專利名稱：含有五環(huán)型三萜類的飼料和肥料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以動(dòng)植物體和/或其一部分和/或其很少一部分作為原料的可用于防止食品等的變色或保持鮮度的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑以及防止黑變·褐變的組合物。
背景技術(shù)：
動(dòng)植物為了維持其生命，必須發(fā)生各種各樣的化學(xué)反應(yīng)，其結(jié)果，生成了各色各樣的色素化合物，這是眾所周知的。特別是，已知呈黑～褐色的黑素是一類在所有動(dòng)植物中都會(huì)生成的化合物。已經(jīng)查明，這類黑素是引起例如，肉、魚、蔬菜類等生鮮食品的黑變、褐變現(xiàn)象或者動(dòng)物寵物或觀賞魚類等由于黑變而導(dǎo)致顏色發(fā)暗或掉色現(xiàn)象的原因之一等各種問題的原因物質(zhì)。
魚貝類、水產(chǎn)加工品、畜生產(chǎn)加工品、蔬菜和水果等的褪色和褐變是從外觀上導(dǎo)致消費(fèi)者反感和造成與其鮮度無關(guān)的商品價(jià)值降低的原因之一。例如，蝦和蟹等的甲殼類在保存過程中其身體的顏色會(huì)逐漸黑變。這是因?yàn)橛捎谠诩讱ゎ愺w內(nèi)的與泰樂霉素共存的氧化酶(酪氨酸酶)的氧化作用而導(dǎo)致生成了黑色的黑色素的緣故。傳統(tǒng)上對(duì)于這種黑變現(xiàn)象，一般可以使用維生素C類或亞硫酸鹽或植酸。然而，所謂使用亞硫酸鹽，作為食品衛(wèi)生法上的使用基準(zhǔn)，對(duì)SO2的殘存限量有嚴(yán)格的規(guī)定，因此不得不很當(dāng)心地使用，另外，植酸單體由于其pH值低，因此，對(duì)于防止蔬菜等的低pH值的食品的變色和降低酸味是有效的，但是對(duì)于作為中性食品的水產(chǎn)加工物卻不能獲得充分的效果。另外，關(guān)于從米曲菌的酶分泌物活動(dòng)的曲酸(酪氨酸酶抑制劑)，學(xué)會(huì)發(fā)表了它是致癌性物質(zhì)的報(bào)告，因此，再使用亞硫酸鹽已是不可能的，這是目前的現(xiàn)狀。
另外，與天然魚類相比，例如真鯛、虎紋圓鲀、比目魚等養(yǎng)殖魚的肉質(zhì)和外觀的品質(zhì)都較差，其商品價(jià)值較低。例如，天然的真鯛由于棲息在陽光幾乎不能達(dá)到的海底附近，所以不會(huì)被曬黑，另外，由于以新鮮的蝦等甲殼類為食物，所以其體表具有美麗的粉紅色，與此相反，對(duì)于養(yǎng)殖魚來說，由于接近海面而與陽光直接接觸，另外，由于使用起色用的磷蝦等鮮度降低的飼料，并由于曬黑或者鮮度已降低了的甲殼類的作用而使黑素增加，從而使其變黑。在這類養(yǎng)殖魚中的黑素的沉積不僅發(fā)生于體表上，而且還出現(xiàn)在肌肉中。例如，在將真鯛做成生魚片時(shí)，在養(yǎng)殖鯛的情況下可以清楚地看出魚身中的黑筋，而在天然鯛的生魚片中則看不出來。為此，已知有通過在魚池上覆蓋一層遮光幕來加以改善的(松井等，日本水產(chǎn)學(xué)會(huì)志，58，1459，1999)。然而，僅僅依靠遮光幕只能在某種程度上除去在肌肉中的黑素沉著，存在黑筋仍然顯眼的現(xiàn)狀。由于在肌肉中存在黑筋，因此養(yǎng)殖魚的商品價(jià)值降低是不言而喻的。
另外，例如，在含有多酚類的植物組織中，通常含有可將其氧化的酶。作為這類酶，例如有酪氨酸酶、蟲漆酶等，由于組織中的多酚類被這些酶氧化，進(jìn)而這些多酚類的氧化物發(fā)生氧化聚合，從而導(dǎo)致黑素的生成。新鮮的植物體一旦受傷就會(huì)發(fā)生褐變就是由于上述原因，例如在將蘋果或香蕉去皮或搽碎后過了不久，其中所含有的多酚類和其氧化酶就會(huì)由于與空氣接觸而發(fā)生反應(yīng)，結(jié)果由于產(chǎn)生黑素而導(dǎo)致變色，這是眾所周知的。作為防止褐變的方法，傳統(tǒng)上可以按照利用食鹽水或檸檬汁的方法來進(jìn)行，但是由于其風(fēng)味受損，因此不能說是一種可用來提高商品價(jià)值的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可用于抑制動(dòng)植物黑變或褐變的非常優(yōu)良的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑和防止黑變·褐變的組合物。
本發(fā)明者們?yōu)榱诉_(dá)到上述目的而進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽和/或其衍生物具有優(yōu)良的黑素生成抑制效果，另外還發(fā)現(xiàn)，通過將其與抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類相組合，可以獲得更強(qiáng)的防止黑變·褐變的作用，至此便完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明涉及一種動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，其中含有選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽和/或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分；優(yōu)選涉及一種動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，其中含有選自五環(huán)型三萜類為齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類、其生理上容許的鹽和/或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分；更優(yōu)選涉及一種動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，其中含有選自作為齊墩果烷系三萜類的山楂酸、高根二醇、其生理上容許的鹽和/或其衍生物；作為烏薩烷系三萜類的烏索酸、山楂醇、其生理上容許的鹽和/或其衍生物；作為羽扇烷系三萜類的樺木酸、樺木醇和/或其生理上容許的鹽中的一種或兩種以上作為有效成分。本發(fā)明另外還涉及一種動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，其中含有橄欖植物的脫脂物或橄欖提取物作為有效成分。本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑由于具有黑素生成抑制效果，因此能夠非常有效地防止肉、魚和貝類、蔬菜類、水果類等的食品，觀葉植物、園藝用植物、谷物類、種子類等的植物類等的變色或保持其鮮度，或者防止動(dòng)物寵物或觀賞魚類等由于黑變等而引起的顏色發(fā)暗或掉色，而且由于可以從天然產(chǎn)物中獲得，因此可以非常放心地使用。
另外，本發(fā)明涉及一種動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的原料，其中含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上。本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑原料可以按天然獲得的或人工合成的任何一種形式使用。這些原料可以作為用于制造本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑、防止黑變·褐變的組合物的目的而配合使用。
進(jìn)而，本發(fā)明涉及一種用于防止黑變·褐變的組合物，其中含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上。本發(fā)明另外還涉及一種動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物，其中含有橄欖植物的脫脂物或橄欖提取物作為有效成分。本發(fā)明另外還涉及一種用于防止黑變·褐變的組合物，其中優(yōu)選含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上以及選自抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中的一種或兩種以上。
另外，本發(fā)明涉及飼料和肥料，其中含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為動(dòng)植物用黑素生成抑制成分。
另外，本發(fā)明還涉及一種飼料，其中含有橄欖植物的脫脂物或橄欖提取物作為有效成分。
另外，本發(fā)明還涉及一種飼料，其中含有選自魚粉和/或大豆粕、作為有效成分的山楂酸或?yàn)跛魉?、以及作為抗氧化劑的維生素C、維生素E和異黃酮中的一種以上。
另外，本發(fā)明還涉及一種肥料，其中含有橄欖植物的脫脂物或橄欖提取物作為有效成分。
另外，本發(fā)明還涉及一種肥料，其中含有作為有效成分的山楂酸或?yàn)跛魉?、油粕以及礦物質(zhì)混合物。
另外，本發(fā)明還涉及一種飲食物，其中含有可使黑變·褐變防止指數(shù)達(dá)到115以上的選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物的動(dòng)植物。
另外，本發(fā)明還涉及一種飼料或肥料的制備方法，其中包括用水和/或有機(jī)溶劑處理橄欖植物、其干燥物、粉碎物或脫脂物，從而得到五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物的合計(jì)含量為0.1～99.99質(zhì)量％的提取物的工序。
另外，本發(fā)明還涉及一種用于防止或改善動(dòng)物體或植物體的黑變·褐變的方法，其中包括將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物投與動(dòng)物或植物。
另外，本發(fā)明還涉及上述方法，該方法是防止或改善動(dòng)植物體的黑變·褐變的方法，其中包括(a)通過將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物溶解于水中來配制溶液的工序、以及
(b)將動(dòng)植物浸漬在工序(a)獲得的溶液中的工序。
另外，本發(fā)明還涉及一種防止動(dòng)物體或植物體的黑素生成的方法，其中包括將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物投與動(dòng)物或植物。
發(fā)明的最佳實(shí)施方案本發(fā)明涉及一種動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，其中含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分。即，本發(fā)明是一種以其中所含有的該五環(huán)型三萜類等的黑素生成抑制效果為特征的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，可以容易而且繼續(xù)地使用，因此可以期待優(yōu)良的黑素生成抑制效果。此處，所謂五環(huán)型三萜類，是指在由6個(gè)異戊二烯單元構(gòu)成的三萜類中的五環(huán)型化合物，它是一類在自然界中的各種各樣的植物體內(nèi)都大量存在的物質(zhì)組。這些物質(zhì)中，天然的物質(zhì)可通過從植物體提取而獲得，另外，即便其中有某幾種是人工合成的，但也是已經(jīng)作為試劑等銷售的，任何一種均適宜使用，特別是由天然獲得的物質(zhì)，可以非常放心地用于飲食物等。
作為含有這些物質(zhì)作為有效成分，是指這些物質(zhì)的含量達(dá)到了能夠?qū)谒氐纳砂l(fā)揮抑制效果的程度，但是在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中，其含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如0.00001質(zhì)量％以上，優(yōu)選0.00001～99.99質(zhì)量％，更優(yōu)選0.0001～99.99質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選0.0005～99.99質(zhì)量％，特別優(yōu)選0.001～99.99質(zhì)量％，尤其優(yōu)選0.005～99.99質(zhì)量％，更進(jìn)一步優(yōu)選0.01～99.99質(zhì)量％，更特別優(yōu)選0.05～99.99質(zhì)量％，更尤其優(yōu)選0.1～99.99質(zhì)量％，進(jìn)一步特別優(yōu)選0.5～99.99質(zhì)量％，最優(yōu)選1～99.99質(zhì)量％。在長時(shí)期內(nèi)把本發(fā)明的飼料、肥料等投與動(dòng)植物體的情況，從效果和成本等方面的平衡考慮，在本發(fā)明中所含有的五環(huán)型三萜類等的含量以較低為宜。因此，本發(fā)明所含有的五環(huán)型三萜類等的含量即使在較低的情況，也能發(fā)揮效果，所以較為優(yōu)選。
在本發(fā)明中，當(dāng)從橄欖植物或從在橄欖油制造工序中產(chǎn)生的脫脂物獲得的提取物含有山楂酸的情況，該提取物中的山楂酸的含量優(yōu)選0.0001～30質(zhì)量％，更優(yōu)選0.0005～30質(zhì)量％，尤其優(yōu)選0.001～25質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.005～25質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選0.01～20質(zhì)量％，更特別優(yōu)選0.05～20質(zhì)量％，最優(yōu)選0.1～15質(zhì)量％。
在本發(fā)明中，當(dāng)從橄欖植物或從在橄欖油制造工序中產(chǎn)生的脫脂物獲得的濃縮物含有山楂酸的情況，該濃縮物中的山楂酸的含量優(yōu)選0.01～50質(zhì)量％，更優(yōu)選0.05～45質(zhì)量％，尤其優(yōu)選0.1～40質(zhì)量％，特別優(yōu)選0.5～35質(zhì)量％，更特別優(yōu)選1～30質(zhì)量％，最優(yōu)選2～25質(zhì)量％。
在本發(fā)明中，當(dāng)從橄欖植物或從在橄欖油制造工序中產(chǎn)生的脫脂物獲得的粗精制物含有山楂酸的情況，該粗精制物中的山楂酸等的含量優(yōu)選1～99質(zhì)量％，更優(yōu)選2～98質(zhì)量％，尤其優(yōu)選5～95質(zhì)量％，特別優(yōu)選10～95質(zhì)量％，更特別優(yōu)選15～85質(zhì)量％，最優(yōu)選20～80質(zhì)量％。
在本發(fā)明中，當(dāng)從橄欖植物或從在橄欖油制造工序中產(chǎn)生的脫脂物獲得的精制物含有山楂酸的情況，該精制物中的山楂酸的含量優(yōu)選70質(zhì)量％以上，更優(yōu)選75～99.99999質(zhì)量％，尤其優(yōu)選80～99.9999質(zhì)量％，特別優(yōu)選為85～99.999質(zhì)量％，更特別優(yōu)選90～99.99質(zhì)量％，最優(yōu)選95～99.9質(zhì)量％。
另外，作為具有黑素生成抑制效果的物質(zhì)，在上述五環(huán)型三萜類中，優(yōu)選為齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類，本發(fā)明涉及含有從上述物組中選出的一種或兩種以上的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑。進(jìn)而，在上述的齊墩果烷系三萜類中，優(yōu)選為山楂酸和/或高根二醇，特別優(yōu)選為山楂酸。在烏薩烷系三萜類中，優(yōu)選為烏索酸和/或山楂醇。在羽扇烷系三萜類中，優(yōu)選為樺木酸和/或樺木醇。
這些物質(zhì)的黑素生成抑制效果可以按照利用培養(yǎng)色素細(xì)胞的試驗(yàn)法來評(píng)價(jià)。按照該評(píng)價(jià)方法，即使與傳統(tǒng)上已知具有黑素生成抑制效果的維生素C磷酸鎂鹽相比，仍可以確認(rèn)上述物質(zhì)具有數(shù)十倍～數(shù)百倍的黑素生成抑制效果。另外，作為繼續(xù)使用的效果，例如對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等在經(jīng)口攝取等的情況，可以確認(rèn)上述物質(zhì)能夠充分發(fā)揮其黑素生成抑制效果。
另外，本發(fā)明還涉及含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑原料，在上述五環(huán)型三萜類中，優(yōu)選為齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類。進(jìn)而，在上述的齊墩果烷系三萜類中，優(yōu)選為山楂酸和/或高根二醇，特別優(yōu)選為山楂酸。在烏薩烷系三萜類中，優(yōu)選為烏索酸和/或山楂醇。在羽扇烷系三萜類中，優(yōu)選為樺木酸和/或樺木醇。在作為原料使用的情況，優(yōu)選采用較高的濃度。對(duì)此沒有特別限定，但是優(yōu)選0.1質(zhì)量％以上，更優(yōu)選0.1～99.99質(zhì)量％，尤其優(yōu)選1～99.99質(zhì)量％，特別優(yōu)選10～99.99質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選30～99.99質(zhì)量％，更進(jìn)一步優(yōu)選50～99.99質(zhì)量％，更特別優(yōu)選70～99.99質(zhì)量％，最優(yōu)選90～99.99質(zhì)量％。
另外，本發(fā)明涉及把選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的使用方法，在上述五環(huán)型三萜類中，優(yōu)選為齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類。進(jìn)而，在上述的齊墩果烷系三萜類中，優(yōu)選為山楂酸和/或高根二醇，特別優(yōu)選為山楂酸。在烏薩烷系三萜類中，優(yōu)選為烏索酸和/或山楂醇。在羽扇烷系三萜類中，優(yōu)選為樺木酸和/或樺木醇。
特別是本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑可以以其黑素生成抑制效果作為目的而按各種飼料的形式使用。即，本發(fā)明涉及含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為動(dòng)植物用黑素生成抑制成分的飼料，上述五環(huán)型三萜類中，優(yōu)選齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類。進(jìn)而，在上述的齊墩果烷系三萜類中，優(yōu)選為山楂酸和/或高根二醇，特別優(yōu)選為山楂酸。在烏薩烷系三萜類中，優(yōu)選為烏索酸和/或山楂醇。在羽扇烷系三萜類中，優(yōu)選為樺木酸和/或樺木醇。更特別優(yōu)選是五環(huán)型三萜類為山楂酸或?yàn)跛魉?。在本發(fā)明的飼料中的該動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、對(duì)象的種類、性別、體重、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，在只是使用選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的情況，相對(duì)于對(duì)象的質(zhì)量，按照直接投與的方式，可以為0.00001～50質(zhì)量％，優(yōu)選為0.0001～30質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.001～20質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.01～10質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％；另外，在按照浸漬等方式間接投與的情況，可以作為0.001～30質(zhì)量％、優(yōu)選0.01～20質(zhì)量％、更優(yōu)選0.1～10質(zhì)量％的溶液使用。
當(dāng)本發(fā)明的飼料以在橄欖油制造工序中獲得的脫脂物的形式含有作為有效成分的五環(huán)型三萜類等的情況并且是直接投與的情況，優(yōu)選在飼料中按0.01～40質(zhì)量％的量混合進(jìn)脫脂物，更優(yōu)選按0.05～30質(zhì)量％、特別優(yōu)選按0.1～20質(zhì)量％、更特別優(yōu)選按0.3～10質(zhì)量％、最優(yōu)選按0.5～10質(zhì)量％的量混合。只要按照這些含量，就可以避免飼料全體的營養(yǎng)價(jià)值大大降低，并且可以獲得黑變·褐變的抑制效果。另外，通常把大豆的脫脂物或菜種的脫脂物等作為營養(yǎng)源混合到飼料中。另一方面，橄欖植物的脫脂物由于纖維多，而且營養(yǎng)價(jià)值低，因此不適合作為飼料使用，通常作為燃料使用。但是，本發(fā)明的飼料即使在以橄欖植物脫脂物的形式含有五環(huán)型三萜類等有效成分的情況并且在飼料中所含有的有效成分的量非常低的情況，也能夠發(fā)揮本發(fā)明的效果?？傊?，本發(fā)明的飼料不會(huì)損害動(dòng)物的健康狀況，可以含有橄欖植物的脫脂物。
特別是本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑可以以其黑素生成抑制效果作為目的而按各種肥料的形式使用。即，本發(fā)明涉及含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為動(dòng)植物用黑素生成抑制成分的肥料，上述五環(huán)型三萜類中，優(yōu)選齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類。進(jìn)而，在上述的齊墩果烷系三萜類中，優(yōu)選山楂酸和/或高根二醇、特別優(yōu)選為山楂酸。在烏薩烷系三萜類中，優(yōu)選為烏索酸和/或山楂醇。在羽扇烷系三萜類中，優(yōu)選為樺木酸和/或樺木醇。本發(fā)明的肥料中的該動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、對(duì)象的種類、重量、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，在只是使用選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的情況，在土壤混合或土壤灌注的情況，相對(duì)于所使用的土壤的質(zhì)量，可以為0.0001～30質(zhì)量％，優(yōu)選為0.001～20質(zhì)量％、較優(yōu)選為0.01～15質(zhì)量％、更優(yōu)選為0.1～10質(zhì)量％、特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％，在培養(yǎng)液的情況，相對(duì)于液體的質(zhì)量，可以作為0.001～20質(zhì)量％、優(yōu)選0.01～10質(zhì)量％、更優(yōu)選0.1～5質(zhì)量％的溶液使用。
另外，本發(fā)明涉及含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的防止黑變·褐變的組合物，優(yōu)選涉及這樣一種防止黑變·褐變的組合物，其特征在于，該組合物含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上、從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上。即，如上所述，由于五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物所具有的黑素生成抑制效果以及它與抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類等的協(xié)同效果，因此可以獲得一種非常適用的防止黑變·褐變的組合物。此處，本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物中的選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，可以為0.00001質(zhì)量％以上、優(yōu)選為0.00001～99.99質(zhì)量％、較優(yōu)選為0.0001～99.99質(zhì)量％、更優(yōu)選為0.0005～99.99質(zhì)量％、尤其優(yōu)選為0.001～99.99質(zhì)量％、特別優(yōu)選為0.005～99.99質(zhì)量％、進(jìn)一步優(yōu)選為0.01～99.99質(zhì)量％、更尤其優(yōu)選為0.05～99.99質(zhì)量％、更特別優(yōu)選為0.1～99.99質(zhì)量％、更進(jìn)一步優(yōu)選為0.5～99.99質(zhì)量％、最優(yōu)選為1～99.99質(zhì)量％。同樣，本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物中的抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上的含量可根據(jù)所含有的抗氧化劑等的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，可以為0.0001～95質(zhì)量％、優(yōu)選為0.001～90質(zhì)量％、較優(yōu)選為0.01～80質(zhì)量％、更優(yōu)選為0.05～70質(zhì)量％、尤其優(yōu)選為0.1～60質(zhì)量％、特別優(yōu)選為0.5～50質(zhì)量％。另外，該選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上與從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上的含有比率可根據(jù)所使用的抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類的種類、作為目標(biāo)的協(xié)同效果、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，當(dāng)以所含有的選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的質(zhì)量作為1時(shí)，從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上的質(zhì)量比可以為0.001～1000，優(yōu)選為0.005～500，較優(yōu)選為0.01～100，更優(yōu)選為0.05～50，特別優(yōu)選為0.1～20。
此處，本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物為了達(dá)到其防止黑變·褐變的效果的目的，可以按各種飼料的形式使用。即，本發(fā)明涉及含有該防止黑變·褐變的組合物的飼料。本發(fā)明的飼料中的該防止黑變·褐變的組合物的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類或抗氧化劑等的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、對(duì)象的種類、性別、體重、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，相對(duì)于對(duì)象的質(zhì)量，在經(jīng)口給藥時(shí)可以為0.00001～50質(zhì)量％、優(yōu)選為0.0001～30質(zhì)量％、較優(yōu)選為0.001～20質(zhì)量％、更優(yōu)選為0.01～10質(zhì)量％、特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％，另外，在通過浸漬等的間接給藥時(shí)可以作為0.001～30質(zhì)量％、優(yōu)選為0.01～20質(zhì)量％、更優(yōu)選為0.1～10質(zhì)量％的溶液等使用。
此處，本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物為了達(dá)到其防止黑變·褐變的效果的目的，可以按各種肥料的形式使用。即，本發(fā)明涉及含有該防止黑變·褐變的組合物的肥料。本發(fā)明的肥料中的該防止黑變·褐變的組合物的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類或抗氧化劑等的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、對(duì)象的種類、重量、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，在土壤混合或土壤灌注的情況，相對(duì)于所使用的土壤的質(zhì)量，可以為0.0001～30質(zhì)量％、優(yōu)選為0.001～20質(zhì)量％、較優(yōu)選為0.01～15質(zhì)量％、更優(yōu)選為0.1～10質(zhì)量％、特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％，在培養(yǎng)液的情況，相對(duì)于液的質(zhì)量，可以作為0.001～20質(zhì)量％、優(yōu)選為0.01～10質(zhì)量％、較優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％的溶液使用。
本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑在以動(dòng)植物體和/或其一部分和/或其一小部作為在原料的食品等中使用時(shí)，可以作為用于抑制、防止黑色素的生成的目的來使用。一般來說，已知黑素是作為動(dòng)植物的生命活動(dòng)的結(jié)果而產(chǎn)生的，它是黑～褐色，是肉、魚、蔬菜類等生鮮食品發(fā)生黑變、褐變現(xiàn)象的原因之一。因此，只要能夠抑制黑素的生成，就可以提高肉、魚、蔬菜類等生鮮食品或動(dòng)物寵物或觀賞用動(dòng)植物的商品價(jià)值。如上所述，本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑有助于大大提高肉、魚、蔬菜類等生鮮食品或動(dòng)物寵物或觀賞用動(dòng)植物的商品價(jià)值。
本發(fā)明涉及一種飼料、肥料、動(dòng)植物用黑素生成抑制劑以及動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物，該組合物含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分。此處，所謂五環(huán)型三萜烯一般是指三萜類中的1種，它是一種由6個(gè)異戊二烯單元構(gòu)成的五環(huán)型化合物，其碳原子數(shù)基本上為30個(gè)，但是也包含在生化合成過程中由于轉(zhuǎn)移、氧化、脫離或烷基化反應(yīng)而使碳原子數(shù)發(fā)生多少變化的情況。本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中的五環(huán)型三萜類也包括上述五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽和/或它們被羥基或羧基取代的衍生物，而且，它們的來源沒有特別的限制，天然獲得的、由人工合成的和市售品等之中的任何一種均可，但是，當(dāng)考慮將本發(fā)明應(yīng)用于飲食方面時(shí)，優(yōu)選使用天然物。特別優(yōu)選是從天然物提取分離獲得的產(chǎn)品。
五環(huán)型三萜類一般根據(jù)其骨架進(jìn)行分類。本發(fā)明中，作為五環(huán)型三萜類，可以舉出例如，齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類、忽布烷(hopane)系三萜類、serratane系三萜類、木栓烷系三萜類、蒲公英賽烷系三萜類、蒲公英甾烷(taraxastane)系三萜類、multi-furolane系三萜類、日耳曼烷(germanicane)系三萜類等。
此處，生理上容許的鹽特別是指五環(huán)型三萜烯酸由羧基衍生的鹽(部分結(jié)構(gòu)-COOX；X表示任意的陽離子型物質(zhì))，本發(fā)明也包含從天然物的提取物中原來含有的物質(zhì)。本發(fā)明中，只要是通常可在飲食物或者醫(yī)藥組合物中使用的鹽，就沒有特別的限定，可以舉出例如，鈉、鉀、鋰等的堿金屬鹽；鈣、鎂、鋇、鋅等的堿土金屬鹽；氨、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、丙胺、丁胺、四丁胺、戊胺、己胺等的烷基胺鹽；乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、丙醇胺、二丙醇胺、異丙醇胺、二異丙醇胺等的鏈烷醇胺鹽；哌嗪、哌啶等其他的有機(jī)胺鹽；賴氨酸、精氨酸、組氨酸、色氨酸等的堿性氨基酸鹽等的鹽。其中，優(yōu)選為堿金屬鹽、烷基胺鹽、鏈烷醇胺鹽以及堿性氨基酸鹽。一般地說，這些鹽類與上述的五環(huán)型三萜類相比，顯示較好的水溶性，因此，本發(fā)明中，特別優(yōu)選用于水體系的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑。
另外，所謂衍生物是指可以用生物化學(xué)或人工合成的方法獲得的衍生物，本發(fā)明中，只要是可能的衍生物，就沒有特別的限定，可以舉出例如，具有醇酯基的衍生物、具有脂肪酸酯基的衍生物、具有烷氧基的衍生物、具有烷氧基甲基的衍生物、或者配糖物等。其中，特別是具有醇酯基的衍生物、具有脂肪酸酯基的衍生物、具有烷氧基的衍生物、具有烷氧基甲基的衍生物，它們與上述的五環(huán)型三萜類相比，顯示較好的脂溶性，因此，按照本發(fā)明，特別優(yōu)選用于油體系的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，另外，配糖物與上述的五環(huán)型三萜類相比，顯示較好的水溶性，因此，按照本發(fā)明，特別優(yōu)選用于水體系的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑。
這些衍生物的一部分在天然中也有存在，另外，也可以通過人工合成來獲得。而且，也可以通過將本發(fā)明的衍生物再次衍生物化來使用它們的鹽。
醇酯基一般是指羧基與醇類發(fā)生脫水反應(yīng)而形成的官能團(tuán)(部分結(jié)構(gòu)-COOR；R表示任意的烴系官能團(tuán))。即，本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類、具有醇酯基的衍生物特別是指可以由其羧基與醇類形成的衍生物。此時(shí)的醇類沒有特別的限制，例如，甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、烯丙醇、正丁醇、仲丁醇、叔丁醇、乙二醇、三甲基甲硅烷基醇、三乙基甲硅烷基醇、苯酚、芐醇、糖類等。其中，優(yōu)選為由乙醇、三乙基甲硅烷基醇、甲醇、正丙醇、異丙醇、三甲基甲硅烷基醇形成的衍生物。
脂肪酸酯基一般是指羥基與脂肪酸類發(fā)生脫水反應(yīng)而形成的官能團(tuán)(部分結(jié)構(gòu)-OCOR；R表示任意的烴系官能團(tuán))。即，本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類、具有脂肪酸酯基的衍生物特別是指可以由其羥基與脂肪酸類形成的衍生物。此時(shí)的脂肪酸類沒有特別的限制，可以舉出例如，乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸、異戊酸、三甲基乙酸、己酸、辛酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚烯酸、硬脂酸、油酸、反油酸、異油酸、亞油酸、反亞油酸、亞麻酸、γ-亞麻酸、花生酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、山萮酸、二十二碳六烯酸、二十四烷酸、二十六烷酸、二十八烷酸、三十烷酸等。其中，優(yōu)選為由乙酸、乙酸酐、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚烯酸、硬脂酸、油酸、反油酸、亞油酸、反亞油酸、亞麻酸、γ-亞麻酸、花生酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、山萮酸、二十二碳六烯酸形成的衍生物。
烷氧基一般是指羥基與醇類進(jìn)行脫水反應(yīng)而形成的官能團(tuán)(部分結(jié)構(gòu)-OR；R表示任意的烴系官能團(tuán))。即，本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類、具有烷氧基的衍生物特別是指可以由其羥基與醇類形成的衍生物。此時(shí)的醇類沒有特別的限制，可以舉出例如，甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、烯丙醇、正丁醇、仲丁醇、叔丁醇、乙二醇、三甲基甲硅烷基醇、三乙基甲硅烷基醇、苯酚、芐醇、糖類等。其中，優(yōu)選為由乙醇、三乙基甲硅烷基醇、甲醇、正丙醇、異丙醇、三甲基甲硅烷基醇形成的衍生物。
烷氧基甲基一般是指羥甲基與醇類進(jìn)行脫水反應(yīng)而形成的官能團(tuán)(部分結(jié)構(gòu)-CH2OR；R表示任意的烴系官能團(tuán))。即，本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類、具有烷氧基甲基的衍生物特別是指可以由其羥甲基與醇類形成的衍生物。此時(shí)的醇類沒有特別的限制，可以舉出例如，甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、烯丙醇、正丁醇、仲丁醇、叔丁醇、乙二醇、三甲基甲硅烷基醇、三乙基甲硅烷基醇、苯酚、芐醇、糖類等。其中，優(yōu)選為由乙醇、三乙基甲硅烷基醇、甲醇、正丙醇、異丙醇、三甲基甲硅烷基醇形成的衍生物。
另外，本發(fā)明中的配糖物是指上述具有醇酯基的衍生物、具有烷氧基的衍生物、具有烷氧基甲基的衍生物，其中特別是指可以由五環(huán)型三萜類的羧基、羥基、羥甲基與糖類形成的衍生物(部分結(jié)構(gòu)-COOR、-OR、-CH2OR；R表示任意的糖類。)。此時(shí)的糖類沒有特別的限制，可以舉出例如，葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、木糖、阿拉伯糖、巖藻糖、鼠李糖、葡糖胺、半乳糖胺、葡糖醛酸等，也可以是它們的α體、β體中的任一種。另外，這些配糖物可以是單糖，也可以是二糖以上的各種組合的低聚糖。其中，它們通常在天然中也有存在，已知的有總稱為皂草苷的物質(zhì)，按照本發(fā)明，可以使用它們當(dāng)中的任一種。
本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類等如上所述，特別是從黑素生成抑制效果好的方面考慮，優(yōu)選為齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類以及其生理上容許的鹽、或者其衍生物。齊墩果烷系三萜類具有由通式(I)表示的骨架，烏薩烷系三萜類具有由通式(II)表示的骨架，羽扇烷系三萜類具有由通式(III)表示的骨架，它們都是五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物。另外，對(duì)于各自的式中的官能團(tuán)，與上述相同。
式中，R1、R2表示氫原子(-H)、羥基(-OH)、烷氧基(-OR)、醇酯基(-OCOR)，R3表示甲基(-CH3)、羥甲基(-CH2OH)、烷氧基甲基(-CH2OR)、羧基(-COOH)、脂肪酸酯基(-COOR)、羧酸鹽(-COOX)。
式中，R1表示氫原子(-H)、羥基(-OH)、烷氧基(-OR)、醇酯基(-OCOR)，R2表示甲基(-CH3)、羥甲基(-CH2OH)、烷氧基甲基(-CH2OR)、羧基(-COOH)、脂肪酸酯基(-COOR)、羧酸鹽(-COOX)。
式中，R1表示氫原子(-H)、羥基(-OH)、烷氧基(-OR)、醇酯基(-OCOR)，R2表示甲基(-CH3)、羥甲基(-CH2OH)、烷氧基甲基(-CH2OR)、羧基(-COOH)、脂肪酸酯基(-COOR)、羧酸鹽(-COOX)。
本發(fā)明中沒有特別的限制，例如，作為齊墩果烷系三萜類可以舉出山楂酸、齊墩果酸、高根二醇、β-香樹素、常春配質(zhì)、甘草亭酸等，作為烏薩烷系三萜類，可以舉出烏索酸、山楂醇、α-香樹素、奎諾酸、蒲公英甾醇、α-羥基烏索酸等；作為羽扇烷系三萜類，可以舉出樺木酸、樺木醇、羽扇醇等。另外，對(duì)于其生理上容許的鹽及其衍生物，與上述相同。在使用其生理上容許的鹽或者其衍生物的情況，對(duì)于齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類以及其生理上容許的鹽、或者其衍生物的來源沒有限制，在從天然獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食，則優(yōu)選使用天然物。
如上所述，本發(fā)明中，優(yōu)選為五環(huán)型三萜類中的齊墩果烷系三萜類(I)、烏薩烷系三萜類(II)、羽扇烷系三萜類(III)以及其生理上容許的鹽、或者其衍生物，從黑素生成抑制效果的強(qiáng)度方面考慮，進(jìn)而，作為齊墩果烷系三萜烯，優(yōu)選山楂酸、高根二醇；作為烏薩烷系三萜烯，優(yōu)選烏索酸、山楂醇；作為羽扇烷系三萜烯，優(yōu)選樺木酸、樺木醇，當(dāng)然優(yōu)選為其生理上容許的鹽、或者其衍生物。
山楂酸、高根二醇皆為齊墩果烷系三萜類的一種，是已知存在于各種植物中的物質(zhì)。而且，對(duì)于其生理上容許的鹽及其衍生物，與上述相同。本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中，在使用山楂酸、高根二醇、其生理上容許的鹽、或者其衍生物的情況，對(duì)這些物質(zhì)的來源沒有限制，在從天然獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選使用天然物。
本發(fā)明中，從黑素生成抑制效果高、穩(wěn)定供給的方面考慮，最優(yōu)選山楂酸和/或其生理上容許的鹽。山楂酸(maslinic acid)是齊墩果烷系三萜烯的一種，具有化學(xué)式(IV)所示的結(jié)構(gòu)，并已知具有抗炎癥作用和抗組胺作用。已知該化合物存在于天然植物如橄欖、啤酒花、薄荷、石榴、丁香、鼠尾草、棗等中。本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中，山楂酸、其生理上容許的鹽以及衍生物的來源沒有限制，在從天然獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選使用例如，橄欖、啤酒花、薄荷、石榴、丁香、鼠尾草、棗等從天然獲得的山楂酸，特別是從原料供給或含量方面考慮，非常優(yōu)選的是從橄欖獲得的山楂酸和/或其生理上容許的鹽。山楂酸和/或其生理上容許的鹽可以通過利用水和/或有機(jī)溶劑來對(duì)上述原料、特別是橄欖植物進(jìn)行提取處理來獲得，進(jìn)而可通過濃縮、精制來簡便而且大量地獲得高濃度的來自天然的山楂酸和/或其生理上容許的鹽。
本發(fā)明中，對(duì)于山楂酸的生理上容許的鹽以及衍生物，與上述記載的相同。即，其生理上容許的鹽是指由化學(xué)式(IV)中的-COOH衍生而獲得的，其鹽的種類只要是通?？捎糜陲嬍澄锘蛘哚t(yī)藥組合物中的，就沒有特別的限定。具體地說，例如，作為山楂酸的鹽，可以舉出山楂酸鈉、山楂酸鉀、山楂酸銨、山楂酸二甲基銨、山楂酸鈣、山楂酸鎂等。其中，優(yōu)選為山楂酸鈉和山楂酸鉀。
另外，作為山楂酸的衍生物，例如，作為在其任何一個(gè)位置上發(fā)生衍生物化而獲得的化合物，可以舉出山楂酸甲酯、山楂酸乙酯、山楂酸正丙酯、山楂酸異丙酯、山楂酸正丁酯、山楂酸三甲基甲硅烷基酯、山楂酸三乙基甲硅烷基酯、山楂酸-β-D-吡喃葡糖基酯、山楂酸-β-D-吡喃半乳糖基酯、3-O-乙?；?山楂酸、3-O-丙?；?山楂酸、3-O-丁?；?山楂酸、3-O-戊酰基-山楂酸、3-O-辛基-山楂酸、3-O-月桂基-山楂酸、3-O-肉豆蔻基-山楂酸、3-O-棕櫚基-山楂酸、3-O-棕櫚油烯基-山楂酸、3-O-硬脂基-山楂酸、3-O-油烯基-山楂酸、3-O-棕櫚油烯基-山楂酸、3-O-亞油基-山楂酸、3-O-亞麻基-山楂酸、3-O-花生基-山楂酸、3-O-花生四烯基-山楂酸、3-O-山萮基-山楂酸、2-O-乙?；?山楂酸、2-O-丙酰基-山楂酸、2-O-丁酰基-山楂酸、2-O-戊?；?山楂酸、2-O-辛基-山楂酸、2-O-月桂基-山楂酸、2-O-肉豆蔻基-山楂酸、2-O-棕櫚基-山楂酸、2-O-棕櫚油烯基-山楂酸、2-O-硬脂基-山楂酸、2-O-油烯基-山楂酸、2-O-棕櫚油烯基-山楂酸、2-O-亞油基-山楂酸、2-O-亞麻基-山楂酸、2-O-花生基-山楂酸、2-O-花生四烯基-山楂酸、2-O-山萮基-山楂酸、3-O-甲基-山楂酸、3-O-乙基-山楂酸、3-O-叔丁基-山楂酸、3-O-三乙基甲硅烷基-山楂酸、3-O-β-D-吡喃葡糖基-山楂酸、3-O-β-D-吡喃半乳糖基-山楂酸、3-O-β-D-吡喃葡糖醛基-山楂酸、2-O-甲基-山楂酸、2-O-乙基-山楂酸、2-O-叔丁基-山楂酸、2-O-三乙基甲硅烷基-山楂酸、2-O-β-D-吡喃葡糖基-山楂酸、2-O-β-D-吡喃半乳糖基-山楂酸、2-O-β-D-吡喃葡糖醛基-山楂酸等。其中，優(yōu)選的是山楂酸乙酯、山楂酸三乙基甲硅烷基酯、3-O-乙?；?山楂酸、2-O-乙?；?山楂酸、2-O-三乙基甲硅烷基-山楂酸、3-O-硬脂?；?山楂酸以及2-O-硬脂?；?山楂酸。雖然以上舉出的都是作為衍生物只有1個(gè)基團(tuán)發(fā)生衍生物化的化合物，當(dāng)然，其中這些化合物中的衍生位置以及種類當(dāng)然也可能是兩個(gè)基團(tuán)以上發(fā)生衍生物化的。作為優(yōu)選的例子，可以舉出例如，山楂酸或上述優(yōu)選的山楂酸酯的2，3-O-二乙?；w、2，3-O-二(三乙基甲硅烷基)體、2，3-二硬脂酰基體，具體地可以舉出2，3-O-二乙?；?山楂酸、2，3-O-三乙基甲硅烷基-山楂酸三乙基甲硅烷基酯以及2，3-O-二硬脂?；?山楂酸等優(yōu)選的山楂酸衍生物。另外，關(guān)于配糖物，可以舉出單糖，當(dāng)然，也可以是從各種各樣的糖類中選出的二糖以上的低聚糖。
高根二醇(erythrodiol)是齊墩果烷系三萜烯的一種，具有化學(xué)式(V)所示的結(jié)構(gòu)，在作用方面，已知具有抗炎癥作用(Planta.Med.VOL.61，No.2，182-185，1995)等。已知該化合物存在于天然植物橄欖、向日葵、金盞花、阿拉伯膠樹、red sanders、長葉木姜子等中。在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中，對(duì)高根二醇或者其衍生物的來源沒有限制，在從天然獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選是例如，橄欖、向日葵、金盞花、阿拉伯膠樹、red sanders、長葉木姜子等從自然界獲得的物質(zhì)。特別優(yōu)選的是橄欖，具體地說，優(yōu)選是從在橄欖植物和/或橄欖油制造工序中獲得的副產(chǎn)物中提取的物質(zhì)。
關(guān)于高根二醇，其生理上容許的鹽或其衍生物的情況也與上述相同。
此處，作為衍生物可以是但不限定于以下物質(zhì)，例如可以是在任一個(gè)位置上發(fā)生衍生物化而生成的化合物，例如可以舉出3-O-乙?；?高根二醇、3-O-丙酰基-高根二醇、3-O-丁?；?高根二醇、3-O-戊酰基-高根二醇、3-O-辛基-高根二醇、3-O-月桂基-高根二醇、3-O-肉豆蔻基-高根二醇、3-O-棕櫚基-高根二醇、3-O-棕櫚油烯基-高根二醇、3-O-硬脂基-高根二醇、3-O-硬脂酰基-高根二醇、3-O-油烯基-高根二醇、3-O-棕櫚油烯基-高根二醇、3-O-亞油基-高根二醇、3-O-亞麻基-高根二醇、3-O-花生基-高根二醇、3-O-花生四烯基-高根二醇、3-O-山萮基-高根二醇、28-O-乙酰基-高根二醇、28-O-丙酰基-高根二醇、28-O-丁酰基-高根二醇、28-O-戊?；?高根二醇、28-O-辛基-高根二醇、28-O-月桂基-高根二醇、28-O-肉豆蔻基-高根二醇、28-O-棕櫚基-高根二醇、28-O-棕櫚油烯基-高根二醇、28-O-硬脂基-高根二醇、28-O-油烯基-高根二醇、28-O-棕櫚油烯基-高根二醇、28-O-亞油基-高根二醇、28-O-亞麻基-高根二醇、28-O-花生基-高根二醇、28-O-花生四烯基-高根二醇、28-O-山萮基-高根二醇、3-O-甲基-高根二醇、3-O-乙基-高根二醇、3-O-叔丁基-高根二醇、3-O-三乙基甲硅烷基-高根二醇、28-O-甲基-高根二醇、28-O-乙基-高根二醇、28-O-叔丁基-高根二醇、28-O-三乙基甲硅烷基-高根二醇、3-O-β-D-吡喃葡糖基-高根二醇、3-O-β-D-吡喃半乳糖基-高根二醇、3-O-β-D-吡喃葡糖醛基-高根二醇、28-O-β-D-吡喃葡糖基-高根二醇、28-O-β-D-吡喃半乳糖基-高根二醇、28-O-β-D-吡喃葡糖醛基-高根二醇等。其中，優(yōu)選為3-O-乙?；?高根二醇、28-O-乙?；?高根二醇。雖然以上舉出的都是作為衍生物只有一個(gè)基團(tuán)發(fā)生衍生物化的化合物，當(dāng)然，這些化合物中的衍生位置以及種類當(dāng)然也可能是兩個(gè)基團(tuán)以上發(fā)生衍生物化的。例如可以舉出，3，28-O-二乙?；?高根二醇。另外，關(guān)于配糖物，可以舉出單糖，當(dāng)然，也可以是從各種各樣的糖類中選出的二糖以上的低聚糖。
烏索酸、山楂醇二者皆為烏薩烷系三萜類中的一種，已知它們是存在于各種植物中的物質(zhì)。另外，它們的生理上容許的鹽以及衍生物的情況也與上述相同。當(dāng)在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中使用烏索酸、山楂醇、其生理上容許的鹽、或者其衍生物的情況，對(duì)這些物質(zhì)的來源沒有限制，從自然界獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選使用天然物。
烏索酸(ursolic acid)是烏薩烷系三萜烯中的一種，是具有化學(xué)式(VI)所示結(jié)構(gòu)的化合物，在作用方面，已知具有抗炎癥作用、抗肥胖作用、抗糖尿病作用、抗高脂血癥作用(Jie Liu，Journal ofEthnopharmacology，49，57-68，1995)等。已知在自然界廣泛地分布于蘋果、櫻桃、熊果等的果實(shí)和葉子中。在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中，對(duì)烏索酸、其生理上容許的鹽、或者其衍生物的來源沒有限制，從天然獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選是從例如蘋果、櫻桃、熊果等的天然物中獲得的物質(zhì)。
關(guān)于烏索酸，其生理上容許的鹽或其衍生物的情況也與上述相同。
此處，其生理上容許的鹽可以舉出但不限定于以下物質(zhì)，例如，作為烏索酸的鹽，可以舉出烏索酸鈉、烏索酸鉀、烏索酸銨、烏索酸二甲基銨、烏索酸鈣、烏索酸鎂等。
作為烏索酸的衍生物，例如，作為在其任何一個(gè)位置上發(fā)生衍生物化而獲得的化合物，可以舉出烏索酸甲酯、烏索酸乙酯、烏索酸正丙酯、烏索酸異丙酯、烏索酸正丁酯、烏索酸三甲基甲硅烷基酯、烏索酸三乙基甲硅烷基酯、烏索酸-β-D-吡喃葡糖基酯、烏索酸-β-D-吡喃半乳糖基酯、3-O-乙?；?烏索酸、3-O-丙?；?烏索酸、3-O-丁?；?烏索酸、3-O-戊?；?烏索酸、3-O-辛基-烏索酸、3-O-月桂基-烏索酸、3-O-肉豆蔻基-烏索酸、3-O-棕櫚基-烏索酸、3-O-棕櫚油烯基-烏索酸、3-O-硬脂基-烏索酸、3-O-油烯基-烏索酸、3-O-棕櫚油烯基-烏索酸、3-O-亞油基-烏索酸、3-O-亞麻基-烏索酸、3-O-花生基-烏索酸、3-O-花生四烯基-烏索酸、3-O-山萮基-烏索酸、3-O-甲基-烏索酸、3-O-乙基-烏索酸、3-O-叔丁基-烏索酸、3-O-三乙基甲硅烷基-烏索酸、3-O-β-D-吡喃葡糖基-烏索酸、3-O-β-D-吡喃半乳糖基-烏索酸、3-O-β-D-吡喃葡糖醛基-烏索酸等。其中，優(yōu)選是烏索酸乙酯。雖然以上舉出的都是作為衍生物只有一個(gè)基團(tuán)發(fā)生衍生物化的化合物，當(dāng)然，這些化合物中的衍生位置以及種類當(dāng)然也可能是兩個(gè)基團(tuán)以上發(fā)生衍生物化的。另外，關(guān)于配糖物，可以舉出單糖，當(dāng)然，也可以是從各種各樣的糖類中選出的二糖以上的低聚糖。
山楂醇(uvaol)是烏薩烷系三萜烯中的一種，具有化學(xué)式(VII)所示的結(jié)構(gòu)，在作用方面，已知具有抗炎癥作用(Planta.Med.VOL.61，No.2，182-185，1995)、甘油磷酸脫氫酶抑制作用(特開平9-67249)等。已知在自然界的橄欖、熊果、鼠尾草、阿拉伯膠樹、玉樹等中有存在。在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中，對(duì)山楂醇或者其衍生物的來源沒有限制，從自然界獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選是從例如，橄欖、熊果、鼠尾草、阿拉伯膠樹、玉樹等的天然物中獲得的物質(zhì)。特別優(yōu)選的是從橄欖，具體說，優(yōu)選是從在橄欖植物和/或橄欖油制造工序中獲得的副產(chǎn)物提取而獲得的物質(zhì)。
關(guān)于山楂醇，其生理上容許的鹽或衍生物的情況也與上述相同。
此處，作為衍生物，可以是但不限定于以下物質(zhì)，例如可以是在任一個(gè)位置上發(fā)生衍生物化而生成的化合物，例如可以舉出3-O-乙?；?山楂醇、3-O-丙酰基-山楂醇、3-O-丁酰基-山楂醇、3-O-戊酰基-山楂醇、3-O-辛基-山楂醇、3-O-月桂基-山楂醇、3-O-肉豆蔻基-山楂醇、3-O-棕櫚基-山楂醇、3-O-棕櫚油烯基-山楂醇、3-O-硬脂基-山楂醇、3-O-油烯基-山楂醇、3-O-棕櫚油烯基-山楂醇、3-O-亞油基-山楂醇、3-O-亞麻基-山楂醇、3-O-花生基-山楂醇、3-O-花生四烯基-山楂醇、3-O-山萮基-山楂醇、28-O-乙?；?山楂醇、28-O-丙?；?山楂醇、28-O-丁?；?山楂醇、28-O-戊?；?山楂醇、28-O-辛基-山楂醇、28-O-月桂基-山楂醇、28-O-肉豆蔻基-山楂醇、28-O-棕櫚基-山楂醇、28-O-棕櫚油烯基-山楂醇、28-O-硬脂基-山楂醇、28-O-油烯基-山楂醇、28-O-棕櫚油烯基-山楂醇、28-O-亞油基-山楂醇、28-O-亞麻基-山楂醇、28-O-花生基-山楂醇、28-O-花生四烯基-山楂醇、28-O-山萮基-山楂醇、3-O-甲基-山楂醇、3-O-乙基-山楂醇、3-O-叔丁基-山楂醇、3-O-三乙基甲硅烷基-山楂醇、28-O-甲基-山楂醇、28-O-乙基-山楂醇、28-O-叔丁基-山楂醇、28-O-三乙基甲硅烷基-山楂醇、3-O-β-D-吡喃葡糖基-山楂醇、3-O-β-D-吡喃半乳糖基-山楂醇、3-O-β-D-吡喃葡糖醛基-山楂醇、28-O-β-D-吡喃葡糖基-山楂醇、28-O-β-D-吡喃半乳糖基-山楂醇、28-O-β-D-吡喃葡糖醛基-山楂醇等。其中，優(yōu)選為3-O-乙?；?山楂醇、28-O-乙?；?山楂醇。雖然以上舉出的都是作為衍生物只有一個(gè)基團(tuán)發(fā)生衍生物化的化合物，當(dāng)然，這些化合物中的衍生位置以及種類當(dāng)然也可能是兩個(gè)基團(tuán)以上發(fā)生衍生物化的。例如可以舉出3，28-O-二乙酰基-山楂醇。另外，關(guān)于配糖物，可以舉出單糖，當(dāng)然，也可以是從各種各樣的糖類中選出的二糖以上的低聚糖。
樺木酸以及樺木醇二者皆為羽扇烷系三萜類中的一種，是已知在各種植物中均有存在的物質(zhì)。另外，關(guān)于其生理上容許的鹽以及衍生物的情況也與上述相同。當(dāng)在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中使用樺木酸、樺木醇、其生理上容許的鹽、或者其衍生物的情況，對(duì)這些物質(zhì)的來源沒有限制，從自然界獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選使用天然物。
樺木酸(betulinic acid)為羽扇烷系三萜烯中的一種，具有化學(xué)式(VIII)所示的結(jié)構(gòu)，在作用方面，已知具有抗癌作用、抗炎癥作用、創(chuàng)傷治療促進(jìn)作用(特公平4-26623)、醇吸收抑制作用(特開平7-53385)、生發(fā)促進(jìn)作用(特開平9-157139)等。已知該化合物存在于自然界中，在獐牙菜、丁香、葡萄皮、橄欖等中以游離狀態(tài)存在，而在日本人參、胡蘿卜、甜菜屬等中以皂草苷的形式存在。在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中對(duì)樺木酸、其生理上容許的鹽、或者其衍生物的來源沒有限制，從自然界獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選使用例如，獐牙菜、丁香、葡萄、橄欖、日本人參、胡蘿卜、甜菜屬等從自然界獲得的物質(zhì)。特別優(yōu)選是從橄欖中獲得的物質(zhì)，具體地說，優(yōu)選是從在橄欖植物和/或橄欖油制造工序中獲得的副產(chǎn)物提取獲得的物質(zhì)。
關(guān)于樺木酸，其生理上容許的鹽或衍生物的情況也與上述相同。
此處，其生理上容許的鹽可以是但不限定于以下的物質(zhì)，例如，作為樺木酸的鹽，可以舉出樺木酸鈉、樺木酸鉀、樺木酸銨、樺木酸二甲基銨、樺木酸鈣、樺木酸鎂等。其中，優(yōu)選為樺木酸鈉和樺木酸鉀。
作為樺木酸的衍生物，例如，作為在任何一個(gè)位置上發(fā)生衍生物化而獲得的化合物，可以舉出樺木酸甲酯、樺木酸乙酯、樺木酸正丙酯、樺木酸異丙酯、樺木酸正丁酯、樺木酸三甲基甲硅烷基酯、樺木酸三乙基甲硅烷基酯、樺木酸-β-D-吡喃葡糖基酯、樺木酸-β-D-吡喃半乳糖基酯、3-O-乙?；?樺木酸、3-O-丙?；?樺木酸、3-O-丁酰基-樺木酸、3-O-戊?；?樺木酸、3-O-辛基-樺木酸、3-O-月桂基-樺木酸、3-O-肉豆蔻基-樺木酸、3-O-棕櫚基-樺木酸、3-O-棕櫚油烯基-樺木酸、3-O-硬脂基-樺木酸、3-O-油烯基-樺木酸、3-O-棕櫚油烯基-樺木酸、3-O-亞油基-樺木酸、3-O-亞麻基-樺木酸、3-O-花生基-樺木酸、3-O-花生四烯基-樺木酸、3-O-山萮基-樺木酸、3-O-甲基-樺木酸、3-O-乙基-樺木酸、3-O-叔丁基-樺木酸、3-O-三乙基甲硅烷基-樺木酸、3-O-β-D-吡喃葡糖基-樺木酸、3-O-β-D-吡喃半乳糖基-樺木酸、3-O-β-D-吡喃葡糖醛基-樺木酸等。其中，優(yōu)選為樺木酸乙酯。雖然以上舉出的都是作為衍生物只有一個(gè)基團(tuán)發(fā)生衍生物化的化合物，當(dāng)然，這些化合物中的衍生位置以及種類當(dāng)然也可能是兩個(gè)基團(tuán)以上發(fā)生衍生物化的。另外，關(guān)于配糖物，可以舉出單糖，當(dāng)然，也可以是從各種各樣的糖類中選出的二糖以上的低聚糖。
樺木醇(betulin)為羽扇烷系三萜烯中的一種，具有化學(xué)式(IX)所示的結(jié)構(gòu)，在作用方面，已知具有生物蛋白修飾抑制作用(特開平9-67253)、甘油磷酸脫氫酶抑制作用(特開平9-67249)、脂肪酶抑制作用(特開平10-265328)、肝臟疾病預(yù)防作用(特開平11-209275)等。已知該化合物存在于自然中，例如白樺樹皮等。在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中對(duì)樺木醇或者其衍生物的來源沒有限制，從自然界獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)、市售品等之中的任何一種均可使用，但是如果考慮應(yīng)用于飲食等，則優(yōu)選是從例如白樺樹皮等天然物中獲得的物質(zhì)。
關(guān)于樺木醇，其生理上容許的鹽和衍生物的情況也與上述相同。
此處，衍生物可以是但不限定于以下的物質(zhì)，例如，作為在任何一個(gè)位置上發(fā)生衍生物化而獲得的化合物，可以舉出3-O-乙?；?樺木醇、3-O-丙?；?樺木醇、3-O-丁酰基-樺木醇、3-O-戊?；?樺木醇、3-O-辛基-樺木醇、3-O-月桂基-樺木醇、3-O-肉豆蔻基-樺木醇、3-O-棕櫚基-樺木醇、3-O-棕櫚油烯基-樺木醇、3-O-硬脂基-樺木醇、3-O-油烯基-樺木醇、3-O-棕櫚油烯基-樺木醇、3-O-亞油基-樺木醇、3-O-亞麻基-樺木醇、3-O-花生基-樺木醇、3-O-花生四烯基-樺木醇、3-O-山萮基-樺木醇、28-O-乙酰基-樺木醇、28-O-丙?；?樺木醇、28-O-丁?；?樺木醇、28-O-戊?；?樺木醇、28-O-辛基-樺木醇、28-O-月桂基-樺木醇、28-O-肉豆蔻基-樺木醇、28-O-棕櫚基-樺木醇、28-O-棕櫚油烯基-樺木醇、28-O-硬脂基-樺木醇、28-O-油烯基-樺木醇、28-O-棕櫚油烯基-樺木醇、28-O-亞油基-樺木醇、28-O-亞麻基-樺木醇、28-O-花生基-樺木醇、28-O-花生四烯基-樺木醇、28-O-山萮基-樺木醇、3-O-甲基-樺木醇、3-O-乙基-樺木醇、3-O-叔丁基-樺木醇、3-O-三乙基甲硅烷基-樺木醇、28-O-甲基-樺木醇、28-O-乙基-樺木醇、28-O-叔丁基-樺木醇、28-O-三乙基甲硅烷基-樺木醇、3-O-β-D-吡喃葡糖基-樺木醇、3-O-β-D-吡喃半乳糖基-樺木醇、3-O-β-D-吡喃葡糖醛基-樺木醇、28-O-β-D-吡喃葡糖基-樺木醇、28-O-β-D-吡喃半乳糖基-樺木醇、28-O-β-D-吡喃葡糖醛基-樺木醇等。其中，優(yōu)選為3-O-乙?；?樺木醇、28-O-乙?；?樺木醇。雖然以上舉出的都是作為衍生物只有一個(gè)基團(tuán)發(fā)生衍生物化的化合物，當(dāng)然，這些化合物中的衍生位置以及種類當(dāng)然也可能是兩個(gè)基團(tuán)以上發(fā)生衍生物化的。例如，優(yōu)選為3，28-O-二乙酰基-樺木醇。另外，關(guān)于配糖物，可以舉出單糖，當(dāng)然，也可以是從各種各樣的糖類中選出的二糖以上的低聚糖。
這些五環(huán)型三萜類可以通過從自然界中各自有記載的植物體以及橄欖植物的脫脂物等提取來獲得。即，可以用水和/或有機(jī)溶劑從各植物體提取，然后從該提取物，使用溶劑提取法、利用與雜質(zhì)存在溶解度差的方法、分別沉淀法、重結(jié)晶法、離子交換樹脂法、液相色譜法等單獨(dú)地或者適宜組合地、或者反復(fù)使用這些方法來加以分離精制。
特別是山楂酸和/或其生理上容許的鹽可以通過用水和/或有機(jī)溶劑從橄欖植物以及橄欖植物的脫脂物等提取，然后從該提取物，通過溶劑提取法、利用與雜質(zhì)存在溶解度差的方法、分別沉淀法、重結(jié)晶法、離子交換樹脂法、液相色譜法等單獨(dú)地或者適宜組合地、或者反復(fù)使用這些方法來加以分離精制。
橄欖植物(Olea europaea L.)，產(chǎn)地為日本國和歐州等是可以作為食用或榨油用。在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中含有的山楂酸和/或其生理上容許的鹽可以從屬于天然植物的以橄欖植物為主的果實(shí)或者種子中獲得，另外，也可以從其種子皮、葉、莖、芽中獲得。另外，還可以適宜地從其干燥物、粉碎物、脫脂物中獲得。其中，優(yōu)選是脫脂后的果實(shí)(含果皮)或果皮的干燥物以及粉碎物。另外，也可以從在橄欖油的制造工序中產(chǎn)生的副產(chǎn)物，例如壓榨殘?jiān)?、提取殘?jiān)⒄ビ蜌堅(jiān)?、壓榨油、提取油、脫膠油渣、脫酸油渣、黑油、廢脫色劑、脫臭渣滓、榨油漿汁、排水、廢過濾材料中獲得。其中，優(yōu)選是榨油殘?jiān)约疤崛堅(jiān)?br> 由于上述橄欖植物含有山楂酸和/或其生理上容許的鹽，因此在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑、及其原料、飼料、肥料、防止黑變·褐變的組合物中可以使用該橄欖植物。即，本發(fā)明涉及含有橄欖植物的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，涉及含有橄欖植物的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑原料，涉及含有橄欖植物的飼料，涉及含有橄欖植物的肥料，涉及含有橄欖植物的防止黑變·褐變的組合物。
另外，在向上述橄欖植物的果實(shí)或其脫脂物等添水或加水的情況、或者利用蒸汽蒸煮等來進(jìn)行加濕處理的情況，可以使這些橄欖植物的果實(shí)或其脫脂物等適度膨潤，因此可以提高提取效率，所以較為優(yōu)選。應(yīng)予說明，在本說明書中所說的橄欖提取物是指對(duì)在橄欖油制造工序中獲得的脫脂物進(jìn)行溶劑提取而獲得的提取物，所說的在橄欖油制造工序中獲得的脫脂物包含提取殘?jiān)蛪嚎s殘?jiān)Ａ硗?，在本說明書中所說的橄欖提取油是指使用己烷等對(duì)在橄欖油制造工序中獲得的壓榨殘?jiān)M(jìn)行溶劑提取而獲得的提取油。
特別是在橄欖植物的脫脂物中，山楂酸和/或其生理上容許的鹽以高濃度存在，而且不必從所獲的山楂酸和/或其生理上容許的鹽中除去油分，因此較為優(yōu)選。
該脫脂物可以用在食油精制工序中產(chǎn)生的橄欖榨油殘?jiān)?、或者用己烷等提取后的殘?jiān)鳛樵稀?br> 另外，在橄欖植物或者該脫脂物中含有的脂質(zhì)成分可以通過用戊烷、己烷、庚烷等的烴類、乙酸乙酯等的低級(jí)脂肪酸烷基酯、乙醚等的非水溶性有機(jī)溶劑中的一種或兩種以上進(jìn)行提取來除去，另外，根據(jù)需要，可以對(duì)該經(jīng)過反復(fù)洗滌處理的脫脂物適宜地加以利用。
通過用水和/或有機(jī)溶劑來提取上述橄欖植物，可以獲得在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中含有的山楂酸和/或其生理上容許的鹽。另外，在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑、及其原料、飼料、肥料、防止黑變·褐變的組合物中可以使用該橄欖提取物。即，本發(fā)明涉及含有橄欖提取物的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，涉及含有橄欖提取物的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑原料，涉及含有橄欖提取物的飼料，涉及含有橄欖提取物的肥料，涉及含有橄欖提取物的防止黑變·褐變的組合物。
作為用于從橄欖植物獲得山楂酸和/或其生理上容許的鹽時(shí)使用的有機(jī)溶劑，可以是親水性有機(jī)溶劑、疏水性有機(jī)溶劑中的任一種。具體地說，作為親水性有機(jī)溶劑，可以舉出甲醇、乙醇、甘油、丙二醇、1，3-丁二醇等的醇類；丙酮、四氫呋喃、乙腈、1，4-二噁烷、吡啶、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺、乙酸等公知的有機(jī)溶劑；作為疏水性有機(jī)溶劑，可以舉出己烷、環(huán)己烷、四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、乙醚、乙酸乙酯、苯、甲苯等公知的有機(jī)溶劑。另外，這些有機(jī)溶劑可以將其一種或兩種以上組合使用。
在工業(yè)上，從例如向植物組織的浸透性、提取效率等考慮，優(yōu)選使用親水性的有機(jī)溶劑，更優(yōu)選使用含水的親水性有機(jī)溶劑。具體地可以舉出甲醇、乙醇、甘油、丙二醇、1，3-丁二醇等的醇、丙酮、四氫呋喃、乙腈等的有機(jī)溶劑以及它們的含水溶劑。通過使用從其中選出的一種或兩種以上，可以從橄欖植物中獲得本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中含有的山楂酸和/或其生理上容許的鹽。
對(duì)提取條件沒有特別限定，例如，可以在溫度為5℃～95℃，優(yōu)選為10℃～90℃，更優(yōu)選為15℃～85℃的條件下提取，即便在常溫下也可以提取。溫度越高，提取效率越高。在壓力方面，不管是常壓、加壓或者是通過抽吸形成的減壓都可以提取。另外，為了提高提取效率，可以采用振動(dòng)提取或使用裝備有攪拌機(jī)等的提取機(jī)進(jìn)行提取。提取時(shí)間隨其他提取條件的不同而異，一般為數(shù)分鐘～數(shù)小時(shí)，時(shí)間越長，提取越充分，可依生產(chǎn)設(shè)備、收率等的生產(chǎn)條件適宜地確定。
另外，作為在提取時(shí)使用的溶劑，在單獨(dú)使用水的情況，單獨(dú)使用有機(jī)溶劑的情況、混合使用水和有機(jī)溶劑的情況，相對(duì)于原料，可以使用1～100倍量(“質(zhì)量/質(zhì)量”，以下相同)，優(yōu)選為1～20倍量。
另外，如果考慮到對(duì)人體等的安全性等，特別優(yōu)選使用水、含水低級(jí)醇、無水低級(jí)醇之中任一種來提取。
進(jìn)而，在同時(shí)考慮山楂酸和/或其生理上容許的鹽的收率和黑素生成抑制效果的強(qiáng)度的情況，優(yōu)選使用低級(jí)醇含量在10質(zhì)量％以上的含水低級(jí)醇來提取。更優(yōu)選使用低級(jí)醇含量為10質(zhì)量％～95質(zhì)量％的含水醇，最優(yōu)選使用低級(jí)醇含量為30質(zhì)量％～95質(zhì)量％的含水低級(jí)醇。
此處，作為在本發(fā)明中使用的醇，可以舉出甲醇、乙醇、1-丙醇、1-丁醇等的伯醇；2-丙醇、2-丁醇等的仲醇；2-甲基-2-丙醇等的叔醇以及乙二醇、丙二醇、1，3-丁二醇等的液態(tài)多元醇等的溶劑，這些溶劑可以使用其中的一種或?qū)⑵鋬煞N以上組合使用。
低級(jí)醇是指碳原子數(shù)為1～4的公知的醇，可以舉出例如，上述的伯醇、仲醇、叔醇、或者液態(tài)多元醇等，它們可以使用其中的一種或?qū)⑵鋬煞N以上組合使用。
可以通過從如此獲得的粗提取物和/或粗提取液中除去溶劑和水分來獲得本發(fā)明中的山楂酸和/或其生理上容許的鹽。
溶劑和水分的除去，可以采用減壓蒸餾、減壓·真空干燥、凍結(jié)干燥、噴霧干燥等公知的方法來進(jìn)行。
當(dāng)然，可以直接采用含溶劑或水分的狀態(tài)，但對(duì)此沒有限定。
由于從脫脂物獲得的提取物不含三甘油酯或甾醇、生育酚等的油溶性成分，因此沒有必要將其除去和精制，所以較為優(yōu)選。除此之外，由于脫脂物含有榨油后的殘?jiān)?，因此可以使用榨取橄欖油后的壓榨殘?jiān)?壓榨粕)以及提取殘?jiān)?提取粕)，所以是一種對(duì)橄欖極為有效利用的方法，由于通常可用于廢棄物或者飼料等中，因此從生產(chǎn)成本方面考慮是最優(yōu)良的方法。
進(jìn)而，為了使得從橄欖植物提取獲得的山楂酸和/或其生理上容許的鹽在黑素生成抑制方面的效果能進(jìn)一步提高，優(yōu)選是對(duì)山楂酸和/或其生理上容許的鹽進(jìn)行濃縮處理等。
對(duì)濃縮條件沒有特別限定，例如，可以舉出利用對(duì)水的溶解性的方法。本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中含有的山楂酸和/或其生理上容許的鹽是極性較低的、難水溶性的化合物。通過利用該性質(zhì)，將從橄欖植物獲得的粗提取物分為難以溶解于水中的成分和/或不溶解于水中的成分即難水溶性等的成分和容易溶解于水中的成分，從而可以大幅度地進(jìn)行濃縮。從橄欖植物獲得的粗提取物中含有的難水溶性等的成分，即使與從橄欖植物獲得的粗提取物全體相比，其大幅度抑制黑素生成的效果也優(yōu)良，由此可以確認(rèn)山楂酸和/或其生理上容許的鹽已被濃縮。
難水溶性等的成分可以通過把從橄欖植物獲得的粗提取物添加到水中并進(jìn)行攪拌后，采用過濾等方法收集析出的部分來簡易地獲得。
另外，本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中含有的山楂酸和/或其生理上容許的鹽，根據(jù)需要，可以通過一般的溶劑組合進(jìn)行液-液萃取來加以濃縮。溶劑的組合難以一概而定，可以舉出例如，水-疏水性有機(jī)溶劑的組合，作為疏水性有機(jī)溶劑，可以舉出己烷、四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯等公知的有機(jī)溶劑。其中，優(yōu)選己烷、乙酸乙酯、正丁醇。
由于山楂酸和/或其生理上容許的鹽是難水溶性的，因此，可以通過分離取出疏水性有機(jī)溶劑相來除去不需要的水溶性成分。通過除去溶劑，可以容易地將山楂酸和/或其生理上容許的鹽濃縮。
進(jìn)而，優(yōu)選是將本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中含有的山楂酸和/或其生理上容許的鹽，從上述提取物和/或濃縮物中分離出來并進(jìn)行精制處理。如此可以將其濃縮至上述的濃縮物以上，從而可以分離出所需的成分。
作為分離、精制處理的優(yōu)點(diǎn)，可以舉出，除了可以大大地提高黑素生成抑制效果等以外，還能除去雜質(zhì)等。即，在進(jìn)行該分離、精制處理的情況，可以獲得白色結(jié)晶的山楂酸和/或其生理上容許的鹽，因此在使用時(shí)不必添加顏色便可適宜地配合，因此較為優(yōu)選。
對(duì)于分離、精制處理的方法，難以一概而定，但是可以舉出例如，重結(jié)晶法、分級(jí)沉淀法、利用色譜法的方法等。在色譜法中，特別是利用液相色譜法的方法可以在不導(dǎo)致本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中含有的山楂酸和/或其生理上容許的鹽分解的條件下以良好的收率進(jìn)行分離·精制，因此是優(yōu)選的。作為液相色譜法，具體地可以舉出正相液相色譜法、反相液相色譜法、薄層色譜法、紙上色譜法、高速液相色譜法(HPLC)等，在對(duì)本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中含有的山楂酸和/或其生理上容許的鹽進(jìn)行分離·精制處理時(shí)，可以采用上述任何一種方法。特別是在考慮分離能力、處理量、工序數(shù)等時(shí)，優(yōu)選采用正相液相色譜法、反相液相色譜法、高速液相色譜法(HPLC)。
此處，正相液相色譜法是指例如以下的方法。即，首先制成例如將硅膠作為固定相、將己烷-乙酸乙酯混合液、氯仿-甲醇混合液等作為移動(dòng)相的柱子，將從橄欖植物獲得的粗提取物或者其濃縮物以負(fù)荷率0.1～5％(wt(質(zhì)量)/v(體積))供料，按照使用單一移動(dòng)相進(jìn)行的連續(xù)洗脫法或者按照順序增加溶劑極性的分段洗脫的方法來將規(guī)定的級(jí)分洗脫的方法。
反相液相色譜法是指例如以下的方法。即，首先制成例如將結(jié)合有十八烷基硅烷的二氧化硅(ODS)作為固定相、將水-甲醇混合液、水-乙腈混合液、水-丙酮混合液等作為移動(dòng)相的柱子，把從橄欖植物中獲得的粗提取物或其濃縮物按負(fù)荷率0.1～5％(wt(質(zhì)量)/v(體積))供料，按照使用單一溶劑進(jìn)行的連續(xù)洗脫法或者按照順序降低溶劑極性的分段洗脫法來將規(guī)定的級(jí)分洗脫的方法。
高速液相色譜法(HPLC)在原理上與上述的正相液相色譜法或反相液相色譜法相同，可以在迅速而且高分離能力的條件下進(jìn)行分離·精制。
通過使用上述方法中的一種或兩種以上的組合，可以在很大程度上濃縮山楂酸和/或其生理上容許的鹽，而且可以按除去雜質(zhì)的狀態(tài)獲得，因此是優(yōu)選的。
進(jìn)而，通過使用上述方法中的一種或兩種以上的組合，可以調(diào)整山楂酸和/或其生理上容許的鹽的純度，還可以根據(jù)需要設(shè)計(jì)黑素生成抑制效果的強(qiáng)度、特性等。
關(guān)于上述的濃縮處理，優(yōu)選可以反復(fù)進(jìn)行濃縮處理，進(jìn)而可以將不同的濃縮處理組合使用。同樣是關(guān)于分離·精制處理，優(yōu)選可以反復(fù)進(jìn)行分離·精制處理，進(jìn)而可以將不同的分離·精制處理組合使用。進(jìn)而，在進(jìn)行濃縮處理后，也可以進(jìn)行分離·精制處理，在進(jìn)行分離·精制處理后也可以再進(jìn)行分離·精制處理，在進(jìn)行濃縮處理后也可以進(jìn)行分離·精制處理然后再進(jìn)行濃縮處理。當(dāng)然，也可以是上述組合以外的組合。
另外，作為本發(fā)明的有效成分的選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物，當(dāng)在本發(fā)明的飼料、肥料以及組合物中含有有效的必要量時(shí)，可以發(fā)揮防止黑變·褐變的效果。即，即使是按照從橄欖植物等的天然的植物體或橄欖油制造工序中獲得的脫脂物提取出的提取物、濃縮物、粗精制物或精制物的形式含有本發(fā)明的有效成分的情況，也可以獲得防止黑變·褐變的效果。該橄欖提取物根據(jù)提取方法·條件、或是濃縮·精制條件，造成含有的山楂酸的濃度不同。特別是由于在濃縮·精制后提高了山楂酸的濃度，因此其防止黑變·褐變的功能也得以提高。就是說，當(dāng)以相同濃度含有的情況，濃縮·精制的程度越高，防止黑變·褐變的功能越強(qiáng)。
通過將上述提取處理、濃縮處理、分離和/或精制處理等進(jìn)行各種各樣的組合，可以適宜地獲得山楂酸和/或其生理上容許的鹽。對(duì)于其組合沒有特別限定，作為一系列處理的具體例，可以舉出以下的方法。
例如，用水和/或親水性有機(jī)溶劑對(duì)橄欖植物進(jìn)行提取處理后，對(duì)所獲的提取液除去其中的親水性有機(jī)溶劑的一部分或者全部，根據(jù)需要加入水，并進(jìn)行攪拌，回收水層部中析出的水不溶成分，進(jìn)行濃縮。析出的水不溶成分可以通過過濾或離心分離等進(jìn)行回收，為了提高該回收效率，可以根據(jù)需要，可以進(jìn)行向水溶液中添加水和攪拌等的處理。另外，對(duì)于已從由橄欖植物獲得的提取液中除去水和/或親水性有機(jī)溶劑后獲得的干固狀態(tài)的提取物也可以與上述同樣地進(jìn)行添加水和攪拌等的處理并通過過濾等來回收其中的水不溶性成分，如此進(jìn)行濃縮處理。由于該濃縮方法屬于水體系的處理方法，因此在安全性方面比使用溶劑進(jìn)行濃縮的方法要好，另外，可供使用的機(jī)器的范圍也較寬，因此是優(yōu)選的。另外，由于幾乎不含油分，因此在濃縮·精制的效率方面也優(yōu)良，所以是優(yōu)選的。
對(duì)這些濃縮物通過正相和/或反相色譜法和/或重結(jié)晶法進(jìn)行分離·精制處理，可以適宜地獲得精制成高純度的山楂酸和/或其生理上容許的鹽。
此處，液-液萃取時(shí)添加的水的量，只要是能夠進(jìn)行萃取處理的量即可，對(duì)此沒有特別限定，但優(yōu)選為干固的提取物質(zhì)量的1～100倍量，較優(yōu)選為5～50倍量，更優(yōu)選為10～30倍量左右。
另外，在使用水-疏水性有機(jī)溶劑的液-液萃取中，水與疏水性有機(jī)溶劑優(yōu)選按水∶疏水性有機(jī)溶劑＝9∶1～1∶9(體積比)的比例使用，更優(yōu)選按8∶2～2∶8的比例使用。
另外，在從橄欖植物和/或橄欖油制造工序中獲得的生成物提取出的山楂酸及其生理上容許的鹽的混合物中，山楂酸及其生理的上容許的鹽的總含量優(yōu)選為95％以上，更優(yōu)選為95％～99.99％。該含量可以采用例如氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定。
另外，對(duì)于從橄欖植物獲得的提取液，可以通過除去其中的親水性有機(jī)溶劑、根據(jù)需要向殘余的水溶液中添加水、進(jìn)而添加疏水性有機(jī)溶劑、并通過水-疏水性有機(jī)溶劑的液-液萃取來進(jìn)行濃縮處理。另外，即使是干固狀態(tài)的提取物，也可以與上述同樣地添加水、進(jìn)而添加疏水性有機(jī)溶劑并通過水-疏水性有機(jī)溶劑的液-液萃取來進(jìn)行濃縮處理。通過對(duì)這些濃縮物按照正相和/或反相色譜法和/或重結(jié)晶法進(jìn)行分離·精制處理，可以獲得精制成高純度的山楂酸和/或其生理上容許的鹽。
本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中可以含有山楂酸和/或其生理上容許的鹽，即使含有上述提取物以及濃縮物，也可以獲得本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑。另外，通過調(diào)整濃縮、精制等的程度，可以調(diào)整山楂酸和/或其生理上容許的鹽的濃度等，從而可以適宜地配合到動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中。
由于橄欖油中含有山楂酸，因此在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑、及其原料、飼料、肥料、防止黑變·褐變的組合物中，通過使用橄欖油作為油性成分，可以獲得優(yōu)良的黑素生成抑制效果和防止黑變·褐變的效果，因此較為優(yōu)選。
另外，從橄欖植物提取山楂酸和/或其生理上容許的鹽的情況，可以同時(shí)提取齊墩果酸和/或其生理上容許的鹽，但從該齊墩果酸和/或其生理上容許的鹽與山楂酸的相溶性優(yōu)良的觀點(diǎn)考慮，可以將該混合物直接配合到本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中。因此可以期待它們各自具有的生理效果起到協(xié)同的效果，特別是可以期待山楂酸和/或其生理上容許的鹽對(duì)本發(fā)明中的黑素生成抑制效果起到協(xié)同的效果，因此較為優(yōu)選。在將山楂酸和/或其生理上容許的鹽從橄欖植物中進(jìn)行提取、分離精制等時(shí)，通過調(diào)整其條件，可以作為與齊墩果酸和/或其生理上容許的鹽的混合物獲得，也可以從橄欖植物中分別分離出山楂酸和/或其生理上容許的鹽、齊墩果酸和/或其生理上容許的鹽，然后將它們混合在一起使用。另外，也可以把從不同的原料獲得的山楂酸和/或其生理上容許的鹽與齊墩果酸和/或其生理上容許的鹽混合在一起使用。
本發(fā)明涉及上述選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑。
此處，所謂含有上述成分作為有效成分是指其含量達(dá)到能夠發(fā)揮黑素生成抑制效果的程度，但是在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中，上述成分的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，可以為0.00001質(zhì)量％以上，優(yōu)選為0.00001～99.99質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.0001～99.99質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.0005～99.99質(zhì)量％，尤其優(yōu)選為0.001～99.99質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.005～99.99質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選為0.01～99.99質(zhì)量％，更尤其優(yōu)選為0.05～99.99質(zhì)量％，更特別優(yōu)選為0.1～99.99質(zhì)量％，更進(jìn)一步優(yōu)選為0.5～99.99質(zhì)量％，最優(yōu)選為1～99.99質(zhì)量％。
本發(fā)明的發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)，五環(huán)型三萜類和/或其生理上容許的鹽、或者其衍生物具有優(yōu)良的黑素生成抑制效果，特別是山楂酸和/或其生理上容許的鹽、或者其衍生物具有極為優(yōu)良的黑素生成抑制效果。
本發(fā)明中，所謂黑素生成抑制效果是指一種作為動(dòng)植物生命活動(dòng)的結(jié)果而產(chǎn)生的能夠抑制或防止呈黑～褐色的黑素生成的效果，它能有效地防止以動(dòng)植物體和/或其一部分和/或其一小部分作為原料的食品等變色或保持鮮度。一般來說，已知黑素是引起肉、魚、蔬菜類等生鮮食品黑變、褐變現(xiàn)象或動(dòng)物寵物或觀賞魚類等由于黑變等而導(dǎo)致的顏色發(fā)暗或掉色現(xiàn)象的原因之一，因此，只要能夠抑制黑素的生成，就有可能提高肉、魚、蔬菜類等生鮮食品等或動(dòng)物寵物或觀賞用動(dòng)植物的商品價(jià)值。
在本發(fā)明中，對(duì)黑素生成抑制效果的評(píng)價(jià)按下述方法進(jìn)行，首先，作為一次評(píng)價(jià)，使用B-16黑色素瘤細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)并通過黑素生成抑制功能試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)比較。另外，作為二次評(píng)價(jià)，使用實(shí)際配制的飼料等對(duì)黑素生成抑制效果的有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)。在作為一次評(píng)價(jià)的細(xì)胞評(píng)價(jià)中顯示強(qiáng)力的黑素生成抑制功能的五環(huán)型三萜類即使在二次評(píng)價(jià)中也具有優(yōu)良的效果，另外，在兩個(gè)評(píng)價(jià)方法中的效果的相互關(guān)系也是相同的。
B-16黑色素瘤細(xì)胞是一種具有黑素產(chǎn)生能力的細(xì)胞，能通過培養(yǎng)使自然增殖的細(xì)胞黑色化。但是如果在增殖時(shí)在體系內(nèi)存在能夠抑制黑素生成的物質(zhì)，則可以抑制細(xì)胞的黑色化，從而達(dá)到相對(duì)地白色化。因此，在進(jìn)行控制的情況，就可以根據(jù)與黑色化度相反的添加檢體時(shí)的白色化度的程度來對(duì)黑素生成抑制效果進(jìn)行比較。根據(jù)對(duì)該細(xì)胞培養(yǎng)系中的黑素生成抑制效果的評(píng)價(jià)結(jié)果，可以看出，五環(huán)型三萜類和/或其生理上容許的鹽、或者其衍生物所具有的黑素生成抑制效果是非常強(qiáng)的。例如，當(dāng)與維生素C磷酸鎂鹽進(jìn)行比較時(shí)，下述各種物質(zhì)所具有的黑素生成抑制效果分別為山楂酸約為100～200倍，山楂酸的鹽約為100～200倍，高根二醇約為10～100倍，山楂醇約為30～120倍，樺木酸約為30～120倍，樺木醇約為10～100倍，山楂酸乙酯約為100～200倍，乙?；介峒s為50～150倍，三乙基甲硅烷基化山楂酸約為30～120倍，硬脂?；介嵋阴ゼs為50～150倍，乙酰基化高根二醇約為10～100倍，乙?；介技s為10～100倍，樺木酸乙酯約為10～100倍，乙酰基化樺木醇約為5～50倍。
如上所述，只要能夠抑制黑素的生成，就可以預(yù)防、改善肉、魚、蔬菜類等的生鮮食品等的黑變、褐變。根據(jù)這一點(diǎn)，由于在本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑中使用的五環(huán)型三萜類和/或其生理上容許的鹽、或者其衍生物具有強(qiáng)力的黑素生成抑制效果，因此可以將黑素色素的生成抑制到最小限度，從而可以改善或防止肉、魚、蔬菜類等的生鮮食品等的黑變、褐變。
作為黑素生成抑制效果的二次評(píng)價(jià)，可以使用實(shí)際配制的飼料等來確認(rèn)其有效性。例如，可以實(shí)際上配制配合有本發(fā)明中選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的飼料，通過進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)來評(píng)價(jià)。例如，可以將配制的飼料、以及通常的飼料投與真鯛，用色差計(jì)測(cè)定其體色的黑變，通過評(píng)價(jià)體色黑變的抑制程度來確認(rèn)其有效性。另外，在一般消費(fèi)者所看到的多數(shù)為切成魚片的狀態(tài)下，當(dāng)對(duì)由于黑素的生成而形成的魚肉內(nèi)的黑筋進(jìn)行測(cè)定時(shí)，與投喂通常飼料的真鯛相比，投喂配制飼料的真鯛呈現(xiàn)的黑筋較少，更接近于天然的真鯛的狀態(tài)。在這種評(píng)價(jià)中，本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物，即使與配合曲酸等的情況相比，也具有同等以上的黑素生成抑制效果。
進(jìn)而，對(duì)于魚貝類的黑變，或者對(duì)于蔬菜水果等植物之類的生鮮食品，也可以通過把配合有本發(fā)明中的選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的組合物配制成溶解于水中的處理液并用其處理對(duì)象物之后，通過比較黑變、褐變的程度來進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如，把作為會(huì)發(fā)生黑變的魚貝類的蝦、會(huì)發(fā)生褐變的食用植物體的蘋果用配制好的處理液浸漬之后，將其保存和放置一定期間，對(duì)這時(shí)的黑變、褐變的程度分五級(jí)進(jìn)行點(diǎn)數(shù)化評(píng)價(jià)，用本發(fā)明組合物處理過的物品，結(jié)果明確表明其黑變、褐變的進(jìn)行要慢得多，因此可以確認(rèn)其有效性。該評(píng)價(jià)表明，本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物具有優(yōu)良的黑素生成抑制效果。
本發(fā)明的效果可以用黑變·褐變防止指數(shù)來表示。黑變·褐變防止指數(shù)用下式表示。
黑變·褐變防止指數(shù)＝投與本發(fā)明品或比較品的黑變·褐變防止劑的動(dòng)植物體的體表L值/未投與動(dòng)植物體的體表L值×100本發(fā)明的效果也可以用黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)來表示。即，如上所述的曲酸具有防止動(dòng)植物體的體表的黑變·褐變的功能。因此，防止黑變·褐變的強(qiáng)度可以通過與使用作為公知的黑變·褐變防止劑的曲酸的情況所得到的效果相比較來求出。因此，黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)可以用下式來求出。
黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)＝投與本發(fā)明品的黑變·褐變防止劑的動(dòng)植物體的體表L值/投與曲酸的動(dòng)植物體的體表L值×100但是，把含有黑變·褐變防止成分的本發(fā)明品與按相同含量含有曲酸的比較品進(jìn)行對(duì)比。
本發(fā)明的黑變·褐變防止效果可以另外用與色彩有關(guān)的指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如，L值、a值以及b值是在一個(gè)具有對(duì)人們的感覺為大致均等尺寸的空間內(nèi)配置所有各種顏色，因此可以按照與人們感覺相接近的狀態(tài)來表示顏色。在該情況，以L值表示亮度，在數(shù)值為0～100的范圍內(nèi)，亮度越高，即，越是明亮感的顏色，其數(shù)值越高。這些數(shù)值一般可用來對(duì)由于黑素的積累所引起的黑變進(jìn)行外觀評(píng)價(jià)，從下述的實(shí)施例可以清楚地看出，按目視的外觀評(píng)價(jià)與L值等有很高的相關(guān)性。但是，即使L值之差較小，也存在按目視的黑變·褐變防止效果高的情況。
本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑可以是由選自上述五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上構(gòu)成的物質(zhì)，另外，也可以是由選自上述五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分，由這些有效成分與適當(dāng)?shù)南♂寗┗蜉d體形成的組合物的形式。作為這種稀釋劑或載體的例子，可以是例如阿拉伯樹膠、黃原膠、糊精、環(huán)糊精、淀粉、葡萄糖、蔗糖、乳糖、木糖、半乳糖低聚糖、木糖低聚糖等的個(gè)體稀釋劑或載體；另外，也可以是由例如水、乙醇、丙二醇、甘油、乳化劑等的液體稀釋劑或載體中的一種或兩種以上配合而成的組合物。在乳化劑中，作為親油性乳化劑的優(yōu)選的例子，可以舉出市售的各種甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、脫水山梨糖醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、季戊四醇脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯硬化蓖麻油以及卵磷脂等。
作為親水性乳化劑的優(yōu)選的例子，可以使用市售的各種陰離子型、非離子型、陽離子型、兩性型的各種乳化劑。
作為陰離子型乳化劑，可以舉出例如皂化N-?；被猁}、烷基醚羧酸、?；牡鹊聂人猁}、烷基磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽、烷基萘磺酸、及其甲醛縮合物、二烷基磺基琥珀酸酯鹽、α-烯烴磺酸鹽、N-?；谆；撬岬鹊幕撬猁}；硫酸化油、烷基硫酸鹽、烷基醚硫酸鹽、烷基烯丙基醚硫酸鹽、烷基酰胺硫酸鹽等的硫酸酯鹽；烷基磷酸鹽、烷基醚磷酸鹽、烷基烯丙基醚磷酸鹽等的磷酸酯鹽等。另外，作為非離子型乳化劑，可以舉出例如聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯仲醇醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、烷基苯酚甲醛縮合物的氧化乙烯衍生物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物等的醚型表面活性劑；聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油以及硬化蓖麻油、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯等的醚酯型表面活性劑；聚氧乙二醇脂肪酸酯、脂肪酸單甘油酯、脫水山梨糖醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯等的酯型表面活性劑；脂肪酸鏈烷醇酰胺、聚氧乙烯脂肪酸酰胺、聚氧乙烯烷基胺、烷基胺化氧等含氮型表面活性劑等。作為陽離子型乳化劑，可以舉出例如烷基胺鹽、季銨鹽、芐烷銨鹽、吡啶鎓鹽等，進(jìn)而，作為兩性型乳化劑，可以舉出例如羧基甜菜堿型、氨基羧酸鹽、咪唑啉甜菜堿、卵磷脂等。
另外，本發(fā)明涉及含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的動(dòng)植物用黑素抑制劑原料，在上述五環(huán)型三萜類中，優(yōu)選為齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類。進(jìn)而，在上述的齊墩果烷系三萜類中，優(yōu)選為山楂酸和/或高根二醇，特別優(yōu)選為山楂酸。在烏薩烷系三萜類中，優(yōu)選為烏索酸和/或山楂醇。在羽扇烷系三萜類中，優(yōu)選為樺木酸和/或樺木醇。作為原料使用的情況，優(yōu)選為高濃度。在該情況，選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的來源沒有特別限制，從自然界獲得的物質(zhì)、人工合成的物質(zhì)中任何一種均適合使用，但是其目的是至少具有黑素生成抑制作用，并且其純度越高越好。作為純度高的優(yōu)點(diǎn)，可以舉出除了可以大幅度提高黑素生成抑制效果以外，還可以除去雜質(zhì)等。即，可以避免由于雜質(zhì)等引起的不能預(yù)測(cè)的副作用等的危險(xiǎn)性，同時(shí)可以避免在制備黑素生成抑制劑時(shí)發(fā)生的不能預(yù)測(cè)的麻煩問題，也就是提高了操作性，從而有助于大幅度地提高制品的質(zhì)量等，因此，純度越高越好。另外，在通過分離精制處理來提高純度的情況，一般均能以白色或無色固體、半固體、液體等形式獲得本發(fā)明中的選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上，因此具有不必向黑素生成抑制劑中添加多余的顏色便能適宜地配合等的優(yōu)點(diǎn)，因此是優(yōu)選的。本發(fā)明的黑素生成抑制劑原料中的選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的純度如上所述越高越好，但是不能一概而定，應(yīng)根據(jù)三萜類的種類、使用的目的、投與形式、制法、制造成本等來適宜地決定。因此，本發(fā)明可以是但不限定于以下范圍，例如，可以為0.1質(zhì)量％以上，優(yōu)選為0.1～99.99質(zhì)量％，較優(yōu)選為1～99.99質(zhì)量％，更優(yōu)選為10～99.99質(zhì)量％，尤其優(yōu)選為30～99.99質(zhì)量％，特別優(yōu)選為50～99.99質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選為70～99.99質(zhì)量％，最優(yōu)選為90～99.99質(zhì)量％。只要在上述范圍內(nèi)，就能制備出黑素生成抑制劑，或者即使配合到飼料、肥料等中，也能較好地發(fā)揮黑素生成抑制效果，因此是優(yōu)選的。
作為使用本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑來抑制或防止黑素生成的對(duì)象，可以舉出由動(dòng)植物體和/或其一部分和/或其一小部分作為原料的食品等，例如可以舉出，金槍魚、鮭、鱒、鯛類等的魚類；蝦類、蟹類、磷蝦等的甲殼類；章魚、烏賊類等的軟體動(dòng)物；扇貝、鮑魚、赤貝等的貝類等；魚肉香腸、魚糕、筒狀魚卷、咸魚、魚干等的水產(chǎn)加工品；畜肉、火腿、香腸等的畜產(chǎn)加工品；胡蘿卜、柿子椒、萵苣、元白菜、藕、牛蒡、茄子等的蔬菜類；切菜、葫蘆干、魔芋粉、馬鈴薯加工食品、甘納豆、煮豆等的蔬菜·谷類的生鮮品·加工品；藻類、蘑菇等的菌類、蘋果、桃、葡萄、橙子、香蕉等的果實(shí)類；切果、干燥果實(shí)、果汁、果實(shí)酒等的果實(shí)生鮮品·加工品等。
進(jìn)而，當(dāng)考慮將動(dòng)植物體不限于作為食用的目的加以利用的情況，可以舉出將玩賞用、觀賞用的動(dòng)植物或作為室內(nèi)裝飾利用的動(dòng)植物作為本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的使用對(duì)象，例如可以舉出，狗、貓、倉鼠等的哺乳動(dòng)物類；龜、蛇、蜥蜴、鱷等的爬蟲類；虎皮鸚鵡、鸚鵡等的鳥類；蛙、蠑螈等的兩棲類；蝦、蟹等的甲殼類；蝴蝶魚、錦鯉、日本金魚等的魚類；以貝類、軟體珊瑚、?？葹榇淼乃畻珶o脊椎動(dòng)物類、水草等的水棲植物類、水淹植物類、以及花卉類、矮草類、觀葉植物類、樹木等鑒賞用的植物體等。
本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，如上所述，是以抑制或防止生鮮食品、加工食品等以及玩賞用、觀賞用的動(dòng)植物等中的黑素的生成為目的，因此其使用方法應(yīng)根據(jù)對(duì)象的種類等而異，不能一概而定。因此，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，作為本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的使用方法，可以舉出例如以下的情況。例如，對(duì)于具有生命活動(dòng)的動(dòng)物體，可以將本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑混合到飼料中讓其攝取，或者以各種片劑、膠囊劑、散劑等的形式讓其經(jīng)口攝取，或者以各種注射劑、栓劑、外用液劑、軟膏劑等的形式讓其非經(jīng)口地?cái)z取，特別是在用于魚貝類的情況，可以把制劑混入水中以使其與之接觸。這樣做的目的是使作為對(duì)象的動(dòng)物體在生長期間吸收本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物，從而可以抑制或防止對(duì)象體內(nèi)的黑素生成。另外，例如，對(duì)于已結(jié)束了生命活動(dòng)的動(dòng)物體或食品，可以將本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑進(jìn)行直接添加、涂布、散布等處理或?qū)⒅苿┑娜芤簢婌F，或?qū)⒃撌称方n于制劑的溶液中。另外，例如，對(duì)于在生長階段的植物體，可以將本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑以肥料或營養(yǎng)劑等的形式投與，讓其吸收，或者通過注射等將制劑直接注入，或者按涂布、散布等的形式投與。其目的也與上述同樣是使作為對(duì)象的植物體在生長階段吸收本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物，從而可以抑制或防止在對(duì)象體內(nèi)的黑素生成。另外，例如，對(duì)于通常供食用的部分或其加工品等，也可以將本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑進(jìn)行直接添加、涂布、散布等處理或?qū)⒅苿┑娜芤簢婌F，或?qū)⒃撌称方n于制劑的溶液中。通過實(shí)施例可使本發(fā)明的效果更為明確，但是本發(fā)明不特別限定于該實(shí)施例。
本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑除了具有上述功能以外，還可以期待間接地抑制或防止生鮮食品、加工食品、玩賞用、鑒賞用的動(dòng)植物等和人體中的黑素的生成。其使用方法應(yīng)根據(jù)對(duì)象的種類等而異，不能一概而定。因此，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，作為本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的使用方法，可以舉出例如以下的情況。例如，對(duì)于生長過程中的動(dòng)物體，采用經(jīng)口或者注射等的方法使其攝取本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，使對(duì)象動(dòng)物體中積蓄了黑素生成抑制成分后，再由別的動(dòng)物體或人體將其攝取。具體地說，優(yōu)選將黑變·褐變防止指數(shù)達(dá)到優(yōu)選115以上、較優(yōu)選120以上、更優(yōu)選123以上的選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物投與動(dòng)植物體。優(yōu)選將該黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)達(dá)到優(yōu)選110以上、較優(yōu)選114以上、更優(yōu)選116以上、特別優(yōu)選120以上的五環(huán)型三萜類等投與動(dòng)植物體。進(jìn)而，也可以采用將其混入肥料中的方法，使植物體攝取。另外，例如，對(duì)于生長階段的植物體，也可以將本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑以肥料或營養(yǎng)劑等的形式投與，由動(dòng)物體、或者人體、或者植物體將其攝取、吸收。例如，在人體攝取的情況，也可以制成飲食物等的形式。這樣做的目的是使作為對(duì)象的動(dòng)植物體在其生長過程中吸收本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物，從而使其含有高濃度的黑素生成抑制成分。因此，通過將它們作為飲食物或其原料攝取，可以有效地抑制或防止人體中的黑素生成。同樣是將它們以飼料或肥料的形式用于動(dòng)植物，也可以有效地抑制黑素的生成。
對(duì)于上述的生鮮食品、加工食品等或玩賞用、觀賞用的動(dòng)植物等，本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的使用量應(yīng)根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、對(duì)象的種類、使用量、使用的頻率、年齡、性別、體重、癥狀的程度等條件而異，不能一概而定，當(dāng)然是應(yīng)具有能夠有效地抑制或防止黑素生成所需的量。例如，其用量可以是但不限定于以下的范圍，例如，在只是使用選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的情況，相對(duì)于對(duì)象的重量，按照直接投與的方式，可以為0.0001～50質(zhì)量％，優(yōu)選為0.001～30質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.01～20質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.1～10質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％；在按照浸漬等方式間接投與的情況，可以作為0.001～30質(zhì)量％、優(yōu)選0.01～20質(zhì)量％、較優(yōu)選0.1～10質(zhì)量％的溶液使用。不足上述添加量，黑素生成抑制效果弱，另一方面，即使添加50質(zhì)量％以上，也不能期望獲得與該添加量相符的效果，因此是不經(jīng)濟(jì)的。
特別是本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑可以其黑素生成抑制效果作為目的而按各種飼料的形式使用。即，本發(fā)明涉及含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑原料的飼料，在上述五環(huán)型三萜類中，優(yōu)選為齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類。進(jìn)而，在上述的齊墩果烷系三萜類中，優(yōu)選為山楂酸和/或高根二醇，特別優(yōu)選為山楂酸。在烏薩烷系三萜類中，優(yōu)選為烏索酸和/或山楂醇。在羽扇烷系三萜類中，優(yōu)選為樺木酸和/或樺木醇。五環(huán)型三萜類更特別優(yōu)選為山楂酸或?yàn)跛魉?。本發(fā)明的飼料中優(yōu)選還含有從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的至少1種。本發(fā)明的飼料中優(yōu)選另外還含有從魚粉和/或大豆粕、作為有效成分的山楂酸或?yàn)跛魉?、以及作為抗氧化劑的維生素C、維生素E和異黃酮中選出的一種以上。作為上述飼料，可以是但不限定于以下的范圍，可以舉出例如，牛、豬、馬、兔等的家畜用飼料；雞、火雞、鵪鶉等的家禽用飼料、 魚、比目魚、虎紋圓鲀、香魚、鮭鱒類、蝴蝶魚類、日本金魚等的海產(chǎn)或淡水養(yǎng)殖魚類、海產(chǎn)或者淡水觀賞魚類、蝦、蟹、鮑魚、蠑螺、鱉、龜、蛙等的養(yǎng)殖用、觀賞用、玩賞用的甲殼類、兩棲類、貝類等的魚貝用飼料；狗、貓、猿猴等的動(dòng)物寵物飼養(yǎng)用寵物食品、昆蟲用飼料；動(dòng)物園用飼料；以及動(dòng)物用治療食品等。它們可以是粉末狀、液態(tài)、凝膠狀、干食品、半濕潤食品、罐頭食品、塊狀點(diǎn)心、片劑等，可以根據(jù)用途選取各種形式。另外，對(duì)于向飼料中添加或混合的方法，可以是但不限定于以下的方法，可以舉出例如，作為飼料組合物添加的方法、通過把粉體、液體混合、噴霧到飼料中的添加方法、將上述形式的飼料混合到其他飼料中的方法以及作為添加劑添加到飼料中的方法等。
本發(fā)明的飼料中的該動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、對(duì)象的種類、性別、體重、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，在只是使用選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的情況，相對(duì)于對(duì)象的質(zhì)量，按照直接投與的方式，可以為0.00001～50質(zhì)量％，優(yōu)選為0.0001～30質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.001～20質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.01～10質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％，另外，在按照浸漬等方式間接投與的情況，可以作為0.001～30質(zhì)量％、優(yōu)選0.01～20質(zhì)量％、較優(yōu)選0.1～10質(zhì)量％的溶液使用。
特別是本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑可以以其黑素生成抑制效果作為目的而按各種肥料的形式使用。即，本發(fā)明涉及含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑原料的肥料，在上述五環(huán)型三萜類中，優(yōu)選齊墩果烷系三萜類、烏薩烷系三萜類、羽扇烷系三萜類。進(jìn)而，在上述的齊墩果烷系三萜類中，優(yōu)選為山楂酸和/或高根二醇、特別優(yōu)選為山楂酸。在烏薩烷系三萜類中，優(yōu)選為烏索酸和/或山楂醇。在羽扇烷系三萜類中，優(yōu)選為樺木酸和/或樺木醇。更特別是五環(huán)型三萜類優(yōu)選為山楂酸或?yàn)跛魉帷１景l(fā)明的肥料中優(yōu)選還含有從抗氧化劑、有機(jī)酸、其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的至少1種。本發(fā)明的肥料中優(yōu)選另外還含有作為有效成分的山楂酸或?yàn)跛魉?、油粕和礦物混合物。作為上述肥料，可以是但不限定于以下的范圍，例如可以舉出土壤混合用肥料、土壤灌注用肥料、或者進(jìn)行葉面散布、涂布的肥料、和水耕栽培、組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)液、以及進(jìn)行對(duì)種子、植株等的處理的肥料等。另外，作為其適用植物，可以是但不限定于以下的植物，例如可以舉出，水稻、小麥等的谷物類；元白菜、萵苣、菠菜等的葉菜類；牛蒡、蕪菁、蘿卜、胡蘿卜等的根菜類；西紅柿、草莓等的果菜類；蘋果、梨、葡萄、桃等的果樹類；三色堇紫、百合等的花卉類；高麗草、bent草等的草皮類以及橡膠樹、龍血樹、鐵線蕨等的觀賞用植物等。
本發(fā)明的肥料中的該動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、對(duì)象的種類、重量、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，作為只是使用選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的情況，在進(jìn)行土壤混合或土壤灌注的情況，相對(duì)于所使用的土壤的質(zhì)量，可以為0.0001～30質(zhì)量％，優(yōu)選為0.001～20質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.01～15質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.1～10質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％，在培養(yǎng)液的情況，相對(duì)于液體的質(zhì)量，可以作為0.001～20質(zhì)量％、優(yōu)選0.01～10質(zhì)量％、更優(yōu)選0.1～5質(zhì)量％的溶液使用。
另外，本發(fā)明是防止或改善動(dòng)植物體的黑變·褐變的方法，其中包括(a)通過將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物溶解于水中來配制溶液的工序、以及(b)將動(dòng)植物浸漬在工序(a)獲得的溶液中的工序。
也可以在把動(dòng)植物浸漬于工序(a)獲得的溶液中之前，將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物投與工序(b)中使用的動(dòng)植物。另外，在工序(a)中，優(yōu)選將山楂酸、檸檬酸和檸檬酸鈉溶解于水中以配制溶液。
在該情況，優(yōu)選使浸漬液中含有0.0001～5質(zhì)量％、較優(yōu)選0.001～1質(zhì)量％、更優(yōu)選0.01～0.5質(zhì)量％的山楂酸。在使用提取物配制浸漬液的情況，優(yōu)選使浸漬液中含有0.0001～50質(zhì)量％、較優(yōu)選0.001～30質(zhì)量％、更優(yōu)選0.01～20質(zhì)量％的提取物。
另外，本發(fā)明涉及一種食品用防止黑變·褐變的組合物，它是含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的防止黑變·褐變的組合物，其特征在于，其中含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上、以及從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上。如上所述，五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物具有優(yōu)良的黑素生成抑制效果，進(jìn)而，通過將其與從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上同時(shí)使用，可以有效地抑制或防止黑變·褐變。
此處，本發(fā)明的抑制動(dòng)植物的黑變·褐變的飼料、肥料、或者組合物，可以以各種各樣的動(dòng)植物作為對(duì)象進(jìn)行投與，但是該方法應(yīng)根據(jù)對(duì)象種類等的不同而異，不能一概而定。因此，可以是但不限定于以下的方法，作為投與本發(fā)明的黑變·褐變防止飼料、肥料或者組合物的方法，例如可以舉出以下那些情況。例如，對(duì)于動(dòng)物體，可以把作為本發(fā)明的抑制黑變·褐變的飼料讓其經(jīng)口攝取，或者將組合物混合到飼料中讓其攝取，或者以各種片劑、膠囊劑、散劑等的形式讓其經(jīng)口攝取，或者以各種注射劑、栓劑、外用液劑、軟膏劑等的形式讓其非經(jīng)口地?cái)z取，特別是在用于魚貝類的情況，可以采用混入水中的方法進(jìn)行投與。另外，對(duì)于植物體，作為本發(fā)明的抑制動(dòng)植物用黑變·褐變的肥料，可以通過混合到栽培用的土壤中進(jìn)行投與，也可以將組合物按營養(yǎng)劑的形式注入混合到土壤中進(jìn)行投與。進(jìn)而，也可以采用注射等方法直接注入到植物體內(nèi)，或是以涂布、散布等的形式進(jìn)行投與。進(jìn)而，在水耕栽培等中，也可以采用混合到水耕培養(yǎng)液中的方法，通過將花或果實(shí)等植物體的一部分切除后使其吸收來投與。例如，可以很好地利用于切花等。這樣，對(duì)于投與本發(fā)明品的方法，可以通過使對(duì)象吸收本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物來達(dá)到抑制或防止對(duì)象中的黑變或褐變的目的。
由于投與本發(fā)明品的對(duì)象是動(dòng)植物體，因此投與量應(yīng)根據(jù)其種類和大小的不同而異。其投與量可以是但不限定于以下的范圍，例如，在將含有從橄欖油制造工序獲得的脫脂物等中提取的提取物的本發(fā)明的飼料直接投與動(dòng)物的情況，優(yōu)選使飼料中含有0.0001～50質(zhì)量％、較優(yōu)選0.001～20質(zhì)量％、更優(yōu)選0.005～10質(zhì)量％、進(jìn)一步優(yōu)選0.01～5質(zhì)量％、特別優(yōu)選0.05～4質(zhì)量％、最優(yōu)選0.1～3質(zhì)量％的提取物。
本發(fā)明中，所謂抗氧化劑是指可以防止由于氧化現(xiàn)象而造成食品變質(zhì)的物質(zhì)，優(yōu)選為能夠抑制或防止由于氧化造成的食品的黑變·褐變的物質(zhì)。作為本發(fā)明中使用的抗氧化劑，只要是通常飲食物或者飼料中使用的，就沒有特別的限制，優(yōu)選可以舉出維生素C及其衍生物以及它們的鹽、生育酚和生育三烯酚(tocotrienol)及其衍生物、二丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鈣二鈉、沒食子酸和鞣花酸等的鞣酸類以及其衍生物、亞硫酸鈉、次亞硫酸鈉和二氧化硫等的硫酸系化合物、γ-谷維素、蕓香苷及其衍生物、芝麻酚林和芝麻酚等的木聚糖類、β-胡蘿卜素等的類胡蘿卜素類及其衍生物、黃酮、兒茶素、槲皮酮、異槲皮酮、無色花色素、染料木苷、染料木黃酮、6“-O-乙?；玖夏拒?、6“-O-丙二酰基染料木苷、黃豆苷、黃豆苷原、6“-O-乙酰基黃豆苷、6“-O-丙二?；S豆苷、黃豆甙(Glycitin)、黃豆黃素(Glycitein)、6“-O-乙?；S豆甙(Glycitin)、6“-O-丙二?；S豆甙(Glycitin)、葛根素、槲皮酮、山奈黃素、microestrol等的類黃酮類、泛醌和維生素K等的醌類、過氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶等的酶類、葵花提取物、土曲霉菌提取物、甘草油性提取物、子丁香提取物、愈創(chuàng)木脂、生咖啡豆提取物、米糠油提取物、美人蕉提取物、鼠尾草提取物、水芹提取物、Tempeh提取物、菜種油提取物、多香果提取物、越橘提取物、蜂膠提取物、胡椒提取物、Melaleuca制油、桉樹提取物、龍膽(草)提取物、蕎麥提取物、小豆提取物、迷迭香提取物、橄欖粕提取物和大豆粕提取物等的油粕提取物、大豆胚芽提取物、維生素B1類及其鹽、核黃素、乙酸核黃素等的核黃素類、維生素B6鹽酸鹽、維生素B6二辛酸鹽等的維生素B6類、煙酰胺、煙酸芐酯等的煙酸類、膽紅素、甘露糖醇、色氨酸、組氨酸、去甲二氫愈創(chuàng)木酸等。
作為本發(fā)明中使用的有機(jī)酸及其鹽類，可以舉出例如，檸檬酸及其鹽類、琥珀酸及其鹽類、乳酸及其鹽類、酒石酸及其鹽類等。
作為本發(fā)明中使用的磷酸及其鹽類，可以舉出例如，磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸三鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸三鉀等。
上述各成分可以根據(jù)使用目的進(jìn)行適宜設(shè)計(jì)、配合。根據(jù)吸收性和作用效果的種類，可以使黑素生成抑制或者黑變防止或者褐變防止效果相互協(xié)同和補(bǔ)充，并可將其作為優(yōu)選的使用形式使用。另外，例如異黃酮類及其衍生物的水溶性優(yōu)良，因此，通過將其與一般屬于油溶性物質(zhì)的本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類同時(shí)作用于生物體，可以獲得酪氨酸酶抑制效果以及通過水和脂質(zhì)媒介性的各種各樣的代謝途徑發(fā)揮同時(shí)作用的效果，可以期望該效果是協(xié)同的。進(jìn)而，可以期待同時(shí)配合有本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類與異類黃酮等的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑、飼料、肥料等，可以同時(shí)獲得異類黃酮的抗氧化性和雌性激素那樣作用等的生理活性并且協(xié)同地活性化。
此處，在本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物中的選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，可以為0.00001質(zhì)量％以上，優(yōu)選為0.00001～99.99質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.0001～99.99質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.0005～99.99質(zhì)量％，尤其優(yōu)選為0.001～99.99質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.005～99.99質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選為0.01～99.99質(zhì)量％，更尤其優(yōu)選為0.05～99.99質(zhì)量％，更特別優(yōu)選為0.1～99.99質(zhì)量％，更進(jìn)一步優(yōu)選為0.5～99.99質(zhì)量％，最優(yōu)選為1～99.99質(zhì)量％。同樣是本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物中的從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上的含量可根據(jù)所含有的抗氧化劑等的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，可以為0.0001～95質(zhì)量％，優(yōu)選為0.001～90質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.01～80質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.05～70質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.1～60質(zhì)量％，最優(yōu)選為0.5～50質(zhì)量％。另外，該選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上與從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上的含有比率，可根據(jù)所使用的抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類的種類、作為目標(biāo)的協(xié)同效果、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，在將所含有的選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上的質(zhì)量作為1的情況，從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上的質(zhì)量比可以為0.001～1000，優(yōu)選為0.005～500，較優(yōu)選為0.01～100，更優(yōu)選為0.05～50，特別優(yōu)選為0.1～20。如果小于該比率，則幾乎看不到在防止黑變·褐變的效果方面的協(xié)同效果，另外，如果在該比率以上，則也不能期望獲得與該添加量相符的效果，因此是不經(jīng)濟(jì)的。
作為使用本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物來抑制或防止黑變和/或褐變的對(duì)象，可以舉出由動(dòng)植物體和/或其一部分和/或其一小部分作為原料的食品等，例如可以舉出，金槍魚、鮭、鱒、鯛類等的魚類；蝦類、蟹類、磷蝦等的甲殼類；章魚、烏賊類等的軟體動(dòng)物；扇貝、鮑魚、赤貝等的貝類等；魚肉香腸、魚糕、筒狀魚卷、咸魚、魚干等的水產(chǎn)加工品；畜肉、火腿、香腸等的畜產(chǎn)加工品；胡蘿卜、柿子椒、萵苣、元白菜、藕、牛蒡、茄子等的蔬菜類；切菜、葫蘆干、魔芋粉、馬鈴薯加工食品、甘納豆、煮豆等的蔬菜·谷類的生鮮品·加工品；藻類、蘑菇等的菌類；蘋果、桃、葡萄、橙子、香蕉等的果實(shí)類；切果、干燥果實(shí)、果汁、果實(shí)酒等的果實(shí)生鮮品·加工品等。
進(jìn)而，當(dāng)考慮將動(dòng)植物體不限于作為食用的目的加以利用的情況，可以舉出將玩賞用、觀賞用的動(dòng)植物或作為室內(nèi)裝飾利用的動(dòng)植物作為本發(fā)明的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑的使用對(duì)象，例如可以舉出，狗、貓、倉鼠等的哺乳動(dòng)物類；龜、蛇、蜥蜴、鱷等的爬蟲類；虎皮鸚鵡、鸚鵡等的鳥類；蛙、蠑螈等的兩棲類；蝦、蟹等的甲殼類；蝴蝶魚、錦鯉、日本金魚等的魚類；以貝類、軟體珊瑚、海葵等為代表的水棲無脊椎動(dòng)物類、水草等的水棲植物類、水淹植物類、以及花卉類、矮草類、觀葉植物類、樹木等鑒賞用的植物體等。
本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物，如上所述，是以抑制或防止生鮮食品、加工食品等以及玩賞用、觀賞用的動(dòng)植物等中的黑變和/或褐變?yōu)槟康?，因此其使用方法?yīng)根據(jù)對(duì)象的種類等而異，不能一概而定。因此，本發(fā)明可以是但不限定于以下的方法，作為本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物的使用方法，可以舉出例如以下那些情況。例如，對(duì)于具有生命活動(dòng)的動(dòng)物體，可以將本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物混合到飼料中讓其攝取，或者以各種片劑、膠囊劑、散劑等的形式讓其經(jīng)口攝取，或者以各種注射劑、栓劑、外用液劑、軟膏劑等的形式讓其非經(jīng)口地?cái)z取，特別是在用于魚貝類的情況，可以把組合物混入飼養(yǎng)用水中以使其與之接觸。這樣做的目的是使作為對(duì)象的動(dòng)物體在生長期間吸收本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物，從而可以抑制或防止對(duì)象體內(nèi)的黑變和/或褐變。另外，例如，對(duì)于已結(jié)束了生命活動(dòng)的動(dòng)物體或食品，可以將本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物進(jìn)行直接添加、涂布、散布等處理或?qū)⒔M合物的溶液噴霧，或?qū)⒃撌称方n于組合物的溶液中。另外，例如，對(duì)于在生長階段的植物體，可以將本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物以肥料或營養(yǎng)劑等的形式投與，讓其吸收，或者通過注射等將組合物直接注入，或者按涂布、散布等的形式投與。其目的也與上述同樣是使作為對(duì)象的植物體在生長階段吸收本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物，從而可以抑制或防止在對(duì)象體內(nèi)的黑變和/或褐變。另外，例如，對(duì)于通常供食用的部分或其加工品等，也可以將本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物進(jìn)行直接添加、涂布、散布等處理或?qū)⒔M合物的溶液噴霧，或?qū)⒃撌称方n于組合物的溶液中。通過實(shí)施例可使本發(fā)明的效果更為明確，但是本發(fā)明不特別限定于該實(shí)施例。
本發(fā)明的動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物除了具有上述功能以外，還可以期待間接地抑制或防止生鮮食品、加工食品、玩賞用、鑒賞用的動(dòng)植物等和人體中的黑變和/或褐變。其使用方法應(yīng)根據(jù)對(duì)象的種類等而異，不能一概而定。因此，本發(fā)明可以是但不限定于以下的方法，作為本發(fā)明的動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物的使用方法，可以舉出例如以下那些情況。例如，對(duì)于生長過程中的動(dòng)物體，采用經(jīng)口或者注射等的方法使其攝取本發(fā)明的動(dòng)植物用黑變和/或褐變防止組合物，使對(duì)象動(dòng)物體中積蓄了黑素生成抑制成分后，再由別的動(dòng)物體或人體將其攝取。進(jìn)而，也可以采用將其混入肥料中的方法，使植物體攝取。另外，例如，對(duì)于生長階段的植物體，也可以將本發(fā)明的動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物以肥料或營養(yǎng)劑等的形式投與，由動(dòng)物體、或人體、或植物體將其攝取、吸收。例如，在人體攝取的情況，也可以制成飲食物等的形式。這樣做的目的是使作為對(duì)象的動(dòng)植物體在其生長過程中吸收本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物，從而使其含有高濃度的防止黑變·褐變的成分。因此，通過將它們作為飲食物或其原料攝取，可以有效地抑制或防止人體中的黑素生成。同樣是將它們以飼料或肥料的形式用于動(dòng)植物，也可以有效地抑制黑變和/或褐變。
此處，本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物可以其防止黑變·褐變的效果作為目的而按各種飼料的形式使用。即，本發(fā)明涉及含有該防止黑變·褐變的組合物的飼料。作為上述飼料，可以是但不限定于以下的飼料，例如可以舉出，牛、豬、馬、兔等的家畜用飼料；雞、火雞、鵪鶉等的家禽用飼料； 魚、比目魚、虎紋圓鲀、香魚、鮭鱒類、蝴蝶魚類、日本金魚等的海產(chǎn)或淡水養(yǎng)殖魚類、海產(chǎn)或淡水觀賞魚類、蝦、蟹、鮑魚、蠑螺、鱉、龜、蛙等的養(yǎng)殖用、觀賞用、玩賞用的甲殼類、兩棲類、貝類等的魚貝用飼料；狗、貓、猿猴等的動(dòng)物寵物飼養(yǎng)用寵物食品、昆蟲用飼料；動(dòng)物園用飼料；以及動(dòng)物用治療食品等。它們可以是粉末狀、液態(tài)、凝膠狀、干食品、半濕潤食品、罐頭食品、塊狀點(diǎn)心、片劑等，可以根據(jù)用途選取各種形式。
另外，對(duì)于向飼料中添加或混合的方法，可以是但不限定于以下的方法，可以舉出例如，作為飼料組合物添加的方法、通過把粉體、液體混合、噴霧到飼料中的添加方法、將上述形式的飼料混合到其他飼料中的方法以及作為添加劑添加到飼料中的方法等。
本發(fā)明的飼料中的該防止黑變·褐變的組合物的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類和抗氧化劑等的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、對(duì)象的種類、性別、體重、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，相對(duì)于對(duì)象的量，按照直接投與的方式，可以為0.00001～50質(zhì)量％，優(yōu)選為0.0001～30質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.001～20質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.01～10質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％；另外，在按照浸漬等方式間接投與的情況，可以作為0.001～30質(zhì)量％、優(yōu)選0.01～20質(zhì)量％、更優(yōu)選0.1～10質(zhì)量％的溶液使用。
此處，本發(fā)明的防止黑變·褐變的組合物可以其防止黑變·褐變的效果作為目的而按各種肥料的形式使用。即，本發(fā)明涉及含有該防止黑變·褐變的組合物的肥料。作為上述肥料，可以是但不限定于以下的肥料，例如可以舉出土壤混合用肥料、土壤灌注用肥料、或者進(jìn)行葉面散布、涂布的肥料、和水耕栽培、組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)液、以及進(jìn)行對(duì)種子、植株等的處理的肥料等。另外，作為其適用植物，可以是但不限定于以下的植物，可以舉出例如，水稻、小麥等的谷物類；元白菜、萵苣、菠菜等的葉菜類；牛蒡、蕪菁、蘿卜、胡蘿卜等的根菜類；西紅柿、草莓等的果菜類；蘋果、梨、葡萄、桃等的果樹類；三色堇紫、百合等的花卉類；高麗草、bent草等的草皮類以及橡膠樹、龍血樹、鐵線蕨(Adiantum raddianun)等的觀賞用植物等。
本發(fā)明的肥料中的該防止黑變·褐變的組合物的含量可根據(jù)所含有的五環(huán)型三萜類和抗氧化劑等的種類、使用形式、使用目的、使用量、使用頻率、對(duì)象的種類、重量、黑素生成的程度等進(jìn)行適宜的調(diào)整，不能一概而定，本發(fā)明可以是但不限定于以下的范圍，例如，在進(jìn)行土壤混合或土壤灌注的情況，相對(duì)于所使用的土壤的質(zhì)量，可以為0.0001～30質(zhì)量％，優(yōu)選為0.001～20質(zhì)量％，較優(yōu)選為0.01～15質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.1～10質(zhì)量％，特別優(yōu)選為0.1～5質(zhì)量％，在培養(yǎng)液的情況，相對(duì)于液體的質(zhì)量，可以作為0.001～20質(zhì)量％、優(yōu)選0.01～10質(zhì)量％、更優(yōu)選0.1～5質(zhì)量％的溶液使用。
由于本發(fā)明中的五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物具有非常優(yōu)良的黑素生成抑制效果，因此，通過將它們用于動(dòng)植物，可以帶來非常好的效果。即，通過抑制或防止玩賞用、觀賞用的動(dòng)植物等或生鮮食品、加工食品等中的黑變·褐變，可以大幅度提高它們的商品價(jià)值。進(jìn)而，將它們與抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類等組合使用，可以發(fā)揮非常優(yōu)良的協(xié)同效果，與以往單獨(dú)使用抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類等的情況相比，在效果、減少使用量、成本等方面皆非常優(yōu)選。
實(shí)施例以下示出本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明不受它們的限定。以下，有時(shí)將“質(zhì)量％”表示為“％”。
對(duì)于實(shí)施例中使用的五環(huán)型三萜烯，高根二醇(フナコシ公司制造)、烏索酸(和光純藥公司制造)、山楂醇(フナコシ公司制造)、樺木酸(フナコシ公司制造)、樺木醇(フナコシ公司制造)是作為試劑購買的。HPLC級(jí)的就原樣使用，而其余試劑則使用通過將其溶解在乙醇中加熱到其沸點(diǎn)直至所得的溶液達(dá)到飽和，隨后將其冷卻進(jìn)行重結(jié)晶，過濾和干燥該重結(jié)晶的產(chǎn)物。關(guān)于山楂酸，以下例舉實(shí)例進(jìn)行說明，在此使用的是從橄欖植物提取并且精制、確認(rèn)純度為95％的產(chǎn)物。
<制備例1>
將日本國內(nèi)產(chǎn)的橄欖(Olea europaea L.)的干果(包括種子)500g破碎，加入3L己烷，提取3小時(shí)。重復(fù)該操作4次，得到脫脂果實(shí)，除去種子后，粉碎，用5倍量的己烷再次提取3小時(shí)，由此得到完全除去油分的脫脂物(脫脂粕)229g。向該脫脂物中加入10倍量的乙醇含量為60質(zhì)量％的含水乙醇水溶液，在室溫下一邊劇烈攪拌一邊提取3小時(shí)。全部過濾后，將濾液濃縮干固，得到提取物112.7g。
向該提取物100g中加入2L水，在室溫下劇烈攪拌1小時(shí)。將全量經(jīng)離心分離處理后，傾析除去上清液，將殘留的沉淀干燥，得到濃縮物10.0g。
其次，使用一種裝備有其中填充約40倍量(400g)硅膠的柱子的硅膠柱色譜將該濃縮物分級(jí)。首先，用己烷∶乙酸乙酯＝3∶1的洗脫液以10倍于填充硅膠的體積(4000mL)洗脫各種不需要的成分后，再用2.5倍量(1000mL)的己烷∶乙酸乙酯＝1∶1洗脫液洗脫各種不需要的成分。接著，用相當(dāng)于填充的硅膠10倍量(4000mL)的己烷∶乙酸乙酯＝1∶1的洗脫液將目的產(chǎn)物山楂酸洗脫，得到粗山楂酸級(jí)分。從該級(jí)分中除去己烷和乙酸乙酯后，進(jìn)行真空干燥，得到粗山楂酸分級(jí)物1.96g。
進(jìn)而，將該粗山楂酸分級(jí)物用裝備有其中填充約30倍量(60g)的十八烷基硅膠的柱子的ODS柱色譜進(jìn)行精制。首先，用相當(dāng)于填充的硅膠10倍量(600mL)的甲醇∶水＝8∶2的洗脫液洗脫各種不需要的成分。接著，用相當(dāng)于填充的硅膠30倍量(1800mL)的甲醇∶水＝8∶2的洗脫液將目的產(chǎn)物山楂酸洗脫，得到精制的山楂酸級(jí)分。從該級(jí)分中除去甲醇后，進(jìn)行真空干燥，得到1.51g的精制山楂酸1。
此處，由NMR、MS等的分析可以確認(rèn)，該精制山楂酸1的一部分為鈉鹽和鉀鹽的狀態(tài)，其余的大部分為游離酸的狀態(tài)。另外，用GC測(cè)定它們的純度，確認(rèn)山楂酸的純度為95％以上。
<制備例2>
向意大利產(chǎn)的橄欖(Olea europaea L.)榨油后獲得的榨油殘?jiān)?榨油粕)1kg中，加熱10倍量的乙醇含量為65質(zhì)量％的含水乙醇水溶液，在室溫下一邊劇烈攪拌攪拌一邊提取3小時(shí)。將全量過濾后，將濾液濃縮干固，得到提取物20.2g。
向該提取物中加入正丁醇1L、水1L，攪拌10分鐘后，分成正丁醇相和水相。將正丁醇相的正丁醇除去后，進(jìn)行真空干燥，得到濃縮物13.3g。
然后，將該濃縮物用裝備有其中填充約40倍量(500g)的硅膠的柱子的硅膠柱色譜進(jìn)行分級(jí)。首先，用相當(dāng)于填充的硅膠10倍量(5000mL)的己烷∶乙酸乙酯＝3∶1的洗脫液洗脫各種不需要的成分后，再用2.5倍量(1250mL)的己烷∶乙酸乙酯＝1∶1的洗脫液洗脫各種不需要的成分。接著，用所填充的硅膠的10倍量(5000mL)的己烷∶乙酸乙酯＝1∶1的洗脫液將目的產(chǎn)物山楂酸洗脫，得到粗山楂酸級(jí)分。從該級(jí)分中除去己烷和乙酸乙酯后，進(jìn)行真空干燥，得到粗山楂酸分級(jí)物2.66g。
進(jìn)而，將該粗山楂酸分級(jí)物用裝備有其中填充約30倍量(80g)的十八烷基硅膠的柱子的ODS柱子用色譜進(jìn)行精制。首先，用相當(dāng)于充填的硅膠10倍量(800mL)的甲醇∶水＝8∶2的洗脫液洗脫各種不需要的成分。接著，用相當(dāng)于填充的硅膠30倍量(2400mL)的甲醇∶水＝8∶2的洗脫液將目的產(chǎn)物山楂酸洗脫，得到精制的山楂酸級(jí)分。從該級(jí)分中除去甲醇后，進(jìn)行真空干燥，得到2.06g的精制山楂酸2。
此處，由NMR、MS等的分析可以確認(rèn)，該精制山楂酸2的一部分為游離酸的狀態(tài)，其余的大部分為鈉或鉀等的鹽的狀態(tài)。另外，用GC測(cè)定它們的純度，確認(rèn)作為山楂酸的純度為97％以上。
<制備例3>
向橄欖油制造工序中獲得的意大利產(chǎn)的橄欖的提取殘?jiān)?對(duì)榨油殘?jiān)龠M(jìn)行提取工序處理后的脫脂物)1kg中，加入10倍量的乙醇，加熱至55℃，一邊劇烈攪拌，一邊提取3小時(shí)。將全量過濾后，將濾液濃縮干固，得到提取物35g。
其次，將該提取物供給到裝備有其中填充約40倍量(1400g)的硅膠的柱子的硅膠柱色譜中。首先，用所填充的硅膠的約10倍量(14L)的己烷∶乙酸乙酯＝3∶1的洗脫液洗脫各種不需要的成分后，再用2.5倍量(3500mL)的己烷∶乙酸乙酯＝1∶1的洗脫液洗脫各種不需要的成分，進(jìn)而，用相當(dāng)于填充的硅膠10倍量(14L)的己烷∶乙酸乙酯＝1∶1的洗脫液將目的產(chǎn)物山楂酸洗脫，得到粗山楂酸級(jí)分。從該級(jí)分中除去己烷和乙酸乙酯后，進(jìn)行真空干燥，得到粗山楂酸分級(jí)物5.90g。
進(jìn)而，將該粗山楂酸分級(jí)物用裝備有其中填充約30倍量(180g)十八烷基硅膠的柱子的ODS柱色譜進(jìn)行精制。首先，用相當(dāng)于填充的硅膠10倍量(1800mL)的甲醇∶水＝8∶2的洗脫液洗脫各種不需要的成分。接著，用相當(dāng)于填充的硅膠30倍量(5400mL)的甲醇∶水＝8∶2的洗脫液將目的產(chǎn)物山楂酸洗脫，得到精制的山楂酸級(jí)分。從該級(jí)分中除去甲醇和水后，進(jìn)行真空干燥，得到5.36g的精制山楂酸3。
此處，由NMR、MS等的分析確認(rèn)，該精制山楂酸3象精制山楂酸1那樣，其一小部分為鈉鹽和鉀鹽的狀態(tài)，其余的大部分為游離酸的狀態(tài)。另外，用GC測(cè)定它們的純度，確認(rèn)作為山楂酸的純度為97％以上。
作為五環(huán)型三萜類的衍生物，按如下方法獲得。
<合成例1>山楂酸乙酯將山楂酸4.5g和三乙胺1.0g溶解于氯仿50mL中，在冰冷下一邊滴入由亞硫酰氯1.1g溶解于氯仿10mL中而成的溶液，一邊攪拌1小時(shí)。接著，加入乙醇3.2g，在冰冷下一邊滴入由三乙胺1.0g溶解于氯仿10mL中而成的溶液，一邊攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，萃取氯仿溶解的成分，蒸餾除去氯仿，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到山楂酸乙酯3.5g。
<合成例2>2，3-O-二乙?；?山楂酸將山楂酸2.0g溶解于吡啶100mL中，加入乙酸酐50mL，攪拌一夜。蒸餾除去吡啶和乙酸酐后，將殘留物溶解于乙醚中，將該乙醚相用1N鹽酸水溶液洗滌一次、用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次、用純水洗滌3次后，加入硫酸鎂，放置一夜。過濾除去硫酸鎂，蒸餾除去乙醚，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到2，3-O-二乙酰基-山楂酸2.2g。
<合成例3>2，3-O-二(三乙基甲硅烷基)-山楂酸三乙基甲硅烷基酯將山楂酸1.0g溶解于無水二甲基甲酰胺200mL中，在0℃下加入咪唑144.0mg和三乙基甲硅烷基氯化物350μL，將蓋子蓋嚴(yán)，攪拌2小時(shí)。蒸餾除去二甲基甲酰胺后，將殘留物溶解于乙醚中，將該乙醚相用1N鹽酸水溶液洗滌一次、用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次、用純水洗滌3次后，加入硫酸鎂，放置一夜。過濾除去硫酸鎂，蒸餾除去乙醚，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到2，3-O-二(三乙基甲硅烷基)-山楂酸三乙基甲硅烷基酯1.5g。
<合成例4>2，3-O-二硬脂?；?山楂酸乙酯將合成例1中得到的山楂酸乙酯1.0g溶解于無水甲苯50mL中，加入三乙胺5.0g，再在冰冷下一邊緩慢添加硬脂酰氯6.0g一邊攪拌1小時(shí)，一邊緩慢升溫至室溫一邊攪拌9小時(shí)。適量加入1N鹽酸水溶液，用乙醚萃取，乙醚相用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次、用純水洗滌3次后，加入硫酸鎂，放置一夜。過濾除去硫酸鎂，蒸餾除去乙醚，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到2，3-O-二硬脂?；?山楂酸乙酯1.2g。
<合成例5>3，28-O-二乙?；?高根二醇將高根二醇5.0g溶解于吡啶250mL中，加入乙酸酐100mL，攪拌一夜。蒸餾除去吡啶和乙酸酐后，將殘留物溶解于乙醚中，將該乙醚相用1N鹽酸水溶液洗滌一次、用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次、用純水洗滌3次后，加入硫酸鎂，放置一夜。過濾除去硫酸鎂，蒸餾除去乙醚，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到3，28-O-二乙?；?高根二醇5.4g。
<合成例6>烏索酸乙酯將烏索酸5.0g和三乙胺1.1g溶解于氯仿50mL中，在冰冷下一邊滴入由亞硫酰氯1.2g溶解于氯仿10mL中而成的溶液，一邊攪拌1小時(shí)。接著，加入乙醇3.5g，在冰冷下一邊滴入由三乙胺1.1g溶解于氯仿10mL中而成的溶液，一邊攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，萃取氯仿溶解的成分，蒸餾除去氯仿，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到烏索酸乙酯3.8g。
<合成例7>3，28-O-二乙?；?山楂醇將山楂醇5.0g溶解于吡啶250mL中，加入乙酸酐100mL，攪拌一夜。蒸餾除去吡啶和乙酸酐后，將殘留物溶解于乙醚中，將該乙醚相用1N鹽酸水溶液洗滌一次、用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次、用純水洗滌3次后，加入硫酸鎂，放置一夜。過濾除去硫酸鎂，蒸餾除去乙醚，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到3，28-O-二乙?；?山楂醇5.4g。
<合成例8>樺木酸乙酯將樺木酸5.0g和三乙胺1.1g溶解于氯仿50mL中，在冰冷下一邊滴入由亞硫酰氯1.2g溶解于氯仿10mL中而成的溶液，一邊攪拌1小時(shí)。接著，加入乙醇3.5g，在冰冷下一邊滴入由三乙胺1.1g溶解于氯仿10mL中而成的溶液，一邊攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，萃取氯仿溶解的成分，蒸餾除去氯仿，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到樺木酸乙酯3.8g。
<合成例9>3，28-O-二乙?；?樺木醇將樺木醇5.0g溶解于吡啶250mL中，加入乙酸酐100mL，攪拌一夜。蒸餾除去吡啶和乙酸酐后，將殘留物溶解于乙醚中，將該乙醚相用1N鹽酸水溶液洗滌一次、用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次、用純水洗滌3次后，加入硫酸鎂，放置一夜。過濾除去硫酸鎂，蒸餾除去乙醚，將獲得的粗反應(yīng)物用硅膠柱色譜精制，得到3，28-O-二乙?；?樺木醇5.4g。
實(shí)施例1<黑素生成抑制效果的評(píng)價(jià)>
在一塊6孔平板上按2mL/井的量加入培養(yǎng)基，按規(guī)定量接種B-16黑色素瘤細(xì)胞，在37℃、二氧化碳濃度5％的條件下靜置，進(jìn)行培養(yǎng)。次日，按所規(guī)定濃度添加混合檢體試樣(五環(huán)型三萜類)配制液，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)第5天，更換培養(yǎng)基，再度添加檢體試樣配制液。第二天，除去培養(yǎng)基，回收細(xì)胞，用PBS(磷酸緩沖生理食鹽水)洗滌后，通過細(xì)胞的白色化度進(jìn)行評(píng)價(jià)。關(guān)于黑素抑制效果的評(píng)價(jià)，與由添加了已經(jīng)明確其效果的維生素C磷酸鎂450ppm(正對(duì)照)的試樣代替檢體試樣調(diào)制液時(shí)的白色化度、和未添加檢體試樣時(shí)(對(duì)照)的樣品的白色化度相比較，按照以下的基準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
細(xì)胞的白色化度的評(píng)價(jià)基準(zhǔn)如下。
(評(píng)價(jià)基準(zhǔn))<評(píng)價(jià)><內(nèi)容>
++ 比正對(duì)照白+ 與正對(duì)照同等程度± 達(dá)不到正對(duì)照的程度，但比對(duì)照白- 與對(duì)照同等程度按照上述方法評(píng)價(jià)黑素生成抑制功能。其結(jié)果示于表1中表1<黑素生成抑制效果評(píng)價(jià)結(jié)果>

基準(zhǔn)為添加450ppm維生素C磷酸鎂鹽時(shí)的白色化度從表1可以看出，當(dāng)分別將五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物的黑素生成抑制功能與作為正對(duì)照的添加濃度450ppm的維生素C磷酸鎂的情況相比較時(shí)，很顯然，前者皆具有為維生素C磷酸鎂鹽的數(shù)十倍至數(shù)百倍的黑素生成抑制功能。例如，將游離的山楂酸(精制山楂酸1)與維生素C磷酸鎂的添加濃度450ppm的情況相比較，能顯示出同等程度白色化度的添加濃度為4ppm，因此可以判明，游離的山楂酸(精制山楂酸1)具有相當(dāng)于維生素C磷酸鎂約110倍的黑素生成抑制功能。同樣可以判明，以添加濃度450ppm的維生素C磷酸鎂為基準(zhǔn)，山楂酸的鹽(精制山楂酸2)具有約110倍、高根二醇具有約20倍、烏索酸具有約110倍、山楂醇具有約40倍、樺木酸具有約40倍、樺木醇具有約20倍、山楂酸乙酯具有約110倍、乙?；介峋哂屑s75倍、三乙基甲硅烷基化山楂酸具有約40倍、硬脂酰基化山楂酸乙酯具有約75倍、乙?；吒季哂屑s20倍、烏索酸乙酯具有約110倍、乙?；介季哂屑s20倍、樺木酸乙酯具有約20倍、乙?；瘶迥敬季哂屑s10倍的黑素生成抑制效果。
同樣是從表1可以看出，即使與以往被廣泛使用的曲酸相比較，五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物的黑素生成抑制效果也優(yōu)良。
由以上看出，五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物具有相當(dāng)于作為現(xiàn)有的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑而被廣泛使用的維生素C磷酸鎂的數(shù)十倍至數(shù)百倍的驚人的黑素生成抑制效果。由此可以判明，可以提供一種迄今為止尚無法達(dá)到的程度的非常優(yōu)良的動(dòng)植物用黑素生成抑制劑。
實(shí)施例2表2示出飼料的制備例。應(yīng)予說明，表2的飼料的制備是按順序?qū)⒏鹘M合物混合后，用適量的水?dāng)嚭?，將其成形為顆粒狀后，進(jìn)行抽吸干燥。
表2比較品A比較品B比較品C 本發(fā)明品A本發(fā)明品B本發(fā)明品C 比較品D比較品E本發(fā)明品D比較品F比較品G魚粉60 60 6060 60 60 60 60 60 60 60大豆粕 10 10 1010 10 10 10 10 10 10 10制造例1的橄欖脫脂粕 - - - ---- - - - -糊精10.09.99.999 9.9 9.9999.9 9.859.759.849.95 9.85魚油7 7 7 7777 7 7 7 7大豆油 3 3 3 3333 3 3 3 3玉米淀粉3.5 3.53.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.53.5混合礦物質(zhì) 4.5 4.54.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.54.5混合維生素 2 2 2 2222 2 2 2 2曲酸- 0.10.001 ---- 0.1 - - 0.1山楂酸 - - - 0.1 0.001-- - 0.01- -烏索酸 - - - --0.1 - - - - -維生素E - - - ---0.050.050.05- -維生素C - - - ---0.100.100.10- -蝦青素 - - - ---- - - 0.05 0.05制造例1的提取物 - - - ---- - - - -制造例1的濃縮物 - - - ---- - - - -制造例1的粗山楂酸分級(jí)物 - - - ---- - - - -染料木苷- - - ---- - - - -總計(jì)100 100 100100 100 100 100 100 100 100100
表2(續(xù)表)本發(fā)明品E本發(fā)明品R本發(fā)明品S本發(fā)明品T本發(fā)明品U 本發(fā)明品V本發(fā)明品W本發(fā)明品X本發(fā)明品Y本發(fā)明品Z比較品Z魚粉 60 70 -60 60 60 60 60 60 60 60大豆粕 10 -70 10 10 10 10 10 10 10 10- ---- 10.0---- -制造例1的橄欖脫脂粕9.949.99 9.99 9.99 9.9999 - 9.5 9.95 9.9889.989.84糊精 7 7777 7 7777 7魚油 3 3333 3 3333 3大豆油 3.5 3.5 3.5 3.5 3.53.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5玉米淀粉 4.5 4.5 4.5 4.5 4.54.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5混合礦物質(zhì) 2 2222 2 2222 2曲酸 - ---- - ---- 0.01山楂酸 0.010.01 0.01 0.01 0.0001 - ---0.01-- ---- - ---- -烏索酸- ---- - ---- 0.05維生素E- ---- - ---- 0.10維生素C 0.05---- - ---- -蝦青素 - ---- - 0.5 --- -制造例1的提取物 - ---- - -0.05 -- -制造例1的濃縮物 - ---- - --0.012- -制造例1的粗山楂酸分級(jí)物 - ---- - ---0.01-總計(jì) 100 100 100 100 100100 100 100 100 100 100
實(shí)施例3然后，如下地進(jìn)行真鯛的飼養(yǎng)試驗(yàn)。將平均魚體重220g的真鯛440條隨機(jī)地按每20條分為-組，分別作為試驗(yàn)區(qū)。將各試驗(yàn)區(qū)的真鯛分別收容在500升的黑色聚碳酸酯樹脂水槽中，將其置于野外。設(shè)置各水槽，使其均等地照射太陽光，并且在日照時(shí)間內(nèi)不受結(jié)構(gòu)物的遮擋。將各水槽分成試驗(yàn)區(qū)1～22，按照每日4％(每單位魚的體重)的標(biāo)準(zhǔn)，在2個(gè)月期間，向各試驗(yàn)區(qū)的真鯛投喂表2記載的飼料。投喂期間結(jié)束后，對(duì)試驗(yàn)區(qū)1～22的真鯛的全部都用色差計(jì)(MINOLTASPECTROPHOTOMETER CM-508d)測(cè)定其身體表面部分作為亮度指標(biāo)的L值，計(jì)算出平均值。L值的測(cè)定是將連接尾部中央和鰓蓋突出端的延長線、與被側(cè)線夾持的部分中，腹鰭與肛門等距離的地方作為測(cè)定地點(diǎn)，進(jìn)行測(cè)定。
進(jìn)而，對(duì)于試驗(yàn)區(qū)10～12以外的真鯛，以L值測(cè)定地點(diǎn)為中心，切出3層沿著體表的1mm厚的凍結(jié)切片，解凍后，在已變得大致透明的這些試樣上放置透明方格，測(cè)定1平方厘米中出現(xiàn)的黑筋的總長度。黑筋呈樹枝狀，測(cè)定所有部分的長度后，將其合計(jì)。
另外，對(duì)于試驗(yàn)區(qū)10～12的真鯛，測(cè)定作為亮度指標(biāo)的L值，同時(shí)，在同-部位測(cè)定作為紅色指標(biāo)的a值。
進(jìn)而，對(duì)于試驗(yàn)區(qū)1～22的魚以目視法進(jìn)行評(píng)價(jià)。將全部個(gè)體皆收容在水深50厘米的飼養(yǎng)水槽中，在室內(nèi)并在同-條件下，對(duì)于從水面可目視的魚體背面逐個(gè)進(jìn)行觀察，對(duì)于各體表的黑色，按各等級(jí)進(jìn)行點(diǎn)數(shù)化。其方法是，對(duì)于全部的飼養(yǎng)個(gè)體，各自按其黑色分為5組，將屬于最白的組的個(gè)體作為5點(diǎn)，將屬于最黑的組的個(gè)體作為1點(diǎn)，按五個(gè)等級(jí)評(píng)價(jià)各組的點(diǎn)數(shù)。然后，分別將各試驗(yàn)區(qū)的點(diǎn)數(shù)合計(jì)，計(jì)算出平均值。
進(jìn)而，作為表示本發(fā)明效果的指標(biāo)，采用黑變·褐變防止指數(shù)和黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。黑變·褐變防止指數(shù)和黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)的計(jì)算按照上述公式進(jìn)行。結(jié)果示于表3中。
表3試驗(yàn)區(qū) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011投喂飼料比較品A 比較品B 比較品C 本發(fā)明品A本發(fā)明品B 本發(fā)明品C比較品D比較品E 本發(fā)明品D比較品F 比較品G體色(L值) 51.8 55.9 50.9 68.766.9 65.153.158.8 78.3 50.4 55.1體色(a值) 7.0 - - - - - 7.2 8.8- 7.28.8肉中黑筋 60.5 42.2 59.1 37.241.1 41.858.838.6 17.2 - -目視評(píng)價(jià)點(diǎn)數(shù)平均值1.25 1.55 1.24.053.83.5 1.3 1.84.25 1.11.45黑變·褐變防止指數(shù)100.0 107.9 98.3 132.6 129.2 125.7 102.5 113.5 151.2 97.3 106.4黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)- 100.0 100.0 122.9 131.4 116.5 - - 147.7 - 100.0試驗(yàn)區(qū)12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22投喂飼料本發(fā)明品E 本發(fā)明品R 本發(fā)明品S 本發(fā)明品T 本發(fā)明品U 本發(fā)明品V本發(fā)明品W本發(fā)明品X 本發(fā)明品Y 本發(fā)明品Z比較品Z體色(L值) 63.264.9 64.964.8 62.8 67.2 62.963.9 64.2 66.9 53體色(a值) 9.4 - - - --- -- --肉中黑筋 - 36.1 35.335.5 41.3 40.2 40.539.1 37.2 34.9 44.2目視評(píng)價(jià)點(diǎn)數(shù)平均值3.253.35 3.5 3.43.2 3.85 3.153.3 3.45 3.6 1.3黑變·褐變防止指數(shù)122.0 124.3 125.3 124.7 121.2129.7121.4 123.4124.9 129.2102.3黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)- - - - --- -- -100.0
從表3可以看出，與試驗(yàn)區(qū)1相比較，試驗(yàn)區(qū)4顯示出高得多的L值，該結(jié)果表明，通過添加山楂酸可以抑制體色的黑變。另外，還可以看出，與投喂已知具有黑變·褐變防止效果的曲酸的試驗(yàn)區(qū)2相比較，試驗(yàn)區(qū)4以相同的投喂量獲得更高的效果。進(jìn)而，在試驗(yàn)區(qū)3中，投喂曲酸0.001％時(shí)，不能完全抑制體色的黑變，而在試驗(yàn)區(qū)5中，即使山楂酸以相同的量投喂，也可確認(rèn)具有較高的效果。另外，在試驗(yàn)區(qū)6中，使用烏索酸時(shí)，比試驗(yàn)區(qū)2中使用曲酸時(shí)能更強(qiáng)地抑制黑變。進(jìn)而，同時(shí)投喂作為抗氧化劑已知的維生素C和E時(shí)，可從試驗(yàn)區(qū)7明顯地看出有一定的黑變·褐變防止效果。而從試驗(yàn)區(qū)8明顯地看出，通過將其與曲酸并用，雖然具有協(xié)同的黑變·褐變防止效果，但從試驗(yàn)區(qū)9看出，通過與山楂酸并用，可以獲得更顯著的協(xié)同的黑變·褐變防止效果。這一點(diǎn)也可以通過將試驗(yàn)區(qū)22與試驗(yàn)區(qū)9進(jìn)行比較來確認(rèn)。
另外，關(guān)于肉中的黑筋，從試驗(yàn)區(qū)1～3看出，雖然通過投喂曲酸而被抑制，但曲酸的效果在0.001％的添加量時(shí)看不出來。另一方面，從試驗(yàn)區(qū)4、5可以看出，通過投喂山楂酸可以使肉中的黑筋的量急劇減少，而從試驗(yàn)區(qū)16可以看出，即便是低的含量，本發(fā)明品也能發(fā)揮其效果，在抑制體表黑化的同時(shí)，還能使黑筋的總長度縮短。如試驗(yàn)區(qū)6所示，即便使用烏索酸，也能得到與山楂酸同樣的效果。進(jìn)而，從試驗(yàn)區(qū)7～9可以看出，通過與抗氧化劑并用，可使其效果顯著提高，添加山楂酸的飼料比使用曲酸時(shí)顯示出更高的效果。
另外，在投喂已知的作為顏色增艷劑蝦青素的情況，雖然表中未示出，但如果以目視觀察，可以發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)區(qū)12中魚身紅色顯著變強(qiáng)。
另外，在試驗(yàn)區(qū)18中將制備例1中的提取物、在試驗(yàn)區(qū)19中將制備例1中的濃縮物、在試驗(yàn)區(qū)20中將制備例2的粗山楂酸分級(jí)物分別作為黑變·褐變防止成分混合到試樣中，可以得到與配合山楂酸的情況同樣的黑變·褐變防止效果。應(yīng)予說明，從試驗(yàn)區(qū)17可以看出，即便使用含有山楂酸的橄欖粕，也可以發(fā)揮本發(fā)明品的效果。在試驗(yàn)區(qū)18～20中，濃縮精制度不同，高濃縮精制度的提取物以少量就可以發(fā)揮效果。由此可以看出，在投喂含有同等量的山楂酸的提取物的情況，以濃縮精制度高的一方可以得到更明確的效果。進(jìn)而還判明，本發(fā)明在作為類黃酮化合物的染料木苷的存在下，可以發(fā)揮出高的效果。
關(guān)于黑變·褐變防止指數(shù)，本發(fā)明品均在115以上，可以確認(rèn)具有高的效果。同時(shí)，即使目視評(píng)價(jià)，也可以發(fā)揮同樣好的黑變·褐變防止效果。另外，它們的目視評(píng)價(jià)結(jié)果與L值具有很好的相關(guān)性。
另外，如果著眼于黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)，則可以看出，在試驗(yàn)區(qū)2與4和6、試驗(yàn)區(qū)3與5、試驗(yàn)區(qū)22與9的比較中，本發(fā)明品的黑變·褐變防止強(qiáng)度指數(shù)均在110以上，發(fā)揮出比曲酸更高的效果。
應(yīng)予說明，從試驗(yàn)區(qū)13、14可以看出，在以動(dòng)物性蛋白質(zhì)為主成分的情況和以植物性蛋白質(zhì)為主成分的情況皆可發(fā)揮出本發(fā)明品的效果。
<飼料制備例>
按照表4的添加比例，制成加入添加物的蝦飼養(yǎng)用的飼料。對(duì)于F～H，使用市售飼料作基本飼料。市售飼料以魚粉、大豆粕、魚油、植物油脂等為主成分，并含有必要充分量的維生素類和礦物質(zhì)類，一般作為大蝦養(yǎng)殖用的固形飼料(粒狀)。應(yīng)予說明，全部飼料經(jīng)過一次粉碎，混合1％的魚油，再用適量的水?dāng)嚭停尚螢榱詈?，在低溫條件下進(jìn)行減壓干燥，將其作為投喂飼料。表4記載的山楂酸在將它們拌和時(shí)適時(shí)混入。
表4

實(shí)施例4<處理液制備例>
制成處理液。將碳酸氫鈉3g、食鹽45g溶解于離子交換水1升中，將該溶液作為處理液的基本組成。向這些基本組成中添加山楂酸0.01質(zhì)量％。另外，將山楂酸溶解于乙醇中，使其濃度為1％，用離子交換水將其稀釋混合。
進(jìn)而，制作用于進(jìn)行評(píng)價(jià)的處理液。處理液與實(shí)施例4同樣地制備，對(duì)于檸檬酸、檸檬酸鈉、曲酸、山楂酸的用量，如表5中所記載。
表5

實(shí)施例5以下進(jìn)行大蝦的飼養(yǎng)試驗(yàn)以及飼養(yǎng)后的蝦的保存試驗(yàn)。將平均體重21.7g的大蝦120只按每20只為一個(gè)試驗(yàn)區(qū)，共分為6個(gè)試驗(yàn)區(qū)，如表6所示，用比較品H和本發(fā)明品F的飼料進(jìn)行2個(gè)月飼養(yǎng)。每天按體重的3％左右的標(biāo)準(zhǔn)投喂飼料。飼養(yǎng)結(jié)束后，將所有對(duì)蝦在-80℃下凍結(jié)保存，將其浸漬處理后，用于保存試驗(yàn)。保存試驗(yàn)中，從各試驗(yàn)區(qū)中任意選擇個(gè)體各5只進(jìn)行試驗(yàn)。
<浸漬處理>
將蝦全部進(jìn)行一次冷凍后，解凍，將其在實(shí)施例4配制的處理液中浸漬1小時(shí)，去掉水分后，收納于發(fā)泡聚苯乙烯托盤中，將其包封，進(jìn)行在4℃下保存5天的試驗(yàn)。從各試驗(yàn)區(qū)各取5只蝦進(jìn)行保存試驗(yàn)。評(píng)價(jià)方法是，在進(jìn)行了保存試驗(yàn)的樣品中，將黑變最嚴(yán)重的蝦評(píng)價(jià)為5，將在冷凍狀態(tài)下保存著的蝦評(píng)價(jià)為1，對(duì)全部的蝦按5～1的點(diǎn)數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)，計(jì)算出各試驗(yàn)區(qū)的平均值。
表6試驗(yàn)區(qū) 2324 25 26 27 28 29投與飼料 比較品H 本發(fā)明品F 比較品H比較品H比較品H比較品H 比較品H處理液 比較品I 比較品I比較品J比較品K比較品L本發(fā)明品G 本發(fā)明品H平均值 4.8 2 4.43.64 1.6 2.4由表6可以看出，與試驗(yàn)區(qū)23相比，試驗(yàn)區(qū)24明顯抑制了在保存期間的黑變，由此表明，由于在投喂飼料中添加了山楂酸，從而可以抑制黑變。另外，如試驗(yàn)區(qū)25所示，雖然通過用有機(jī)酸進(jìn)行處理可以在一定程度上抑制黑變，但其效果不大。進(jìn)而，從試驗(yàn)區(qū)26的結(jié)果可以看出，雖然通過曲酸的處理可以確認(rèn)協(xié)同的效果，但按試驗(yàn)區(qū)27所示的曲酸的添加量不能充分發(fā)揮效果。另一方面，從試驗(yàn)區(qū)28的結(jié)果可以看出，通過用山楂酸進(jìn)行處理，可以顯著抑制黑變，從試驗(yàn)區(qū)29的結(jié)果可以看出，即使是0.001％的添加量，也可以明確地發(fā)揮其效果。
實(shí)施例6進(jìn)而，針對(duì)作為植物的蘋果考察本發(fā)明的效果。以下示出該實(shí)施例。
確認(rèn)蘋果全部為同一產(chǎn)地、同一收獲日，在此基礎(chǔ)上用于實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)備5個(gè)直徑約11cm的蘋果，削掉外皮后，分別從各蘋果上各切下6片0.5mm厚、大小為1cm見方的果肉部。應(yīng)予說明，切下的果肉部使用距外皮1.5cm以內(nèi)的部分。
在將全部樣品切下后，將其在0.5％的食鹽水中保存，直到用于實(shí)驗(yàn)。切下的樣品分別對(duì)6片中的5片進(jìn)行浸漬處理。使用表5中記載的那些處理液。剩下的1片作為評(píng)價(jià)對(duì)照，在進(jìn)行評(píng)價(jià)之前，在4℃條件下保存于0.5％食鹽水中。浸漬處理是用食鹽水充分水洗，在表7中記載的各處理液中浸漬15分鐘，除去水后，在25℃下放置2小時(shí)，評(píng)價(jià)褐變的程度。評(píng)價(jià)方法是，在放置的樣品中，將褐變最嚴(yán)重的樣品評(píng)價(jià)為5，將未進(jìn)行浸漬處理并保存于食鹽水中的樣品評(píng)價(jià)為1，對(duì)全部的切片按5～1的點(diǎn)數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)所準(zhǔn)備的5個(gè)蘋果全都進(jìn)行試驗(yàn)后，計(jì)算出各浸漬處理的平均值。
表7試驗(yàn)區(qū) 30 31 3233 34處理液 比較品J 比較品K比較品L 本發(fā)明品G 本發(fā)明品H平均54.24.4 1.4 2.2從表7可以看出，與試驗(yàn)區(qū)31相比，試驗(yàn)區(qū)30雖然可以在一定程度上抑制褐變，可以確認(rèn)曲酸的處理效果，但就試驗(yàn)區(qū)32中進(jìn)行的添加量而言，幾乎看不出其效果。另一方面，可以看出，與各個(gè)比較例相比，試驗(yàn)區(qū)33、34顯著抑制了褐變，通過添加山楂酸，可以有效地抑制褐變。另外，即使?jié)舛葹?.001％，其效果也是很顯著的。
實(shí)施例7<肥料的制備例>
本發(fā)明品I(油粕固形肥料)菜籽油粕690g作為礦物混合物的骨粉300g山楂酸 10g水量適量將作為上述原料的菜籽油粕、作為礦物質(zhì)混合物的骨粉、山楂酸充分混合，加入水，制成有點(diǎn)發(fā)硬的膏狀，將其置于背陰處。使其發(fā)酵1個(gè)月，得到油粕固形肥料。
本發(fā)明品J(油粕固形肥料)橄欖油粕590g骨粉400g烏索酸 10g水量適量將上述原料充分混合，加入水，制成有點(diǎn)發(fā)硬的膏狀，將其置于背陰處。使其發(fā)酵1個(gè)月，得到油粕固形肥料。
<比較品的制備>
比較品M采用與本發(fā)明品I相同的方法，制成比較品M的肥料。應(yīng)予說明，比較品M中不使用山楂酸，而是使用曲酸10g。
實(shí)施例8考察本發(fā)明對(duì)于生長中的植物產(chǎn)生的效果。以下示出其實(shí)驗(yàn)例。
使用15臺(tái)容量約20升的種植機(jī)，進(jìn)行茄子的栽培試驗(yàn)。在1臺(tái)種植機(jī)中栽培用于長成1株茄子的苗，從栽培開始的40天內(nèi)，對(duì)全部種植機(jī)以相同的日照條件、肥料、給水等條件進(jìn)行栽培。根據(jù)葉片數(shù)、莖長度，選擇6株生長狀態(tài)大致相同的苗，進(jìn)而將它們分成2個(gè)區(qū)，每個(gè)區(qū)3株。然后，用比較品M和本發(fā)明品I的肥料對(duì)各區(qū)的苗進(jìn)行追肥。應(yīng)予說明，追肥是2周1次，在種植機(jī)的土壤表面，撒播15g的肥料，再從它們的上方澆灌足量的水。從栽培開始第65～75天，在所收獲的茄子中，選擇3株表面沒有受傷或蟲咬的茄子，用于觀察褐變情況。
褐變的觀察如下那樣進(jìn)行。即，將用于觀察的茄子縱向切成2片，將其中一片浸漬到0.5％食鹽水中。將另一片在25℃的恒溫箱內(nèi)放置1小時(shí)。對(duì)全部茄子進(jìn)行同樣的處理，放置1小時(shí)后，與浸漬于食鹽水中的那一片進(jìn)行比較，觀察褐變的進(jìn)行程度。觀察的結(jié)果，將全體明顯出現(xiàn)褐變的評(píng)價(jià)為3，將部分出現(xiàn)褐變的評(píng)價(jià)為2，將褐變不那么顯著的評(píng)價(jià)為1，將完全不出現(xiàn)褐變的評(píng)價(jià)為0，對(duì)全部茄子進(jìn)行根據(jù)點(diǎn)數(shù)的評(píng)價(jià)后，分別計(jì)算出各區(qū)的平均值。
表8試驗(yàn)區(qū) 35 36追肥肥料 比較品M 本發(fā)明品I觀察平均值 2.9 1.9與試驗(yàn)區(qū)36的結(jié)果相比，可以看出，試驗(yàn)區(qū)35在褐變觀察中的平均值較低，因此表明，通過將本發(fā)明的五環(huán)型三萜類用作肥料，可以使所栽培的茄子比通常的茄子難以出現(xiàn)褐變。
<飼料制備例>
<嫩肉(broilers)用飼料>
按照表9的添加比例，制作加入添加物的嫩肉用飼料。應(yīng)予說明，所使用的橄欖提取物，是通過使用30％含水乙醇將橄欖榨油殘?jiān)?5℃下攪拌3小時(shí)進(jìn)行提取，接著進(jìn)行過濾，將濾液濃縮干固而獲得的。其山楂酸含有濃度為9質(zhì)量％。
表9原材料組成(％)玉米 54.90高粱 10.00大豆粕17.48魚粉 9.00酪蛋白0.60苜蓿粉1.00牛脂 5.20蛋氨酸0.12維生素混合物 0.10礦物質(zhì)混合物 1.20橄欖提取物0.40<豬育肥用飼料>
按照表10的添加比例制成豬育肥用飼料。所使用的橄欖提取物，是使用30％含水乙醇將橄欖榨油殘?jiān)?5℃下攪拌提取3小時(shí)并進(jìn)行過濾，將濾液濃縮干固而得到的。其山楂酸含有濃度為9質(zhì)量％。
表10原材料組成(％)玉米 64.30麥麩 9.85大豆粕22.70維生素混合物 0.25礦物混合物1.90酪蛋白0.55橄欖提取物0.45<牛育肥用飼料>
按照表11的添加比例制成牛育肥用飼料。所使用的橄欖提取物是使用30％含水乙醇將橄欖榨油殘?jiān)?5℃下攪拌提取3小時(shí)并進(jìn)行過濾，將濾液濃縮干固而得到的。其山楂酸含有濃度為9質(zhì)量％。
表11原材料 組成(％)玉米48.80壓扁大麥10.00麥麩17.00脫脂米糠10.00玉米麩 3.00大豆粕 7.50維生素混合物0.20礦物質(zhì)混合物2.50酪蛋白 0.50橄欖提取物 0.50
權(quán)利要求
1.一種飼料，其中含有選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物作為有效成分。
2.權(quán)利要求1中所述的飼料，其中，五環(huán)型三萜類為山楂酸或?yàn)跛魉帷?br> 3.一種飼料，其中含有橄欖植物的脫脂物、橄欖提取物或橄欖提取油作為有效成分。
4.權(quán)利要求3所述的飼料，其中，橄欖提取物為從在橄欖油的制造工序中獲得的脫脂物用水和/或有機(jī)溶劑提取的提取物。
5.權(quán)利要求1或3所述的飼料，其中還含有從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的至少1種。
6.一種飼料，其中含有魚粉和/或大豆粕、作為有效成分的山楂酸或?yàn)跛魉帷⒁约白鳛榭寡趸瘎┑膹木S生素C、維生素E和異黃酮中選出的一種以上。
7.一種肥料，其中含有選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物作為有效成分。
8.權(quán)利要求7所述的肥料，其中，五環(huán)型三萜類為山楂酸或?yàn)跛魉帷?br> 9.一種肥料，其中含有橄欖植物的脫脂物、橄欖提取物或橄欖提取油作為有效成分。
10.權(quán)利要求9所述的肥料，其中，橄欖提取物為從在橄欖油的制造工序中獲得的脫脂物用水和/或有機(jī)溶劑提取的提取物。
11.權(quán)利要求7或9所述的肥料，其中還含有從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的至少1種。
12.一種肥料，其中含有作為有效成分的山楂酸或?yàn)跛魉帷⒂推梢约暗V物質(zhì)混合物。
13.一種動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，其中含有選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物作為有效成分。
14.一種動(dòng)植物用黑素生成抑制劑，其中含有橄欖植物的脫脂物、橄欖提取物或橄欖提取油作為有效成分。
15.一種動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物，其中含有選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物作為有效成分。
16.一種動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物，其中含有橄欖植物的脫脂物、橄欖提取物或橄欖提取油作為有效成分。
17.權(quán)利要求16所述的動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物，其中，橄欖提取物為從在橄欖油的制造工序中獲得的脫脂物用水和/或有機(jī)溶劑提取的提取物。
18.權(quán)利要求15或16所述的動(dòng)植物用防止黑變·褐變的組合物，其中還含有從抗氧化劑、有機(jī)酸及其鹽類、磷酸及其鹽類中選出的一種或兩種以上。
19.一種飲食物，其中含有可使黑變·褐變防止指數(shù)達(dá)到115以上的選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物的動(dòng)植物。
20.一種飼料或肥料的制備方法，其中包括將橄欖植物、其干燥物、粉碎物或脫脂物用水和/或有機(jī)溶劑處理，從而得到五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物的合計(jì)含量為0.1～99.99質(zhì)量％的提取物的工序。
21.一種用于防止或改善動(dòng)物體或植物體的黑變·褐變的方法，其中包括將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物投與動(dòng)物或植物。
22.一種用于防止或改善動(dòng)植物體的黑變·褐變的方法，其中包括(a)通過將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物溶解于水或含水有機(jī)溶劑中來配制溶液的工序、以及(b)將動(dòng)植物浸漬在工序(a)獲得的溶液中的工序。
23.權(quán)利要求22所述的方法，其中包括在浸漬于工序(a)獲得的溶液中之前，將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物投與工序(b)中使用的動(dòng)植物的工序。
24.權(quán)利要求22所述的方法，其中，在工序(a)中，將山楂酸、檸檬酸和檸檬酸鈉溶解于水或含水有機(jī)溶劑中來配制溶液。
25.一種用于防止動(dòng)物體或植物體的黑素生成的方法，其中包括將選自五環(huán)型三萜類、其生理上容許的鹽以及其衍生物中的化合物投與動(dòng)物或植物。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有優(yōu)良的黑素生成抑制效果的、含有選自五環(huán)型三萜類及其生理上容許的鹽或其衍生物中的一種或兩種以上作為有效成分的飼料、肥料、動(dòng)植物用黑素生成抑制劑以及動(dòng)植物用黑變·褐變防止劑。
文檔編號(hào)C07J63/00GK1558722SQ0281897
公開日2004年12月29日 申請(qǐng)日期2002年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月28日
發(fā)明者村野賢博, 筱原剛, 久野憲康, 康 申請(qǐng)人:日清奧利友株式會(huì)社