專利名稱：苯乙酰氨基噻唑衍生物、它們的制備方法和它們作為抗腫瘤劑的用途的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及苯乙酰氨基噻唑衍生物、它們的制備方法、含有它們的藥物組合物和它們作為治療劑的用途，特別是在癌癥和細胞增殖障礙治療中的用途。
背景討論幾種細胞毒性藥物——例如氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素和喜樹堿——損害DNA或者影響細胞代謝途徑，從而在很多情況下間接地阻滯細胞周期。因此，這些藥物對正常細胞和腫瘤細胞都產(chǎn)生不可逆的損害，導致顯著的毒性和副作用。
在這一點上，能夠充當高度特異性抗腫瘤劑的化合物是可取的，它們選擇性引導腫瘤細胞抑制和細胞程序死亡，與目前可用的藥物相比，具有相當?shù)墓π?，但是減少了毒性。
眾所周知，細胞周期的進展受到一系列關(guān)卡的控制，也稱之為限制點，它們受到一個已知稱為細胞周期蛋白依賴性激酶(cdk)的酶家族的調(diào)節(jié)。繼而，cdk本身在很多水平上都受到調(diào)節(jié)，例如與細胞周期蛋白的結(jié)合。
不同細胞周期蛋白/cdk配合物的活化與失活作用的協(xié)調(diào)是細胞周期的正常進展所必需的。決定性G1-S與G2-M轉(zhuǎn)變都受到不同細胞周期蛋白/cdk活性的活化作用的控制。在G1中，CdK4/細胞周期蛋白D和CdK2/細胞周期蛋白E被認為介導S期的開始。S期的進展需要CdK2/細胞周期蛋白A的活性，而cdc2(cdk1)/細胞周期蛋白A和cdc2/細胞周期蛋白B的活化作用是有絲分裂的開始所需的。關(guān)于細胞周期蛋白和細胞周期蛋白依賴性激酶的一般性介紹，例如參見Kevin R.Webster et al，Exp.Opin.Invest.Drugs，1998，Vol.7(6)，865-887。
關(guān)卡控制在腫瘤細胞中是有缺陷的，部分原因是cdk活性的去調(diào)節(jié)作用。例如，已經(jīng)在腫瘤細胞中觀察到改變了的細胞周期蛋白E和cdk的表達，已經(jīng)在小鼠中顯示cdk抑制性p27 KIP基因的缺失導致更高的癌癥發(fā)病率。
越來越多的證據(jù)支持這樣一種觀點，cdk是細胞周期進展中的限速酶，因此代表了治療性干預的分子靶。特別地，直接抑制cdk/細胞周期蛋白激酶的活性應當有助于限制失調(diào)了的腫瘤細胞增殖。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供化合物，它們可用于治療與改變的細胞周期依賴性激酶活性有關(guān)的細胞增殖性障礙。另一目的是提供化合物，它們具有cdk/細胞周期蛋白激酶抑制活性。
本發(fā)明人現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，某些苯乙酰氨基噻唑被賦予cdk/細胞周期蛋白激酶抑制活性，因而在療法中可用作抗腫瘤劑，并且在毒性和副作用方面缺少上述與目前可利用的抗腫瘤藥有關(guān)的缺點。
更具體而言，本發(fā)明的苯乙酰氨基噻唑可用于治療各種癌癥，包括但不限于癌，例如膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌(包括小細胞肺癌)、食管癌、膽囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌和皮膚癌(包括鱗狀細胞癌)；淋巴系的造血系統(tǒng)腫瘤，包括白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、毛發(fā)細胞淋巴瘤和Burkett氏淋巴瘤；骨髓系的造血系統(tǒng)腫瘤，包括急性與慢性骨髓性白血病、脊髓發(fā)育不良綜合征和早幼粒細胞白血?。婚g充質(zhì)來源的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；中樞與外周神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細胞瘤、成神經(jīng)細胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；其它腫瘤，包括黑瘤、精原細胞瘤、畸胎樣癌、骨肉瘤、著色性干皮病、角化棘皮瘤、甲狀腺濾泡癌和卡波濟氏肉瘤。
由于cdk在細胞增殖調(diào)節(jié)作用中的關(guān)鍵角色，這些苯乙酰氨基噻唑衍生物還可用于治療各種細胞增殖性障礙，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤病息肉病、神經(jīng)纖維瘤病、牛皮癬、與動脈粥樣硬化有關(guān)的血管平滑肌細胞增殖、肺纖維變性、關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎和手術(shù)后狹窄與再狹窄。
本發(fā)明的化合物可以用于治療阿爾茨海默氏病，這受cdk5參與τ蛋白的磷酸化作用這一事實的啟發(fā)(J.Biochem.117，741-749，1995).
本發(fā)明的化合物作為細胞程序死亡的調(diào)制劑，還可以用于治療癌癥、病毒感染、HIV感染的個體向AIDS發(fā)展的預防、自身免疫疾病和神經(jīng)變性性障礙。
本發(fā)明的化合物可以用于抑制腫瘤的血管生成和轉(zhuǎn)移。
本發(fā)明的化合物還可以充當其他蛋白激酶的抑制劑，例如不同異構(gòu)形式(isoform)的蛋白激酶C、Met、PAK-4、PAK-5、ZC-1、STLK-2、DDR-2、Aurora1、Aurora2、Bub-1、PLK、Chk1、Chk2、HER2、rafl、MEK1、MAPK、EGF-R、PDGF-R、FGF-R、IGF-R、PI3K、weel激酶、Src、Abl、Akt、MAPK、ILK、MK-2、IKK-2、Cdc7、Nek，因而有效地治療與其它蛋白激酶有關(guān)的疾病。
本發(fā)明的化合物還可用于治療和預防放療誘發(fā)的或化療誘發(fā)的脫發(fā)。
因此，本發(fā)明提供治療與改變的細胞周期依賴性激酶活性有關(guān)的細胞增殖性障礙的方法，該方法對需要的哺乳動物給以有效量的由通式(I)代表的苯乙酰氨基噻唑衍生物 其中R是氫原子或者直鏈或支鏈C1-C4烷基；R1是式(IIa-e)基團
其中R2是氫或者直鏈或支鏈C1-C6烷基，環(huán)(IIc)上的羥基位于任意一個空位(free position)上；R3選自由氨基、氨甲基(-CH2-NH2)、羥甲基(-CH2OH)、直鏈或支鏈C1-C4烷基組成的組，或者它是具有1或2個選自氮、氧和硫的雜原子的5或6元雜環(huán)；其條件是若R是氫，則R3不是甲基或吡啶-3-基；或其藥學上可接受的鹽。
在上述方法的優(yōu)選實施方式中，細胞增殖性障礙選自由癌癥、阿爾茨海默氏病、病毒感染、自身免疫疾病和神經(jīng)變性障礙組成的組。
可以治療的具體癌癥類型包括癌、鱗狀細胞癌、骨髓或淋巴系的造血系統(tǒng)腫瘤、間充質(zhì)來源的腫瘤、中樞與外周神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤、黑瘤、精原細胞瘤、畸胎樣癌、骨肉瘤、著色性干皮病、角化棘皮瘤、甲狀腺濾泡癌和卡波濟氏肉瘤。
在上述方法的另一優(yōu)選實施方式中，細胞增殖性障礙選自由良性前列腺增生、家族性腺瘤病息肉病、神經(jīng)纖維瘤病、牛皮癬、與動脈粥樣硬化有關(guān)的血管平滑肌細胞增殖、肺纖維變性、關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎和手術(shù)后狹窄與再狹窄組成的組。
另外，本發(fā)明方法提供對腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移的抑制作用。本發(fā)明方法還可以提供對細胞周期的抑制作用或cdk/細胞周期蛋白依賴性抑制作用。
除了上述以外，本發(fā)明的方法客體提供對放療誘發(fā)的或化療誘發(fā)的脫發(fā)的治療和預防。
本發(fā)明還提供由通式(I)代表的苯乙酰氨基噻唑衍生物
其中R是氫原子或甲基；R1是式(IIa-e)基團 其中R2是氫或者直鏈或支鏈C1-C6烷基，環(huán)(IIc)上的羥基位于任意一個空位上；R3選自由氨基、氨甲基(-CH2-NH2)、羥甲基(-CH2OH)、直鏈或支鏈C1-C4烷基組成的組，或者它是具有1或2個選自氮、氧和硫的雜原子的5或6元雜環(huán)；其條件是若R是氫，則R3不是甲基或吡啶-3-基；或其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明還包括合成由式(I)代表的苯乙酰氨基噻唑衍生物的方法。在本發(fā)明中還包括包含由式(I)代表的苯乙酰氨基噻唑衍生物的藥物組合物。
將會容易獲得對發(fā)明及其很多附帶優(yōu)點的更完整的領(lǐng)會，因為參照下列詳細說明這些將變得更好理解。
發(fā)明的詳細說明幾種氨基噻唑是本領(lǐng)域已知的，例如作為除草劑、合成中間體或者甚至是治療劑。其中，作為實例，有抗變態(tài)反應劑2-苯甲酰氨基-1，3-噻唑(EP-A-261503，Valeas S.p.A.)；蛋白激酶C抑制劑5-烷基-2-苯基烷基羰基氨基-1，3-噻唑(WO 98/04536，Otsuka Pharmaceutical Co.)；抗腫瘤劑5-芳硫基-2-酰氨基-1，3-噻唑(EP-A-412404，F(xiàn)ujisawa Pharm.Co.)；細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑4-氨基-2-羰基氨基-1，3-噻唑(WO 99/21845，Agouron Pharmaceutical Inc.)；氨基噻唑，其中有細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑5-鏈烯基-2-酰氨基噻唑(WO 99/65884，Bristol-Myers Squibb Co.)；葡糖激酶活化劑被環(huán)烷基烷基取代的苯乙酰氨基噻唑，其可用于治療II型糖尿病(WO 01/85707，Hoffinann-LaRoche AG)。
另外，兩份同屬Pharmacia & Upjohn S.p.A.名下的國際專利申請WO 00/26202和WO 01/14353(US 6,114,365)及其中引用的參考文獻都公開了一大類具有細胞依賴性激酶抑制活性的酰氨基噻唑衍生物。
本發(fā)明的化合物客體落入WO 00/26202和WO 01/14353的通式范圍，但是其中沒有具體例證。
式(I)化合物可以具有不對稱的碳原子，因此可以存在外消旋混合物或單獨的旋光異構(gòu)體，它們都屬于本發(fā)明的范圍。
作為實例，當R不是氫時，與R本身連接的碳原子是不對稱的碳原子，因此，式(I)化合物的(R)與(S)旋光異構(gòu)體以及外消旋(R，S)混合物或任意其它包含兩種旋光(R)或(S)異構(gòu)體之一為主的混合物都屬于本發(fā)明的范圍。
同樣，式(I)化合物的全部可能的異構(gòu)體及其混合物和代謝產(chǎn)物與藥學上可接受的生物前體(也稱之為前體藥物)作為抗腫瘤劑的用途也屬于本發(fā)明的范圍。
本說明書中，正如技術(shù)人員所清楚的，作為式(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)與(IIe)R1基團一部分的氮原子在式(I)中是直接與亞苯基部分鍵合的。
另外，除非另有指定，在提到其中R1是基團(IIc)的式(I)化合物時，2-氧代吡咯烷-1-基部分進一步在環(huán)的3、4或5位被羥基取代，以致得到3-羥基-、4-羥基-或5-羥基-2-氧代吡咯烷-1-基。
本說明書中，除非另有指定，術(shù)語直鏈或支鏈C1-C4烷基表示任意的甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基和仲丁基。
術(shù)語具有1或2個選自氮、氧或硫的雜原子的5或6元雜環(huán)表示這樣一種基團，例如呋喃、吡咯、咪唑、吡唑、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、吡咯烷、吡咯啉、咪唑烷、咪唑啉、吡唑烷、吡唑啉、哌啶、哌嗪、嗎啉等。
式(I)化合物的藥學上可接受的鹽包括分別與無機或有機酸或堿所生成的酸與堿加成鹽。上述酸的實例例如包括硝酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸、高氯酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、草酸、丙二酸、蘋果酸、馬來酸、酒石酸、枸櫞酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、羥乙磺酸和水楊酸。
同樣，適合的堿例如有堿金屬或堿土金屬氫氧化物以及有機胺，例如脂族胺、哌啶等。
一類優(yōu)選的本發(fā)明式(I)化合物是其中R是甲基的那些。
在這類優(yōu)選的式(I)化合物中，最優(yōu)選的是其中R1是式(IIa)、(IIb)或(IIc)基團的那些，其中羥基取代基位于吡咯烷環(huán)的3位，或者它是式(IId)基團，其中R2是氫或甲基，或者它是式(IIe)基團，其中R3是甲基或吡啶基，因此包括吡啶-4-基、吡啶-3-基或吡啶-2-基。
在這類中進而更優(yōu)選的是其中R1是式(IIa)或(IIe)基團的式(I)化合物。
還優(yōu)選的是其中R是氫原子的式(I)化合物。
進而更優(yōu)選的是其中上述特征組合在一起的化合物，以致得到其中R是氫且R1是式(IIa)基團的式(I)化合物，也就是化合物N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酰胺，或者其中R是甲基且R3是甲基、吡啶-3-基或吡啶-4-基的式(I)化合物，為它們的(S)構(gòu)型，也就是(2S)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺、N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺和N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺。
本發(fā)明的式(I)化合物任選地是藥學上可接受的鹽的形式，實例有1.N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酰胺；2.N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；3.(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；4.(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；5. 2-[4-(3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；6. 2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；7. 2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；8. 2-[4-(3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；9. 2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；10. 2-{4-[(3R)-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；11.(2R)-2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；12.(2S)-2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；13.(2R)-2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；14.(2S)-2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；15.N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]乙酰胺；16.N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺；17.(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺；18.(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺；19.N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酰胺；20.N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；21.(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；22.(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；23.N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酰胺；24.N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；25.(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；26.(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；27.(2S)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；
28.(2R)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；29.2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；30.(2S)-2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；31.(2R)-2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；32. 2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；33. 2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；34.(2S)-2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；35.(2R)-2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；36. 2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；37.N-1-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)甘氨酰胺；38.N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺；39.N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺；40.N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺；41.N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；42.N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；43.N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；44.N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；45.N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺；46.N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺；47.N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺；48.N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺。
式(I)化合物、即本發(fā)明客體可以借助這樣一種方法獲得，包含使2-氨基-5-異丙基-1，3-噻唑與式(III)化合物反應， 其中R和R1是如上所定義的，R’是羥基或適合的離去基團，任選地，再轉(zhuǎn)化它們?yōu)槠渌帉W上可接受的鹽。
作為替代選擇，其中R1是式(IIe)基團的式(I)化合物可以借助這樣一種方法獲得，包含a’)當R3不是氨基時，使式(IV)化合物
與式(V)化合物反應，R3-COX (V)其中R和R3是如上所定義的，X是羥基或適合的離去基團；a”)當R3是氨基時，使式(IV)化合物與氰酸鉀反應；任選地，再轉(zhuǎn)化任何一個步驟a’)或a”)所得式(I)化合物為其藥學上可接受的鹽。
上述方法是可以按照本領(lǐng)域熟知的方法進行的類似方法。
2-氨基-5-異丙基-1，3-噻唑與其中R’是羥基的式(III)化合物之間的反應可以這樣進行，在偶聯(lián)劑的存在下，例如碳化二亞胺，也就是1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺、1，3-二異丙基碳化二亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺、N-環(huán)己基碳化二亞胺或N’-甲基聚苯乙烯，任選地在叔堿的存在下、例如三乙胺、N-甲基嗎啉、N，N-二異丙基乙胺、吡啶或二乙氨基甲基聚苯乙烯進行。
反應發(fā)生在適合的溶劑中，例如乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、1，4-二噁烷、乙腈、甲苯或N，N-二甲基甲酰胺，反應溫度從約-10℃至回流，優(yōu)選從0℃至室溫，適合的反應時間從約30分鐘至約8天。
作為替代選擇，這種相同的反應也可以按照混合酸酐法進行，也就是使用氯代甲酸烷基酯，例如氯甲酸乙基、異丁基或異丙基酯，在叔堿的存在下、例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或吡啶進行。
該反應也是在適合的溶劑中進行的，例如甲苯、二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙腈、二乙醚、1，4-二噁烷或N，N-二甲基甲酰胺，反應溫度從約-30℃至室溫。
2-氨基-5-異丙基-1，3-噻唑與其中R’是適合的離去基團、例如鹵原子的式(III)化合物之間的反應可以這樣進行，在叔堿的存在下、例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或吡啶，在適合的溶劑中、例如乙酸乙酯、甲苯、二氯甲烷、氯仿、二乙醚、四氫呋喃、乙腈或N，N-二甲基甲酰胺，在約-10℃至回流的溫度下進行。
按照優(yōu)選的發(fā)明實施方式，制備式(I)化合物的方法是利用其中R’是羥基或鹵原子、優(yōu)選氯的式(III)化合物進行的。
對技術(shù)人員而言清楚的是，根據(jù)該方法步驟a’)的酰胺化反應是按類似方式、在式(IV)氨基衍生物與式(V)羧酸衍生物之間進行的，基本上如上所述。
作為實例，按照步驟a’)，其中R3是甲基的式(I)化合物的制備是這樣進行的，使式(IV)衍生物與乙酰氯(V)反應，或者可能的話與類似的酰化劑反應，例如乙酸酐。
反應是這樣進行的，在適合的堿的存在下、例如三乙胺、N-甲基嗎啉、N，N-二異丙基乙胺、吡啶或二乙氨基聚苯乙烯，在適合的溶劑中、例如乙酸乙酯、二氯甲烷、四氫呋喃或乙腈，在0℃至室溫的溫度下進行。
在式(V)化合物中，X是羥基或適合的離去基團，例如鹵原子。優(yōu)選地，X是羥基或氯原子。
按照該方法的步驟a”)，在適合的溶劑中，例如乙腈，在三氟乙酸的存在下，按照用于制備脲基衍生物(其中R3是氨基的式(I)化合物)的常規(guī)方法，使式(IV)中間體化合物與氰酸鉀反應。
式(I)化合物的可選成鹽作用或者其鹽向游離化合物的轉(zhuǎn)化都可以按照常規(guī)方法進行。
起始的2-氨基-5-異丙基-1，3-噻唑是已知的化合物，它們?nèi)菀装凑找阎椒ǐ@得，例如實施例中的報道。
同樣，其中R’是羥基或適合的離去基團的式(III)化合物是已知的，或者可以按照常規(guī)方法制備。
作為實例，其中R’是羥基、R是如上所述的且R1是式(IIa)基團的式(III)化合物可以這樣制備，在適合的溶劑中、例如甲苯、二甲苯或N，N-二甲基甲酰胺，在回流溫度下，使其中R是如上所述的式(VI)化合物
與6，6-二甲基-5，7-二氧雜螺(2，5)辛烷-4，8-二酮反應約2至約6小時。作為替代選擇，這些相同的化合物可以這樣制備，在適合的溶劑中、例如冰乙酸或鹽酸，在150℃至200℃的溫度下，使上述式(VI)化合物與γ-丁內(nèi)酯進行反應。
按照另一種替代方法，這些化合物可以這樣制備，在適合的溶劑中、例如氯仿、二氯甲烷、N，N-二甲基乙酰胺，在室溫下，使式(VI)化合物與4-氯丁酰氯反應，隨后在室溫下與無機堿、例如氫氧化鈉或氫氧化鉀進行反應。
其中R1是式(IIe)基團的式(III)化合物可以這樣制備，使其中R是如上所述的式(VI)化合物與適合的式(V)羧酸衍生物反應，以便得到任何其中R3不是氨基的式(III)衍生物，或者與氰酸鉀反應，以便得到其中R3是氨基的式(III)衍生物。這里所采用的操作條件是常規(guī)的，相當于以前報道的那些，分別涉及酰胺化反應或脲基的制備。
其中R’是羥基、R是如上所述的且R1是基團(IIb)的式(III)化合物可以借助這樣一種方法制備，包含a)在適合的溶劑中，例如氯仿或二氯甲烷，在0℃至室溫的溫度下，使式(VI)化合物與氯代甲酸2-氯乙基酯反應，隨后用磷酸鈉處理，從而得到其中R是如上所述的式(VII)化合物
b)在適合的無機堿的存在下，例如碳酸鉀或碳酸鈉，在N，N-二甲基甲酰胺中，或者在有機堿的存在下、例如1，5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯或1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯，在室溫下，環(huán)化式(VII)化合物。
其中R’是羥基、R是如上所述的、R1是基團(IId)且R2是氫的式(III)化合物可以借助這樣一種方法制備，包含a)借助下列常規(guī)方法，將其中R是如上所述的式(VI)化合物轉(zhuǎn)化為其中R是如上所述的對應的甲基酯衍生物(VIII) b)在適合的溶劑中，例如氯仿、二氯甲烷、四氫呋喃、1，4-二噁烷，在約0℃至約室溫的溫度下，使其中R是如上所述的式(VIII)化合物與異氰酸氯乙酯反應，從而得到其中R是如上所述的式(IX)化合物 c)在適合的無機堿的存在下，例如碳酸鉀或碳酸鈉，在N，N-二甲基甲酰胺中，或者在有機堿的存在下，例如1，5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯或1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯，在室溫下，環(huán)化式(IX)化合物，從而得到其中R是如上所述的式(X)化合物
d)在適合的溶劑中，例如水-甲醇或水-四氫呋喃混合物，在室溫下，將式(X)化合物用堿、例如碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鋰水解。
其中R’是羥基、R是如上所述的、R1是基團(IId)且R2是烷基的式(III)化合物可以借助這樣一種方法制備，包含a)在堿的存在下，例如叔丁醇鉀或氫化鈉，在適合的溶劑中，例如四氫呋喃、乙腈、1，4-二噁烷或N，N-二甲基甲酰胺，在約0℃至室溫的溫度下，使式(X)化合物與式(XI)化合物反應，R2-X (XI)其中R2是烷基，X是鹵素，從而得到其中R和R2是如上所述的式(XII)化合物 b)在適合的溶劑中，例如水-甲醇或水-四氫呋喃混合物，在室溫下，將式(XII)化合物用堿、例如碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鋰水解。
其中R是如上所述的且R1是基團(IIc)的式(I)化合物可以這樣制備，在氰基硼氫化鈉或氰基硼氫化(聚苯乙烯基甲基)三甲銨的存在下，在適合的溶劑中，例如冰乙酸或三氟乙醇，在室溫下，使其中R是如上所述的式(IV)化合物與2，2-二甲基-4-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-5-乙醛反應，后者例如是如Tetrahedron Lett.，39，(1998)，5313-5316所述制備的。
其中R是如上所述的式(IV)化合物可以借助這樣一種方法制備，包含a)在適合的偶聯(lián)劑的存在下，如碳化二亞胺，例如二環(huán)己基碳化二亞胺、二異丙基碳化二亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺，使其中R是如上所述的式(XIII)化合物 與5-異丙基-2-氨基-1，3-噻唑反應，后者是借助常規(guī)方法制備的，得到其中R是如上所述的式(XIV)化合物 b)在酸性介質(zhì)中，例如在鹽酸或硫酸的存在下，在乙醇中，或者在甲酸或三氟乙酸的存在下，在二氯甲烷中，在室溫下水解式(XIV)化合物，時間為約2小時至約12小時。
根據(jù)上步a)的反應發(fā)生在適合的溶劑中，例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、1，4-二噁烷、乙腈、甲苯或N，N-二甲基甲酰胺，反應溫度從-10℃至室溫。作為替代選擇，式(XIV)化合物可以這樣制備，在適合的溶劑中，例如甲苯、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯，在約0℃至室溫的溫度下，將式(XIII)化合物用亞硫酰氯或草酰氯轉(zhuǎn)化為對應的酰氯衍生物，隨后在適合的堿的存在下，例如三乙胺、甲基嗎啉、N，N-二異丙基乙胺或吡啶，在適合的溶劑中，例如乙酸乙酯、二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺，在0℃至室溫的溫度下，使它們與5-異丙基-2-氨基-1，3-噻唑反應。
其中R是如上所述的式(XIII)化合物可以這樣制備，在適合的溶劑中，例如水/1，4-二噁烷混合物，在堿的存在下，例如碳酸鈉，在室溫下，使式(VI)化合物與叔丁氧羰基酸酐反應約4至約12小時。
其中R’是離去基團的式(III)化合物適宜按照已知方法制備，從其中R’是羥基的對應的式(III)羧酸衍生物開始。
作為實例，其中R’是鹵原子、例如氯的化合物是這樣制備的，按照制備酰鹵的常規(guī)方法，使其中R’是羥基的式(III)衍生物與草酰氯或亞硫酰氯反應。該反應通常是這樣進行的，在催化量N，N-二甲基甲酰胺的存在下，在適合的溶劑的存在下、例如二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯或甲苯，在0℃至回流的溫度下進行。
式(IV)化合物也可以通過如上所報道的酰胺化反應加以制備，使2-氨基-5-異丙基-1，3-噻唑與式(VIII)化合物反應。
輪到式(VIII)和(V)化合物，如果本身不是商業(yè)上可得到的，那么也是已知的或者容易按照已知方法制備。
綜上所述，對技術(shù)人員而言清楚的是，當按照任何一種上述方法變體制備式(I)化合物時，原料或其中間體內(nèi)可能引起所不希望的副反應的可選官能團需要按照常規(guī)技術(shù)加以適當保護。
同樣，后者向游離的脫保護的化合物的轉(zhuǎn)化可以按照已知工藝進行。
舉例來說，在適合的溶劑中，例如水/1，4-二噁烷混合物，在堿的存在下，例如碳酸鈉，在室溫下，通過與二碳酸二叔丁酯反應，時間從約4小時至約12小時不等，可以將氨基例行保護為(BOC)叔丁氧羰基氨基。
隨后可以借助酸水解進行任何脫保護作用，例如在鹽酸或硫酸的存在下，在乙醇中，或者在甲酸或三氟乙酸的存在下，在二氯甲烷中，在室溫下，時間從約2小時至約12小時不等。
正如將被容易領(lǐng)會的是，如果按照上述方法制備的式(I)化合物是異構(gòu)體的混合物，那么按照常規(guī)技術(shù)分離為單一的式(I)異構(gòu)體也屬于本發(fā)明的范圍。
常規(guī)外消旋物拆分技術(shù)例如包括非對映異構(gòu)鹽衍生物的分步結(jié)晶或制備型手性HPLC。
藥理學式(I)化合物作為cdk/細胞周期蛋白抑制劑是有活性的，它們可以用于治療各種腫瘤，例如癌，例如乳腺癌、肺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、卵巢與子宮內(nèi)膜腫瘤，肉瘤，例如軟組織與骨肉瘤，和血液學惡性腫瘤，例如白血病。
另外，式(I)化合物還可用于治療其他細胞增殖性障礙，例如牛皮癬、與動脈粥樣硬化有關(guān)的血管平滑肌細胞增殖、手術(shù)后狹窄與再狹窄和阿爾茨海默氏病。
公認的cdk/細胞周期蛋白抑制劑的抑制活性最初是利用基于MultiScreen-PH 96孔平板(Millipore)的方法測定的，其中將磷酸纖維素濾紙置于每孔底部，以便在洗滌/過濾步驟之后結(jié)合帶正電的底物。當放射性標記的磷酸鹽部分被絲氨酸/蘇氨酸激酶轉(zhuǎn)移至與濾紙結(jié)合的組蛋白時，在閃爍計數(shù)器中測量所發(fā)出的光，方案如下激酶反應向96孔U形底平板的每孔加入100μl緩沖液(TRIS HCl10mM pH 7.5，MgCl210mM，7.5mM DTT)，其中含有1.5μM組蛋白H1底物、25μM ATP(0.5μCi P33γ-ATP)、100ng細胞周期蛋白A/cdk2配合物、10μM抑制劑。在37℃下培育10分鐘后，利用20μl EDTA120mM終止反應。
捕獲從每孔MultiScreen平板轉(zhuǎn)移100μl，以便底物與磷酸纖維素濾紙結(jié)合。然后將平板用150μl/孔不含Ca++/Mg++的PBS洗滌3次，利用MultiScreen過濾系統(tǒng)過濾。
檢測使濾紙在37℃下干燥，然后加入100μl/孔閃爍劑，通過在Top-Count儀器中計數(shù)放射性，檢測33P標記的組蛋白H1。
結(jié)果分析數(shù)據(jù)，以總的酶活性(＝100％)的抑制％表示。
當供試化合物的數(shù)量變得一致時，對快速均勻的篩選測定法的需求也增加了。因而，建立起基于SPA技術(shù)(Amersham PharmaciaBiotech)的測定方法。該測定法中，放射性標記的磷酸鹽部分被激酶轉(zhuǎn)移至生物素基化的底物。使所得33P-標記的生物素化產(chǎn)物與涂有鏈霉抗生物素的SPA珠粒(生物素容量130pmol/mg)結(jié)合，在閃爍計數(shù)器中測量所發(fā)出的光。
cdk2/細胞周期蛋白A活性的抑制作用測定激酶反應向96孔U形底平板的每孔加入30μl緩沖液(TRIS HCl10mM pH 7.5，MgCl210mM，DTT 7.5mM+0.2mg/ml BSA)，其中含有4μM生物素化組蛋白H1(Sigma # H-5505)底物、10μM ATP(0.1μCiP33γ-ATP)、4.2ng cdk2/細胞周期蛋白A配合物、抑制劑。在室溫下培育30分鐘后，利用含有1mg SPA珠粒的100μl PBS+32mM EDTA+0.1％Triton X-100+500μM ATP終止反應。然后將110μl轉(zhuǎn)移至Optiplate。
為捕獲底物而培育20分鐘后，加入100μl 5M CsCl，以便珠粒statification至平板頂部，放置4小時，然后在Top-Count儀器中計數(shù)放射性。
IC50測定在0.0015至10μM的不同濃度下測試抑制劑。利用計算機程序GraphPad Prizm分析實驗數(shù)據(jù)，其中使用四參數(shù)邏輯方程y＝底部+(頂部-底部)/(1+10^((logIC50-x)*斜率))其中x是抑制劑濃度的對數(shù)，y是響應值；y始于底部，到達頂部斜率呈S形。
關(guān)于cdk2/細胞周期蛋白A的Ki實驗方法在緩沖液(10mM Tris，pH 7.5，10mM MgCl2，0.2mg/mlBSA，7.5mM DTT)中進行反應，其中含有3.7nM酶、組蛋白和ATP(冷/標記ATP之比恒定為1/3000)。利用EDTA終止反應，底部被捕獲在磷酸膜上(Multiscree 96孔平板來自Millipore)。充分洗滌后，在Top-Count上讀取Multiscreen平板。測量關(guān)于每種ATP與組蛋白濃度的對照(時間為零)。
實驗設(shè)計在四種不同的ATP、底物(組蛋白)與抑制劑濃度下測量反應速度。設(shè)計一種80點的濃度矩陣，分布在各自ATP與底物的Km值和抑制劑的IC50值附近(Km或IC50值的0.3、1、3、9倍)。在沒有抑制劑的存在下，在不同的ATP和底物濃度下，進行初步時間過程實驗，以便在Ki測定實驗反應的線性范圍內(nèi)選擇單一的終點時間(10min)。
動力學參數(shù)估算利用[Eq.1]借助同時進行的非線性最小平方回歸法估算動力學參數(shù)(關(guān)于ATP的競爭性抑制劑，隨機機理)，其中使用完整的數(shù)據(jù)組(80點)v=Vm·A·Bα·Ka·Kb+α·Ka·B+a·Kb·A+A·B+α·KaKi·I·(Kb+Bβ)--[Eq.1]]]>其中A＝[ATP]，B＝[底物]，I＝[抑制劑]，Vm＝最大速度，Ka、Kb、Ki分別是ATP、底物和抑制劑的離解常數(shù)，α和β分別是底物與ATP結(jié)合和底物與抑制劑結(jié)合之間的協(xié)同性因子。
另外，還已經(jīng)在與細胞周期嚴格相關(guān)的絲氨酸/蘇氨酸激酶(cdk2/細胞周期蛋白E、cdk1/細胞周期蛋白B1、cdk5/p25、cdk4/細胞周期蛋白D1)水平上鑒別了所選擇的化合物。
cdk2/細胞周期蛋白E活性的抑制作用測定激酶反應向96孔U形底平板的每孔加入30μl緩沖液(TRIS HCl10mM pH 7.5，MgCl210mM，DTT 7.5mM+0.2mg/ml BSA)，其中含有10μM生物素基化組蛋白H1(Sigma # H-5505)底物、30μM ATP(0.3μCi P33γ-ATP)、4ng GST-細胞周期蛋白E/cdk2配合物、抑制劑。在室溫下培育60分鐘后，利用含有1mg SPA珠粒的100μl PBS+32mM EDTA+0.1％Triton X-100+500μM ATP終止反應。然后將110μl轉(zhuǎn)移至Optiplate。
為捕獲底物而培育20分鐘后，加入100μl 5M CsCl，以便珠粒statification至平板頂部，放置4小時，然后在Top-Count儀器中計數(shù)放射性。
IC50測定見上。
cdk1/細胞周期蛋白B1活性的抑制作用測定激酶反應向96孔U形底平板的每孔加入30μl緩沖液(TRIS HCl10mM pH 7.5，MgCl210mM，DTT 7.5mM+0.2mg/ml BSA)，其中含有4μM生物素基化組蛋白H1(Sigma # H-5505)底物、20μM ATP(0.2μCiP33γ-ATP)、3ng cdk1/細胞周期蛋白B配合物、抑制劑。在室溫下培育20分鐘后，利用含有1mg SPA珠粒的100μl PBS+32mM EDTA+0.1％Triton X-100+500μM ATP終止反應。然后將110μl轉(zhuǎn)移至Optiplate。
為捕獲底物而培育20分鐘后，加入100μl 5M CsCl，以便珠粒statification至平板頂部，放置4小時，然后在Top-Count儀器中計數(shù)放射性。
IC50測定見上。
cdk5/p25活性的抑制作用測定按照下列方案進行cdk5/p25活性的抑制作用測定。
激酶反應向96孔U形底平板的每孔加入30μl緩沖液(TRIS HCl10mM pH 7.5，MgCl210mM，DTT 7.5mM+0.2mg/ml BSA)，其中含有10μM生物素基化組蛋白H1(Sigma # H-5505)底物、30μM ATP(0.3μCi P33γ-ATP)、15ng cdk5/p25配合物、抑制劑。在室溫下培育30分鐘后，利用含有1mg SPA珠粒的100μl PBS+32mM EDTA+0.1％Triton X-100+500μM ATP終止反應。然后將110μl轉(zhuǎn)移至Optiplate。
為捕獲底物而培育20分鐘后，加入100μl 5M CsCl，以便珠粒statification至平板頂部，放置4小時，然后在Top-Count儀器中計數(shù)放射性。
IC50測定見上。
cdk4/細胞周期蛋白D1活性的抑制作用測定激酶反應向96孔U形底平板的每孔加入50μl緩沖液(TRIS HCl10mM pH 7.5，MgCl210mM，DTT 7.5mM+0.2mg/ml BSA)，其中含有0.4μM小鼠GST-Rb(769-921)(#sc-4112，Santa Cruz)底物、10μMATP(0.5μCi P33γ-ATP)、100ng被桿狀病毒表達的GST-cdk4/GST-細胞周期蛋白D1、適合濃度的抑制劑。在37℃下培育40分鐘后，利用20μl EDTA 120mM終止反應。
捕獲從每孔轉(zhuǎn)移60μl至MultiScreen平板，以便底物與磷酸纖維素濾紙結(jié)合。然后將平板用不含Ca++/Mg++的150μl/孔PBS洗滌3次，利用MultiScreen過濾系統(tǒng)過濾。
檢測將濾紙在37℃下干燥，然后加入100μl/孔閃爍劑，通過在Top-Count儀器中計數(shù)放射性，檢測33P標記的Rb片段。
IC50測定見上。
上述抑制測定法證明，本發(fā)明的式(I)化合物具有顯著的cdk抑制活性。
作為實例，當測試cdk2/細胞周期蛋白A時，本發(fā)明的代表性化合物(2S)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺顯示抑制活性，以IC50表示，為11nM。
驚人地，所述抑制活性顯著優(yōu)于供對比的非常接近的現(xiàn)有技術(shù)化合物。事實上，當如前面所報道的那樣測試cdk2/細胞周期蛋白A時，WO 01/14353的化合物N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]乙酰胺(見該文實施例4，跨越第32、33頁的段落)顯示110nM的IC50值。
在測試cdk2/細胞周期蛋白A時，本發(fā)明的另一種代表性化合物、即N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酰胺顯示近似的顯著優(yōu)異的活性。
迄今為止，新穎的本發(fā)明化合物意外地被賦予cdk抑制活性，明顯高于最接近的現(xiàn)有技術(shù)WO 01/14353的化合物，因而在療法中特別有利于對抗與改變的細胞周期依賴性激酶活性有關(guān)的增殖性障礙。
限于失調(diào)的腫瘤細胞增殖而言，式(I)化合物因此在療法中可用于治療各種腫瘤，例如癌，例如乳腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、卵巢與子宮內(nèi)膜腫瘤，肉瘤，例如軟組織與骨肉瘤，和血液學惡性腫瘤，例如白血病。
另外，式(I)化合物還可用于治療其他細胞增殖性障礙，例如牛皮癬、與動脈粥樣硬化有關(guān)的血管平滑肌細胞增殖、手術(shù)后狹窄與再狹窄和阿爾茨海默氏病。
本發(fā)明的化合物能夠作為單一的成分給藥，或者與已知的抗癌治療措施聯(lián)用，例如放射療法或化療方案，其中聯(lián)合細胞抑制劑或細胞毒劑、抗生素型藥、烷基化劑、抗代謝劑、激素藥、免疫藥、干擾素型藥、環(huán)加氧酶抑制劑(例如COX-2抑制劑)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、端粒酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑、抗生長因子受體劑、抗HER劑、抗EGFR劑、抗血管生成劑(例如血管生成抑制劑)、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、ras-raf信號轉(zhuǎn)導途徑抑制劑、細胞周期抑制劑、其它cdk抑制劑、微管蛋白結(jié)合劑、拓撲異構(gòu)酶I抑制劑、拓撲異構(gòu)酶II抑制劑等。
作為實例，本發(fā)明的化合物可以與一種或多種化療劑聯(lián)合給藥，例如依西美坦，福美坦，阿那曲唑，來曲唑，法倔唑，紫杉烷與衍生物，例如紫杉醇或多西他賽，包封的紫杉烷，CPT-11，喜樹堿衍生物，蒽環(huán)糖苷，例如阿霉素，伊達比星，表柔比星，依托泊苷，異長春堿，長春堿，卡鉑，順鉑，磷酸雌莫司汀，塞來昔布，他莫昔芬，雷洛昔芬，Sugen SU-5416，Sugen SU-6668，Herceptin等，任選為它們的脂質(zhì)體制劑。
如果配制成固定劑量，這類組合產(chǎn)物采用在下述劑量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物和在許可劑量范圍內(nèi)的其它藥物活性成分。
若組合制劑是不適合的，式(I)化合物可以與已知抗癌劑先后使用。
適合于對哺乳動物、例如人類給藥的本發(fā)明式(I)化合物可以借助通常的途徑給藥，劑量水平依賴于患者的年齡、體重、條件，和給藥途徑。
例如，適合于式(I)化合物口服給藥的劑量可以從約10至約500mg每劑，每日1至5次。本發(fā)明的化合物可以按各種劑型給藥，例如口服方式的片劑、膠囊劑、糖衣或膜衣片劑、液體溶液劑或混懸劑；直腸方式的栓劑；腸胃外方式，例如肌內(nèi)或通過靜脈內(nèi)和/或鞘內(nèi)和/或脊柱內(nèi)注射或輸注。
本發(fā)明還包括藥物組合物，包含式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的賦形劑，后者可以是載體或稀釋劑。
含有本發(fā)明化合物的藥物組合物通常是遵照常規(guī)方法制備的，按適合的藥物劑型給藥。
例如，固體口服劑型可以含有活性化合物，以及稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖(saccharose)、蔗糖(sucrose)、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣、和/或聚乙二醇；粘合劑，例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑，例如淀粉、藻酸、藻酸鹽或淀粉羥乙酸鈉；泡騰混合物；染料；甜味劑；潤濕劑，例如卵磷脂、聚山梨醇酯、月桂基硫酸鹽；和一般用在藥物制劑中的無毒與無藥理活性的物質(zhì)。這些藥物制劑可以按照已知方式制造，例如借助混合、造粒、壓片、包糖衣或包膜衣過程。
用于口服給藥的液體分散系例如可以是糖漿劑、乳劑和混懸劑。
作為實例，糖漿劑可以含有蔗糖或蔗糖與甘油和/或甘露糖醇與山梨糖醇作為載體。
作為載體的實例，混懸劑和乳劑可以含有天然樹膠、瓊脂、藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇。
用于肌內(nèi)注射的混懸劑或溶液劑可以含有活性化合物以及藥學上可接受的載體，例如無菌的水、橄欖油、油酸乙酯、二醇(例如丙二醇)，并且，如果需要的話，適量的鹽酸利多卡因。
用于靜脈內(nèi)注射或輸注的溶液劑可以含有無菌的水作為載體，或者它們可以是無菌的、含水的、等滲的鹽水溶液的形式，或者它們可以含有丙二醇作為載體。
栓劑可以含有活性化合物以及藥學上可接受的載體，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯表面活性劑或卵磷脂。
為了更好地理解本發(fā)明，但不對其造成任何限制，現(xiàn)給出下列實施例。
實施例12-氨基-5-異丙基-1，3-噻唑的制備將3-甲基丁醛(2ml，18.6mmol)溶于15ml 1，4-二噁烷。在0℃下向其中滴加2％v/v溴的1，4-二噁烷溶液(40.4ml，18.6mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時，然后加入2.83g(37.2mmol)硫脲和5ml乙醇。在室溫下6小時后，蒸發(fā)溶液至干，將殘余物溶于CH2Cl2，產(chǎn)物用1M鹽酸萃??；將含水層用30％氫氧化銨調(diào)至堿性，再次用CH2Cl2萃取。將有機相經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空下蒸發(fā)。殘余物經(jīng)過硅膠柱色譜純化，用環(huán)己烷-乙酸乙酯洗脫，得到1.1g(42％收率)標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δppm6.6(s，2H，NH2)；6.58(s，1H，噻唑CH)；2.9(m，1H，CHMe2)；1.18(s，3H，MeCHMe)；1.17(s，3H，MeCHMe).
實施例22-(4-氨基苯基)丙酸將10g(0.05mol)2-(4-硝基苯基)丙酸溶于5ml水與100ml甲醇的混合物，加入0.65g Pd/C 5％。使混合物在60psi和室溫下氫化2小時。在C鹽上過濾分離催化劑后，在真空下蒸發(fā)甲醇，經(jīng)過冷卻從水中結(jié)晶出標題化合物(7g；85％收率)。
ESI(+)MSm/z 166(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.08-6.71(2d，4H，CH-苯基，J＝7.1Hz)，3.76(q，1H，CH-Me，J＝7.6Hz)，1.53(d，3H，CH3，7.6Hz).
實施例3(2S)-2-(4-氨基苯基)丙酸和(2R)-2-(4-氨基苯基)丙酸向4.34g 2-(4-氨基苯基)丙酸加入26ml水和3.94g L-(+)-酒石酸。將混合物在80℃下加熱、攪拌，直至完全溶解。然后停止加熱，使溶液自然冷卻。24小時后，過濾出3.8g左旋酒石酸鹽，干燥。在40℃真空下濃縮含有右旋酒石酸鹽的溶液，以蒸發(fā)約10ml水。然后在30℃下冷卻溶液，加入1.047g氫氧化鈉。過濾收集(+)-(2S)-2-(4-氨基苯基)丙酸，干燥，得到1.36g(αD20＝+73.0；C＝0.1％，甲醇)。將左旋酒石酸鹽用氫氧化鈉處理，得到(-)-(2R)-2-(4-氨基苯基)丙酸。
實施例4[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酸將8.8g(0.058mol)4-氨基苯乙酸溶于350ml N，N-二甲基甲酰胺，加入10g(0.058mol)6，6-二甲基-5，7-二氧雜螺(2，5)辛烷-4，8-二酮，將混合物在回流下攪拌8小時。然后在真空下蒸發(fā)溶劑，粗產(chǎn)物經(jīng)過硅膠柱色譜純化，使用己烷-乙酸乙酯7/3混合物作為洗脫劑，從而得到6.53g(51％收率)標題化合物。
ESI(+)MSm/z 220(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.19-7.68(2d，4H，CH-苯基，J＝8.7Hz)，3.43(s，2H，CH2Ph)，3.85(m，2H，CH2N)，2.57(m，2H，CH2CO)，2.10(m，2H，CH2).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)聂人嵫苌镩_始2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酸；ESI(+)MSm/z 234(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.17-7.66(2d，4H，CH-苯基，J＝8.6Hz)，3.76(q，1H，CHMe，J＝7.6Hz)，1.53(d，3H，CH3，J＝7.6Hz)，3.84(m，2H，CH2N)，2.61(m，2H，CH2CO)，2.15(m，2H，CH2).
(2R)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酸；(2S)-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酸。
實施例5N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酰胺將2.5g(11.4mmol)[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酸溶于150ml二氯甲烷，在0℃下連續(xù)加入1.54g(11.4mmol)N-羥基苯并三唑和2.18g(11.4mmol)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺。在相同溫度下30分鐘后，滴加1.35g(5.7mmol)5-異丙基-2-氨基-1，3-噻唑的40ml二氯甲烷溶液。在室溫下6小時后，將混合物用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。分離有機層，經(jīng)硫酸鈉干燥，在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過硅膠柱色譜純化(己烷-乙酸乙酯7/3)，得到1.17g(60％收率)標題化合物。
ESI(+)MSm/z 344(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.48-7.51(m，4H，CH-苯基)，3.68(s，2H，CH2Ph)，7.51(s，1H，CH-噻唑)，3.91(m，1H，CH-異丙基)，1.39(d，6H，CH3，J＝7.1Hz)3.83(m，2H，CH2N)，2.60(m，2H，CH2CO)，2.15(m，2H，CH2).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)聂人嵫苌镩_始N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酰胺；N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺。
實施例6
(2S)-2-{4-[(叔丁氧羰基)氨基]苯基}丙酸將12g(73mmol)(2S)-2-(4-氨基苯基)丙酸懸浮在140ml 1，4-二噁烷與140ml水中，用7.6g(73mmol)碳酸鈉的70ml水溶液處理。將所得溶液冷卻至4℃，用17.2g(79mmol)叔丁氧基羰基酸酐(tertbutoxycarbonylanhydride)處理，攪拌過夜，使溫度達到室溫。蒸發(fā)溶劑，將含水相用150ml乙酸乙酯洗滌，用200ml相同的溶劑稀釋，在攪拌的同時用130ml 1M含水硫酸氫鉀處理。分離有機層，含水相用更多的乙酸乙酯萃取。合并有機萃取液，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，用己烷研制，過濾，得到18.18g(94％收率)標題化合物。
ESI(+)MSm/z 266(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.47-7.52(m，4H，CH-苯基)，3.76(q，1H，CHMe，J＝7.6Hz)，1.53(d，3H，CH3，J＝7.6)，1.51(s，9H，叔丁基).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)聂人嵫苌镩_始(2R)-2-{4-[(叔丁氧羰基)氨基]苯基}丙酸；2-{4-[(叔丁氧羰基)氨基]苯基}丙酸；4-[(叔丁氧羰基)氨基]苯基乙酸；ESI(+)MSm/z 252(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.45-7.51(2d，4H，CH-苯基，J＝8.8Hz)，3.43(s，2H，CH2Ph)，1.51(s，9H，叔丁基).
實施例7(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺在4℃下，將265mg(1mmol)(2S)-2-{4-[(叔丁氧羰基)氨基]苯基}丙酸用0.146ml(2mmol)亞硫酰氯處理。將反應混合物攪拌2.5小時，使反應溫度逐漸升至室溫。將混合物蒸發(fā)至干，溶于四氫呋喃，徹底蒸發(fā)。該粗產(chǎn)物無需進一步純化即可用于下面的步驟。將其溶于3ml無水四氫呋喃，在室溫下滴加到113mg(0.8mmol)5-異丙基-2-氨基-1，3-噻唑與0.14ml(1mmol)三乙胺的5ml四氫呋喃溶液中。3小時后，蒸發(fā)溶劑，將粗產(chǎn)物重新溶于5ml二氯甲烷，加入1ml三氟乙酸。將混合物在室溫下攪拌4小時。蒸發(fā)溶劑，得到油，用飽和碳酸氫鈉溶液處理，用二氯甲烷萃取若干次。合并有機萃取液，經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，得到115mg(50％總收率)標題化合物。
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)聂人嵫苌镩_始(2R)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺。
實施例82-(4-{[(2-氯乙氧基)羰基]氨基}苯基)丙酸將1g(6mmol)2-(4-氨基苯基)丙酸溶于30ml二氯甲烷。將混合物冷卻至0℃，加入1.24ml(12mmol)氯代甲酸2-氯乙基酯。30分鐘后，分批加入2.27g(12mmol)磷酸鈉十二水合物，將反應混合物保持攪拌3小時。然后加入0.5N鹽酸，直至pH為酸性，用二氯甲烷萃取產(chǎn)物。將有機層經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，得到油，從二異丙醚中結(jié)晶后，得到1.3g(93％收率)標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.47-7.58(2d，4H，CH-苯基，J＝9.0Hz)，3.75(q，1H，CH-Me，J＝7.6Hz)，4.31(m，2H，CH2Cl)，3.62(m，2H，CH2O)，1.53(d，3H，CH3，7.6Hz).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)聂人嵫苌镩_始(2R)-2-(4-{[(2-氯乙氧基)羰基]氨基}苯基)丙酸；(2S)-2-(4-{[(2-氯乙氧基)羰基]氨基}苯基)丙酸；(4-{[(2-氯乙氧基)羰基]氨基}苯基)乙酸；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.44-7.60(2d，4H，CH-苯基，J＝8.8Hz)，3.43(s，2H，CH2Ph)，4.30(m，2H，CH2Cl)，3.63(m，2H，CH2O).
實施例9
2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酸將500mg(1.85mmol)2-(4-{[(2-氯乙氧基)羰基]氨基}苯基)丙酸溶于10ml N，N-二甲基甲酰胺，在室溫下加入0.55ml(3.7mmol)1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯。攪拌2小時后，將混合物倒入150ml水中，用1N鹽酸酸化，用乙酸乙酯徹底萃取。將有機萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)至干，得到350mg(80％收率)標題化合物，從乙酸乙酯-二異丙醚混合物中結(jié)晶。
ESI(+)MSm/z 236(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.08-7.35(2d，4H，CH-苯基，J＝8.6Hz)，3.76(q，1H，CH-Me，J＝7.6Hz)，3.80(m，2H，CH2N)，4.45(m，2H，CH2O)，1.53(d，3H，CH3，7.6Hz).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)穆却苌镩_始(2R)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酸；(2S)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酸；[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]乙酸；ESI(+)MSm/z 222(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.10-7.38(2d，4H，CH-苯基，J＝8.7Hz)，3.43(s，2H，CH2Ph)，3.79(m，2H，CH2N)，4.45(m，2H，CH2O).
實施例10N-(4-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺將460mg(1.96mmol)2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酸懸浮在15ml二氯甲烷中，在0℃下加入0.22ml(2.5mmol)草酰氯和一滴N，N-二甲基甲酰胺。攪拌2小時后，蒸發(fā)溶劑，將粗產(chǎn)物重新溶于15ml四氫呋喃，在0℃下滴加到250mg(1.764mmol)5-異丙基-2-氨基-1，3-噻唑與2.2ml(11.76mmol)N，N-二異丙基乙胺在11ml相同溶劑中的溶液中。使反應溫度逐漸升至室溫，5小時后，在真空下蒸發(fā)溶劑，將粗產(chǎn)物重新溶于二氯甲烷，用水洗滌。有機層最后經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，殘余物經(jīng)過硅膠柱色譜純化，得到450mg(71％總收率)標題化合物。
ESI(+)MSm/z 360(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm6.88(s，4H，CH-苯基)，3.85(q，1H，CHMe，J＝6.8Hz)，1.25(d，3H，CH3，J＝6.8Hz)，7.55(s，1H，CH-噻唑)，3.90(m，1H，CH異丙基)，1.38(d，6H，CH3-異丙基，J＝7.0Hz)，3.80(m，2H，CH2N)，4.40(m，2H，CH2O).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)聂人嵫苌镩_始N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]乙酰胺；ESI(+)MSm/z 346(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.58(m，4H，CH-苯基)，3.66(s，2H，CH2)，7.51(s，1H，CH-噻唑)，3.91(m，1H，CH-異丙基)，1.39(d，6H，CH3-異丙基，J＝7.1Hz)，3.79(m，2H，CH2N)，4.45(m，2H，CH2O).
(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺；(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺；N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酰胺；N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺。
實施例11
2-(4-氨基苯基)丙酸甲酯將10g(0.06mol)4-氨基苯基丙酸懸浮在100ml甲醇中。將反應混合物冷卻至0℃，滴加10ml 96％硫酸。將所得溶液保持在室溫下過夜，然后倒入冰水中，用30％氫氧化銨堿化，用二氯甲烷萃取若干次。有機相經(jīng)硫酸鈉干燥，得到10g(93％收率)標題化合物，為一種油。
ESI(+)MSm/z 180(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm6.50-6.94(2d，4H，CH-苯基，J＝8.6Hz)，3.70(q，1H，CHMe，J＝7.2Hz)，1.48(d，3H，CH3，J＝7.2Hz)，3.50(s，3H，CH3O).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)聂人嵫苌镩_始(2R)-2-(4-氨基苯基)丙酸甲酯；(2S)-2-(4-氨基苯基)丙酸甲酯；2-(4-氨基苯基)乙酸甲酯；ESI(+)MSm/z 166(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm6.49-7.00(2d，4H，CH-苯基，J＝8.0Hz)，3.55(s，2H，CH2Ph)，3.48(s，3H，CH3O).
實施例122-[4-({[(2-氯乙基)氨基]羰基}氨基)苯基]丙酸甲酯將700mg(3.9mmol)2-(4-氨基苯基)丙酸甲酯溶于10ml二氯甲烷，在室溫下加入0.4ml(4.68mmol)異氰酸2-氯乙基酯。2小時后，過濾收集所生成的沉淀，在真空下essicate，得到1g(90％收率)標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.28-7.53(2d，4H，CH-苯基，J＝9.0Hz)，3.69(q，1H，CHMe，J＝7.1Hz)，1.44(d，3H，CH3，J＝7.1Hz)，3.48(s，3H，CH3O)，3.50(m，2H，CH2Cl)，3.31(m，2H，CH2N).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)陌被苌镩_始(2R)-2-[4-({[(2-氯乙基)氨基]羰基}氨基)苯基]丙酸甲酯；(2S)-2-[4-({[(2-氯乙基)氨基]羰基}氨基)苯基]丙酸甲酯；
2-[4-({[(2-氯乙基)氨基]羰基}氨基)苯基]乙酸甲酯。
實施例132-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸甲酯將950mg(3.3mmol)2-[4-({[(2-氯乙基)氨基]羰基}氨基)苯基]丙酸甲酯溶于20ml N，N-二甲基甲酰胺，加入2ml 1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯。將反應混合物保持在室溫下達6小時。加入500ml 1/1己烷/乙酸乙酯混合物，將有機相用1N鹽酸、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)至干，得到760mg(92％收率)標題化合物。
ESI(+)MSm/z 249(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.19-6.82(2d，4H，CH-苯基，J＝8.6Hz)，3.69(q，1H，CHMe，J＝7.2Hz)，1.48(d，3H，CH3，J＝7.2Hz)，3.50(s，3H，CH3O)，3.85(m，2H，CH2N)，3.48(m，2H，CH2NH).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)穆却苌镩_始(2R)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸甲酯；(2S)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸甲酯；2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酸甲酯。
實施例142-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸將850mg(3.42mmol)2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸甲酯溶于30ml甲醇，加入10ml飽和碳酸鈉溶液。在室溫下過夜后，蒸發(fā)甲醇，將含水相用乙酸乙酯萃取，用1N鹽酸酸化，用二氯甲烷再次萃取。將有機層經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，得到400mg(50％收率％)標題化合物。
ESI(+)MSm/z 235(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.03-7.33(2d，4H，CH-苯基，J＝8.6Hz)，3.76(q，1H，CHMe，J＝7.6Hz)，1.53(d，3H，CH3，J＝7.6Hz)，3.84(m，2H，CH2N)，3.48(m，2H，CH2NH).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)孽パ苌镩_始(2R)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸；(2S)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸；2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酸；(2R)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸；(2S)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸；2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸；ESI(+)MSm/z 249(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm7.14-7.35(2d，4H，CH-苯基，J＝8.5Hz)，3.76(q，1H，CHMe，J＝7.6Hz)，1.52(d，3H，CH3，J＝7.6Hz)，3.20(m，2H，CH2NMe)，3.70(m，2H，CH2NPh)，2.75(s，3H，CH3N)；2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酸。
實施例152-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸甲酯在氬氣氛下，將248mg(1mmol)2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸甲酯的N，N-二甲基甲酰胺溶液用120mg(3mmol)氫化鈉60％處理。20分鐘后，加入0.068ml(1.1mmol)甲基碘。2小時后，將反應物倒入冰水中，用10ml己烷-乙酸乙酯1/1稀釋，用2N鹽酸洗滌兩次。將有機相經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，經(jīng)過色譜純化(己烷-乙酸乙酯6/4)，得到105mg(40％收率)標題化合物。
ESI(+)MSm/z 263(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)ppm6.93-7.19(2d，4H，CH-苯基，J＝8.4Hz)，3.69(q，1H，CHMe，J＝7.2Hz)，1.48(d，3H，CH3，J＝7.2Hz)，3.35(m，2H，CH2NMe)，3.70(m，2H，CH2NPh)，2.74(s，3H，CH3N)，3.44(s，3H，CH3O).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從適當?shù)孽パ苌镩_始(2R)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸甲酯；
(2S)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酸甲酯；2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酸甲酯。
實施例16(2S)-2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺將158mg(1mmol)[(4S)-2，2-二甲基-5-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基]乙醛和290mg(1mmol)(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺溶于10ml三氟乙醇，用氰基硼氫化(聚苯乙烯基甲基)三甲銨(Novabiochem，負載率3.0-4.5mmol/g)處理，在室溫下攪拌過夜。在這些條件下，從還原性胺化作用衍生的仲胺自發(fā)地生成γ-內(nèi)酰胺。濾出樹脂，用甲醇洗滌。蒸發(fā)濾液，粗產(chǎn)物經(jīng)過閃式色譜純化，得到269mg(72％收率)標題化合物。
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物和適合的(2，2-二甲基-5-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)乙醛開始2-[4-(3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；2-[4-(3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；(2R)-2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；(2S)-2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；(2R)-2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；(2S)-2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺。
實施例174-[(1S)-2-氯-1-甲基-2-氧代乙基]苯基氨基甲酸叔丁酯將(2S)-2-{4-[(叔丁氧羰基)氨基]苯基}丙酸(4.2g，15.85mmol)溶于無水四氫呋喃(48ml)，加入一滴N，N-二甲基甲酰胺，在+4℃氬氣氛下滴加凈草酰氯(1.49ml，17.43mmol)。將反應混合物攪拌2小時，使反應溫度逐漸升至室溫。蒸發(fā)混合物至干；將灰白色固體溶于環(huán)己烷，過濾，用環(huán)己烷徹底洗滌，在真空下干燥。得到酰氯，收率84％，無需進一步純化即可用于下面的步驟。
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的酸衍生物開始4-[(1R)-2-氯-1-甲基-2-氧代乙基]苯基氨基甲酸叔丁酯；4-(2-氯-1-甲基-2-氧代乙基)苯基氨基甲酸叔丁酯；4-(2-氯-2-氧代乙基)苯基氨基甲酸叔丁酯。
實施例184-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基氨基甲酸叔丁酯向2-氨基-5-異丙基-1，3-噻唑(1.63g，11.48mmol)的無水四氫呋喃(50ml)溶液加入二乙氨基甲基-聚苯乙烯(Fluka，負載率3.2mmol/g，3.98g)。輕輕地攪拌反應混合物，在+4℃氬氣氛下用4-[(1S)-2-氯-1-甲基-2-氧代乙基]苯基氨基甲酸叔丁酯(3.61g，12.756mmol)的四氫呋喃(40ml)溶液滴加處理。在+4℃下1小時繼之以在室溫下2小時后，加入三(2-氨基乙基)胺聚苯乙烯(Novabiochem，負載率3.2mmol/g，2.3g)，以螯合所有未反應的酰氯及其對應的酸。攪拌1小時后，過濾樹脂，用二氯甲烷和甲醇洗滌若干次。蒸發(fā)揮發(fā)物，留下淺黃色無定形固體，無需進一步純化即可用于下一步。
ESI(+)MSm/z 390(100，MH+)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm11.98(s，1H)，9.24(s，1H)，7.35(d，2H，J＝8.7Hz)，7.2(d，2H，J＝8.7Hz)，7.10(s，1H)，3.85(q，1H，J＝7.0Hz)，3.1(m，1H，J＝6.8Hz)，1.44(s，9H)，1.36，(d，3H，J＝7.0Hz)，1.22(d，6H，J＝6.8Hz).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的酰氯衍生物開始4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基氨基甲酸叔丁酯；4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基氨基甲酸叔丁酯；4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基氨基甲酸叔丁酯；m.p.179-180℃；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm12.1(s，1H)，9.22(s，1H)，7.35(d，2H)，7.19(s，1H)，7.15(d，2H)，3.6(s，2H)，1.43(s，9H)，1.11(d，6H).
實施例19(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺將粗品4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基氨基甲酸叔丁酯用二氯甲烷與三氟乙酸的8∶2混合物(130ml)處理，同時在室溫下攪拌。2.5小時后，蒸發(fā)揮發(fā)物，將粗產(chǎn)物溶于少量甲醇(～15ml)，滴加到飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)中，同時攪拌。有白色固體沉淀出來，過濾，用水洗滌若干次。在40℃真空下干燥后，得到2.96g灰白色結(jié)晶性固體(TLC二氯甲烷/甲醇95∶5)，收率89％(兩步)。
ESI(+)MSm/z 290(100，MH+)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.86(s，1H)，7.10(s，1H)，6.97(d，2H，J＝2.0Hz)，6.47(d，2H，J＝2.0Hz)，4.92(s，2H)，3.85(q，1H，J＝7.0Hz)，3.1(m，1H，J＝6.8Hz)，1.31(d，3H，7.0Hz)，1.22(d，6H，J＝6.8Hz)；C15H19N3OS的元素分析理論值C，62.25；H，6.62；N，14.52；S，11.08.實測值C，57.93；H，6.16；N，13.07；S，9.53.
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基甲酸叔丁酯開始(2R)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；m.p.165-166℃；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm11.98(s，1H)，7.13(s，1H)，7-6.6(m，4H)，5.9(s，2H)，3.55(s，2H)，3.08(m，1H)，1.12(d，6H).
實施例20(2S)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺將(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺(1.6g，5.54mmol)溶于吡啶(18ml)，在+4℃氬氣氛下用凈乙酸酐(627μl，6.648mmol)逐滴處理。1.5小時后，使溫度升至室溫，另外1.5小時后，將反應混合物緩慢加入到300ml冰水中，同時攪拌。有粘性固體沉淀出來。含水相用二氯甲烷萃取(300ml，100ml×2)，然后將有機相先用2N HCl(200ml)洗滌，再用飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)洗滌，最后用少量鹽水洗至中性，經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)揮發(fā)物，得到1.62g粗產(chǎn)物。進一步經(jīng)過柱色譜純化(二氯甲烷/甲醇95∶5)，得到1.58g純化合物，為灰白色無定形固體(86％收率)。
ESI(+)MSm/z 332(100，MH+)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.00(s，1H)，9.95(s，1H)，7.48(d，2H，J＝8.2Hz)，7.24(d，2H，J＝8.2Hz)，7.10(s，1H)，3.87(q，1H，7.1Hz)，3.05(m，1H，J＝6.8Hz)，1.99(s，3H)，1.37(d，3H，J＝7.1Hz)，1.21(d，6H，J＝6.8Hz)；
C17H21N3O2S的元素分析理論值C，61.61；H，6.39；N，12.68；S，9.67.實測值C，61.11；H，6.45；N，12.48；S，9.31；對映體過量99.5％(手性HPLC).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物開始(2R)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺。
實施例21(2S)-2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺將(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺(289mg，1mmol)溶于乙腈，在室溫下用三氟乙酸(153μl，2mmol)和氰酸鉀(162mg，2mmol)處理，攪拌直至均勻，放置過夜。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯。將有機相先用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，再用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。所得黃色的油經(jīng)過柱色譜純化(二氯甲烷/甲醇96∶4)，得到205mg標題化合物，為白色固體(收率62％)。
ESI(+)MSm/z 333(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.95(s，1H)，8.6(s，1H)，7.30(d，2H，J＝8.7Hz)，7.17(d，2H，J＝8.7Hz)，7.10(s，1H)，5.75(s，2H)，3.83(q，1H，J＝6.9Hz)，3.07(m，1H，J＝6.8Hz)，1.36(d，3H，J＝6.9Hz)，1.22(d，6H，J＝6.8Hz)；C16H20N4O2S的元素分析理論值C，57.81；H，6.06；N，16.85；S，9.65.實測值C，56.73；H，6.06；N，16.28；S，7.54.
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物開始(2R)-2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺。
實施例22({4-[(S)-1-(5-異丙基-噻唑-2-基氨基甲?；?乙基]苯基氨基甲?；鶀甲基)氨基甲酸叔丁基酯將(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺(289mg，1mmol)與Boc-gly-OH(210mg，1.2mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液用N-環(huán)己基碳化二亞胺-N’-甲基聚苯乙烯(Novabiochem，負載率1.93mmol/g，1.04g)處理。將混合物輕輕攪拌1小時，然后在+4℃下放置過夜。過濾樹脂，用二氯甲烷徹底洗滌。蒸發(fā)溶劑，留下黃色的油(HPLC純度93％，在254nm下測量)，無需進一步純化即可進行下一步轉(zhuǎn)化。
ESI(+)MSm/z 447(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)12.00(s，1H)，9.95(s，1H)，7.49(d，2H，8.5Hz)，7.26(d，2H，J＝8.5)，7.11(s，1H)，6.96(t，1H，J＝6.1Hz)，3.7(q，1H，J＝7.1Hz)，3.26(d，2H，J＝6.1Hz)，3.06(m，1H，J＝6.8Hz)，1.35(s，9H)，1.37(d，3H，J＝7.1Hz)，δ1.21(d，6H，J＝6.8Hz).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物開始({4-[(R)-1-(5-異丙基-噻唑-2-基氨基甲?；?乙基]苯基氨基甲?；鶀甲基)氨基甲酸叔丁基酯；({4-[1-(5-異丙基-噻唑-2-基氨基甲?；?乙基]苯基氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸叔丁基酯；({4-[(5-異丙基-噻唑-2-基氨基甲?；?甲基]苯基氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸叔丁基酯。
實施例23(2S)-2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺在室溫下，將({4-[(S)-1-(5-異丙基-噻唑-2-基氨基甲?；?乙基]苯基氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸叔丁基酯用二氯甲烷與三氟乙酸的9∶1混合物(10ml)處理，攪拌1.5小時，然后蒸發(fā)。將剩余的油溶于少量絕對乙醇(～5ml)，滴加到飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)中，同時攪拌。將含水相用二氯甲烷萃取，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色譜純化(二氯甲烷/甲醇9∶1+1％TEA)，得到217mg純化合物(總收率63％)。
ESI(+)MSm/z 347(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.54(d，2H，J＝8.7Hz)，7.26(d，2H，J＝8.7Hz)，7.11(s，1H)，1.21(d，6H，J＝6.8Hz)，3.88(q，1H，J＝7.1Hz)，3.05(m，1H，J＝6.8Hz)，1.37(d，3H，J＝7.1Hz)；C17H22N4O2S的元素分析理論值C，58.94；H，6.40；N，16.17；S，9.25.實測值C，56.88；H，6.56；N，15.07；S，7.69.
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基甲酸叔丁基酯開始(2R)-2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)甘氨酰胺。
實施例24N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺在+4℃惰性氣氛下，將鹽酸煙酰氯(762mg，4.15mmol)的吡啶(30ml)溶液用(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺(800mg，2.77mmol)的吡啶(19ml)溶液處理，同時攪拌。2小時后，使反應物達到室溫，放置過夜。第二天，加入更多的鹽酸煙酰氯(254mg)使反應進行完全。將反應混合物滴加到碎冰與水(600ml)中，同時攪拌，但是所生成的沉淀是相當有粘性的。含水相用乙酸乙酯萃取(300ml，100ml×2)。合并有機萃取液，經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)揮發(fā)物，留下1.56g黃色的油。進一步經(jīng)過色譜純化(二氯甲烷/甲醇95∶5)，得到967mg標題化合物(收率89％)。
ESI(+)MSm/z 395(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.05(s，1H)，10.40(s，1H)，9.04-9.09(m，1H)，8.70-8.76(m，1H)，8.22-8.28(m，1H)，7.69(d，2H，J＝8.5Hz)，7.50-7.57(m，1H)，7.33(d，2H，J＝8.5Hz)，7.12(s，1H)，3.92(q，1H，J＝7.1Hz)，3.07(m，1H，J＝6.8Hz)，1.40(d，3H，J＝7.1Hz)，1.22(d，6H，J＝6.8Hz)；C21H22N4O2S的元素分析理論值C，63.94；H，5.62；N，14.20；S，8.13.實測值C，63.49；H，5.65；N，14.10；S，8.10.
對映體過量99.5％(手性HPLC).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物開始N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺；N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺。
實施例25N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺將(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺(289mg，1mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，先用吡啶甲酸(148mg，1.2mmol)在少量DMF中的溶液處理，再用N-環(huán)己基碳化二亞胺-N’-甲基聚苯乙烯(Novabiochem，負載率1.93mmol/g，1.04g)處理，在軌道搖動器上攪拌過周末。由于起始的氨基衍生物仍然存在，分批加入更多的吡啶甲酸(148mg×3)以及更多的N-環(huán)己基碳化二亞胺-N’-甲基聚苯乙烯(1g)。第二天，蒸發(fā)溶劑，粗產(chǎn)物經(jīng)過色譜純化(二氯甲烷/乙酸乙酯8∶2)，得到231mg純化合物，為灰白色無定形固體(收率59％)。
ESI(+)MSm/z 395(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(s，1H)，10.57(s，1H)，8.70(m，1H)，8.12(m，1H)，8.04(m，1H)，7.80(d，2H，J＝8.5Hz)，7.66(m，1H)，7.33(d，2H，J＝8.5Hz)，7.11(s，1H)，3.91(q，1H，J＝7.1Hz)，3.07(m，1H，J＝6.8Hz)，1.41(d，3H，J＝7.1Hz)，1.22(d，6H，J＝6.8Hz)；
C21H22N4O2S的元素分析理論值C，63.94；H，5.62；N，14.20；S，8.13.實測值C，61.91；H，5.71；N，13.92；S，7.31.
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物開始N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；N-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺。
實施例26N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺將(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺(289mg，1mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，先用異煙酸(148mg，1.2mmol)在少量DMF中的溶液處理，再用N-環(huán)己基碳化二亞胺-N’-甲基聚苯乙烯(Novabiochem，負載率1.93mmol/g，1.04g)處理，在軌道搖動器上攪拌過周末。由于起始的氨基衍生物(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺仍然存在，分批加入更多的異煙酸(148mg×3)以及更多的N-環(huán)己基碳化二亞胺-N’-甲基聚苯乙烯(1g，0.5g)。兩天后，蒸發(fā)溶劑，粗產(chǎn)物經(jīng)過色譜純化(二氯甲烷/乙酸乙酯9∶1)，得到231mg純化合物，為灰白色無定形固體(收率59％)。
ESI(+)MSm/z 395(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(s，1H)，10.45(s，1H)，8.75(d，2H，J＝6.1Hz)，7.83(d，2H，J＝6.1Hz)，7.68(d，2H，J＝8.5Hz)，7.35(d，2H，J＝8.5)，7.12(s，1H)，3.91(q，1H，J＝7.1Hz)，3.07(m，1H，J＝6.8Hz)，1.41(d，3H，J＝7.1Hz)，1.23(d，6H，J＝6.8Hz)；C21H22N4O2S的元素分析理論值C，63.94；H，5.62；N，14.20；S，8.13.實測值C，62.74；H，5.75；N，13.94；S，8.13.
對映體過量99.5％(手性HPLC).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物開始N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺；N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺；N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺。
實施例272-[(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)氨基]-2-氧代乙基乙酸酯將(2S)-2-(4-氨基苯基)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺(3.6g，12.46mmol)溶于二氯甲烷(60ml)，先用N，N-二異丙基乙胺(2.6ml，14.95mmol)處理，再在+4℃氬氣氛下用乙酰氧基乙酰氯(1.61ml，14.95mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液處理。1小時后，將反應物用二氯甲烷稀釋，用1N HCl洗滌，再用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，最后用少量鹽水洗至中性。經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)揮發(fā)物，以定量收率和純的形式得到所需化合物，為黃色無定形固體。
ESI(+)MSm/z 390(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.01(s，1H)，7.49(d，2H，J＝8.8Hz)，7.28(d，2H，J＝8.8Hz)，7.11(s，1H)，4.60(s，2H)，3.88(q，1H，J＝6.9Hz)，3.06(m，1H，J＝6.8Hz)，2.09(s，3H)，1.38(d，3H，J＝6.9Hz)，1.22(d，6H，J＝6.8Hz).
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物開始2-[(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)氨基]-2-氧代乙基乙酸酯；2-[(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)氨基]-2-氧代乙基乙酸酯；2-[(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)氨基]-2-氧代乙基乙酸酯。
實施例28(2S)-2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺在室溫下，將2-[(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-氧代乙基}苯基)氨基]-2-氧代乙基乙酸酯(5g，12.85mmol)的四氫呋喃(80ml)溶液用氫氧化鋰一水合物(1.08g，25.27mmol)的水(80ml)溶液處理。1小時后，部分地蒸發(fā)反應物，將含水相用1M含水硫酸氫鉀中和，用乙酸乙酯萃取。將有機相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗產(chǎn)物經(jīng)過閃式色譜純化(二氯甲烷/丙酮9∶1)，得到3.82g標題化合物，為白色固體(收率86％)。
ESI(+)MSm/z 348(100，MH+)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.01(s，1H)，9.58(s，1H)，7.60(d，2H，J＝8.5Hz)，7.25(d，2H，J＝8.5Hz)，7.11(d，1H，J＝1.0Hz)，5.59(t，1H，J＝5.9Hz)，3.93(d，2H，J＝5.9Hz)，3.88(q，1H，J＝7.1Hz)，3.05(m，1H，J＝6.9Hz，J＝10Hz)，1.38(d，3H，J＝7.1Hz)，1.21(d，6H，J＝6.9Hz)；對映體過量99.5％(手性HPLC)；[α]D+207°(C＝1，CH3OH)；C17H21N3O3S的元素分析理論值C，58.77；H，6.09；N，12.09；S，9.23.實測值C，58.58；H，6.25；N，11.65；S，9.12.
按照類似的方式操作，可以制備下列化合物，從對應的氨基衍生物開始(2R)-2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺。
權(quán)利要求
1.治療與改變的細胞周期依賴性激酶活性有關(guān)的細胞增殖性障礙的方法，該方法對需要的哺乳動物給以有效量的由通式(I)代表的苯乙酰氨基噻唑衍生物 其中R是氫原子或者直鏈或支鏈C1-C4烷基；R1是式(IIa-e)基團 其中R2是氫或者直鏈或支鏈C1-C6烷基，環(huán)(IIc)上的羥基位于任意一個空位上；R3選自由氨基、氨甲基(-CH2-NH2)、羥甲基(-CH2OH)、直鏈或支鏈C1-C4烷基組成的組，或者它是具有1或2個選自氮、氧和硫的雜原子的5或6元雜環(huán)；其條件是若R是氫，則R3不是甲基或吡啶-3-基；或其藥學上可接受的鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中細胞增殖性障礙選自由癌癥、阿爾茨海默氏病、病毒感染、自身免疫疾病和神經(jīng)變性障礙組成的組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中癌癥選自由癌、鱗狀細胞癌、骨髓或淋巴系的造血系統(tǒng)腫瘤、間充質(zhì)來源的腫瘤、中樞與外周神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤、黑瘤、精原細胞瘤、畸胎樣癌、骨肉瘤、著色性干皮病、角化棘皮瘤、甲狀腺濾泡癌和卡波濟氏肉瘤組成的組。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中細胞增殖性障礙選自由良生前列腺增生、家族性腺瘤病息肉病、神經(jīng)纖維瘤病、牛皮癬、與動脈粥樣硬化有關(guān)的血管平滑肌細胞增殖、肺纖維變性、關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎和手術(shù)后狹窄與再狹窄組成的組。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其提供對腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移的抑制作用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其提供對放療誘發(fā)的或化療誘發(fā)的脫發(fā)的治療或預防。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，進一步包含對需要的哺乳動物聯(lián)合使用放射療法或化療方案及至少一種細胞抑制劑或細胞毒劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中該需要的哺乳動物是人。
9.抑制細胞周期蛋白依賴性激酶活性的方法，該方法包含使所述激酶與有效量的如權(quán)利要求1所定義的化合物接觸。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，該方法包含有效量式(I)化合物的給藥，其中式(I)化合物選自由N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酰胺、(2S)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺、N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺和N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺組成的組。
11.由通式(I)代表的苯乙酰氨基噻唑衍生物 其中R是氫原子或者直鏈或支鏈C1-C4烷基；R1是式(IIa-e)基團 其中R2是氫或者直鏈或支鏈C1-C6烷基，環(huán)(IIc)上的羥基位于任意一個空位上；R3選自由氨基、氨甲基(-CH2-NH2)、羥甲基(-CH2OH)、直鏈或支鏈C1-C4烷基組成的組，或者它是具有1或2個選自氮、氧和硫的雜原子的5或6元雜環(huán)；其條件是若R是氫，則R3不是甲基或吡啶-3-基；或其藥學上可接受的鹽。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物，其中R是甲基。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物，其中R1是式(IIa)或(IIb)基團。
14.根據(jù)權(quán)利要求11的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物，其中R1是式(IIc)基團，其羥基位于吡咯烷環(huán)的3-位。
15.根據(jù)權(quán)利要求11的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物，其中R1是式(IIe)基團，其中R3選自由甲基、吡啶-4-基或吡啶-3-基組成的組。
16.根據(jù)權(quán)利要求11的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物，其中R是氫原子。
17.根據(jù)權(quán)利要求11的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物，其中R是氫原子，R1是式(IIa)基團，該衍生物是N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酰胺。
18.根據(jù)權(quán)利要求11的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物，選自由(2S)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺、N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺和N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺組成的組。
19.根據(jù)權(quán)利要求11的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物，任選為藥學上可接受的鹽的形式，選自下組1).N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]乙酰胺；2).N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；3).(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；4).(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]丙酰胺；5).2-[4-(3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；6).2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；7).2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；8).2-[4-(3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；9).2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；10).2-{4-[(3R)-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；11).(2R)-2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；12).(2S)-2-{4-[(3S)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；13).(2R)-2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；14).(2S)-2-{4-[(3R)-3-羥基-2-氧代-1-吡咯烷基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；15).N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]乙酰胺；16).N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺；17).(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺；18).(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)苯基]丙酰胺；19).N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酰胺；20).N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；21).(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；22).(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；23).N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]乙酰胺；24).N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；25).(2R)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；26).(2S)-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)-2-[4-(3-甲基-2-氧代-1-咪唑烷基)苯基]丙酰胺；27).(2S)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；28).(2R)-2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；29).2-[4-(乙酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；30).(2S)-2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；31).(2R)-2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；32).2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；33).2-{4-[(氨基羰基)氨基]苯基}-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)乙酰胺；34).(2S)-2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；35).(2R)-2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；36).2-[4-(甘氨酰氨基)苯基]-N-(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)丙酰胺；37).N-1-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)甘氨酰胺；38).N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺；39).N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺；40).N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)煙酰胺；41).N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；42).N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；43).N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；44).N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)吡啶-2-甲酰胺；45).N-(4-{(1S)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺；46).N-(4-{(1R)-2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺；47).N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺；48).N-(4-{2-[(5-異丙基-1，3-噻唑-2-基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)異煙酰胺。
20.制備如權(quán)利要求11所定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包含使2-氨基-5-異丙基-1，3-噻唑與式(III)化合物反應， 其中R和R1是如權(quán)利要求11所定義的，R’是羥基或適合的離去基團，任選地，再轉(zhuǎn)化它們?yōu)槠渌帉W上可接受的鹽。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中R’是羥基或鹵原子。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中R’是羥基或氯原子。
23.藥物組合物，包含治療有效量的如權(quán)利要求11所定義的式(I)苯乙酰氨基噻唑衍生物和至少一種藥學上可接受的賦形劑、載體和/或稀釋劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的藥物組合物，進一步包含一種或多種化療劑。
25.產(chǎn)品或試劑盒，包含聯(lián)合制劑的形式的如權(quán)利要求11所定義的式(I)化合物或如權(quán)利要求23所定義的其藥物組合物，以及一種或多種化療劑，在抗癌療法中同時、單獨或先后使用。
26.用作藥物的如權(quán)利要求11所定義的式(I)化合物。
27.權(quán)利要求11所定義的式(I)化合物用于制備具有細胞周期依賴性激酶活性的藥物的用途。
28.權(quán)利要求11所定義的式(I)化合物用于制備具有抗腫瘤活性的藥物的用途。
全文摘要
公開了如說明書所定義的由式(I)代表的化合物，其中R是氫原子或甲基，R
文檔編號C07D277/46GK1531535SQ02814338
公開日2004年9月22日 申請日期2002年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月19日
發(fā)明者P·佩瓦雷洛, R·阿密茨, M·維拉, B·薩洛姆, A·烏爾佩蒂, M·瓦拉希, M·G·布拉斯卡, G·特拉坎迪, M·奈斯, P 佩瓦雷洛, 宓, 布拉斯卡, 艽, 迥, 駁 申請人:法瑪西雅意大利公司