專利名稱：抗炎癥和免疫調(diào)節(jié)氨基酸衍生物、它們的制備及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有關(guān)脂肪酸的某些氨基酸衍生物及它們的制備方法，以及這種化合物或其藥物制品作為例如抗炎癥或免疫調(diào)節(jié)劑，在哺乳動物(包括人類)的藥物中的用途。
脂肪酸通常包括構(gòu)成甘油酯類(例如三酰基甘油)的羧酸，羧基酯存在于植物和動物的脂肪儲存細胞中。許多這種脂肪酸是具有三到十八個碳原子(C3-C18)的直鏈化合物，由于生物合成的原因，除了C3和C5化合物之外，只有含有偶數(shù)數(shù)目碳原子的酸大量存在。脂肪酸可分為飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸，例如不飽和的C18油酸、α-亞油酸和γ-亞麻(GLA)脂肪酸，它們分別具有一個、兩個和三個碳-碳雙鍵，因此涉及這些酸時習慣上分別用符號18∶1、18∶2和18∶3脂肪酸來表示。這些雙鍵的構(gòu)型通常為順式的，這樣可以降低相應(yīng)脂肪酸的熔點(與相應(yīng)的飽和和反式化合物相比)。
除了這些短鏈和中鏈脂肪酸外，那些長鏈脂肪酸如C16-C24也是已知的并已被用于研究，尤其是那些從魚油中獲得的脂肪酸如二十碳五烯酸(EPA，20∶5(n-3))和二十二碳六烯酸(DHA，22∶6(n-3))，其中在(n-x)中，x表示脂肪酸中相應(yīng)于末端甲基的第一個碳碳雙鍵的位置。
除了它們的食物代謝作用和它們潛在的飲食用途，一些脂肪酸已經(jīng)被用于進行與醫(yī)學疾病如精神分裂癥(GLA和DHA)和兩極紊亂癥(EPA和DHA)有關(guān)的研究。一些脂肪酸也已經(jīng)被打算通過將生物活性物質(zhì)直接或間接地連接到某種脂肪酸，以提高生物活性藥物(生物活性物質(zhì))通過脂質(zhì)膜的傳輸。
一些脂肪酸已被打算用作常規(guī)的乳化劑和表面活性劑，當其經(jīng)由氨基的氮原子與氨基酸連接時。這樣的脂肪酸包括月桂酸(C12)、肉豆蔻酸(C13)、棕櫚酸(C16)、硬脂艾杜糖酸(C18)、亞油酸(C18)、花生四烯酸(C20)和山崳酸(C22)，而這樣的氨基酸包括蛋氨酸、蘇氨酸、賴氨酸、甘氨酸、丙氨酸和天冬氨酸。氨基酸的這種脂肪酸衍生物的制備方法已被如Paquet在Can J Biochem，58573-6(1980)和在Can J Chem，54733-7(1975)中進行了描述。
然而，在這些參考文獻中預期了沒有利用可能性的其它類型脂肪酸，如那些僅有一個碳碳雙鍵或長鏈如24個碳原子的脂肪酸。一種與之相異的脂肪酸是神經(jīng)酸。神經(jīng)酸(24∶1(n-9))是順式(或z)-二十四碳-15-烯酸，它沒有被列作為一種必需脂肪酸并且其僅具有一個不飽和的C＝C鍵。它參與髓磷脂的生物合成，是一種主要的腦神經(jīng)鞘脂類脂肪酸。因此神經(jīng)酸腦白質(zhì)腎上腺素萎縮癥(ALD)和多發(fā)性硬化癥(MS)等脫髓鞘疾病有關(guān)聯(lián)，因此已經(jīng)打算將神經(jīng)酸或其來源物質(zhì)作為神經(jīng)酸藥物制品施予患脫髓鞘疾病的患者(如第WO 91/07955號PCT公開說明書中描述的)，或是提供神經(jīng)酸或其一種功能性衍生物作為一種飲食補劑，如作為嬰幼兒食品，或提供給懷孕或哺乳期婦女(如第PCT/GB95/01985號PCT公開說明書中描述的)。
雖然引起MS的準確原因還不知道，但現(xiàn)在有利的證據(jù)表明MS是由一種環(huán)境因素引發(fā)的自動免疫過程導致的，很可能是在遺傳易感個體身上的非特異性的病毒感染，該個體的免疫細胞誤把髓磷脂當作為一種外來入侵病菌而對之進行攻擊。這個過程使得中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管周圍發(fā)生炎癥，從而最終不但損害了髓磷脂而且損害了基本的神經(jīng)組織?？墒?，目前對于神經(jīng)酸對炎癥或炎性疾病有何普遍效應(yīng)還不知曉。
作為髓磷脂和神經(jīng)組織損害的結(jié)果，血-腦屏障被破壞，使活化的T-細胞進入腦部并修復其它的淋巴細胞。活化的T-細胞釋放淋巴毒素、γ干擾素(IFN-γ)和其它炎性細胞因子。淋巴毒素可以損害少突細胞，而已經(jīng)被證明能引發(fā)MS惡化的IFN-γ通過各種能夠加重MS的途徑刺激免疫系統(tǒng)。少突細胞合成了髓磷脂-特異性的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，它們的作用對于正常的髓磷脂鞘的形成和正常的腦功能都是危險的。
例如，IFN增加了主組織相容性復合體(MHC)II類分子在巨噬細胞上的表達，并誘發(fā)了它們在星形細胞、格子細胞和內(nèi)皮細胞上的表達。伴隨這些MHC分子的抗原性髓磷脂肽被T-細胞識別，T-細胞響應(yīng)抗原呈遞而增生，從而增強了免疫反應(yīng)。
被IFN-γ激化的巨噬細胞也釋放腫瘤壞死因子(TNF)，該因子顯現(xiàn)出能在活體外損害少突細胞。另外，細胞因子、蛋白酶和脂肪酶被分泌出，并且B-細胞被誘導合成抗體。這些反應(yīng)導致脫髓鞘病變和神經(jīng)膠質(zhì)過多癥，它們能引起神經(jīng)沖動減緩或停止和產(chǎn)生MS癥狀。
令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，某些神經(jīng)酸的氨基酸衍生物具有抗炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)活性，而且這種衍生物中的一些輔助神經(jīng)酸穿越血腦屏障。
因此，本發(fā)明提供了一種滿足通式(I)的化合物
其中，R是氫(H)或C1-6烷基；X按以下的定義，-NH-(X)-COOH是一種氨基酸的殘基，其中該氨基酸本身在任何側(cè)氨基基團處，可以任意地被一種羧酸或其衍生物或其鹽的殘基取代。
通式(I)的定義還包括適用的、個別異構(gòu)體及其混合物。
本發(fā)明上下文中使用的“衍生物”通常指所述化合物的任一個反應(yīng)基和反應(yīng)物的一個反應(yīng)基之間發(fā)生反應(yīng)的產(chǎn)物。例如，化合物的反因基可以是一羧酸基團。反應(yīng)物的反應(yīng)基可以是乙醇或乙二醇的-OH基團(能形成酯)，或反應(yīng)物可以包括一個酰基供體如一種酸鹵化物或酐。同這種產(chǎn)物一樣，例如酯，“衍生物”包括通式(I)化合物的生物前體或前體藥物，和其溶劑化物(尤其是氫氧化物)。
術(shù)語“生物前體”或“前體藥物”指藥學上可接受的衍生物，例如一種酯(如一種具有一-COOH基的生物不穩(wěn)定的酯衍生物)，它在活體內(nèi)轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的化合物?！吧锴绑w”還包括那些神經(jīng)酸來源的分子成分(即CH3-(CH2)7-CH＝CH-(CH2)13-C＝O)被在活體內(nèi)能轉(zhuǎn)化成神經(jīng)酸的成分所取代的化合物，例如C22∶1(n-9)和C26∶1(n-9)脂肪酸。適合的前體藥物可以通過參見Goodman和Gilman的The PharmacologicalBasis of Therapeutics(第8版，McGraw-Hill，Int.Ed.1992，尤其是“藥物的生物轉(zhuǎn)化”，第13-15頁)來確定。
優(yōu)選的通式(I)化合物的鹽類是那些藥學/或藥理學上可接受的鹽類。通常地藥學上可接受的通式(I)化合物的鹽類包括適用的基礎(chǔ)鹽。適合的藥物鹽可以通過參見Berge等的文獻(J Pharm Sci，661-19，1977)來確定。
作為實施例，適合的基礎(chǔ)鹽類形成自組成無毒鹽類的有機和無機鹽基。其中的例子有鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、鋅、葡糖胺、氨基酸殘基、N-苯甲基-N-(2-苯乙基)胺、1-金剛胺鹽和二乙醇胺鹽。優(yōu)選基礎(chǔ)鹽為鈉、鉀、鋰、葡糖胺、N-苯甲基-N-(2-苯乙基)胺和1-金剛胺堿鹽。
當R是C1-6烷基時，烷基基團可以是直鏈或支鏈形式，優(yōu)選乙烷基。
可衍生出通式(I)中-NH-(X)-COOR的氨基酸可以含有一個或多個氨基基團而且必須是生理學上可以接受的，因此，簡單的二胺如1，3-二氨基烷烴是不適合的。特別適合的氨基酸是那些已經(jīng)被研究或被批準用于食物的氨基酸和包括那些具有2-碳原子(-COOR基為α位)不是CH2的氨基酸。
在X的定義中涉及的羧酸優(yōu)選具有1至26個碳原子，并且可以是直鏈或支鏈形式，可以是飽和的也可以是不飽和的。更加優(yōu)選的羧酸為直鏈形式并選自由單不飽和和多不飽和脂肪酸組成的組。特別優(yōu)選的是通式(I)中X為R1-CH(Y)-的化合物，其中R1是共價鍵或亞烴基鏈，優(yōu)選鏈中具有1至4個碳原子；和Y為亞烴基鏈，優(yōu)選鏈中具有1至4個碳原子，它們中的任一個碳原子以及與之鍵合的氫原子可以被-O-或-S-(例如在蛋氨酸中)取代，或它們中任一個氫原子也可以被羥基等(例如在蘇氨酸中)取代，或者Y可以是NHR2，其中R2是氫(例如在賴氨酸中)或羧酸或其衍生物的殘基，例如C18到C24單不飽和或多不飽和脂肪酸，具有1至6個碳碳雙鍵。特別優(yōu)選的是當R2是H或神經(jīng)酸(24∶1(n-9))或二十二碳六烯酸(22∶6(n-3))的殘基時，其中(n-x)中的x表明的是相對于脂肪酸末端甲基的第一個雙鍵的位置。
通式(I)的化合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何一種合適的方法制備，包括并且更適宜于根據(jù)Paquet(ibid)描述的方法制備。優(yōu)選的方法包括(a)神經(jīng)酸的反應(yīng)衍生物與NH2-(X)-COOR或其鹽反應(yīng)，然后任選的，如果需要的話，(b)將這樣制備的通式(I)的化合物通過與一種反應(yīng)物反應(yīng)形成其衍生物來轉(zhuǎn)化成另一種通式(I)的化合物。
特別優(yōu)選的是神經(jīng)酸的反應(yīng)衍生物為神經(jīng)酸和一種?；w之間的反應(yīng)產(chǎn)物，如與一種酸鹵化物或酐反應(yīng)形成一種?；苌?，尤其是琥珀酰亞胺衍生物。這可以通過如實施例1描述的方法或適合的與其相似的方法來制備。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供了一種方法，其中通式(I)中的化合物經(jīng)由神經(jīng)酸的?；苌锶珑牾啺费苌镌诖嬖谝粋€堿基時與NH2-(X)-COOR或其鹽發(fā)生反應(yīng)來制備。
優(yōu)選的，任選步驟(b)的反應(yīng)條件應(yīng)是適合于水解或進一步胺基取代的。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解通式(I)中R2是H的化合物也可以提供合成其它通式(I)化合物的中間產(chǎn)物。相應(yīng)地，本發(fā)明提供了一種制備通式(I)中R2是羧酸殘基的化合物的方法，該方法包括將通式(IA)相應(yīng)的化合物與通式R2-H或其反應(yīng)衍生物相應(yīng)的羧酸進行反應(yīng)，其中R、R1和R2的定義如通式(I)。再次地，優(yōu)選的衍生物是琥珀酰亞胺基衍生物，尤其是那種具有1至6個碳碳雙鍵的C18到C24單或多不飽和脂肪酸。
此外，通式(I)中R為H的化合物可以被酯化來提供R為C1-6烷基的相應(yīng)化合物，或反之亦然。
神經(jīng)酸購自Aldrich Chemicals，UK，或以別的方式得到，如美國專利說明書US 5 194 448或公開的PCT專利說明書第PCT/GB95/01985號中所述方法獲得。
如前所述，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，通式(I)化合物具有抗炎性和/或免疫調(diào)節(jié)活性。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供了下列通式(I)的特定化合物Nε-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸 Nα，Nε-二-(z-15-二十四碳烯基-L-賴氨酸)乙烷酯
Nα，Nε-二-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸 N-(z-15-二十四碳烯基)-L-蛋氨酸 N-(z-15-二十四碳烯基)-L-蘇氨酸 這里所述的“抗炎性”指降低、改善或預防炎癥或一種炎癥反應(yīng)的能力。這里所述的免疫調(diào)節(jié)指調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)如抑制或刺激這種反應(yīng)的能力。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解抗炎性和免疫調(diào)節(jié)活性可適用于治療或防止某些醫(yī)學疾病。
相應(yīng)地，通式(I)化合物可用于減輕風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性脊椎炎、骨性關(guān)節(jié)炎、痛風性關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)炎病；發(fā)炎的關(guān)節(jié)；濕癥和其它炎癥性皮膚??；包括結(jié)膜炎等炎癥性眼??；pyresis和其它與炎癥有關(guān)的疾病，包括減少慢性炎癥中的組織壞死，抑制移植手術(shù)后的組織排斥，克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎。
通式(I)化合物還可以用于治療或預防呼吸道炎癥疾病如哮喘和支氣管炎。其它適合用免疫調(diào)節(jié)因子治療的疾病包括全身性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、肌無力、進行性全身硬化癥、特異性皮炎、超免疫球蛋白E、肝炎B抗原呈陰性的慢活性肝炎、橋本甲狀腺炎、家族性地中海熱、甲狀腺機能亢進、自體免疫溶血性貧血、初級膽汁硬化，和炎癥性腸疾。此外適合于通過免疫刺激物治療的疾病例如發(fā)生在AIDS病患者和其他與病毒感染如HIV相關(guān)的任何損害免疫系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)能力喪失或功能障礙的疾病。
用于達到期望的治療效果，通式(I)化合物的必需量(活性成分)應(yīng)隨著特定的化合物、給藥方式和治療的哺乳動物而不同。用于患上述疾病哺乳動物的通式(I)化合物的適宜劑量范圍為每公斤體重0.1至1000mg，最優(yōu)選的劑量為每公斤哺乳動物體重0.5至500mg，如1至50mg/kg，例如5至25mg/kg，每天給藥兩至三次。
在治療或預防炎癥性呼吸道疾病的例子中，合適的抗-哮喘的通式(I)化合物的劑量為每公斤體重1至10mg，最優(yōu)選的劑量為每公斤哺乳動物體重1至5mg，例如1至2mg/kg。
雖然活性成分能作為原料化學藥品單獨給藥，但優(yōu)選將之制備成藥物制品的形式。本發(fā)明的藥物制品既可以用于醫(yī)牲畜也可以是人類藥用，該制品包括與藥學上可接受的載體結(jié)合的一種活性成分和任選的其他治療成分。載體必須是“可接受的”意味著載體應(yīng)與制品中的其他成分可配伍并對其施用對象無害。
適宜的是，活性成分占制品重量的0.1％至99.9％。適合的是，制品的單位劑量含有0.1mg和1g之間的活性成分。制品優(yōu)選每天給藥一至六次，例如二至四次。對于局部給藥，活性成分優(yōu)選占制品重量的1％至2％，也可以高達10％w/w。適用于鼻或口給藥的制品如下文所述的自體推進的粉末配制品，其中可以包含0.1至20％w/w例如約2％w/w的活性成分。
制品包括那些適用于口服、眼部給藥、直腸給藥、非腸道注射(包括皮下、陰道、腹膜內(nèi)、肌肉和靜脈內(nèi))給藥、關(guān)節(jié)內(nèi)、局部、鼻和口給藥的形式。
制品可以方便地制備成單位劑量的形式，并可以通過制藥領(lǐng)域已知的任何方法制備。所有的方法包括將活性成分與載體結(jié)合的步驟，該載體構(gòu)成了一種或多種輔助成分。通常通過使活性成分與一種液態(tài)載體或一種細微分散的固體載體或二者均一和緊密地結(jié)合在一起制備藥物制品，然后如果需要可以將產(chǎn)物制成所需要的制品。
適于口服的本發(fā)明的制品可以是個體分離的形式如膠囊、藥包、藥片或錠劑等，每一種含有預先確定量的活性成分；或是粉末或顆粒形式；或是溶液或在水溶液或非水溶液中的懸浮液形式；或是水包油乳劑或油包水乳劑的形式?；钚猿煞诌€可以是大丸藥、藥糖劑或糊劑。對這樣的制品，活性成分在賦形劑中適宜的稀釋范圍如1％至99％，優(yōu)選5％至50％和更優(yōu)選10％至25％的稀釋度?；谙♂尩乃?，制品可以是常溫(約20℃左右)時的液體或是一種低溶解度的固體。
藥片可以通過將活性成分任意地與一種或多種輔助成分進行壓縮或模制來制備。通過在相應(yīng)的機器上壓縮粉末或小顆粒等自由流動形式的活性成分可制備壓縮藥片，其中活性成分可任選地與一種粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑混合。模制藥片可通過在相應(yīng)的機器上將粉末化的活性成分和由惰性稀釋劑濕潤的適宜載體的混合物模塑而成。
直腸給藥的制品可以是一種混合了活性成分和一種載體如可可油的栓劑形式，或是一種灌腸劑。
適合于腸胃外給藥的制品包括上述的溶液、懸浮液或乳劑，常規(guī)的是一種消過毒的活性成分的水溶液制劑，該制劑優(yōu)選是與受體血液等滲的溶液。
適合于關(guān)節(jié)內(nèi)給藥的制品可以是一種消過毒的活性成分的水溶液制劑形式，其可以是一種微晶的形式，例如，水成微晶懸浮液形式或作為一種膠束分散劑或懸浮劑。脂質(zhì)體制品或生物可降解的聚合體系統(tǒng)也可以用于呈遞活性成分，尤其對于關(guān)節(jié)內(nèi)和眼部給藥。
適合于局部給藥的制品包括液體或半液體制劑如擦劑、洗液或敷劑；水包油或油包水的乳劑如乳膏、油膏或糊膏；或是溶液或懸浮液如滴劑。例如，用于眼部給藥時，活性成分可以是在水成眼部滴劑形式，例如0.1-1.0％的溶液。
本發(fā)明所述的滴劑可以包括消過毒的水溶劑或油性溶劑，并且可以通過將活性成分溶于一種適合的含有殺菌劑和/或殺真菌劑和/或任一種其它合適的防腐劑的水溶液來制備。然后可以通過過濾將得到的溶液澄清，將之轉(zhuǎn)移到適合的容器中，然后進行密封和通過高壓滅菌或在90-100攝氏度放置半個小時消毒。溶液可經(jīng)過濾消毒并通過無菌技術(shù)轉(zhuǎn)移到容器中。適用于滴劑中的防腐劑、殺菌劑和殺真菌劑為苯汞基鹽(0.002％)、苯札氯胺(0.01％)和醋酸洗必太(0.01％)。適用于制備油性溶液的溶劑包括甘油、稀釋的乙醇和丙二醇。
本發(fā)明所述的洗劑包括那些適用于眼部的藥劑。眼部洗液包括消過毒的水溶液，其中任選地含有殺菌劑或防腐劑，通過制備上述滴劑的類似方法制備。用于皮膚的洗液或擦劑還可以包括一種加速涂抹后皮膚變干和涼爽的成分，如酒精、軟化劑、濕潤劑(如甘油)或油類(如蓖麻油或花生油)。
本發(fā)明所述的乳膏、油膏或糊膏是外用的活性成分的半固體制品。它們可以在相應(yīng)的機器上通過混合顆?；蚍勰畹幕钚猿煞趾陀椭蚍怯椭|(zhì)來制備，其中顆?；蚍勰罨钚猿煞挚梢灾苯佑脕砘旌匣蚴侨苡谒蚍撬娜芤夯驊腋∫褐羞M行混合?；|(zhì)可以包括一或多種硬、軟或液體石蠟、甘油、蜂蠟、金屬皂；膠水；油類(如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄欖油等植物油)；羊毛脂或其衍生物；或脂肪酸加上乙醇的脂肪酸酯如丙二醇或聚乙二醇。制品還可以包括一種適宜的表面活性劑如陰離子、陽離子或非離子表面活性劑如乙二醇或其聚氧乙烯衍生物。懸浮劑如天然樹脂可以任意與其它無機物如硅質(zhì)硅酸(silicaceoussilicas)和其它成分如羊毛脂等混合。
適合于鼻或口給藥的制品包括那些適合于吸入或吹入的藥物，并且包括粉末、自體-推進和噴射的制劑如氣霧劑和噴霧劑等。制品分散時優(yōu)選具有的粒徑范圍為10至200μ。
這種制品可以是細微的細碎粉末形式，用于自一個粉末吸入裝置或自體推進的粉末-配制品的肺部給藥，其中作為細微的細碎粉末的活性成分可以占到制品的99.9％(w/w)。在自體推進溶液和噴霧制劑的例子中，可以通過選擇一種具有所需噴霧特性(如能夠產(chǎn)生具有所需粒徑的噴霧)的真空管或通過混合活性成分形成限制粒徑的懸浮粉末來獲得期望的效果。這樣制品不是穿過肺部而是被大量地保留在了鼻腔中。這些自體推進的制品可以是一種粉末配制品或是將活性成分作為溶液或懸浮液小滴進行配制的產(chǎn)品。
自體推進的粉末配制品優(yōu)選含有固體活性成分的分散粒子，而且液體推進劑在大氣壓力下具有低于18℃的沸點。液體推進劑可以是任何一種已知的適合于醫(yī)學給藥的推進劑并且可以包含一或多種低級烷烴或鹵化低級烷烴或它們的混合物；氯化或氟化低級烷烴是特別優(yōu)選的。一般地，推進劑占制品的50至99.9％(w/w)，而活性成分占到0.1至20％(w/w)，例如約占制品的2％(w/w)。
這種自體推進制品中的藥學上可接受的載體可以包括推進劑外的其它組分，特別是表面活性劑或固體稀釋劑或同時兼有兩者。表面活性劑是值得要的因為它們能防止活性成分微粒的凝聚和維持活性成分的懸浮。特別有價值的是液體非離子表面活性劑和固體陰離子表面活性劑或它們的混合物。適合的液體非離子表面活性劑是那些具有低于10的親水-親脂平衡系數(shù)的表面活性劑(HLB，參見Journal of the Society ofCosmetic Chemists，Vol.1，pp.311-326，1949)，尤其是酯和部分具有脂肪族多元醇的脂肪酸酯，如山梨聚糖單-油酸酯和山梨聚糖三油酸酯，分別為商品名‘Span 80’和‘Span 85’，可在市場上購得。液體非離子表面活性劑可以占到制品的0.01至20％(w/w)，但它更適宜的組成比例為低于制品的1％(w/w)。適合的陰離子表面活性劑包括堿金屬、銨和二烴基硫代琥珀酸的胺鹽(其中烷基具有4到12個碳原子)和烷基苯磺酸(其中烷基具有8到14個碳原子)。固體陰離子表面活性劑以占到制品的0.01至20％(w/w)，但它更適宜的組成比例為低于組合物的1％(w/w)。固體稀釋劑可以被方便地混合進這種自體推進的制品中，其中活性成分的密度全然不同于推進劑的密度；而且，它們有助于保持懸浮液中的活性成分。固體稀釋劑是細微粉末的形式，優(yōu)選具有與活性成分微粒的粒徑具有相同等級粒徑的粉末。適合的固體稀釋劑包括氯化鈉、硫酸鈉和糖。
本發(fā)明的制品還可以是自體推進制劑的形式，其中活性成分存在于溶液中。這種自體推進制劑可以包含活性成分、推進劑和聯(lián)合溶劑，并且含有一種抗氧化穩(wěn)定劑是有利的。推進劑是上面已經(jīng)描述的化合物中的一種或多種。聯(lián)合溶劑根據(jù)它們在推進劑中的可溶性、它們?nèi)芙饣钚猿煞值哪芰退鼈兙哂邢鄳?yīng)于上述特性的最低沸點來選擇。適合的聯(lián)合溶劑為低級烷基醇類和其混合物。聯(lián)合溶劑可以占到制品組成的5至40％(w/w)，但優(yōu)選少于制品的20％(w/w)。抗氧化穩(wěn)定劑可以被摻入這種溶液-制劑中來抑制活性成分變壞，合適的有堿金屬抗壞血酸鹽或亞硫酸氫鹽，它們優(yōu)選以高達0.25％(w/w)的量存在于制劑中。
這種自體推進制劑可以通過本領(lǐng)域已知方法制備。例如，活性成分(既可以是如上所述的存在于適當液體中的懸浮液中的適當微?；蚴窃诟哌_20％w/w溶液中一種可接受聯(lián)合溶劑中的適當微粒)與任何一種藥學上可接受的載體組分混合。將產(chǎn)生的混合物冷卻，轉(zhuǎn)移到一個適宜的冷卻的容器中并將液體形式的推進劑加入；對容器進行密封?；蛘撸@種自體推進制劑可以通過混合同樣適合的如前所述的微?；?至20％w/w乙醇或水溶液中的活性成分和藥學上可接受載體而不是推進劑的保留成分來制備；任選地和某些推進劑一起將產(chǎn)生的混合物引入一個合適的容器；在環(huán)境溫度時通過一個真空管在壓力下將推進劑注入容器，該真空管構(gòu)成容器的一部分并用于控制制品從中釋放。需要的是，在制備自體推進制劑過程中的某一合適階段通過將容器中的空氣移走對容器進行凈化處理。
適用于自體推進制劑的容器是一種具有手工可操作真空管的容器，并且該真空管由鋁、不銹鋼或固化玻璃制成。當然，真空管應(yīng)當是一種具有所需微粒噴射特性的裝置，即在每次真空管操作時給予固定量的制劑，例如每一次發(fā)送約50至100微升的制劑；配制劑量的設(shè)備是本領(lǐng)域公知的。
本發(fā)明的制品還可以以活性成分的水溶液或稀釋的乙醇溶液或任選消過毒的溶液的形式用于霧化器或噴霧器中，其中用加速的氣流產(chǎn)生由小滴溶液組成的細的薄霧。這種制品通常含有一種調(diào)味劑如糖精鈉或揮發(fā)油。偏亞硫酸氫鈉等緩沖劑和表面活性劑還可以添加到這種制品中，但該制品應(yīng)當還含有一種防腐劑如甲基羥基安息香酸鹽。
其它適合鼻部給藥的制品包括粒徑為20至500微米的粉末，該粉末狀制品可以通過鼻吸入的方式給藥，即通過鼻子將容器中靠近鼻子的粉末快速吸入的方式。
除了上述的成分，本發(fā)明的制品可以包括一到多種附加成分如稀釋劑、緩沖劑、調(diào)味劑、粘合劑、表面活性劑、增稠劑、潤滑劑、防腐劑如甲基羥基安息香酸鹽(包括抗氧化劑)、乳化劑之類。用于本發(fā)明制品的一種特別優(yōu)選的載體或稀釋劑是油酸等C18至C24單不飽和脂肪酸的低級烷基酯，例如乙烷基油酸鹽。其它適合的載體或稀釋劑包括葵酸或辛酸酯或甘油三酸酯或它們的混合物，例如那些以商品名為Miglyol(如Miglyol 810)的辛酸/癸酸甘油三酸酯。
任何其它的治療成分可以包括抗生素、抗菌劑和抗病毒劑中的一種或多種。
因此根據(jù)以上所述，本發(fā)明提供了(a)一種新的通式(I)化合物，包括衍生物(如生物前體或前體藥物)和其溶劑化物或其鹽；(b)制備通式(I)化合物的方法，如通過對一種通式(I)化合物進行酯化作用或脫脂化作用來制備另一種通式(I)化合物；或通過神經(jīng)酸等脂肪酸與氨基酸在適宜條件下反應(yīng)獲得，如Paquet(ibid)描述的那樣；(c)含有非毒性、有效量的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽和一種藥學上可接受載體的藥物制品；(d)制備這種藥物制品的方法；(e)一種預防或治療哺乳動物包括人類炎癥的方法，包括給予所述哺乳動物一種非毒性、有效抗炎癥量的通式(I)化合物；(f)一種預防或治療哺乳動物包括人類的免疫調(diào)節(jié)疾病的方法，包括給予所述哺乳動物一種非毒性、有效免疫調(diào)節(jié)量的通式(I)化合物；(g)通式(I)化合物在醫(yī)學或治療中的用途，例如抑制炎癥和/或調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)；(h)通式(I)化合物在制備藥物中的用途，例如該藥物用來治療或預防炎癥和/或與免疫系統(tǒng)的興奮過度或興奮不足相關(guān)的疾病；和(i)通式(I)化合物在制備其它通式(I)化合物中的用途。
通過以下給出的實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
在下面的說明和實施例中，最終產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)使用了JEOL JNM-GX270分光計通過1H和13C核磁共振(NMR)波譜確定。在相對于溶劑的CDCl3中測定溶液的1H和13C的化學位移。CDCl3是氘化了的氯仿，DMSO是二甲基亞砜，TFA是三氟乙酸。Ner指二十四碳烯基氧基(tetracosenoyloxy)鏈，Lys指L-賴氨酸殘基，Met指L-蛋氨酸殘基，Thr指蘇氨酸殘基。所有指示的溫度均為攝氏度。
實施例1、Nε-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸的制備 A.制備琥珀酰亞胺基神經(jīng)酸鹽神經(jīng)苷脂(nervonoyl)氯化物(26mmol，10.0g)的二氯甲烷(50mL)溶液滴加入冷卻的N-羥基琥珀酰亞胺(26mmol，3.0g)和三乙胺(52mmol，5.2g)的二氯甲烷(200mL)溶液(0℃)中，當添加完全后攪拌溶液并反應(yīng)一個小時。薄層色譜(TLC)分析(80∶18∶2的己烷-二乙基醚-乙酸)表明反應(yīng)完全。將反應(yīng)混合物倒入己烷中，將混合物進行過濾和濃縮至干燥。從乙醇中重結(jié)晶產(chǎn)生的琥珀酰亞胺基神經(jīng)酸鹽為白色固體。
B.制備Nε-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸L-賴氨酸單氫氯化物(13mmol，2.4g，商購)和三乙胺(39mmol，3.9g)溶于50mL的水-丙酮(1∶1)后將溶液進行充分攪拌，而后在半小時內(nèi)往溶液中逐份地加入琥珀酰亞胺基神經(jīng)酸鹽(13mmol，6.0g，按實施例1A制備)。在添加時，加入更多的水-丙酮-三乙胺(10∶10∶2)來防止產(chǎn)物形成大塊的沉淀物。再持續(xù)攪拌1個小時。然后用水稀釋的鹽酸(1∶1，v/v)將混合物酸化至pH4并將之冷凍。輕微起沫的產(chǎn)物通過過濾分離并用水和熱的二氧雜環(huán)己烷洗滌，從而獲得目標化合物。
ES-MS(M+H)cacld.for C30H58O3N2495.4525，(M+H)obsvd.495.4526。
1H NMRδ(DMSO/TFA)0.81(t，3H，Ner H-24)，1.20(m，34H，NerH-4-13，Ner H-18-23，Lys H-4)，1.33-1.80(m，6H，Ner H-3，Lys H-3，5)，1.94(m，4H，Ner H-14，17)，2.02(t，2H，Ner H-2)，3.00(t，2H，Lys H-6)，3.85(m，1H，Lys H-2)，5.28(m，2H，Ner H-15，16)，7.78(t，1H，JN-H＝5.6Hz，LysNHε)，8.24(dxd，1H，JN-H＝4.6Hz，Lys NHα)。
13C NMRδ(CDCl3/TFA)14.0(Ner C-24)，22.8(Ner C-23)，35.0(Ner C-2)，40.4(Lys C-6)，53.6(Lys C-2)，130.1(Ner C-15，16)，172.4(CO，Ner C-1)，179.3(CO，Lys C-1)。
實施例2、Nα，Nε-二-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸乙烷酯的制備 L-賴氨酸乙烷酯二氫氯化物(6mmol，1.4g，商購)和三乙胺(36mmol，3.6g)加到氯仿(80mL)中攪拌形成的懸浮液，于室溫時向懸浮液中逐份地添加琥珀酰亞胺基神經(jīng)酸鹽(18mmol，8.4g，按實施例1中制備)。連續(xù)攪拌過夜，在減壓下除去溶劑后，產(chǎn)物從乙醇∶水(1∶1)中結(jié)晶出來，從而獲得了目標化合物。
IR(cm-1)1746，1646，1553.ES-MS(M+H)calcd.for C56H106O4N2871.8231，(M+H)obsvd.871.8244。
1H NMRδ(CDCl3)0.88(t，6H，Ner H-24，Ner′H-24)，1.28(m，69H，Ner H-4-13，Ner H-18-23，Ner′H-4-13，Ner′H-18-23，Lys H-4，Lys CH3ester)，1.48-1.88(m，8H，Ner H-3，Ner′H-3，Lys H-3，5)，2.01(m，8H，NerH-14，17，Ner′H-14，17)，2.15(t，2H，Ner′H-2)，2.23(t，2H，Ner H-2)，3.22(m，2H，Lys H-6)，4.19(q，2H，Lys CH2ester)，4.55(m，1H，Lys H-2)，5.35(m，4H，Ner H-15，16，Ner′H-15，16)，5.78(t，1H，JN-H＝5.6Hz，Lys NHε)，6.23(d，1H，JN-H＝7.6Hz，Lys NHα)。
13C NMRδ(CDCl3)14.1(Ner C-24，Ner′C-24)，22.3，22.6(Ner C-23，Ner′C-23)，36.5，36.8(Ner C-2，Ner′C-2)，38.7(Lys C-5)，51.6(Lys C-6)，61.4(Lys C-2)，129.9(Ner C-15，16，Ner′C-15，16)，172.6，173.2，173.4(CO，Ner C-1，Ner′C-1，Lys C-1)。
實施例3、Nα，Nε-二-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸的制備 將Nα，Nε-二-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸乙烷酯(2mmol，1.74g，根據(jù)實施例2制備)和3％甲醇鈉氫氧化物溶液(25mL)加熱兩個小時至溫和回流，并將之置于室溫過夜。用1N冰鹽酸將肥皂樣物質(zhì)酸化至pH2，收集白色固體并加入游離酸，而后從丙酮-水(1∶1)中再結(jié)晶出白色粉末狀目標化合物。
IR(cm-1)1717，1645，1558.ES-MS(M+H)calcd.for C54H102O4N2841.7762，(M+H)obsvd.841.7750。
1H NMRδ(CDCl3)0.88(t，6H，Ner H-24，Ner′H-24)，1.27(m，66H，Ner H-4-13，Ner H-18-23，Ner′H-4-13，Ner′H-18-23，Lys H-4)，1.50-1.94(m，8H，Ner H-3，Ner′H-3，Lys H-3，5)，2.01(m，8H，Ner H-14，17，Ner′H-14，17)，2.19(t，2H，Ner′H-2)，2.26(t，2H，Ner H-2)，3.27(m，2H，LysH-6)，4.54(m，1H，Lys H-2)，5.35(m，4H，Ner H15，16，Ner′H-15，16)，5.94(t，1H，JN-H＝5.9Hz，Lys NHε)，6.67(d，1H，JN-H＝6.9Hz，Lys-NHα)。
13C NMRδ(CDCl3)14.1(Ner C-24，Ner′C-24)，22.7(Ner C-23，Ner′C-23)，36.4，36.8(Ner C-2，Ner′C-2)，38.7(Lys C-5)，52.2(Lys C-6)，129.9(Ner C-15，16，Ner′C-15，16)，174.2，174.5(CO，Ner C-1，Ner′C-1，Lys C-1)。
實施例4、N-(z-15-二十四碳烯基)-L-蛋氨酸的制備 將L-蛋氨酸(5mmol，0.75g)和三乙胺(15mmol，2.1mL)溶于15mL的水-丙酮(1∶1)并進行攪拌，而后往溶液中逐份加入琥珀酰亞胺基神經(jīng)酸鹽(5mmol，2.32g，按實施例1A制備)。攪拌混合物4個小時直到TLC(己烷-二乙基醚-乙酸，80∶18∶2)檢測沒有酯的存在。溶液在減壓下進行蒸發(fā)干燥。然后加入10mL水，混合物被濃縮的鹽酸酸化至pH2。沉淀產(chǎn)物通過過濾分離，用水洗滌并自乙醇中結(jié)晶出來。然后加入己烷用于除去目標化合物中微量的非極性雜質(zhì)。
IR(cm-1)1722，1647，1534.ES-MS(M+H)calcd.for C29H55O3NS498.3981，(M+H)obsvd.498.3981。
1H NMRδ(DMSO)0.81(t，3H，Ner H-24)，1.20(m，32H，Ner H-4-13，Ner H-18-23)，1.45(m，2H，Ner H-3)，1.81(m，2H，Met H-3)，1.93(q，4H，Ner H-14，17)，1.99(s，3H，Met H-5)，2.07(m，2H，Ner H-2)，2.42(m，2H，Met H-4)，4.25(m，1H，Met H-2)，5.25(t，2H，Ner H-15，16)，7.96(d，1H，JN-H＝8.0Hz)。
13C NMRδ(DMSO)13.8(Ner C-24)，14.6(Met C-5)，35.2(Ner C-2)，45.2(Met C-3)，51.2(Met C-2)，129.3，129.4(Ner C-15，16)，172.1，173.7(C＝O，Ner C-1，Met C-1)。
實施例5、N-(z-15-二十四碳烯基)-L-蘇氨酸的制備
L-蘇氨酸(5mmol，0.595g)和重碳酸鈉(5mmol，0.420g)和琥珀酰亞胺基神經(jīng)酸鹽(5mmol，2.320g，按實施例1A制備)溶于水(2mL)的混合物和二甲氧基乙烷(5mL)被分餾兩個小時直到根據(jù)TLC(己烷-二乙基醚-乙酸，80∶18∶2)檢測沒有酯的存在。通過濃縮的鹽酸酸化至pH2并急速冷卻析出目標化合物，用水進行洗滌和干燥，從氯仿中結(jié)晶出目標化合物。最后用己烷洗滌用于移走目標化合物中微量的非極性雜質(zhì)。
IR(cm-1)1717，1647，1542.ES-MS(M+H)calcd.for C28H53O4N468.4053，(M+H)obsvd.468.4053。
1H NMRδ(DMSO)0.82(t，3H，Ner H-24)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz，Thr H-4)，1.20(m，32H，Ner H-4-13，18-23)，1.46(m，2H，Ner H-3)，1.94(q，4H，Ner H-14，17)，2.15(m，2H，Ner H-2)，4.09(m，1H，J＝6.8Hz，Thr H-3)，4.19(dxd，1H，J＝8.7Hz，Thr H-2)，5.27(t，2H，Ner H-15，16)，7.66(d，1H，JN-H＝8.7Hz)。
13C NMRδ(DMSO)13.8(Ner C-24)，20.3(Thr C-4)，35.2(Ner C-2)，57.5(Thr C-3)，66.4(Thr C-2)，129.4，129.5(Ner C-15，16)，172.4，172.6(C＝O，Ner C-1，Thr C-1)。
實施例A-藥片
將活性成分、乳糖和淀粉混合在一起。在純凈水中加入聚乙烯吡咯酮溶液將粉末顆?；?。顆粒干燥后加入硬脂酸鎂，將混合物壓縮成產(chǎn)物藥片，每片100mg。
實施例B-藥膏組合物
活性成分被分配到小體積的介質(zhì)中，然后摻入大量的介質(zhì)中獲得一種光滑、均一的產(chǎn)物。然后將分散體裝入可壓癟金屬管中。
實施例C-局部霜劑組合物
極性蠟、蜂蠟和羊毛脂一起在60℃加熱。加入甲基羥基安息香酸鹽溶液并通過高速攪拌均質(zhì)化。溫度降至50℃。然后加入活性成分并進行分散。組合物可以通過低速攪拌冷卻。
實施例D-局部洗液組合物
75℃時甲基羥基安息香酸鹽和甘油溶于70ml水中。山梨聚糖單十二酸酯、聚山梨醇酯20TM和鯨硬脂醇在75℃時一起融化并加到水溶液中。產(chǎn)生的乳劑是均質(zhì)的，可以通過持續(xù)的攪拌冷卻并把活性成分加入到剩余的水中形成懸浮液。攪拌懸浮液至均質(zhì)化。
實施例E-膠囊組合物膠囊通過將50mg的活性成分、110mg的乳糖、32mg的滑石粉和8mg的硬脂酸鎂填充一種兩片狀硬的凝膠膠囊制成。
實施例F-滴眼液組合物
甲基和丙基羥基安息香酸鹽溶于70ml純凈水中并且得到的溶液被冷卻。加入活性成分后將溶液經(jīng)過一個過濾膜(孔徑0.22μm)過濾消毒并被填充進合適的消過毒的容器。
實施例G-用于吸入給藥的組合物對于15-20ml容量的氣霧劑容器來說活性成分(10mg)與0.2-0.2％的潤滑劑如聚山梨醇酯85TM或油酸或它們的混合物在一種推進劑如FreonTM中混合，優(yōu)選在1，2-二氯乙烯和二氟氯甲烷的組合物中混合，混合物被置入一種適合于吸入給藥的氣霧劑容器中。
實施例H-用于吸入給藥的組合物(酒精溶液)對于15-20ml容量的氣霧劑容器來說將活性成分(10mg)溶于乙醇(6-8ml)中，加入0.1-0.2％的潤滑劑如聚山梨醇酯85TM，將溶液分散進推進劑如Freon中，優(yōu)選在1，2-二氯乙烯和二氟氯甲烷的組合物中混合，混合物被置入一種適合于鼻或口吸入給藥的氣霧劑容器中。
實施例I-非腸道注射用藥物組合物通過在丙二醇和水中攪拌按重量計1.5％的活性成分制備成注射劑。溶液通過過濾消毒。
實施例J-口服組合物通過混合10份活性成分(NA∶NA和/或NA∶GLA)和90份乙烷基油酸鹽，獲得乙烷基油酸鹽脂質(zhì)10％稀釋液的口服組合物。
實施例K-生物學數(shù)據(jù)根據(jù)Dehouck等在J Cont Rel 81-91，1992中描述的方法，通過試驗來研究實施例2化合物穿過血腦屏障的傳輸過程。這些結(jié)果表明化合物在以濃度5μm/l使用時沒有細胞毒性。
權(quán)利要求
1.一種通式(I)所述的化合物 其中R是氫(H)或C16烷基；X按以下的定義，-NH-(X)-COOH是一種氨基酸的殘基，其中該氨基酸本身可以在其任何側(cè)氨基基團處，任意地被一種羧酸或其衍生物或其鹽的殘基取代。
2.一種如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R是乙烷基。
3.一種如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中可衍生出通式(I)中-NH-(X)-COOR的氨基酸含有一個或多個氨基基團；是生理學上可以接受的；和其中2-碳原子(-COOR基為α位)不是CH2。
4.前述任一項權(quán)利要求所述的化合物，其中在定義X中涉及的羧酸優(yōu)選具有1至26個碳原子，選自單不飽和多不飽和脂肪酸。
5.前述任一項權(quán)利要求所述的化合物，其中X為R1-CH(Y)-，其中R1為共價鍵或亞烷基鏈，優(yōu)選鏈中具有1至4個碳原子；和Y為亞烷基鏈，優(yōu)選鏈中具有1至4個碳原子，其中任一個和氫原子鍵合的碳原子可以被-O-或-S-(例如在蛋氨酸中)取代，或任一個氫原子也可以被羥基(例如在蘇氨酸中)取代，或者Y可以是NHR2，其中R2是氫(例如在賴氨酸中)或羧酸或其衍生物的殘基，例如C18到C24單不飽和或多不飽和脂肪酸，具有1至6個碳碳雙鍵。
6.一種如權(quán)利要求5所述的化合物，其中R2是H或神經(jīng)酸(24∶1(n-9))或二十二碳六烯酸(22∶6(n-3))的殘基，其中(n-x)中的x表明的是相應(yīng)于脂肪酸末端甲基的第一個雙鍵的位置。
7.如前述任一項權(quán)利要求所述的化合物，選自以下的化合物和它們的鹽類Nε-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸 Nα，Nε-二-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸乙烷酯 Nα，Nε-二-(z-15-二十四碳烯基)-L-賴氨酸 N-(z-15-二十四碳烯基)-L-蛋氨酸 和N-5-二十四碳烯基)-L-蘇氨酸
8.一種制備上述任一權(quán)利要求所述化合物的方法，該方法包括(a)神經(jīng)酸衍生物與NH2-(X)-COOR或其鹽反應(yīng)，之后，如果需要，(b)將這樣制備的通式(I)的化合物轉(zhuǎn)化成另一種通式(I)的化合物或其鹽，其中通過將這種化合物與反應(yīng)物反應(yīng)形成其衍生物。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中通式(I)的化合物通過神經(jīng)酸的琥珀酰亞胺基衍生物在存在一個堿基時與NH2-X-COOR或其鹽發(fā)生化學反應(yīng)制備。
10.如權(quán)利要求8或9所述的方法，其中步驟(b)的反應(yīng)條件是適合于水解或進一步胺基替代的。
11.如權(quán)利要求1至7任一項所述的化合物在藥物中的用途。
12.如權(quán)利要求1至7任一項所述的化合物在抗炎癥劑和/或免疫調(diào)節(jié)劑中的用途。
13.如權(quán)利要求1至7任一項所述的化合物在制備另一種如權(quán)利要求1至7任一項所述化合物中的用途。
14.一種藥物組合物，其中包含無毒的、藥學上可接受的如權(quán)利要求1至7任一項所述化合物的有效量和一種藥學上可接受的載體。
15.制備權(quán)利要求14所述組合物的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至7任一項所述的化合物與一種藥學上可接受的載體結(jié)合。
16.如前所述的權(quán)利要求1至15任一項所述的化合物、組合物、用途或方法，詳細描述參見實施例。
17.如權(quán)利要求1至7任一項所述的化合物隨時可以通過權(quán)利要求8至10中任一項所述方法來制備。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)所述的化合物其中R是氫(H)或C
文檔編號C07C231/10GK1514822SQ02810440
公開日2004年7月21日 申請日期2002年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月21日
發(fā)明者基斯·庫普蘭, 基斯 庫普蘭 申請人:克羅達國際公司