專利名稱：β-取代的β-氨基乙基膦酸酯類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及取代的氨基乙基膦酸酯組合物及其在治療中的用途。更具體地講，本發(fā)明涉及新的β-取代的-β-氨基乙基膦酸酯衍生物、制備它們的方法、含有它們的藥物組合物以及它們?cè)谥委熤械挠猛?，例如它們?cè)诮档脱獫{apo(a)和apo(a)相關(guān)的脂蛋白(脂蛋白(a)，或“Lp(a)”)水平、降低血漿apo B和apo B相關(guān)的脂蛋白(低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白)水平以及在降低血漿總膽固醇水平中的用途。
背景技術(shù)：
Lp(a)為L(zhǎng)DL樣脂蛋白，其中的主要脂蛋白apo B-100與稀有糖蛋白脫輔基蛋白(a)共價(jià)相連。apo(a)和apo B共價(jià)結(jié)合形成Lp(a)是與血漿apo B濃度無關(guān)的次要事件。由于其結(jié)構(gòu)與血纖維蛋白溶酶原相似，apo(a)通過阻止血栓溶解(即血塊溶解)而干擾正常的生理性血栓形成-止血過程(參見，如Biemond B J，Circulation 1997，96(5)1612-1615)。人們認(rèn)為L(zhǎng)p(a)的結(jié)構(gòu)特征(在其結(jié)構(gòu)中，LDL脂蛋白與apo(a)相連)使其具有導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和形成血栓的活性。
Lp(a)水平升高與發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀心臟病、心肌梗塞、腦栓塞、氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄和中風(fēng)相關(guān)。最近的流行病學(xué)研究為血漿Lp(a)濃度與心臟病發(fā)病率具有正相關(guān)性提供了臨床證據(jù)(A.G.Bostom等，Journal of American Medical Association 1996，276，第544-548頁)。
Lp(a)濃度超過20-30mg/dl的患者發(fā)生心臟病和中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。目前尚不存在降低Lp(a)的有效療法，這是因?yàn)榻档湍懝檀嫉乃幬锶鏗MGCoA還原酶抑制劑并不能降低血漿Lp(a)的濃度。唯一能夠降低Lp(a)濃度的化合物為煙酸，但是必需以高劑量使用才具有活性，而高劑量伴隨著不能接受的副作用。因此，未能滿足人們對(duì)有效降低高水平的Lp(a)的治療藥物的需要。
國際專利申請(qǐng)WO 97/20307、WO 98/28310、WO 98/28311和WO98/28312(Symphar，SmithKline Beecham)描述了一系列的α-氨基膦酸酯類化合物，它們具有降低Lp(a)的活性。但是，仍然需要識(shí)別其他具有降低Lp(a)活性的化合物。
發(fā)明概述在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中X1、X2、X3、X4和X5獨(dú)立為氫、羥基、羥甲基、C1-C2烷氧基甲基、直鏈或支鏈C1-C8烷基、直鏈或支鏈C1-C8烷氧基；或者X2可以與X3結(jié)合，或者X4可以與X5結(jié)合，形成任選被C1-C4烷基取代的5元至6元亞烷二氧基環(huán)；或者X4可以與X5結(jié)合形成任選被C1-C4烷基取代的5元至6元亞烷基環(huán)；R1和R2獨(dú)立為氫、具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；B為CH2、CH2-CH2或CH＝CH；n為0或1；Z0為H、具有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、?；鶊F(tuán)R3-CO(其中R3為1-4個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè)碳原子的全氟烷基)；
Z1、Z2獨(dú)立為H、Cl、Br、F、1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；m為0-4；Het為含至少一個(gè)氮原子的任選取代的雜芳基。
本發(fā)明的化合物包括β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-5-(2-甲氧基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-5-(2-甲氧基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；
β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二甲酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，5-二甲基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，4，5-三甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，4，5-三甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3-乙氧基-4-羥基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-乙氧基-4-羥基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3-乙氧基-4-羥基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-乙氧基-4-羥基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)]-乙基膦酸二異丙酯；β-(4，5-二甲氧基-3-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(4，5-二甲氧基-3-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3-羥基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-羥基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；
β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-α-甲基-乙基膦酸二乙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-α，α-二氟-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(2，4-二甲基-3-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(2，4-二甲基-3-羥苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(2，4-二甲基-3-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；和β-(3，5-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯。
一方面，本發(fā)明提供包括式(I)化合物及藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明還提供式(I)化合物的治療用途。一方面，本發(fā)明提供降低血漿apo(a)和脂蛋白(a)水平、降低血漿apo B和LDL膽固醇水平以及降低血漿總膽固醇的方法。本發(fā)明還提供其他方法，包括通過降低血漿apo(a)和脂蛋白(a)水平而增加血栓溶解來治療和/或預(yù)防血栓形成的方法；通過降低血漿apo(a)和脂蛋白(a)水平來治療血管成形術(shù)后的再狹窄的方法；通過降低血漿apo(a)和脂蛋白(a)水平或通過降低血漿脫輔基蛋白B和LDL膽固醇水平從而預(yù)防和/或治療動(dòng)脈粥樣硬化的方法；預(yù)防和/或治療血膽固醇過多的方法；通過降低對(duì)他汀類藥物(statins)治療具有抗性的患者的膽固醇來預(yù)防和/或治療動(dòng)脈粥樣硬化的方法；以及通過與降低膽固醇合成的化合物如他汀類藥物聯(lián)合來預(yù)防和/或治療動(dòng)脈粥樣硬化的方法。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及式(I)化合物以及它們?cè)诮档脱獫{apo(a)、Lp(a)、apoB、apo B相關(guān)的脂蛋白(低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白)水平和降低血漿總膽固醇水平中的用途。
對(duì)于式(I)化合物而言，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，X1為氫或甲基；X2為甲氧基、乙氧基、甲基或羥基；X3為氫、羥基、甲氧基、羥甲基、甲氧基甲基、甲基或乙基；X4為氫、甲氧基或甲基；X5為氫。優(yōu)選n為0，從而(B)n直接為鍵，或者n為1，B為CH2。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R2獨(dú)立為C1-C3烷基，更優(yōu)選C2或C3烷基，特別是乙基或異丙基。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，m為0，Z0為氫，Z1和Z2各為氫。
在本文中，除另外指明外，術(shù)語“雜芳基”指在各環(huán)中含有多至四個(gè)雜原子的單環(huán)或稠環(huán)，所述雜原子選自氧、氮和硫，所述環(huán)可以是未取代的，也可以是被如多至四個(gè)取代基取代的。各個(gè)環(huán)適合具有4-7個(gè)、優(yōu)選5或6個(gè)環(huán)原子。稠合環(huán)系可以包括碳環(huán)，并且需僅包括一個(gè)雜芳基環(huán)。
Het的代表性例子包括吡啶基、嘧啶基、吡唑基和三嗪基，這些基團(tuán)可以是未取代的，也可以是被多至四個(gè)取代基(對(duì)于吡啶基)、三個(gè)取代基(嘧啶基、吡唑基)、或兩個(gè)取代基(三嗪基)取代的，所述取代基可以相同，也可以不同，選自直鏈或支鏈C1-C4烷基或烷氧基、羥基、羥甲基、鹵素(F、Cl、Br、I)或任選被C1-C4烷基取代的氨基。優(yōu)選Het是未取代，或者被甲基、甲氧基、二甲氧基或二甲基取代的吡啶基、嘧啶基、吡唑基。Het的優(yōu)選示例為3-吡啶基或3-(2，6-二甲基吡啶基)。
本發(fā)明中采用的藥學(xué)上可接受的鹽包括由Berge、Bighley和Monkhouse，J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19中述及的那些鹽。此類鹽可以由無機(jī)酸和有機(jī)酸形成。這些酸的代表性例子包括馬來酸、富馬酸、苯甲酸、抗壞血酸、撲酸、琥珀酸、雙亞甲基水楊酸、甲磺酸、乙二磺酸、乙酸、丙酸、酒石酸、水楊酸、檸檬酸、葡糖酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、衣糠酸、乙醇酸、對(duì)-氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸、環(huán)己氨基磺酸、磷酸和硝酸。
由于式(I)化合物具有至少一個(gè)手性中心(位于膦酸酯基團(tuán)的β位碳原子)，為外消旋物。因此式(I)化合物可以兩種對(duì)映體的形式存在。外消旋混合物(各對(duì)映體約50％)、對(duì)映體的其他混合物以及純的對(duì)映體包括在本申請(qǐng)范圍內(nèi)。同樣，其中Z1和Z2不同的式(I)化合物可作為非對(duì)映異構(gòu)體的混合物存在。所述混合物和單獨(dú)的異構(gòu)體也包括在本發(fā)明中。除另外指明外，給出的式(I)化合物的物理常數(shù)和生物學(xué)數(shù)據(jù)是指外消旋物和非對(duì)映異構(gòu)體的混合物。
因?yàn)楸景l(fā)明的化合物，具體而言為式(I)化合物是用于藥物組合物中，所以可以理解，這些化合物均是以基本純的形式提供的，例如，它們的純度至少為50％、更適當(dāng)?shù)氖侵辽贋?5％，并優(yōu)選至少為95％(其中％基于重量計(jì))。式(I)化合物的不純的制劑可以用于制備用于藥物組合物中的更純形式的化合物。盡管本發(fā)明的中間體化合物的純度不是關(guān)鍵，但是可以容易地理解，對(duì)于式(I)化合物而言，優(yōu)選基本純形式的化合物。在可能時(shí)，還優(yōu)選以結(jié)晶形式得到本發(fā)明的化合物。
當(dāng)使本發(fā)明的某些化合物從有機(jī)溶劑中結(jié)晶或重結(jié)晶時(shí)，結(jié)晶產(chǎn)物中可能存在結(jié)晶溶劑。因此，本發(fā)明也包括此類溶劑合物。同理，本發(fā)明的某些化合物可以從含水溶劑中結(jié)晶或重結(jié)晶，在這種情況下，可形成水合物。所以，本發(fā)明還包括化學(xué)計(jì)算量的水合物以及含有可變量水的化合物，這些可變量的水可能是由操作過程如冷凍干燥產(chǎn)生的。此外，不同的結(jié)晶條件可能導(dǎo)致形成結(jié)晶產(chǎn)物的不同多晶型物。本發(fā)明也包括式(I)化合物的所有多晶型物。
本發(fā)明還涉及這樣一個(gè)出乎人們意料的發(fā)現(xiàn)，即式(I)化合物可以有效減少獼猴體外產(chǎn)生apo(a)和體內(nèi)產(chǎn)生Lp(a)。將該動(dòng)物屬選作動(dòng)物模型是由于它們的Lp(a)與人Lp(a)具有類似的免疫學(xué)性質(zhì)，并且以幾乎相同的血漿濃度頻率分布發(fā)生，參見例如N.Azrolan等的J.Biol.Chem.，266，13866-13872(1991)。在體外測(cè)定中，發(fā)現(xiàn)式(I)化合物可以減少apo(a)的分泌，該物質(zhì)是由獼猴肝細(xì)胞的原代培養(yǎng)物以游離形式分泌的。對(duì)相同屬動(dòng)物進(jìn)行的體內(nèi)研究也證實(shí)了這些結(jié)果，表明式(I)化合物可以有效降低Lp(a)。因此，本發(fā)明的化合物可以用于降低人的apo(a)和Lp(a)，并由此提供治療作用。
所以，在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供用于治療，特別是作為L(zhǎng)p(a)降低藥物的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。血漿和組織中Lp(a)水平的升高與加速的動(dòng)脈粥樣硬化、平滑肌細(xì)胞增殖異常和血栓形成增加有關(guān)，并以疾病狀態(tài)表現(xiàn)，如冠狀心臟病、外周動(dòng)脈疾病、間歇性跛行、血栓形成、血管成形術(shù)后的再狹窄、顱外頸動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)和心臟移植后發(fā)生的動(dòng)脈粥樣硬化。
此外，還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物具有有效降低膽固醇的性能。所以，在獼猴中進(jìn)行的研究表明本發(fā)明的化合物降低了血漿總膽固醇，特別是LDL(低密度脂蛋白)膽固醇。人們已經(jīng)確知高水平的LDL膽固醇是動(dòng)脈粥樣硬化疾病的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。另外，對(duì)獼猴進(jìn)行的相同研究還表明本發(fā)明的化合物降低了脫輔基蛋白B(apo B)的水平，該蛋白為L(zhǎng)DL的主要蛋白，并且是LDL受體的主要配體。這種使apoB和apo B相關(guān)的LDL降低的機(jī)制并不涉及對(duì)膽固醇合成的抑制作用，所述抑制作用是他汀類藥物作用的機(jī)制。因此，本發(fā)明的化合物可以用于降低對(duì)他汀類藥物治療具有抗性的患者的膽固醇，但是反過來，本發(fā)明的化合物在對(duì)他汀類藥物治療產(chǎn)生響應(yīng)的患者中具有降低膽固醇的協(xié)同作用。
所以，本發(fā)明的化合物可以在治療中用作降低膽固醇的藥物。此外，由于式(I)化合物具有降低血漿Lp(a)和血漿膽固醇的雙重作用，所以它們?cè)谥委熤锌梢杂糜陬A(yù)防和/或治療急性和慢性動(dòng)脈粥樣硬化。
本發(fā)明的化合物還可以與抗高血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗糖尿病、抗心絞痛、抗炎或抗高血壓的藥物聯(lián)合用于預(yù)防和/或治療上述疾病狀態(tài)。上述藥物的示例包括膽固醇合成抑制劑，如他汀類(例如阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和ZD 4522(也稱為S-4522，Astra Zeneca)、抗氧劑如普羅布考、胰島素敏化劑如PPARγ活化劑(例如G1262570(Glaxo Wellcome))以及格列酮類化合物，例如羅格列酮(Avandia，SmithKline Beecham)、曲格列酮和吡格列酮，鈣通道拮抗劑和抗炎藥物如NSAID。
在將本發(fā)明的化合物用于治療時(shí)，一般是以標(biāo)準(zhǔn)藥物組合物的形式給予。因此，本發(fā)明另一個(gè)方面提供藥物組合物，該組合物包括式(I)化合物以及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。適當(dāng)?shù)馁x形劑和載體是本領(lǐng)域公知的，并且可以根據(jù)所需的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)實(shí)踐進(jìn)行選擇。例如，可以下列口服劑型給予所述組合物片劑，含有諸如淀粉或乳糖之類的賦形劑；膠囊劑、ovules或錠劑，這些劑型可以為單獨(dú)藥物的形式，也可以為與賦形劑的混合物；或者為含有矯味劑或著色劑的酏劑或混懸劑。它們也可以胃腸外注射給藥，例如，通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下注射給藥。在胃腸外給藥時(shí)，最好采用無菌水溶液，該溶液可以含有其他物質(zhì)，如含有足量的鹽或葡萄糖以使該溶液與血液等滲。對(duì)于劑型以及有效劑量的選擇應(yīng)特別根據(jù)所治療的疾病而變化。給藥形式和劑量的選擇在本領(lǐng)域范圍內(nèi)。
當(dāng)口服給藥時(shí)，可以將活性的式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽配制為液體制劑，如糖漿劑、混懸劑或乳劑，也可以配制為固體制劑，如片劑、膠囊劑和錠劑。液體制劑通常由化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在適當(dāng)?shù)囊后w載體如乙醇、甘油、非水溶劑(例如聚乙二醇)、油或水中的混懸液或溶液組成，所述混懸液或溶液中含有懸浮劑、防腐劑、矯味劑或著色劑?？梢圆捎贸Ｒ?guī)用于配制固體制劑的任何適當(dāng)?shù)乃幱幂d體來制備片劑形式的組合物。此類載體的例子包括硬脂酸鎂、淀粉、乳糖、蔗糖和纖維素。可以采用常規(guī)的包囊方法來制備膠囊劑形式的組合物。例如，首先采用標(biāo)準(zhǔn)的載體制備含有活性組分的小球，然后將其填充于硬明膠膠囊中；或者，可以采用任何適當(dāng)?shù)乃幱幂d體如含水樹膠、纖維素、硅酸鹽或油制備分散液或懸浮液，然后將所述分散液或懸浮液填充于軟明膠膠囊中。常規(guī)的胃腸外組合物由化合物或藥學(xué)上可接受的鹽的無菌含水載體或胃腸外可接受的油(如聚乙二醇、聚乙烯基吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油)的溶液或混懸液組成?；蛘撸部梢詫⒃撊芤豪鋬龈稍?，臨給藥前再用適當(dāng)?shù)娜軇?fù)原。典型的栓劑包括式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽(當(dāng)以該種形式給藥時(shí)，它們具有活性)和粘合劑和/或潤(rùn)滑劑，如聚二醇、明膠、可可油或其他低熔點(diǎn)植物或合成蠟或脂肪。優(yōu)選所述化合物為單位劑型，如片劑或膠囊劑。
優(yōu)選用于口服給藥的各劑量單位含有1-250mg(用于胃腸外給藥時(shí)優(yōu)選含有0.1-25mg)的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述量以游離堿形式計(jì)。
本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的化合物通常以每日給藥方案給予患者。對(duì)于成人患者而言，口服劑量可為例如1mg-500mg、優(yōu)選1mg-250mg，靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)給藥劑量為0.1mg-100mg、優(yōu)選0.1-25mg式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述量以游離堿形式計(jì)，每日給予所述化合物1-4次。
本發(fā)明還涉及制備新的式(I)的β-取代的-β-氨基乙基膦酸酯衍生物的方法，該方法將在下面描述。
可以通過下面的方法制備其中Z0為氫的式(I)化合物。該方法包括用式(III)的取代二烷基甲基膦酸酯的陰離子 其中Z1、Z2、R1和R2與前述定義相同，通過用適當(dāng)?shù)膹?qiáng)堿如正丁基鋰或二異丙基氨基化鋰處理式(III)化合物就地形成，處理式(II)的亞胺， 其中Het、X1、X2、X3、X4、X5、B、n和m與前述定義相同。
所述反應(yīng)可以在溶劑中進(jìn)行。適當(dāng)?shù)娜軇┌ǘ颐?、四氫呋?THF)、1，2-二甲氧基乙烷；優(yōu)選的溶劑是THF。適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)溫度是-78℃至25℃，優(yōu)選的反應(yīng)溫度是-78℃至-20℃。適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)時(shí)間是30分鐘至6小時(shí)，優(yōu)選的反應(yīng)時(shí)間是1小時(shí)至3小時(shí)，所述反應(yīng)可通過水解停止，并根據(jù)有機(jī)合成中的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行后處理。
這種式(II)的亞胺化合物可以通過在亞胺形成條件下，用式(V)的伯胺 其中Het、Z0和m與前述定義相同，縮合式(IV)的醛化合物
其中X1、X2、X3、X4、X5、B和n與前述定義相同，得到。適當(dāng)?shù)氖窃谌缑选⑺臍溥秽?、苯、甲苯或乙醇的溶劑中，在催化劑的存在或不存在下進(jìn)行所述縮合。適當(dāng)?shù)拇呋瘎┌ǚ肿雍Y，硫酸鎂，原甲酸三烷基酯，酸如冰醋酸、對(duì)甲苯磺酸、亞硫酰氯、四氯化鈦、三氟化硼醚合物，堿如碳酸鉀。所述反應(yīng)適合在0℃至所用溶劑的沸點(diǎn)溫度下進(jìn)行。對(duì)于活性較低的胺或醛，可以通過將式(IV)的醛和式(V)的胺的等摩爾量的甲苯混合物加熱至回流，并在迪安斯達(dá)克裝置中除去水來進(jìn)行所述反應(yīng)。
當(dāng)式(II)的亞胺包含可以在所用的強(qiáng)堿反應(yīng)條件下反應(yīng)、并引起討厭的副反應(yīng)的取代基時(shí)，即當(dāng)取代基X1、X2、X3、X4、X5中的任一個(gè)為羥基時(shí)，則需要對(duì)這樣一個(gè)取代基進(jìn)行保護(hù)。保護(hù)羥基的一個(gè)特別有效的方法是將其轉(zhuǎn)化為烷基甲硅烷基醚，如三甲基甲硅烷基醚(Me3Si醚或Tms醚)或叔丁基二甲基甲硅烷基醚(tBuMe2Si醚或Tbs醚)。本發(fā)明的構(gòu)成部分為將包括羥基的式(II)的亞胺轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的Tbs醚。適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)反應(yīng)條件為在咪唑存在下、在二甲基甲酰胺中采用叔丁基二甲基甲硅烷基氯。然后，使Tbs保護(hù)的亞胺在強(qiáng)堿性條件下與式(III)的二烷基甲基膦酸酯發(fā)生選擇性加成，從而形成Tbs保護(hù)的β-取代的β-氨基膦酸酯。然后，通過采用本領(lǐng)域技術(shù)人員確知的氟化物試劑脫除Tbs保護(hù)基團(tuán)。適當(dāng)?shù)拿摫Ｗo(hù)反應(yīng)條件包括使Tbs保護(hù)的化合物與氟化四丁基銨在冰乙酸中反應(yīng)。Tbs保護(hù)的亞胺可以通過兩種備選方法制備(1)保護(hù)通過上述常用方法制備的亞胺的OH取代基；或者(2)在形成亞胺之前保護(hù)醛的OH取代基。
將在下面的實(shí)施例中對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，這些實(shí)施例是用于說明本發(fā)明，而不是用于限制本發(fā)明的范圍。在本中請(qǐng)中采用的縮寫如下在各個(gè)表中，“n”代表正，“i”代表異，“s”代表仲，“t”代表叔。在說明書給出的NMR波譜中，分別采用“s”代表單峰，“d”代表雙峰，“t”代表三重峰，“q”代表四重峰，“m”代表多重峰。TsOH代表對(duì)甲苯磺酸一水合物。
溫度以攝氏度表示，熔點(diǎn)未經(jīng)校正。以下實(shí)施例中所制備的化合物是采用紅外光譜(IR)、質(zhì)譜(MS)和核磁共振波譜(NMR)鑒定的。采用薄層層析、氣液或高效液相層析檢測(cè)化合物的純度。
實(shí)施例實(shí)施例1 β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將咪唑(14.8g，217.6mmol)分次加入攪拌好的丁香醛(12.0g，65.83mmol)和氯化叔丁基二甲基甲硅烷(14.9g，98.9mmol)在80mlN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中的混合物中，在室溫下持續(xù)攪拌3小時(shí)。將混合物傾入保持在0℃的水中，向其中加入25％氫氧化銨溶液，直至pH達(dá)到7。用二氯甲烷萃取水相，經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)相。蒸發(fā)溶劑得到油狀物，將其經(jīng)柱層析純化(硅膠，洗脫液CH2Cl2)。以固體的形式得到16.4g(84％)純流分，mp＝74-76℃。
將10.6g(35.8mmol)4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛、3.36g(35.8mmol)3-氨基吡啶和催化量的對(duì)甲苯磺酸(約5mg)的混合物溶解于裝在連接至迪安斯達(dá)克裝置的燒瓶中的80ml甲苯中，回流4小時(shí)。將溶液蒸發(fā)至干得到12.5g(94％)粗亞胺。
將正丁基鋰(36.9ml的1.6M己烷溶液，59.14mmol)滴加至保持在-78℃的100ml無水THF中。加入甲基膦酸二乙酯(9.0g，59.14mmol)，將此混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加N-(3-吡啶基)4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛亞胺(benzaldimine)(11.0g，29.57mmol)在15ml無水THF中的溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌1小時(shí)。經(jīng)GLC對(duì)反應(yīng)樣品進(jìn)行檢測(cè)表明亞胺完全反應(yīng)；反應(yīng)溫度升高至-30℃，然后用飽和氯化銨溶液進(jìn)行水解。將猝滅的反應(yīng)混合物用乙醚萃取，醚萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾、蒸發(fā)至干。將殘余物通過柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化得到11.6g(75％)β-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3，5-二甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯，為褐色油狀物。
將上述化合物(11.6g，22.18mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(27.94g，88.7mmol)置于80ml THF中，向其中滴加15.97g(266.1mmol)冰醋酸。在20℃攪拌3小時(shí)后，GLC測(cè)試顯示Tbs保護(hù)的化合物已經(jīng)完全反應(yīng)。用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，用飽和碳酸氫鹽溶液洗滌有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥。蒸發(fā)萃取物，殘余物經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化。純化的部分用石油醚/CH2Cl2的混合物重結(jié)晶得到2.85g(31％)標(biāo)題化合物，為白色固體，mp＝164-166℃。
MS(m/e)＝410M+，316(100％)M+-C5H4N-NH2，259M+-CH2PO3Et2，94C5H4N-NH2NMR(CDCl3)δ＝8.01，7.94，6.98和6.74(4m，各自1H)芳族H，3-吡啶基6.62(s，2H)芳族H，取代苯基5.3(s，1H)OH5.27(d，1H，J＝3Hz)N-H4.57-4.51(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.13-4.03(m，4H)P-O-CH2-CH33.85(s，6H)Ph-OCH32.25(dxd，J＝7和17Hz，2H)CH-CH2-PO3Et21.29和1.28(2t，J＝7Hz)P-O-CH2-CH3
實(shí)施例2β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將35.0g(0.21mol)4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯甲醛(mp＝98-100℃)，19.8g(0.21mmol)3-氨基吡啶以及催化量的對(duì)甲苯磺酸(約10mg)的混合物溶解于裝在連接至迪安斯達(dá)克裝置的燒瓶中的150ml甲苯中，回流6小時(shí)。通過形成等量的水來指示席夫堿的定量形成。將甲苯溶液蒸發(fā)至干得到51g(100％)粗亞胺。分三次向此物質(zhì)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(47.6g，0.32mol)的DMF溶液(300ml)中加入咪唑(28.7g，0.42mol)，將得到的混合物在室溫下攪拌6小時(shí)。將混合物傾入冰水中，用25％氨水溶液中和，最后用CH2Cl2萃取。干燥(MgSO4)有機(jī)相，過濾并真空蒸發(fā)以除去最后的痕量DMF，直到恒重。得到Tbs保護(hù)的亞胺(75g，99％)，為褐色油狀物，其在下一步驟中直接使用。
向裝在2升兩頸燒瓶中的800ml無水THF中加入正丁基鋰(263ml的1.6M己烷溶液，0.42mol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入甲基膦酸二乙酯(64.0g，0.42mol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘。然后滴加N-(3-吡啶基)4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-甲氧基-5-甲基苯甲醛亞胺(75.0g，0.21mol)的THF溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌90分鐘。經(jīng)GLC對(duì)反應(yīng)樣品進(jìn)行檢測(cè)表明亞胺已經(jīng)完全反應(yīng)，用飽和氯化銨溶液進(jìn)行水解。用二乙醚萃取被猝滅的反應(yīng)混合物，過濾經(jīng)干燥(MgSO4)的醚萃取液，蒸發(fā)至干得到122 g褐色油狀物。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化得到90.5g(86％)淺褐色油。
將冰醋酸(130ml)加入至500ml含β-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯(90.5g，0.18mol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(224.5g，0.71mol)的混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)后，GLC測(cè)試顯示Tbs保護(hù)的化合物已經(jīng)完全反應(yīng)。用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，用飽和碳酸氫鹽溶液洗滌有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥、蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1CH2Cl2/MeOH)純化得到53g純流分。用石油醚/CH2Cl2的混合物重結(jié)晶得到27g(39％)標(biāo)題化合物，為白色固體，mp＝156-158℃。
MS(m/e)＝394M+，300M+-C5H4N-NH2，243M+-CH2PO3Et2，94(100％)C5H4N-NH2NMR(CDCl3)δ＝8.00，7.92，6.97和6.76(4m，各自1H)芳族H，3-吡啶基6.75(m，2H)芳族H，取代的苯基5.75(寬峰，1H)OH5.21(d，1H，J＝3Hz)N-H4.57-4.49(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.12-4.0(m，4H)P-O-CH2-CH33.82(s，3H)Ph-OCH32.24(dxd，J＝7和17Hz，2H)CH-CH2-PO3Et22.22(s，3H)Ph-CH31.28(dxt，J＝1和7Hz)P-O-CH2-CH3實(shí)施例3β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二甲酯 將4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯甲醛(15.0g，90.4mmol)、3-氨基-2，6-二甲基吡啶(11.0g，90.36mmol)和5mg TsOH的混合物溶解于裝在連接至迪安斯達(dá)克裝置的燒瓶中的150ml甲苯中，回流7小時(shí)。將甲苯蒸發(fā)至干得到24.4g(100％)橙色油，其在下一步驟中直接使用。向此物質(zhì)(24.4g，90.4mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(20.4g，135.6mmol)的DMF溶液(150ml)中加入咪唑(12.3g，180.7mmol)，將得到的混合物在室溫下攪拌6小時(shí)。將混合物傾入冰水中，周25％氨水溶液中和，最后用CH2Cl2萃取。蒸發(fā)干燥的溶劑得到粗Tbs保護(hù)的亞胺，為褐色油(28g，81％)。
向120ml無水THF中加入正丁基鋰(39ml，1.6M己烷溶液，62.5mmol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入甲基膦酸二甲酯(7.75g，62.5mmol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘。然后滴加N-[3-(2，6-二甲基吡啶基)]4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-甲氧基-5-甲基苯甲醛亞胺(12.0g，31.3mmol)，將得到的混合物在-78℃攪拌1小時(shí)。用飽和氯化銨溶液進(jìn)行水解，經(jīng)二乙醚萃取猝滅的反應(yīng)混合物。柱層析醚萃取物(硅膠，95/5 CH2Cl2/MeOH)得到5.5g(35％)淺褐色油。
將冰醋酸(7.8g)加入至40ml含β-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-[(3-(2，6-二甲基吡啶基)]-氨基]-乙基膦酸二甲酯(5.5g，10.83mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(13.6g，43.31mmol)的混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)后，用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，洗滌(NaHCO3)有機(jī)相，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化得到2.9g(24％)標(biāo)題化合物，為黃色固體。
MS(m/e)＝394M+，272M++1-C7H8N-NH2，259M+-CH2PO3Me2，122(100％)C7H8N-NH2NMR(CDCl3)δ＝6.73(m，2H)芳族H，取代的苯基6.69和6.49(2d，J＝8.5Hz，2H)芳族H，3-吡啶基5.65(寬s，1H)OH5.03(m，1H，J＝2Hz)N-H
4.56-4.48(m，1H)CH-CH2-PO3Me23.82(s，3H)Ph-OCH33.72和3.69(2d，J＝6.5Hz，4H)P-O-CH32.54和2.37(2s，總共6H)Py-CH32.32-2.24(m，2H)CH-CH2-PO3Et22.23(1s，sH)Ph-CH3實(shí)施例4β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯 向裝在2升兩頸燒瓶中的800ml無水THF中加入正丁基鋰(283ml，1.6M己烷溶液，0.45mol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入甲基膦酸二乙酯(68.9g，0.45mol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加N-[3-(2，6-二甲基吡啶基]4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-甲氧基-5-甲基苯甲醛亞胺(87.0g，0.23mol)的THF溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌90分鐘。經(jīng)驗(yàn)證亞胺已經(jīng)完全反應(yīng)(GLC分析)，用飽和氯化銨溶液進(jìn)行水解，經(jīng)二乙醚萃取猝滅的反應(yīng)混合物，過濾干燥(MgSO4)的醚萃取物，蒸發(fā)至干。柱層析(硅膠，95/5CH2Cl2/MeOH)純化得到102.8g(85％)淺褐色油。
將冰醋酸(138g，2.3mol)加入至500ml含β-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-[(3-(2，6-二甲基吡啶基)]-氨基]-乙基膦酸二乙酯(102.8g，0.19mol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(241.6g，0.77mol)的混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)，GLC測(cè)試顯示Tbs保護(hù)的化合物已經(jīng)完全反應(yīng)。用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，洗滌(NaHCO3)有機(jī)相，干燥(MgSO4)、蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1CH2Cl2/MeOH)純化，經(jīng)石油醚/CH2Cl2的混合物重結(jié)晶，得到31g(45％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，mp＝89-91℃。
MS(m/e)＝422M+，300M+-C7H8N-NH2，122(100％)C7H8N-NH2NMR(CDCl3)δ＝6.73(m，2H)芳族H，取代的苯基6.69和6.48(2d，J＝8Hz，2H)芳族H，3-吡啶基5.68(寬峰，1H)OH5.10(d，1H，J＝2Hz)N-H4.55-4.47(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.15-4.03(m，4H)P-O-CH2-CH33.82(s，3H)Ph-OCH32.54和2.37(2s，總共6H)Py-CH32.30-2.23(m，2H)CH-CH2-PO3Et22.23(1s，3H)Ph-CH31.28和1.27(2t，J＝7Hz，總共6H)P-O-CH2-CH3實(shí)施例5β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二異丙酯 N-[3-(2，6-二甲基吡啶基]4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-甲氧基-5-甲基苯甲醛亞胺(10.0g，26.0mol)和正丁基鋰(32.6ml，1.6M己烷溶液，52.1mmol)以及甲基膦酸二異丙基酯(9.4g，52.1mmol)反應(yīng)，得到化合物β-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-[3-(2，6-二甲基-吡啶基)-氨基]]-乙基膦酸二異丙基酯(5.5g，9.8mmol)，如在實(shí)施例4中所述，通過與四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(12.3g，39mmol)以及乙酸(7.0g，117mmol)反應(yīng)脫保護(hù)得到2.25g標(biāo)題化合物，mp＝81-83℃(石油醚/CH2Cl2)。
MS(m/e)＝450M+，328M+-C7H8N-NH2，122C7H8N-NH2NMR(CDCl3)δ＝6.73(m，2H)芳族H，取代的苯基6.68和6.46(2d，J＝8Hz，2H)芳族H，3-吡啶基5.65(寬峰，1H)OH5.22(m，1H，J＝2Hz)N-H4.75-4.65(m，2H)P-O-CH-(CH3)24.50-4.42(m，1H)CH-CH2-PO3iPr23.82(s，3H)Ph-OCH32.56和2.37(2s，總共6H)Py-CH32.25-2.17(m，2H)CH-CH2-PO3iPr22.23(1s，3H)Ph-CH31.32，1.30，1.26和1.19(4d，J＝7Hz，總共12H)P-O-CH-(CH3)2實(shí)施例6β-(3，4，5-三甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將3，4，5-三甲氧基苯甲醛(10.2g，52mmol)、3-氨基吡啶(4.9g，52mmol)以及催化量的TsOH在50ml甲苯中的混合物在連接至迪安斯達(dá)克疏水器的燒瓶中回流16小時(shí)。將甲苯蒸發(fā)得到14g(99％)相應(yīng)的亞胺，mp＝69-71℃，其在下一步驟中直接使用。
將正丁基鋰(32ml，1.6M己烷溶液，51.5mmol)滴加至80ml保持在-78℃的無水THF中。加入甲基膦酸二乙酯(7.80g，51.5mmol)，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加N-(3-吡啶基)-3，4，5-三甲氧基苯甲醛亞胺(7.0g，25.7mmol)在10ml無水THF中的溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌1小時(shí)。用飽和NH4Cl溶液猝滅反應(yīng)混合物，用二乙醚萃取，干燥(MgSO4)醚萃取物，過濾并蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化殘余物得到6.2g(57％)標(biāo)題化合物，mp＝104-106℃。
MS(m/e)＝424M+，331(100％)M+-C5H4N-NHNMR(CDCl3)δ＝7.99，7.94，7.0和6.76(4m，各自1H)芳族H，3-吡啶基6.61(s，2H)芳族H，取代的苯基5.30(m，1H)N-H4.60-4.53(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.14-4.03(m，4H)P-O-CH2-CH33.83和3.82(3s，總共9H)Ph-OCH32.26(扭曲的dxd，J＝7和17Hz，2H)CH-CH2-PO3Et21.29和1.28(2t，J＝7Hz)P-O-CH2-CH3實(shí)施例7β-(4，5-二甲氧基-3-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將裝在連接至迪安斯達(dá)克裝置的燒瓶中的4，5-二甲氧基-3-羥基苯甲醛(9.6g，52.9mmol)、溶解在150ml甲苯中的3-氨基-2，6-二甲基吡啶(6.45g，52.9mmol)以及5mg TsOH的混合物回流16小時(shí)。將溶液蒸發(fā)至干得到15.1g(100％)固體，其在下一步驟中直接使用。向此物質(zhì)(15.1g，52.9mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(11.93g，79mmol)的DMF溶液(85ml)中加入咪唑(7.2g，105.7mmol)，將得到的混合物在室溫下攪拌6小時(shí)。將混合物傾入冰水中，用25％氨水溶液中和，最后用CH2Cl2萃取。蒸發(fā)干燥的溶劑得到粗Tbs保護(hù)的亞胺，為褐色油(21.2g，100％)。
向裝在兩頸燒瓶中的90ml無水THF中加入正丁基鋰(31ml，1.6M己烷溶液，50mmol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入甲基膦酸二乙酯(7.6g，50mmol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加N-[3-(2，6-二甲基吡啶基)]3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4，5-二甲氧基苯甲醛亞胺(10.0g，25mmol)的THF溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌90分鐘。用二乙醚萃取被猝滅(NH4Cl溶液)的反應(yīng)混合物，過濾被干燥(MgSO4)的醚萃取物，蒸發(fā)得到14.5g(103％)褐色油狀的粗產(chǎn)物。將冰醋酸(19g，315mmol)加入至70ml含β-(3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-4，5-二甲氧基苯基)-β-[N-[(3-(2，6-二甲基吡啶基)]-氨基]-乙基膦酸二乙酯(14.5g，26.3mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(33.1g，105mmol)的混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)后，用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，洗滌(NaHCO3)有機(jī)相，干燥(MgSO4)、蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化，經(jīng)石油醚/CH2Cl2的混合物重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(3.2g，29％)，為淡黃色固體，mp＝121-123℃。
MS(m/e)＝438M+，317M+-C7H8N-NH，287M+-CH2-PO3Et2，122(100％)C7H8N-NH2NMR(CDCl3)δ＝7.4(寬峰，1H)OH6.70和6.44(2d，J＝8.5Hz，2H)芳族H，3-吡啶基6.61和6.46(2m，總共2H)芳族H，取代的苯基5.11(m，1H)N-H4.55-4.46(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.12-4.01(m，4H)P-O-CH2-CH33.88和3.83(2s，總共6H)Ph-OCH32.41和2.37(2s，總共9H)Py-CH32.31-2.24(m，2H)CH-CH2-PO3Et21.27(t，J＝7Hz，總共6H)P-O-CH2-CH3
實(shí)施例8β-(3-羥基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將裝在連接至迪安斯達(dá)克裝置的燒瓶中的3-羥基-4-甲氧基-5-甲基苯甲醛(12g，72.3mmol)、溶解在160ml甲苯中的3-氨基-2，6-二甲基吡啶(8.82g，72.3mmol)以及5mg TsOH的混合物回流12小時(shí)。將甲苯蒸發(fā)得到19.5g(100％)油狀物，其在下一步驟中直接使用。向此物質(zhì)(19.5g，72.3mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(16.3g，108.4mmol)的DMF溶液(85ml)中加入咪唑(9.8g，144.6mmol)，將得到的混合物在室溫下攪拌6小時(shí)。將混合物傾入冰水中，用25％氨水溶液中和，最后用CH2Cl2萃取。蒸發(fā)干燥的溶劑得到粗Tbs保護(hù)的亞胺(27.8g，100％)，為褐色油狀物。
向裝在兩頸燒瓶中的120ml無水THF中加入正丁基鋰(42ml，1.6M己烷溶液，72.4mmol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入甲基膦酸二乙酯(11g，72.4mmol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加N-[3-(2，6-二甲基吡啶基)]3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-甲氧基-5-甲基苯甲醛亞胺(13.9g，36.2mmol)的THF溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌90分鐘。用二乙醚萃取猝滅(NH4Cl溶液)的反應(yīng)混合物，將干燥后的醚萃取物經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)，得到18.0g(93％)褐色油。將冰醋酸(24g，403mmol)加入至90ml含β-(3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-[(3-(2，6-二甲基吡啶基)]-氨基]-乙基膦酸二乙酯(18g，33.6mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(42g，134mmol)混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用二氯甲烷萃取，洗滌(NaHCO3)有機(jī)相，干燥(MgSO4)、蒸發(fā)。經(jīng)柱層析純化(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)，經(jīng)石油醚/CH2Cl2的混合物重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(3.6g，24％)，為淡黃色固體，mp＝128-130℃。
MS(m/e)＝422M+，301M+-C7H8N-NH，271M+-CH2-PO3Et2，122(100％)C7H8N-NH2NMR(CDCl3)δ＝8.0(寬峰，1H)OH6.77和6.62(2m，總共2H)芳族H，取代的苯基6.69和6.44(2d，J＝8.5Hz，2H)芳族H，3-吡啶基5.09(d，1H，J＝3Hz)N-H4.55-4.47(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.10-3.95(m，4H)P-O-CH2-CH33.81(s，3H)Ph-OCH32.36和2.28(3s，總共9H)Py-CH3和Ph-CH32.30-2.23(m，2H)CH-CH2-PO3Et21.24(2t，J＝7 Hz，總共6H)P-O-CH2-CH3實(shí)施例9β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-α-甲基-乙基膦酸二乙酯 向裝在兩頸燒瓶中的50ml無水THF中加入正丁基鋰(19.5ml，1.6M己烷溶液，31.3mmol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入乙基膦酸二乙酯(5.2g，31.3mmol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加N-[3-(2，6-二甲基吡啶基)]4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-甲氧基-5-甲基苯甲醛亞胺(6.0g，15.6mmol)的THF溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌90分鐘。猝滅(NH4Cl)反應(yīng)混合物，經(jīng)二乙醚萃取，過濾干燥(MgSO4)的醚萃取物并蒸發(fā)至干。經(jīng)柱層析(硅膠，95/5CH2Cl2/MeOH)純化得到3.9g(46％)淡褐色油。
將冰醋酸(5.2g，86mmol)加入至20ml含β-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-[(3-(2，6-二甲基吡啶基)]-氨基]-α-甲基-乙基膦酸二乙酯(3.9g，7mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(9.0g，29mmol)混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)后，用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，洗滌(NaHCO3)有機(jī)相，干燥(MgSO4)、蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化，經(jīng)揮發(fā)油/乙醇的混合物重結(jié)晶得到1.6g(24％)標(biāo)題化合物，為白色固體。mp＝194-196℃。MS(m/e)＝436M+，314M+-C7H8N-NH2，271M+-CH(CH3)-PO33Et2，122(100％)C7H8N-NH2NMR(CDCl3)δ＝6.66(m，2H)芳族H，取代的苯基6.65和6.37(2d，J＝8Hz，2H)芳族H，3-吡啶基5.68(寬峰，1H)OH4.97(寬峰，1H)N-H4.64-4.57(m，1H)CH-CH(Me)-PO3Et24.15-4.0(m，4H)P-O-CH2-CH33.81(s，3H)Ph-OCH32.56和2.37(2s，總共6H)Py-CH32.36-2.24(m，1H)CH-CH(Me)-PO3Et22.23(1s，3H)Ph-CH31.29和1.26(2t，J＝7Hz，總共6H)P-O-CH2-CH31.15(2d，J＝7.5和17.5Hz，3H)CH-CH(Me)-PO3Et2
實(shí)施例10β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-α，α-二氟-乙基膦酸二乙酯 在整個(gè)反應(yīng)中反應(yīng)溫度保持在-78℃。向150ml預(yù)冷卻至-78℃的無水THF中依次加入正丁基鋰(25ml，1.6M己烷溶液，40mmol)、二異丙胺(5.6ml，40mmol)、四甲基乙二胺(6.0ml，40mmol)、二氟甲基膦酸二乙酯(5g，27mmol)以及N-[3-(2，6-二甲基吡啶基)]4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-甲氧基-5-甲基苯甲醛亞胺(5.1g，13mmol)，加入每種物質(zhì)后攪拌15分鐘，將得到的混合物在-78℃攪拌1小時(shí)。GLC分析顯示亞胺化合物已經(jīng)完全反應(yīng)，猝滅(NH4Cl)反應(yīng)混合物，用二乙醚萃取，過濾干燥(MgSO4)的醚萃取物、蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，95/5CH2Cl2/MeOH)純化得到5.5g(73％)淡褐色油。
將冰醋酸(7.0g，116mmol)加入至30ml含β-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-[(3-(2，6-二甲基吡啶基)]-氨基]-α，α-二氟乙基膦酸二乙酯(5.5g，9.7mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(12.2g，39mmol)混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)后，用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，洗滌(NaHCO3)有機(jī)相，干燥(MgSO4)、蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化得到0.32g(7％)標(biāo)題化合物，為褐色油狀物。
MS(m/e)＝458M+，271(100％)M+-CF2-PO3Et2NMR(CDCl3)δ＝6.80(m，2H)芳族H，取代的苯基6.74和6.60(2d，J＝8Hz，2H)芳族H，3-吡啶基4.97(d，J＝2Hz，1H)N-H4.83-4.73(m，1H)CH-CH2-PO3Et2
4.3-4.1(m，4H)P-O-CH2-CH33.85(s，3H)Ph-OCH32.54和2.38(2s，總共6H)Py-CH32.24(1s，3H)Ph-CH31.31和1.27(2t，J＝7Hz，總共6H)P-O-CH2-CH3實(shí)施例11β-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將裝在連接至迪安斯達(dá)克疏水器的燒瓶中的3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯甲醛(4.5g，18.3mmol)、3-氨基吡啶(1.8g，19.5mmol)和催化量TsOH在50ml甲苯中的混合物回流12小時(shí)。將甲苯蒸發(fā)得到5.8g(98％)相應(yīng)的亞胺，其在下一步驟中直接使用。
將正丁基鋰(11.5ml，1.6M己烷溶液，18.3mmol)滴加至30ml保持在-78℃的無水THF中，加入甲基膦酸二乙酯(2.8g，18.3mmol)，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加N-(3-吡啶基)3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯甲醛亞胺(3.0g，9.2mmol)在5ml無水THF中的溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌1小時(shí)。用二乙醚萃取被飽和NH4Cl溶液猝滅的反應(yīng)混合物，干燥(MgSO4)醚萃取物，過濾和蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，95/5 CH2Cl2/MeOH)純化殘余物，得到2.1g(48％)標(biāo)題化合物，為油狀物。
IRcm-11290P＝O，1050和1022P-O-C。
實(shí)施例12β-(2，4-二甲基-3-羥苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將裝在連接至迪安斯達(dá)克裝置的燒瓶中的2，4-二甲基-3-羥基苯甲醛(3g，20.3mmol)、溶解在30ml甲苯中的5-氨基-2-甲基吡啶(2.1g，19.4mmol)和5mg TsOH的混合物回流4小時(shí)。將甲苯蒸發(fā)得到4.8g(100％)油狀物，其在下一步驟中直接使用。向此物質(zhì)(4.8g，20mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(4.5g，30.1mmol)的DMF溶液(20ml)中加入咪唑(2.72g，40mmol)，將得到的混合物在室溫下攪拌6小時(shí)。將混合物傾入冰水中，用25％氨水溶液中和，最后用CH2Cl2萃取。蒸發(fā)被干燥的溶劑得到粗Tbs保護(hù)的亞胺(6.1g，87％)，為褐色油狀物。向裝在兩頸燒瓶中的60ml無水THF加入正丁基鋰(21ml，1.6M己烷溶液，34.5mmol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入甲基膦酸二乙酯(5.2g，34.6mmol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加Tbs保護(hù)的亞胺(6.13g，17.3mmol)的THF溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌90分鐘。用二乙醚萃取被猝滅(NH4Cl溶液)的反應(yīng)混合物，使干燥的醚萃取物經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)，得到8.6g(98％)褐色油。將冰醋酸(12g，204mmol)加入至40ml含β-(2，4-二甲基-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯(8.6g，17mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(21.4g，68mmol)混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)后，用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，洗滌(NaHCO3)有機(jī)相，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化得到標(biāo)題化合物(0.7g，10％)，為淡黃色油。
MS(m/e)＝392M+，284M+-C6H6N-NH
NMR(CDCl3)δ＝8.0(寬峰，1H)OH7.75，6.82(2d，2H)和6.65(d，1H)芳族H，5-吡啶基6.95和6.90(2m，2H)芳族H，取代的苯基5.04(d，1H)N-H4.85-4.75(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.15-4.05(m，4H)P-O-CH2-CH32.47(s，3H)Py-CH32.30和2.20(2s，6H)Ph-CH32.25-2.04(m，2H)CH-CH2-PO3Et21.28和1.27(2t，J＝7 Hz，總共6H)P-O-CH2-CH3實(shí)施例13β-(3-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將裝在連接至迪安斯達(dá)克裝置的燒瓶中的3-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯甲醛(3.5g，21.1mmol)、溶解在70ml甲苯的5-氨基-2-甲基吡啶(2.21g，20.5mmol)和5mg TsOH的混合物回流6小時(shí)。將溶液蒸發(fā)至干得到5.4g(100％)油狀物，其在下一步驟中直接使用。將溶解在20ml DMF中的此化合物(5.4g，21mmol)加入至叔丁基二甲基甲硅烷基氯(4.76g，32mmol)在50ml DMF中的溶液中，隨后加入咪唑(2.9g，42mmol)，將得到的混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將此混合物傾入冰水中，用25％氨水溶液中和，最后用CH2Cl2萃取。蒸發(fā)被干燥的溶劑，得到粗Tbs保護(hù)的亞胺(7.8g，100％)，為褐色油狀物。向80ml裝在兩頸燒瓶中的無水THF中加入正丁基鋰(26ml，1.6M己烷溶液，42mmol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入甲基膦酸二乙酯(6.4g，42mmol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加Tbs保護(hù)的亞胺(7.8g，21mmol)的THF溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌90分鐘。用二乙醚萃取被猝滅(NH4Cl溶液)的反應(yīng)混合物，過濾被干燥(MgSO4)的醚萃取物并蒸發(fā)，得到11g(100％)粗產(chǎn)物，為褐色油狀物。將冰醋酸(15g，253mmol)加入至60ml含β-(3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-5-甲氧基-4-甲基苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯(11g，21mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(26.6g，84mmol)混合物的THF溶液中。在20℃攪拌3小時(shí)后，用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，洗滌(NaHCO3)有機(jī)相，干燥(MgSO4)和蒸發(fā)。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2Cl2/MeOH)純化，通過石油醚/CH2Cl2的混合物重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(1.6g，19％)，為淡黃色固體，mp＝138-140℃。
MS(m/e)＝408M+，301M+-C6H6N-NH，257M+-CH2-PO3Et2(100％)NMR(CDCl3)δ＝約9.5(寬峰，1H)OH7.8，6.80(2d，2H)和6.64(d，1H)芳族H，5-吡啶基6.56和6.38(2m，總共2H)芳族H，取代的苯基5.11(d，1H)N-H4.54-4.46(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.10-3.95(m，4H)P-O-CH2-CH33.82(s，3H)Ph-OCH32.35(s，3H)Py-CH32.31-2.18(m，2H)CH-CH2-PO3Et22.08(s，3H)Ph-CH31.26和1.24(2t，J＝7Hz，總共6H)P-O-CH2-CH3
實(shí)施例14β-(3，5-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯 將溶解在裝于連接至迪安斯達(dá)克裝置的燒瓶中的70ml甲苯中的3.5g(17.9mmol)3，5-二甲氧基-4-羥基甲基苯甲醛(mp＝118-120℃)、1.87g(17.3mmol)5-氨基-2-甲基吡啶以及催化量的對(duì)甲苯磺酸(約10mg)的混合物回流4小時(shí)。將甲苯溶液蒸發(fā)至干得到5.1g(100％)粗亞胺。向此物質(zhì)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(4.03g，26.75mmol)的DMF溶液(50ml)中加入咪唑(2.43g，35.7mmol)，將得到的混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將混合物傾入冰水中，用25％氨水溶液中和，最后用CH2Cl2萃取，干燥(MgSO4)有機(jī)相，過濾并真空蒸發(fā)以除去最后的痕量DMF，直到恒重。得到Tbs保護(hù)的亞胺(7.1g，99％)，為褐色油狀物，其在下一步驟中直接使用。向150ml裝在500ml兩頸燒瓶中的無水TMF中加入正丁基鋰(22.3ml，1.6M己烷溶液，35.7mmol)，將得到的溶液在-78℃攪拌15分鐘。加入甲基膦酸二乙酯(5.4g，35.7mmol)后，將混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后滴加N-(5-(2-甲基吡啶基))-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-3，5-二甲氧基苯甲醛亞胺(7.1g，17.9mmol)的THF溶液，將得到的混合物在-78℃攪拌90分鐘。經(jīng)GLC對(duì)反應(yīng)樣品進(jìn)行檢測(cè)表明亞胺已經(jīng)完全反應(yīng)，用飽和氯化銨溶液進(jìn)行水解。用二乙醚萃取被猝滅的反應(yīng)混合物，過濾被干燥(MgSO4)的醚萃取物，蒸發(fā)至干得到9.8g(101％)淡褐色油。
將冰醋酸(13ml)加入至50ml含β-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯(9.8g，18mmol)和四丁基氟化銨三水合物(TBAF)(22.4g，71mmol)混合物的THF溶液中。在20℃攪拌16小時(shí)，GLC測(cè)試顯示Tbs保護(hù)的化合物沒有完全反應(yīng)。經(jīng)二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，用飽和碳酸氫鹽溶液洗滌有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，蒸發(fā)。然后將殘余物在2ml三氟醋酸和70ml 1％的HCl-乙醇溶液的混合物中攪拌4小時(shí)。反應(yīng)混合物在碳酸氫鈉溶液和二氯甲烷之間分配，分離有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥。經(jīng)柱層析(硅膠，9/1 CH2C12/MeOH)純化得到1.6g(21％)標(biāo)題化合物，其為緩慢固化的油。
MS(m/e)＝438M+，287M+-CH2PO3Et2NMR(CDCl3)δ＝7.90，6.84(2d，各自1H)和6.68(dd，1H)芳族H，5-吡啶基6.6(s，2H)芳族H，取代的苯基5.18(d，1H，J＝3Hz)N-H4.72(s，2H)HO-CH2-Ph4.57-4.52(m，1H)CH-CH2-PO3Et24.15-4.05(m，4H)P-O-CH2-CH33.81(s，6H)Ph-OCH32.24(dxd，J＝7和15Hz，2H)CH-CH2-PO3Et21.31和1.30(2t，J＝7Hz)P-O-CH2-CH3實(shí)施例15合成化合物總結(jié)表1概括了式(I)的氨基膦酸酯(其中X5＝H，m＝0，n＝0，Z0＝H，在本文中稱為式(Ia))，可以根據(jù)前述方法制備。

表1
實(shí)施例16生物數(shù)據(jù)A.脂蛋白(a)降低活性1.體外數(shù)據(jù)測(cè)定式(I)化合物是否能夠降低獼猴肝細(xì)胞的原代培養(yǎng)物中apo(a)的產(chǎn)生。
試驗(yàn)方案根據(jù)C.Guguen-Guillouzo和A.Guillouzo的“肝細(xì)胞的分離和培養(yǎng)”(“Isolated and Cultured Hepatocytes”)(les editionsInserm Paris和John Libbey Eurotext London(1986))的第1-12頁中的“成年和胎兒肝細(xì)胞制備方法”(“Methods for preparation of adult andfetal hepatocytes”)一文中所述的兩步膠原酶灌注方法，由雄性成年獼猴的肝中分離肝細(xì)胞。
采用錐蟲藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞的存活率。然后將細(xì)胞以每2cm2中1.5-2.105個(gè)存活細(xì)胞的濃度接種于24孔組織培養(yǎng)板中，每孔中包括500μl含有10％胎牛血清的Williams E組織培養(yǎng)液。將細(xì)胞于37℃的CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)中、在20μM受試化合物的乙醇溶液存在下培養(yǎng)6-24小時(shí)。每一種化合物采用四個(gè)孔。將煙酸和類固醇激素類化合物用作參照物以驗(yàn)證該測(cè)定體系，因?yàn)橐阎@些化合物能夠降低人的Lp(a)。在只有乙醇存在下培養(yǎng)對(duì)照細(xì)胞。
采用商業(yè)可獲得的試劑盒，通過ELISA直接測(cè)定培養(yǎng)基中分泌的Lp(a)的量。按照A.L.White等，Joumal of Lipid Research，第34卷，第509-517頁(1993)中所述洗滌并溶解細(xì)胞，并且如上所述測(cè)定Lp(a)的細(xì)胞含量。培養(yǎng)基中Lp(a)濃度的變化以相對(duì)于對(duì)照板值的百分比表示。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)編號(hào)為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38和39的化合物的測(cè)定濃度為20μM時(shí)，它們可將apo(a)分泌降低-10至-35％。
2.體內(nèi)數(shù)據(jù)研究方案將體重為3-7kg的雄性獼猴分組，每組3-4只。在進(jìn)行處理前，對(duì)它們的血漿Lp(a)水平進(jìn)行兩個(gè)月的監(jiān)測(cè)以確定穩(wěn)定的基礎(chǔ)值。以25mg/kg/天的劑量經(jīng)口管飼法給予受試化合物4周，在第28天測(cè)定Lp(a)。給藥結(jié)束后，維持動(dòng)物4-6周的無處理期，于是它們的血漿Lp(a)水平恢復(fù)至處理前的水平。該種對(duì)照為測(cè)定的Lp(a)降低是由受試化合物的藥理活性所致提供了證據(jù)。在第-7天和21或28天，收集禁食過夜的血樣于EDTA中，經(jīng)高敏感的特異性ELISA試驗(yàn)測(cè)定Lp(a)。結(jié)果(每組3-4只動(dòng)物的平均值)以給藥前(-7天)的％表示。
結(jié)果在試驗(yàn)條件下檢測(cè)選擇的式(I)化合物的體內(nèi)藥理活性。編號(hào)為14和9的化合物可以將血漿Lp(a)降低-22％至-52％(在第21天或第28天測(cè)定的值，相對(duì)于第-7天給藥前的變化％)。
B.膽固醇降低活性研究方案將體重為3-7kg的雄性獼猴分組，每組3-4只。在進(jìn)行處理前，對(duì)它們的血漿膽固醇、LDL膽固醇和apo B水平進(jìn)行一個(gè)月的監(jiān)測(cè)以確定穩(wěn)定的基礎(chǔ)值。以25mg/kg/天的劑量經(jīng)口管飼法給予受試化合物4周，在第7、14、21和28天測(cè)定apo B、LDL膽固醇和血漿總膽固醇。給藥結(jié)束后，維持動(dòng)物4周的無處理期，于是它們的膽固醇水平恢復(fù)至處理前的水平。該種對(duì)照為測(cè)定的膽固醇降低是由受試化合物的藥理活性所致提供了證據(jù)。在第-1天和第7、14、21或28天，收集禁食過夜的血樣于EDTA中，經(jīng)ELISA方法(Morwell診斷)測(cè)定apo B，經(jīng)免疫濁度法(Boehringer)測(cè)定LDL膽固醇，并經(jīng)酶促方法(CHOD-PAP，Boehringer)測(cè)定總血漿膽固醇。結(jié)果(每組3-4只動(dòng)物的平均值)以給藥前(第-1天)的％表示。
結(jié)果在所述試驗(yàn)條件下檢測(cè)選擇的式(I)化合物的體內(nèi)藥理活性。編號(hào)為14和9的化合物可以將apo B降低-16％至-45％，將LDL膽固醇降低-10％至-22％，將血漿總膽固醇降低-10％至-25％(在第21天或第28天測(cè)定的值，相對(duì)于第-1天給藥前的變化％)。
權(quán)利要求
1.一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中X1、X2、X3、X4和X5獨(dú)立為氫、羥基、羥甲基、C1-C2烷氧基甲基、直鏈或支鏈C1-C8烷基、直鏈或支鏈C1-C8烷氧基；或者X2可以與X3結(jié)合，或者X4可以與X5結(jié)合，形成任選被C1-C4烷基取代的5元至6元亞烷二氧基環(huán)；或者X4可以與X5結(jié)合形成任選被C1-C4烷基取代的5元至6元亞烷基環(huán)；R1和R2獨(dú)立為氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基；B為CH2、CH2-CH2或CH＝CH；n為0或1；Z0為H、直鏈或支鏈C1-C4烷基、?；鶊F(tuán)R3-CO，其中R3為1-4個(gè)碳原子的烷基、C1-C4全氟烷基；Z1、Z2獨(dú)立為氫、氯、溴、氟、直鏈或支鏈C1-C4烷基；m為0-4；Het為含至少一個(gè)氮原子的任選取代的雜芳基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中X1為氫或甲基；X2為甲氧基、乙氧基、甲基或羥基；X3為氫、羥基、甲氧基、羥甲基、甲氧基甲基、甲基或乙基；X4為氫、甲氧基或甲基；X5為氫。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中n為0或者n為1，B為CH2。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2獨(dú)立為C1-C3烷基。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R1和R2獨(dú)立為乙基或異丙基。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物，其中m為0。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物，其中Z1和Z2為氫。
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物，其中Z0為氫。
9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的化合物，其中Het為任選取代的吡啶基、嘧啶基或吡唑基。
10.權(quán)利要求9的化合物，其中Het為3-吡啶基或3-(2，6-二甲基吡啶基)。
11.一種藥物組合物，它包含權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑。
12.權(quán)利要求1定義的化合物在制備對(duì)抗疾病的藥物中的用途。
13.權(quán)利要求1定義的化合物在制備用于降低血漿apo(a)和脂蛋白(a)水平、降低血漿apo B和LDL膽固醇水平以及在降低血漿總膽固醇的藥物中的用途。
14.權(quán)利要求13的用途，用于生產(chǎn)通過降低血漿apo(a)和脂蛋白(a)水平而增加血栓溶解來治療或預(yù)防血栓形成的藥物。
15.權(quán)利要求13的用途，用于生產(chǎn)通過降低血漿apo(a)和脂蛋白(a)水平來治療或預(yù)防血管成形術(shù)后的再狹窄的藥物。
16.權(quán)利要求13的用途，用于生產(chǎn)治療或預(yù)防血膽固醇過多的藥物。
17.權(quán)利要求13的用途，用于生產(chǎn)通過降低血漿apo(a)和脂蛋白(a)水平來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
18.權(quán)利要求13的用途，用于生產(chǎn)通過降低血漿脫輔基蛋白質(zhì)B和LDL膽固醇水平來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
19.權(quán)利要求13的用途，用于生產(chǎn)通過降低對(duì)他汀類藥物(statins)治療具有抗性的患者的膽固醇來治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
20.權(quán)利要求13的用途，用于與降低膽固醇合成的化合物如他汀類藥物一起來生產(chǎn)治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
21.權(quán)利要求1的化合物，選自β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-5-(2-甲氧基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥苯基)-β-[N-5-(2-甲氧基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-5-(2-甲基吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二甲酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，5-二甲基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲基-4-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3，4，5-三甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，4，5-三甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3-乙氧基-4-羥基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-乙氧基-4-羥基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3-乙氧基-4-羥基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-乙氧基-4-羥基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基)]-乙基膦酸二異丙酯；β-(4，5-二甲氧基-3-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(4，5-二甲氧基-3-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(3-羥基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-羥基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二異丙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-α-甲基-乙基膦酸二乙酯；β-(4-羥基-3-甲氧基-5-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基)吡啶基))-氨基]-α，α-二氟-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(2，4-二甲基-3-羥苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(2，4-二甲基-3-羥苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(2，4-二甲基-3-羥苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-β-[N-(3-吡啶基)-氨基]-乙基膦酸二乙酯；β-(3，5-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-β-[N-(5-(2-甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯；和β-(3，5-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-β-[N-(3-(2，6-二甲基吡啶基))-氨基]-乙基膦酸二乙酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的β－取代的－β－氨基乙基膦酸酯衍生物、以及它們?cè)诮档脱獫{apo(a)、Lp(a)、apo B、apo B相關(guān)的脂蛋白(低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白)水平以及在降低血漿總膽固醇水平中的用途。
文檔編號(hào)C07F9/58GK1518553SQ01817711
公開日2004年8月4日 申請(qǐng)日期2001年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月23日
發(fā)明者H·T·范, L·M·阮, V·V·迪普, R·阿佐萊, E·J·尼索爾, C·L·本特岑, R·J·伊費(fèi), H T 范, 伊費(fèi), 尼索爾, 本特岑, 衾, 迪普, 阮 申請(qǐng)人:艾雷克斯產(chǎn)品公司