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酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法

文檔序號(hào):3576765閱讀:722來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于一種調(diào)控低聚糖聚合度的方法,具體地說(shuō)涉及一種酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明提供的一種酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法,把酶法降解多糖與膜分離相結(jié)合,通過(guò)選擇不同的膜介質(zhì)及膜的孔徑大小,將中空纖維或平板膜超濾器與酶降解反應(yīng)器相連接,對(duì)不同聚合度的低聚糖進(jìn)行即時(shí)分離,大于截留分子量的分子返回反應(yīng)釜繼續(xù)降解,超濾液再經(jīng)納濾器分離,除掉低活性的單糖、二糖和水等小分子化合物,得到不同聚合度的低聚糖。
具體方案是將多糖原料溶解成溶液,按0.5-3.0%(重量百分比)加入降解酶進(jìn)行降解,本發(fā)明指的多糖原料降解包括果膠、卡拉膠、瓊膠、褐藻膠、黃原膠、田菁膠、葡聚糖、木聚糖、甘露聚糖、肝素、硫酸多糖等原料的生物降解,降解酶可以是幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、菠蘿蛋白酶、溶菌酶、脂肪酶、殼聚糖酶、果膠酶等中任選一種或幾種,反應(yīng)溫度15-80℃,pH=3.0-10.0,粘度下降至40-60%開(kāi)始超濾;中空纖維、平板膜超濾器與酶降解反應(yīng)器相連接,先將溶液泵入中空纖維、平板膜超濾器,對(duì)不同聚合度的低聚糖進(jìn)行分離,膜的孔徑以透過(guò)相應(yīng)分子量的低聚糖為準(zhǔn)則,但必須截留住酶分子,通常采用截流分子量為2,000-100,000的膜,小于截留分子量的部分透過(guò)膜,大于截留分子量的分子返回反應(yīng)釜繼續(xù)降解;超濾液泵入卷式平板膜納濾器分離,納米濾膜截流分子量為100-2,000,其選擇原則以透過(guò)單糖、二糖和水為準(zhǔn),通常選用對(duì)MgSO4截留率為80-95%的膜;經(jīng)以上步驟,除掉低活性的單糖、二糖和水等小分子化合物,得到不同聚合度的低聚糖。
本發(fā)明的反應(yīng)分離耦合操作方式,可以是連續(xù)操作或間歇操作,原料補(bǔ)充方式可以是間歇補(bǔ)料,也可以是連續(xù)補(bǔ)料。間歇補(bǔ)料是在膜分離器排出一定量后,向反應(yīng)釜中加入等體積的原料液,連續(xù)補(bǔ)料在膜分離器濾出的同時(shí)向反應(yīng)釜中滴加原料液,但補(bǔ)加速率須與濾出速率相等。
本發(fā)明與現(xiàn)有的批次降解后層析分離比較,具有如下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明采用酶法降解殼聚糖與膜分離相耦合可以使產(chǎn)生的低聚糖及時(shí)分離,有效地阻止其進(jìn)一步降解。
2、降解酶可連續(xù)重復(fù)使用,提高了酶的使用效率。
3、通過(guò)選擇不同孔徑的膜的調(diào)控操作條件可以獲得不同聚合度的低聚糖。
4、本發(fā)明過(guò)程簡(jiǎn)捷,減少了分離過(guò)程引起的污染,提高了分離效率,過(guò)程可連續(xù)進(jìn)行,有利于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
實(shí)施例1在酶降解反應(yīng)器1中將0.5%殼聚糖溶解于pH5.6、濃度為0.05M的醋酸鈉緩沖液中,過(guò)濾除渣,加入1%殼聚糖酶為降解酶,反應(yīng)溫度35℃,反應(yīng)時(shí)間4小時(shí),降解殼聚糖,待溶液粘度下降至40-60%即可進(jìn)行超濾。中空纖維膜超濾器卷式平板膜納濾器組裝為一個(gè)膜組件2并通過(guò)輸液泵3與酶降解反應(yīng)器1相連接,將不同聚合度的寡聚糖進(jìn)行分離,中空纖維超濾膜表面積為2m2,切割分子量為2,000-10,000,小于截留分子量的部分透過(guò)膜,得到超濾液,大于截留分子量的分子經(jīng)控制閥4返回酶降解反應(yīng)器1繼續(xù)降解。本例采用連續(xù)補(bǔ)料方式。經(jīng)中空纖維超濾膜得到的超濾液再泵入2英寸卷式平板膜納濾器分離,其膜面積0.5m2,截流分子量為100-2,000,除掉低活性的單糖、二糖和大量水,得到聚合度為3-20的殼寡糖,并由產(chǎn)物收集器5收集。
實(shí)施例2將2%果膠溶于20L的水溶液中,加入3.0%的果膠酶,反應(yīng)溫度50℃,反應(yīng)時(shí)間1小時(shí),pH3.0,平板膜超濾器超濾,采用間歇補(bǔ)料,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-20的果膠寡聚糖。
實(shí)施例33%的卡拉膠水溶液中加入0.5%脂肪酶,反應(yīng)溫度80℃,pH10,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-18的卡拉膠寡聚糖。
實(shí)施例4瓊膠水溶液中加入幾丁質(zhì)酶,反應(yīng)溫度15℃,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-18的瓊膠寡聚糖。
實(shí)施例5膠水溶液中加入溶菌酶,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-18的褐藻寡聚糖實(shí)施例6黃原膠水溶液中加入菠蘿蛋白酶,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-18的黃原膠寡聚糖。
實(shí)施例7田菁膠水溶液中加入纖維素酶,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-18的田菁膠寡聚糖。
實(shí)施例8葡聚糖水溶液中加入果膠酶與菠蘿素酶,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-20的葡聚寡聚糖實(shí)施例9糖水溶液中加入纖維素酶與溶菌酶,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-20的木聚寡聚糖。
實(shí)施例10甘露聚糖水溶液中加入果膠酶,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-20的甘露寡聚糖。
實(shí)施例11肝素水溶液中加入果膠酶,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-18的肝素寡聚糖。
實(shí)施例12硫酸多糖水溶液中加入果膠酶,其余操作同實(shí)施例1,得到聚合度為3-18的硫酸寡聚糖。
實(shí)施例13殼聚糖的酶降解反應(yīng)將1%的殼聚糖溶于pH=5.6,0.05M的醋酸緩沖液中,按酶∶底物=1∶20加入酶,在45℃下反應(yīng),以反應(yīng)液粘度下降的百分率表征各種酶的降解活性。用平氏粘度計(jì)測(cè)定初始和降解12小時(shí)后反應(yīng)液通過(guò)測(cè)量段的下降時(shí)間t0、t1,則殼聚糖粘度下降的百分率為t0-t1/t0。
表1各種酶降解殼聚糖活性

實(shí)施例14間歇補(bǔ)料與連續(xù)補(bǔ)料實(shí)驗(yàn)反應(yīng)總體積20L,試驗(yàn)條件與實(shí)施例1相同,投料1小時(shí)后開(kāi)始超濾,同時(shí)以等速連續(xù)補(bǔ)加原料和醋酸,超濾濾出液60L,經(jīng)過(guò)納濾得濃縮液1.8L,在間歇補(bǔ)料與連續(xù)補(bǔ)料中,不同聚合度殼聚糖所占比例如表2所示,連續(xù)補(bǔ)料使3-4糖相對(duì)量降低,而6-8糖相對(duì)量增加。
表2間歇補(bǔ)料與連續(xù)補(bǔ)料中,3-10糖的相對(duì)量

權(quán)利要求
1.一種酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法,包括如下步驟將多糖原料溶解成溶液,加入0.5-3.0%(重量百分比)降解酶,反應(yīng)溫度15-80℃,pH=3.0-10.0,中空纖維、平板膜超濾器與酶降解反應(yīng)器相連接進(jìn)行分離,其超濾器截流分子量為2,000-100,000,大于截留分子量的分子返回反應(yīng)釜繼續(xù)降解,超濾液再經(jīng)卷式平板膜納濾器分離,納米濾膜截流分子量為100-2,000,得到聚合度3-20的低聚糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法,其特征在于,其中多糖降解指包括果膠、卡拉膠、瓊膠、褐藻膠、黃原膠、田菁膠、葡聚糖、木聚糖、甘露聚糖、肝素、硫酸多糖等原料的生物降解。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法,其特征在于,其中降解酶可以是幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、菠蘿蛋白酶、溶菌酶、脂肪酶、殼聚糖酶、果膠酶等中任選一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法,其特征在于,降解液粘度下降至40-60%開(kāi)始超濾。
全文摘要
一種酶法制備不同聚合度低聚糖的調(diào)控方法,把酶法降解多糖與膜分離相結(jié)合,通過(guò)選擇不同的膜介質(zhì)及膜的孔徑大小,將中空纖維或平板膜超濾器與酶降解反應(yīng)器相連接,對(duì)不同聚合度的低聚糖進(jìn)行即時(shí)分離,超濾液再經(jīng)納濾器分離,除掉低活性的單糖、二糖和水等小分子化合物,得到不同聚合度的低聚糖。采用這種技術(shù)可生產(chǎn)多種不同系列及不同聚合度的低聚糖,無(wú)活性的單糖和二糖生成量低,較高聚合度的多糖可以實(shí)現(xiàn)再反應(yīng)和分離連續(xù)操作。由于實(shí)現(xiàn)連續(xù)操作,酶可重復(fù)使用,提高降解酶的使用效率,適合于規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H3/00GK1414001SQ0113684
公開(kāi)日2003年4月30日 申請(qǐng)日期2001年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月26日
發(fā)明者杜昱光, 白雪芳, 曲天明, 李曙光 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
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