本申請(qǐng)涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多效生物菌酶的制備方法。

背景技術(shù)：

生物酶普遍用于紡織、食品加工、醫(yī)藥、煙草陳化、飼料等行業(yè)，但是應(yīng)用于土壤和種子處理中的情況還是比較少。

在我國(guó)廣大的農(nóng)村，大量農(nóng)業(yè)用肥都是工業(yè)化生產(chǎn)的無(wú)機(jī)化肥，雖然對(duì)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)效果顯著，但是由于長(zhǎng)期單施或偏施化肥，抑制了土壤中微生物群體及其生物酶群體的積極作用，導(dǎo)致土壤中有機(jī)質(zhì)嚴(yán)重減少，土壤出現(xiàn)板結(jié)，綜合肥力下降，生態(tài)環(huán)境破壞，農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)降低。

播種的種子在經(jīng)過(guò)常規(guī)的種子播種后，由于前期的種子的簡(jiǎn)單處理，存在種子的發(fā)芽率不理想的情況。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本申請(qǐng)的目的在于提供一種生物菌酶的制備方法，用于改善農(nóng)田土壤品質(zhì)和刺激種子發(fā)芽。

本申請(qǐng)的生物菌酶的制備方法，包括如下步驟：

步驟s1、在培養(yǎng)基中培育生物菌；

步驟s2、從培養(yǎng)基中提取生物菌；

步驟s3、將提取的生物菌在一定溫度下保存8個(gè)月～14個(gè)月，得生物菌酶預(yù)制體；

步驟s4、將生物菌酶預(yù)制體進(jìn)行液態(tài)凍干，得到生物菌酶。

可選地，步驟s1的方法包括：

步驟r1、原料稱取和混合，原料包括玉米、黃豆、馬鈴薯、黃米中的一種或多種；

步驟r2、對(duì)混合后的原料進(jìn)行處理；

步驟r3、在處理后的原料中植入生物菌的菌種，并進(jìn)行培育。

可選地，原料包括玉米和黃豆，步驟s1中稱取玉米10～20份，黃豆25～35份，上述份數(shù)均為重量份數(shù)。

可選地，在步驟r1和步驟r2之間，對(duì)混合后的原料進(jìn)行粉碎。

可選地，粉碎后的玉米和黃豆的粒徑為40～100目。

可選地，步驟r3中的生物菌的菌種為枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌中的一種或多種。

優(yōu)選地，步驟s3中，將生物菌在一定溫度下保存12個(gè)月，得到生物菌酶預(yù)制體。

可選地，將生物菌酶預(yù)制體進(jìn)行液態(tài)凍干的方法包括：

步驟t1、將生物菌酶預(yù)制體與保護(hù)劑進(jìn)行充分混合后預(yù)凍；

步驟t2、將預(yù)凍后的生物菌酶預(yù)制體進(jìn)行干燥，得到生物菌酶。

可選地，步驟t1中使用的保護(hù)劑為：甘油、蔗糖、海藻糖中的一種或多種。

本申請(qǐng)的生物菌酶的制備方法，提出了培育生物菌酶的具體步驟，經(jīng)過(guò)上述步驟，制得的生物菌酶，一方面，能夠改善土壤中微生物群體的數(shù)量，改善土壤中的有機(jī)質(zhì)，增強(qiáng)土壤肥力，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，提高農(nóng)作物的產(chǎn)品品質(zhì)；另一方面，本申請(qǐng)制得的生物菌酶，能夠增大種子活性，刺激種子的胚發(fā)芽，提高種子的發(fā)芽率。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本申請(qǐng)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本申請(qǐng)中記載的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)講，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1是本申請(qǐng)的生物菌酶的制備方法的流程圖；

圖2是本申請(qǐng)的培育生物菌的方法的流程圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本申請(qǐng)?zhí)岢鲆环N多效生物菌酶的制備方法，圖1是本申請(qǐng)的生物菌酶的制備方法的流程圖，如圖1所示，該生物菌的生物菌酶的制備方法，包括如下步驟：

步驟s1、在培養(yǎng)基中培育生物菌。

圖2是本申請(qǐng)的培育生物菌的方法的流程圖。如圖2所示，培育生物菌的方法包括：

步驟r1、原料稱取和混合，原料包括玉米、黃豆、馬鈴薯、黃米中的一種或多種；

其中，上述各原料可以在生物菌的培育過(guò)程中提供充足的蛋白質(zhì)和多聚糖，而且培育后產(chǎn)生的渣料還可以直接撒放至土壤中，改良土壤外觀。

可選地，原料包括玉米和黃豆，步驟s1中稱取玉米10～20份，黃豆25～35份，上述份數(shù)均為重量份數(shù)。

步驟r2、對(duì)混合后的原料進(jìn)行處理；

步驟r2中對(duì)混合后的原料進(jìn)行處理后，原料中的碳、氮析出，且原料中的多聚糖也被分解?？蛇x地，步驟r2具體包括：對(duì)混合后的原料進(jìn)行蒸或者煮，并將其晾涼。進(jìn)一步地，將蒸或者煮好的原料晾涼至40℃以下，例如晾至室溫。進(jìn)一步地，以步驟r1中稱取玉米10～20份，黃豆25～35份為例，對(duì)混合后的原材料進(jìn)行煮時(shí)，所加的水的份數(shù)為50～70份，上述份數(shù)均為重量份數(shù)。

示例性地，對(duì)混合后的原料進(jìn)行煮的操作過(guò)程如下：將原料與水按照一定的重量比加入至加熱容器(例如加熱釜)中攪拌混合均勻并加熱，攪拌速度為80～100r/min，加熱溫度為90～96℃，加熱時(shí)間為10～20min。

需要說(shuō)明的是，在步驟r1和步驟r2之間，對(duì)混合物進(jìn)行粉碎。以使得原料的粒徑減小，顆粒破碎，可以有效提高后續(xù)處理的效率和效果。示例性地，本發(fā)明實(shí)施例中選擇，粉碎后的玉米和黃豆的粒徑為40～100目?？蛇x地，將原料以超微粉碎機(jī)粉碎，每次粉碎的原料的量可以根據(jù)超微粉碎機(jī)的容量進(jìn)行選擇，超微粉碎機(jī)轉(zhuǎn)速為5000～10000r/min，粉碎時(shí)間為1～5min，得到原料粉末。

本發(fā)明實(shí)施例中，在步驟r1和步驟r2之間，還可以對(duì)混合后的原料進(jìn)行紫外殺菌處理，消除原料中的雜菌，可有利于提高培育的生物菌的質(zhì)量，且在殺菌的過(guò)程中還不會(huì)對(duì)多聚糖等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的養(yǎng)分產(chǎn)生損害?？蛇x地，將原料(例如，黃豆、玉米)置于干燥密封容器中進(jìn)行紫外殺菌，殺菌溫度為15～25℃，殺菌時(shí)間為20～40min。

步驟r3、在處理后的原料中植入生物菌的菌種，并進(jìn)行培育。

培育在培養(yǎng)基中進(jìn)行。植入的生物菌的菌種可以根據(jù)生物菌的使用情況以及生物菌的作用進(jìn)行選擇，可選的生物菌的菌種可以為：枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、涇陽(yáng)鏈霉菌、菌根真菌、棕色固氮菌、光合菌群、凝結(jié)芽孢桿菌、米曲霉、淡紫擬青霉中的一種或多種。

關(guān)于加入生物菌的特性，將在后續(xù)進(jìn)行詳細(xì)解釋。

步驟s2、從培養(yǎng)基中提取生物菌。

示例性地，可以通過(guò)撈取等方式提取生物菌。提取生物菌后的渣料可以直接播撒放至土壤中，用于改良土壤結(jié)構(gòu)。

步驟s3、將提取的生物菌在一定溫度下保存8個(gè)月～14個(gè)月，得生物菌酶預(yù)制體。

優(yōu)選地，將生物菌在一定溫度下保存12個(gè)月，得到生物菌酶預(yù)制體。將生物菌在一定溫度下保存12個(gè)月，得到的生物菌酶預(yù)制體經(jīng)液態(tài)凍干后的效果較好。

示例性地，步驟s3中的保存生物菌的一定溫度的溫度范圍為0～40℃，優(yōu)選4～10℃，或者直接在室溫、室壓下進(jìn)行保存。這給生物菌酶預(yù)制體在常溫下就可保存，與現(xiàn)有的生物酶的制備相比，工藝簡(jiǎn)單、節(jié)省成本。

步驟s4、將生物菌酶預(yù)制體進(jìn)行液態(tài)凍干，得到生物菌酶。

可選地，將生物菌酶預(yù)制體進(jìn)行液態(tài)凍干的方法包括：

步驟t1、將生物菌酶預(yù)制體與保護(hù)劑進(jìn)行充分混合后預(yù)凍；

優(yōu)選地，步驟t1選擇的保護(hù)劑為甘油、蔗糖、海藻糖中的一種或多種。需要說(shuō)明的是，生物菌酶預(yù)制體與保護(hù)劑進(jìn)行混合時(shí)，按照生物菌酶預(yù)制體17～20份，保護(hù)劑0.5～1.5份進(jìn)行混合，其中，生物菌酶預(yù)制體19份，保護(hù)劑1份時(shí)，制得的生物菌酶的活性較高，上述份數(shù)均為重量份數(shù)。

其中，預(yù)凍溫度控制在-20℃～-30℃，預(yù)凍時(shí)間隨菌體量表面積而定。

步驟t2、將預(yù)凍后的生物菌酶預(yù)制體進(jìn)行干燥，得到生物菌酶。

生物菌酶的干燥溫度在-20℃～-30℃下進(jìn)行干燥，干燥后的生物菌酶的水分含量低于3％為宜。

本申請(qǐng)的生物菌酶的制備方法，提出了培育生物菌酶的具體步驟，經(jīng)過(guò)上述步驟，制得的生物菌酶，一方面，能夠改善土壤中微生物群體的數(shù)量，改善土壤中的有機(jī)質(zhì)，增強(qiáng)土壤肥力，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，提高農(nóng)作物的產(chǎn)品品質(zhì)；另一方面，本申請(qǐng)制得的生物菌酶，能夠增大種子活性，刺激種子的胚發(fā)芽，提高種子的發(fā)芽率。

下面對(duì)加入的生物菌的特性，進(jìn)行詳細(xì)解釋。

植入的生物菌的具有以下特性：枯草芽孢桿菌：增加作物抗逆性、固氮；巨大芽孢桿菌：釋放出可溶磷鉀元素及鈣、硫、鎂、鐵、鋅、鉬、錳等中微量元素；地衣芽孢桿菌：抗病、殺滅有害菌；蘇云金芽孢桿菌：殺蟲，對(duì)鱗翅目等節(jié)肢動(dòng)物有特異性的毒殺活性；側(cè)孢芽孢桿菌：促根、殺菌及降解重金屬；膠質(zhì)芽孢桿菌：有溶磷、釋鉀和固氮功能，分泌多種酶，增強(qiáng)作物對(duì)一些病害的抵抗力；涇陽(yáng)鏈霉菌：具有增強(qiáng)土壤肥力、刺激作物生長(zhǎng)的能力；菌根真菌：擴(kuò)大根系吸收面，增加對(duì)原根毛吸收范圍外的元素(特別是磷)的吸收能力；棕色固氮菌：固定空氣中的游離氮，增產(chǎn)；光合菌群：是肥沃土壤和促進(jìn)動(dòng)植物生長(zhǎng)的主力部隊(duì)；凝結(jié)芽孢桿菌：可降低環(huán)境中的氨氣、硫化氫等有害氣體，提高果實(shí)中氨基酸的含量；米曲霉：使秸稈中的有機(jī)質(zhì)成為植物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)，提高土壤有機(jī)質(zhì)，改善土壤結(jié)構(gòu)；淡紫擬青霉：對(duì)多種線蟲都有防治效能，是防治根結(jié)線蟲最有前途的生防制劑。

在上述各生物菌中，多種生物菌功效相互補(bǔ)充，能加速作物生長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)增產(chǎn)高產(chǎn)的效果。示例性地，巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌共存可等在代謝過(guò)程中產(chǎn)生大量的植物內(nèi)源酶，可明顯提高作物對(duì)氮、磷、鉀等營(yíng)養(yǎng)元素的吸收率；膠凍樣芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌共存可促進(jìn)作物根系生長(zhǎng)，須根增多，使得生物菌代謝產(chǎn)生的植物內(nèi)源酶和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑經(jīng)由根系進(jìn)入植物體內(nèi)，促進(jìn)葉片光合作用，調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)元素往果實(shí)流動(dòng)，膨果增產(chǎn)效果明顯，與施用化肥相比，在等價(jià)投入的情況下可增產(chǎn)15％—30％；側(cè)孢芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌共存可使果實(shí)中vc含量提高30％以上，可溶性糖提高2—4度；乳酸菌、嗜酸乳桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌共存可提高果實(shí)中必需氨基酸(賴氨酸和蛋氨酸)、維生素b族和不飽和脂肪酸等的含量，果實(shí)口感好，耐儲(chǔ)藏，賣價(jià)高；米曲菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌共存可加速有機(jī)物質(zhì)的分解，為作物制造速效養(yǎng)分、提供動(dòng)力，能分解連作有毒有害物質(zhì)，防止重茬。

示例性地，本發(fā)明實(shí)施例中的生物菌用在種子處理過(guò)程中時(shí)，可以選擇枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌等中的一種或多種。

此外，本申請(qǐng)實(shí)施例中的步驟r3中的生物菌的菌種為將從空氣或者土壤中獲得的菌群，并在特定環(huán)境的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)所得。

在一個(gè)例子中，培養(yǎng)枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的具體方式為：分別將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌置入各自的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，在溫度為37℃條件下，斜面培養(yǎng)16h；將兩個(gè)培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到各自茄瓶中，培養(yǎng)的條件均為在溫度37℃條件下，斜面培養(yǎng)16h；將茄瓶培養(yǎng)后的菌種接種到含相應(yīng)菌種培養(yǎng)基的種子罐中培養(yǎng)，培養(yǎng)的條件均為溫度為37℃，通氣量為30m³/h、種子罐轉(zhuǎn)速為175r/min，培養(yǎng)12～16h；將培養(yǎng)出的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌置入發(fā)酵罐中發(fā)酵，發(fā)酵的溫度為37℃，通氣量為350m³/h、發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速為96r/min，發(fā)酵時(shí)間為16～20h；對(duì)得到的發(fā)酵液進(jìn)行壓濾，分別收集枯草芽孢桿菌濾餅和地衣芽孢桿菌濾餅；將收集到的濾餅分別進(jìn)行沸騰干燥，干燥的進(jìn)口溫度均為80℃，干燥后得到固體的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌。

在另一個(gè)例子中，培養(yǎng)巨大芽孢桿菌的具體方式為：將巨大芽孢桿菌置入馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，在溫度為33℃條件下，斜面培養(yǎng)16h；將得到的單菌落轉(zhuǎn)接到茄瓶中，培養(yǎng)巨大芽孢桿菌的溫度為33℃，繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)間為16h；將茄瓶培養(yǎng)后的菌種接種到含相應(yīng)菌種培養(yǎng)基的種子罐中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28℃，通氣量為30m³/h、種子罐轉(zhuǎn)速為175r/min，培養(yǎng)10～15h；將培養(yǎng)出的巨大芽孢桿菌置入發(fā)酵罐中發(fā)酵，發(fā)酵的溫度為28～30℃，通氣量為350m³/h、發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速為96r/min，發(fā)酵時(shí)間為40～48h；通過(guò)壓濾法收集發(fā)酵液，得到巨大芽孢桿菌濾餅；將收集到的濾餅分別進(jìn)行沸騰干燥，干燥的進(jìn)口溫度均為80℃，干燥后得到巨大芽孢桿菌粉末。

盡管已描述了本申請(qǐng)的優(yōu)選實(shí)施例，但本領(lǐng)域技術(shù)人員一旦得知了基本創(chuàng)造性概念，則可對(duì)這些實(shí)施例作出另外的變更和修改。所以，所附權(quán)利要求意欲解釋為包括優(yōu)選實(shí)施例以及落入本申請(qǐng)范圍的所有變更和修改。顯然，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本申請(qǐng)進(jìn)行各種改動(dòng)和變型而不脫離本申請(qǐng)的精神和范圍。這樣，倘若本申請(qǐng)的這些修改和變型屬于本申請(qǐng)權(quán)利要求及其等同技術(shù)的范圍之內(nèi)，則本申請(qǐng)也意圖包含這些改動(dòng)和變型在內(nèi)。