(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種新型的金磁納米顆粒及其制備方法，以及在表面增強(qiáng)拉曼光譜法檢測(cè)三聚氰胺中的應(yīng)用。

(二)

背景技術(shù)：

三聚氰胺(melamine，c3n3(nh2)3)，俗稱密胺、蛋白精。其本身的毒性較低，成年人體內(nèi)的三聚氰胺，大部分可以排出體外，但如果與三聚氰酸同時(shí)存在，會(huì)反應(yīng)生成人體無法溶解的氰尿酸三聚氰胺，三聚氰胺的長期攝入將對(duì)人體造成嚴(yán)重危害，引發(fā)膀胱結(jié)石、腎結(jié)石甚至膀胱癌等疾病。尤其在胃酸參與作用下，三聚氰胺在體內(nèi)的消化過程中會(huì)自身部分轉(zhuǎn)化為三聚氰酸，這些生成的三聚氰酸與未轉(zhuǎn)化的三聚氰胺結(jié)合而形成結(jié)晶，造成腎結(jié)石，進(jìn)而堵塞腎小管，甚至導(dǎo)致腎衰竭。2007年3月，在美國含三聚氰胺的寵物食品引發(fā)貓狗等動(dòng)物死亡，2008年8月，在中國含三聚氰胺的嬰幼兒奶粉，使兒童出現(xiàn)了不同程度的中毒事件，甚至出現(xiàn)腎結(jié)石及泌尿系統(tǒng)的代謝疾病。

目前檢測(cè)三聚氰胺的方法有高效液相色譜法(hplc)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(lc-ms)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gc-ms)、試劑盒檢測(cè)法(elisa)、紅外光譜法、濁度法等。hplc法靈敏度高、選擇性好、可以同時(shí)檢測(cè)多種物質(zhì)，但檢測(cè)之前需要對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜耗時(shí)的前處理，不適合現(xiàn)場快速檢測(cè)。lc-ms法及gc-ms法設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜、測(cè)試費(fèi)用高且需要專業(yè)人員，僅限實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。紅外光譜法檢測(cè)速度快、試樣用量少，操作簡單，但分析靈敏度較低，定量分析誤差較大。elisa法操作簡單、分析時(shí)間較短，方便大批量篩選，但重現(xiàn)性不佳且需要專業(yè)人員在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)操作，難以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速分析。

直接運(yùn)用表面增強(qiáng)拉曼光譜對(duì)三聚氰胺進(jìn)行檢測(cè)，無法達(dá)到檢測(cè)限要求，檢測(cè)靈敏度較低。一般方法制備的金磁納米顆粒包覆的金顆粒較少，磁濃縮后利用表面增強(qiáng)拉曼光譜測(cè)量也達(dá)不到檢測(cè)限要求，給表面增強(qiáng)拉曼光譜的快速檢測(cè)特點(diǎn)的發(fā)揮帶來較大的影響，無法普及。

(三)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種新型的fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒及其制備方法與應(yīng)用，該金磁納米顆粒能在外磁場中快速分離，表面包覆具有良好表面增強(qiáng)拉曼效應(yīng)的金納米顆粒。以該金磁納米顆粒作為sers的檢測(cè)基底，將檢測(cè)樣品快速濃縮，提高檢測(cè)靈敏度，利用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)快速檢測(cè)三聚氰胺。

本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒，由如下方法制備得到：

(1)金納米顆粒溶液的制備

將水加熱至95～101℃，然后加入氯金酸，攪拌均勻后加入3wt％～6wt％檸檬酸鈉溶液，保溫反應(yīng)5～15min，制得金納米顆粒溶液，0～10℃保存?zhèn)溆茫?/p>

所述氯金酸與水的質(zhì)量比為1：4000～6000；

所述檸檬酸鈉溶液與水的體積比為1：500～1500；

(2)磁納米顆粒的修飾

將fe3o4納米顆粒分散于蒸餾水a(chǎn)中，然后加入無水乙醇a，用氨水(濃度為20wt％～25wt％)調(diào)節(jié)ph為9～11，超聲(功率為200w～600w，下同)4～6min，加入四乙氧基硅烷，超聲反應(yīng)5～7h，之后磁分離收集顆粒，加到無水乙醇b中，用冰乙酸調(diào)節(jié)ph為5～7，超聲4～6min，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷和3-巰丙基三乙氧基硅烷，超聲反應(yīng)16～20h，之后磁分離收集顆粒，洗滌后即得表面修飾有-nh2和-sh的fe3o4/sio2納米顆粒，分散在蒸餾水b中備用；

所述蒸餾水a(chǎn)、無水乙醇a、無水乙醇b的體積用量以fe3o4納米顆粒的質(zhì)量計(jì)各自為450～550ml/g、2250～2750ml/g、2250～2750ml/g；

所述四乙氧基硅烷、3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-巰丙基三乙氧基硅烷的體積用量以fe3o4納米顆粒的質(zhì)量計(jì)各自為1.5～2.5ml/g、0.75～1.25ml/g、0.75～1.25ml/g；

(3)fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒的合成

取步驟(2)制備的分散在蒸餾水b中的表面修飾有-nh2和-sh的fe3o4/sio2納米顆粒，磁分離棄去上清液后，加入步驟(1)制備的金納米顆粒溶液中，振蕩(采用機(jī)械振蕩器，功率為150～300轉(zhuǎn)/分，下同)3.5～4.5h，之后磁分離棄去上清液，收集固體顆粒，即完成一次金納米顆粒的組裝，將所得固體顆粒再加入步驟(1)制備的金納米顆粒溶液中，重復(fù)上述組裝過程3～4次，得到具有核殼結(jié)構(gòu)的fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒；

所述一次金納米顆粒的組裝，推薦所述金納米顆粒溶液的體積用量以fe3o4/sio2納米顆粒的質(zhì)量計(jì)為2～3ml/mg；所述重復(fù)上述組裝過程，所述金納米顆粒溶液的體積用量以前次得到的固體顆粒的質(zhì)量計(jì)為2～3ml/mg；

所得fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒分散于蒸餾水中保存，后續(xù)應(yīng)用時(shí)，只要通過磁分離棄去上清液，即可收集產(chǎn)品并進(jìn)行使用。

以上所述“蒸餾水a(chǎn)”、“蒸餾水b”、“無水乙醇a”、“無水乙醇b”沒有特殊的含義，均為通常意義上的“蒸餾水”、“無水乙醇”，標(biāo)記為“a”、“b”只是用于區(qū)分不同操作步驟中用到的“蒸餾水”、“無水乙醇”。

本發(fā)明制得的fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒可作為檢測(cè)基底應(yīng)用于表面增強(qiáng)拉曼光譜法檢測(cè)三聚氰胺中。具體的，所述應(yīng)用的方法為：

(a)拉曼基底氨基乳清酸修飾的金磁納米顆粒(fe3o4/au/aoa)的合成

將5-氨基乳清酸(aoa)溶解于磷酸鹽緩沖溶液(pbs)中，接著加入活性酯聚乙二醇巰基(nhs-peg-sh)，在室溫(20～30℃，下同)下振蕩反應(yīng)6～7h后得到混合液，將所得混合液用pbs溶液透析10～14h(將脫落的-nhs活性酯基團(tuán)及多余的氨基乳清酸去除)，與本發(fā)明制備的fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒混合，在室溫下振蕩反應(yīng)24～25h，之后磁分離收集固體顆粒，用蒸餾水洗滌后，即得氨基乳清酸修飾的金磁納米顆粒，分散于蒸餾水中并于0～10℃下保存?zhèn)溆茫?/p>

所述的磷酸鹽緩沖溶液由磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉溶于水中配制而成，且所述的磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉與水的質(zhì)量比為1：14：34：4000；

所述磷酸鹽緩沖溶液的體積用量以5-氨基乳清酸的質(zhì)量計(jì)為150～250ml/g；

所述5-氨基乳清酸、fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒、活性酯聚乙二醇巰基的質(zhì)量比為1：0.5～1∶2；

(b)氨基乳清酸修飾的羅丹明(rbic/aoa)溶液的制備

將異硫氰酸羅丹明b(rbic)溶于二甲基甲酰胺a中，得到溶液a；將5-氨基乳清酸(aoa)溶于二甲基甲酰胺b中，得到溶液b；將所述溶液a與溶液b等體積混合，室溫下振蕩反應(yīng)23～25h，之后用二甲基甲酰胺c透析以除去多余異硫氰酸羅丹明b，得到氨基乳清酸修飾的羅丹明溶液；

所述二甲基甲酰胺a的體積用量以異硫氰酸羅丹明b的質(zhì)量計(jì)為45～55ml/g；

所述二甲基甲酰胺b的體積用量以5-氨基乳清酸的質(zhì)量計(jì)為170～175ml/g；

所述“二甲基甲酰胺a”、“二甲基甲酰胺b”、“二甲基甲酰胺c”沒有特殊的含義，均指通常意義上的二甲基甲酰胺，標(biāo)記為“a”、“b”、“c”只是用于區(qū)分不同操作步驟中所用到的二甲基甲酰胺；

(c)三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)

取步驟(a)合成的氨基乳清酸修飾的金磁納米顆粒(溶液形式)、步驟(b)制備的氨基乳清酸修飾的羅丹明溶液、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，將三者混合配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，振蕩反應(yīng)10～20min后，將所述的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別用移液槍轉(zhuǎn)移到凹面載玻片上，并于凹面載玻片下用一圓形釹鐵硼磁鐵將金磁納米顆粒聚集成點(diǎn)，用激光拉曼光譜儀照射，激光波長為785nm，功率為120mw，積分時(shí)間為1s，分別以標(biāo)準(zhǔn)溶液中三聚氰胺的濃度為橫坐標(biāo)，以異硫氰酸羅丹明b拉曼光譜圖中位于1510cm^-1處的伸縮振動(dòng)峰峰強(qiáng)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，得到三聚氰胺定量分析的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

所述的標(biāo)準(zhǔn)溶液中，氨基乳清酸修飾的金磁納米顆粒的濃度范圍在2～3mg/ml，氨基乳清酸修飾的羅丹明的濃度范圍在0.3～0.5μg/ml，三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品的濃度范圍在1～15μg/ml。

與已有的技術(shù)相比較，本發(fā)明的有益效果如下：

1.在拉曼光譜中，rbic在1510cm^-1處的伸縮振動(dòng)峰通常以很強(qiáng)的特征峰出現(xiàn)，峰強(qiáng)度的對(duì)數(shù)值在一定濃度范圍內(nèi)與三聚氰胺的濃度成正比，當(dāng)檢測(cè)體系中存在三聚氰胺時(shí)，三聚氰胺與氨基乳清酸的超分子氫鍵作用，將fe3o4/au/aoa基底與rbic/aoa間的距離拉近，產(chǎn)生較強(qiáng)的sers增強(qiáng)效應(yīng)，從而可以通過測(cè)定rbic在1510cm^-1處的特征拉曼峰強(qiáng)來間接檢測(cè)待測(cè)體系中三聚氰胺的濃度，如圖1所示。

2.采用檸檬酸鈉還原法制備粒徑分布均勻的金納米顆粒，再以fe3o4納米顆粒作為磁性核心，將金納米顆粒組裝在fe3o4表面，形成形貌一致、分散性好、具有核殼結(jié)構(gòu)的fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒，最終通過磁聚集的方法，拉近分子間的距離，省去傳統(tǒng)的離心沉淀或濃縮過程。金磁納米顆粒的透射電子顯微鏡(tem)分析與edx分析，如圖2、圖3所示。

3.磁納米顆粒能在外磁場中快速分離，在其表面包覆具有良好表面增強(qiáng)拉曼散射效應(yīng)的金納米顆粒并使用這種顆粒作為sers檢測(cè)基底，使樣品不但易于分離，省去傳統(tǒng)的離心沉淀或過柱分離的復(fù)雜過程，還能將樣品快速濃縮，從而提高檢測(cè)靈敏度。與傳統(tǒng)使用的高效液相色譜、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法相比，其在達(dá)到國家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下，可以做到戶外直接檢測(cè)，縮短檢測(cè)時(shí)間，無需使用大型儀器，亦不需要專業(yè)檢測(cè)人員，便捷快速。

4.在檢測(cè)體系中存在三聚氰胺時(shí)，三聚氰胺上攜帶的三個(gè)-nh2分別與氨基乳清酸上的-nh-、-c＝o產(chǎn)生超分子氫鍵作用，將fe3o4/au/aoa基底與rbic/aoa間的距離拉近，從而使基底上的au納米顆粒與rbic染料分子的距離拉近，產(chǎn)生較強(qiáng)的sers增強(qiáng)效應(yīng)，從而提高了檢測(cè)的靈敏度和選擇性，降低了檢測(cè)背景的干擾，相比于其它檢測(cè)手段(如高效液相色譜、質(zhì)譜、薄層色譜等)，拉曼光譜技術(shù)更加簡單便捷、易應(yīng)用于現(xiàn)場快速檢測(cè)，如圖4所示。

5.異硫氰酸羅丹明b拉曼光譜圖中位于1510cm^-1的伸縮振動(dòng)峰的強(qiáng)度的對(duì)數(shù)在一定濃度范圍內(nèi)與三聚氰胺濃度成正比，且線性關(guān)系良好。所以可以通過檢測(cè)rbic染料分子在1510cm^-1的峰強(qiáng)來間接檢測(cè)牛奶中的三聚氰胺，相比于直接檢測(cè)(如以金納米顆粒為基底的拉曼光譜直接檢測(cè)技術(shù))，該間接檢測(cè)技術(shù)具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，單個(gè)樣品的測(cè)試時(shí)間小于10分鐘，如圖5、圖6所示。

(四)附圖說明

圖1：以金磁納米顆粒為基底的rbic拉曼光譜圖譜，可看出rbic濃度為1μg/ml時(shí)，1510cm^-1處特征峰峰強(qiáng)大約為14000多，1648cm^-1處特征峰峰強(qiáng)大約為12000，相比較單純金納米顆粒為基底時(shí)，峰強(qiáng)略有下降，但仍有較高水準(zhǔn)，可以將其作為基底進(jìn)行三聚氰胺的檢測(cè)。rbic在1510cm^-1處的伸縮振動(dòng)峰通常以很強(qiáng)的特征峰出現(xiàn)，峰強(qiáng)度的對(duì)數(shù)值在一定濃度范圍內(nèi)與三聚氰胺的濃度成正比，可以通過測(cè)定rbic在1510cm^-1處的特征拉曼峰強(qiáng)對(duì)牛奶中三聚氰胺濃度進(jìn)行定量分析。

圖2：不同分辨率下fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒的tem圖像。可以看出，fe3o4/sio2磁性納米顆粒的粒徑較大，在顆粒的邊界可以看到一層無定形的sio2包覆層，且在磁性粒子的表面吸附了大量au納米顆粒，吸附的au納米顆粒粒徑均勻，呈球形，從圖中可以看出au納米顆粒緊密地接合在了fe3o4/sio2納米顆粒的表面。

圖3：fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒的edx譜圖。從能譜分析中可以看出，au元素的信號(hào)峰和fe元素信號(hào)峰都十分明顯，而圖中c元素峰來源于銅網(wǎng)的超薄碳支膜，cu元素峰來源于電鏡銅網(wǎng)，說明fe3o4納米顆粒的表面覆蓋有au元素。

圖4：不添加(a)及添加(b)三聚氰胺時(shí)牛奶中fe3o4/au/aoa作基底檢測(cè)的拉曼圖譜。

圖5：以異硫氰酸羅丹明b拉曼光譜圖中位于1510cm^-1處的伸縮振動(dòng)峰峰強(qiáng)的對(duì)數(shù)對(duì)三聚氰胺濃度作圖，測(cè)量三聚氰胺濃度為2.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、15.0μg/ml。獲得fe3o4/au/aoa納米顆粒作基底快速檢測(cè)牛奶中三聚氰胺的工作曲線，繪于圖5。

圖6：待測(cè)樣品中三聚氰胺的檢測(cè)，測(cè)定三聚氰胺濃度為10.0μg/ml時(shí)，異硫氰酸羅丹明b拉曼光譜圖中位于1510cm^-1處的伸縮振動(dòng)峰峰強(qiáng)為214，如圖6示。將其與由標(biāo)準(zhǔn)曲線算出的理論值進(jìn)行比較。

(五)具體實(shí)施方式：

下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。

實(shí)施例1：金納米顆粒的制備

量取50ml水加入至燒瓶中加熱至99℃，500r/min機(jī)械攪拌下，稱取10.0mg氯金酸迅速加入到燒瓶中，觀察到氯金酸攪拌均勻后，快速加入50μl5％檸檬酸鈉溶液。保持99℃，待溶液顏色不再發(fā)生變化時(shí)停止反應(yīng)(反應(yīng)時(shí)間為6min)，制得金納米顆粒溶液，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)施例2：磁納米顆粒的修飾

取20.0mgfe3o4納米顆粒，用蒸餾水洗滌四次，洗完后磁分離收集，用10ml蒸餾水分散，加入三頸瓶中，并加入50ml無水乙醇及0.5ml氨水，在ph＝10的條件下，超聲振蕩5min，緩慢加入40μlteos，在超聲振蕩作用下反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后磁分離收集顆粒，用無水乙醇，蒸餾水分別洗兩次，最后用50ml無水乙醇分散，加入0.5ml冰乙酸，超聲振蕩5min，再加入20μlaptes，20μlmptes，在超聲振蕩作用下反應(yīng)18h。反應(yīng)結(jié)束后磁分離收集顆粒，得到表面帶-nh2和-sh的fe3o4/sio2納米顆粒，用無水乙醇，蒸餾水各洗兩遍，最后分散在20ml蒸餾水中待用。

實(shí)施例3：fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒的合成

取4ml實(shí)施例2中的fe3o4/sio2納米顆粒，磁分離棄去上清液，加入10ml實(shí)施例1中的au納米顆粒溶液，置于機(jī)械振蕩器上振蕩4h，將au納米顆粒組裝在fe3o4/sio2納米粒子表面，然后磁分離棄去上清液，用蒸餾水分散、洗滌四次，重復(fù)上述組裝過程三次，最后磁分離收集得到具有核殼結(jié)構(gòu)fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒，用蒸餾水洗滌四次，分散在蒸餾水中保存。

實(shí)施例4：新型拉曼基底fe3o4/au/aoa的合成

配制ph＝7.4(25℃)的磷酸鹽緩沖液(pbs)：精確稱取8.5g氯化鈉，3.5g磷酸氫二鈉，0.25g磷酸二氫鈉溶于水，定容至1000ml。稱取5.0mg5-氨基乳清酸，溶于1mlpbs中。

稱取10.0mg活性酯聚乙二醇巰基(nhs-peg-sh)，加入1ml的氨基乳清酸溶液，室溫振蕩反應(yīng)6h，通過修飾在peg一端的-nhs活性酯基團(tuán)與氨基乳清酸上的氨基反應(yīng)，形成新的酰胺鍵，將氨基乳清酸結(jié)合在nhs-peg-sh上，形成氨基乳清酸-peg。用pbs溶液透析12h，將脫落的-nhs活性酯基團(tuán)及多余的氨基乳清酸去除。

取1ml上述金磁納米顆粒，磁分離收集顆粒，將透析后的氨基乳清酸-peg加入其中，室溫下振蕩反應(yīng)24h，使peg一端攜帶的巰基與金磁納米顆粒充分接觸，通過形成au-s鍵將-nhs活性酯基團(tuán)修飾在金磁納米顆粒的表面。

反應(yīng)結(jié)束后，磁分離收集金磁納米顆粒，用適量的蒸餾水洗滌金磁納米顆粒，用1ml蒸餾水將收集到的顆粒分散至玻璃瓶中，將氨基乳清酸修飾的金磁納米顆粒暫時(shí)存于4℃?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)施例5：氨基乳清酸修飾的羅丹明(rbic/aoa)溶液的制備

將10.0mg異硫氰酸羅丹明b(rbic)溶于0.5ml二甲基甲酰胺a中，得到溶液a；將2.9mg5-氨基乳清酸(aoa)溶于0.5ml二甲基甲酰胺b中，得到溶液b；將所得溶液a與所得溶液b等體積混合，室溫下振蕩反應(yīng)24h，之后用二甲基甲酰胺c透析以除去多余rbic，得到rbic/aoa溶液。

實(shí)施例6：以fe3o4/sio2/au金磁納米顆粒為拉曼基底快速檢測(cè)三聚氰胺

(1)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

取實(shí)施例4合成的fe3o4/au/aoa(溶于標(biāo)準(zhǔn)液)、實(shí)施例5配制的rbic/aoa溶液、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，配制一系列最終金磁顆粒濃度為2.5mg/ml，羅丹明b濃度為0.5μg/ml，三聚氰胺濃度分別為2.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、15.0μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，振蕩反應(yīng)30min，將這些溶液用移液槍轉(zhuǎn)移到凹面載玻片上，并于凹面載玻片下用一圓形釹鐵硼磁鐵(直徑10mm×厚度3mm，寧波江東亮豪磁業(yè)有限公司)將金磁納米顆粒聚集成點(diǎn)，在激光拉曼光譜儀的照射下，讀取rbic相關(guān)特征峰及譜圖(單個(gè)樣品的測(cè)試時(shí)間小于10分鐘)，進(jìn)行定量分析，以rbic染料分子拉曼光譜圖中位于1510cm^-1處的伸縮振動(dòng)峰峰強(qiáng)的對(duì)數(shù)值對(duì)三聚氰胺濃度作圖。結(jié)果如圖5所示。三聚氰胺濃度在1×10^-3mg/ml至1.5×10^-2mg/ml范圍內(nèi)，1510cm^-1處拉曼峰強(qiáng)的對(duì)數(shù)與三聚氰胺濃度線性關(guān)系良好，線性方程為lgi＝2.02148+0.05852*c(lgi為1510cm^-1處拉曼峰強(qiáng)的對(duì)數(shù)，c為三聚氰胺濃度)，r²＝0.9939。

相比傳統(tǒng)方法，該方法不但使樣品易于分離，省去傳統(tǒng)離心沉淀或過柱分離的復(fù)雜過程，還能將樣品快速濃縮，從而提高檢測(cè)靈敏度。

(2)待測(cè)樣品中三聚氰胺的檢測(cè)

取實(shí)施例4合成的fe3o4/au/aoa(溶于待測(cè)牛奶)、實(shí)施例5配制的rbic/aoa溶液、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，配制最終金磁顆粒濃度為2.5mg/ml，羅丹明b濃度為0.5μg/ml，三聚氰胺濃度為10.0μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，振蕩反應(yīng)30min，將這些溶液用移液槍轉(zhuǎn)移到凹面載玻片上，并于凹面載玻片下用一圓形釹鐵硼磁鐵(直徑10mm×厚度3mm，寧波江東亮豪磁業(yè)有限公司)將金磁納米顆粒聚集成點(diǎn)，在激光拉曼光譜儀的照射下，讀取rbic相關(guān)特征峰及譜圖(單個(gè)樣品的測(cè)試時(shí)間小于10分鐘)，得到1510cm^-1處峰強(qiáng)為214，結(jié)果如圖6所示。按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，當(dāng)三聚氰胺濃度為5.0μg/ml時(shí)，計(jì)算值為206，實(shí)際測(cè)試值與標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算值間的偏差為3.88％，在合理范圍內(nèi)。