本發(fā)明涉及對癌癥的治療或預防有效的、將alk抑制劑和vegf抑制劑組合形成的藥物；和用于治療或預防癌癥的方法；以及產品等。
背景技術：
間變性淋巴瘤激酶(anaplasticlymphomakinase，alk)是屬于胰島素受體家族的受體型酪氨酸激酶之一(非專利文獻1、非專利文獻2)。
據報道，alk基因異常(易位、點突變和基因擴增)的結果，會引起與其他基因融合的異常激酶的生成，與癌化有關。
作為在日本或海外得到了認可的alk抑制劑，可以列舉アレセンサtm(通用名：艾樂替尼鹽酸鹽、alectinib)、ザーコリtm(通用名：克唑替尼、crizotinib)、zykadiatm(通用名：色瑞替尼、ceritinib)。
通常，在抗癌藥的使用中，為了增強效果、擴大可適用的腫瘤種類、或者為了應對或預防已耐藥的癌癥，而使用作用機理不同的多種抗癌藥。
關于作為alk抑制劑的艾樂替尼與其他分子靶向藥物的聯用已有報道。有報道稱：將艾樂替尼和厄洛替尼(egfr(上皮生長因子受體)的酪氨酸激酶選擇性抑制劑)或克唑替尼(alk和c-met(肝細胞增殖因子受體)的酪氨酸激酶抑制劑)聯用的結果，在移植了艾樂替尼耐性肺癌細胞株的異種移植模型中確認到了腫瘤的退縮效果(非專利文獻3：cancerresoctober1,2014,74；3720,aacrannualmeeting2014；april5-9,2014,abstract3720)。
另一方面，血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，vegf)是血管新生的主要調節(jié)因子，在大部分的人腫瘤中表達亢進，與腫瘤的增殖?轉移有關。通過阻斷vegf的信號傳遞路徑，確認到了下述作用：抑制由vegf引起的腫瘤組織中的血管新生，抑制腫瘤的增殖，使脈管結構正?；档脱芡高^性，降低在腫瘤組織中亢進的間質壓，作為vegf途徑抑制劑，有アバスチンtm(通用名：貝伐單抗、bevacizumab)、ネクサバールtm(通用名：索拉非尼、sorafenib)、ヴォトリエントtm(通用名：鹽酸帕唑帕尼、pazopanibhydrochloride)、スーテントtm(通用名：蘋果酸舒尼替尼、sunitinibmalate)、インライタtm(通用名：阿昔替尼、axitinib)、スチバーガtm(瑞格非尼水合物、regorafenib)等，作為抗癌藥在開發(fā)的vegf途徑抑制劑，有通用名雷莫蘆單抗(ramucirumab)、通用名馬來酸卡博替尼(cabozantinibs-malate)、通用名乙磺酸尼達尼布(nintedanibesylate)等作為抗癌藥在銷售。
關于無法治癒切除的進行?復發(fā)的結腸?直腸癌、除扁平上皮癌以外的無法切除的進行?復發(fā)的非小細胞肺癌、卵巢癌、無法手術或者復發(fā)乳癌，アバスチン(貝伐單抗)與特定的標準化學療法或者化療藥聯用作為療法在日本得到認可。然而，關于アバスチン(貝伐單抗)與vegf途徑抑制劑以外的分子靶向藥的聯用目前尚未得到認可，但有人報道了vegf途徑抑制劑與作為egfr的酪氨酸激酶選擇性抑制劑的厄洛替尼聯用的效果、以及通過抑制vegf途徑和c-met或hgf/c-met途徑兩者而產生的腫瘤抑制效果。(非專利文獻4：lancetoncol2014；15：1236-44；非專利文獻5：cancerdiscov.2012march；2(3)：270-287；非專利文獻6：molcancerther.2015jan；14(1)：101-110,“combinationstrategytargetingvegfandhgf/c-metinhumanrenalcellcarcinomamodels”)。
然而，迄今為止，關于vegf途徑抑制劑與alk抑制劑的聯用尚無報道的文獻。而且，據報道，給予貝伐單抗有可能降低聯用藥物向腫瘤中的轉移性(非專利文獻7：cancercell21,82-91,january17,2012；非專利文獻8：cancerres.2013jun1；73(11)：3347-55”bevacizumab-inducednormalizationofbloodvesselsintumorshampersantibodyuptake.”)，抑制血管新生有可能降低聯用藥的效果。臨床上報道了：在將egfr1抗體的帕尼單抗、貝伐單抗、化療藥聯用的臨床試驗中無惡化生存期縮短(非專利文獻9：journalofclinicaloncology,27卷,no.5,february10,2009,672-680)。
現有技術文獻
非專利文獻
非專利文獻1：procnatlacadsciusa,第101卷,第13306-13311頁,2004年；
非專利文獻2：nature,第448卷,第561-566頁,2007年；
非專利文獻3：cancerresoctober1,2014,74；3720,aacrannualmeeting2014；april5-9,2014,abstract3720；
非專利文獻4：lancetoncol2014；15：1236-44；
非專利文獻5：cancerdiscov.2012march;2(3):270-287；
非專利文獻6：molcancerther.2015jan;14(1):101-110；
非專利文獻7：cancercell21,82-91,january17,2012；
非專利文獻8：cancerres.2013jun1;73(11):3347-3355；
非專利文獻9：journalofclinicaloncology,第27卷,no.5,february10,2009,672-680。
技術實現要素：
如上所述，進一步希望開發(fā)對癌癥的預防?治療有效且具有優(yōu)異藥效的藥物。
本發(fā)明的課題在于：提供將多種藥物組合形成的新型藥物、以及使用了該新型藥物的癌癥的治療方法或產品等，以用于治療或預防各種癌癥、或者延長無惡化生存期。
本發(fā)明人等將alk抑制劑和vegf抑制劑組合使用的結果，還出乎意料地發(fā)現：這些藥劑的聯用發(fā)揮出較單劑給藥優(yōu)異的腫瘤縮小效果，完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明涉及以下的發(fā)明：
[1]用于治療或預防癌癥的藥物，該藥物是將alk抑制劑和vegf抑制劑組合形成的。
[2][1]所述的藥物，其特征在于：上述藥物為配方劑。
[3][1]所述的藥物，其特征在于：alk抑制劑和vegf抑制劑分開給藥。
[4][3]所述的藥物，其特征在于：alk抑制劑和vegf抑制劑同時或者依次給藥。
[5]藥物，其含有alk抑制劑作為有效成分，且與vegf抑制劑聯用用于治療或預防癌癥。
[6][5]所述的藥物，其特征在于：與vegf抑制劑同時給藥。
[7][5]所述的藥物，其特征在于：在vegf抑制劑的給藥前或給藥后進行給藥。
[8]藥物，其含有vegf抑制劑作為有效成分，且與alk抑制劑聯用用于治療或預防癌癥。
[9][8]所述的藥物，其特征在于：與alk抑制劑同時給藥。
[10][8]所述的藥物，其特征在于：在alk抑制劑的給藥前或給藥后進行給藥。
[11][1]～[10]中任一項所述的藥物，其特征在于：alk抑制劑為選自艾樂替尼、克唑替尼和色瑞替尼的化合物或其鹽。
[12][1]～[11]中任一項所述的藥物，其特征在于：alk抑制劑為艾樂替尼或其鹽。
[13][12]所述的藥物，其特征在于：艾樂替尼或其鹽按照1天2次、每1次以游離體換算計為20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg進行給藥。
[14][1]～[13]所述的藥物，其特征在于：vegf抑制劑選自貝伐單抗、索拉非尼和舒尼替尼。
[15][1]～[13]中任一項所述的藥物，其中vegf抑制劑為抗vegf抗體。
[16][15]所述的藥物，其中抗vegf抗體具有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，
所述重鏈可變區(qū)是包含以下的氨基酸序列而形成的：
evqlvesggglvqpggslrlscaasgytftnygmnwvrqapgkglewvgwintytgeptyaadfkrrftfsldtskstaylqmnslraedtavyycakyphyygsshwyfdvwgqgtlvtvss(seqidno:1)；
所述輕鏈可變區(qū)是包含以下的氨基酸序列而形成的：
diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasqdisnylnwyqqkpgkapkvliyftsslhsgvps
rfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqystvpwtfgqgtkveikr(seqidno:2)。
[17][16]所述的藥物，其特征在于：抗vegf抗體每1次以1μg/kg～50mg/kg進行給藥。
[18][17]所述的藥物，其特征在于：抗vegf抗體每1次以5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg進行給藥。
[19][16]～[18]中任一項所述的藥物，其中抗vegf抗體以每周一次、每2周或每3周進行給藥。
[20][1]～[19]中任一項所述的藥物，其中癌癥選自非霍奇金淋巴瘤、成神經細胞瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、腎癌和肺癌。
[21][1]～[20]中任一項所述的藥物，其中癌癥為alk融合基因陽性的癌癥。
[22]治療或預防癌癥的方法，該方法包含：將有效量的alk抑制劑和有效量的vegf抑制劑組合對對象進行給藥。
[23][22]所述的方法，其特征在于：alk抑制劑和vegf抑制劑分開給藥。
[24][23]所述的方法，其特征在于：alk抑制劑和vegf抑制劑同時或依次給藥。
[25]增強alk抑制劑的癌癥治療效果的方法，該方法包含：對對象給予有效量的vegf抑制劑。
[26][25]所述的方法，其特征在于：與alk抑制劑同時給藥。
[27][26]所述的方法，其特征在于：在alk抑制劑的給藥前或給藥后進行給藥。
[28]延長腫瘤的無惡化生存期的方法，該方法包含：將有效量的alk抑制劑和有效量的vegf抑制劑組合對對象進行給藥。
[29][28]所述的方法，其特征在于：alk抑制劑和vegf抑制劑分開給藥。
[30][29]所述的方法，其特征在于：alk抑制劑和vegf抑制劑同時或依次給藥。
[31][22]～[30]中任一項所述的方法，其中癌癥選自非霍奇金淋巴瘤、成神經細胞瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、腎癌和肺癌。
[32][22]～[30]中任一項所述的方法，其中癌癥為alk融合基因陽性的癌癥。
[33]用于抑制腫瘤增殖的方法，該方法包含：將有效量的alk抑制劑和有效量的vegf抑制劑組合對對象進行給藥。
[34][33]所述的方法，其特征在于：alk抑制劑和vegf抑制劑分開給藥。
[35][34]所述的方法，其特征在于：alk抑制劑和vegf抑制劑同時或依次給藥。
[36][33]～[35]中任一項所述的方法，其中腫瘤選自非霍奇金淋巴瘤、成神經細胞瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、腎癌和肺癌。
[37][33]～[35]中任一項所述的方法，其中腫瘤為具有alk融合基因的腫瘤。
[38][22]～[37]中任一項所述的方法，其中alk抑制劑為選自式(i)～(iii)的化合物或其鹽：
[化學式1]
[39][22]～[37]中任一項所述的方法，其特征在于：alk抑制劑為選自艾樂替尼、克唑替尼和色瑞替尼的化合物或其鹽。
[40][22]～[37]所述的方法，其特征在于：alk抑制劑為艾樂替尼或其鹽。
[41][40]所述的方法，其特征在于：艾樂替尼或其鹽按照1天2次、每1次以游離體換算計為20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg進行給藥。
[42][22]～[41]中任一項所述的方法，其特征在于：vegf抑制劑為貝伐單抗、索拉非尼或舒尼替尼。
[43][22]～[41]中任一項所述的方法，其中vegf抑制劑為抗vegf抗體。
[44][43]所述的方法，其中抗vegf抗體為人源化抗體。
[45][44]所述的方法，其中抗vegf抗體具有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，
所述重鏈可變區(qū)是包含以下的氨基酸序列而形成的：
evqlvesggglvqpggslrlscaasgytftnygmnwvrqapgkglewvgwintytgeptyaadfkrrftfsldtskstaylqmnslraedtavyycakyphyygsshwyfdvwgqgtlvtvss(seqidno:1)；
所述輕鏈可變區(qū)是包含以下的氨基酸序列而形成的：
diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasqdisnylnwyqqkpgkapkvliyftsslhsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqystvpwtfgqgtkveikr(seqidno:2)。
[46][45]所述的方法，其特征在于：抗vegf抗體為貝伐單抗。
[47][42]～[46]中任一項所述的方法，其特征在于：抗vegf抗體以1μg/kg～50mg/kg進行給藥。
[48][47]所述的方法，其特征在于：抗vegf抗體以5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg進行給藥。
[49][47]或[48]所述的方法，其中抗vegf抗體以每周一次、每2周或每3周進行給藥。
[50]產品，該產品包含：(1)含vegf抑制劑的制劑、(2)容器和(3)使用說明書或標簽，所述使用說明書或標簽顯示將上述vegf抑制劑和至少一種alk抑制劑組合對對象進行給藥用于治療癌癥。
[51]產品，該產品包含：(1)含alk抑制劑的制劑、(2)容器和(3)使用說明書或標簽，所述使用說明書或標簽顯示將上述alk抑制劑和至少一種vegf抑制劑組合對對象進行給藥用于治療癌癥。
附圖簡述
圖1是顯示對于人alk融合基因陽性非小細胞肺癌株nci-h2228，艾樂替尼和(a)順鉑、(b)紫杉醇、(c)吉西他濱、以及(d)貝伐單抗的單獨使用以及與艾樂替尼聯用所引起的腫瘤體積的變化的曲線圖。
具體實施方式
本發(fā)明涉及對癌癥的治療有效的、將alk抑制劑和vegf抑制劑組合形成的用于治療或預防癌癥的藥物；治療或預防癌癥的方法；或用于抑制腫瘤增殖的方法。
alk抑制劑
本發(fā)明中使用的alk抑制劑是指可直接或間接地中和、阻斷、抑制、降低或者妨礙alk活性的物質。作為上述alk活性的例子，可以列舉：酪氨酸激酶活性。上述物質包含低分子化合物、抗體、反義轉錄抑制劑、低分子干擾rna(sirna)等。
作為上述低分子化合物的例子，可以列舉：wo2010/143664、wo2004/076412、wo2006/021881、wo2008/073687中記載的化合物或其鹽等。
作為更具體的例子，可以列舉選自下述的化合物或其鹽等：艾樂替尼(化合物名：9-乙基-6,6-二甲基-8-[4-(嗎啉-4-基)-哌啶-1-基]-11-氧代-6,11-二氫-5h-苯并[b]咔唑-3-腈一鹽酸鹽)、克唑替尼(化合物名：3-[(1r)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基]吡啶-2-胺)和色瑞替尼(化合物名：5-氯-n2-(2-異丙氧基-5-甲基-4-哌啶-4-基-苯基)-n4-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基]-嘧啶-2,4-二胺。這些化合物或其鹽可以利用wo2010/143664、wo2004/076412、wo2006/021881、wo2008/073687等中記載的方法來制備。這些化合物或其鹽還包含：水合物、制藥學上可接受的各種溶劑合物或多晶型(多晶型物)等。
艾樂替尼、克唑替尼和色瑞替尼的結構式以式(i)～(iii)的形式如下所示。
[化學式2]
本發(fā)明中使用的alk抑制劑的給藥途徑可適當采用口服給藥或胃腸外給藥的任一種，但優(yōu)選適當采用口服給藥。作為用于口服給藥的劑型，例如可從液體制劑、散劑、顆粒劑、片劑、腸溶劑和膠囊劑等任意劑型中適當選擇。具有上述劑型的alk抑制劑通過本領域技術人員所公知的方法制成制劑。例如，將其與藥理學上可接受的載體或介質、具體而言與滅菌水或生理鹽水、植物油、乳化劑、懸浮劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、香味劑、賦形劑、媒介物、防腐劑、粘合劑等適當組合，以通常認可的制藥實施所要求的單位用量方式混和，之后通過冷凍干燥、壓片成型等制劑化操作制成制劑。
alk抑制劑以與水或水以外的藥學上可接受的液體的無菌溶液或懸浮液劑等注射劑的形式，也可用于胃腸外。這些制劑中的有效成分量可適當選擇，使得能夠給予所指示的范圍的適當用量。用于注射的無菌組合物可使用注射用蒸餾水這樣的媒介物，按照通常制劑實施來進行配方。作為注射用水溶液，例如例示生理鹽水、含有葡萄糖或其他輔助劑的等滲液(例如d-山梨醇、d-甘露糖、d-甘露醇、氯化鈉)，可與適當的助溶劑(例如醇、具體如乙醇、多元醇、例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子性表面活性劑(例如聚山梨酯80(tm)、hco-50)適當聯用。作為油性液體，例示芝麻油、大豆油，可與作為助溶劑的苯甲酸芐酯、芐醇聯用。另外，還可與緩沖劑(例如磷酸鹽緩沖液、乙酸鈉緩沖液)、止痛劑(例如鹽酸普魯卡因)、穩(wěn)定劑(例如芐醇、苯酚)、抗氧化劑適當配合。
作為本發(fā)明的alk抑制劑的給藥量，例如每一次給藥可以在每1kg體重0.0001mg～1000mg的范圍內選擇給藥量?；蛘?，例如可以在每位患者0.001mg～100000mg/人的范圍內選擇給藥量。但本發(fā)明的alk抑制劑的給藥量并不限于上述的給藥量。
作為上述艾樂替尼、其鹽、或它們的水合物的更具體的給藥量，以1天2次、每1次換算成游離體計，可以列舉：20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg。
本發(fā)明的alk抑制劑的給藥期間根據適應癥狀或副作用的程度來確定，可以在癌癥得到治療或者達到所期望的治療效果的期間進行給藥。具體而言，有如下方法等：可以連續(xù)給藥7天～3年，或者，在給藥期間設定1～14天左右的停藥期間，以2天～3個月作為1個周期，給藥1～36個周期。優(yōu)選為如下方法：以14～30天作為1個周期，給藥3～24個周期。
vegf抑制劑
本發(fā)明中使用的vegf抑制劑是指可直接或間接地中和、阻斷、抑制、降低或者妨礙vegf活性的物質。vegf抑制劑通過與一個或多個vegf受體結合，可以中和、阻斷、抑制、降低或者妨礙vegf的活性。vegf抑制劑包含：抗vegf抗體及其抗原結合片段、受體分子和與vegf特異性地結合以隔絕其與一個或多個受體結合的衍生物、抗vegf受體抗體和抗vegf受體拮抗劑(例如vegfr酪氨酸激酶的低分子抑制劑)。作為低分子vegf抑制劑的具體例子，可以列舉選自下述的化合物、其鹽、或者它們的水合物等：索拉非尼(sorafenib、化合物名稱：n-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-n’-(4-(2-(n-甲基氨基甲?；?-4-吡啶氧基)苯基)脲、專利文獻：us7235576)、帕唑帕尼(pazopanib、化合物名稱：5-[[4-[(2,3-二甲基-2h-吲唑-6-基)甲基氨基]嘧啶-2-基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺)、舒尼替尼(sunitinib、化合物名稱：n-[2-(二乙基氨基)乙基]-5-[(z)-(5-氟-2-氧代-1,2-二氫-3h-吲哚-3-亞基)甲基]-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺、專利文獻：專利3663382、us6573293、us7125905)、阿昔替尼(axitinib、化合物名稱：n-甲基-2-({3-[(1e)-2-(吡啶-2-基)乙烯-1-基]-1h-吲唑-6-基}硫烷基)苯甲酰胺)、瑞格非尼(regorafenib、化合物名稱：4-(4-(((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲?；鶀氨基)-3-氟苯氧基)-n-甲基吡啶-2-甲酰胺)、卡博替尼(cabozantinib、化合物名稱：n’-[4-[(6,7-二甲氧基-4-喹啉基)氧基]苯基]-n-(4-氟苯基)-1,1-環(huán)丙烷二甲酰胺)、尼達尼布(nintedanib、化學名：(z)-甲基3-((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰氨基)苯基氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸酯、參照wo01/27081)。
本發(fā)明中的“抗vegf抗體”是指具有充分的親和性和特異性與vegf結合的抗體。所選擇的抗體通常對vegf具有結合親和性，例如抗體能夠以100nm-1pm之間的kd值與hvegf結合?？贵w親和性可以通過表面等離子體共振基礎測定(例如wo2005/012359中記載的biacore測定等)；酶結合免疫吸附測定(elisa)、以及競爭測定(例如ria的測定)來確定。作為其他實施方式，本發(fā)明的抗vegf抗體可以以vegf活性有關的疾病或癥狀為靶向，用作妨礙其活性時的治療藥。另外，例如為了評價其作為治療藥的有效性，可以對抗體施行其他的生物學活性測定。這種測定在該領域中是已知的，取決于靶抗原和抗體所期望的用途。例子有：huvec抑制測定；腫瘤細胞增殖抑制測定(例如wo第89/06692號中記載的測定)；抗體依賴性細胞毒活性(adcc)和補體介導的細胞毒活性(cdc)測定(美國專利第5500362號)；以及激動劑活性或者造血測定(參照wo95/27062號)等。
“抗體”一詞以最廣泛的意義使用，包含單克隆抗體(包含全長或無損的單克隆抗體)、多克隆抗體、多價抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，以及只要顯示出它們所期望的生物活性即可，還包含抗體片段(參照以下內容)。
在本說明書中，在一實施方式中，“kd”或“kd值”通過以下的測定所示的(chen,等,(1999)j.molbiol293:865-881)、使用抗體的fab型和vegf分子實行的放射性標記的vegf結合測定(ria)來測定：在梯度性效價的非標記vegf的存在下，用最小濃度的(125i)-標記抗原使fab達到平衡，捕獲與抗fab抗體包被板結合的vegf，從而測定fab對vegf的溶液結合親和性。在一個例子中，為了確定測定的條件，將微量滴定板(dynex)在含有5μg/ml的捕獲抗fab抗體(cappellabs)的50mm碳酸鈉(ph9.6)中包被一夜，之后，使用包含2%(w/v)牛血清白蛋白的pbs在室溫(大約23℃)下封閉2～5小時。在非吸附板上(nunc#269620)將100pm或26pm的[125i]vegf(109)與進行了梯度稀釋的有價值(興趣)的fab、例如fab-12(presta等,(1997)cancerres.57:4593-4599)混合。然后，將有價值的fab培養(yǎng)一夜；但培養(yǎng)可以花費65小時直至確實達到平衡狀態(tài)。之后，將混合物轉移到捕獲板上，在室溫下培育1小時。然后，除去溶液，將板用包含0.1%tween20的pbs清洗8次。在板干燥后，加入150μl/孔的閃光物質(microscint-20;packard)，將板使用topcountγ計測器(packard)計測10分鐘。選擇最大結合的20%或20%以下的濃度的fab，分別用于競爭結合測定。根據其他實施方式，使用～10反應單位(ru)的固定的hvegf(8-109)cm5芯片，利用25℃的biacoretm-2000或biacoretm-3000(biacore,inc.,piscataway,nj)，采用表面等離子體共振測定來測定kd或kd值。簡而言之，按照供者的使用說明書，通過n-乙基-n’-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(edc)和n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)激活羧甲基化葡聚糖生物傳感器芯片(cm5,biacoreinc.)。使用10mm的乙酸鈉(ph4.8)將人vegf稀釋至5μg/ml(～0.2um)，以5μl/分鐘的流量注入，使已結合的蛋白的反應單位(ru)達到約10。注入人vegf后，注入1m的乙醇胺，以阻斷未反應的組。為了進行動態(tài)測定，將進行了2倍梯度稀釋的fab(0.78nm～500nm)在25℃下以大約25μl/分鐘的流量注入到包含0.05%tween20(pbst)的pbs中。利用使締合和解離的傳感圖同時擬合的單純一對一朗繆爾結合模型(simpleone-to-onelangmuirbindingmodel)(biacoreevaluation軟件3.2版)，算出締合速度(kon)和解離速度(koff)。以koff/kon比的形式算出平衡解離常數(kd)。例如，參照chen,y.等(1999)j.molbiol293:865-881。當通過上述表面等離子體共振測定得到的結合速度超過106m-1s-1時，可以利用如下的熒光消光技術測定結合速度：使用分光計、例如具備截流的分光光度計(avivinstruments)或者具備攪拌小池(比色杯)的8000系列slm-aminco分光光度計(thermospectronic)，在增加濃度的人vegf截短型(8-109)或者小鼠vegf的存在下，在pbs(ph7.2)、25℃下測定20nm的抗vegf抗體(fab型)的熒光發(fā)光強度(激發(fā)=295nm；發(fā)光=340nm、帶域通過=16nm)的增加或減少。
在本發(fā)明中，抗vegf抗體或其抗原結合片段可以是單克隆抗體、嵌合抗體、完全人抗體、或者人源化抗體。另外，抗vegf抗體或其抗原結合片段可以是fc部分、f(ab’)2、fab、或者缺少fv結構的抗體。
作為本發(fā)明的一實施方式，對抗vegf抗體沒有限定，包含通過雜交瘤atcchb10709產生的單克隆抗vegf抗體a4.6.1和與相同表位結合的單克隆抗體；按照presta等(1997)cancerres.57:4593-4599產生的重組人源化抗vegf單克隆抗體。在另一實施方式中，抗vegf抗體是還作為“rhumabvegf”或“アバスチン(注冊商標)”而已知的“貝伐單抗(bv)”。アバスチン(注冊商標)在特定國家銷售。其包含來自阻斷人vegf與其受體結合的小鼠抗hvegf單克隆抗體a.4.6.1的抗原結合互補性決定區(qū)和發(fā)生了突變的人igg1構架區(qū)。包含幾乎所有的構架區(qū)的貝伐單抗的氨基酸序列的約93%由人igg1誘導、而序列的約7%由小鼠抗體a4.6.1誘導。而且，在這里使用時，“貝伐單抗(bv)”這一用語包含：滿足在選自美國、歐州和日本的國家組的國家或地區(qū)以相同或者生物模擬(仿真)產品獲得銷售認可所必需的要求的所有對應抗vegf抗體或抗vegf抗體片段。
為了篩選與感興趣的抗體所結合的抗原上的表位結合的抗體，可以實施常規(guī)的交叉阻斷測定、例如alaboratorymanual,coldspringharborlaboratory,edharlow和davidlane(1988)中記載的測定。
貝伐單抗和其他的人源化抗vegf抗體還記載在2005年2月26日發(fā)行的美國專利第6884879號中。另外，還包含如wo2005/012359號、wo2005/044853號和美國專利申請第60/991302號中記載的g6或b20系列抗體(例如g6-31、b20-4.1)。此外，還包含美國專利第7060269號、同6582959號、同6703020號、同6054297號；wo98/45332號；wo96/30046號；wo94/10202號；歐州專利第0666868b1號；美國專利申請公開第2006009360號、同20050186208號、同20030206899號、同20030190317號、同20030203409號和同20050112126號；以及popkov等,journalofimmunologicalmethods288:149-164(2004)中記載的抗體。作為一實施方式，上述抗體包含與人vegf上的功能性表位結合的抗體，該抗體包含殘基f17、m18、d19、y21、y25、q89、i91、k101、e103和c104、或者包含殘基f17、y21、q22、y25、d63、i83和q89。
上述“g6系列抗體”是由wo2005/012359的圖7、24-26和34-35的任一種g6抗體或g6-誘導抗體的序列誘導的抗vegf抗體。而且，還包含wo2005/044853中記載的抗體。作為一實施方式，g6系列抗體與包含殘基f17、y21、q22、y25、d63、i83和q89的人vegf上的功能性表位結合。
上述“b20系列抗體”是由wo2005/012359的圖27-29的任一種b20抗體或b20誘導抗體的序列誘導的抗vegf抗體。而且，還包含wo2005/044853和美國專利申請第60/991302號中記載的抗體。作為一實施方式，b20系列抗體與包含殘基f17、m18、d19、y21、y25、q89、i91、k101、e103和c104的人vegf上的功能性表位結合。
上述“功能性表位”是指能量性地有助于抗體結合性的抗原的氨基酸殘基。因抗原的能量性地有益的殘基中的任意一個發(fā)生突變(例如由丙氨酸引起的野生型vegf的突變或者同源突變)，抗體的結合性將發(fā)生錯亂，使抗體的相對親和性比(ic50突變vegf/ic50野生型vegf)大于5(參照wo2005/012359號的實施例2)。在一實施方式中，相對親和性比通過溶液結合性噬菌體展示elisa來測定。簡而言之，將96孔maxisorp免疫板(nunc)在4℃下用抗體的fab型包被一夜，在pbs中以2μg/ml的濃度進行試驗，在室溫下用pbs、0.5%的bsa和0.05%的吐溫20(pbt)封閉2小時。在pbt中將噬菌體展示hvegf丙氨酸點突變(殘基8-109型)或野生型hvegf(8-109)的連續(xù)稀釋物在室溫下于fab-包被板上最初培養(yǎng)15分鐘，將板用pbs、0.05%的吐溫20(pbst)清洗。在pbt中利用按1：5000稀釋的抗m13單克隆抗體辣根過氧化物酶(amershampharmacia)綴合物檢測所結合的噬菌體，使之在3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺(tmb,kirkegaard&perrylabs,gaithersburg,md)底物中表達約5分鐘，用1.0m的h3po4進行淬火，在450nm下進行分光光度性地讀取。ic50值的比率(ic50,ala/ic50,wt)表示結合親和性的降低倍數(相對結合親和性)。
非人(例如小鼠)抗體的“人源化”型是指包含來自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。在大部分中，人源化抗體是指受體(recipient，接受者)的高頻率可變區(qū)的殘基被來自小鼠、大鼠、兔或者具有所期望的特異性、親和性和能力的非人靈長類這樣的非人種(供體抗體)的高頻率可變區(qū)的殘基取代的人免疫球蛋白(受體抗體)。在幾個例子中，人免疫球蛋白的構架區(qū)(fr)殘基被對應的非人殘基取代。而且，人源化抗體也可以包含在受體抗體或供體抗體中也未發(fā)現的殘基。進行這些修飾以進一步洗練(精煉)抗體的特性。通常，人源化抗體的全部或者實質上全部的高頻率可變環(huán)區(qū)與非人免疫球蛋白的高頻率可變環(huán)區(qū)對應，全部或者實質上全部的fr包含作為人免疫球蛋白序列的fr的至少一個或者典型的是2個可變結構域的實質上的全部。另外，人源化抗體根據情況還包含免疫球蛋白恒定區(qū)(fc)的至少一部分、典型的是包含人免疫球蛋白的fc的至少一部分。更詳細而言，參照jones等人,nature321:522-525(1986)；riechmann等人,nature332:323-329(1988)；以及presta,curr.op.struct.biol.2:593-596(1992)。
作為其他人源化抗vegf抗體的例子，可以列舉雷莫蘆單抗(通用名：ramcirumab；商品名：cyamzatm；cas注冊號：947687-13-0)。
在本發(fā)明的另一實施方式中，抗vegf抗體具有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，
所述重鏈可變區(qū)是包含以下的氨基酸序列而形成的：
evqlvesggglvqpggslrlscaasgytftnygmnwvrqapgkglewvgwintytgeptyaadfkrrftfsldtskstaylqmnslraedtavyycakyphyygsshwyfdvwgqgtlvtvss(seqidno:1)；
所述輕鏈可變區(qū)是包含以下的氨基酸序列而形成的：
diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasqdisnylnwyqqkpgkapkvliyftsslhsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqystvpwtfgqgtkveikr(seqidno:2)。
vegf抑制劑按照常規(guī)方法制成制劑(例如remington’spharmaceuticalscience,最新版,mackpublishingcompany,easton,u.s.a)，同時可以包含藥學上可接受的載體或添加劑。例如可以列舉：表面活性劑、賦形劑、著色劑、著香劑、保存劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、懸浮劑、等滲劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、流動性促進劑、矯味劑等，但并不限于這些，可適當使用其他常用的載體。具體而言，可適當列舉：海藻糖、輕質硅酸酐、乳糖、結晶纖維素、甘露醇、淀粉、羧甲纖維素鈣、羧甲纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇縮醛二乙氨基乙酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、中鏈脂肪酸三甘油酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油60、白糖、羧甲基纖維素、玉米淀粉、無機鹽類、聚山梨酯等。
藥物和治療?預防方法
本發(fā)明的一個方案為：將alk抑制劑和vegf抑制劑組合形成的、用于治療或預防癌癥的藥物。
上述方案中的“將alk抑制劑和vegf抑制劑組合形成的、用于治療或預防癌癥的藥物”是指，在癌癥的治療或預防中為了將alk抑制劑和vegf抑制劑同時、分開或者依次進行給藥而組合的藥物。本發(fā)明的藥物還可以以同時含有alk抑制劑和vegf抑制劑的配方劑的形式提供。另外，分別提供含有alk抑制劑的制劑和含有vegf抑制劑的制劑，這些制劑可以同時或依次使用。
在本發(fā)明中，同時給藥是指在同一時期給予alk抑制劑和vegf抑制劑進行聯合用藥，可以以配方劑的形式進行給藥，也可以以在給藥時進行用時調制的混合物的形式給藥，還可以在同一時期給予其他形態(tài)的制劑。在同時給藥進行使用時，可以從各自的路徑進行給藥，也可以從相同路徑進行給藥，給藥劑型可以相同也可以各自不同。
在本發(fā)明中，在將alk抑制劑和vegf抑制劑分開給藥時，alk抑制劑和vegf抑制劑的給藥順序可以是在給予vegf抑制劑后給予alk抑制劑，也可以同時給予alk抑制劑和vegf抑制劑，還可以在給予alk抑制劑后給予vegf抑制劑。
本發(fā)明的alk抑制劑和vegf抑制劑依次給藥是指在給予一種藥劑后再給予另一種藥劑，對alk抑制劑和vegf抑制劑的給藥間隔沒有特別限定，可以考慮給藥途徑或劑型等因素來設定。例如，alk抑制劑和vegf抑制劑的給藥間隔為0小時～168小時，優(yōu)選為0小時～72小時，還優(yōu)選為0～24小時，進一步優(yōu)選為0小時～12小時。另外，除給藥途徑及劑型等因素外，還可參考本發(fā)明的alk抑制劑和vegf抑制劑各自在對象中的殘留濃度。即，在給予vegf抑制劑前給予alk抑制劑的情況下，可以在獲得vegf抑制劑的所期望的效果的、檢測到對象中的該alk抑制劑的殘留濃度的時間點給予vegf抑制劑。通過各種使用了色譜法等的分離裝置的本領域技術人員所公知的分析方法分析由對象采集的樣品，根據結果即可確定該濃度。
與此相反，在給予alk抑制劑前給予vegf抑制劑的情況下，可以在獲得alk抑制劑的所期望的效果的、檢測到對象中的vegf抑制劑的殘留濃度的時間點給予alk抑制劑。通過本領域技術人員所公知的elisa等免疫測定法分析由對象采集的樣品，根據結果即可確定該濃度。
在上述藥物中，在將alk抑制劑和vegf抑制劑包含在各自的制劑中進行提供時，這些制劑的劑型可以是相同劑型，也可以是不同劑型。例如，雙方可以是口服制劑、非口服制劑、注射劑、點滴劑、靜脈內點滴劑中的一種且彼此不同的劑型，雙方也可以是口服制劑、非口服制劑、注射劑、點滴劑、靜脈內點滴劑中的一種且相同的劑型。另外，在上述藥物中還可以組合一種以上的不同的制劑。
在另一觀點中，本發(fā)明提供：包含alk抑制劑作為有效成分、且與vegf抑制劑聯用用于治療或預防癌癥的藥物?！鞍琣lk抑制劑作為有效成分、且與vegf抑制劑聯用用于治療或預防癌癥的藥物”是指，以與vegf抑制劑聯用為條件用于治療或預防癌癥的、包含alk抑制劑作為有效成分的藥物。包含alk抑制劑作為有效成分的本發(fā)明的藥物在與vegf抑制劑聯用時，可以和vegf抑制劑同時給藥，也可以在vegf抑制劑給藥前或給藥后進行給藥。在vegf抑制劑給藥前或給藥后給予alk抑制劑的情況下，通過測定對象中的該vegf抑制劑的殘留濃度或者日本專利第4362225號等中例示的vegf同工型的表達量，可使其給藥時期最佳化。該濃度可以通過根據本領域技術人員所公知的后述的elisa等免疫測定法測定由對象采集的樣品來確定。
在又一觀點中，本發(fā)明提供：包含vegf抑制劑作為有效成分、且與alk抑制劑聯用用于治療或預防癌癥的藥物。本發(fā)明中的“包含vegf抑制劑作為有效成分、且與alk抑制劑聯用用于治療或預防癌癥的藥物”是指，以與alk抑制劑聯用為條件用于治療或預防癌癥的、包含vegf抑制劑作為有效成分的藥物。在包含vegf抑制劑作為有效成分的藥物與alk抑制劑聯用時，可以和alk抑制劑同時給藥，也可以在alk抑制劑給藥前或給藥后進行給藥。在alk抑制劑給藥前或給藥后給予vegf抑制劑的情況下，通過測定對象中的該alk抑制劑的殘留濃度，可以使其給藥時期最佳化。該濃度可以通過按照各種使用了色譜法等的分離裝置的本領域技術人員所公知的分析方法測定由對象采集的樣品來確定。
上述發(fā)明是指將alk抑制劑和vegf抑制劑一同給藥或使用(以下僅指稱為“給藥”。)，給藥順序或給藥間隔等并沒有限定。另外，本發(fā)明的alk抑制劑和vegf抑制劑還可以以組合產品的形式使用。而且，按照本發(fā)明，在alk抑制劑和vegf抑制劑聯用時，根據需要各自可以以較任一方單獨使用的給藥量少的給藥量進行給藥。
癌瘤
本發(fā)明的藥物對白血病(急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病等)、惡性淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤等)、腦瘤、成神經細胞瘤、神經膠質瘤、甲狀腺癌、骨髓異常增生綜合征、頭頸部癌、食道癌、胃癌、大腸癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、膽嚢癌、皮膚癌、惡性黑色素瘤、腎癌、腎盂輸尿管癌、膀胱癌、子宮癌、睪丸癌、前列腺癌這樣的各種癌癥等疾病的預防或治療有效。而且，本發(fā)明的化合物對固體癌的浸潤?轉移的預防或治療有效。
特別是，本發(fā)明的藥物對alk融合基因陽性的癌癥的預防或治療有效。作為alk融合基因陽性的癌癥的例子，可以列舉：非霍奇金淋巴瘤、成神經細胞瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、腎癌和肺癌等，但并不限于這些。
在本發(fā)明中，“alk融合基因陽性”是指存在alk與其他基因的融合基因。作為上述其他的融合基因，可以列舉：eml4(棘皮動物微管關聯蛋白樣蛋白4(echinodermmicrotubule-associatedproteinlikeprotein4),genbanktm注冊號nm_019063)、tfg(trk融合基因(trk-fusedgene),genebanktm注冊號nm_006070)等，但并不限于這些。
鑒定alk融合基因陽性的癌癥的方法記載在wo2008/127248、日本特開2008-295444、“alk基因檢查指南”(日本肺癌學會生物標志物委員會)等中。作為用于檢測該融合基因的試劑盒，有vysislsialkbreakapartrearrangementprobekittm(abbott公司)、ヒストファインalkiaeptmキット(ニチレイ社)在出售。
在本發(fā)明的又一方案中，提供如下的方法：通過使用vegf抑制劑，在利用alk抑制劑對癌癥患者進行治療時增強該alk抑制劑的治療效果。這里，治療效果的增強是指治療奏效率提高、為了治療而給予的alk抑制劑的量減少、和/或alk抑制劑的治療期間縮短。另外，在本發(fā)明的又一方案中，提供在對象中延長無惡化生存期的方法，該方法包含將alk抑制劑和有效量的vegf抑制劑組合進行給藥。另外，在本發(fā)明的又一方案中，提供vegf抑制劑的使用方法，該使用方法是將vegf抑制劑用于制備包含alk抑制劑和vegf抑制劑作為有效成分的用于治療或預防癌癥的藥物組合物。
在本發(fā)明中，包含alk抑制劑和/或vegf抑制劑作為有效成分是指包含alk抑制劑和/或vegf抑制劑作為主要活性成分，對alk抑制劑和/或vegf抑制劑的含量沒有限制。另外，“治療”一詞是指，通過對對象給予本發(fā)明的藥物，癌細胞死亡或其細胞數減少、癌細胞的增殖得到抑制、由癌癥引起的各種癥狀得到改善。另外，“預防”一詞是指防止已減少的癌細胞再次增殖所引起的其數量的增加、以及防止增殖已得到抑制的癌細胞再次增殖。
在本發(fā)明中，vegf抑制劑的給藥方法可通過口服、胃腸外給藥的任一種途徑來實施。特別優(yōu)選為胃腸外給藥的給藥方法，作為所涉及的給藥方法，具體而言，適當例示注射給藥、經鼻給藥、經肺給藥、經皮給藥等。作為注射給藥的例子，例如本發(fā)明的治療用抗體可通過靜脈內注射、肌肉內注射、腹腔內注射、皮下注射等進行全身或局部給藥。另外，給藥方法可根據患者的年齡、癥狀來適當選擇。作為給藥量，例如每一次給藥可在每1kg體重0.0001mg～1000mg的范圍內選擇給藥量?；蛘?，例如可在每位患者0.001～100000mg/人的范圍內選擇給藥量。但本發(fā)明的vegf抑制劑的給藥量并不限于上述給藥量。
根據疾病的類型和嚴重程度，例如貝伐單抗這樣的抗vegf抗體的優(yōu)選用量并沒有限定，可以是包含5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或者15mg/kg在內的約1μg/kg～約50mg/kg的范圍，最優(yōu)選為約5mg/kg～約15mg/kg的范圍。給藥頻率根據疾病的類型和嚴重程度而變動。在數日或其以上的重復給藥中，根據癥狀，通過該領域中已知的方法進行測定，維持治療直至癌癥得到治療或者達到所期望的治療效果。在一個例子中，抗vegf抗體以每周一次、每2周、或者每3周進行給藥，但沒有限定，以包含5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或者15mg/kg在內的約5mg/kg～約15mg/kg的用量范圍進行給藥。但其他用量方案也可以有效。
vegf抑制劑可以以上述每1周、每2周、或者每3週的給藥作為1個周期，直至癌癥得到治療或者達到所期望的治療效果的期間進行給藥。具體而言可以持續(xù)給藥1～36個周期。
在本發(fā)明中，“無惡化生存期(pfs)”是指從治療(或者隨機化)到最初的疾病進展或者死亡的時間。在本發(fā)明的一個方案中，pfs可以根據固體腫瘤的治療效果判定標準(recist)進行評價。在本發(fā)明的一個方案中，pfs可以根據作為進展的決定因素的ca-125水平進行評價。
在本發(fā)明中，作為“延長無惡化生存期”的具體例子，可以列舉：與alk抑制劑單獨給藥時的無惡化生存期相比無惡化生存期有所延長。
在本發(fā)明中，“對象”沒有限定，是指作為本發(fā)明藥物的給藥對象的人或者非人哺乳動物、例如包含牛、馬、狗、綿羊或貓在內的哺乳動物。優(yōu)選對象為人。對象包含患者(包含人和非人哺乳動物)。
產品
作為本發(fā)明的又一方案，提供產品。在一實施方式中，產品是為了治療或預防對象的癌癥而提供的，包含如下的(a)或(b)：(a)(1)含vegf抑制劑的制劑、(2)容器、以及(3)使用說明書或標簽，顯示將上述vegf抑制劑和至少一種alk抑制劑組合對對象進行給藥用于治療對象的癌癥；或者(b)(1)含alk抑制劑的制劑、(2)容器、以及(3)使用說明書或標簽，顯示將上述alk抑制劑和至少一種vegf抑制劑組合對對象進行給藥用于治療對象的癌癥。
產品包含容器，該容器包含含有vegf抑制劑或alk抑制劑的制劑。
產品還可以包含容器上或容器所附帶的標簽或使用說明書。
在本發(fā)明中，“使用說明書”包含關于與制劑的使用有關的適應癥、用法、給藥量、給藥、禁忌癥和/或警告的信息，是指制劑的商業(yè)用包裝中通常所包含的書類?！皹撕灐笔侵赴衯egf抑制劑或alk抑制劑的制劑的產品名稱、用量、劑型、適應癥等內容在內的片狀物，其直接貼在容器上。
標簽或使用說明書顯示用于制劑的適應癥、即癌癥等選擇的疾病的治療。在一實施方式中，標簽或使用說明書顯示制劑可用于治療癌癥。標簽或使用說明書還可顯示制劑可用于治療其他障礙。
適當的容器例如可以列舉ptp、瓶、小瓶、針筒、泡罩包裝等。容器可由玻璃或塑料等各種材料形成。這些容器還可打包在印刷有上述標簽的內容等的紙制外箱(盒)上。
將alk抑制劑和vegf抑制劑聯用時，可通過眾所周知的方法確認是否存在副作用。這里，“副作用”是指在接受疾病治療的患者中觀察和/或測定到的臨床上、醫(yī)學上、物理上、生理學上和/或生物化學上的影響，且該影響不是所期望的治療結果的一部分。通常，關于所治療的患者的健康狀態(tài)和/或舒適感、對于所治療的患者的健康危險性、和/或對于所治療的患者的治療寬容性，上述影響并不是所期望的。作為副作用的具體例子，可以列舉：中性粒細胞減少、白細胞減少、出血(消化道出血、肺出血、腦出血等)、高血壓、神經毒性、疲勞?倦怠感、食欲減退、惡心、口腔炎、脫毛癥、血小板減少、尿蛋白陽性、休克、過敏反應、消化道穿孔、瘺、創(chuàng)傷治愈延遲、血栓塞栓癥、高血壓性腦病、高血壓性風險、可逆性后白質腦病綜合征、腎病綜合征、骨髄抑制、感染癥、缺血性心功能不全、間質性肺炎、血栓性微小血管癥、間質性肺病、肝功能障礙、血中膽紅素增加、味覺異常、起疹、血中肌酸酐增加等。通過將聯用時確認到的副作用的頻率和等級等與單劑給藥時的頻率和等級等進行比較，可以確認在聯用時副作用是否減輕。
實施例
在本說明書中明示引用的所有專利和參考文獻的內容均作為參照而納入本說明書。
以下，通過實施例的記載來具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不解釋為限于該記載。
實施例1
對于以1×107個細胞/只移植了人alk融合基因陽性非小細胞肺癌株nci-h2228的重癥復合型免疫缺陷(scid)小鼠，在細胞移植后第17天或第20天將艾樂替尼(游離體、3mg/kg、1天1次、口服給藥15天)與選自dna交聯劑順鉑、微小管抑制劑紫杉醇、dna合成抑制劑吉西他濱和抗人vegf抗體貝伐單抗的抗癌藥聯用。順鉑(5mg/kg)按每周1次進行靜脈內給藥(第17、24天)、紫杉醇(12.5mg/kg)按每周1次進行靜脈內給藥(第20、27天)、吉西他濱(60mg/kg)按每周2次進行腹腔內給藥(第17、21、24、27天)、貝伐單抗(5mg/kg)按每周1次進行腹腔內給藥(第20、27天)。各給藥組的腫瘤體積(平均值±標準偏差)和體重變化率(平均值±標準偏差)見圖1。
需要說明的是，在圖1中，橫軸表示細胞移植后的經過天數，縱軸表示腫瘤體積(tumorvolume)和體重變化率(bodyweightchangerate)，control表示溶劑給藥對照組，combo表示聯用組。
其結果，各聯用組顯示出較艾樂替尼單劑組高的抗腫瘤效果。特別是，以血管新生為靶的貝伐單抗單劑在給藥中確認到了腫瘤體積的增加，但在艾樂替尼和貝伐單抗的聯用組中確認到了腫瘤的縮小，與艾樂替尼單劑組相比，在統(tǒng)計學上顯示出顯著高的抗腫瘤效果(p=0.008)。細胞毒性抗癌藥順鉑、紫杉醇、吉西他濱單劑在給藥中沒有確認到腫瘤體積的大幅變化。