專利名稱：一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥和皮膚保健及美容化妝品等技術(shù)領(lǐng)域，涉及到一種用于表皮
修復(fù)的復(fù)合納米乳及其制備方法。
背景技術(shù)：
人的皮膚在年幼的時(shí)候都是柔潤光滑的，但隨著年齡的增長、季節(jié)變換、過度日曬、睡眠不足、工作壓力、生活美容、專業(yè)美容、醫(yī)學(xué)美容和整形美容中對皮膚的過度去角質(zhì)、按摩及過度使用一些腐蝕性藥膜或營養(yǎng)面膜、化學(xué)剝脫換膚后的脫皮、發(fā)紅及脫毛、曬后紫外線灼傷、痤瘡、維甲酸和果酸等導(dǎo)致的皮膚灼傷及磨削后深層肌膚損傷等常規(guī)或非正規(guī)的過度美容均很容易造成面部表皮的變薄或損傷；而且，濫用化妝品、激光或光子美容、整形美容術(shù)后、皮膚老化、皮膚燒傷、潰瘍及各種皮膚病的皮損修復(fù)、甚至不良的飲食及環(huán)境因素等也可能造成表皮的變薄或損傷?，F(xiàn)代皮膚生理學(xué)的最新研究成果表明，問題性皮膚的出現(xiàn)外界因素只是一個(gè)條件，而起決定作用的因素是人自身合成表皮生長因子的能力降低，表皮自身修復(fù)能力下降，皮膚機(jī)能衰退所致。因此，表皮修復(fù)對于皮膚的保護(hù)是非常重要的。 表皮可分為角質(zhì)層、顆粒層、有棘層及基底層，掌跖部還有透明層。
(1)角質(zhì)層是皮膚的最外層，由5 15層角質(zhì)細(xì)胞和角層脂質(zhì)組成，與皮膚美容
關(guān)系最密切。具有五大功能 ①保護(hù)功能角質(zhì)層的主要成分角蛋白及脂質(zhì)緊密有序地排列能抵御外界各種物理、化學(xué)和生物性有害因素對皮膚的侵襲。②防曬功能角質(zhì)層可吸收紫外線，主要是中波紫外線(UVB)，因此角質(zhì)層具有防曬功能。③吸收功能角質(zhì)層是皮膚吸收外界物質(zhì)的主要部位.占皮膚全部吸收能力的90%以上。由于角質(zhì)層間隙以脂質(zhì)為主，所以角質(zhì)層主要吸收的是脂溶性物質(zhì)，這就是為什么皮膚科的外用藥物和美容化妝品多是乳劑和霜?jiǎng)┑脑颉?保濕功能正常角質(zhì)層中的脂質(zhì)、天然保濕因子使角質(zhì)層保持一定的含水量，穩(wěn)定的水合狀態(tài)是維持角質(zhì)層正常生理功能的必需條件。角質(zhì)層能使經(jīng)皮膚失水量僅為2 5克/(h.cm2)，使皮膚光滑柔韌而有彈性。⑤美學(xué)功能光線在厚薄不一的皮膚中散射后，表皮顏色會(huì)出現(xiàn)變化，如光滑含水較多的角質(zhì)層有規(guī)則地反射，可形成明亮的光澤，而干燥、有鱗屑的角質(zhì)層以非鏡面反射的形式反射光線，使皮膚灰暗。角質(zhì)層過厚，皮膚會(huì)顯得粗糙、黯淡無光；角質(zhì)層過薄，如過度'去死皮'、'換膚'等，皮膚的防御功能減弱，容易受到外界不良因素的侵害，出現(xiàn)皮膚問題，如出現(xiàn)皮膚潮紅、毛細(xì)血管擴(kuò)張、色素沉著、皮膚老化，甚至引起某些皮膚疾病。 可見角質(zhì)層對于皮膚的保護(hù)非常重要，下面對角質(zhì)層中的各種結(jié)構(gòu)成分做個(gè)簡單介紹。 ①角質(zhì)形成細(xì)胞，以及角質(zhì)細(xì)胞間隙中脂質(zhì)(含神經(jīng)酰胺、脂肪酸、膽固醇)，限制水分在細(xì)胞內(nèi)外及細(xì)胞間流動(dòng)保證不丟失水分，使表皮形成牢固的結(jié)構(gòu)，使皮膚維持重要的屏障功能。銀屑病、炎、濕疹及長期外用激素等均會(huì)破壞皮膚角質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)表皮水分丟失
3增多，皮膚變得干燥、脫屑。皮脂膜和角質(zhì)細(xì)胞具有四大功能I.屏障功能構(gòu)成了物理、化學(xué)和生物因素進(jìn)入皮膚的第一道屏障；11.保濕功能皮脂膜中的脂質(zhì)能鎖住水分阻止真皮營養(yǎng)物質(zhì)、保濕因子、水分散失，使角質(zhì)層含水量保持在20%左右，對皮膚起到滋潤保濕作用III.調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)皮脂膜中的亞油酸、亞麻酸可對炎癥有一定的調(diào)節(jié)作用；IV.防曬功能角質(zhì)層本身就是一道抵御日光的屏障，而皮脂膜內(nèi)的角鯊烯具有防曬作用。
②水通道蛋白(AQPs)在角質(zhì)形成細(xì)胞中是一個(gè)完整的跨膜蛋白通道，它的分子量為28kDa—個(gè)(AQPs)分子每秒鐘可以允許30億個(gè)水分子通過。由于(AQPs)的存在，細(xì)胞才可以快速調(diào)節(jié)自身體積和內(nèi)部滲透壓。(AQPs)家族成員主要存在于動(dòng)物和植物中，目前哺乳動(dòng)物中已發(fā)現(xiàn)13種(AQPs)，根據(jù)AQP的特性可分為三類第一類為能透水的AQPO至AQP6，第二類為能透水、甘油和尿素的AQP3和AQP7，第三類為能透水和中性物質(zhì)的AQP9和AQP10，其中分布于皮膚的主要是AQP3。 AQP3不僅能轉(zhuǎn)運(yùn)水，而且也能轉(zhuǎn)運(yùn)尿素和甘油等物質(zhì)進(jìn)出皮膚，是維持皮膚水合作用的一個(gè)關(guān)鍵因素，AQP3與細(xì)胞的遷移以及皮膚的創(chuàng)傷愈合有密切的關(guān)系。有研究還表明紫外線可導(dǎo)致AQP3表達(dá)下調(diào)從而損傷皮膚的屏障功能。
③天然保濕因子是存在于角質(zhì)層內(nèi)能與水結(jié)合的一些低分子量物質(zhì)的總稱，包括氨基酸、乳酸鹽、尿素等及其他未知的物質(zhì)，由角質(zhì)層細(xì)胞中中間絲相關(guān)蛋白不斷降解并最終由多種氨基酸產(chǎn)物衍化而成，其代謝周期為48h。它是參與減少皮膚透皮水分丟失的重要生物分子，水溶性極強(qiáng)，很容易隨著水分移出細(xì)胞外。膠原纖維、彈力纖維、基質(zhì)及細(xì)胞成分組成。 I.膠原纖維又稱膠原蛋白，大部分為I型和III型膠原，其中I型膠原占80%左
右，是成熟的膠原，ni型膠原是幼稚、纖細(xì)的膠原纖維。膠原纖維的主要作用是維持皮膚
的張力，其韌性大，抗拉力強(qiáng)，但缺乏彈性。日曬可減少I型膠原的形成，皮膚出現(xiàn)松弛和皺
紋。因此膠原蛋白可用來添加在化妝品中、注射或口服，以達(dá)到保濕、抗皺的目的。 II.彈力纖維又稱彈力蛋白，彈力纖維是由交叉相連的彈性蛋白外繞以微纖維
蛋白所構(gòu)成，對皮膚的彈性和順應(yīng)性起著重要的作用，使皮膚有彈性、光滑，減少皺紋的產(chǎn)
生。在皮膚的自然老化中，彈力纖維可進(jìn)行性地降解、變細(xì)、消失；紫外線所至的皮膚光老化
可使彈力纖維變性、增生、變粗、巻曲，形成濃染的團(tuán)塊狀聚集物，錨纖維幾乎消失，皮膚彈
性和順應(yīng)性亦隨之喪失。 III.網(wǎng)狀纖維是幼稚、纖細(xì)的未成熟膠原纖維，在乳頭層多數(shù)和表皮垂直，在網(wǎng)狀層排列方向多數(shù)和膠原纖維一致，III型膠原是網(wǎng)狀纖維主要成分，創(chuàng)傷愈合時(shí)或肉芽腫組織中可大量增生而影響皮膚的外觀。 IV.基質(zhì)基質(zhì)為填充于纖維、纖維束間隙和細(xì)胞間的無定形物質(zhì)，不僅有支持和連接細(xì)胞的作用，而且還有保濕、參與細(xì)胞的形態(tài)變化、增殖、分化、遷移及促進(jìn)膠原纖維成熟等多種生物學(xué)作用。基質(zhì)由多種結(jié)構(gòu)性糖蛋白、蛋白多糖(pmteoglycan)和氨基聚糖(glycoaminoglycan)構(gòu)成。氨基聚糖包括透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、肝素等，雖然氨基聚糖占皮膚干重不足1 % ，但它組織的水化起重要作用，可結(jié)合1000倍于自身重量的水。真皮組織含有大量的水，是細(xì)胞生理活動(dòng)的基礎(chǔ)，也是表皮的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此皮膚不僅需要表皮層的保濕，還需要真皮層保濕。 V細(xì)胞主要有成纖維細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞和噬色素細(xì)胞等，還有少量淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞。其中成纖維細(xì)胞是真皮結(jié)締組織中最重要的細(xì)胞，
4它主要功能包括合成各種膠原、彈性蛋白及細(xì)胞外基質(zhì)成分，同時(shí)還產(chǎn)生分解這些成分的
酶類，來維持代謝平衡，在創(chuàng)傷愈合過程和皮膚的老化中十分重要。成纖維細(xì)胞過度增生可
產(chǎn)生病理性纖維增生，形成瘢痕疙瘩。在皮膚的老化中，皺紋部位膠原萎縮與紫外線介導(dǎo)的
成纖維細(xì)胞損傷有明顯的關(guān)系，它可使成纖維細(xì)胞合成膠原的能力下降。
(2)透明層僅見于掌跖，由2 3層扁平、境界不清、無核、嗜酸性、緊密聯(lián)結(jié)的細(xì)
胞構(gòu)成，介于角質(zhì)層和顆粒層之間，胞漿中有較多的疏水性蛋白結(jié)合磷脂并和張力細(xì)絲融
合在一起.有防止水及電解質(zhì)通過的屏障作用。 (3)顆粒層一般為2 4層梭形或扁平細(xì)胞構(gòu)成.細(xì)胞中可見大量的透明角質(zhì) 顆粒，包含厚絲狀聚合蛋白，其前身是絲狀蛋白聚合蛋白。絲狀聚合蛋白與角蛋白之間相互 交織.為顆粒層提供張力，并作為其組成部分。顆粒層不僅有合成代謝的作用，而且有分解 代謝的作用，是皮膚一道防水屏障。 (4)棘層位于基底層上方，由4 8層多角形細(xì)胞構(gòu)成。角蛋白1和10首先發(fā) 現(xiàn)于該層中，這些蛋白構(gòu)成一個(gè)堅(jiān)硬的細(xì)胞架，為細(xì)胞提供更大的、機(jī)械性的張力。其釋放 的脂質(zhì)包裹在皮膚表面，是皮膚屏障的組成部分，可避免水分從皮膚中過度流失。在一些美 容手術(shù)后，如面部磨削術(shù)和化學(xué)剝脫術(shù)后，靠近基底層的棘細(xì)胞也可以進(jìn)行細(xì)胞分裂，參
與修復(fù)。 (5)基底層是表皮細(xì)胞的"發(fā)源地"。位于表皮的最底層，僅為一層柱狀或立方狀 的基底細(xì)胞，與基底膜帶垂直排列成柵欄狀，是除角質(zhì)層以外與皮膚美容關(guān)系最密切的結(jié) 構(gòu)，為表皮細(xì)胞的生發(fā)層，與皮膚自我修復(fù)、創(chuàng)傷修復(fù)及疤痕形成有關(guān)。外傷或手術(shù)時(shí)，尤其 是進(jìn)行面部美容磨削術(shù)與激光治療，只要注意創(chuàng)面不突破真皮淺層，沒有破壞嵌在真皮淺 層的表皮腳，其修復(fù)由基底層完成.皮膚就能恢復(fù)到原來的狀態(tài)。若突破真皮淺層，由真皮 結(jié)締組織增生修復(fù)創(chuàng)面，則會(huì)形成疤痕。 此外，表皮更替周期和美容有相當(dāng)重要的關(guān)系。角質(zhì)形成細(xì)胞增殖有一定的規(guī)律 性，每日大約有10%的細(xì)胞進(jìn)行核分裂活動(dòng)，有次序地逐漸向上移動(dòng)，角質(zhì)形成細(xì)胞由基 底層移行至角質(zhì)層表面而脫落共需約28天，稱為表皮通過時(shí)間或更替時(shí)間，也稱為表皮的 "生命周期"。表皮更替時(shí)間過快或過慢都不利于皮膚的美容。這個(gè)規(guī)律提示我們在進(jìn)行皮 膚基礎(chǔ)護(hù)理時(shí)，不能人為干預(yù)皮膚的"生命周期"。 下面再簡單說明一般的外用護(hù)膚品怎樣通過皮膚發(fā)揮作用。表皮吸收外界物質(zhì)有 三個(gè)途徑角質(zhì)層、毛囊皮脂腺和汗腺口。其中角質(zhì)層是從外界吸收水分的重要通道，直接 影響其吸收效果的因素有以下幾點(diǎn) 1、表皮的厚薄及部位角質(zhì)層不同的部位有不同的厚度，皮膚吸收能力依次為 陰囊>前額>大腿屈面>上臂屈面>前臂>掌面。臉部皮膚不同的部位也是因同樣的原因 造成美容護(hù)理后呈現(xiàn)不同的膚感狀態(tài)，最常見的是混合型皮膚，其T型區(qū)往往最先失去良 好的滋潤感。 2、角質(zhì)層的水合狀態(tài)水分在角質(zhì)細(xì)胞間與脂質(zhì)和保濕因子(NMF)形成的穩(wěn)定狀 態(tài)也被稱為水合狀態(tài)。這種程度越高表示表層水量保有越多，此時(shí)對外界的水分吸收能力 越低，但相反的影響是對水溶性的功能添加劑透過率越高。特別是當(dāng)采用離子導(dǎo)入方式 時(shí)，由于水合增加了導(dǎo)電性，使在水劑載體中的電離狀添加劑大量隨閉合電流通路穿入表 皮內(nèi)，提高了皮膚的含有量，這是超聲波導(dǎo)入儀不能代替的。在專業(yè)線產(chǎn)品中雖然配入很多各種保濕劑，如果不注重噴蒸效果以及不進(jìn)行其后保濕產(chǎn)品的離子導(dǎo)入，將會(huì)大大將低滋 潤感的保留時(shí)間。 3、角質(zhì)細(xì)胞膜的滲透壓前面已經(jīng)講述了外界水分主要靠表皮細(xì)胞膜的透入而進(jìn) 入內(nèi)層，但是通常體內(nèi)排泄壓力要略大于外部進(jìn)入壓力，造成難以形成深層水合度的提升。 我們通過面膜外敷的臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)含有相同功能添加劑的不同面膜表現(xiàn)出不同的水分吸 收效果干粉面膜<濕粉面膜<乳化粉類面膜<乳化膏體面膜<乳化成膜型面膜<成膜類 面膜。當(dāng)外用面膜封閉度越高其補(bǔ)水度也越高，反應(yīng)出外部增加壓力對細(xì)胞膜透析的影響 是非常重要的。但也應(yīng)看到，過高成膜類面膜對脂質(zhì)的大量粘帶作用，反而造成皮膚的粗 糙。 4、外部溫度的影響當(dāng)美容室內(nèi)溫度升高時(shí)，皮膚血管擴(kuò)張，血流通量加大，流速 加快，已透入組織內(nèi)的物質(zhì)擴(kuò)散也加快，不斷地進(jìn)入血液循環(huán)之中。因此，表皮的吸收也會(huì) 得到很大提高。
關(guān)于透皮吸收的研究，目前國內(nèi)外僅對藥物的透皮吸收研究較多，主要集中在藥
物滲透特性、藥動(dòng)學(xué)分析、促滲劑的選用等幾個(gè)方面；而對于化妝品的透皮吸收，則是近十
幾年才開始重視并發(fā)展起來的。但透皮吸收對于化妝品的重要性及其技術(shù)發(fā)展的迅猛性都
是行業(yè)中不可忽視的。 1、化妝品中透皮吸收的重要性 護(hù)膚品中大量營養(yǎng)成分的添加，無論什么精華，什么營養(yǎng)，只要皮膚不能吸收，都 是一種負(fù)擔(dān)。皮膚表面化妝品營養(yǎng)成分過剩，正是造成"皮膚氧化"的重要原因之一。俄羅 斯新西伯利亞細(xì)胞作物研究所的專家就發(fā)現(xiàn)，約有90%的抗皺霜營養(yǎng)成分過剩，非但不能 起到延緩衰老的作用，反而會(huì)加速皮膚的衰老。 同時(shí)，皮膚表面的細(xì)菌在生長繁殖過程中需要大量維生素、蛋白質(zhì)和生物細(xì)胞營 養(yǎng)物，而這些也正是營養(yǎng)化妝品的主要成分。如果化妝品的營養(yǎng)成分不能被皮膚完全吸收， 那么它就會(huì)成為寄生細(xì)菌生長繁殖的溫床，而大量的細(xì)菌還會(huì)導(dǎo)致皮膚感染。這些都說明 我們應(yīng)更重視化妝品功效成分"透皮吸收"的研究，而不是盲目地追求開發(fā)新原料，生產(chǎn)新 產(chǎn)品。只有建立在透皮吸收的基礎(chǔ)上，修復(fù)、美白、抗衰老等功效成分的開發(fā)與應(yīng)用才有意 義。 2、化妝品中透皮吸收的定義 化妝品功效成分的透皮吸收，指化妝品中的有效成分通過皮膚，并到達(dá)不同作用
皮膚層發(fā)揮各種作用的過程?；瘖y品與藥物"透皮吸收"的主要區(qū)別在于化妝品功能性成
分是以經(jīng)皮滲透后積聚在作用皮膚層為最終目的。大多數(shù)化妝品功能性成分需要進(jìn)入皮
膚，是按產(chǎn)品的有效性作用于皮膚表面或進(jìn)入表皮或真皮，并在該部位積聚和發(fā)揮作用，不
需要透過皮膚進(jìn)入體循環(huán)。例如，防曬產(chǎn)品中的UV吸收劑應(yīng)滯留在皮膚表面，起吸收和反
射紫外線的作用；美白產(chǎn)品中的美白劑常作用于表皮中的基底層，阻斷黑色素的產(chǎn)生；而
表皮修復(fù)產(chǎn)品的功效成分則常作用于表皮角質(zhì)層下細(xì)胞，到達(dá)修復(fù)效果。 采用傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的化妝品，活性物質(zhì)的功效往往難以充分發(fā)揮。如今，采用納米
技術(shù)對化妝品進(jìn)行處理，將使活性物質(zhì)功效得到充分的發(fā)揮，從而大大提高化妝品的性能。
正因?yàn)槿绱耍{米技術(shù)迅速在化妝品工業(yè)中得到了廣泛的應(yīng)用。 目前，納米技術(shù)在化妝品領(lǐng)域中的應(yīng)用主要在于乳化技術(shù)、活性物質(zhì)傳輸技術(shù)、防
6曬劑等方面，并已開發(fā)出各種相關(guān)產(chǎn)品，得到許多消費(fèi)者的認(rèn)同。乳化技術(shù)是制備膏霜和乳 液類化妝品的關(guān)鍵技術(shù)，傳統(tǒng)工藝乳化得到的化妝品膏體內(nèi)部結(jié)構(gòu)為膠團(tuán)狀或膠束狀，其 直徑為微米數(shù)量級，對皮膚的滲透能力較弱。皮膚一般只能通過表皮吸收和毛囊腺吸收這 兩條途徑，皮膚最外層為疏水性角質(zhì)層，因而水溶性物質(zhì)和大分子量的物質(zhì)通過這兩條途 徑的吸收相當(dāng)不易。因此，傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的化妝品膏體不易被表皮細(xì)胞吸收。納米技術(shù)應(yīng) 用到化妝品制造業(yè)中，可以對傳統(tǒng)工藝乳化得到的化妝品的缺陷進(jìn)行很好的改進(jìn)。采用納 米技術(shù)制備化妝品時(shí)，將化妝品中最具功效的成分進(jìn)行特殊處理，得到的化妝品膏體微粒 尺寸可以達(dá)到納米數(shù)量級。這種納米級膏體對皮膚的滲透性大大增加，皮膚選擇吸收功效 成分的利用率隨之大大提高。

發(fā)明內(nèi)容
1.為了克服解決上述背景技術(shù)中存在的的缺點(diǎn)(l)采用傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的化妝品
對皮膚的滲透能力較弱，料體不易被表皮細(xì)胞吸收，其中的活性成分同樣因皮膚最外層為
疏水性的角質(zhì)層，使水溶性物質(zhì)和大分子層的物質(zhì)通過表皮和皮囊腺吸收受阻，以致達(dá)不
到預(yù)計(jì)的效果。(2)如何保護(hù)不耐熱、高溫功效成分的活性及含量、特別是保護(hù)蛋白類、肽
類、酶類、細(xì)胞生長因子類等活性物質(zhì)，提高蛋白多肽類藥物或功效成分的穩(wěn)定性，能最大
限度保持其生物活性及生物學(xué)作用，這是普通的劑型不能解決功效成分穩(wěn)定性的問題。(3)
如何增大難溶于水的物質(zhì)的溶解性、提高易水解物質(zhì)的穩(wěn)定性。如脂溶性的維生素A、維
生素D、維生素K、輔酶Q10的化學(xué)穩(wěn)定性。(4)如何使得化妝品不含防腐劑、降低毒性、提高
安全性、且不需特殊設(shè)備即可大量生產(chǎn)。這些都是本發(fā)明所要解決的問題。 本發(fā)明的目的是針對背景技術(shù)中存在的缺點(diǎn)和問題加以改進(jìn)、創(chuàng)新，提供一種用
于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳及其制備方法。 2.本發(fā)明的技術(shù)方案 (1)本發(fā)明一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳是由下列組份制成的(用量為重 量份)肉豆蔻酸異丙酯11-13，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯25-30，聚甘油脂肪酸酯9-12， 蒸餾水35-40， EDTA-2NA 0. 05-0. 1，檸檬酸0. 3-0. 5，檸檬酸鈉1-1. 5，甘氨酸0. 7-1，海 藻糖1.5-2. l，金屬硫蛋白0. 001-0. 007，表皮細(xì)胞生長因子0. 00005-0. 00015，維生素E 1.6-2.0，維生素A 1.6-2.0，黃白紫花油(黃芪、白芷、紫草、花生油的復(fù)合物)1.6-2.0。
(2)本發(fā)明優(yōu)選重量配比是肉豆蔻酸異丙酯12.25，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 29. 1，聚甘油脂肪酸酯9. 7，蒸餾水39. 2769， EDTA-2NA 0. 087，檸檬酸0. 437，檸檬酸鈉 1. 27，甘氨酸0. 874，海藻糖1. 75，金屬硫蛋白0. 005，表皮細(xì)胞生長因子0. 0001，維生素E 1. 75，維生素Al. 75，黃白紫花油(黃芪、白芷、紫草、花生油的復(fù)合物)1. 75。
(3)本發(fā)明的組方原則一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳，采用多種不同機(jī)理的 功效成分進(jìn)行復(fù)配而成，以上功效成分具有去死皮、促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞增生、營養(yǎng)、保濕、抗氧化 和去除自由基等功效。以上功效成分通過一種先進(jìn)皮膚傳遞載體-納米乳進(jìn)行研發(fā)。 一方 面，納米乳能迅速透過皮膚、且具有一定的角質(zhì)剝脫作用，能有效去除死皮，另一方面，有助 于功效成分進(jìn)入皮膚，提高功效成分表皮修復(fù)效果。以下為各功效成分的作用機(jī)理
維生素A (Vitamin A， VA)是一種良好的皮膚營養(yǎng)劑和調(diào)理劑，且還能促進(jìn)和維持 上皮組織正常功能和結(jié)構(gòu)完整性，這無疑有利于表皮的修復(fù)和皮膚屏障功能的重建，并能改善因VA缺乏所導(dǎo)致的糙皮病等。而且VA也是一種小分子抗氧化劑，其抗氧化作用與其 具備的多烯烴疏水鏈有關(guān)，它能預(yù)防超氧陰離子自由基和羥自由基的損傷，結(jié)合和穩(wěn)定過 氧化氫結(jié)構(gòu)；特別是VA作為體內(nèi)自由基清除劑及酶與非酶抗氧化劑，由于其含量隨年齡增 長而下降，導(dǎo)致體內(nèi)自由基積累，因此，適當(dāng)補(bǔ)充VA對于皮膚的抗氧化能起到較好的效果。
維生素E (Vitamin E， VE)是一種具有廣泛生理作用的脂溶性維生素，也是一種良 好的皮膚營養(yǎng)劑及油溶性小分子抗氧化劑，它可以有效營養(yǎng)和調(diào)理皮膚，并迅速中斷自由 基的連鎖反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，防止膜上脂質(zhì)過氧化作用。VE還具有維持結(jié)締組織彈 性，促進(jìn)血管的血液循環(huán)的作用。在體內(nèi)還可調(diào)節(jié)激素正常分泌，控制體內(nèi)酸素消耗，保護(hù) 皮膚粘膜等功能，從而使皮膚滋潤健美，充滿青春活力。VE對保持皮膚代謝，防止皮膚衰老 起著至關(guān)重要的作用，也可預(yù)防面部產(chǎn)生黑褐色斑，也即類脂褐色素的積累，促進(jìn)末端血管 的血液循環(huán)，使皮膚有豐富的營養(yǎng)供應(yīng)，保持光澤滋潤。 海藻糖(trehalose, TRH)是由兩個(gè)葡萄糖基分子通過半縮醛基縮合而成的非還 原性雙糖，也是一種對熱對酸相對穩(wěn)定的生物大分子非特異性保護(hù)劑和天然雙糖，它具有 良好的安全性，對皮膚組織的保護(hù)、調(diào)理和修復(fù)作用及防護(hù)DNA免受輻射損害的功效等表 現(xiàn)在多個(gè)方面①它是一種細(xì)胞膜的保護(hù)劑，在低溫下替代水分子與膜磷脂結(jié)合，阻止細(xì)胞 外凋亡信號；②它是一種細(xì)胞膜的穩(wěn)定劑，能穩(wěn)定細(xì)胞膜成分的分子結(jié)構(gòu)，減少膜本身變化 產(chǎn)生損傷；③TRH與葡萄糖及蔗糖一樣，其羥基也能代替水分子同蛋白質(zhì)分子表面部分結(jié) 合，對蛋白質(zhì)形成保護(hù)，同時(shí)海藻糖的分子較小，易于以分子形式填充到蛋白質(zhì)分子的空隙 中，有效限制蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而避免膜蛋白質(zhì)變性失活；④海藻糖具有 穩(wěn)定超氧化物歧化酶(SOD)活性的機(jī)能，從而提高皮膚活力。提高清除0H—、 02—與11202的 能力，保護(hù)細(xì)胞免受自由基損傷，也可保護(hù)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶類活性，阻止多價(jià)不飽和脂肪酸 過氧化反應(yīng)，維持生物膜正常脂質(zhì)結(jié)構(gòu)； TRH被證實(shí)還是EGF最合適的保護(hù)劑，對于維持 EGF的穩(wěn)定性和生物活性十分重要；⑥皮膚抗干燥脫水保護(hù)作用，TRH能與生物分子形成氫 鍵，代替空間結(jié)構(gòu)所必須的水分子。即生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸、糖類、脂質(zhì)類及其它生物大 分子周圍均包著一層水膜，這層水膜是維持生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能必不可少的物質(zhì)基礎(chǔ)， 當(dāng)干燥、冷凍等條件下失去水膜時(shí)，TRH分子能在失水部位與生物大分子以氫鍵連接，形成 一層保護(hù)膜以代替失去的結(jié)構(gòu)水膜，而不至于使生物分子喪失活性。防止細(xì)胞因失水而造 成養(yǎng)分的損失和細(xì)胞的損傷。 甘氨酸(Glycine, Gly)又稱a -氨基乙酸、氨基醋酸，屬于不帶電荷的極性氨基 酸和非必需氨基酸，也是化學(xué)結(jié)構(gòu)最為簡單的氨基酸(僅含一個(gè)氨基和一個(gè)羧基)，其分子 結(jié)構(gòu)簡單、分子量小，因此，易于在蛋白中作為靈活的連接區(qū)，參與形成螺旋、胞外的信號分 子、細(xì)胞膜或酶的識(shí)別位點(diǎn)。近年研究發(fā)現(xiàn)，Gly是一種良好的細(xì)胞保護(hù)劑，還具有抗炎、 免疫調(diào)節(jié)和細(xì)胞保護(hù)等作用，它通過直接作用靶細(xì)胞或間接調(diào)節(jié)炎癥因子起到細(xì)胞保護(hù)作 用，主要包括減少氧自由基的生成、調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)的生成、降低脂衍化介質(zhì)合成、抑制酶的 活性等，這對于表皮組織修復(fù)和皮膚屏障功能重建有積極意義。EGF屬于生物活性多肽的基 因重組產(chǎn)品，易受環(huán)境影響而失活。因此，要根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)，選擇甘氨酸作為合適的保護(hù)劑， 對于保持細(xì)胞因子的活性，保證產(chǎn)品質(zhì)量至關(guān)重要。 金屬硫蛋白(Metallothionein，簡稱MT)是一類存在于細(xì)胞中的低分子量、高金 屬含量、富含半胱氨酸、功能獨(dú)特、可被高度誘導(dǎo)的小分子蛋白質(zhì)，其分子呈現(xiàn)獨(dú)特的金屬硫四面體絡(luò)合結(jié)構(gòu)，具有很強(qiáng)的耐熱性和抗蛋白酶解的能力及良好的穩(wěn)定性。MT中還原狀 態(tài)巰基具有親核性，使得它對羥自由基( OH)、超氧自由基( 0—2)或一氧化氮(NO)等有 較強(qiáng)的清除作用，從而可修復(fù)被損細(xì)胞并保護(hù)完好細(xì)胞。MT還可抵抗電離輻射或紫外線引 起的細(xì)胞組織損傷，并起到一定修復(fù)作用。MT具有絡(luò)合重金屬功能，參與體內(nèi)微量元素代謝 和解除重金屬的毒性，可與鉛、砷、汞等有毒金屬緊密結(jié)合，消除重金屬的危害，是目前較為 理想的生物解毒劑。MT在創(chuàng)面修復(fù)和愈合作用的研究證實(shí)，MT涉及表皮角質(zhì)細(xì)胞的增生， 這對皮膚屏障功能的重建和表皮組織的修復(fù)具有重要意義。 表皮細(xì)胞生長因子(Epidermal Growth Factor, EGF)是人體內(nèi)的一種生物活性物 質(zhì)，由53個(gè)氨基酸殘基組成并包括3個(gè)二硫鍵的多肽，可通過細(xì)胞因子的磷酸化將生物信 息傳導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)，增強(qiáng)糖酵解，激活細(xì)胞外透明質(zhì)酸、糖蛋白等大分子合成，激活DNA合成， 激活RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白合成，促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化，維持細(xì)胞的生長。EGF還能增強(qiáng)細(xì)胞抑制 凋亡基因BCL-2功能，抵御導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)DNA斷裂、變異的外來因素(如紫外線、低溫、藥物、 激素等)剌激，防止細(xì)胞凋亡，增加皮膚抗干擾能力。EGF具有趨化、增殖和重建等作用和功 能，它與EGFR結(jié)合后可以介導(dǎo)有絲分裂信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，促進(jìn)細(xì)胞的分裂、增生，它導(dǎo)致細(xì)胞 分裂和增值的分子機(jī)制是與EGFR結(jié)合后使其受體酪氨酸激酶上酪氨酸殘基自動(dòng)磷酸化， 并通過激活磷酯酰肌醇傳導(dǎo)通路，導(dǎo)致蛋白激酶激活，增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，且通過改變細(xì) 胞內(nèi)的Ca2+濃度誘導(dǎo)細(xì)胞增生。同時(shí)EGF通過激活ras途徑，導(dǎo)致包括ERK的促分裂素激 活的蛋白激酶途徑發(fā)揮作用。其所誘導(dǎo)綜合生物學(xué)效應(yīng)，既能直接促進(jìn)表皮細(xì)胞增殖效應(yīng)， 還能促進(jìn)皮膚創(chuàng)面組織修復(fù)過程中DNA、 RNA和羥脯氨酸的合成，誘導(dǎo)分化成熟表皮細(xì)胞逆 轉(zhuǎn)化為表皮干細(xì)胞，加速創(chuàng)面肉芽組織生成和上皮細(xì)胞增殖，縮短創(chuàng)面的愈合時(shí)間，提高創(chuàng) 面修復(fù)質(zhì)量?？傊?，EGF能促進(jìn)皮膚細(xì)胞的增殖分化，加速新陳代謝，提高新細(xì)胞在皮膚中 所占的比例，在表皮修復(fù)方面作用普遍公認(rèn)且機(jī)制清楚。 復(fù)方黃白紫花油中的紫草、白芷、黃芪等，具有防腐生肌、活血解毒、皮膚免疫調(diào)節(jié) 等作用，并且具有較強(qiáng)的收斂作用，而其中的油性部分又對創(chuàng)面有滋潤營養(yǎng)的作用。有研 究顯示，它們對皮膚創(chuàng)面的修復(fù)治療效果明顯，可能是剌激了皮膚細(xì)胞生長因子(EGF、 FGF 等)的表達(dá)增加，從而，剌激了皮膚細(xì)胞的分裂和增殖；同時(shí)，通過調(diào)動(dòng)和激活組織細(xì)胞而 使生長因子分泌，使表皮修復(fù)和愈合過程的中間產(chǎn)物發(fā)生明顯變化，促進(jìn)了皮膚細(xì)胞及組 織生長，并為創(chuàng)面的修復(fù)提供了良好的物質(zhì)條件，從而加速了創(chuàng)面的修復(fù)和愈合。復(fù)方黃白 紫花油可能通過調(diào)節(jié)創(chuàng)面的內(nèi)皮素(ET)-1、一氧化氮(N0)的含量，優(yōu)化ET-1/N0比值，從 而減少創(chuàng)面組織細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化損傷程度。有學(xué)者在對復(fù)方黃白紫花油研究中發(fā)現(xiàn)，它 能使皮膚創(chuàng)面成纖維細(xì)胞、膠原和毛細(xì)血管增多，且堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)及基 因表達(dá)在各時(shí)段均明顯超過對照組，這對表皮修復(fù)意義重要。紫草是傳統(tǒng)中藥最多最好應(yīng) 用于表皮修復(fù)的草藥，而且有很好的天然色素和生物活性成分，其中含有三萜皂苷、硅酸及 尿囊素等成分，對皮膚修復(fù)具有積極作用。特別是紫草根及葉子中含有的尿囊素是很好的 抗氧化劑和抗剌激劑，美國FDA將尿囊素列入第一類(安全高效)活性組分護(hù)膚劑，可用于 香波、唇膏、刮臉?biāo)⒃∮媚z、口腔衛(wèi)生用品中，適用于皮膚損傷修復(fù)、抗剌激過敏、皮膚炎 癥、燒傷燙傷治療。而且作為抗剌激劑有助于減輕香皂等表面活性劑、油、酸及堿性化妝品 導(dǎo)致的不適和皮膚剌激，消除皮膚發(fā)紅、粗糙等過敏現(xiàn)象。尿囊素還有剌激細(xì)胞增殖的作 用，有助于剌激創(chuàng)面新的健康組織生長，達(dá)到修復(fù)皮膚、誘導(dǎo)新生皮膚生成的效果，可用于暫時(shí)性保護(hù)小傷口、傷痕、燒傷、曬傷等，對擦傷、皸裂、干裂的皮膚作暫時(shí)性保護(hù)。使皮膚發(fā) 炎、過敏反應(yīng)、皺紋及老化、龜裂得到修復(fù)，還有助于恢復(fù)正常作用。尿囊素和洋蔥提取物按 照合適比例組成的復(fù)合物被證實(shí)能夠改善瘢痕癥狀。 乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)是一種重要絡(luò)合劑，用于絡(luò)合體系中的金屬離子 和分離金屬，有助與保持功效成分的有效性。
檸檬酸和二水合檸檬酸三鈉能夠組成良好的緩沖體系，維持納米乳體系ra值的
相對穩(wěn)定，從而有利于功效成分的有效發(fā)揮。 總之，高度重視并最大限度地發(fā)揮整個(gè)套裝中各個(gè)功效成分所具有的生物學(xué)作用 和功能，包括與某些天然藥物或活性成分及營養(yǎng)保濕劑的有機(jī)結(jié)合、合理使用，使其與表皮 修復(fù)納米乳相互協(xié)調(diào)、共濟(jì)協(xié)同和聯(lián)合增效，達(dá)到更為理想的表皮修復(fù)效果。
(4)本發(fā)明一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳的制備方法 ①稱量組方中水量置于三角燒瓶，再依次溶解加入EDTA-2NA，檸檬酸，檸檬酸鈉，
甘氨酸，海藻糖，金屬硫蛋白，表皮細(xì)胞生長因子，將此溶液作為水相(1)。注意此步驟中，
每添加一種原料后需要待其完全溶解后才能再添加第二種成分，依此類推。 ②用分析天平準(zhǔn)確稱取肉豆蔻酸異丙酯，置于另一個(gè)經(jīng)過洗消過的三角燒瓶之
中；依次溶解加入維生素E，維生素A，黃白紫花油，超聲充分混合溶解后，用記號筆清楚標(biāo)
記為油相(II)。同樣，每添加一種原料后需要進(jìn)行充分混合均勻后才能再添加第二種成分，
依此類推。 ③按照事先已設(shè)計(jì)好的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(S):聚甘油脂肪酸酯(C)= 3 : 1的比例，分別準(zhǔn)確稱取辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯，并將這兩者原料 置于第三個(gè)經(jīng)過洗消過的三角燒瓶之中；加蓋，并將此三角燒瓶迅速置于液體快速混合器 上，充分混合均勻，使之形成乳化劑/助乳化劑(S/C)混合物，并用記號筆清楚標(biāo)記為S/C 混合物(III)。按照油相(ii) : s/c(m):水相(i) = 17.5% : 38.8% : 43.7%的比例，先
分別取水相a)、s/c混合物(in)置于第四個(gè)經(jīng)過洗消過的三角燒瓶之中。 ⑤將上述水相(I) 、S/C混合物(III)兩液相充分混合后，再在室溫25。C條件下或
者自然室溫中，將其放入超聲振蕩器中震蕩并超聲，或者在室溫25t:條件下或者自然室溫
中，啟動(dòng)定時(shí)恒溫磁力攪拌器攪拌，此時(shí)會(huì)產(chǎn)生放熱反應(yīng)，需待冷卻后再在此容器中直接加
入油相(II)，并將整個(gè)體系在超聲振蕩器中超聲5min左右，或者在室溫25t:條件下或者自 然室溫中，啟動(dòng)定時(shí)恒溫磁力攪拌器攪拌。 ⑥關(guān)閉超聲振蕩器或者定時(shí)恒溫磁力攪拌器，取下三角燒瓶，觀察其外觀如是淡 紫色、流體性和分散性好、有明顯可見乳光者，即為一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳。
⑦將此用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳迅速分裝于不同規(guī)格的避光玻璃容器之中，迅
速加蓋，包裝，并置于2-8t:密閉保存即可。 ⑧按國際國內(nèi)企業(yè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和要求，從上述分裝產(chǎn)品中隨機(jī)抽樣，首先采用馬爾 文儀器檢測該納米乳樣品的顆粒分布及粒徑大小，在符合納米乳的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，再按照國 家有關(guān)部門的具體要求，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的系統(tǒng)檢測；待判斷或評價(jià)其完全符合國家相關(guān)規(guī) 定和標(biāo)準(zhǔn)及批準(zhǔn)文號后，即可作為產(chǎn)品上市銷售或在美容院內(nèi)專用。 本發(fā)明提供的一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳，其透皮吸收好，同時(shí)提高了功效
10成分的穩(wěn)定性、安全性，且制備工藝簡單，易于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
3.本發(fā)明的有益效果 本發(fā)明一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳與現(xiàn)有的技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)
1)穩(wěn)定性更高本發(fā)明的一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳中的生物功效成分表 皮生長因子以及甘氨酸及其輔助功效成分在美容化妝品中的穩(wěn)定性至關(guān)重要。如功效成 分不能在美容化妝品中保持穩(wěn)定，且在有效期穩(wěn)定存在，其產(chǎn)品自然無法保證質(zhì)量。應(yīng)用 本發(fā)明的納米乳技術(shù)配制，其形成的功效納米乳則可顯著地提高其穩(wěn)定性，大大延長其有 效期，且肉眼觀察外觀清澈、透明、美觀。按照納米乳穩(wěn)定性試驗(yàn)要求驗(yàn)證①將本納米乳 復(fù)合物和傳統(tǒng)方法制備的同類型同劑量功效成分的非納米乳精華素同時(shí)置于日光燈和自 然光下連續(xù)照射0、5、10、15、30天取樣測定證實(shí)，復(fù)合納米乳較傳統(tǒng)工藝配制的精華素對
光照的穩(wěn)定性大大提高；②將納米乳復(fù)合物和傳統(tǒng)精華素同時(shí)置于ot:、4t:、25t:、4(rc、 6(TC、8(TC下，按0、5、10、15、30天取樣測定證實(shí)，復(fù)合納米乳較精華素對在不同溫度條 件下的穩(wěn)定性更高；③將納米乳復(fù)合物和傳統(tǒng)精華素同時(shí)置于空氣中(室溫條件溫度為 20-25t:，相對濕度為50% -75% )暴露，按0、5、 10、 15、30天取樣測定證實(shí)，納米乳復(fù)合物 較精華素對暴露在空氣中和室溫自然存放的穩(wěn)定性試驗(yàn)更高；且置于自然室溫空氣中(室 溫條件溫度為25 32°C ，相對濕度為40 80% )存放30天取樣測定也證實(shí)，納米乳復(fù)合 物較精華素穩(wěn)定性更高；④將納米乳復(fù)合物和傳統(tǒng)的精華素分別置于高速離心機(jī)中，并以 10000-16000rpm min—1的速度離心30min后測定證實(shí)，復(fù)合納米乳較精華素穩(wěn)定性更高。
2)透皮吸收率提高本發(fā)明的一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳粒徑小，粒徑分布 均勻，加上乳化好，與皮膚屏障結(jié)構(gòu)的相溶性好，因此，即使未添加任何促皮膚滲透劑，其功 效成分也較易透過表皮吸收，甚至可穿透全層皮膚發(fā)揮其良好的皮膚修復(fù)效果。特別是因 納米乳明顯提高了難溶性藥物在水相中的溶解度，使藥物作用強(qiáng)度加大，且納米乳的粒徑 和皮膚組織親合性，使功效成分或生物活性物質(zhì)的經(jīng)皮擴(kuò)散速率明顯增加，透皮吸收明顯 加快。 3)安全性更好在化妝品中無論哪種功效成分，在超過其使用劑量或多次反復(fù) 時(shí)，均有可能引起皮膚的異常反應(yīng)；特別是一些化學(xué)合成物質(zhì)或異源性的生物大分子物質(zhì) 更是如此。如果不采用相關(guān)的制劑或載體處理，其產(chǎn)品自然無法保證其安全性，甚至出現(xiàn)嚴(yán) 重的皮膚剌激或過敏或皮膚損傷。采用本發(fā)明納米乳配制技術(shù)處理后，其功效成分添加濃 度可大大降低，使用次數(shù)也明顯減少，促皮膚滲透的化學(xué)合成或半合成物質(zhì)基本剔除，則使 應(yīng)用的安全性得以提高。而且，在使用效果相同的情況下，大大降低了主要或輔助功效成 分的應(yīng)用濃度，并減少了傳統(tǒng)方法添加的濃度，使功效成分可能發(fā)生的皮膚剌激性、過敏反 應(yīng)、毒副作用大大降低，而安全性則大大提高。同時(shí)納米乳是透明液體，可以濾過，易于消毒 滅菌處理，且本身能抑制微生物的生長和繁殖，減少或不添加防腐劑，使皮膚剌激性減少， 安全性提高。 4)提高生物活性生物活性物質(zhì)通常需要在低溫或常溫下保存和使用才能發(fā)揮 其生物學(xué)作用的優(yōu)勢；因此，在配制產(chǎn)品過程中，這些生物活性物質(zhì)對最終反應(yīng)溫度要求甚
高；如反應(yīng)溫度過高容易使功效成分結(jié)構(gòu)改變而失去生物活性；而如反應(yīng)溫度過低，又無 法達(dá)到各反應(yīng)體系的溶解。但目前美容化妝品配制技術(shù)大多必須采用70-8(TC條件下進(jìn)行 水相和油相成分的乳化溶解，這樣是必使生物活性物質(zhì)大量丟失或滅活，不僅導(dǎo)致其含量大大下降，而且功效作用明顯降低，甚至失去其應(yīng)有的作用效果。而本發(fā)明制備的方法在室 溫下制備，因此對于保護(hù)不耐熱、高溫功效成分的活性及含量、特別是保護(hù)蛋白類、肽類、酶 類、細(xì)胞生長因子類等活性物質(zhì)具有重要價(jià)值，提高蛋白多肽類藥物或功效成分的穩(wěn)定性， 能最大限度保持其生物活性及生物學(xué)作用，對于這些功效成分在其它領(lǐng)域的應(yīng)用也提供了 一種很好的方法。 5)感觀性更好一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳為兩種互不相溶的液體按一定 的比例，在表面活性劑和助表面活性劑的共同作用下自然形成熱力學(xué)穩(wěn)定的、各向同性的、 流動(dòng)性好、清澈透明、晶瑩剔透的、有細(xì)微黃色的、略帶乳光的分散體系，具有良好的感官 性，實(shí)際使用舒適性極佳。 6)成本更低本產(chǎn)品成本減低，工藝簡單，利于環(huán)保。傳統(tǒng)工藝無論生產(chǎn)何種劑型 的表皮修復(fù)產(chǎn)品，由于需要使用多種原料，其油相和水相成分復(fù)雜，工藝流程繁瑣，生產(chǎn)周 期較長，特別是油相和水相必須在高溫條件下才能完成乳化等，而本發(fā)明皮膚外用表皮修 復(fù)納米乳復(fù)合物的配制成分精簡、成本低廉、制備工藝簡單、實(shí)際操作容易、制備高效快速、 不需要特殊儀器設(shè)備，不需要外界提供能量、不需要加熱。通過本發(fā)明制備的產(chǎn)品功效成分 用量的減少，而且，進(jìn)行納米乳配制可在常溫條件下自發(fā)形成納米乳體系，不需要電力和其 它能源，既可節(jié)約能源和成本，又不污染環(huán)境。降低了資源消耗和浪費(fèi)，也使產(chǎn)品成本大大 降低。 7)組方更加合理一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳，采用多種不同機(jī)理的功效成 分進(jìn)行復(fù)配而成，以上功效成分具有去死皮、促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞增生、營養(yǎng)、保濕、抗氧化和去除 自由基等功效。不同功效成分有機(jī)結(jié)合，聯(lián)合應(yīng)用，作用途徑和機(jī)制互補(bǔ)，即可相互協(xié)同，共 濟(jì)增效，可達(dá)到最佳的皮膚表皮修復(fù)的效果，且科學(xué)性明顯加強(qiáng)。 8)組方適應(yīng)性更好一種很好的產(chǎn)品需要面對不同的消費(fèi)人群，也要根據(jù)實(shí)際情 況對配方進(jìn)行變動(dòng)，如油性皮膚就不適用油性的化妝品。通過使用本發(fā)明制備的表皮修復(fù) 納米乳制劑復(fù)合物，主要包括油相、水相、表面活性劑和助表面活性劑四個(gè)相。通過這四個(gè) 相液及親水親油平衡值不同，可根據(jù)需要得到水包油型納米乳液(0/W)、油包水型納米乳液 (W/0)以及雙連續(xù)型納米乳液。因其劑型調(diào)整和轉(zhuǎn)換方便，因此可在實(shí)際應(yīng)用中根據(jù)季節(jié)、 皮膚類型及功效成分的理化特性，配制不同的用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳。
9)療效性更好產(chǎn)品的效果與其功效成分的共濟(jì)協(xié)同和聯(lián)合增效密切相關(guān)。目 前，傳統(tǒng)美容化妝品中并非所有的美容功效成分都能發(fā)揮共濟(jì)協(xié)同和聯(lián)合增效的優(yōu)勢，即 使添加了一些具有共濟(jì)協(xié)同和聯(lián)合增效的美容功效成分也未必能達(dá)到設(shè)計(jì)預(yù)期效果。而采 用本發(fā)明制備的表皮修復(fù)納米乳，由于其分散性，流動(dòng)性，均勻性，穩(wěn)定性，透皮吸收性及與 皮膚接觸的面積增大，作用時(shí)間延長等共同影響，使配伍以后的功效成分的共濟(jì)協(xié)同性和 聯(lián)合增效性更加明顯，實(shí)際應(yīng)用效果將會(huì)更加明顯和高效。應(yīng)用本發(fā)明研制的復(fù)合功效納 米乳與傳統(tǒng)工藝所配制的同類型同劑量功效成分的非納米乳精華素臨床試用的結(jié)果表明， 前者較后者有效率高30%左右。 10)推動(dòng)納米乳技術(shù)的應(yīng)用本發(fā)明可應(yīng)用于皮膚外用化妝品領(lǐng)域。 一種用于表 皮修復(fù)的復(fù)合納米乳作為新型透皮傳遞給藥系統(tǒng)(TDDS)屬熱力學(xué)穩(wěn)定系統(tǒng)，在皮膚表皮 修復(fù)產(chǎn)品方面應(yīng)用尚屬首創(chuàng)。同時(shí)通過本發(fā)明在化妝品方面的應(yīng)用，可帶動(dòng)納米乳載體系 統(tǒng)在其它的學(xué)科方面的應(yīng)用。
12
11)本發(fā)明將油溶性天然藥物提取物黃白紫花油和抗氧化劑及相關(guān)制劑結(jié)合使 用，充分發(fā)揮各自作用特點(diǎn)和優(yōu)勢，必將使皮膚修復(fù)效果和效率提高。
4.本發(fā)明的分析鑒定 1)肉眼外觀觀察空白納米乳液外觀無色或微微淡藍(lán)色、澄清透明、可見乳光、具 有一定的流動(dòng)性。用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳外觀無色或微微淡黃色、澄清透明、可見乳 光、具有一定的流動(dòng)性。 2)納米乳的電鏡形態(tài)觀察將2_3%的磷鎢酸鈉溶液滴加到蠟板上，將用于表皮 修復(fù)的復(fù)合納米乳滴加到銅網(wǎng)正面，用濾紙吸去過多的樣品液，將銅網(wǎng)正面朝下蓋到染液 滴上，負(fù)染30min，取出銅網(wǎng)，用濾紙吸取過多染液，將銅網(wǎng)正面朝上置于玻璃皿中自然晾干 2小時(shí)后，在透射電子顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)觀測并照相。納米乳的電鏡普通形態(tài)通常黑色物質(zhì) 為納米乳小滴，而納米乳負(fù)染形態(tài)白色物質(zhì)則為納米乳小滴，背景為黑色，液滴直徑分布在 10 100nm之間。 3)納米乳粒徑大小、分布及電位測定采用馬爾文測定方法，取納米乳2ml注入測 試杯中，通過粒徑分析儀測定納米乳粒子的粒徑大小和分布及zeta電位。通常，納米乳粒 子的平均粒徑為100nm以下，用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳粒徑分布集中在10 100nm區(qū) 間，符合納米乳的特點(diǎn)。 4)用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳中各功效成分的測定精密稱取皮膚外用表皮修 復(fù)納米乳復(fù)合物適量，分別置25mL量瓶中，加入丁二醇或丙二醇稀釋至刻度搖勻，作為供 試品溶液。用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳中表皮修復(fù)功效成分的含量測定及有關(guān)物質(zhì)檢查含 量測定參照其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及含量測定方法進(jìn)行含量測定。 5)納米乳類型的鑒定采用染色法鑒定納米乳的類型的主要原理是通過蘇丹紅 (油性染料)和亞甲藍(lán)(水溶性染料)在納米乳中紅色或藍(lán)色的擴(kuò)散快慢來判斷納米乳的 類型水溶性染料在0/W納米乳擴(kuò)散快，因?yàn)?/W納米乳連續(xù)相為水相，水溶性染料在水相 比在油相擴(kuò)散快，同樣道理，油溶性染料在W/0納米乳擴(kuò)散快。通過鑒定本用于表皮修復(fù)的 復(fù)合納米乳為水包油型納米乳。
6.本發(fā)明的制備注意事項(xiàng) 1)產(chǎn)品配制時(shí)所用的容器必須按照規(guī)定嚴(yán)格清洗和消毒，最好采用強(qiáng)酸浸泡后水 沖，再清水洗滌干凈，后用蒸餾水浸泡晾干，再置于烘箱高溫消毒干燥后備用。另外，在進(jìn)行 產(chǎn)品配制時(shí)，所用容器均要特別注意防止含有雜質(zhì)或金屬離子及微生物等污染，以免影響 產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性。 2)因目前同種功效成分和原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完全相同，特別是含量和純度存在一 定差異，因此，在進(jìn)行產(chǎn)品配制時(shí)，務(wù)必高度注意原料的質(zhì)量和來源、并在配制前逐一認(rèn)真 核對產(chǎn)品的名稱和有效期。在最后確定配方原料和制備方法后，原則上不要再更換原料來 源和品質(zhì)，以免影響產(chǎn)品質(zhì)量、穩(wěn)定性和使用效果。 3)嚴(yán)格按照上述劑量和方法進(jìn)行配制。在進(jìn)行該產(chǎn)品配制時(shí)，應(yīng)根據(jù)上述流程順 序添加，其添加劑量務(wù)必要求準(zhǔn)確無誤，而且，在其它原料的添加上， 一定要等上一種加入 的原料充分溶解后才能再加入下一種原料，以免出現(xiàn)渾濁，影響整個(gè)納米乳體系的配制。
4)在配制外用表皮修復(fù)納米乳時(shí)需要選擇和確定S/C質(zhì)量比(km值)，而確定S/ C質(zhì)量比(km值)1、2、3、4，是需要進(jìn)行滴定水油兩相的二元液試驗(yàn)并通過偽三元相圖分析后才能最后確定，只有在確定并計(jì)算出得到最大的納米乳區(qū)域的km值，才是較為理想的km 值。上述制備方法已通過試驗(yàn)確定Km值為3，但在實(shí)際進(jìn)行產(chǎn)品配制時(shí)，表面活性劑(S)和 助表面活性劑按此比例仍須在進(jìn)行混合后還要再充分混勻，以免影響配制效果和質(zhì)量。
5)由于液態(tài)溶液的比重或密度不同的關(guān)系，在進(jìn)行產(chǎn)品配制時(shí)，所選配制容器的 容量一定要稍大于實(shí)際配制的產(chǎn)品量，如配制100g產(chǎn)品，需要選擇150-200mL的配制容器， 這樣既便于各成分充分混合和溶解，也便于超聲震蕩或者攪拌混勻，而不至于往外溢出。
6)空白納米乳本身雖具有一定的抑制細(xì)菌生長的特點(diǎn)，本產(chǎn)品配方中未有另外添 加防腐劑，故在進(jìn)行產(chǎn)品配制時(shí)，除配制容器必須進(jìn)行嚴(yán)格清洗和消毒外，具體配制時(shí)也應(yīng) 嚴(yán)格按照操作規(guī)程，盡可能在無菌條件下并按照無菌操作要求進(jìn)行操作，避免該納米乳樣 品受到污染，影響產(chǎn)品質(zhì)量。 7)在完成此納米乳制備并分裝后，最好用無菌注射器進(jìn)行抽氣封閉，并置于通風(fēng)、 干燥、陰涼、避光處保存；特別是因本產(chǎn)品含有豐富生物活性物質(zhì)、營養(yǎng)成分、保濕劑及蛋白 多肽等細(xì)胞生長因子，配制完成的產(chǎn)品應(yīng)置于低溫或冰箱2-『C保存，以免污染和變質(zhì)。
8)本品可能對皮膚有剌激性，如使用部位出現(xiàn)明顯反應(yīng)請立即暫停使用；在實(shí)際 使用過程中，切勿將本品弄入眼內(nèi)；皮膚受傷、有傷口或紅腫不得使用、使用后如有持續(xù)紅 腫，應(yīng)停止使用；嬰兒和兒童不得使用；皮膚敏感者，使用前應(yīng)做皮膚敏感性測試，測試完 全無剌激性反應(yīng)方可使用。 9)由于涉及配制技術(shù)熟練程度，加上配制過程中的嚴(yán)格要求，因此，請務(wù)必在配制 前，反復(fù)閱讀此納米乳的制備方法及其注意事項(xiàng)，直到完全領(lǐng)會(huì)操作規(guī)程和要領(lǐng)后再進(jìn)行 配制。 10)為了確保產(chǎn)品質(zhì)量和原料不被浪費(fèi)，請按照此制備方法先試著配制100g小 樣，認(rèn)真仔細(xì)觀察小樣l-2天，看所配制的美白納米乳有無分層現(xiàn)象或穩(wěn)定性情況。待確定 配制100g小樣完全沒有問題后，再逐步放大到1000g中樣；確定成功后，再逐步放大，直至 配制到所需要量。 11)將水相滴加到S/C中時(shí)，有可能產(chǎn)生放熱反應(yīng)，因此，滴加速度不能太猛、太 快，而應(yīng)逐步滴加、緩慢進(jìn)行，且注意一邊滴加、一邊用手不斷搖勻，確保反應(yīng)完全。
12)為了確保和提高本發(fā)明產(chǎn)品配制的效果和質(zhì)量，特別是產(chǎn)品的穩(wěn)定性和均一 性，建議有條件時(shí)最好購買一臺(tái)液體超聲震蕩儀器進(jìn)行制備和生產(chǎn)。


圖1. 一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳的制備工藝流程及技術(shù)路線。
具體實(shí)施例方式
—種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳的制備方法。 —種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳各原料優(yōu)選重量配比是肉豆蔻酸異丙酯 12. 25，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯29. 1，聚甘油脂肪酸酯9. 7，蒸餾水39. 2769， EDTA-2NA 0. 087，檸檬酸0. 437，檸檬酸鈉1. 27，甘氨酸0. 874，海藻糖1. 75，金屬硫蛋白0. 005，表皮細(xì) 胞生長因子O. OOOl，維生素E 1. 75，維生素A1. 75，黃白紫花油(黃芪、白芷、紫草、花生油的 復(fù)合物)1.75。
—種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳的具體制備方法及實(shí)施舉例(以配制100g為 例) ①稱量39. 2769g水置于lOOmL容量的三角燒瓶，再依次溶解加入 0. 087gEDTA-2NA， 0. 437g檸檬酸，1. 27g擰檬酸鈉，0. 874g甘氨酸，1. 75g海藻糖，0. 005g金 屬硫蛋白，O. OOOlg表皮細(xì)胞生長因子，將此溶液作為水相(1)43. 7g。注意此步驟中，每添 加一種原料后需要待其完全溶解后才能再添加第二種成分，依此類推。
②用分析天平準(zhǔn)確稱取12.25g重量的肉豆蔻酸異丙酯，置于另一個(gè)經(jīng)過洗消過 的50mL三角燒瓶之中；依次溶解加入1. 75g維生素E， 1. 75g維生素A， 1. 75g黃白紫花油， 超聲5min充分混合溶解后，用記號筆清楚標(biāo)記為油相(11)17. 5g。同樣，每添加一種原料后 需要進(jìn)行充分混合均勻后才能再添加第二種成分，依此類推。 ③按照事先已設(shè)計(jì)好的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(S):聚甘油脂肪酸酯(C)= 3 : l的比例，分別準(zhǔn)確稱取29. lg辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和9.7g聚甘油脂肪酸酯，并將 這兩者原料置于第三個(gè)經(jīng)過洗消過的100mL潔凈三角燒瓶之中；加蓋，并將此三角燒瓶迅 速置于液體快速混合器上，打開液體快速混合器，并將其調(diào)至II檔，充分混合均勻，使之形 成乳化劑/助乳化劑(S/C)混合物，3-5min后，關(guān)閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用記 號筆清楚標(biāo)記為S/C混合物(111)38. 8g。按照油相(ii) : s/c(in):水相(i) = 17.5% : 38.8% : 43.7%的比例，先
分別取水相(1)43. 7g、S/C混合物(111)38. 8g置于第四個(gè)經(jīng)過洗消過的200mL潔凈三角燒 瓶之中。 ⑤將上述水相(I) 、S/C混合物(III)兩液相充分混合后，再在室溫25t:條件下或 者自然室溫中，將其放入超聲振蕩器中震蕩并超聲2min左右，或者在室溫25t:條件下或者 自然室溫中，啟動(dòng)定時(shí)恒溫磁力攪拌器，以200rpm min—1的轉(zhuǎn)速磁力攪拌5min，此時(shí)會(huì)產(chǎn) 生放熱反應(yīng)，需待冷卻后再在此容器中直接加入油相(II) 17. 5g，并將整個(gè)體系在超聲振蕩 器中超聲5min左右，或者在室溫25t:條件下或者自然室溫中，啟動(dòng)定時(shí)恒溫磁力攪拌器， 以200rpm min—1的轉(zhuǎn)速磁力攪拌20min。 ⑥關(guān)閉超聲振蕩器或者定時(shí)恒溫磁力攪拌器，取下200mL三角燒瓶，觀察其外觀 如是淡紫色、流體性和分散性好、有明顯可見乳光者，即為100g—種用于表皮修復(fù)的復(fù)合 納米乳。 ⑦將此100g用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳迅速分裝于不同規(guī)格的避光玻璃容器之
中，迅速加蓋，包裝，并置于2-8t:密閉保存即可。 ⑧按國際國內(nèi)企業(yè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和要求，從上述分裝產(chǎn)品中隨機(jī)抽樣，首先采用馬爾
文儀器檢測該納米乳樣品的顆粒分布及粒徑大小，在符合納米乳的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，再按照國
家有關(guān)部門的具體要求，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的系統(tǒng)檢測；待判斷或評價(jià)其完全符合國家相關(guān)規(guī)
定和標(biāo)準(zhǔn)及批準(zhǔn)文號后，即可作為產(chǎn)品上市銷售或在美容院內(nèi)專用。 本發(fā)明所制備的一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳經(jīng)穩(wěn)定性檢測，結(jié)果如下 ①強(qiáng)光照射實(shí)驗(yàn)將一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳及按傳統(tǒng)工藝制備的表皮修
復(fù)乳液在2000-40001x的光照下放置，于d5， d10測定，用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳結(jié)果同
放置前比較仍保持澄清透明，未見油水分層。且經(jīng)過測定相關(guān)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明技術(shù)制
備出的用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳產(chǎn)品較傳統(tǒng)工藝配制的表皮修復(fù)乳液光穩(wěn)定性更高。
②高濕度實(shí)驗(yàn)將一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳在密閉器皿中于25t:、相對濕 度75%及92.5%條件下放置，于(15， dlO測定，結(jié)果同放置前比較仍保持澄清透明，未見油 水分層。 ③高溫實(shí)驗(yàn)將一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳放在密閉器皿中于4(TC、6(TC、
8(TC分別放置，于d5，dlO測定，結(jié)果同放置錢比較仍保持澄清透明，未見油水分層。
加速實(shí)驗(yàn)將一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳置于高速離心機(jī)中于10000r/
min離心30min，觀察納米乳制劑復(fù)合物保持澄清透明，未見油水分層。 ⑤常溫留樣考察將一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳及按傳統(tǒng)工藝制備的表皮修
復(fù)乳液在常溫25°C /朋75%條件下放置0， 30， 60， 90天，表皮修復(fù)納米乳復(fù)合物仍保持澄清
透明，未見油水分層。經(jīng)過測定相關(guān)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明技術(shù)制備出的用于表皮修復(fù)的復(fù)
合納米乳產(chǎn)品較傳統(tǒng)工藝配制的表皮修復(fù)乳液產(chǎn)品穩(wěn)定性更高。 *備注所有實(shí)施步驟和操作過程均在潔凈而無菌的環(huán)境中進(jìn)行，且操作人員應(yīng) 嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)程進(jìn)行。 本發(fā)明所述的實(shí)施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行的描述，并非對本發(fā)明 構(gòu)思和范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)思想的前題下，本領(lǐng)域中工程技術(shù)人員對本發(fā) 明的技術(shù)方案作出的各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍，本發(fā)明請求保護(hù)的技 術(shù)內(nèi)容，已經(jīng)全部記載在權(quán)利要求書中。
權(quán)利要求
一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳，其特征在于按重量配比該復(fù)合納米乳含有如下成分肉豆蔻酸異丙酯11-13，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯25-30，聚甘油脂肪酸酯9-12，蒸餾水35-40，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2NA)0.05-0.1，檸檬酸0.3-0.5，檸檬酸鈉1-1.5，甘氨酸0.7-1，海藻糖1.5-2.1，金屬硫蛋白0.001-0.007，表皮細(xì)胞生長因子0.00005-0.00015，維生素E 1.6-2.0，維生素A 1.6-2.0，黃白紫花油(黃芪、白芷、紫草、花生油的復(fù)合物)1.6-2.0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳，其特征在于各原料的優(yōu)選重量配比是肉豆蔻酸異丙酯12. 25，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯29. 1，聚甘油脂肪酸酯9. 7，蒸餾水39. 2769，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2NA)0.087，檸檬酸0.437，檸檬酸鈉1. 27，甘氨酸0. 874，海藻糖1.75，金屬硫蛋白0. 005，表皮細(xì)胞生長因子0. OOOl，維生素E 1.75，維生素A 1.75，黃白紫花油(黃芪、白芷、紫草、花生油的復(fù)合物)1.75。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳，其特征在于它是由下述重量比的原料組成油相17. 5%，乳化劑/助乳化劑38. 8%，水相43. 7% 。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳，其特征在于所述的油相是肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、維生素A、黃白紫花油(黃芪、白芷、紫草、花生油的復(fù)合物)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳，其特征在于所述的水相是蒸餾水、EDTA-2NA、檸檬酸、檸檬酸鈉、甘氨酸、海藻糖、金屬硫蛋白、表皮細(xì)胞生長因子。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥和皮膚保健及美容化妝品技術(shù)領(lǐng)域，是一種用于表皮修復(fù)的復(fù)合納米乳及其制備方法。本發(fā)明制備的產(chǎn)品加快損傷表皮修復(fù)和表皮屏障功能恢復(fù)，通過促進(jìn)表皮功效成分對皮膚滲透吸收，提高蛋白多肽類藥物或功效成分穩(wěn)定性，增大難溶于水的物質(zhì)溶解性和易水解物質(zhì)的穩(wěn)定性，科學(xué)合理匹配天然藥物和抗氧化劑及生物源性皮膚修復(fù)多肽物質(zhì)，并利用高效皮膚傳遞載體空白納米乳體系與之結(jié)合，可更好發(fā)揮表皮修復(fù)效率和速率。且本發(fā)明制備出的產(chǎn)品還能大大提高皮膚的營養(yǎng)保濕能力，為表皮修復(fù)建立適宜微生態(tài)環(huán)境，并加強(qiáng)功效成分協(xié)同和增效；另本發(fā)明制備的產(chǎn)品不含防腐劑和香精，降低了毒性，提高安全性，且不需特殊設(shè)備和能量即可產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61Q19/00GK101785752SQ20101013127
公開日2010年7月28日 申請日期2010年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月22日
發(fā)明者丁克祥, 丁宇, 左夏林, 朱曉亮, 楊永鵬, 董萍 申請人:董萍;丁克祥