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白介素-13結(jié)合蛋白的制作方法

文檔序號(hào):1552022閱讀:993來(lái)源:國(guó)知局

專(zhuān)利名稱(chēng)::白介素-13結(jié)合蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明涉及IL-13結(jié)合蛋白,且具體而言涉及其在預(yù)防和/或治療包括哮喘、過(guò)敏、COPD、纖維化和癌癥在內(nèi)的各種疾病的用途。共同研究協(xié)議介紹本申i青的內(nèi)容月良乂人ProteinDesignLabs,Inc.與AbbottLaboratories于2005年12月14日簽訂的共同研究協(xié)議,且涉及IL-13的重組工程化抗體。
背景技術(shù)
:人類(lèi)IL-13是從活化T細(xì)胞克隆的17-kDa糖蛋白(Zurawski與deVries1994ImmunolToday1519-26),且由Th2譜系的活化T細(xì)胞產(chǎn)生,盡管ThO和ThlCD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和幾個(gè)例如肥大細(xì)胞的非-T細(xì)胞群體也產(chǎn)生IL-13(Zurawski和deVries1994ImmunolToday1519-26)。IL-13的功能包括在人類(lèi)B細(xì)胞中轉(zhuǎn)變成IgE(Punnonen,Aversa等人1993ProcNatlAcadSciUSA903730-4)且抑制人和小鼠炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生(deWaalMalefyt,F(xiàn)igdor等人,1993JImmunol1516370-81;Doherty,Kastelein等人,1993JImmunol1517151-60)的免疫球蛋白同種型。IL-13與其細(xì)胞表面受體IL-13Ral和IL-13Ra2結(jié)合。IL畫(huà)13Ral以低親和力(KD約10nM)與IL-13相互作用,接著募集IL-4Ra以形成高親和力(KD約0.4nM)信號(hào)傳導(dǎo)異二聚受體復(fù)合體(Aman,Tayebi等人,1996JBiolChem27129265-70;Hilton,Zhang等人,1996ProcNatlAcadSciUSA93497-501)。IL-4R/IL-13Ral復(fù)合體在例如B細(xì)胞、單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、樹(shù)狀細(xì)胞、嗜伊紅性粒細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、氣管上皮細(xì)胞和氣管平滑肌細(xì)胞的許多細(xì)胞類(lèi)型上28表達(dá)(Graber,Gretener等人,1998EurJImmunol284286-98;Murata,Husain等人,1998IntImmunol101103-10;Akaiwa,Yu等人,2001Cytokine1375-84)。IL-13Ral/IL-4R受體復(fù)合體的結(jié)扎使得包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白和轉(zhuǎn)錄活化因子(STAT6)和胰島素受體底物-2(IRS-2)途徑的各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化(Wang,Michieli等人,1995Blood86421-27;Takeda,Kamanaka等人,1996JImmunol1573220-2)。單獨(dú)的IL-13Ra2鏈對(duì)IL-13具有高親和力(KD約0.25-0.4nM),且起反向調(diào)節(jié)IL-13結(jié)合的誘辨受體的作用(Donaldson,Whitters等人,1998JImmunol1612317-24)和誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和可能地其它細(xì)胞類(lèi)型中TGF-b經(jīng)由AP-1途徑合成和纖維化的信號(hào)傳導(dǎo)受體的作用(Fichtner-Feigl,Strober等人,2006NatMed1299-106)。臨床前。孝喘動(dòng)物模型中進(jìn)行的幾個(gè)研究指示IL-13在哮喘中起重要作用。這些數(shù)據(jù)包括IL-13基因剔除小鼠的哮喘抗性以及各種小鼠模型中IL-13拮抗劑(可溶性IL-13受體、抗IL-13mAbs等)的哮喘表型抑制作用(Sela1999Harefuah137317-9;Wills-Karp和Chiaramonte2003CurrOpinPulmMed921-7;Wills-Karp2004ImmunolRev202175-90)。多個(gè)研究已證明向小鼠和豚鼠的肺部藥理學(xué)施用重組IL-13誘導(dǎo)氣管粘液高度分泌、嗜酸粒細(xì)胞增多和AHR(Grimig,Warnock等人,1998Science2822261-3;Wills-Karp,Luyimbazi等人,1998Science2822258-61;Kibe,Inoue等人,2003AmJRespirCritCareMed16750-6;Vargaftig和Singer2003AmJPhysiolLungCellMolPhysiol284L260-9;Vargaftig和Singer2003AmJRespirCellMolBiol28410-9)。IL-13的這些效應(yīng)在構(gòu)成型或誘導(dǎo)型表達(dá)IL-13的轉(zhuǎn)基因小鼠系統(tǒng)中重新產(chǎn)生(Zhu,Homer等人,1999JClinInvestl03779-88;Zhu,Lee等人,2001AmJRespirCritCareMed164S67-70;La匪e,Zheng等人,2002JClinInvest110463-74)。IL-13的慢性轉(zhuǎn)基因過(guò)度表達(dá)也謗導(dǎo)上皮下纖維化和氣腫。缺乏IL-13(和IL-14)信號(hào)傳導(dǎo)分子STAT6的小鼠未能發(fā)展過(guò)敏原誘導(dǎo)的AHR和粘液過(guò)度產(chǎn)生(Kuperman,Huang等人,2002NatMed8885-9)。使用可溶性IL-13受體融合蛋白(sIL-13Ra2Fc)的研究已證明此細(xì)胞因子在實(shí)驗(yàn)性過(guò)敏原卵白蛋白(OVA)誘導(dǎo)的氣管疾病中的關(guān)鍵作用(Grunig,Warnock等人,1998Science2822261-3;Wills國(guó)Karp,Luyimbazi等人,1998Science2822258-61;Taube,Duez等人,2002JImmunol1696482-9)。也在鼠類(lèi)哮喘慢性才莫型中證明了抗IL-13治療的效力。除表現(xiàn)出粘液高度分泌和AHR的特征外,慢性哮喘的此模型證明了更急性模型中缺乏的幾個(gè)人類(lèi)疾病的特點(diǎn)。這些包括位于上皮間空間的肺組織嗜酸粒細(xì)胞增多以及如由膠原沉積增加所測(cè)定的平滑肌纖維化。用OVA在OVA敏化小鼠中每周1次重復(fù)氣溶膠攻擊,歷時(shí)總計(jì)4周誘導(dǎo)慢性譯喘模型。最后2周OVA攻擊中施用抗IL-13抗體(自第36天開(kāi)始,在研究的第53天評(píng)估效力讀出值)顯著地抑制了AHR,肺炎、杯狀細(xì)胞增生、粘液高度分泌和氣管纖維化(Yang,Li等人,2005JPharmacolExpTher)。此外,在靈長(zhǎng)類(lèi)哮喘模型中也證明IL-13拮抗劑的治療作用抑制AHR[摘要,AmericanThoracicSociety2005]。由于已在哮喘患者的肺檢測(cè)到升高含量的IL-13mRNA和蛋白,其與疾病的嚴(yán)重程度相互有關(guān),因此IL-13牽涉于人類(lèi)譯喘的發(fā)病機(jī)制中(Huang,Xiao等人,1995JImmunol1552688-94)。另外,已鑒定出導(dǎo)致升高的IL-13水平的人類(lèi)IL-13遺傳多態(tài)性,且其與哮喘和特異反應(yīng)性皮炎相關(guān)(Heinzmann,Mao等人,2000HumMolGenet9549-59;Hoerauf,Kmse等人,2002MicrobesInfect437-42;Vercelli2002CurrOpinAllergyClinImmunol2389-93;Hdnzmann,Jerkic等人,2003JAllergyClinImmunol112735-9;Chen,Ericksen等人,2004JAllergyClinImmunol114553-60;Vladich,Brazille等人,2005JClinInvest),且在哮喘患者的肺中已檢測(cè)到升高的IL-13水平(Huang,Xiao等人,1995JImmunol1552688-94;Arima,Umeshita-Suyama等人,2002JAllergyClinImmunol109980-7;Berry,Parker等人,2004JAllergyClinImmunol1141106-9)。由于具有導(dǎo)致較高血漿IL-13水平的IL-13基因多態(tài)性的個(gè)體對(duì)于特異反應(yīng)性和譯喘具有增加風(fēng)險(xiǎn)性,因此已也證明IL-13與哮喘之間的遺傳聯(lián)系(Wills-Karp2000RespirRes119-23)。由于人類(lèi)IL-13在各種人類(lèi)病癥中的作用,因此治療策略已經(jīng)設(shè)計(jì)以抑制或抵消IL-13活性。尤其已尋找結(jié)合與中和IL-13的抗體作為抑制IL-13活性的手段。然而,在現(xiàn)有技術(shù)中需要能夠結(jié)合IL-13的改善的抗體。優(yōu)選地,抗體結(jié)合人類(lèi)IL-13。優(yōu)選地,抗體能夠中和人類(lèi)IL-13。本發(fā)明提供了新的結(jié)合蛋白、CDR移植抗體、人源化抗體和其片段的家族,其能夠結(jié)合人類(lèi)IL-13,以高親和力結(jié)合,以及結(jié)合且中和人類(lèi)30IL-13。發(fā)明概述本發(fā)明涉及IL-13結(jié)合蛋白。本發(fā)明的結(jié)合蛋白包括但不限于抗體、抗原結(jié)合部分和其它能夠結(jié)合人類(lèi)IL-13的抗原結(jié)合蛋白。另夕卜,本發(fā)明提供了IL-13結(jié)合蛋白的制備和使用方法。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及能夠結(jié)合IL-13的結(jié)合蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,結(jié)合蛋白結(jié)合人類(lèi)IL-13。優(yōu)選地,所述結(jié)合蛋白能夠調(diào)節(jié)IL-13的生物學(xué)功能。所述結(jié)合蛋白更優(yōu)選能夠中和IL-13。在本發(fā)明的一個(gè)方面中,所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合IL-13,且阻止IL-13與IL-13cd受體結(jié)合。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中,所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合IL-13,且阻止IL-13與IL-13a2受體結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合IL-13,且阻止IL-13與IL-13al受體和IL-13a2結(jié)合。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,且在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定中以下述IC5o抑制所述IL-13與IL-13a2受體結(jié)合,其中IC50選自約1.5xl(T8至lxl(T8M、lxl(T8至1x10—9M、l(T9至1(T"M和10—10至IO"1M;或在基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中以下述1(:5()抑制所述IL-13與IL-13a2受體結(jié)合,其中1。50選自約1.8乂10-8至lxl(T8M、lxl(T8至lxlO力M、10力至10眉M和IO,至10"M。優(yōu)選地,抗體結(jié)合人類(lèi)IL-13且在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定中以2.7x10—9M的ICso抑制所述IL-13與IL-13a2受體結(jié)合,且在基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中以l.lxl(T9M的IC5o抑制所述IL-13與IL國(guó)13a2受體結(jié)合。優(yōu)選地抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,且在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定或在基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中在100nM的濃度下將所述IL-13與IL-13a2受體的結(jié)合抑制約70-100%。抗體優(yōu)選為13C5.5??贵w更優(yōu)選不為BAK502G9、mAbl3.2或MJ2醫(yī)7。在另一個(gè)方面中,本發(fā)明提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,且在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘才莫型中將AHR抑制約50%、60%、70%、80%、90%或100%。在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中所述抗體優(yōu)選將AHR抑制大于86%。在另一個(gè)實(shí)施方案中,所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,且在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哞喘模型中將AHR抑制約50%、60%、70%、80%、90%或100%,并且將粘液產(chǎn)生抑制約40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%??贵w優(yōu)選為13C5.5??贵w更優(yōu)選不為BAK502G9、mAbl3.2或MJ2曙7。在一個(gè)實(shí)施方案中,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)IL-13具有以下結(jié)合速率常數(shù)(onrateconstant)(k。n):至少約102M-V;至少約103M-1s-1;至少約104M"s_1;至少約105M"s-1;或至少約1(^M-V1。優(yōu)選地,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)il-13具有介于1()2m"s"與1()3M"s"之間;介于1()3m"s"與1()4M"s"之間;介于1。4M"s-1與1()5M"s"之間;或介于105m"s"與1(^M-V1之間的結(jié)合速率常數(shù)(k。n)。在另一個(gè)實(shí)施方案中,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定,本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)IL-13具有至多約l(T3s";至多約10、";至多約10、";或至多約l(T6s"的分解速率常數(shù)(offrateconstant)(k。ff)。優(yōu)選地,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定,本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)IL-13具有10—Y1至lO-Y1;IO-Y至10-Y1;或lO—Y1至lOY的分解速率常數(shù)(k。ff)。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)IL-13具有至多約l(T7M;至多約10-8M;至多約10-94;至多約10^M;至多約10—UM;至多約10"2M;或至多10"3M的解離常數(shù)(dissociationconstant)(KD)。優(yōu)選地,本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)IL-13具有l(wèi)(T7M至l(T8M;l(T8M至(T9M;10-9M至1(T10M;l(T10至10—11M;l(T11M至l(T12M;或10-12M至1(T13M的解萬(wàn)常數(shù)(Kd)。優(yōu)選地,抗體或其抗原結(jié)合片段以選自下列的結(jié)合特征結(jié)合IL-13:a)介于約1()5m"s"至106m—^"或約1()6m"s"至k^NfV1的結(jié)合速率常數(shù)(k。。;或b)如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定的約10、"至lO—Y1;或約10-5s"至10-6s"的分解速率常數(shù)(k。ff);或c)約1.5x10"g至lxl(T1C)M或約10-1()至10"M的解離常數(shù)(kd)。優(yōu)選地,抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)IL-13具有選自下列的結(jié)合速率常數(shù)(k。n):6.68xl05M"s—1、7.86x1。5m-Y1、8.35x105ntV1、8.69xl。5NfV1、9.15xl05M-V、1.26xl()6NrV1、DIOW1和2.51xl06M-V。優(yōu)選地,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定的,所述抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)IL-13具有選自32下列的分解速率常數(shù)(k。ff):1.23xl0-4s";1.76xlcrV;4.74X1CTY1;1.91xl0—5s—;2.14xl0-5s-1;3.82x10國(guó)"s";8.81xl(T5s-1;和9.65xIO國(guó)Y1。優(yōu)選地,抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)IL-13具有選自下列的解離常數(shù)(Kd):1.05xlO"。M;7.10xlO"。M;lxlO-11M;2.20xlO-UM;2.72xl(T"M;4.17xl(T"M;5.68x10-11M;7.01xlO-11M;7.10xlO-11M;和9.79xl0-11M。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及能夠結(jié)合IL-13上的特定表位的結(jié)合蛋白。優(yōu)選地,所述特定表位包含人類(lèi)IL-13的C末端螺旋D區(qū)。更優(yōu)選地,所述特定表位包含氨基酸序列VRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGR,對(duì)應(yīng)于SEQIDNO.1的氨基酸104-130。在另一個(gè)方面中,所述抗體或抗原結(jié)合部分結(jié)合包含人類(lèi)IL-13的C末端螺旋D區(qū)和N末端螺旋A區(qū)的表位。優(yōu)選地,所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Ser26-Thr27-Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34-Glu35-Leu36-Val37-Asn38與Lysl23-Lysl24誦Leul25-Phel26-Argl27-Glu-128-Glyl29-Arg130界定的表位結(jié)合。優(yōu)選地,所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Arg30-Glu31畫(huà)Leu32-Ile33-Glu34-Glu35-Leu36-Val37-Asn38和Lysl23-Lysl24-Leul25-Phel26-Argl27界定的表位結(jié)合。優(yōu)選地,所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13a2受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Ser26-Thr27畫(huà)Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32-Ile33畫(huà)Glu34-Glu35-Leu36誦Val37-Asn38和Lysl23-Lysl24醫(yī)Leul25-Phel26-Argl27-Glu國(guó)128-Glyl29國(guó)Arg130界定的表位結(jié)合。更優(yōu)選地,所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13a2受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Ser26-Thr27-Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34-Glu35-Leu3633-Val37-Asn38和Lysl23-Lysl24-Leul25-Phel26-Argl27-Glu-128-Glyl29-Arg130界定的表位結(jié)合,條件是所述抗體不是BAK502G9或MJ2-7。所述抗體最優(yōu)選為13C5.5。在一個(gè)方面中,分離的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合IL-13且阻止IL-13與IL-13ot2受體結(jié)合,其結(jié)合特征選自與IL-13上包括螺旋A和D的表位結(jié)合;結(jié)合速率常數(shù)(k。n)介于約10SM"s"至1(^M"s"或約1(^M"s"至1(^M"s"之間;如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定分解速率常數(shù)(k。ff)為約10、-至lCrY1;或約10、"至l(T6s-;且解萬(wàn)常數(shù)(Kd)為約1.5x10"g至lxlO"GM或約10—1(}至10—11M。在另一個(gè)方面中,分離的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合變體IL-13且阻止變體IL-13與IL-13a2受體結(jié)合,其結(jié)合特征選自與IL-13上包括螺旋A和D的表位結(jié)合;結(jié)合速率常數(shù)(k。n)介于約1()5m"s"至k)6M"s^或約k^m-V1至1(^M"s"之間;如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定分解速率常數(shù)(k。ff)為約至10—Y1;或約10—Y1至lO—Y1;且解離常數(shù)(KD)為約1.5xl0"。至lxlO"。M或約10-10至10-11M。在一個(gè)方面中,本發(fā)明結(jié)合蛋白能夠結(jié)合IL-13,所述抗原結(jié)合域包含至少一CDR,所述CDR包含選自下列的氨基酸序列CDR-H1.X廣XrX3-X4-X5-X6-X7(SEQIDNO:64)其中X為T(mén)、D、G或S;x2為S;X3為D;X4為M、S、Y、L或H;Xs為G、W、Y、A、S或N;Xs為V、I或M;且乂7為D、H、S、Y、N或G;GDR-H2.x1-x2-X3-X4-X5-X6國(guó)X7-X8-X9-x10-x11-x12誦X13-X14國(guó)X15-Xi6-Xn(SEQIDNO:65),其中Xi為M、E、H、R、S、G或L;x2為I或不存在;乂3為H、Y、A、D、S或W;X4為P、S、W或G;Xs為S、G、E或D;又6為D、G、S、E或N;X為S、Y或G;Xg為E、N、Y、V或R;X9為T(mén)、I或K;X^為R、Y、I、D或A;Xu為L(zhǎng)、Y、D或F;乂12為N、P、S或D;X〗3為Q、E、D、P或S;Xw為K、M、S、T、A或V;X,5為F、L、V或M;乂16為K、R或Q;且Xn為D、G或S;CDR-H3.X廣X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Xn-X12-X13-X14(SEQIDNO:66),其中X!為W、T、G、Y、D或I;X2為R、A、S、G或V;X3為T(mén)、F、Y或S;乂4為S、T或Y;Xs為Y、F或G;X6為F或Y;X7為S、Y、I或F;Xs為D、L、Y或P;X9為Y;Xu)為G;Xu為Y、A、P或E;X)2為F、M、S、L或I;Xn為D、V、N或K;且Xw為Y或F;CDR-L1.Xi一X2-X3誦X4-X5-X6-X7-X8國(guó)X9-Xio-Xii一Xi2曙Xi3-Xi4-Xi5國(guó)Xi6畫(huà)Xi7(SEQIDNO:67)其中Xj為K或R;X2為S或A;X3為S或T;X4為Q、K或I;Xs為N、S、T、G或E;Xs為L(zhǎng)、T或S;X7為L(zhǎng)、Q或V;Xs為Y、N、H、D或T;X9為S、I或T;X!o為S、D、N、H或Y;X!為N或G;Xu為Q;乂13為K、F、N、E或S;X!4為N、T或S;X^為Y或F;乂16為L(zhǎng)、A或M;且Xn為A、D、E、H或N;CDR-L2.X!國(guó)X2畫(huà)X3-X4-X5-X6-X7(SEQIDNO:68),其中Xj為L(zhǎng)、S、K、T、W或Y;X2為V、T或A;X3為S或N;X4為N、K、T、M或R;Xs為R、K或L;X6為F、D、E、H、P或A;且X7為S、R或P;和CDR-L3.XrX2-X3-X4-X5畫(huà)X6-X7-Xs-X9(SEQIDNO:69),其中Xj為F、W、Q或A;X2為Q或L;X3為H、G、Y、W或N;乂4為N、S、T、L或Y;Xs為Y、T、S、E或H;36X6為L(zhǎng)、V、F、Y、N、G、P或D;X7為P或H;Xs為L(zhǎng)、F、Y、W或R;且X9為T(mén)或V。優(yōu)選地,所述抗原結(jié)合域包含至少一個(gè)CDR,所述CDR包含選自下列的氨基酸序列SEQIDNO:32的殘基31-35;SEQIDNO:32的殘基50-66;SEQIDNO:32的殘基99-105;SEQIDNO:33的殘基24-39;SEQIDNO:33的殘基55-61;SEQIDNO:33的殘基94-102;SEQIDNO:34的殘基31-35;SEQIDNO:34的殘基50-66;SEQIDNO:34的殘基99-105;SEQIDNO:35的殘基24-39;SEQIDNO:35的殘基55-61;SE(5IDNO:35的殘基94-102;SEQIDNO:36的殘基31-35;SEGIDNO:36的殘基50-66;SEQIDNO:36的殘基99-109;SEQIDNO:37的殘基24-39;SEQIDNO:37的殘基55-61;SEQIDNO:37的殘基94-102;SEQIDNO:38的殘基31-35;SEQIDNO:38的殘基50-66;SEQIDNO:38的殘基99-109;SEQIDNO:39的殘基31-35;SEQIDNO:39的殘基50-66;SEQIDNO:39的殘基99-112;SEQIDNO:46的殘基52-67;SEQIDNO:46的殘基100-112;SEQIDNO:47的殘基24-34;SEQIDNO:47的殘基50-56;SEQIDNO:47的殘基89-97;SEQIDNO:48的殘基31-37;SEQIDNO:48的殘基52-67;SEQIDNO:48的殘基100-112;SEQIDNO:49的殘基24-34;SEQIDNO:49的殘基50-56;SEQIDNO:49的殘基89-97;SEQIDNO:50的殘基31-37;SEQIDNO:50的殘基52-67;SEQIDNO:50的殘基100-112;SEQIDNO:51的殘基24-34;SEQIDNO:51的殘基60-66;SEQIDNO:51的殘基89-97;SEQIDNO:52的殘基31-35;SEQIDNO:52的殘基50-66;SEQIDNO:52的殘基99-107;SEQIDNO:53的殘基23-36;SEQIDNO:53的殘基52-58;SEQIDNO:53的殘基91-99;SEQIDNO:54的殘基31-35;37SEQIDNO40的殘基24--39;SEQIDNO54的殘基50-65;SEQIDNO40的殘基55-61;SEGIDNO54的殘基98-107;SEQIDNO40的殘基94--102;SEQIDNO55的殘基24-38;SEQIDNO41的殘基31-35;SEQIDNO55的殘基54-60;SEQIDNO41的殘基50--66;SEQIDNO55的殘基93-101;SEQIDNO41的殘基99-.112;SEQIDNO56的殘基31-35;SEQIDNO42的殘基31-.35;SEGIDNO56的殘基50-65;SEQIDNO42的殘基50--66;SEQIDNO56的殘基98-107;SEQIDNO42的殘基99--100;SEQIDNO57的殘基24-38;SEGIDNO43的殘基24--39;SEQIDNO57的殘基54-60;SEQIDNO43的殘基55--61;SEQIDNO57的殘基93-101;SEQIDNO43的殘基94-.102;SEQIDNO58的殘基31-35;SEQIDNO44的殘基31--35;SEQIDNO58的殘基50-65;SEQIDNO44的殘基50-■65;SEQIDNO58的殘基98-107;SEQIDNO44的殘基98-.106;SEQIDNO59的殘基24-38;SEQIDNO45的殘基24-.40;SEQIDNO59的歹戔基54-60;SEQIDNO45的殘基56-■62;SEQIDNO59的殘基93-101;SEGIDNO45的殘基95--103;SEQIDNO60的殘基31-35;SEQIDNO46的殘基32-.38;SE(5IDNO60的殘基50-65;SEQIDNO60的殘基98--107;SEQIDNO62的殘基98-107;SEQIDNO61的殘基24--38;SEQIDNO63的殘基24-38;SEQIDNO61的殘基54-.60;SEQIDNO63的殘基54-60;SEQIDNO61的殘基93--101;和SEQIDNO62的殘基31-35;SEQIDNO.63的殘基93-101。SEGIDNO62的殘基50-65;在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,結(jié)合蛋白包含至少3個(gè)CDR,其是選自下列的可變域CDR組<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>VH25C8CDR-H3SEQIDNO:32的殘基99-105VL25C8CDR組VL25C8CDR-L1SEQIDNO:33的殘基24-39VL25C8CDR-L2SEQIDNO:33的殘基55-61VL25C8CDR匿L3SEQIDNO:33的殘基94-102VH9C11CDR組VH9C11CDR-H1SEQIDNO34的殘基31-35VH9C11CDR-H2SEQIDNO34的殘基50-66VH9C11CDR-H3SEQIDNO34的殘基99-105VL9C11CDR組VL9C11CDR畫(huà)L1SEQIDNO35的殘基24-39VL9C11CDR曙L(fēng)2SEQIDNO35的殘基55-61VL9C11CDR-L3SEQIDNO35的殘基94-102VH21D9CDR組VH21D9CDR國(guó)H1SEQIDNO36的殘基31-35VH21D9CDR-H2SEQIDNO36的殘基50-66VH21D9CDR-H3SEQIDNO36的殘基99-109VL21D9CDR組VL21D9CDR-L1SEGIDNO37的殘基24-39VL21D9CDR-L2SEQIDNO37的殘基55-61VL21D9CDR-L3SEQIDNO37的殘基94-102VH22D10CDR組VH22D10CDR-H1SEQIDNO38的殘基31-35VH22D10CDR曙H2SEQIDNO38的殘基50-66VH22D10CDR-H3SEqIDNO38的殘基99-109VL22D10CDR組VL22D10CDR-L1SEQIDNO37的殘基24-39VL22D10CDR-L2SEQIDNO37的殘基55-61VL22D10CDR-L3SEQIDNO37的殘基94-102VH5F1CDR組VH5F1CDR畫(huà)H1SEQIDNO:39的殘基31-3539<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>VH13C5CDR-H1SEQIDNO:46的殘基32-38VH13C5CDR-H2SEQIDNO:46的殘基52-67VH13C5CDR畫(huà)H3SEQIDNO:46的殘基100-112VL13C5CDR組VL13C5CDR-L1SEQIDNO47的殘基24-34VL13C5CDR-L2SEQIDNO47的殘基50-56VL13C5CDR-L3SEQIDNO47的殘基89-97VH29G5CDR組VH29G5CDR-H1SEQIDNO48的殘基31-37VH29G5CDR-H2SEQIDNO48的殘基52-67VH29G5CDR-H3SEQIDNO48的殘基100-112VL29G5CDR組VL29G5CDR-L1SEQIDNO49的殘基24-34VL29G5CDR畫(huà)L2SEQIDNO49的殘基50-56VL29G5CDR-L3SEQIDNO49的殘基89-97VH33C3CDR組VH33C3CDR-H1SEQIDNO50的殘基31-37VH33C3CDR-H2SEQIDNO50的殘基52-67VH33C3CDR-H3SEQIDNO50的殘基100-112VL33C3CDR組VL33C3CDR-L1SEQIDNO51的殘基24-34VL33C3CDR畫(huà)L2SEQIDNO51的殘基60-66VL33C3CDR誦L3SEQIDNO51的殘基89-97VH4A8CDR組VH4A8CDR-H1SEQIDNO52的殘基31-35VH4A8CDR-H2SEQIDNO52的殘基50-66VH4A8CDR-H3SEQIDNO52的殘基99-107VL4A8CDR組VL4A8CDR-L1SEQIDNO53的殘基23-36VL4A8CDR-L2SEQIDNO53的殘基52-58VL4A8CDR-L3SEQIDNO53的殘基91-9941<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>VL5D3CDR-L3SEQIDNO:61的殘基93-101VH8B6CDR組VH8B6CDR-H1SEQIDNO:62的殘基31-35VH8B6CDR-H2SEQIDNO62的殘基50-65VH8B6CDR-H3SEQIDNO62的殘基98-107VL8B6CDR組巧nm63的殘基24-38VL8B6CDR-L2SEQIDNO63的殘基54-60VL8B6CDR-L3SEQIDNO63的殘基93-101結(jié)合蛋白優(yōu)選包含至少兩個(gè)可變域CDR組。優(yōu)選地,至少兩個(gè)可變域CDR組選自VH25C8CDR組&VL25C8CDR組;VH9C11CDR組(feVL9C11CDR組;VH21D9CDR組&VL21D9CDR組;VH22D10CDR組&VL22D10CDR組;VH5F1CDR組&VL5F1CDR組;VH5G1CDR組&VL5G1CDR組;VH3H7CDR組&VL3H7CDR組;VH14B2CDR組&VL14B2CDR組;VH13C5CDR組&VL13C5CDR組;VH29G5CDR組&VL29G5CDR組;VH33C3CDR組&VL33C3CDR組;VH4A8CDR組&VL4A8CDR組;VH1B6CDR組&VL1B6CDR組;VH3E5CDR組&VL3E5CDR組;VH6C8CDR組&VL6C8CDR組;VH5D3CDR組&VL5D3CDR組;和VH8B6CDR組&VL8B6CDR組。在另一個(gè)實(shí)施方案中,上文公開(kāi)的結(jié)合蛋白還包含人類(lèi)接納體43(acceptor)框架。人類(lèi)接納體框架優(yōu)選的包含選自下列的氨基酸序列SEQIDNO6SEQIDNO16SEQIDNO26SEQIDNO7SEQIDNO17SEQIDNO27SEQIDNO8SEQIDNO18SEQIDNO28SEQIDNO9SEQIDNO19SEQIDNO29SE(^IDNO10SEQIDNO20SEQIDNO30SEQIDNO11SEQIDNO21和SEQIDNO12SEQIDNO22SEQIDNO31SEGIDNO13SEQIDNO23SEQIDNO14SEQIDNO24SEQIDNO15SEQIDNO25在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,結(jié)合蛋白為能夠結(jié)合IL-13的CDR移植抗體或其抗原結(jié)合部分。CDR移植抗體或其抗原結(jié)合部分優(yōu)選的包含一個(gè)或多個(gè)上文公開(kāi)的CDR。CDR移植抗體或其抗原結(jié)合部分優(yōu)選包含人類(lèi)接納體框架。所述人類(lèi)接納體框架更優(yōu)選為上文公開(kāi)的人類(lèi)接納體框架的任一個(gè)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,結(jié)合蛋白為能夠結(jié)合IL-13的人源化抗體或其抗原結(jié)合部分。人源化抗體或其抗原結(jié)合部分優(yōu)選的包含一個(gè)或多個(gè)上文所公開(kāi)摻入人類(lèi)接納體框架的人類(lèi)抗體可變域的CDR。人類(lèi)抗體可變域優(yōu)選為共有人類(lèi)可變域。人類(lèi)接納體框架更優(yōu)選包含至少一關(guān)鍵殘基的框架區(qū)域氨基酸取代,其中所述關(guān)鍵殘基是選自以下各物鄰近于CDR的殘基;糖基化位點(diǎn)殘基;稀有殘基;能夠與人類(lèi)IL-13相互作用的殘基;能夠與CDR相互作用的殘基;規(guī)范殘基;重鏈可變區(qū)域與輕鏈可變區(qū)域之間的接觸殘基;Vernier區(qū)中的殘基;在Chothia定義的可變重鏈CDRl與Kabat定義的第一重鏈框架之間重疊的區(qū)域中的殘基。人類(lèi)接納體框架優(yōu)選的包含至少一框架區(qū)域氨基酸取代,其中所述框架的氨基酸序列與所述人類(lèi)接納體框架的序列至少65%—致且包含至少70個(gè)與所述人類(lèi)接納體框架一致的氨基酸殘基。優(yōu)選地,關(guān)鍵殘基的框架區(qū)域氨基酸取代選自2L、15L、22L、41L、42L、44L、49L、50L、51L、62L、71L、73L、10H、44H、46H、48H、4467H、68H、70H、72H、74H、76H、83H、84H、86H、87H和97H。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,結(jié)合蛋白為能夠結(jié)合IL-13的人源化抗體或其抗原結(jié)合部分。人源化抗體或其抗原結(jié)合部分優(yōu)選的包含一個(gè)或多個(gè)上文公開(kāi)的CDR。人源化抗體或其抗原結(jié)合部分更優(yōu)選包含三個(gè)或三個(gè)以上上文公開(kāi)的CDR。人源化抗體或其抗原結(jié)合部分最優(yōu)選包含六個(gè)上文公開(kāi)的CDR。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含至少一可變域,其具有選自選自下列的氨基酸序列SEQIDNO.70SEQIDNO.81SEQIDNO.71SEQIDNO.82SEQIDNO.72SEQIDNO.83SEQIDNO.73SEQIDNO.84SEQIDNO.74SEQIDNO.85SEQIDNO.75SEQIDNO.92SEQIDNO.76SEQIDNO.93SEQIDNO.77和SEQIDNO.78SEQIDNO.94SEGIDNO.79SEQIDNO.80人源化抗體或其抗原結(jié)合部分更優(yōu)選包含兩個(gè)選自上文公開(kāi)的的可變域。結(jié)合蛋白更優(yōu)選包含兩個(gè)可變域,其中所述兩個(gè)可變域具有選自下列的氨基酸序列SEQIDNO70&SEQIDNO71,SEQIDNO72&SEQIDNO73,SEQIDNO74&SEQIDNO75,SEQIDNO76&SEQIDNO77,SEGIDNO78&SEQIDNO79,SEQIDNO80&SEGIDNO81,SEqIDNO82&SEQIDNO83,45SEGIDNO:84&SEQIDNO:85SEQIDNO:80&SEQIDNO:92,SEQIDNO:80&SEQIDNO:93和SEQIDNO:80&SEQIDNO:94。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了抗體構(gòu)建體,其包含上文所公開(kāi)結(jié)合蛋白的任一個(gè)和接頭(linker)多肽或免疫球蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,抗體構(gòu)建體選自免疫球蛋白分子、單克隆抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、人源化抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二石?;镞B接的Fv、scFv、單域抗體、雙功能抗體(diabody)、多特異性抗體、雙重特異抗體(dualspecificantibody)和雙特異性抗體(bispecificantibody)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,抗體構(gòu)建體包含重鏈免疫球蛋白恒定域,其選自人類(lèi)IgM恒定域、人類(lèi)IgGl恒定域、人類(lèi)IgG2恒定域、人類(lèi)IgG3恒定域、人類(lèi)IgG4恒定域、人類(lèi)IgE恒定域和人類(lèi)IgA恒定域??贵w構(gòu)建體更優(yōu)選包含SEQIDNO:2;SEQIDNO:3;SEQIDNO:4;和SEQIDNO:5。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了抗體綴合物,其包含上文公開(kāi)的抗體構(gòu)建體和選自以下的試劑免疫粘附分子、造影劑、治療劑和細(xì)胞毒性劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,所述造影劑選自放射性標(biāo)記、酶、熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、不茲性標(biāo)記和生物素。更優(yōu)選,造影劑為選自3H、14C、35S、9QY、"Tc、mIn、125I、131I、177Lu、"6Ho和^Sm的放射性標(biāo)記。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,治療劑或細(xì)胞毒性劑選自抗代謝物、烷基化劑、抗生素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環(huán)霉素、毒素和細(xì)胞凋亡劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中,抗體構(gòu)建體是糖基化的。優(yōu)選的,所述糖基化為人類(lèi)糖基化模式。在另一個(gè)實(shí)施方案中,上文公開(kāi)的結(jié)合蛋白、抗體構(gòu)建體或抗體綴合物以晶體形式存在。優(yōu)選的所述晶體為無(wú)載體的藥物控釋晶體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,結(jié)晶結(jié)合蛋白、結(jié)晶抗體構(gòu)建體或結(jié)晶抗體綴合物具有比其可溶性對(duì)應(yīng)物更大的體內(nèi)半衰期。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,結(jié)晶結(jié)合蛋白、結(jié)晶抗體構(gòu)建體或結(jié)晶抗體綴合物結(jié)晶后保留生物學(xué)活性。46本發(fā)明的一個(gè)方面涉及包含能夠結(jié)合IL-13的結(jié)合蛋白的DVD結(jié)合蛋白。所述DVD結(jié)合蛋白優(yōu)選能夠結(jié)合IL-13和第二標(biāo)靶(target)。第二標(biāo)耙選自CSF1(MCSF)、CSF2(GM-CSF)、CSF3(GCSF)、FGF2、IFNA1、IFNB1、IFNG、組胺和組胺受體、IL1A、IL1B、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、ILIO、ILll、IL12A、IL12B、IL14、IL15、IL16、IL17、IL18、IL19、KITLG、PDGFB、IL2RA、IL4R、IL5RA、IL8RA、IL8RB、IL12RB1、IL12RB2、IL13RA1、IL13RA2、IL18R1、TSLP、CCL1、CCL2、CCL3、CCM、CCL5、CCL7、CCL8、CCX13、CCL17、CCL18、CCX19、CCUO、CCL22、CCX24、CX3CL1、CXCL1、CXCL2、CXCL3、XCL1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CX3CR1、GPR2、XCR1、FOS、GATA3、JAK1、JAK3、STAT6、TBX21、TGFB1、TNFSF6、YY1、CYSLTR1、FCER1A、FCER2、LTB4R、TB4R2、LTBR和殼多糖酶。DVD蛋白更優(yōu)選能夠識(shí)別IL-13和IL-1卩、IL-13和IL-9;IL-13和IL-4;IL-13和IL-15;IL-13和IL-25;IL-13和TARC;IL-13和MDC;IL-13和MIF;IL-13和TGF-P;IL-13和LHR激動(dòng)劑;IL-13和CL25;IL-13和SPRR2a;IL-13和SPRR2b;或IL-13和ADAM8。DVD蛋白最優(yōu)選能夠結(jié)合IL-13和TNFa。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及分離的核酸,其編碼任何上文公開(kāi)的結(jié)合蛋白、抗體構(gòu)建體或抗體綴合物。另一個(gè)實(shí)施方案提供了包含上文所公開(kāi)的分離的核酸的載體,其中所述載體選自pcDNA;pTT(Durocher等人,NucleicAcidsResearch2002,第30巻,第2號(hào));pTT3(具有其它幾個(gè)克隆位點(diǎn)的pTT);pEFBOS(Mizushima,S.和Nagata,S.,(1990)NucleicacidsResearch第18巻,第17號(hào));pBV;pJV;和pBJ。在另一個(gè)方面中,宿主細(xì)胞用上文所公開(kāi)的載體轉(zhuǎn)化。宿主細(xì)胞優(yōu)選為原核細(xì)胞。宿主細(xì)胞更優(yōu)選為大腸桿菌(E.Coli)。在相關(guān)實(shí)施方案中,宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞。真核細(xì)胞優(yōu)選選自原生生物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞和真菌細(xì)胞。宿主細(xì)胞更優(yōu)選為哺乳動(dòng)物細(xì)胞,其包括但不限于CHO和COS;或真菌細(xì)胞,例如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae);或昆蟲(chóng)細(xì)月包,例如Sf9。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了產(chǎn)生結(jié)合IL-13的結(jié)合蛋白的方法,所述方法包括在培養(yǎng)基中在足以產(chǎn)生結(jié)合IL-13的結(jié)合蛋白的條件下培養(yǎng)任何上文公開(kāi)的宿主細(xì)胞。另一個(gè)實(shí)施方案提供了根據(jù)上文所公開(kāi)方法產(chǎn)生的結(jié)合蛋白。一個(gè)實(shí)施方案提供了用于釋放結(jié)合蛋白的組合物,其中所述組合物包含制劑和至少一種聚合載體,所述制劑包含如上文公開(kāi)的結(jié)晶結(jié)合蛋白、結(jié)晶抗體構(gòu)建體或結(jié)晶抗體綴合物和組分。聚合載體優(yōu)選是選自下列的一種或多種聚合物聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(氨基酸)、聚(酸肝)、聚(酯肽)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳-共-乙醇酸)或PLGA、聚(b-羥基丁酯)、聚(己內(nèi)酯)、聚(二氧雜環(huán)己酮);聚(乙二醇)、聚((羥丙基)曱基丙烯酰胺)、聚[(有機(jī))磷腈]、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、順丁烯二酸酐-烷基乙烯基醚共聚物、復(fù)合多元醇(pluronicpolyols)、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素和纖維素衍生物、膠原、血纖蛋白、明膠、透明質(zhì)酸、寡糖、葡糖胺聚糖(glycaminoglycans)、硫酸化多糖、其混合物和共聚物。組分優(yōu)選選自白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明膠、羥丙基-p-環(huán)糊精、曱氧基聚乙二醇和聚乙二醇。另一個(gè)實(shí)施方案提供了用于治療哺乳動(dòng)物的方法,所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用有效量的上文所公開(kāi)組合物的步驟。本發(fā)明也提供了藥物組合物,其包含如上文所公開(kāi)的結(jié)合蛋白、抗體構(gòu)建體或抗體綴合物和藥物學(xué)上可接受的載體。在另一個(gè)實(shí)施方案中,所述藥物組合物包含至少一用于治療其中IL-13活性有害的病癥的其它治療劑。優(yōu)選的所述其它藥劑選自治療劑、造影劑、細(xì)胞毒性劑、血管生成抑制劑(包括但不限于抗VEGF抗體或VEGF-tmp);激酶抑制劑(包括^f旦不限于KDR和TIE-2-抑制劑);協(xié)同刺激分子阻斷劑(包括但不限于抗B7.1、抗B7.2、CTLA4-Ig、抗CD20);粘著分子阻斷劑(包括但不限于抗-LFA-lAbs、抗-E/L選擇蛋白Abs、小分子抑制劑);抗細(xì)胞因子抗體或其功能片段(包括但不限于抗-IL-18、抗-TNF、抗-IL-6/細(xì)胞因子接納體抗體);曱氨蝶呤;環(huán)孢菌素;雷帕霉素(rapamycin);FK506;可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)道基因;TNF拮抗劑;防風(fēng)濕藥劑;肌肉松弛劑、麻醉藥、非甾類(lèi)消炎藥物(NSAID)、止痛藥、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻斷劑、抗菌劑、牛皮痹治療劑、皮質(zhì)類(lèi)固醇、合成代謝類(lèi)固醇、紅血球生成素、免疫、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長(zhǎng)激素、激素替換藥物、放射性藥物、抗抑郁劑、抗精神病劑、刺激劑、哮喘藥劑、卩激動(dòng)劑、經(jīng)吸入甾類(lèi)藥物、腎上腺素或類(lèi)似物、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子拮抗劑。48在另一個(gè)方面中,本發(fā)明提供了用于抑制人類(lèi)IL-13活性的方法,所述方法包括使人類(lèi)IL-13與上文公開(kāi)的結(jié)合蛋白接觸使得人類(lèi)IL-13活性受抑制。在一相關(guān)方面中,本發(fā)明提供一種用于抑制患有其中IL-13活性有害的病癥的人類(lèi)個(gè)體的人類(lèi)IL-13活性的方法,所述方法包括向所述人類(lèi)個(gè)體施用上文公開(kāi)的結(jié)合蛋白,使得所述人類(lèi)個(gè)體的人類(lèi)IL-13活性被抑制且實(shí)現(xiàn)治療。在另一個(gè)方面中,本發(fā)明提供了治療(例如治愈、抑制、改善、延遲或阻止發(fā)作或預(yù)防反復(fù)或復(fù)發(fā))或阻止個(gè)體的IL-13相關(guān)病癥的方法。所述方法包括向個(gè)體施用足以治療或預(yù)防IL-13相關(guān)病癥的量的IL-13結(jié)合劑(尤其拮抗劑),例如如本文中描述的抗IL-13抗體或其片段??蓡为?dú)或組合如本文中描述的其它治療形式將IL-13拮抗劑,例如抗IL-13抗體或其片段施用個(gè)體。在一個(gè)實(shí)施方案中,個(gè)體為哺乳動(dòng)物,例如患有一種或多種IL-13相關(guān)病癥的人類(lèi),這樣的病癥包括例如呼吸病癥(例如哮喘(例如過(guò)敏性和非過(guò)敏性哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)和其它病癥,包括呼吸道炎癥、嗜酸粒細(xì)胞增多、纖維化和粘液過(guò)量產(chǎn)生;特異反應(yīng)性病癥(例如特異反應(yīng)性皮炎和過(guò)敏性鼻炎);皮膚、胃腸器官(例如炎性腸病(IBD),例如潰瘍性結(jié)腸炎和/或克羅恩氏病(Crohn'sdisease))和肝臟(例如硬化、纖維化)的炎性和/或自身免疫病癥;硬皮??;腫瘤或癌癥,例如如本文中描述的霍奇金淋巴瘤(Hodgkin'slymphoma)。因此,公開(kāi)內(nèi)容包括IL-13結(jié)合劑(例如抗IL-13抗體或其本文中描述的片段)用于本文中描述的治療的用途,和IL-13結(jié)合劑(例如抗IL-13抗體或其本文中描述的片段)用于制備用于本文中描述的治療的藥劑的用途。IL-13相關(guān)病癥的實(shí)施例包括zf旦不限于選自以下的一種或多種病癥呼吸病癥,例如哮喘(例如過(guò)敏性和非過(guò)敏性哮喘(例如因(例如)呼吸道合胞病毒(RSV)感染所致的(例如)幼兒哞喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)和其它病癥,包括呼吸道炎癥、嗜酸粒細(xì)胞增多、纖維化和粘液過(guò)量產(chǎn)生,例如嚢性纖維化和肺纖維化;特異反應(yīng)性病癥,例如因IL-13敏感性增加所致的特異反應(yīng)性病癥(例如特異反應(yīng)性皮炎、蕁麻滲、濕滲、過(guò)敏性鼻炎和過(guò)敏性腸胃炎);皮膚(例如特異反應(yīng)性皮炎)、胃腸器官(例如炎性腸病(IBD),例如潰瘍性結(jié)腸炎和/或克羅恩氏病)、肝臟(例如硬化、肝細(xì)胞癌)的炎性和/或自身免疫病癥和硬皮病;腫瘤或癌癥(例如,軟組織或?qū)嶓w腫瘤),例如白血病、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和淋巴瘤,例如霍奇金淋巴瘤;病毒感染(例如自HTLV-1病毒感染);其它器官纖維化,例如肝臟纖維化(例如,由B型肝炎和/或C型肝炎病毒所致的纖維化);和如本文中描述的保護(hù)性1型免疫反應(yīng)表現(xiàn)的抑制(例如在疫苗接種期間)。在其它實(shí)施方案中,本申請(qǐng)?zhí)峁┝酥委?例如降低、改善)或預(yù)防一種或多種與以下病癥相關(guān)的癥狀的方法呼吸病癥,例如哮喘(例如過(guò)敏性和非過(guò)敏性啤喘);過(guò)敏癥;慢性阻塞性肺病(COPD);包括呼吸道炎癥、嗜酸粒細(xì)胞增多、纖維化和粘液過(guò)量產(chǎn)生的病癥,例如嚢性纖維化和肺纖維化。例如,哮喘癥狀包括但不限于喘息、氣促、支氣管收縮、氣管高反應(yīng)性、降低的肺活量、纖維化、呼吸道炎癥和粘液產(chǎn)生。所述方法包含向個(gè)體施用足以治療(例如降低、改善)或預(yù)防一種或多種癥狀的量的IL-13拮抗劑,例如IL-13抗體或其片段。IL-13抗體可治療性或預(yù)防性或兩者性質(zhì)地施用??蓡为?dú)或組合如本文中描述的其它治療形式將IL-13拮抗劑,例如抗IL-13抗體或其片段施用個(gè)體。個(gè)體優(yōu)選為哺乳動(dòng)物,例如患有如本文中所述的IL-13相關(guān)病癥的人類(lèi)。在另一個(gè)方面中,本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N用于體外檢測(cè)樣品(例如生物樣品,例如血清、血漿、組織、活組織切片)中IL-13的存在的方法。本方法可用于診斷例如免疫細(xì)胞相關(guān)病癥的病癥。所述方法包括(iM吏樣品或?qū)φ諛悠放c如本文中描述的抗IL-13抗體或其片段接觸;且(ii)檢測(cè)抗IL-13抗體或其片段與樣品或?qū)φ諛悠分g復(fù)合體的形成,其中相對(duì)于對(duì)照樣品,樣品中復(fù)合體形成的統(tǒng)計(jì)上顯著變化指示樣品中IL-13存在。在另一個(gè)方面中,本申請(qǐng)?zhí)峁┝擞糜隗w內(nèi)檢測(cè)IL-13存在的方法(例如在個(gè)體體內(nèi)造影中)。本方法可用于診斷例如IL-13相關(guān)病癥的病癥。所述方法包括(i)在容許抗體或片段與IL-13結(jié)合的條件下,向個(gè)體或?qū)φ諅€(gè)體施用如本文中描述的抗IL-13抗體或其片段;且(ii)檢測(cè)抗體或片段與IL-13之間復(fù)合體的形成,其中相對(duì)于對(duì)照個(gè)體,個(gè)體中復(fù)合體形成的統(tǒng)計(jì)上顯著變化指示IL-13存在。在另一個(gè)方面中,本發(fā)明的結(jié)合蛋白適用于治療選自下列的病癥關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、萊姆(Lyme)關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、脊推關(guān)節(jié)病、全身性紅斑50性狼掩癥、克羅恩氏病(Crohn'sdisease)、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸病、胰島素依賴(lài)型糖尿病、甲狀腺炎、嗜喘、過(guò)敏性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、移植物對(duì)抗宿主疾病、器官移植排斥反應(yīng)、與器官移植相關(guān)的急性或慢性免疫疾病、肉狀瘤病、動(dòng)脈粥樣硬化、彌漫性血管內(nèi)凝血、川崎氏疾病(Kawasaki'sdisease)、才各雷氏疾病(Grave'sdisease)、腎病綜合征、慢性疲勞綜合征、韋格納肉牙胂病(Wegener'sgranulomatosis)、過(guò)敏性紫瘕(Henoch-Schoenleinpurpurea)、腎微觀(guān)血管炎、慢性活動(dòng)型肝炎、葡萄膜炎、膿毒性休克、中毒性休克綜合征、膿毒癥綜合征、惡病質(zhì)、傳染性疾病、寄生疾病、獲得性免疫缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓舞蹈病(Huntington'schorea)、帕金森病(Parkinson'sdisease)、阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease)、中風(fēng)、原發(fā)性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡性疾病、心臟衰竭、心肌梗塞、阿狄森氏病(Addison'sdisease)、多腺缺乏I型和多腺缺乏II型、施密特綜合征(Schmidt'ssyndrome)、成人(急性)呼吸窘迫綜合征、脫發(fā)、斑形脫發(fā)、血清陰性關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)病、萊特爾氏病(Reiter'sdisease)、牛皮癬性關(guān)節(jié)病、潰瘍性大腸炎性關(guān)節(jié)病、腸病性滑膜炎、衣原體病、耶爾森氏菌(yersinia)和沙門(mén)氏菌(salmonella)相關(guān)關(guān)節(jié)病、脊推關(guān)節(jié)病、動(dòng)脈粥樣化的疾病/動(dòng)脈硬化、特異反應(yīng)性過(guò)敏、自身免疫大皰疾病、尋常天皰瘡、葉型天泡瘡、類(lèi)天皰瘡、線(xiàn)性IgA疾病、自身免疫溶血性貧血癥、庫(kù)姆(Coombs)陽(yáng)性溶血性貧血癥、后天性惡性貧血、幼年型惡性貧血、肌痛性腦炎/RoyalFree疾病、慢性皮膚粘膜念珠菌病、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、原發(fā)性硬化型肝炎、隱性自身免疫肝炎、后天免疫缺陷疾病綜合征、后天免疫缺陷相關(guān)疾病、B型肝炎、C型肝炎、常見(jiàn)變異免疫缺損(常見(jiàn)變異低丙種球蛋白血病)、擴(kuò)張型心肌病、雌性不育癥、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維化肺疾病、隱性纖維性肺泡炎、炎癥后間質(zhì)性肺病、間質(zhì)肺炎、結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺病、混合性結(jié)締組織病相關(guān)肺病、全身性硬化相關(guān)間質(zhì)性肺病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)間質(zhì)性肺病、全身性紅斑性狼瘡癥相關(guān)肺病、皮肌炎/多發(fā)性肌炎相關(guān)肺病、修格蘭氏疾病(SjOgren'sdisease)相關(guān)肺病、強(qiáng)直性脊推炎相關(guān)肺病、脈管炎擴(kuò)散肺病、含鐵血黃素沉著癥相關(guān)肺病、藥物誘導(dǎo)之間質(zhì)性肺病、纖維化、放射性纖維化、閉塞性細(xì)支氣管炎、慢性嗜酸細(xì)胞性肺炎、淋巴細(xì)胞滲透性肺病、感染后間質(zhì)性肺病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、自身免疫51肝炎、1型自身免疫肝炎(傳統(tǒng)的自身免疫或狼瘡樣肝炎)、2型自身免疫肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自身免疫介導(dǎo)的低血糖、具有黑棘皮病的B型抗胰島素癥、曱狀旁腺機(jī)能減退、與器官移植相關(guān)的急性免疫疾病、與器官移植相關(guān)的慢性免疫疾病、骨性關(guān)節(jié)病、原發(fā)性硬化性膽管炎、l型牛皮褲、2型牛皮齊、特發(fā)性白血球減少、自身免疫性嗜中性白血球減少癥、腎病NOS、絲球體腎炎、腎微觀(guān)血管炎、菜姆病(lymedisease)、盤(pán)狀紅斑狼瘡、特發(fā)性或NOS男性不育癥、精液自身免疫性、多發(fā)性硬化癥(所有亞型)、交感性眼炎、結(jié)締組織病后繼發(fā)的肺動(dòng)脈高血壓、古德帕斯徹氏綜合征(Goodpasture'ssyndrome)、肺多發(fā)性結(jié)節(jié)性動(dòng)脈炎特征、急性風(fēng)濕熱、類(lèi)風(fēng)濕性脊推炎、斯蒂爾氏病(Still'sdisease)、系統(tǒng)性硬化、修聯(lián)氏綜合征(Sjogren'ssyndrome)、高安氏疾病(Takayasu'sdisease)/動(dòng)脈炎、自身免疫血小板減少癥、特發(fā)性血小板減少癥、自身免疫性曱狀腺病、曱狀腺機(jī)能亢進(jìn)、甲狀腺腫自身免疫曱狀腺機(jī)能減退(橋本氏癥(Hashimoto'sdisease))、萎縮性自身免疫曱狀腺機(jī)能減退、原發(fā)性粘液水肺、晶狀體源性葡萄膜炎、原發(fā)性血管炎、白斑癥急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘導(dǎo)的肝臟損傷、膽汗郁積(choleosatatis)、特質(zhì)性肝病、藥物誘導(dǎo)的肝炎、非酒精性脂肪變性肝炎、過(guò)敏和哮喘、B組鏈球菌(GBS)感染、精神錯(cuò)亂(例如抑郁和精神分裂癥)Th2型和Thl型介導(dǎo)的疾病、急性和慢性疼痛(各種疼痛)和癌癥(例如肺、乳房、胃、膀胱、結(jié)腸、胰腺、卵巢、前列腺和直腸癌)和造血惡性疾病(白血病和'淋巴瘤)、無(wú)卩脂蛋白血病(Abetalip叩rotemia)、手足發(fā)紺、急性和慢性寄生或傳染性過(guò)程、急性白血病、急性成淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、急性或慢性細(xì)菌感染、急性胰腺炎、急性腎功能衰竭、腺癌、空中異位搏動(dòng)、AIDS癡呆并發(fā)癥、酒精誘導(dǎo)的肝炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎、過(guò)敏性接觸性皮炎、過(guò)敏性鼻炎、同種異體移植排斥、a-l-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎縮性側(cè)索硬化、貧血、心絞痛、前角細(xì)胞退化、抗cd3療法、抗磷脂綜合征、抗受體過(guò)敏性反應(yīng)、主動(dòng)脈瘤和周?chē)鷦?dòng)脈瘤、主動(dòng)脈剝離、高動(dòng)脈壓、動(dòng)脈硬化、動(dòng)靜脈瘺、共濟(jì)失調(diào)、心房顫動(dòng)(持續(xù)性或突發(fā)性)、心房樸動(dòng)、房室傳導(dǎo)阻滯、B細(xì)胞淋巴瘤、骨移植排斥反應(yīng)、骨髓移植(BMT)排斥反應(yīng)、房室束支傳導(dǎo)阻滯、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)、灼傷、心律不整、心臟頓抑綜合征、心臟腫瘤、心肌病、52心肺旁路炎癥反應(yīng)、軟骨移植排斥反應(yīng)、小腦皮質(zhì)退化、小腦病癥、混亂或多灶性房性心動(dòng)過(guò)速、化學(xué)療法相關(guān)的病癥、鉻髓細(xì)胞性白血病(CML)、慢性醇中毒、慢性炎性病癥、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸鹽中毒、結(jié)腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結(jié)膜炎、接觸性皮炎、肺心病、冠狀動(dòng)脈病、庫(kù)賈氏病(Creutzfeldt-Jakobdisease)、培養(yǎng)物陰性膿毒癥、嚢性纖維化、細(xì)胞因子治療相關(guān)的病癥、拳擊員癡呆、脫髓鞘疾病、登革熱出血熱、皮炎、皮膚病學(xué)病癥、糖尿病(diabetes)、糖尿病(diabetesmellitus)、糖尿病性動(dòng)脈硬化性疾病、彌漫性雷維小體疾病、擴(kuò)張型充血型心肌病、基底神經(jīng)節(jié)病癥、中年唐氏并發(fā)癥(Down'sSyndrome)、通過(guò)藥物誘發(fā)的阻斷CNS多巴胺受體的藥物誘發(fā)運(yùn)動(dòng)病癥、藥物過(guò)敏、濕滲、腦脊髓炎、心內(nèi)膜炎、內(nèi)分泌病、會(huì)厭炎、埃-巴二氏病毒(epstein-barrvirus)感染、紅斑性肢痛病、錐體束外和小腦病癥、家族性噬血細(xì)胞淋巴組織細(xì)胞增生癥、胎兒胸腺植入排斥反應(yīng)、弗里德棘希氏共濟(jì)失調(diào)(Friedreich'sataxia)、功能性周邊動(dòng)脈病癥、真菌膿毒癥、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球性腎炎、任何器官或組織的移植排斥反應(yīng)、革蘭氏陰性膿毒癥、革蘭氏陽(yáng)性膿毒癥、因細(xì)胞內(nèi)生物而致的肉芽瘤、毛細(xì)胞白血病、霍-史氏疾病(HallerrordenSpatzdisease)、橋本氏曱狀炎(hashimoto'sthyroiditis),枯草熱、心臟移植排斥反應(yīng)、血色素沉著癥、血液透析、溶血尿毒癥綜合征/溶栓劑血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A)、希氏束心律不整(Hisbundlearrythmias)、HIV感染/HIV神經(jīng)病、霍奇金病、多動(dòng)性運(yùn)動(dòng)障礙、過(guò)敏性反應(yīng)、過(guò)敏性肺炎、高血壓、運(yùn)動(dòng)功能減退性運(yùn)動(dòng)障礙、下視丘垂體腎上腺軸評(píng)估、特發(fā)性阿狄森氏病(Addison'sdisease)、特發(fā)性肺纖維化、抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、衰弱、嬰兒脊髓性肌萎縮、主動(dòng)脈炎癥、流行性感冒a、電離輻射暴露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經(jīng)炎、局部缺血-再灌注損傷、局部缺血性中風(fēng)、青年類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型脊髓性肌萎縮癥、卡波西氏肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、腎臟移植排斥反應(yīng)、軍團(tuán)菌、利什曼病、麻瘋病、脊髓皮質(zhì)系統(tǒng)病變、脂肪水腫、肝臟移植排斥反應(yīng)、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細(xì)胞病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血癥、代謝/特發(fā)性、偏頭痛、線(xiàn)粒體多系統(tǒng)功能異常、混合性結(jié)締組織病、單克隆丙種球蛋白病、多發(fā)性骨髓瘤、多發(fā)性系統(tǒng)退化(MencelDejerine-ThomasShi曙Drager和Machado誦Joseph)、重癥肌無(wú)力、胞內(nèi)鳥(niǎo)分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌、骨髓增生異常綜合征、心肌梗塞、心肌局部缺血癥、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎變病、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)性I肌肉萎縮、嗜中性白血球低下發(fā)燒、非霍奇金淋巴瘤、腹主動(dòng)脈和其旁支閉塞癥、動(dòng)脈閉塞癥、okt3療法、睪丸炎/副睪丸炎、睪丸炎/輸精管切除術(shù)反向程序、臟器腫大、骨質(zhì)疏松癥、胰腺移植排斥反應(yīng)、胰腺癌、肺瘤伴隨綜合征/惡性血鈣過(guò)多、甲狀旁腺移植排斥反應(yīng)、骨盆炎性疾患、常年性鼻炎、心包疾病、周邊動(dòng)脈粥樣硬化的疾病、周邊血管性病癥、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺嚢蟲(chóng)肺炎、肺炎、POEMS綜合征(多神經(jīng)病、臟器肺大、內(nèi)分泌病、單克隆丙種球蛋白病和皮膚變化綜合征)、灌注后綜合征、泵后綜合征、MI心切開(kāi)術(shù)后綜合征、子癇前期、進(jìn)行性核上麻痹、原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、放射治療、雷諾氏(Raynaud)現(xiàn)象和疾病、雷諾氏疾病、雷富孫氏病(Refsum'sdisease)、常見(jiàn)窄QRS心動(dòng)過(guò)速、腎血管高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、雷維小體型老年癡呆癥、血清陰性關(guān)節(jié)病、休克、鐮刀形細(xì)胞貧血癥、同種移植皮膚排斥反應(yīng)、皮膚變化綜合征、小腸移植排斥反應(yīng)、實(shí)體腫瘤、特定心律不整、脊推共濟(jì)失調(diào)、脊髓小腦退化、鏈狀球菌肌炎、小腦結(jié)構(gòu)損害、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統(tǒng)梅毒、全身過(guò)敏反應(yīng)、全身炎性反應(yīng)綜合征、全身發(fā)作青年類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、T細(xì)胞或FABALL、毛細(xì)血管擴(kuò)張、血管閉塞性脈管炎、血小板減少、毒性、移植、外傷/出血、III型過(guò)敏性反應(yīng)、IV型過(guò)敏性反應(yīng)、不穩(wěn)定絞痛、尿毒癥、尿膿毒病、蕁麻滲、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動(dòng)、病毒和真菌感染、致命腦炎/無(wú)菌性腦膜炎、生命攸關(guān)的噬血細(xì)胞綜合征、韋尼克-科爾薩科夫(Wernicke-Korsakoffsyndrome)綜合征、威爾森氏癥(Wilson'sdisease)、任何器官或組織的異種移植排斥反應(yīng)、急性冠狀綜合征、急性特發(fā)性多發(fā)性神經(jīng)炎、急性炎性脫髓鞘多神經(jīng)根神經(jīng)病、急性局部缺血、成人斯蒂爾氏病、斑形脫發(fā)、過(guò)敏性反應(yīng)、抗磷脂抗體綜合征、再生障礙性貧血、動(dòng)脈硬化、特異反應(yīng)性濕滲、特異反應(yīng)性皮炎、自身免疫皮炎、與鏈球菌感染相關(guān)的自身免疫病癥、自身免疫性腸病、自身免疫性耳聾、自身免疫性淋巴組織增生綜合征(ALPS)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢早衰、瞼炎、支氣管擴(kuò)張、大皰性類(lèi)天皰瘡、心血管疾病、惡性抗磷脂綜合征、乳糜瀉、頸脊推病、慢性局部缺血、瘢痕型類(lèi)天皰瘡、具有多發(fā)性硬化癥風(fēng)險(xiǎn)的臨床上獨(dú)立的綜合征(CIS)、結(jié)膜炎、兒童期發(fā)作的精神錯(cuò)亂、慢性阻塞性肺病(COPD)、淚嚢炎、皮肌炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病、腰推間盤(pán)突出癥(Diskherniation,Diskprolaps)、藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血、心內(nèi)膜炎、子宮內(nèi)膜異位、內(nèi)眼炎、鞏膜表層炎、多形性紅斑、主要多形性紅斑、妊娠期類(lèi)天皰瘡、古立安-白瑞綜合征(Guillain-Barr6Syndrome,GBS)、枯草熱、休氏綜合征、特發(fā)性帕金森病、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、IgE介導(dǎo)的過(guò)敏、免疫性溶血性貧血、包括體肌炎、傳染性眼部炎性疾病、炎性髓鞘脫失病、炎性心臟病、炎性腎病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、角結(jié)膜干燥癥、庫(kù)斯毛爾氏癥(Kussmauldisease)或庫(kù)斯毛爾氏-梅爾癥(KussmaulMeierDisease)、蘭德里麻痹(Landry'sParalysis)、藍(lán)氏(Langerhan)細(xì)胞組織細(xì)胞增多病、網(wǎng)狀青斑、黃斑變性、微觀(guān)多血管炎、MorbusBechterev、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病癥、粘膜類(lèi)天皰瘡、多發(fā)性器官衰竭、重癥肌無(wú)力、脊髓發(fā)育不良綜合征、心肌炎、神經(jīng)根病癥、神經(jīng)病、非A非B型肝炎、視神經(jīng)炎、骨質(zhì)溶解、少關(guān)節(jié)型JRA、周邊動(dòng)脈閉塞疾病(PAOD)、周邊血管疾病(PVD)、周邊動(dòng)脈疾病(PAD)、靜脈炎、多發(fā)性結(jié)節(jié)性動(dòng)脈炎(或結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周?chē)?、多軟骨炎、風(fēng)濕性多肌痛、灰發(fā)癥、多關(guān)節(jié)JRA、多內(nèi)分泌腺缺乏綜合征、多發(fā)性肌炎、風(fēng)濕性多肌痛(PMR)、泵后綜合征、原發(fā)性帕金森氏綜合征、前列腺炎、純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、原發(fā)性腎上腺機(jī)能不全、復(fù)發(fā)性視神經(jīng)脊髓炎、再狹窄、風(fēng)濕性心臟病、SAPHO(滑膜炎、粉刺、黃水瘡、骨肥厚和骨炎)、硬皮病、繼發(fā)性淀粉樣變性、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經(jīng)痛、繼發(fā)性腎上腺機(jī)能不全、聚硅氧相關(guān)結(jié)締組織病、史年登-威金森病、強(qiáng)直性脊推炎(spondilitisankylosans)、多形糜爛性紅斑(SJS)、全身炎性反應(yīng)綜合征、顳動(dòng)脈炎、弓形體性視網(wǎng)膜炎、中毒性表皮壞死溶解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(腫瘤壞死因子受體、1型過(guò)敏反應(yīng)、II型糖尿病、蕁麻滲、常見(jiàn)間質(zhì)性肺炎(UIP)、血管炎、春季結(jié)膜炎、病毒性視網(wǎng)膜炎、柳一原田綜合征(Vogt-Koyanagi-Hamdasyndrome)(VKH綜合征)、濕性黃斑變性和傷口愈合。在另一個(gè)方面中,本發(fā)明的結(jié)合蛋白適用于治療選自下列的病癥55急性成淋巴細(xì)胞白血病、急性骨髓性白血病、腎上腺皮質(zhì)癌、肛門(mén)癌、闌尾癌、小腦星形細(xì)胞瘤、大腦星形細(xì)胞瘤、基底細(xì)胞癌、膽管癌、肝外、膀胱癌、骨癌、骨肉瘤/惡性纖維組織細(xì)胞瘤腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、大腦星形細(xì)胞瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、幕上原始神經(jīng)外胚層瘤、視覺(jué)傳導(dǎo)途徑和下視丘神經(jīng)膠質(zhì)瘤、乳癌、支氣管腺瘤/類(lèi)癌、類(lèi)癌肺瘤、類(lèi)癌腫瘤、未知根源的胃腸癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、原發(fā)性小腦星形細(xì)胞瘤、子宮頸癌、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性脊髓增生病癥、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、子宮內(nèi)膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤文(Ewing)肺瘤家族、顱外生殖細(xì)胞腫瘤、性腺外生殖細(xì)胞腫瘤、肝外膽管癌、眼癌、眼內(nèi)黑素瘤成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、膽嚢癌、胃癌、胃腸道類(lèi)癌胂瘤、胃腸基質(zhì)腫瘤(GIST)、顱外生殖細(xì)胞肺瘤、性腺外生殖細(xì)胞肺瘤、卵巢生殖細(xì)胞胂瘤、妊娠期滋養(yǎng)層瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、大腦星形細(xì)胞瘤神經(jīng)膠質(zhì)瘤、兒童期視覺(jué)傳導(dǎo)途徑和下視丘神經(jīng)膠質(zhì)瘤、毛細(xì)胞白血病、頭部和頸部癌、肝細(xì)胞(肝臟)癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼內(nèi)黑素瘤、小島細(xì)胞癌(內(nèi)分泌胰腺)、卡波西(Kaposi)肉瘤、腎臟(腎臟細(xì)胞)癌、喉癌、急性成淋巴細(xì)胞白血病、急性骨髓性白血病、'l"曼性淋巴球性白血病、'隻性骨髓性白血病、毛細(xì)胞白血病、唇和口腔癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、AIDS相關(guān)淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、沃德斯姆巨球蛋白血病(WaldenstromMacroglobulinemia)、骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤/骨肉瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、黑素瘤、眼內(nèi)(眼)黑素瘤、墨克(Merkel)細(xì)胞癌、惡性間皮瘤、具有隱蔽根源的轉(zhuǎn)移性鱗狀頸部癌、口腔癌、多發(fā)性?xún)?nèi)分泌瘤綜合征、多發(fā)性骨髓瘤/漿細(xì)胞腫瘤、蕈樣肉芽腫病、脊髓發(fā)育不良綜合征、脊髓發(fā)育不良/骨髓和外骨髓增生疾病、粒細(xì)胞性白血病、慢性粒細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、脊髓增生病癥、鼻腔和鼻竇癌、鼻咽癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、口腔癌(OralCancer)、口腔癌(OralCavityCancer)、唇和口咽癌、骨肉瘤/骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖細(xì)胞腫瘤、卵巢低惡性潛能腫瘤、胰腺癌、小島細(xì)胞胰腺癌、鼻竇和鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細(xì)胞瘤、成松果體細(xì)胞瘤和幕上原始神經(jīng)外胚層瘤、垂體瘤、漿細(xì)胞腫瘤/多發(fā)性骨髓瘤、胸膜56肺母細(xì)胞瘤、前列腺癌、直腸癌、腎臟細(xì)胞(腎臟)癌、腎盂癌和輸尿管癌、移行細(xì)胞癌、成一見(jiàn)網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、唾液腺癌、肉瘤、尤文腫瘤家族、卡波西肉瘤、軟組織肉瘤、子宮肉瘤、賽謝(S6zary)綜合征、皮膚癌(非黑素瘤)、皮膚癌(黑素瘤)、墨克細(xì)胞皮膚癌、小腸癌、鱗狀細(xì)胞癌、具有隱蔽根源的轉(zhuǎn)移性鱗狀頸部癌、胃癌、幕上原始神經(jīng)外胚層瘤、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、睪丸癌、咽喉癌、胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、曱狀腺癌、腎盂和輸尿管的移行細(xì)胞癌、妊娠期滋養(yǎng)層瘤、輸尿管和腎盂癌、移行細(xì)胞癌、尿道癌、子宮癌、子宮內(nèi)膜子宮肉瘤、陰道癌、視覺(jué)傳導(dǎo)途徑和下視丘神經(jīng)膠質(zhì)瘤、陰門(mén)癌、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血病、胚胎性癌肉瘤。在另一個(gè)方面中,本發(fā)明提供了治療患有其中人類(lèi)IL-13有害的病癥的患者的方法,所述方法包括在施用如以上所討論的第二藥劑之前、同時(shí)或在其后施用上文所公開(kāi)的任一結(jié)合蛋白的步驟。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,可與一種或多種IL-13拮抗劑(例如抗IL-13抗體或其片段)共施用和/或共配制的其它治療劑包括但不限于以下的一或多者經(jīng)吸入甾類(lèi)藥物;口服甾類(lèi)藥物;P-激動(dòng)劑,例如短效或長(zhǎng)效p-激動(dòng)劑;白三烯或白三烯受體拮抗劑;例如ADVAIR的組合藥物;IgE抑制劑,例如抗IgE抗體(例如XOLAIR);磷酸二酯酶抑制劑(例如PDE4抑制劑);黃嘌呤;抗膽堿劑藥物;肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑,例如色甘酸;IL-4抑制劑;IL-5抑制劑;嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子/CCR3抑制劑;組胺或其包括H1、H2、H3和H4的受體的拮抗劑;和前列腺素D或其受體(DP1和CRTH2)的拮抗劑。這樣的組合可用于治療哮喘和其它呼吸病癥??膳c一種或多種抗IL-13抗體或其片段共同給藥和/或共配制的治療劑的其它實(shí)施例尤其包括以下的一或多者TNF拮抗劑(例如TNF受體的可溶性片段,TNF受體例如p55或p75人類(lèi)TNF受體或其衍生物,例如75kDTNFR-IgG(75kDTNF受體-IgG融合蛋白,ENBREL));TNF酶拮抗劑,例如TNF轉(zhuǎn)化酶(TACE)抑制劑;蕈毒堿受體拮抗劑;TGF-卩拮抗劑;干擾素y;潑氟尼東(perfemdone);化學(xué)治療劑,例如曱氨蝶呤、來(lái)氟米特(leflunomide)或西羅莫司(sirolimus)(雷帕霉素(rapamycin))或其類(lèi)似物,例如CCI-779;C0X2和cPLA2抑制劑;NSAID;免疫調(diào)節(jié)劑;p38抑制劑、TPL-2、MK-2和NFkB抑制劑。另一第二藥劑是選自以下各物布替耐德(budenoside);表皮生長(zhǎng)因子;皮質(zhì)類(lèi)固醇;環(huán)孢菌素(cyclosporin);柳氮磺胺吡啶;氨基水楊酸鹽;6-巰基嘌呤;碌u唑噪呤;甲硝唑;脂肪氧合酶抑制劑;馬色4i。秦(mesalamine);奧色拉溱(olsalazine);巴柳氮;抗氧化劑;血栓形成抑制劑;IL-1受體拮抗劑;抗IL-ip單克隆抗體;抗1L-6單克隆抗體;生長(zhǎng)因子;彈性蛋白酶抑制劑;吡啶基-咪唑化合物;TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、1L畫(huà)7、IL-8、IL-15、IL畫(huà)16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF的抗體或激動(dòng)劑;CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配體的抗體;曱氨蝶呤;環(huán)孢菌素;FK506;雷帕霉素(rapamycin);霉酚酸嗎啉乙酯(mycophenolatemofetil);來(lái)氟米特(leflunomide);NSAID;布洛芬(ibuprofen);皮質(zhì)類(lèi)固醇;潑尼龍(prednisolone);磷酸二酯酶抑制劑;腺香激動(dòng)劑;抗血栓形成劑;補(bǔ)體抑制劑;腎上腺素能劑;IRAK;NIK;IKK;p38;MAP激酶抑制劑;IL-ip轉(zhuǎn)化酶抑制劑;TNFa轉(zhuǎn)化酶抑制劑;T-細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)受體;金屬蛋白酶抑制劑;柳氮磺胺吡啶;硫唑噤呤;6-巰基噤呤;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑;可溶性細(xì)胞因子受體;可溶性p55TNF受體;可溶性p75TNF受體;sIL-lRI;sIL-lRII;sIL-6R;消炎細(xì)胞因子;IL-4;IL-10;IL-ll和TGF卩。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,通過(guò)至少一種選自下列的方式將上文公開(kāi)的藥物組合物施用個(gè)體胃腸外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)一、嚢內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、大腸內(nèi)、頸管內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心嚢內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨正中內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、快速濃注、經(jīng)陰道、經(jīng)直腸、經(jīng)頰、舌下、鼻內(nèi)和經(jīng)皮。本發(fā)明的一個(gè)方面提供了本發(fā)明的至少一種IL-13結(jié)合蛋白的至少一種IL-13獨(dú)特型抗體。所述獨(dú)特型抗體包括含有包含免疫球蛋白分子的至少一部分或其可摻入本發(fā)明的結(jié)合蛋白的任何部分的分子的任何蛋白或肽,所述至少一部分是例如但不限于重鏈或輕鏈的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)或其配體結(jié)合部分,重鏈或輕鏈可變域、重鏈或輕鏈恒定區(qū)、框架區(qū)域。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及結(jié)合IL-13的人類(lèi)IL-13結(jié)合蛋白,尤其是抗IL-13抗體或其抗原結(jié)合部分。本發(fā)明的各個(gè)方面涉及抗體和抗體片段和其藥物組合物以及用于制備這樣的抗體和片段的核酸、重組表達(dá)載體和宿抑制人類(lèi)IL-13活性和調(diào)節(jié)基因表達(dá)的使用方i。除非另外指出,否則本文中有關(guān)本發(fā)明使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)將具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常所理解的含義。術(shù)語(yǔ)的含義和范圍應(yīng)為清晰的,然而若存在任何潛在歧義,本文中提供的定義優(yōu)先于任何詞典或外在定義。另外,除非上下文另作要求,否則單數(shù)術(shù)語(yǔ)將包括復(fù)數(shù)且復(fù)數(shù)術(shù)語(yǔ)將包括單數(shù)。在本申請(qǐng)中,除非另作說(shuō)明,否則"或"的使用是指"和/或"。此外,術(shù)語(yǔ)"包括"以及例如"包括"和"包括的"的其它形式的使用無(wú)限制。除非上下文另作說(shuō)明,否則例如"元件"或"成分"的術(shù)語(yǔ)也包括包含一個(gè)單位的元件和成分與包含一個(gè)以上亞單位的元件和成分。通常有關(guān)本文中描述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)物、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)和蛋白和核酸化學(xué)和雜交使用的命名法和其技術(shù)為本領(lǐng)域中熟知且通常使用。通常,除非另有說(shuō)明,否則根據(jù)在本領(lǐng)域中熟知且如本說(shuō)明書(shū)引用且詳盡探討的各種一般和更特定參考文獻(xiàn)中所述的習(xí)知方法進(jìn)行本發(fā)明的方法和技術(shù)。如本領(lǐng)域中通常完成或如本文中所描述,根據(jù)制備商的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)。有關(guān)本文中描述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和藥物和藥物化學(xué)使用的命名法和其實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)為本領(lǐng)域中熟知且通常使用。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和遞送和患者的治療。本發(fā)明可更易于理解,選擇術(shù)語(yǔ)定義如下。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"多肽"是指任何氨基酸的聚合鏈。術(shù)語(yǔ)"肽"和"蛋白"與術(shù)語(yǔ)多肽可交換地使用且也是指氨基酸的聚合鏈。術(shù)語(yǔ)"多肽,,包括天然或人造蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽類(lèi)似物。多肽可為單體或聚合多肽。術(shù)語(yǔ)"分離的蛋白"或"分離的多肽"為由于其衍生起點(diǎn)或來(lái)源與伴隨其天然狀態(tài)的天然有關(guān)組分不相關(guān)的蛋白或多肽;其基本上不含來(lái)自相同物種的其它蛋白;通過(guò)不同物種的細(xì)胞表達(dá);或在自然界系統(tǒng)中合成的多肽將自其天然有關(guān)組分分離。也可使用在本領(lǐng)域中熟知的蛋白純化技術(shù)通過(guò)分離使得蛋白基本上不含天然有關(guān)組分。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"回收"是指通過(guò)分離,例如使用在本領(lǐng)域中熟知的蛋白純化技術(shù)使得例如多肽的化學(xué)物種基本上不含天然有關(guān)組分的過(guò)程。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"人類(lèi)IL-13"和"人類(lèi)IL-13野生型,,(本文中縮寫(xiě)為hlL-13、hlL-13wt)包括主要由T輔助2細(xì)胞分泌的人類(lèi)細(xì)胞因子。該術(shù)語(yǔ)包括13kDa多肽的單體蛋白。人類(lèi)IL-13的結(jié)構(gòu)進(jìn)一步描述于例如(Moy,Diblasio等人,2001JMolBiol310219-30)中。術(shù)語(yǔ)人類(lèi)IL-13意欲包括重組人類(lèi)IL-13(rhIL-13),其可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)重組表達(dá)方法制備。表1顯示人類(lèi)IL-13、SEQIDNo.1的氨基酸序列,其在本領(lǐng)域中是已知的。表1:人類(lèi)IL-13的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>如本文中所用術(shù)語(yǔ)"人類(lèi)IL-13變體"(本文中縮寫(xiě)為hIL-13v)包括人類(lèi)IL-13的變體,其中氨基酸殘基130由精氨酸變化為谷氨酰胺(R130Q)。如本文中所用"生物學(xué)活性"是指細(xì)胞因子的所有固有生物學(xué)特性。IL-13的生物學(xué)特性包括但不限于結(jié)合IL-13受體(其它實(shí)例包括轉(zhuǎn)變成人類(lèi)B細(xì)胞中的IgE的免疫球蛋白同種型和抑制炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生)。如本文中關(guān)于抗體、蛋白或肽與第二化學(xué)物種相互作用所用術(shù)語(yǔ)"特異性結(jié)合"或"特異性地結(jié)合"是指相互作用依賴(lài)于這樣的化學(xué)物種上特定結(jié)構(gòu)(例如抗原決定簇或表位)的存在;例如通??贵w識(shí)別且與特異蛋白結(jié)構(gòu)而非蛋白結(jié)合。如果抗體對(duì)于表位"A"而言具有特異性,則含有標(biāo)記的"A"和抗體的反應(yīng)中含有表位A(或游離未標(biāo)記的A)的分子的存在將降低與抗體結(jié)合的標(biāo)記的A的量。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"抗體"廣泛是指任何免疫球蛋白(Ig)分子,其包含4個(gè)多肽鏈,2個(gè)重鏈(H)和2個(gè)輕鏈(L)或其任何功能片段、突變體、變體或衍生物,其保留Ig分子的基本表位結(jié)合特征。這樣的突變體、變體或衍生物抗體形式在本領(lǐng)域中是已知的。其非限制性實(shí)施方案于下文中探討。在全長(zhǎng)抗體中,各重鏈由重鏈可變域(本文中縮寫(xiě)為HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)由3個(gè)域CH1、CH2和CH3組成。各輕鏈由輕鏈可變域(本文中縮寫(xiě)為L(zhǎng)CVR或VL)和輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)由1個(gè)域CL組成。VH和VL區(qū)域可進(jìn)一步再分成高度可變的稱(chēng)為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)、散布在更保守、稱(chēng)為框架區(qū)域(FR)的區(qū)域中的區(qū)域。各VH和VL包括3個(gè)CDR和4個(gè)FR,按以下順序自胺基末端排列至羧基末端FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可為任何類(lèi)型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類(lèi)另'J(例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞類(lèi)。如本文中所用術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合部分"(或簡(jiǎn)稱(chēng)的"抗體部分")是指抗體的保留特異結(jié)合抗原(例如hIL-13)的能力的一個(gè)或多個(gè)片段。施方案也可為雙特異性、雙重特異性或多特異性形式;與兩個(gè)或兩個(gè)以上不同抗原特異性地結(jié)合。抗體的術(shù)語(yǔ)"抗原結(jié)合部分"中包括的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段,由VL、VH、CL和CH1域組成的單價(jià)片段;(ii)F(ab')2片段,包含2個(gè)在鉸鏈區(qū)由雙硫橋連接的Fab片段的二價(jià)片段;(iii)由VH和CHl域組成的Fd片段;(iv)由抗體的單臂的VL和VH域組成的Fv片段;(v)dAb片段(Ward等人,(1989)Nature341:544-546;Winter等人,PCT公開(kāi)WO90/05144Al,以引用的方式并入本文中),其包含單一可變域;和(vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。此外,盡管Fv片段的2個(gè)域VL和VH經(jīng)獨(dú)立基因編碼,其可使用重組方法經(jīng)使得其能夠制成VL且VH區(qū)域配對(duì)以形成單價(jià)分子的單一蛋白鏈(稱(chēng)為單鏈Fv(scFv);參見(jiàn)例如Bird等人,(1988)Science242:423-426;和Huston等人,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883)的合成接頭連接。這樣的單鏈抗體也意欲包括在術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原-結(jié)合部分"中。也包括單鏈抗體的其它形式,例如雙功能抗體。61雙功能抗體為二價(jià)、雙特異性抗體,其中VH和VL域表達(dá)于單一多肽鏈上,但使用過(guò)短而不允許在相同域的2個(gè)域之間配對(duì)的接頭,由此迫使這樣的域與另一鏈的互補(bǔ)域配對(duì)且產(chǎn)生2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)(參見(jiàn)例如Holliger,P.等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448;Poljak,R丄,等人(1994)Structure2:1121-1123)。這樣的抗體結(jié)合部分在本領(lǐng)域中是已知的(kontermann和Dubel編,AntibodyEngineering(2001)Springer-Verlag.NewYork.第790頁(yè)(ISBN3-540-41354-5)。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"抗體構(gòu)建體"是指包含一個(gè)或多個(gè)與接頭多肽或免疫球蛋白恒定域連接的本發(fā)明的抗原結(jié)合部分的多肽。接頭多肽包含兩個(gè)或兩個(gè)以上由肽鍵連接的氨基酸殘基且其用以連接一個(gè)或多個(gè)抗原結(jié)合部分。這樣的接頭多肽為在本領(lǐng)域中所熟知的(參見(jiàn)例如Holliger,P.等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448;Poljak,R丄,等人(1994)Structure2:1121-1123)。免疫球蛋白恒定域是指重鏈或輕鏈恒定域。人類(lèi)IgG重鏈和輕鏈恒定域氨基酸序列是在本領(lǐng)域中所已知的且表示于表2中。表2:人類(lèi)IgG重鏈恒定域和輕鏈恒定域的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>另外,抗體或其抗原結(jié)合部分可為較大免疫粘附分子的一部分,其通過(guò)抗體或抗體部分與一種或多種其它蛋白或肽共價(jià)或非共價(jià)締合形成。這樣的免疫粘附分子的實(shí)例包括使用鏈霉抗生物素蛋白核心區(qū)域以制備四聚scFv分子(Kipriyanov,S.M,等人(1995)HumanAntibodiesandHybridomas6:93-101)和使用半胱氨酸殘基、標(biāo)記肽和C末端聚組氨酸標(biāo)記以制備二價(jià)和生物素化scFv分子(Kipriyanov,S.M.,等人(1994)Mol.Immunol.31:1047-1058)。可分別使用例如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化全抗體的常規(guī)技術(shù),自全抗體制備例如Fab和F(ab')2片段的抗體部分。此外,可使用如本文中描述的標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)獲得抗體、抗體部分和免疫粘附分子。如本文中所用"分離的抗體"意欲指基本上不含其它具有不同抗原特異性的抗體的抗體(例如特異性結(jié)合hIL-13的分離的抗體基本上不含特異性結(jié)合除hIL-13以外的抗原的抗體)。然而特異性結(jié)合hIL-13的分離的抗體可對(duì)其他抗原(例如其它物種的IL-13分子)具有交叉反應(yīng)性。此外,分離的抗體可基本上不含其它細(xì)胞材料和/或化學(xué)物質(zhì)。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"人類(lèi)抗體'意欲包括具有源自人類(lèi)種系免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人類(lèi)抗體可在(例如)CDR和尤其CDR3中包括不由人類(lèi)種系免疫球蛋白序歹'j(例如由隨機(jī)或位點(diǎn)特異性體外誘變或由體內(nèi)體細(xì)胞突變引入的突變)編碼的氨基酸殘基。然而,如本文中所用術(shù)語(yǔ)"人類(lèi)抗體"不意欲包括源自例如小鼠的另一哺乳動(dòng)物物種的種系的CDR序列已移植于人類(lèi)框架序列上的抗體。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"重組人類(lèi)抗體"意欲包括所有通過(guò)重組方法制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的人類(lèi)抗體,例如使用轉(zhuǎn)染于宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)載體表達(dá)的抗體(進(jìn)一步描述于下文的第二部分C中),自重組、組合人類(lèi)抗體庫(kù)分離的抗體(HoogenboomH.R.,(1997)TIBTech.15:62-70;AzzazyH.,和HighsmithW.E.,(2002)Clin.Biochem.35:425-445;GavilondoJ.V,和LarrickJ.W.(2002)BioTechniques29:128-145;HoogenboomH.和ChamesP.(2000)ImmunologyToday21:371-378)、自對(duì)于人免疫球蛋白基因而言轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物(例如小鼠)分離的抗體(參見(jiàn)例如Taylor,L.D.等人(1992)Nucl.AcidsRes.20:6287-6295;KellermannS-A和GreenL.L.(2002)CurrentOpinioninBiotechnology13:593-597;LittleM.等人(2000)ImmunologyToday21:364-370)或通過(guò)包括將人免疫球蛋白基因序列剪接至其它DNA序列的任何其它方法制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的抗體。這樣的重組人類(lèi)抗體具有源自人類(lèi)種系免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)。然而在某些實(shí)施方案中這樣的重組人類(lèi)抗體經(jīng)受體外誘變(或當(dāng)使用對(duì)于人類(lèi)Ig序列轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物時(shí),體內(nèi)體細(xì)胞誘變),且因此重組抗體的VH和VL區(qū)域的氨基酸序列為盡管源自且與人類(lèi)種系VH和VL序列有關(guān),但不可體內(nèi)天然地存在于人類(lèi)抗體種系譜(repertoire)的序列。一個(gè)實(shí)施方案提供能夠結(jié)合人類(lèi)IL-13的完全人類(lèi)抗體,其可使用在本領(lǐng)域中熟知的技術(shù)使用例如但不限于人類(lèi)Ig噬菌體庫(kù)(例如公開(kāi)于Jermutus等人,PCT公開(kāi)第WO20O5/007699A2號(hào)中的那些)產(chǎn)生。術(shù)語(yǔ)"嵌合抗體"是指包含來(lái)自一種物種的重鏈和輕鏈可變域序列和來(lái)自另一物種的恒定區(qū)序列的抗體,例如具有與人類(lèi)恒定區(qū)連接的鼠類(lèi)重鏈和輕鏈可變域的抗體。術(shù)語(yǔ)"CDR移植抗體"是指包含來(lái)自一種物種的重鏈和輕鏈可變域序列,但其中VH和/或VL的一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)域的序列經(jīng)另一物種的CDR序列替換的抗體,例如具有鼠類(lèi)重鏈和輕鏈可變域的抗體,可變域中一個(gè)或多個(gè)鼠類(lèi)CDR(例如CDR3)已經(jīng)用人類(lèi)CDR序列替換。術(shù)語(yǔ)"人源化抗體"是指包含來(lái)自非人類(lèi)物種(例如小鼠)的重鏈和輕鏈可變域序列,但其中VH和/或VL序列的至少一部分已變更為更"類(lèi)似于人類(lèi)",也即與人類(lèi)種系可變序列更相似的抗體。一種類(lèi)型的人源化抗體為CDR移植抗體,其中人類(lèi)CDR序列經(jīng)引入非人類(lèi)VH和VL序列中以替換對(duì)應(yīng)的非人類(lèi)CDR序列。在一個(gè)實(shí)施方案中,提供人源化抗人類(lèi)IL-13抗體和抗原結(jié)合部分。通過(guò)使用傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)獲得鼠類(lèi)抗hIL-13單克隆抗體,接著使用體外遺傳工程人源化來(lái)產(chǎn)生這樣的抗體,例如那些公開(kāi)于Kasaian等人PCT公開(kāi)第WO2005/123126A2號(hào)中的。本文中術(shù)語(yǔ)"Kabat編號(hào)"、"Kabat定義"和"Kabat標(biāo)記"可交換地使用。這樣的在本領(lǐng)域中識(shí)別的術(shù)語(yǔ)是指將比抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈和輕鏈可變域中的其它氨基酸殘基更可變(也即高度可變)的氨基酸殘基編號(hào)的系統(tǒng)(Kabat等人(1971)Ann.NYAcad,Sci.190:382-391和Kabat,E.A.,等人(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第五版,美國(guó)衛(wèi)生和人類(lèi)服務(wù)部(U.S.DepartmentofHealthandHumanServices),NIH出版號(hào)91-3242)。對(duì)于重鏈可變域,對(duì)于CDR1高變區(qū)在氨基酸位置31至35范圍內(nèi),對(duì)于CDR2在氨基酸位置50至65范圍內(nèi)且對(duì)于CDR3在氨基酸位置95至102范圍內(nèi)。對(duì)于輕鏈可變域,對(duì)于CDR1高變區(qū)在氨基酸位置24至34范圍內(nèi),對(duì)于CDR2在氨基酸位置50至56范圍內(nèi)且對(duì)于CDR3在氨基酸位置89至97范圍內(nèi)。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"接納體"和"接納體抗體"是指提供或編碼至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的一個(gè)或多個(gè)框架區(qū)域的氨基酸序列的抗體或核酸序列。在某些實(shí)施方案中,術(shù)語(yǔ)"接納體"是指提供或編碼恒定區(qū)的抗體氨基酸或核酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中,術(shù)語(yǔ)"接納體"是指提供或編碼一個(gè)或多個(gè)框架區(qū)域和恒定區(qū)的抗體氨基酸或核酸序列。在一特異性實(shí)施方案65中,術(shù)語(yǔ)"接納體"是指提供或編碼至少80%、優(yōu)選的至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的一個(gè)或多個(gè)框架區(qū)域的氨基酸序列的人類(lèi)抗體氨基酸或核酸序列。根據(jù)此實(shí)施方案,接納體可含有至少1個(gè)、至少2個(gè)、至少3個(gè)、至少4個(gè)、至少5或至少10個(gè)在人類(lèi)抗體的一個(gè)或多個(gè)特殊位置不出現(xiàn)的氨基酸殘基。接納體框架區(qū)域和/或接納體恒定區(qū)可(例如)衍生自或由種系抗體基因、成熟抗體基因、功能抗體(例如在本領(lǐng)域中熟知的抗體、發(fā)展中的抗體或市售抗體)獲^曰付。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"CDR"是指抗體可變序列內(nèi)的互補(bǔ)決定區(qū)。在各重鏈和輕鏈可變區(qū)中存在3個(gè)CDR,對(duì)于各可變域其經(jīng)命名為CDR1、CDR2和CDR3。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"CDR組',是指單一可變域中存在的能夠結(jié)合抗原的3個(gè)CDR的組。這些CDR的確切邊界已根據(jù)不同系統(tǒng)不同定義。Kabat(Kabat等人,S叫uencesofProteinsofImmunologicalInterest(國(guó)家衛(wèi)生研究所(NationalInstitutesofHealth),Bethesda,Md(1987)和(1991))描述的系統(tǒng)不僅提供可適用于抗體的任何可變域的明確殘基編號(hào)系統(tǒng),而也提供界定3個(gè)CDR的明確殘基邊界。這些CDR可稱(chēng)為KabatCDR。Chothia和合作者(Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)和Chothia等人,Nature342:877-883(1989))發(fā)現(xiàn)KabatCDR中的某些亞部分幾乎采用相同肽骨架構(gòu)象,盡管其氨基酸序列的水平具有極大多樣性。這些亞部分經(jīng)命名為L(zhǎng)l、L2和L3或H1、H2和H3,其中"L"和"H"分別指示輕鏈和重鏈區(qū)域。這些區(qū)域可稱(chēng)為ChothiaCDR,其具有與KabatCDR重疊的邊界。其它界定CDR、與KabatCDR重疊的邊界已由Padlan(FASEBJ.9:133-139(1995))和MacCallum(JMolBiol262(5):732-45(1996))描述。其它CDR邊界定義可能不嚴(yán)格遵循上文系統(tǒng)中的一個(gè),但仍然與KabatCDR重疊,盡管根據(jù)預(yù)測(cè)或?qū)嶒?yàn)結(jié)果特定殘基或殘基的組或甚至全部CDR并未顯著地影響抗原結(jié)合,其可經(jīng)縮短或延長(zhǎng)。本文中使用的方法可利用根據(jù)任何這樣的系統(tǒng)定義的CDR,盡管優(yōu)選的實(shí)施方案使用Kabat或Chothia定義的CDR。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"規(guī)范,,殘基是指如Chothia等人(J.Mol.Biol.196:901-907(1987);Chothia等人,J.Mol.Biol.227:799(1992),兩者均以引用的方式并入本文中)所定義,定義特定規(guī)范CDR結(jié)構(gòu)的CDR或框架中的殘基。根據(jù)Chothia等人,盡管氨基酸序列的水平的極大多樣性,許多抗體的CDR的關(guān)鍵部分具有幾乎相同肽骨架構(gòu)象。各規(guī)范結(jié)構(gòu)主要規(guī)定形成環(huán)的氨基酸殘基的鄰近片段的一組肽骨架扭轉(zhuǎn)角。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"供體"和"供體抗體"是指提供一個(gè)或多個(gè)CDR的抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,供體抗體為來(lái)自物種的抗體,其不同于獲得或衍生框架區(qū)域的抗體。在人源化抗體的情況中,術(shù)語(yǔ)"供體抗體"是指提供一個(gè)或多個(gè)CDR的非人類(lèi)抗體。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"框架"或"框架序列"是指可變域減去CDR的剩余序列。由于可通過(guò)不同系統(tǒng)測(cè)定CDR序列的確切定義,框架序列的含義經(jīng)歷相對(duì)地不同解譯。6個(gè)CDR(輕鏈的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3和重鏈的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)也將輕鏈和重鏈上的框架區(qū)域分為各鏈上四個(gè)亞區(qū)域(FR1、FR2、FR3和FR4),其中CDR1位于FR1與FR2之間,CDR2位于FR2與FR3之間,且CDR3位于FR3與FR4之間。如通過(guò)其他所提及,將特定亞區(qū)域指定為FR1、FR2、FR3或FR4框架區(qū)域表示單一、天然產(chǎn)生的免疫球蛋白鏈的可變域內(nèi)的組合FR。如本文中所用,F(xiàn)R表示四個(gè)亞區(qū)域中的一個(gè),且FR表示構(gòu)成框架區(qū)域的四個(gè)亞區(qū)域中的2個(gè)或2個(gè)以上。人類(lèi)重鏈和輕鏈接納體序列在本領(lǐng)域中是已知的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,人類(lèi)重鏈和輕鏈接納體序列是選自表3和表4中描述的序列。67表3:重鏈接納體序列seqidNo.蛋白區(qū)域序列12345678901234567890123456789012■'6.vh1-18&jh6fr1qvqjl卿gaevkkpgasvkv'sckasgyt;ft■7.VHl-鵬卿FR2WVRi2AP(3QGlK,G,■BVH1-18&JH6FR3RV,TDTSTSJAYME1^SLRSDDTAV^YCAR9vh1-1他jh6'fr4wgq'gttvtvss"…■621/28&JH4FR1QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT1021/28&JH4fr2WVRQAPGQRL/EWMG1121/28&JH4FR3RVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR1221/28&JH4FR4WGQGTLA/TVSS13vh2-26&JH6FR1QVTEKESGPVLVKPTCTLTI/rCTVSGrSLS14VH2-26&JH6FR2WIRQPPGKALEWLAH15VH2二2'6'&JH6FR3Rl/TISKDTSKSQWI/TMTNMDPVDTATYYCAR9VH2-2,6&JH6FR4WGQGTTVTVSS16M60&JH4FR1QVTLRESGPALVKPTQTI/ri/TCTLYGFSLS17M60&JH4FR2WIRQPPGKALEWLAIBM60&JH4FR3RLTISKDTSKNQWLTMTNMDPVDTATYYCAR12M60&JH4FR4WGQGTLVTVSS6vh1-46&jh6fr1■sgaevkkpg'asvkv'sckasg—ytft7vh1-46&jh6fr'2j^r諷P,]jEWMQ—:..、..19\H1-46&JH6FR3:'RVTMTRDTSTSTVYMELSSIiRSEDTAVYYCAR9窗-46&JH6fr4二W鄉(xiāng)TTVTVSS'表4:輕鏈接納體序列seqidNo.蛋白區(qū)域序列12345678901234567B9012345678901220A20&JK4FR1DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC21A20&JK4FR2WYQQKPGKVPKIXIY22A20&JK4FR3GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSJDQPEDVATYYC23A20&JK4FR4FGGGTKVEIKR20III-3R&JK4FIUD工QMTQSPSSLSASVGDRVTITC24iii-3'r&j;k4服,棘cpkll工y/.……''25III-3R&JK4,FR'3',GVP、SR'ISGSGSGTDFTFTISSLiQPEDIATYYC23III-3R&JK4FR4'FGGCTKVEIKR-26A1&JK4FR1dwmtqsp:lsijPvtlgqpasisc27A1&JK4fr2WFQQRPGQSPRRLIY28A1&JK4FR3GVPDRFSGSGSGTOFTLKISRVEAEDVGVYYC23Al&JK4fr4FGGGTKVEIKR2901&jk2FR1VyQT:RLSLPVTPGEPAS'Ii;G:<3'001&JK2FR2'2801&JK2FR3"GV'P'加FSGSGSGTDFT:tiKISRV,E^EDVGVYYC3:101&JK2FR4FGQ3TKLiSIKK.68如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"種系抗體基因"或"基因片段"是指由非淋巴樣細(xì)胞編碼的免疫球蛋白序列,所述非淋巴樣細(xì)胞并未經(jīng)歷導(dǎo)致遺傳重排和突變以表達(dá)特定免疫球蛋白的成熟過(guò)程。(參見(jiàn)例如Shapiro等人,Crit.Rev.Immunol.22(3):183-200(2002);Marchalonis等人,AdvExpMedBiol.484:13-30(2001))。本發(fā)明的各種實(shí)施方案提供的一優(yōu)點(diǎn)源自以下認(rèn)識(shí)種系抗體基因在物種中比成熟抗體基因更可能保守個(gè)體的必要氨基酸序列結(jié)構(gòu)特征,因此當(dāng)在此物種中治療使用時(shí)不太可能自外來(lái)源識(shí)別出。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"關(guān)鍵"殘基是指可變區(qū)內(nèi)的對(duì)抗體、尤其人源化抗體的結(jié)合特異性和/或親和力具有更多影響的某些殘基。關(guān)鍵殘基包括但不限于以下的一或多者鄰近于CDR、可能的糖基化位點(diǎn)(可為N或O糖基化位點(diǎn))的殘基;稀有殘基;能夠與抗原相互作用的殘基;能夠與CDR相互作用的殘基;規(guī)范殘基;重鏈可變域與輕鏈可變域之間的接觸殘基;Vernier區(qū)中的殘基;和重疊于Chothia定義的可變重鏈CDR1與Kabat定義的第一重鏈框架之間的區(qū)域中的殘基。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"人源化抗體"為抗體或其變體、衍生物、類(lèi)似物或片段,其與所關(guān)注的抗原免疫特異結(jié)合,且其包含基本上具有人類(lèi)抗體的氨基酸序列的框架(FR)區(qū)域和基本上具有非人類(lèi)抗體的氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。如本文中所用,在CDR的情況下術(shù)語(yǔ)"基本上,,是指CDR具有與非人類(lèi)抗體CDR的氨基酸序列至少80%、優(yōu)選的至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的氨基酸序列。人源化抗體包含至少1個(gè)且通常2個(gè)可變域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)中的全部,其中所有或基本上所有CDR區(qū)域?qū)?yīng)于非人免疫球蛋白(也即供體抗體)的那些CDR區(qū)域,且所有或基本上所有框架區(qū)域?yàn)槿嗣庖咔虻鞍坠灿行蛄械目蚣軈^(qū)域。人源化抗體優(yōu)選的也至少包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)的一部分,通常人免疫球蛋白的一部分。在某些實(shí)施方案中,人源化抗體含有輕鏈以及至少重鏈的可變域。抗體也可包括重鏈的CH1、鉸鏈、CH2、CH3和CH4區(qū)域。在某些實(shí)施方案中,人源化抗體僅含有人源化輕鏈。在某些實(shí)施方案中,人源化抗體僅含有人源化重鏈。在特定實(shí)施方案中,人源化抗體僅含有輕鏈和/或人源化重鏈的人源化可變域。所述人源化抗體可選自任何類(lèi)別的免疫球蛋白,包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE,和任何同種型,包括(而不限于)IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。所述人源化抗體可包含一種以上類(lèi)別或同種型的序列且特定恒定域可經(jīng)選擇以使用在本領(lǐng)域中所熟知的技術(shù)優(yōu)化所需效應(yīng)子功臺(tái)匕月匕。人源化抗體的框架且CDR區(qū)域不必精確對(duì)應(yīng)于親本序列,例如供體抗體CDR或共有框架可經(jīng)取代、插入和/或刪除至少一個(gè)氨基酸殘基而誘變以便該位點(diǎn)的CDR或框架殘基并不對(duì)應(yīng)于供體抗體或共有框架。然而在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,這樣的突變不會(huì)為大范圍突變。通常,至少80%、優(yōu)選的至少85%、更優(yōu)選至少90%且最優(yōu)選至少95%的人源化抗體殘基將對(duì)應(yīng)于親本FR和CDR序列的那些殘基。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"共有框架"是指共有免疫球蛋白序列中的框架區(qū)域。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"共有免疫球蛋白序列"是指由相關(guān)免疫球蛋白序列的家族中最頻繁出現(xiàn)的氨基酸(或核普酸)形成的序列(參見(jiàn)例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany1987))。在免疫球蛋白的家族中,共有序列的各位置由在所述家族中最頻繁出現(xiàn)在該位置的氨基酸占據(jù)。若2個(gè)氨基酸以相同頻率出現(xiàn),則任一個(gè)可包括于共有序列中。如本文中所用,"Vernier"區(qū)是指如由Foote和Winter1992,J.Mol.Biol.224:487-499,其以引用的方式并入本文中)所描述可調(diào)節(jié)CDR結(jié)構(gòu)且Vernier以配合抗原的框架殘基的子組。Vernier區(qū)殘基形成位于CDR下的層且可影響CDR的結(jié)構(gòu)和抗體的親和力。術(shù)語(yǔ)"多價(jià)結(jié)合蛋白,,用于此說(shuō)明書(shū)以表示包含2個(gè)或2個(gè)以上抗原結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合蛋白。多價(jià)結(jié)合蛋白優(yōu)選的經(jīng)工程化以具有3個(gè)或3個(gè)以上抗原結(jié)合位點(diǎn),且通常不為天然存在的抗體。術(shù)語(yǔ)"多特異性結(jié)合蛋白"是指能夠結(jié)合2個(gè)或2個(gè)以上相關(guān)或不相關(guān)標(biāo)靶的結(jié)合蛋白。如本文中所用雙可變域(DVD)結(jié)合蛋白為包含2個(gè)或2個(gè)以上抗原結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合蛋白且其為四價(jià)或多價(jià)結(jié)合蛋白。這樣的DVD可具有單特異性,也即能夠結(jié)合一個(gè)抗原或具有多特異性,也即能夠結(jié)合2個(gè)或2個(gè)以上抗原。包含2個(gè)重鏈DVD多肽和2個(gè)輕鏈DVD多肽的DVD結(jié)合蛋白稱(chēng)為DVDIg。DVDIg的每一半包含重鏈DVD多肽和輕鏈DVD多肽和2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。各結(jié)合位點(diǎn)包含重鏈可變域和輕鏈可變域,每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)具有6個(gè)與抗原結(jié)合有關(guān)的CDR。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"中和"是指當(dāng)結(jié)合蛋白特異性結(jié)合細(xì)胞因子時(shí),細(xì)胞因子生物學(xué)活性的中和。中和結(jié)合蛋白優(yōu)選為中和抗體,其與hlL-13和/或hIL-13的結(jié)合使得hlL-13和/或hIL-13的生物學(xué)活性受到抑制。中和結(jié)合蛋白優(yōu)選的結(jié)合hlL-13和/或hIL-13且將IL-13和/或hIL-13的生物學(xué)活性降低至少約20%、40%、60%、80%、85%或以上??赏ㄟ^(guò)測(cè)定在本領(lǐng)域中所熟知的hIL-13和/或hIL-13生物學(xué)活性的一種或多種指示劑來(lái)評(píng)估WL-13和/或hlL-13的生物學(xué)活性受中和結(jié)合蛋白的抑制。例如,A-549細(xì)胞的人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)性TARC(CCL-17)產(chǎn)生的抑制(參見(jiàn)實(shí)施例l.l.C)。術(shù)語(yǔ)"活性"包括例如抗體對(duì)抗原的結(jié)合特異性/親和力的活性,例如結(jié)合IL-13抗原和/或中和抗體效能的抗hIL-13抗體,例如與hIL-13的結(jié)合抑制hIL-13的生物學(xué)活性的抗hIL-13抗體,例如抑制TARC(CCL-17)由A-549細(xì)胞經(jīng)人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)產(chǎn)生(參見(jiàn)實(shí)施例l.l.C)。術(shù)語(yǔ)"表位"包括任何能夠特異性地結(jié)合免疫球蛋白或T細(xì)胞受體的多肽決定蔟。在某些實(shí)施方案中,表位決定簇包括化學(xué)活性表面的分子群,例如氨基酸、糖側(cè)鏈、磷酰基或磺?;?,且在某些實(shí)施方案中可具有特異性三維結(jié)構(gòu)特性和/或比電荷特性。表位為由抗體結(jié)合的抗原區(qū)域。在某些實(shí)施方案中,當(dāng)抗體優(yōu)選的識(shí)別其于蛋白和/或大分子的復(fù)雜混合物中的標(biāo)靶抗原時(shí),據(jù)稱(chēng)其特異性地結(jié)合抗原。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"表面等離子體共振"是指通過(guò)例如使用BIAcore系統(tǒng)(PharmaciaBiosensorAB,Uppsala,SwedenandPiscataway,NJ)檢測(cè)生物傳感器基質(zhì)中蛋白濃度變化而允許實(shí)時(shí)分析生物特異性相互作用的光學(xué)現(xiàn)象。對(duì)于進(jìn)一步描述,參見(jiàn)J6nsson,U.,等人(1993)Ann.Biol.Clin.51:19-26;化nsson,U.,等人(1991)Biotechniques11:620-627;Johnsson,B.,等人(1995)J.Mol.Recognit.8:125-131;和Johnnson,B.,等人(1991)Anal.Biochem.198:268-277。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"k。n"意欲指如在本領(lǐng)域中是已知的抗體與抗原締合以形成抗體/抗原復(fù)合體的結(jié)合速率常數(shù)。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"k。ff"意欲指如在本領(lǐng)域中是已知的抗體自抗體/抗原復(fù)合體解離的分解速率常數(shù)。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"KD"意欲指如在本領(lǐng)域中是已知的特定抗體-抗原相互作用的解離常數(shù)。71如本文中所用術(shù)語(yǔ)"標(biāo)記的結(jié)合蛋白"是指具有經(jīng)并入提供結(jié)合蛋白的鑒定的標(biāo)記的蛋白。所述標(biāo)記優(yōu)選為可檢測(cè)標(biāo)記,例如并入放射性標(biāo)記的氨基酸或附接至多肽的生物素基部分,其可通過(guò)標(biāo)記的抗生物素蛋白檢測(cè)(例如含有熒光標(biāo)記或酶活性的鏈霉抗生物素蛋白,其可通過(guò)光學(xué)或比色法檢測(cè))。多肽的標(biāo)記的實(shí)例包括但不限于以下放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、35S、9DY、"Tc、mIn、125I、131I、177Lu、166Ho或153Sm);焚光標(biāo)記(例如FITC、羅丹明(rhodamine)、鑭系元素磷光體)、酶促標(biāo)記(例如辣根過(guò)氧化物酶、熒光素酶、堿性磷酸酶);化學(xué)熒光標(biāo)記;生物素基基團(tuán);由第二報(bào)導(dǎo)子識(shí)別的預(yù)定多肽表位(例如亮氨酸拉鏈配對(duì)序列、第二抗體的結(jié)合位點(diǎn)、金屬結(jié)合域、表位標(biāo)記);和》茲性試劑,例如禮螯合物。術(shù)語(yǔ)"抗體綴合物"是指結(jié)合蛋白,例如抗體,其在化學(xué)上與例如治療或細(xì)胞毒性劑的第二化學(xué)部分連接。本文中使用術(shù)語(yǔ)"藥劑"以表示化合物、化合物的混合物、生物大分子或由生物材料制成的萃取物。治療或細(xì)胞毒性劑優(yōu)選的包括但不限于百日咳毒素、紫杉酚、細(xì)胞分裂抑素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根堿、絲裂霉素、依托泊苷、鬼臼噻吩戒(tenoposide)、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、秋水仙堿、阿霉素、道諾紅菌素(daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素(mithramycin)、放線(xiàn)菌素D、l-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾和嘌呤霉素和其類(lèi)似物或同系物。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"晶體"和"結(jié)晶"是指以晶體形式存在的抗體或其抗原結(jié)合部分。晶體為一種形式的固態(tài)物質(zhì),其不同于例如非晶形固態(tài)或液晶態(tài)的其它形式。晶體包括規(guī)則、重復(fù)、三維原子、離子、分子數(shù)組(例如蛋白,例如抗體),或分子裝配物(例如抗原/抗體復(fù)合體)。這些三維數(shù)組根據(jù)所述領(lǐng)域中充分理解的特定數(shù)學(xué)關(guān)系排列。晶體中重復(fù)的基本單位或建構(gòu)塊稱(chēng)作不對(duì)稱(chēng)單元。排列中符合給定、充分定義的晶體學(xué)對(duì)稱(chēng)性的不對(duì)稱(chēng)單元的重復(fù)提供晶體的"晶胞"。晶胞通過(guò)規(guī)則平移在所有三維空間中的重復(fù)提供晶體。參見(jiàn)Giege,R.和Ducruix,A.Barrett,CrystallizationofNucleicAcidsandProteins,aPracticalApproach,第二版,笫201-16頁(yè),OxfordUniversityPress,NewYork,NewYork,(1999)。如本文所提及術(shù)語(yǔ)"多核苷酸,,是指2或2個(gè)以上核苷酸的聚合形式、或核糖核苷酸或脫氧核苷酸或任一類(lèi)型的核苷酸的修飾形式。所述術(shù)語(yǔ)包括單鏈和雙鏈形式的DNA,但優(yōu)選雙鏈DNA。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"分離的多核苷酸"將是指(例如染色體組、cDNA或合成起源或其某些組合的)多核苷酸,由于其起源,所述"分離的多核普酸"與自然界中所發(fā)現(xiàn)的"分離的多核普酸"所具有的所有或部分多核苷酸不相關(guān);與在自然界中無(wú)聯(lián)系的多核苷酸可操縱地連接;或在自然界中作為較大序列的一部分并不存在。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"載體"意欲指能夠運(yùn)輸其連接的另一核酸的核酸分子。一種類(lèi)型的載體為"質(zhì)粒",其是指其它DNA片段可連接的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。另一類(lèi)型的載體為病毒載體,其中其它DNA片段可連接于病毒基因組中。某些載體能夠在其所引入的宿主細(xì)胞中(例如具有細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和附加型哺乳動(dòng)物載體)自主復(fù)制。在引入宿主細(xì)胞后其它載體(例如非附加型哺乳動(dòng)物載體)可并入宿主細(xì)胞的基因組中且由此連同宿主基因組一起復(fù)制。此外,某些載體能夠直接表達(dá)其可操縱地連接的基因。這樣的載體在本文中稱(chēng)為"重組表達(dá)載體"(或簡(jiǎn)稱(chēng)的"表達(dá)載體")。一般而言,用于重組DNA技術(shù)的表達(dá)載體通常以質(zhì)粒形式。在本說(shuō)明書(shū)中,"質(zhì)粒"和"載體"可交換地使用,由于質(zhì)粒為載體的最通常使用形式。然而,本發(fā)明意欲包括這樣的其它形式的表達(dá)載體,例如病毒載體(例如復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺病毒相關(guān)病毒),其提供等效功能。術(shù)語(yǔ)"可操縱地連接,,是指所描述元件成允許其以預(yù)定方式起作用的關(guān)系的并置。與編碼序列"可操縱地連接"的控制序列經(jīng)連接使得在與控制序列相容的條件下實(shí)現(xiàn)編碼序列的表達(dá)。"可操縱地連接"的序列包括與所關(guān)注的基因鄰接的表達(dá)控制序列與以反式或在一定距離作用以控制所關(guān)注的基因的表達(dá)控制序列。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"表達(dá)控制序列"是指為實(shí)現(xiàn)其所連接的編碼序列的表達(dá)和處理所必需的多核苷酸序列。表達(dá)控制序列包括適當(dāng)轉(zhuǎn)錄起始、終止、啟動(dòng)子和增強(qiáng)子序列;有效RNA加工信號(hào),例如剪接和聚腺苦酸化信號(hào);穩(wěn)定細(xì)胞質(zhì)mRNA的序列;增強(qiáng)轉(zhuǎn)譯效率(也即Kozak共有序列)的序列;增強(qiáng)蛋白穩(wěn)定性的序列;和如果需要,增強(qiáng)蛋白分泌的序列。這樣的控制序列的性質(zhì)依賴(lài)于宿主生物而不同;在原核生物中這樣的控制序列通常包括啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止序列;在真核生物中,通常這樣的控制序列包括啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄終止序列。術(shù)語(yǔ)"控制序列"意欲包括對(duì)于表達(dá)和加工而言必需存在的元件,且也可包括其它存在具有有利性的元件,例如前導(dǎo)序列和融合搭配序列??墒褂迷诒绢I(lǐng)域中是已知的包括表達(dá)盒、載體、重組宿主細(xì)胞的表達(dá)載體和宿主細(xì)胞和用于重組表達(dá)的方法和自單一開(kāi)放閱讀框的重組聚合蛋白和預(yù)蛋白的蛋白水解過(guò)程(例如WO2007/014162,其以引用的方式并入本文中)來(lái)表達(dá)且純化本發(fā)明的蛋白構(gòu)建體。如本文中所定義的"轉(zhuǎn)化"是指外源性DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞的任何過(guò)程。轉(zhuǎn)化可在自然或人工條件下使用在本領(lǐng)域中所熟知的各種方法進(jìn)行。轉(zhuǎn)化可依賴(lài)于用于將外來(lái)核酸序列插入原核或真核宿主細(xì)胞中的任何已知方法?;诮?jīng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞選擇方法且其可包括但不限于病毒感染、電穿孔、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染和粒子轟擊。這樣的"轉(zhuǎn)染的"細(xì)胞包括穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,其中所插入DNA能夠復(fù)制為自主復(fù)制質(zhì)粒或宿主染色體的一部分。其也包括在有限時(shí)段瞬時(shí)表達(dá)所插入DNA或RNA的纟田月包。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"重組宿主細(xì)胞"(或簡(jiǎn)稱(chēng)的"宿主細(xì)胞")意欲指外源性DNA已引入的細(xì)胞。應(yīng)理解這樣的術(shù)語(yǔ)不僅意欲指特定個(gè)體細(xì)胞,而也指所述細(xì)胞的子代。由于某些修飾因突變或環(huán)境影響可能存在于后繼代中,因此所述子代實(shí)際上不可能與母細(xì)胞相同,但仍包括于如本文中所用的術(shù)語(yǔ)'宿主細(xì)胞"范圍內(nèi)。宿主細(xì)胞優(yōu)選的包括選自任一生命領(lǐng)域的原核和真核細(xì)胞。真核細(xì)胞優(yōu)選的包括原生生物、真菌、植物和動(dòng)物細(xì)胞。宿主細(xì)胞最優(yōu)選包括但不限于原核細(xì)胞系大腸桿菌(E.Coli);哺乳動(dòng)物細(xì)胞系CHO、HEK293和COS;昆蟲(chóng)細(xì)胞系Sf9;禾口真菌細(xì)月包酉良酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于重組DNA、寡核苷酸合成和組織培養(yǎng)物和轉(zhuǎn)化(例如電穿孔、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染)??筛鶕?jù)制備商的說(shuō)明書(shū)或如本領(lǐng)域中通常完成或如本文中所描述,進(jìn)行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)。通常上述技術(shù)和程序可根據(jù)在本領(lǐng)域中熟知的習(xí)知方法且如各種一般和更特定參考文獻(xiàn)(其在整個(gè)本說(shuō)明書(shū)引用和探討)中所述般進(jìn)行。參見(jiàn)例如Sambrook等人,MolecularCloning:ALaboratoryManual(第二版,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y,(1989)),其出于<壬{可目的以引用的方式并入本文中。74如在本領(lǐng)域中是已知的且如本文中所用"轉(zhuǎn)基因生物"是指具有含有轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞的生物,其中所述引入生物(或生物的始祖)中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)不天然表達(dá)于所述生物中的多肽。"轉(zhuǎn)基因"為DNA構(gòu)建體,其穩(wěn)定地且可操縱地整合入發(fā)展轉(zhuǎn)基因生物的細(xì)胞的基因組中,引導(dǎo)所編碼基因產(chǎn)物在轉(zhuǎn)基因生物的一種或多種細(xì)胞類(lèi)型或組織中的表達(dá)。術(shù)語(yǔ)"調(diào)節(jié),,與"調(diào)控"可交換地使用,且如本文中所用是指所關(guān)注的分子(例如WL-13的生物學(xué)活性)的活性變化或變更。調(diào)節(jié)可增加或降低所關(guān)注分子的某一活性或功能的大小。分子的例示性活性和功能包括但不限于結(jié)合特征、酶活性、細(xì)胞受體活化和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。相應(yīng)地,如本文中所用術(shù)語(yǔ)"調(diào)節(jié)劑,,為能夠改變或變更所關(guān)注分子的活性或功能(例如hIL-13的生物學(xué)活性)的化合物。例如,與調(diào)節(jié)劑不存在條件下所觀(guān)察到的活性或功能大小相比,調(diào)節(jié)劑可導(dǎo)致分子的某一活性或功能的大小增加或降低。在某些實(shí)施方案中,調(diào)節(jié)劑為抑制劑,其降低分子的至少一活性或功能的大小。例示性抑制劑包括但不限于蛋白、肽、抗體、肽體、糖類(lèi)或小有機(jī)分子。肽體描述于例如WO01/83525中。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"激動(dòng)劑"是指當(dāng)與所關(guān)注的分子接觸時(shí),與激動(dòng)劑不存在情況下所觀(guān)察到的活性或功能大小相比,導(dǎo)致分子的某一活性或功能的大小增加的調(diào)節(jié)劑。所關(guān)注的特定激動(dòng)劑可能包括但不限于IL-13多肽或多肽、核酸、糖類(lèi)或與WL-13結(jié)合的任何其它分子。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"拮抗劑,,或"抑制劑"是指當(dāng)與所關(guān)注的分子接觸時(shí),與拮抗劑不存在情況下所觀(guān)察到的活性或功能大小相比,導(dǎo)致分子的某一活性或功能的大小降低的調(diào)節(jié)劑。所關(guān)注的特定拮抗劑包括阻斷或調(diào)節(jié)hIL-13和/或hIL-13的生物或免疫活性的那些。hIL-13和/或hIL-13的拮抗劑和抑制劑可包括但不限于蛋白、核酸、糖類(lèi)或與hIL-13和/或hIL-13結(jié)合的任何其它分子。術(shù)語(yǔ)"抑制與受體結(jié)合"是指結(jié)合蛋白阻止IL-13與其一個(gè)或多個(gè)受體結(jié)合的能力。所述與受體結(jié)合的抑制將使得IL-13與其受體結(jié)合所介導(dǎo)的生物學(xué)活性減少或';肖除。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"有效量,,是指足以降低或改善病癥或其一種或多種癥狀的嚴(yán)重程度和/或持續(xù)時(shí)間,預(yù)防病癥進(jìn)行,使得病癥消退,預(yù)防一種或多種與病癥相關(guān)的癥狀反復(fù)、發(fā)展、發(fā)作或進(jìn)行,檢測(cè)病癥或增強(qiáng)或改善另一治療劑(例如預(yù)防或治療劑)的預(yù)防或治療作用的治療劑的量。如本文中所用術(shù)語(yǔ)"樣品"以其最廣泛意義使用。如本文中所用"生物樣品"包括但不限于任意量的來(lái)自自存活物或先前存活物的物質(zhì)。這樣的存活物包括但不限于人類(lèi)、小鼠、大鼠、猴、狗、兔和其它動(dòng)物。這樣的物質(zhì)包括但不限于血液、血清、尿、滑液、細(xì)胞、器官、組織、骨髓、淋巴結(jié)和脾臟。I.結(jié)合人類(lèi)IL-13的抗體本發(fā)明的一個(gè)方面提供了分離的鼠類(lèi)單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分,其以高親和力、緩慢分解速率和高中和能力與IL-13結(jié)合。本發(fā)明的第二方面提供了結(jié)合IL-13的嵌合抗體。本發(fā)明的第三方面提供了結(jié)合IL-13的人源化抗體或其抗原結(jié)合部分。所述抗體或其部分優(yōu)選為分離的抗體。本發(fā)明的抗體優(yōu)選中和人類(lèi)抗IL-13和/或人類(lèi)抗IL-13抗體。A.抗IL-13抗體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明的抗體可通過(guò)在本領(lǐng)域中是已知的大量技術(shù)中的任一種制備。1.使用雜交瘤技術(shù)的抗IL-13單克隆抗體可使用在本領(lǐng)域中是已知的廣泛各種技術(shù)制備單克隆抗體,這樣的技術(shù)包括使用雜交瘤、重組體和噬菌體呈現(xiàn)技術(shù)或其組合。例如,可使用雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生單克隆抗體,所述技術(shù)包括那些在本領(lǐng)域中是已知的且教導(dǎo)于例如于Harlow等人,Antibodies:ALaboratoryManual,(ColdSpringHarborLaboratoryPress,第二版1988);Hammerling,等人,于MonoclonalAntibodiesandT國(guó)CellHybridomas563-681(Elsevier,用術(shù)語(yǔ)"單克隆抗^"不限于、經(jīng)由雜交i技術(shù)產(chǎn)生的抗體。術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體,,是指源自包括任何真核、原核或噬菌體抹的單一克隆抗體,且非其產(chǎn)生的方法的抗體。領(lǐng)域中熟知。在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供產(chǎn)生單克隆抗體的方法以及通過(guò)包括培養(yǎng)分泌本發(fā)明抗體的雜交瘤細(xì)胞的方法產(chǎn)生的抗體,其中雜交瘤優(yōu)選通過(guò)以下步驟產(chǎn)生使從用本發(fā)明的抗原免疫的小鼠分離的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,且隨后篩選由融合產(chǎn)生的雜交瘤以篩選分泌能夠結(jié)合本發(fā)明的多肽的抗體的雜交瘤克隆(參見(jiàn)實(shí)施例1.2)。簡(jiǎn)言之,小鼠可用IL-13抗原免疫。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,將IL-13抗原與輔助劑一起施用以刺激免疫反應(yīng)。這樣的輔助劑包括完整或弗氏不完全輔助劑、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激復(fù)合體)。這樣的輔助劑可通過(guò)使多肽局部沉積而保護(hù)其免于快速分散,或其可含有刺激宿主分泌對(duì)于巨噬細(xì)胞和免疫系統(tǒng)的其它組分而言具有趨化性的因素的物質(zhì)。優(yōu)選地,如果多肽正施用,則免疫計(jì)劃將包括2或2次以上施用多肽,經(jīng)數(shù)星期展開(kāi)。以IL-13抗原使動(dòng)物免疫之后,可由動(dòng)物獲得抗體和/或抗體產(chǎn)生細(xì)胞。通過(guò)放血或處死動(dòng)物由動(dòng)物獲得含有抗IL-13抗體的血清。當(dāng)自動(dòng)物獲得時(shí),可使用血清,可由血清獲得免疫球蛋白部分,或可從血清純化抗IL-13抗體。以此方式獲得的血清或免疫球蛋白為多克隆的,因此具有異質(zhì)組的特性。檢測(cè)免疫反應(yīng)后,例如檢測(cè)小鼠血清中對(duì)抗原IL-13特異性的抗體,收集小鼠脾臟且分離脾細(xì)胞。隨后,通過(guò)熟知技術(shù)使脾細(xì)胞與任何適當(dāng)骨髓瘤細(xì)胞,例如由ATCC獲得的細(xì)胞系SP20的細(xì)胞融合。選擇雜交瘤且通過(guò)限制稀釋進(jìn)行克隆。隨后通過(guò)對(duì)于分泌能夠結(jié)合IL-13的抗體的細(xì)胞而言,在本領(lǐng)域中是已知的方法測(cè)定雜交瘤克隆。可通過(guò)以陽(yáng)性雜交瘤克隆使小鼠免疫來(lái)產(chǎn)生通常含有高含量的抗體的腹水液體。在另一個(gè)實(shí)施方案中,可自免疫動(dòng)物制備抗體產(chǎn)生永生雜交瘤。免疫后,處死動(dòng)物且如在本領(lǐng)域中所熟知般使脾臟B細(xì)胞與永生骨髓瘤細(xì)胞融合。參見(jiàn)例如前述Harlow且Lane。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,骨髓瘤細(xì)胞并不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌細(xì)胞系)。融合和抗生素選擇后,使用IL-13或其部分或表達(dá)IL-13的細(xì)胞篩選雜交瘤。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,使用酶聯(lián)免疫測(cè)定(ELISA)或放射免疫測(cè)定(RIA),優(yōu)選ELISA進(jìn)行初始篩選。ELISA篩選的實(shí)例提供于WO00/37504中,其以引用的方式并入本文中。如下文所進(jìn)一步探討,選擇、克隆抗IL-13抗體產(chǎn)生雜交瘤且進(jìn)一步篩選其合意特性,包括穩(wěn)固雜交瘤生長(zhǎng)、高抗體產(chǎn)生和合意抗體特性。雜交瘤可于同基因型動(dòng)物中、于缺乏免疫系統(tǒng)的例如棵鼠動(dòng)物中體內(nèi)培養(yǎng)且擴(kuò)增或于細(xì)胞培養(yǎng)物中體外培養(yǎng)且擴(kuò)增。選擇、克隆且擴(kuò)增雜交瘤的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,雜交瘤為如上所述的小鼠雜交瘤。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,于例如大鼠、羊、豬、山羊、?;蝰R的非人類(lèi)、非小鼠物種中產(chǎn)生雜交瘤。在另一個(gè)實(shí)施方案中,雜交瘤為人類(lèi)雜交瘤,其中人類(lèi)非分泌骨髓瘤與表達(dá)抗IL-13抗體的人類(lèi)細(xì)胞融合??赏ㄟ^(guò)已知技術(shù)產(chǎn)生識(shí)別特異性表位的抗體片段。例如,本發(fā)明的Fab和F(ab')2片段可使用例如木瓜蛋白酶(以產(chǎn)生Fab片段)或胃蛋白酶(以產(chǎn)生F(ab')2片段)的酶通過(guò)免疫球蛋白分子的蛋白水解裂解產(chǎn)生。F(ab')2片段含有可變域、輕鏈恒定區(qū)和重鏈的CHI域。2.使用SLAM的抗IL-13單克隆抗體在本發(fā)明的另一個(gè)方面中,如美國(guó)專(zhuān)利第5,627,052號(hào)、PCT公開(kāi)WO92/02551和Babcock,J.S.等人,(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-7848中所述,自單一、分離的淋巴細(xì)胞使用在本領(lǐng)域中稱(chēng)作選才奪的淋巴細(xì)胞抗體方法(SLAM)的程序產(chǎn)生重組抗體。在此方法中,使用抗原特異性溶血斑塊測(cè)定篩選分泌所關(guān)注的抗體的單一細(xì)胞,例如源自第一部分所描述的任一免疫動(dòng)物的淋巴細(xì)胞,其中使用例如生物素的接頭將所述抗原IL-13、IL-13的子單元或其片段與綿羊紅細(xì)胞偶聯(lián)且其用以鑒定分泌對(duì)于IL-13具有特異性的抗體的單一細(xì)胞。鑒定所關(guān)注的抗體分泌細(xì)胞后,通過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶PCR自細(xì)胞救援重鏈和輕鏈可變域cDNA,且這些可變域可隨后表達(dá)于例如COS或CHO細(xì)胞的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞的適當(dāng)免疫球蛋白恒定區(qū)(例如人類(lèi)恒定區(qū))環(huán)境中??呻S后通過(guò)(例如)淘洗轉(zhuǎn)染的細(xì)胞以分離表達(dá)IL-13的抗體的細(xì)胞,來(lái)進(jìn)一步體外分析且選擇源自體內(nèi)選擇的淋巴細(xì)胞、經(jīng)擴(kuò)增的免疫球蛋白序列轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。擴(kuò)增的免疫球蛋白序列可進(jìn)一步通過(guò)例如那些描述于PCT公開(kāi)WO97/29131和PCT公開(kāi)WO00/56772中的例如體外親和力成熟方法體外操作。3.使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的抗IL-13單克隆抗體在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,通過(guò)用IL-13抗原使包含某些或所有人免疫球蛋白基因座的非人類(lèi)動(dòng)物免疫產(chǎn)生抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,所述非人類(lèi)動(dòng)物為XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠,包含較大人免疫球蛋白基因座片段且小鼠抗體產(chǎn)生不足的工程化小鼠品系。參見(jiàn)例如Green等人,NatureGenetics7:13-21(1994)和美國(guó)專(zhuān)利5,916,771、5,939,598、5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598和6,130,364。也參見(jiàn)1991年7月25日公開(kāi)的WO91/10741、1994年2月3日公開(kāi)的WO94/02602、1996年10月31日公開(kāi)的WO96/34096和WO96/33735、1998年4月23日公開(kāi)的WO98/16654、1998年6月11日公開(kāi)的WO98/24893、1998年11月12日公開(kāi)的WO98/50433、1999年9月10日公開(kāi)的WO99/45031、1999年10月21日公開(kāi)的WO99/53049、2000年2月24日公開(kāi)的WO00/09560和2000年6月29日公開(kāi)的WO00/037504。XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生類(lèi)似成人的全部人類(lèi)抗體人類(lèi)譜且產(chǎn)生抗原特異性人類(lèi)Mab。XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)由引入人類(lèi)重鏈基因座和x輕鏈基因座的大分子量、種系構(gòu)型YAC片段含有約80%的人類(lèi)抗體譜。參見(jiàn)Mendez等人,NatureGenetics15:146-156(1997);Green和JakobovitsJ.Exp.Med.188:483-495(1998),據(jù)此將其公開(kāi)內(nèi)容以引用的方式并入。4.使用重組抗體庫(kù)的抗IL-13單克隆抗體體外方法也可用于制備本發(fā)明的抗體,其中抗體庫(kù)經(jīng)篩選以鑒定具有所需結(jié)合特異性的抗體。所述篩選重組抗體庫(kù)的方法為在本領(lǐng)域中所熟知且包括描述于以下各專(zhuān)利和參考文獻(xiàn)中的方法例如Ladner等人美國(guó)專(zhuān)利第5,223,409號(hào);Kang等人PCT公開(kāi)第WO92/18619號(hào);Dower等人PCT公開(kāi)第WO91/17271號(hào);Winter等人PCT公開(kāi)第WO92/20791號(hào);Markland等人PCT公開(kāi)第WO92/15679號(hào);Breitling等人PCT公開(kāi)第WO93/01288號(hào);McCafferty等人PCT公開(kāi)第WO92/01047號(hào);Garrard等人PCT公開(kāi)第WO92/09690號(hào);Fuchs等人(1991)Bio/Technology9:1370-1372;Hay等人(1992)HumAntibodHybridomas793:81-85;Huse等人(1989)Science246:1275-1281;McCafferty等人,Nature(1990)348:552-554;Griffiths等人(1993)EMBOJ12:725-734;Hawkins等人(1992)JMolBiol226:889-896;Clackson等人(1991)Nature352:624-628;Gram等人(1992)PNAS89:3576-3580;Garrad等人(1991)Bio/Technology9:1373-1377;Hoogenboom等人(1991)NucAcidRes19:4133-4137;和Barbas等人(1991)PNAS88:7978-7982;美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)20030186374和PCT公開(kāi)第WO97/29131號(hào),將各自的內(nèi)容以引用的方式并入本文中。重組抗體庫(kù)可來(lái)自用IL-13或IL-13或IL-13或IL-13的一部分免疫的個(gè)體?;蛘撸亟M抗體庫(kù)可來(lái)自未實(shí)驗(yàn)過(guò)的個(gè)體,也即并未經(jīng)IL-13免疫的個(gè)體,例如來(lái)自并未經(jīng)人類(lèi)IL-13免疫的人類(lèi)個(gè)體的人類(lèi)抗體庫(kù)。通過(guò)以包含人類(lèi)IL-13的肽篩選重組抗體庫(kù)以由此選擇那些識(shí)別IL-13的抗體來(lái)選才奪本發(fā)明的抗體。進(jìn)行所述篩選和選擇的方法為在本領(lǐng)域中所熟知,例如描述于前段的參考文獻(xiàn)中。為選擇本發(fā)明的對(duì)hIL-13具有特定結(jié)合親和力的抗體,例如那些以特定k。ff速率常數(shù)與人類(lèi)IL-13解離者,本領(lǐng)域中已知的表面等離子體共振法可用于選擇具有所需k。ff速率常數(shù)的抗體。為選擇本發(fā)明的對(duì)hIL-13具有特定中和活性的抗體,例如具有特定ICso的那些,可使用在本領(lǐng)域中是已知的評(píng)估hIL-13活性抑制的標(biāo)準(zhǔn)方法。在一個(gè)方面中,本發(fā)明涉及結(jié)合人類(lèi)IL-13的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分。抗體優(yōu)選是中和抗體。在各種實(shí)施方案中,抗體為重組抗體或單克隆抗體。例如,本發(fā)明的抗體也可使用在本領(lǐng)域中是已知的各種噬菌體呈現(xiàn)方法產(chǎn)生。在噬菌體呈現(xiàn)方法中,功能抗體域呈現(xiàn)在噬菌體顆粒的表面上,其攜帶編碼其的多核普酸序列。詳言之,可利用所述噬菌體以呈現(xiàn)從譜或組合抗體文庫(kù)(例如人類(lèi)或鼠類(lèi))表達(dá)的抗原結(jié)合域。可使用抗原選擇或識(shí)別表達(dá)結(jié)合所關(guān)注的抗原的抗原結(jié)合域的噬菌體,例如使用標(biāo)記抗原或結(jié)合或捕捉于固體表面或珠粒上的抗原。用于這些方法的噬菌體為典型絲狀噬菌體,其包括自具有Fab、Fv或二硫化物穩(wěn)定的Fv抗體域的噬菌體表達(dá)的fd和M13結(jié)合域,所述Fv抗體域重組融合至噬菌體基因III或基因VIII蛋白。可用于制備本發(fā)明的抗體的噬菌體呈現(xiàn)方法的實(shí)例包括那些公開(kāi)于以下專(zhuān)利和參考文獻(xiàn)者中Brinkman等人,J.Immunol.Methods182:41-50(1995);Ames等人,J.Immunol.Methods184:177-186(1995);Kettleborough等人,Eur.J.Immunol.24:952-958(1994);Persic等人,Gene1879-18(1997);Burton等人,AdvancesinImmunology57:191-280(1994);PCT申請(qǐng)案第PCT/GB91/01134號(hào);PCT公開(kāi)WO90/02809;WO91/10737;WO92/01047;WO92/18619;WO93/11236;WO95/15982;WO95/20401;和美國(guó)專(zhuān)利第5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743、和5,969,108號(hào);各自以引用的方式全部并入本文中。如以上參考文獻(xiàn)中所述,噬菌體選擇后,噬菌體的抗體編碼區(qū)可經(jīng)分離且用以產(chǎn)生包括人類(lèi)抗體或任何其它所需抗原結(jié)合片段且表達(dá)于任何所需宿主中的全抗體,所述宿主包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、植物細(xì)胞、酵母和細(xì)菌,例如如下文中所詳述。例如,也可使用在本領(lǐng)域中是已知的方法采用重組產(chǎn)生Fab、Fab'和F(ab')2片段的技術(shù),這樣的方法例如公開(kāi)于PCT公開(kāi)WO92/22324;Mullinax等人,BioTechniques12(6):864-869(1992);和Sawai等人,AJRI34:26-34(1995)和Better等人,Science240:1041-1043(1988)(這樣的參考文獻(xiàn)以引用的方式全部并入)中的那些。可用于產(chǎn)生單鏈Fv和抗體的技術(shù)的實(shí)例包括描述于美國(guó)專(zhuān)利4,946,778和5,258,49;Huston等人,MethodsinEnzymology203:46-88(1991);Shu等人,PNAS90:7995-7999(1993);和Skerraet等人,Science240:1038-1040(1988)中的那些。替代通過(guò)p盆菌體呈現(xiàn)篩選重組抗體庫(kù),可應(yīng)用在本領(lǐng)域中是已知的用于篩選較大組合庫(kù)的其它方法論以鑒定本發(fā)明的雙重特異性抗體。一類(lèi)型的替代表達(dá)系統(tǒng)為如Szostak和Roberts的PCT公開(kāi)第WO98/31700號(hào)和Roberts,R.W.和Szostak,J.W.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:12297-12302中所述其中重組抗體庫(kù)表達(dá)成RNA-蛋白融合體。在此系統(tǒng)中,mRNA與肽或蛋白之間產(chǎn)生共價(jià)融合,其通過(guò)體外翻譯在3'端具有嘌呤霉素,一種肽基受體抗生素的合成mRNA編碼。因此,特異mRNA可基于所編碼肽或蛋白(例如抗體或其部分)的特性自mRNA(例如組合庫(kù))復(fù)雜混合物富集,例如將抗體或其部分結(jié)合至雙重特異性抗原??赏ㄟ^(guò)如上所述的重組方法表達(dá)自篩選這樣的庫(kù)中重新獲得的編碼抗體或其部分的核酸序列(例如在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中),且此外如上所述其可通過(guò)其它輪的mRNA肽融合篩選(其中突變已引入最初選擇的序列中),或通過(guò)其它用于重組抗體的體外親和力成熟法的方經(jīng)受進(jìn)一步親和力成熟。在另一方法中,本發(fā)明抗體也可使用在本領(lǐng)域中是已知的酵母呈現(xiàn)方法產(chǎn)生。在酵母呈現(xiàn)方法中,遺傳法用以將抗體域限定至酵母細(xì)胞壁,且將其呈現(xiàn)在酵母的表面上。尤其可利用所述酵母呈現(xiàn)從譜或組合抗體文庫(kù)(例如人類(lèi)或鼠類(lèi))表達(dá)的抗原結(jié)合域??捎糜谥苽浔景l(fā)明的抗體的酵母呈現(xiàn)方法的實(shí)例包括那些公開(kāi)于Wittrup等人美國(guó)專(zhuān)利第6,699,658號(hào)中的,將其以引用的方式并入本文中。B.產(chǎn)生重組IL-13抗體本發(fā)明的抗體可通過(guò)在本領(lǐng)域中是已知的大量技術(shù)中的任一個(gè)產(chǎn)生。例如,自宿主細(xì)胞表達(dá),其中編碼重鏈和輕鏈的表達(dá)載體經(jīng)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)轉(zhuǎn)染于宿主細(xì)胞中。各種形式的術(shù)語(yǔ)"轉(zhuǎn)染"意欲包括廣泛各種通常用于引入外源性DNA于原核或真核宿主細(xì)胞中的技術(shù),例如電穿孔、磷酸4丐沉淀、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染等。盡管可能在原核或真核宿主細(xì)胞中表達(dá)本發(fā)明的抗體,但優(yōu)選的在真核細(xì)胞中表達(dá)抗體,且最優(yōu)選在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中表達(dá),由于所述真核細(xì)胞(且尤其哺乳動(dòng)物細(xì)胞)比原核細(xì)胞更可能組裝且分泌適當(dāng)折疊且具有免疫活性的抗體。用于表達(dá)本發(fā)明的重組抗體的優(yōu)選的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO細(xì)胞)(包括dhfr-CHO細(xì)胞,描述于Urlaub且Chasin,(1980)Proc.Natl.Acad.Sd.USA77:4216-4220中的,(例如)如R丄Kaufman和P.A.Sharp(1982)Mol.Biol.159:601-621中所述其與DHFR可選擇標(biāo)記一起使用)、NSO骨髓瘤細(xì)胞、COS細(xì)胞和SP2細(xì)胞。當(dāng)將編碼抗體基因的重組表達(dá)載體引入哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中時(shí),通過(guò)培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞歷時(shí)一段足以允許抗體在宿主細(xì)胞中表達(dá),或更優(yōu)選抗體于宿主細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中分泌的時(shí)間產(chǎn)生抗體??贵w可使用標(biāo)準(zhǔn)蛋白純化法從培養(yǎng)基中重新獲得。宿主細(xì)胞也可用以產(chǎn)生功能抗體片段,例如Fab片段或scFv分子。應(yīng)了解上述程序的變化在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如,可能需以編碼本發(fā)82明抗體的輕鏈和/或重鏈的功能片段的DNA轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。DNA重組技術(shù)也可用以除去編碼結(jié)合所關(guān)注的抗原所不必需的輕和重鏈的任一個(gè)或兩者的某些或全部DNA。本發(fā)明的抗體也包括自這樣的截?cái)郉NA第二抗體產(chǎn)生二功能抗;,其中一個(gè)重鏈和」個(gè)輕鏈為本發(fā)明的抗體,和另一重鏈和輕鏈對(duì)除所關(guān)注的抗原以外的抗原具有特異性。在用于重組表達(dá)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分的優(yōu)選的系統(tǒng)中,通過(guò)磷酸鉀介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染將編碼抗體重鏈和抗體輕鏈的重組表達(dá)載體引入dhfr-CHO細(xì)胞中。在重組表達(dá)載體中,抗體重鏈和輕鏈基因各與CMV增強(qiáng)子/AdMLP啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件可操縱地連接以驅(qū)動(dòng)高水平基因轉(zhuǎn)錄。重組表達(dá)載體也具有DHFR基因,其使用曱氨蝶呤選擇/擴(kuò)增允許已經(jīng)載體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞的選擇。培養(yǎng)所選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞以允許抗體重鏈和輕鏈的表達(dá),且從培養(yǎng)基中重新獲得完整抗體。標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)用以制備重組表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞,選擇轉(zhuǎn)化克隆,培養(yǎng)宿主細(xì)胞且從培養(yǎng)基回收抗體。另外本發(fā)明提供一種通過(guò)在適當(dāng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細(xì)胞直至本發(fā)明的重組抗體合成,來(lái)合成本發(fā)明的重組抗體的方法。所述方法可還包括從培養(yǎng)基分離重組抗體。1.抗IL-13抗體表5為本發(fā)明的優(yōu)選的抗hIL-13抗體的VH和VL區(qū)域的氨基酸序列的列表。表5:VH和VL區(qū)域的氨基酸序列的列表SE(JIDNo.蛋白區(qū)域序列12345678901234567890123456789032VH25C8-QVQLQQPGAELVRPGASVQLSCKASGYTFTSAVYYCAS-TATDTOYWGQGTTLTVSSVH25C8CDR-HlSEQIDNO.:32的殘基31-35SSWIH■VH25C8CDR-H2SEQIDNO.:32的殘基50-66.M'IHPSDSETRLNQKFKDVH25C8CDR-H3SEQIDNO.:32的殘基99-105;;m戰(zhàn)頓a"!is!i汰;.畫(huà)」.u*'■'■畫(huà)33VL25C8DWLTQTPLSLiPVNIGDQASISCKSTKSHNSDCTTYU)WYLQKPGQSPQLIiIYLVSNRFSGAPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDIiGVYYCFQHNYLPI/TFGAGTNLE1jKRVL25C8CDR-L1SEQIDNO.:33的殘基24-39KSTKSLLNSDGFTYLDVL25C8CDR-L2SEQIDNO.:33的殘基55-61LVSNRFSVL25C8CDR-L3SEQIDNO.:33的殘基94-102FOHNYLPX/T34VH9C11頓蹄,G郷VRPGASVKLSCKASGYTFT■SSWIHWVNQRPGQGLEWIGMIHPSDSETRLWiil^^KATLTVDKSSSTAYMQLSSPTS'EDSAVYYCAS叫TDTOYWGGGTTLTVSSVH9C11CDR-HlSEQIDNO.:34的殘基31-35VH9C11CDR-H2SEQIDNO.:34的殘基50-66MIHPSDSETRL恥KFKD84SEQIDNo.蛋白區(qū)域序列123456789012345678901234567890VH9C11CDR-H3SE(JIDNO.:34的殘基99-105TATDFDY35VL9C11DWLTQTPLSLPVNIGDQASISCRSTQTHNSDGFTYIiDWYLQKPGQSPQLLIYLVS鵬FSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQNNYLPI/TFGAGTKLELKRVL9C11CDR-L1SEQIDNO.:35的殘基24-39RSTQTLLNSDGFTYLDVL9C11CDR-L2SE(JIDNO.:35的殘基55-61IiVSNRFSVL9C11CDR-L3SEQIDNO.:35的殘基94-102FQNNYI/PI/T36VH21D9QVQL卿GDDLVKPGASVKLSCKASGYTFTNEMFKDKAKLTVDTSSNTAYI卜:LSSLSSEDS'AVYFCft^GSfTFFYAMDyWGQGTSVTVSSVH21D9CDR-H1SEQIDNO.:36的殘基31-35SYWINVH21D9CDR-H2SEQIDNO.:36的殘基50-66加械翁扭;^DNENFKDVH21D9CDR-H3SEQIDNO.:36的殘基99-10937VL21D9DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQNIVHS恥KTYLEWYLQRPGQSPKLLIYKVSNRPSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIKRVL21D9CDR-L1SEQIDNO.:37的殘基24-39RSSQNIVHSNGKTYUSVL21D9CDR-L2SEQIDNO.:37的殘基55-61KVSNRFSVL21D9CDR-L3SEQIDNO.:37的殘基94-102FQGSHVPYT85<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage87</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table>No.蛋白區(qū)域序列12345678901234567890123456789048VH29G5QVTLKESGPGILQPSQTLSE'SCSFSGFSLSTSDI!GVDWIRQPSGKDLEWLAHTWyrt)DVKRYNP^I^SRLTISKDTSSSQV'FLMLASVDTADTATY^CARIVSSGYIYYALDYWGQGTSVT,::vss.'VH29G5CDR-H1SEQIDNO.:48的殘基31-37TSDlGVDVH29G5CDR-H2SEQIDNO.:48的殘基52-67鵬WWDDVXRYNPALKSVH29G5CDR-H3SEqiDNO.:48的殘基100-112IVSSGYIYYALDY49VL29G5DIQMTQTASSLSASIjGDRVTISCRASQDIRNYIiNWYQRKPDGTVKLIilYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSIjTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPLTFGGGTKLEIKRVL29G5CDR-L1SEQIDNO.:49的殘基24-34RASQDIRNYLNVL29G5CDR-L2SE(3IDNO.:49的殘基50-56YTSRLHSVL29G5CDR-USEQIDNO.:49的殘基89-97QQGNTLPIiT50VH33C3W,ESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSDi;dVGWIRQPSGKG]LEWLA^IWWDDVKRYNPA^KSRLTISKDTSSSQVFLMIASVDTAD'TAI^CARIGSSGYIYYEMDYWGQGTSVTVH33C3CDR-H1SEQIDNO.:50的殘基31-37TSDL6VGVH33C3CDR-H2SEQIDNO.:50的殘基52-67HIWWDDVKRYNPALKSVH33C3CDR-H3SEQIDNO.:50的殘基100-112IGSSGYIYYEMDY90SEQIDNo.蛋白區(qū)域序列12345678901234567890123456789051VL33C3DIQMTQTTSSLSASLGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKIjIjIYTrrSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSI/TISNLDQEDIATYFCQQGNTIiPLTFGGGTRLEIKRVL33C3CDR-LlSEQIDNO.:51的殘基24-34RASQDIRNYLNVL33C3CDR-L2SEQIDNO.:51的殘基60-66YTSRLHSVL33C3CDR-L3SEQIDNO.:51的殘基89-97QQGNTIiPLT52VH4A8EVQ,SGAEFVRPGALVKLSCKASGFNIKD^f^fcAfKQRPEQGLEWIGRIDPEiJGNTrirSPKEQ^KASITGDTSSNTAYLQLSSIjTSEDTAV^6^RTTATnfGPFDYWGQGTTLTVSSVH4A8CDR-HlSEQIDNO.:52的殘基31-35VH4A8CDR-H2SEQIDNO.:52的殘基50-66VH4A8CDR-H3SEQIDNO.:52的殘基99-10753VL4A8QAWTQESALTTSPGETVTIiTCRSSIGTVTTNNYANWVQEKPDHIjFTGIjIGSTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVLGVL4A8CDR-LlSEQIDNO.:53的殘基23-36RSSIGTVTTNNYANVL4A8CDR-L2SEQIDNO.:53的殘基52-58STNNRAPVL4A8CDR-L3SEQIDNO.:53的殘基91-99ALWYSNHWV91<table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table>200780033285.7<table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table>上述分離的抗IL-13抗體CDR序列確立根據(jù)本發(fā)明分離且包含包括于下表6中所列的CDR序列的多肽的IL-13結(jié)合蛋白的新穎家族。為產(chǎn)生且選擇本發(fā)明的關(guān)于hIL-13和或hIL-13具有優(yōu)選的IL-13結(jié)合和/或中和活性的CDR,可使用在本領(lǐng)域中是已知的用于產(chǎn)生本發(fā)明結(jié)合蛋白且評(píng)估那些結(jié)合蛋白的IL-13和或IL-13結(jié)合和/或中和特征的標(biāo)準(zhǔn)方法,包括但不限于那些特定描述于本文中的。<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table>嵌合抗體為其中抗體的不同部分源自于不同動(dòng)物物種的分子,例如具有源自鼠類(lèi)單克隆抗體的可變域和人免疫球蛋白恒定區(qū)的抗體。在本領(lǐng)域中是已知的用于產(chǎn)生嵌合抗體的方法且詳細(xì)地探討于實(shí)例2.1.中。參見(jiàn)例如,Morrison,Science229:1202(1985);Oi等人,BioTechmques4:214(1986);Gillies等人,(1989)J.Immunol.Methods125:191-202;美國(guó)專(zhuān)利第5,807,715、4,816,567和4,816,397號(hào),其以引用的方式全部并入本文中。另外,可使用通過(guò)將來(lái)自適當(dāng)抗原特異性的小鼠抗體分子的基因與來(lái)自適當(dāng)生物學(xué)活性的人類(lèi)抗體分子的基因剪接在一起,經(jīng)發(fā)展用于產(chǎn)生"嵌合抗體,,的技術(shù)(Morrison等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.81:851-855;Neuberger等人,1984,Nature312:604-608;Takeda等人,1985,Nature314:452-454,其以引用的方式全部并入本文中)。在一個(gè)實(shí)施方案中,通過(guò)以人類(lèi)IgGl恒定區(qū)替換第一部分所描述的鼠類(lèi)單克隆抗人類(lèi)IL-13抗體的重鏈恒定區(qū)來(lái)產(chǎn)生本發(fā)明的嵌合抗體。在一特定實(shí)施方案中,本發(fā)明的嵌合抗體包含重鏈可變域(VH),其包含SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:46的氨基酸序列;和輕鏈可變域(VO,其包含SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:40、SEQIDNO:43或SEQIDNO:47的氨基酸序列。3.抗IL-13人源化抗體人源化抗體為來(lái)自結(jié)合所需抗原的非人類(lèi)物種抗體的抗體分子,其具有來(lái)自非人類(lèi)物種的一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和來(lái)自人免疫球蛋白分子的框架區(qū)域。已知人類(lèi)Ig序列公開(kāi)在例如www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi;www.atcc.org/phage/hdb.html;www.sciquest.com/;www.abcam.com/;www'antibodyresource.com/onlinecomp.html;www.public.iastate.edu/.about.pedro/research—toois.html;www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT'html;www.whfreeman.com/immunology/CH-05/kuby05.htm;www,library.thinkquest,org/12429/Immune/Antibody,html;www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/;www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m-ikeimages.html;www.antibodyresource.com/;mcb.harvard.edu/BioLinks/Immuno-97logy.html.www.immunologylink.com/;pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.-html;www.biotech.ufl.edu/.about.hc!/;www.pebio.com/pa/340913/340913.html-',www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/;www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html;www.biodesign.com/table.asp;www.icnet.uk/axp/facs/davies/lin-ks.html;www.biotech.ufl.eduy.gbout.fccl/protocoI.html;www.isac-net.org/sites_geo.html;aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP-Start.html;baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html;www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/;www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/pu-blic/INTRO.html;www.ibt.unam.mx/vir/V—mice.html;imgt.cnusc.fr:8104/;www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html;andbody.bath.ac.uk/;abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html;www.unizh.ch/.about.honegger/AHOsem-inar/Slide01.html;www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/;www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm;www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/h-umanisation/TAHHP.html;www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html;www.biosci.missouri,edu/smithgp/index.html;www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.abo-ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html;www.jerini.de/frroducts.htm;www.patents.ibm.com/ibm.html.Kabat等人,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.Dept.Health(1983),各自以引用的方式全部并入本文中。如在本領(lǐng)域中是已知的,這樣的引入序列可用于降低免疫原性或降低、增強(qiáng)或改進(jìn)結(jié)合、親和性(affinity)、結(jié)合速率、分解速率、親和力(avidity)、特異性、半衰期或任何其它適當(dāng)特性。人類(lèi)框架區(qū)域中的框架殘基可經(jīng)CDR施體抗體的對(duì)應(yīng)殘基取代以改變、優(yōu)選的改善抗原結(jié)合。通過(guò)在本領(lǐng)域中所熟知的方法,例如通過(guò)將CDR與框架殘基的相互作用建立模型以鑒定對(duì)于抗原結(jié)合和序列比較而言重要的框架殘基,以鑒定特定位置的特殊框架殘基,來(lái)鑒定這些框架取代。(參見(jiàn)例如Queen等人,美國(guó)專(zhuān)利第5,585,089號(hào);Riechmann等人,Nature332:323(1988),將其以引用的方式全部并入本文中)三維免疫球蛋白模型通??色@得且為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知??色@得說(shuō)明且顯示所選候選免疫球蛋白序列的可能三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)的計(jì)算機(jī)程序。這樣的顯示的檢視允許分析殘基對(duì)候選免疫球蛋白序列的功能的可能作用,也即分析影響候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基。以此方式,F(xiàn)R殘基可自共有區(qū)選擇且組合且引入序列以便獲得所需抗體特征,例如對(duì)耙標(biāo)抗原的增加的親和力。一般而言,CDR殘基直接且極基本上與影響抗原結(jié)合有關(guān)。可使用在本領(lǐng)域中是已知的各種技術(shù)將抗體人源化,例如但不限于那些描述于以下參考文獻(xiàn)和專(zhuān)利中的Jones等人,Nature321:522(1986);Verhoeyen等人,Science239:1534(1988);Sims等人,J.Immunol.151:2296(1993);Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901(1987);Carter等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:4285(1992);Presta等人,J.Immunol.151:2623(1993);Padlan,MolecularImmunology28(4/5):489-498(1991);Studnicka等人,ProteinEngineering7(6):805-814(1994);Roguska.等人,PNAS91:969-973(1994);PCT公開(kāi)WO91/09967;PCT/:US98/16280、US96/18978、US91/09630、US91/05939、US94/01234、GB89/01334、GB91/01134、GB92/01755;WO90/14443、WO簡(jiǎn)4424、WO90/14430、EP229246、EP592,106;EP519,596、EP239,400、美國(guó)專(zhuān)利第5,565,332、5,723,323、5,976,862、5,824,514、5,817,483、5,814,476、5,763,192、5,723,323、5,766,886、5,714,352、6,204,023、6,180,370、5,693,762、5,530,101、5,585,089、5,225,539、4,816,567號(hào),各自以引用的方式全部并入本文中,包括其所引用的參考文獻(xiàn)。C.產(chǎn)生抗體和產(chǎn)生抗體的細(xì)胞系本發(fā)明的抗IL-13抗體優(yōu)選的顯示高降低或中和IL-13活性的能力,例如如在本領(lǐng)域中是已知的數(shù)種體外和體內(nèi)測(cè)定的任一個(gè)所評(píng)估(例如參見(jiàn)實(shí)施例1丄C)。例如,這些抗體以在至少約10-8M、約1(T9M或約1(T"M范圍內(nèi)的IC5o值中和通過(guò)A-549細(xì)胞的IL-13誘導(dǎo)的TARC產(chǎn)生。在優(yōu)選的實(shí)施方案中,分離的抗體或其抗原結(jié)合部分結(jié)合人類(lèi)IL-13,其中如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定,所述抗體或其抗原結(jié)合部分以約0.1s"或更小的k。ff速率常數(shù)與人類(lèi)IL-13解離,或其以約lxl0《M或更小的IC5o值抑制人類(lèi)IL-13和/或人類(lèi)IL-13活性。或者,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定所述抗體或其抗原結(jié)合部分可以約1x10-2s"或更小的k。ff速率常數(shù)與人類(lèi)IL-13解離,或其可以約lxl(T7M或更小的IC5o值抑制人類(lèi)IL-13和/或人類(lèi)IL-13活性?;蛘?,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定抗體或其抗原結(jié)合部分可以約lxl(T3s"或更小的k。ff速率常數(shù)與人類(lèi)IL-13解離,或其可以約1x10-8M或更小的IC5099值抑制人類(lèi)IL-13和/或人類(lèi)IL-13。或者,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定抗體或其抗原結(jié)合部分可以約lxlO、"或更小的k。ff速率常數(shù)與人類(lèi)IL-13解離,或其可以約lxl(T9M或更小的ICso值抑制IL-13和/或人類(lèi)IL-13活性?;蛘撸缤ㄟ^(guò)表面等離子體共振所測(cè)定抗體或其抗原結(jié)合部分可以約lxl(T、"或更小的k。ff速率常數(shù)與人類(lèi)IL-13解離,或其可以約lxlO"^M或更小的IC5o值抑制IL-13和/或人類(lèi)IL-13活性。或者,如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定抗體或其抗原結(jié)合部分可以約lxl(T5s"或更小的k。ff速率常數(shù)與人類(lèi)IL-13解離,或其可以約lxl(T11M或更小的ICso值抑制IL-13和/或人類(lèi)IL-13活性。IL-13通過(guò)與細(xì)胞表面上的IL-13受體(IL-13R),包含IL-13Ral鏈(IL-13Ral)和IL-4R鏈(IL-4R)的異源二聚體結(jié)合行使其作用。IL-13首先以低親和力(Kr^2-10nM)與IL-13Ral結(jié)合,且隨后招募IL-4R至復(fù)合體,產(chǎn)生高親和力受體(Ki^0.03-0.4nM)(Aman,M.J.,等人,1996J.Biol.Chem.271,29265-29270;Miloux等人,1997FEBSLett.401,163-166;Andrews等人2002J.Biol.Chem.277,46073-46078)。IL-13R的異二聚合導(dǎo)致分別與IL-13Ral和IL-4R組成型相關(guān)的Janus激酶TYK2和JAK1活化,接著導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白和轉(zhuǎn)錄6(STAT6)的活化因子活化(Izuhara,K.和Arima,K.2004DrugNewsPerspect.17,91-98)。存在另一IL-13結(jié)合單元IL-13Ra2鏈(IL-13Ra2),其以高親和力(0.25-1.2nM)與IL-13結(jié)合(Caput,等人1996J.Biol.Chem.271,16921-16926;Donaldson等人1998J.Immunol.161,2317-2324)。已知無(wú)其它受體分子涉及于IL-13.TL-13R2復(fù)合體中。最初認(rèn)為IL-13R2充當(dāng)非信號(hào)傳導(dǎo)"誘何"受體。然而,后來(lái)發(fā)現(xiàn)其可與IL-13結(jié)合且經(jīng)由AP-1途徑傳輸信號(hào),使得在某些包括巨噬細(xì)胞的細(xì)胞類(lèi)型中TNF-卩產(chǎn)生,其接著導(dǎo)致肺部纖維化(Fichtner-Feigl,2006NatMed12:99-106)。因此,IL-13Ral/IL-4Ra與IL-13Ra2途徑造成哞喘和其它肺炎癥病癥的總病理生理學(xué)。因此,阻斷IL-13與兩種受體結(jié)合的治療性抗IL-13抗體將比那些僅阻斷一種受體者更有效。已分離阻斷IL-13與IL-13Ral和IL-13Ra2結(jié)合的單克隆抗體。細(xì)胞表面上基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定與125-1-標(biāo)記的IL-13結(jié)合測(cè)定均證明鼠類(lèi)形式與人源化形式(也即13C5.5)的13C5均能夠有效阻斷IL-13與兩種受體的結(jié)合。與13C5相同譜系中的包括25C8和33C3的抗體也能夠阻斷IL-13與兩種受體結(jié)合。13C5的表位作圖指示其結(jié)合位點(diǎn)包括人類(lèi)IL-13的C末端螺旋D區(qū)(殘基VRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGR,對(duì)應(yīng)于SEQIDNO1的氨基酸104-130)。已提出c末端螺旋D區(qū)涉及于與IL-13受體的相互作用中(Zuegg等人2001ImmunolCellBiol.79:332-9)。與13C5.5抗體的Fab部分復(fù)合的人類(lèi)IL-13的晶體結(jié)構(gòu)指示13C5.5結(jié)合人類(lèi)-13的C末端螺旋D區(qū)以及N末端螺旋A區(qū)。優(yōu)選地,所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Ser26國(guó)Thr27畫(huà)Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34畫(huà)Glu35-Leu36-Val37-Asn38和Lysl23-Lysl24-Leul25-Phel26-Argl27-Glul28-Glyl29國(guó)Arg130界定的表位結(jié)合。優(yōu)選地,所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13a2受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Arg30-Glu31-Leu32曙Ile33-Glu34-Glu35畫(huà)Leu36-Val37-Asn38和Lysl23-Lysl24-Leul25-Phel26-Argl27界定的表位結(jié)合。在某些實(shí)施方案中,抗體包含重鏈恒定區(qū),例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)優(yōu)選為IgGl重鏈恒定區(qū)或IgG4重鏈恒定區(qū)。此外,抗體可包含輕鏈恒定區(qū),k輕鏈恒定區(qū)或、輕鏈恒定區(qū)。抗體優(yōu)選的包含k輕鏈恒定區(qū)?;蛘撸贵w部分可為例如Fab片段或單鏈Fv片段。在本領(lǐng)域中是已知的替換Fc部分的氨基酸殘基至改變抗體效應(yīng)子功能(Winter,等人,US專(zhuān)利第5,648,260;5,624,821號(hào))。抗體的Fc部分介導(dǎo)數(shù)種重要效應(yīng)子功能,例如細(xì)胞因子誘導(dǎo)、ADCC、吞噬作用、補(bǔ)體依賴(lài)型細(xì)胞毒性(CDC)和抗體和抗原抗體復(fù)合物的半衰期/清除率。視治療目的而定,在某些情況下,這些效應(yīng)子功能對(duì)于治療抗體而言為合意的,但在其它情況下其可為不必要的或甚至有害的。某些人類(lèi)IgG同種型,尤其IgGl和IgG3經(jīng)由分別與FcyR和補(bǔ)體Clq結(jié)合介導(dǎo)ADCC和CDC。新生Fc受體(FcRn)為決定抗體的循環(huán)半衰期的關(guān)鍵元件。在另一個(gè)實(shí)施方案中,抗體的恒定區(qū)(例如抗體的Fc區(qū)域)中的至少一氨基酸殘基經(jīng)替換,使得抗體的效應(yīng)子功能改變。101一個(gè)實(shí)施方案提供了標(biāo)記的結(jié)合蛋白,其中本發(fā)明的抗體或抗體部分經(jīng)衍生或與另一官能分子(例如另一肽或蛋白)連接。例如,本發(fā)明的標(biāo)記的結(jié)合蛋白可通過(guò)官能性地連接本發(fā)明的抗體或抗體部分(通過(guò)化學(xué)偶聯(lián)、遺傳融合、非共價(jià)締合或以別的方式)與一種或多種其它分子實(shí)體而衍生,這樣的其它分子實(shí)體例如另一抗體(例如雙特異性抗體或雙功能抗體)、可檢測(cè)試劑、細(xì)胞毒性劑、藥劑和/或可介導(dǎo)抗體或抗體部分與另一分子(例如鏈霉抗生物素蛋白核心區(qū)域或聚組氨酸標(biāo)記)締合的蛋白或肽。本發(fā)明的抗體或抗體部分可衍生的適用可檢測(cè)試劑包括熒光化合物。例示性熒光可檢測(cè)試劑包括熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、5-二曱胺-l-萘磺?;?、藻紅蛋白和其類(lèi)似物。抗體也可經(jīng)例如堿性磷酸酶、辣根過(guò)氧化物酶、葡萄糖氧化酶和其類(lèi)似物的可檢測(cè)酶衍生。當(dāng)抗體經(jīng)可4企測(cè)酶衍生時(shí),其通過(guò)添加酶用以產(chǎn)生可才全測(cè)反應(yīng)產(chǎn)物的其它試劑而進(jìn)行檢測(cè)。例如當(dāng)可檢測(cè)試劑辣根過(guò)氧化物酶存在時(shí),添加過(guò)氧化氫和二胺基聯(lián)苯胺得到可檢測(cè)的呈色反應(yīng)產(chǎn)物??贵w也可經(jīng)生物素衍生且經(jīng)由間接測(cè)定抗生物素蛋白或鏈霉抗生物素蛋白結(jié)合而檢測(cè)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供了結(jié)晶結(jié)合蛋白。優(yōu)選地,本發(fā)明涉及如本文公開(kāi)的全抗IL-13抗體和其片段的晶體和包含這樣的晶體的制劑和組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中,結(jié)晶結(jié)合蛋白比結(jié)合蛋白的可溶性對(duì)應(yīng)物具有更大體內(nèi)半衰期。在另一個(gè)實(shí)施方案中,結(jié)晶后結(jié)合蛋白保留生物學(xué)活性??筛鶕?jù)在本領(lǐng)域中是已知的且如WO02072636(以引用的方式并入本文中)中公開(kāi)的方法產(chǎn)生本發(fā)明的結(jié)晶結(jié)合蛋白。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供糖基化結(jié)合蛋白,其中抗體或其抗原結(jié)合部分包含一個(gè)或多個(gè)糖殘基。初期體內(nèi)蛋白產(chǎn)生可進(jìn)行進(jìn)一步處理,稱(chēng)為轉(zhuǎn)譯后修飾。糖(糖基)殘基尤其可以酶方式,一種稱(chēng)為糖基化的方法添加。所得具有以共價(jià)連接的寡糖側(cè)鏈的蛋白稱(chēng)為糖基化蛋白或糖蛋白??贵w為在Fc域以及可變域中具有一個(gè)或多個(gè)糖殘基的糖蛋白。Fc域中的糖殘基對(duì)Fc域的效應(yīng)子功能具有重要影響,對(duì)抗體的抗原結(jié)合或半衰期具有最低影響(R.Jefferis,Biotechnol.Prog.21(2005),第11-16頁(yè))。相反,可變域的糖基化對(duì)抗體的抗原結(jié)合活性可具有一定影響??勺冇虻奶腔赡芤蛭蛔瓒鴮?duì)抗體結(jié)合親和力可具有負(fù)作用(Co,M.S.等人Mol.Immunol.(1993)30:1361-1367)或使得對(duì)抗原的親和力增加(Wallick,S.C.,等人,Exp.Med.(1988)168:1099-1109;Wright,A.等人,EMBOJ.(1991)10:2717-2723)。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及產(chǎn)生糖基化位點(diǎn)突變體,其中結(jié)合蛋白的O或N連接的糖基化位點(diǎn)已突變。本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用標(biāo)準(zhǔn)熟知技術(shù)產(chǎn)生這樣的突變。保留生物學(xué)活性,但具有升高或降低的結(jié)合活性的糖基化位點(diǎn)突變體為本發(fā)明的另一目標(biāo)。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合部分的糖基化經(jīng)改進(jìn)。例如,可制備非糖基化抗體(也即抗體缺乏糖基化)。可改變糖基化以(例如)增加抗體對(duì)抗原的親和力??赏ㄟ^(guò)(例如)改變抗體序列中的一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)這樣的糖類(lèi)修飾。例如,可進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代,其使得一個(gè)或多個(gè)可變域糖基化位點(diǎn)消除以由此消除該位點(diǎn)的糖基化。所述非糖基化可增加抗體對(duì)抗原的親和力。所述方法進(jìn)一步詳細(xì)描述于PCT公開(kāi)WO003016466A2和美國(guó)專(zhuān)利第5,714,350和6,350,861號(hào)中,各者以引用的方式全部并入本文中。另外或替代地,本發(fā)明的修飾的抗體可經(jīng)制備具有改變的糖基化類(lèi)型,例如具有降低量的巖藻糖基殘基的次巖藻糖基化的抗體或具有增加的二等分GlcNAc結(jié)構(gòu)的抗體。已證明這樣的改變的糖基化模式增加抗體的ADCC能力??赏ㄟ^(guò)(例如)于具有改變的糖基化機(jī)制的宿主細(xì)胞中表達(dá)抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)這樣的糖類(lèi)修飾。在本領(lǐng)域中已描述具有改變的糖基化機(jī)制的細(xì)胞且其可用作表達(dá)本發(fā)明的重組抗體以由此產(chǎn)生具有改變的糖基化的抗體的宿主細(xì)胞。參見(jiàn)例如Shields,R.L.等人,(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740;Umana等人(1999)Nat.Biotech.17:176-1以及歐洲專(zhuān)利第EP1,176,195號(hào);PCT公開(kāi)WO03/035835;WO99/5434280,各自以引用的方式全部并入本文中。蛋白糖基化視所關(guān)注的蛋白的氨基酸序列以及表達(dá)蛋白的宿主細(xì)胞而定。不同生物可產(chǎn)生不同糖基化酶(例如糖基轉(zhuǎn)移酶和糖苷酶)且具有不同可用底物(核普酸糖)。因這樣的因素,蛋白糖基化模式和糖基殘基的組合物可依賴(lài)于表達(dá)特定蛋白的宿主系統(tǒng)而不同。適用于本發(fā)明的糖基殘基可包括但不限于葡萄糖、半乳糖、甘露糖、海藻糖、N-乙酰葡萄胺糖和唾液酸。糖基化結(jié)合蛋白優(yōu)選的包含糖基殘基使得糖基化模式為人類(lèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知不同蛋白糖基化可產(chǎn)生不同蛋白特性。例如,與表達(dá)于例如CHO細(xì)胞系的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的相同蛋白相比,在例如酵母的微生物宿主中產(chǎn)生且利用酵母內(nèi)源性途徑糖基化的治療性蛋白的效力可降低。這樣的糖蛋白在人類(lèi)中也可具有免疫原性且施用后顯示降低的體內(nèi)半衰期。人類(lèi)和其它動(dòng)物的特異性受體可識(shí)別特異性糖基殘基且促進(jìn)蛋白自血流快速清除。其它不利效果可包括蛋白折疊、溶解性、蛋白酶易感性、運(yùn)輸、遞送、區(qū)室化、分泌、由其它蛋白或因子識(shí)別、抗原性或過(guò)敏性變化。因此,實(shí)施者可優(yōu)選具有特定組成和糖基化模式的治療性蛋白,例如糖基化組成和形式等同于或至少類(lèi)似于人類(lèi)細(xì)胞或預(yù)定受檢動(dòng)物的物種特異細(xì)胞中產(chǎn)生的??赏ㄟ^(guò)在遺傳上修飾宿主細(xì)胞以表達(dá)異源性糖基化酶來(lái)獲得不同于宿主細(xì)胞的蛋白的表達(dá)糖基化蛋白。使用在本領(lǐng)域中是已知的技術(shù),實(shí)施者可產(chǎn)生顯示人類(lèi)蛋白糖基化的抗體或其抗原結(jié)合部分。例如,酵母林已經(jīng)在遺傳上修飾以表達(dá)非天然發(fā)生糖基化酶,使得在這些酵母抹中產(chǎn)生的糖基化蛋白(糖蛋白)顯示與動(dòng)物細(xì)胞、尤其人類(lèi)細(xì)胞相同的蛋白糖基化(美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)案20040018590和20020137134和PCT公開(kāi)WO2005100584A2)。除結(jié)合蛋白外,本發(fā)明也涉及對(duì)本發(fā)明的這樣的結(jié)合蛋白具有特異性的獨(dú)特型(抗-Id)抗體???ID抗體為識(shí)別通常與另一抗體的抗原結(jié)合區(qū)域相關(guān)的獨(dú)特決定子的抗體??赏ㄟ^(guò)以結(jié)合蛋白或其含有CDR的區(qū)域使動(dòng)物免疫來(lái)制備抗-ID。所免疫動(dòng)物將識(shí)別和對(duì)免疫抗體的個(gè)體基因型決定子作出應(yīng)答且產(chǎn)生抗-Id抗體???Id抗體也可用作"免疫原"以誘導(dǎo)另一動(dòng)物的免疫反應(yīng),產(chǎn)生所謂的抗抗Id抗體。另外,本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解可使用遺傳上工程化以表達(dá)各種糖基化酶的宿主細(xì)胞的庫(kù)表達(dá)所關(guān)注的蛋白,使得庫(kù)的成員宿主細(xì)胞產(chǎn)生具有不同糖基化模式的所關(guān)注的蛋白。實(shí)施者可隨后選擇且分離具有特定新糖基化模式的所關(guān)注的蛋白。具有特定選擇的新穎糖基化模式的蛋白優(yōu)選的顯示改善或改變的生物特性。D.抗IL-13抗體的用途考慮到結(jié)合人類(lèi)IL-13的能力,本發(fā)明的抗人類(lèi)IL-13抗體或其部104分可用于使用例如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、放射免疫測(cè)定(RIA)或組織免疫組織化學(xué)的習(xí)知免疫測(cè)定檢測(cè)人類(lèi)IL-13(例如于例如血清或血漿的生物樣品中)。本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)生物樣品的人類(lèi)IL-13的方法,所述方法包括使生物樣品與本發(fā)明的抗體或抗體部分接觸,且檢測(cè)與人類(lèi)IL-13結(jié)合的抗體(或抗體部分)或未結(jié)合抗體(或抗體部分),以由此檢測(cè)生物樣品中的人類(lèi)IL-13。抗體經(jīng)可^r測(cè)物質(zhì)直接或間接標(biāo)記以促進(jìn)結(jié)合或未結(jié)合抗體的檢測(cè)。適當(dāng)可檢測(cè)物質(zhì)包括各種酶、輔基、熒光材料、發(fā)光材料和放射性物質(zhì)。適當(dāng)酶的實(shí)例包括辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、(3-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶;適當(dāng)輔基復(fù)合體的實(shí)例包括鏈霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素;適當(dāng)熒光材料的實(shí)例包括傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯三溱基胺熒光素、丹磺酰氯或藻紅蛋白;發(fā)光材料的實(shí)例包括魯米諾(luminol);且適當(dāng)放射性物質(zhì)的實(shí)例包括3H、14C、35S、90Y、"Tc、mIn、125I、131I、177Lu、166110或153Sm。替代標(biāo)記抗體,人類(lèi)IL-13可通過(guò)竟?fàn)幟庖邷y(cè)定,利用經(jīng)可檢測(cè)物質(zhì)記的rhIL-13標(biāo)準(zhǔn)和未標(biāo)記抗人類(lèi)IL-13抗體于生物液體中測(cè)定。在此測(cè)定中,將生物樣品、標(biāo)記的rhIL-13標(biāo)準(zhǔn)與抗人類(lèi)IL-13抗體組合,且測(cè)定與未標(biāo)記抗體結(jié)合的標(biāo)記的rhIL-13標(biāo)準(zhǔn)的量。生物樣品中人類(lèi)IL-13的量與同抗IL-13抗體結(jié)合的標(biāo)記的rhIL-13標(biāo)準(zhǔn)的量成反比。類(lèi)似地,人類(lèi)IL-13也可通過(guò)竟?fàn)幟庖邷y(cè)定,利用經(jīng)可檢測(cè)物質(zhì)標(biāo)記的rhIL-13標(biāo)準(zhǔn)和未標(biāo)記抗人類(lèi)IL-13抗體于生物液體中測(cè)定。本發(fā)明的抗體和抗體部分優(yōu)選的能夠體外與體內(nèi)中和人類(lèi)IL-13活性。因此,本發(fā)明的這樣的抗體和抗體部分可用于抑制hIL-13活性,例如在含有hIL-13的細(xì)胞培養(yǎng)物中、在人類(lèi)個(gè)體中或在其它具有本發(fā)明的抗體交叉反應(yīng)的IL-13的哺乳動(dòng)物個(gè)體中抑制hIL-13活性。在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種用于抑制hIL-13活性的方法,所述方法包括使hlL-13與本發(fā)明的抗體或抗體部分接觸,使得hlL-13活性受抑。例如,在含有或懷疑含有hIL-13的細(xì)胞培養(yǎng)物中,本發(fā)明的抗體抗體部分可添加至培養(yǎng)基以抑制培養(yǎng)物的hIL-13活性。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種用于降低個(gè)體的hIL-13活性的方法,有利地從患有其中IL-13活性有害的疾病或病癥的個(gè)體降低hIL-13活性。本發(fā)明提供用于降低患有所述疾病或病癥的個(gè)體的IL-13得所述個(gè)體的IL-13活性降低。IL-13優(yōu)選為人類(lèi)IL-13且所述個(gè)體為人類(lèi)個(gè)體?;蛘?,個(gè)體可為表達(dá)本發(fā)明的抗體能夠結(jié)合的IL-13的哺乳動(dòng)物。另外,個(gè)體可為IL-13已引入(例如通過(guò)施用IL-13或通過(guò)表達(dá)IL-13轉(zhuǎn)基因)的哺乳動(dòng)物??沙鲇谥委熌康南蛉祟?lèi)個(gè)體施用本發(fā)明的抗體。此外,可出于獸醫(yī)學(xué)目的或作為人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型,向表達(dá)抗體能夠結(jié)合的IL-13的非人類(lèi)哺乳動(dòng)物施用本發(fā)明的抗體。關(guān)于后者,這樣的動(dòng)物模型可適用于評(píng)估本發(fā)明抗體的治療效力(例如測(cè)試施用劑量和時(shí)程)。如本文中所用,術(shù)語(yǔ)"IL-13活性有害的病癥"意欲包括疾病和其它病癥,其中患有所述病癥的個(gè)體中IL-13的存在已顯示或懷1€造成所述病癥或造成病癥惡化的因素的病理生理學(xué)。因此,其中IL-13活性有害的病癥為其中預(yù)期IL-13活性降低減輕病癥的癥狀和/或進(jìn)行的病癥。這樣的病癥可通過(guò)(例如)增加患有所述病癥的個(gè)體的生物流體中IL-13的濃度(例如個(gè)體的血清、血漿、滑液等中IL-13的濃度增加)來(lái)證明,所述濃度可使用(例如)如上所述的抗IL-13抗體檢測(cè)??梢员景l(fā)明的抗藥物組合物的部分的病癥。已暗示IL-13在導(dǎo)致與哮喘相關(guān)的病理反應(yīng)中具有關(guān)鍵作用。然而,差示免疫學(xué)途徑的其它介體也與。孝喘發(fā)病機(jī)制有關(guān),且除IL-13的外阻斷這些介體可提供其它治療益處。因此,本發(fā)明的結(jié)合蛋白可并入DVD-Ig蛋白中,其中DVD能夠結(jié)合標(biāo)粑對(duì),包括但不限于IL-13和前炎性細(xì)胞因子,例如腫瘤壞死因子-a(TNF-a)。TNF-a可擴(kuò)增哮喘的炎性反應(yīng)且可與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)(McDonnell,等人,ProgressinRespiratoryResearch(2001),31(NewDrugsforAsthma,AllergyandCOPD),247-250)。此暗示阻斷IL-13與TNF-a可具有有利效應(yīng),尤其在嚴(yán)重氣管疾病中。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,本發(fā)明的DVD-Ig結(jié)合標(biāo)耙IL-13和TNF-a且用于治療哞喘。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的結(jié)合蛋白可用于產(chǎn)生DVD-Ig分子,其結(jié)合IL-13和IL-l卩、IL-13和IL-9;IL-13和IL-4;IL-13和IL-5;IL-13和IL-25;IL-13且TARC;IL-13和MDC;IL-13和MIF;IL-13和TGF-卩;IL-13和LHR激動(dòng)劑;IL-13和CL25;IL-13和SPRR2a;IL-13和SPRR2b;和IL-13和ADAM8。本發(fā)明也提供能夠結(jié)合IL-13和一種或多種與哞喘有關(guān)的標(biāo)耙的DVD-Ig,這樣的標(biāo)靶選自以下各物:CSF1(MCSF)、CSF2(GM-CSF)、CSF3(GCSF)、FGF2、IFNAl、IFNBl、IFNG、組氨酸和組氨酸受體、IL1A、IL1B、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、ILIO、ILll、IL12A、IL12B、IL14、IL15、IL16、IL17、IL18、IL19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-30、EL-31、IL-32、IL國(guó)33、KITLG、PDGFB、IL2RA、IL4R、IL5RA、IL8RA、IL8RB、IL12固、IL12RB2、IL13RA1、IL13RA2、IL18R1、TSLP、CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL13、CCL17、CCL18、CCL19、C(X20、CCU2、CCL24、CX3CL1、CXCL1、CXCL2、CXCL3、XCL1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CX3CR1、GPR2、XCR1、FOS、GATA3、JAK1、JAK3、STAT6、TBX21、TGFB1、TNFSF6、YY1、CYSLTR1、FCER1A、FCER2、LTB4R、TB4R2、LTBR和殼多糖酶。D.藥物組合物本發(fā)明也提供了包含本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分和藥物學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。包含本發(fā)明的抗體的藥物組合物適用于但不限于診斷、檢測(cè)或監(jiān)控病癥;預(yù)防、治療、控制或改善病癥或其一種或多種癥狀和/或用于研究。在一特定實(shí)施方案中,組合物包含一種或多種本發(fā)明的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中,所述藥物組合物包含一種或多種本發(fā)明的抗體和一種或多種除本發(fā)明抗體以外的預(yù)防或治療劑,以供治療其中IL-13活性有害的病癥。優(yōu)選地,已知預(yù)防或治療劑適用于或已或當(dāng)前正用于預(yù)防、治療、控制或改善病癥或其一種或多種癥狀。根據(jù)這些實(shí)施方案,所述組合物可另外包括載體、稀釋劑或賦形劑。本發(fā)明的抗體和抗體部分可并入適用于施用個(gè)體的藥物組合物中。藥物組合物通常包含本發(fā)明的抗體或抗體部分和藥物學(xué)上可接受的載體。如本文中所用,"藥物學(xué)上可接受的載體"包括生理上相容的任一和所有溶劑、分散介質(zhì)、涂料、抗菌和抗真菌劑,等滲和吸收延遲劑和其類(lèi)似物。藥物學(xué)上可接受的載體的實(shí)例包括水、鹽水、磷酸鹽緩沖生理食鹽水、葡聚糖、甘油、乙醇和其類(lèi)似物中的一或多者以及其組合。在多數(shù)情況下,其在組合物中優(yōu)選的包括等滲劑,例如糖,例如甘露糖醇、山梨糖醇的多元醇或氯化鈉。藥物學(xué)上可接受的載體可還包含微量助劑物質(zhì),例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖劑,其增強(qiáng)抗體或抗體部分的存放期或有效性。已知各種遞送系統(tǒng)且其可用于施用一種或多種本發(fā)明的抗體或一種或多種本發(fā)明的抗體與適用于預(yù)防、控制、治療或改善病癥或其一種或多種癥狀的預(yù)防劑或治療劑的組合,例如脂質(zhì)粒封裝、微粒、微膠嚢、能夠表達(dá)抗體或抗體片段的重組細(xì)胞、受體介導(dǎo)的胞吞作用(參見(jiàn)例如Wu和Wu,J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987))、核酸作為反轉(zhuǎn)錄病毒或其它載體的一部分的構(gòu)建等。施用本發(fā)明的預(yù)防或治療劑的方法包括但不限于胃腸外施用(例如皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)和皮下)、硬膜外施用、腫瘤內(nèi)施用和粘膜施用(例如鼻內(nèi)和口服途徑)。另外,可通過(guò)使用(例如)吸入器或霧化器和與霧化劑的制劑,采用肺部施用。參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利第6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,2卯,540和4,880,078號(hào);和PCT公開(kāi)第WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346和WO99/66903號(hào),各自以引用的方式全部并入本文中。在一個(gè)實(shí)施方案中,使用AlkermesAIR⑧肺部藥物遞送技術(shù)(Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass)施用本發(fā)明的抗體、組合療法或本發(fā)明的組合物。在一特定實(shí)施方案中,肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腫瘤內(nèi)、經(jīng)口、鼻內(nèi)、肺部或皮下施用本發(fā)明的預(yù)防或治療劑。預(yù)防或治療劑可通過(guò)任何便利途徑施用,例如通過(guò)注射或快速注射、通過(guò)經(jīng)上皮或粘膜皮膚外膜(例如口腔粘膜、經(jīng)直腸和腸粘膜等)吸收,且其可與其它生物活性劑一起施用。施用可為全身性或局部施用。在一特定實(shí)施方案中,向需要治療的區(qū)域局部施用本發(fā)明的預(yù)防或治療劑可為合意的;此可通過(guò)(例如且不限于)局部輸注、注射或借助于植入而實(shí)現(xiàn),所述植入為包括薄膜和基質(zhì)(例如硅橡膠(sialastic)薄膜、聚合物、纖維基質(zhì)(例如Tissuel⑧)或膠原基質(zhì))的多孔或無(wú)孔材料。在一個(gè)實(shí)施方案中,將有效量的一種或多種本發(fā)明的抗體局部施用患者的受影響區(qū)域以預(yù)防、治療、控制和/或改善病癥或其癥狀。在另一個(gè)實(shí)施方案中,將有效量的本發(fā)明的一種或多種抗體組合有效量的除本發(fā)明抗體外的一種或多種治療劑(例如一種或多種預(yù)防或治療劑)局部施108用患者的受影響區(qū)域以預(yù)防、治療、控制和/或改善病癥或其一種或多種癥狀。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的預(yù)防或治療劑可在控釋或持續(xù)釋放系統(tǒng)中遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中,泵可用以實(shí)現(xiàn)控釋或持續(xù)釋放(參見(jiàn)前述Langer;Sefton,1987,CRCCrit.RefBiomed.Eng.14:20;Buchwald等人,1980,Surgery88:507;Saudek等人,1989,N.Engl.J.Med.321:574)。在另一個(gè)實(shí)施方案中,聚合材料可用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的治療劑的控釋或持續(xù)釋放(參見(jiàn)例如MedicalApplicationsofControlledRelease,Langer和Wise(編),CRCPres.BocaRaton,F(xiàn)la.(1974);ControlledDrugBioavailability,DrugProductDesignandPerformance,Smolen和Ball(編),Wiley,NewYork(1984);Ranger和Peppas,1983,J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61;也參見(jiàn)Levy等人,1985,Science228:190;During等人,1989,Ann.Neurol.25:351;Howard等人,1989,J.Ne畫(huà)urg.71:105);美國(guó)專(zhuān)利第5,679,377號(hào);美國(guó)專(zhuān)利第5,916,597號(hào);美國(guó)專(zhuān)利第5,912,015號(hào);美國(guó)專(zhuān)利第5,989,463號(hào);美國(guó)專(zhuān)利第5,128,326號(hào);PCT公開(kāi)第WO99/15154號(hào);和PCT公開(kāi)第WO99/20253號(hào)。用于持續(xù)釋放制劑的聚合物的實(shí)例包括但不限于聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)、聚(曱基丙烯酸曱酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(曱基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酐、聚(N-聚乙烯吡咯烷酮)、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚乳酸交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)和聚原酸酯。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,用于持續(xù)釋放制劑的聚合物為惰性的、不含可濾除雜質(zhì)、儲(chǔ)存穩(wěn)定、無(wú)菌的與生物可降解。在另一個(gè)實(shí)施方案中,受控或持續(xù)釋放系統(tǒng)可接近預(yù)防或治療標(biāo)靶放置,因此僅需全身劑量的一部分(參見(jiàn)例如前述Goodson,在MedicalApplicationsofControlledRelease,第2巻,第115-138頁(yè)(1984)中)??蒯屜到y(tǒng)論述于Langer的回顧中(1990,Science249:1527-1533)。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何技術(shù)可用于產(chǎn)生包含一種或多種本發(fā)明的治療劑的持續(xù)釋放制劑。參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利第4,526,938號(hào);PCT公開(kāi)WO91/05548;PCT公開(kāi)WO96/20698;Ning等人,1996,"IntratumoralRadioimmunotheraphyofaHumanColonCancerXenograftUsingaSustained-ReleaseGel,,,Radiotherapy&Oncology39:179-189;Song等人,1995,"AntibodyMediatedLungTargetingofLong-CirculatingEmulsions,,,PDAJournalofPharmaceuticalScience&Technology50:372-397;Cleek等人,1997,"BiodegradablePolymericCardersforabFGFAntibodyforCardiovascularApplication,,,Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-854;和Lam等人,1997,"MicroencapsulationofRecombinantHumanizedMonoclonalAntibodyforLocalDelivery,,,Proc.Int'l.Symp.ControlRel.Bioact.Mater.24:759-760,各自以引用的方式全部并入本文中。在一特定實(shí)施方案中,如果本發(fā)明的組合物為編碼預(yù)防或治療劑的核酸,則所述核酸可體內(nèi)施用以促進(jìn)其經(jīng)編碼的預(yù)防或治療劑的表達(dá),通過(guò)將其構(gòu)建為適當(dāng)核酸表達(dá)載體的一部分且施用其以便其在細(xì)胞內(nèi),例如通過(guò)使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第4,980,286號(hào))或通過(guò)直接注入或通過(guò)使用微粒轟擊(例如基因槍?zhuān)籅iolistic,Dupont)或以脂質(zhì)或細(xì)胞表面受體或轉(zhuǎn)染劑涂布,或通過(guò)有關(guān)已知進(jìn)入核的同源異形盒樣肽將其施用(參見(jiàn)例如,Joliot等人,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:1864-1868)?;蛘?,可將核酸引入細(xì)胞內(nèi)且并入宿主細(xì)胞DNA中以通過(guò)同源重組表達(dá)。本發(fā)明的藥物組合物經(jīng)配制以與其預(yù)定施用途徑相容。給藥途徑的實(shí)例包括但不限于胃腸外,例如靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下;口服;鼻內(nèi)(例如吸入);經(jīng)皮(例如局部);經(jīng)粘膜和經(jīng)直腸施用。在一特定實(shí)施方案中,根據(jù)常規(guī)程序配制組合物以作為適合于靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、口服、鼻內(nèi)或局部施用人類(lèi)的藥物組合物。用于靜脈內(nèi)施用的組合物通常為無(wú)菌等滲水性緩沖液中的溶液。若必要,所述組合物也可包括增溶劑和例如利多卡因(lignocamne)的局部麻醉劑以緩解注射位點(diǎn)的痛感。如果局部施用本發(fā)明的組合物,則所述組合物可配制成以下形式軟膏、乳膏、經(jīng)皮貼片、洗劑、凝膠、香波、噴霧劑、氣溶膠、溶液、乳液或本領(lǐng)域沖支術(shù)人員所熟知的其它形式。參見(jiàn)例如Remington'sPharmaceuticalSciencesandIntroductiontoPharmaceuticalDosageForms第19版,MackPub.Co.,Eastern,Pa.(1995)。對(duì)于非噴霧型局部劑型,通常采用包含與局部應(yīng)用相容的載體或一種或多種賦形劑且具有優(yōu)選的大于水的動(dòng)態(tài)粘度的粘性半固型或固型。適當(dāng)制劑包括但110不限于溶液、懸浮液、乳液、乳膏、軟膏、粉末、擦劑、油膏和其類(lèi)似物,如果需要其可經(jīng)滅菌或與助劑(例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、緩沖液或鹽)混合以便影響例如滲透壓的各種特性。其它適當(dāng)局部劑型包括可噴霧氣溶膠制劑,其中優(yōu)選的與固體或液體惰性載體組合的活性組分以與受壓揮發(fā)物(例如氣體推進(jìn)劑,例如氟利昂)的混合物形式包裝或包裝于塑料擠瓶中。如果需要潤(rùn)濕劑或保濕劑也可添加至藥物組合物和劑型。這樣的其它組分的實(shí)例為在本領(lǐng)域中所熟知。如果本發(fā)明的方法包括鼻內(nèi)施用組合物,則所述組合物可配制成氣溶膠形式、噴霧劑、霧狀物或以滴劑形式。根據(jù)本發(fā)明使用的預(yù)防或治療劑尤其可在使用適當(dāng)推進(jìn)劑(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適當(dāng)氣體)的情況下,以來(lái)自加壓包或噴霧器的氣溶膠噴霧呈遞形式便利地遞送。在加壓氣霧劑的情況下,可通過(guò)提供閥門(mén)來(lái)遞送經(jīng)計(jì)量的量來(lái)確定劑量單位。用于吸入器或吹入器的膠嚢和濾筒(由例如明膠組成)可經(jīng)配制以含有所述化合物與例如乳糖或淀粉的適當(dāng)粉末的粉末狀混合物。如果本發(fā)明的方法包括口服給藥,則組合物可經(jīng)配制成錠劑、膠嚢、扁嚢劑、膠嚢錠、溶液、懸浮液、和其類(lèi)似物的經(jīng)口形式??捎闪?xí)知方法與藥物學(xué)上可接受的例如以下的賦形劑一起制備錠劑或膠嚢粘結(jié)劑(例如預(yù)先動(dòng)物膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基曱基纖維素);填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣);潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或硅石);崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或淀粉羥乙酸鈉);或濕潤(rùn)劑(例如十二烷基硫酸鈉)??捎稍诒绢I(lǐng)域中所熟知的方法涂覆這樣的錠劑??诜┯玫囊后w制劑可采用但不限于溶液、糖漿或懸浮液的形式,或其可作為用于在使用之前與水或其它合適載體組合的干燥產(chǎn)物存在。這樣的液體制劑可由習(xí)知方法使用藥物學(xué)上可接受的例如以下的添加劑來(lái)制備懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化可食脂肪);乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠);非水載體(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分級(jí)植物油);和防腐劑(例如甲基或丙基-對(duì)-羥基苯甲酸酯或山梨酸)。這樣的制劑也可視情況而定含有緩沖鹽、調(diào)味劑、著色劑和甜味劑??诜┯玫闹苿┛山?jīng)適當(dāng)配制以便緩釋、控釋或持續(xù)釋放預(yù)防或治療劑。本發(fā)明的方法可包括例如通過(guò)使用吸入器或霧化器肺部施用與氣霧劑一起配制的組合物。參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利第6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078號(hào);和PCT公開(kāi)第WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346和WO99/66903號(hào),各自以引用的方式全部并入本文中。在一特定實(shí)施方案中,使用AlkermesAIR⑧肺部藥物遞送技術(shù)(Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass)施用本發(fā)明的抗體、組合療法和/或本發(fā)明的組合物。本發(fā)明的方法可包括施用經(jīng)配制以便通過(guò)注射(例如通過(guò)快速注射或連續(xù)輸液)胃腸外施用的組合物。用于注射的制劑可以單位劑型形式(例如以安瓿形式或以多劑量容器形式)與經(jīng)添加的防腐劑一起提供。組合物可采用這樣的如于油性或水性載體中的懸浮液、溶液或乳液的形式且可含有配制劑,例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?;蛘呋钚越M分可呈在使用之前與合適的載體(例如無(wú)菌無(wú)熱原水)組合的粉劑形式。本發(fā)明的方法可另外包括施用經(jīng)配制為貯庫(kù)式制劑的組合物。這樣的長(zhǎng)效制劑可通過(guò)植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過(guò)肌內(nèi)注射給藥。因此(例如)可使用合適的聚合或疏水性材料(例如作為可接受的油劑中的乳液)或離子交換樹(shù)脂來(lái)配制組合物,或其可配制為微溶性衍生物(例如微溶性鹽)。本發(fā)明的方法包括施用配制為中性或鹽形式的組合物。藥物學(xué)上可接受的鹽包括那些與陰離子形成的鹽,例如那些源自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的鹽,和那些與陽(yáng)離子形成的鹽,例如那些源自鈉、鉀、銨、釣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙基胺、2-乙基氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等的鹽。通常,獨(dú)立地或于單位劑型中混合在一起提供組合物的組分,這樣的劑型例如于例如指示活性劑數(shù)量的安瓿或藥嚢的密閉容器中的干燥凍干粉或無(wú)水濃縮物。如果施用形式為輸注,則組合物可以含有無(wú)菌藥物級(jí)水或鹽水的輸液瓶施配。如果施用形式為注射,則可提供無(wú)菌注射水或鹽水的安瓿以便組分可在施用之前混合。本發(fā)明也尤其規(guī)定一種或多種預(yù)防或治療劑,或本發(fā)明的藥物組合物經(jīng)封裝在例如安瓿瓶或藥嚢的指示藥劑數(shù)量的密閉容器中。在一個(gè)實(shí)施方案中,一種或多種預(yù)防或治療劑或本發(fā)明的藥物組合物經(jīng)提供為于密閉容器中的干燥滅菌凍干粉末或無(wú)水的濃縮物,且其可經(jīng)重構(gòu)(例如與水或鹽水)成適當(dāng)濃度以便施用個(gè)體。一種或多種預(yù)防或治療劑或本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選的以以下單位劑量經(jīng)提供為于密閉容器中的干燥無(wú)菌凍干粉末至少5mg、更優(yōu)選至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少75mg或至少100mg。這樣的凍干預(yù)防或治療劑或本發(fā)明的藥物組合物應(yīng)于其原始容器中儲(chǔ)存在2。C且8T之間,且這樣的預(yù)防或治療劑或本發(fā)明的藥物組合物應(yīng)在重新配制后1周內(nèi)、優(yōu)選的5天內(nèi)、72小時(shí)內(nèi)、48小時(shí)內(nèi)、24小時(shí)內(nèi)、12小時(shí)內(nèi)、6小時(shí)內(nèi)、5小時(shí)內(nèi)、3小時(shí)內(nèi)或1小時(shí)內(nèi)施用。在一替代實(shí)施方案中,一種或多種預(yù)防或治療劑或本發(fā)明的藥物組合物以于指示藥劑的量和濃度的密閉容器中的液體形式提供。優(yōu)選地,所施用組合物的液體形式在密閉容器中以下列量提供至少0.25mg/ml、更優(yōu)選至少0.5mg/ml、至少1mg/ml、至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少75mg/ml或至少100mg/ml。液體形式應(yīng)于其原始容器中儲(chǔ)存在2。C與8。C之間。本發(fā)明的抗體和抗體部分可并入適用于胃腸外施用的藥物組合物中。抗體或抗體部分優(yōu)選的將制備為含有0.1-250mg/ml抗體的可注射溶液。所述可注射溶液可包括于火石玻璃或琥珀色小瓶、安吾瓦或預(yù)填充注射器中的液體或凍干劑型。緩沖液可為L(zhǎng)-組氨酸(l-50mM)、最優(yōu)選5-10mM,pH5.0至7.0(最優(yōu)選pH6.0)。其它適當(dāng)緩沖液包括但不限于丁二酸鈉、檸檬酸鈉、磷酸鈉或磷酸鉀。氯化鈉可用于調(diào)節(jié)濃度為0-300mM(對(duì)于液體劑型最優(yōu)選150mM)的溶液的毒性。對(duì)于凍干劑型,可包括低溫保護(hù)劑,主要為0-10%蔗糖(最優(yōu)選0.5-1.0%)。其它適當(dāng)?shù)蜏乇Wo(hù)劑包括海藻糖和乳糖。對(duì)于凍干劑型可包括填充劑,主要為1-10%甘露糖醇(最優(yōu)選2-4%)。穩(wěn)定劑可用于液體與凍干劑型,主要為1-50mML-曱硫氨酸(最優(yōu)選5-10mM)。其它適當(dāng)填充劑包括甘氨酸、精氨酸,其可以0-0.05%聚山梨醇酯-80的形式而包括(最優(yōu)選0.005-0.01%)。其它表面活性劑包括但不限于聚山梨醇酯20和BRIJ表面活性劑。經(jīng)制備為用于胃腸外施用的可注射溶液的包含本發(fā)明抗體和抗體部分的藥物組合物可還包含適用作輔助劑的試劑,例如那些用以增加治療蛋白(例如抗體)的吸收或分散的試劑。尤其適用的輔助劑為透明質(zhì)酸酶,例如Hylenex⑧(重組人類(lèi)透明質(zhì)酸酶)。在可注射溶液中添加透明質(zhì)酸酶可改善胃腸外施用、尤其皮下施用后的人類(lèi)生物可用性。其也允許更大注射位點(diǎn)體積(也即大于1ml),而疼痛和不適更少,且注射部位反應(yīng)發(fā)生率最小(參見(jiàn)WO2004078140、US2006104968,其以引用的方式并入本文中)。本發(fā)明的組合物可呈各種形式。這些包括例如液體、半固體和固體劑型,例如液體溶液(例如可注射性和輸注溶液)、分散液或懸浮液、錠劑、丸劑、粉末、脂質(zhì)粒和栓劑。優(yōu)選的形式取決于預(yù)定施用形式和治療應(yīng)用。典型優(yōu)選的組合物系呈可注射或可輸注溶液的形式,例施用的優(yōu)選的形式為胃腸外(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi))。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,抗體通過(guò)靜脈內(nèi)輸注或注射施用。于另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,抗體通過(guò)肌內(nèi)或皮下注射施用。在制備和儲(chǔ)存條件下,治療組合物通常須為無(wú)菌且穩(wěn)定的。組合物可配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)?;蚱渌m于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。視需要,可通過(guò)將所需量的活性化合物(也即抗體或抗體部分)與上文列舉的組分中的一個(gè)或其組合一起并入適當(dāng)溶劑中,接著過(guò)濾滅菌來(lái)制備無(wú)菌可注射溶液。通常,通過(guò)將活性化合物并入含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)和上文所列舉的所需其它組分的無(wú)菌載體中來(lái)制備分散液。在用于制備無(wú)菌可注射溶液的無(wú)菌凍干粉末的情況下,優(yōu)選的制備方法為真空干燥和噴霧干燥,所述方法自先前經(jīng)無(wú)菌濾過(guò)的溶液得到活性組分加上任何其它所需組分的粉末??衫缤ㄟ^(guò)使用例如卵磷脂的涂料,在分散液情況下通過(guò)維持所需粒徑和通過(guò)使用表面活性劑來(lái)維持溶液的適當(dāng)流動(dòng)性??赏ㄟ^(guò)在組合物中包括延遲吸收的例如單硬脂酸鹽和明膠的試劑,來(lái)實(shí)現(xiàn)可注射性組合物的延長(zhǎng)吸收??赏ㄟ^(guò)在本領(lǐng)域中是已知的各種方法施用本發(fā)明的抗體和抗體部分,盡管對(duì)于許多治療應(yīng)用,優(yōu)選的施用途徑/形式為皮下注射、靜脈注射或輸注。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解,施用的途徑和/或形式將依賴(lài)于所需結(jié)果而變。在某些實(shí)施方案中,活性化合物可與保護(hù)化合物阻止快速釋放的載體一起制備,例如控釋制劑,包括植入物、經(jīng)皮貼片和微嚢封的傳輸系統(tǒng)??墒褂蒙锟山到?、生物相容性聚合物,例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。許多用于制備這樣的制劑的方法已申請(qǐng)專(zhuān)利或通常為本領(lǐng)域技術(shù)人員所已114^口。參見(jiàn)伊J^口SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robi勵(lì)n編,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1978。在某些實(shí)施方案中,本發(fā)明的抗體或抗體部分可與(例如)惰性稀釋劑或可吸收可食用載體一起經(jīng)口施用。所述化合物(如果需要和其它組分)也可封入硬質(zhì)或軟殼膠嚢中,壓縮成錠劑,或直接并入個(gè)體的膳食中。對(duì)于口服治療給藥,所述化合物可與賦形劑一起并入且以可纟聶取錠劑、口含錠劑、片劑、膠嚢、酏劑、懸浮液、糖漿、糯米紙嚢劑和其類(lèi)似物形式使用。為通過(guò)胃腸外以外的施用方式施用本發(fā)明的化合共施用所述化合物。補(bǔ)充型活性化合物也可并入所述組合物中。在某些實(shí)施方案中,本發(fā)明的抗體或抗體部分與一種或多種適用于治療其中IL-13活性有害的病癥的其它治療劑一起共配制和/或共施用。例如,本發(fā)明的抗hIL-13抗體或抗體部分可與一種或多種結(jié)合其它標(biāo)粑的其它抗體(例如結(jié)合其它細(xì)胞因子或結(jié)合細(xì)胞表面分子的抗體)一起共配制和/或共施用。此外,本發(fā)明的一種或多種抗體可組合2種或2種以上上述治療劑使用。這樣的組合療法可有利地利用低劑量的所施用治療劑,因此避免與各種單一療法相關(guān)的可能的中毒或并發(fā)癥。在某些實(shí)施方案中,IL-13或其片段的抗體與在本領(lǐng)域中是已知的半衰期延長(zhǎng)載體有關(guān)。這樣的載體包括但不限于Fc域、聚乙二醇和葡聚糖。這樣的載體描述于(例如)美國(guó)申請(qǐng)案笫09/428,082號(hào)和公開(kāi)的PCT申請(qǐng)案第WO99/25044號(hào)中,據(jù)此出于任何目的將其以引用的方式并入。在一個(gè)特定實(shí)施方案中,施用包含編碼本發(fā)明的抗體或本發(fā)明的另一預(yù)防或治療劑的核苷酸序列的核酸序列以經(jīng)由基因療法治療、預(yù)防、控制或改善病癥或其一種或多種癥狀?;虔煼ㄊ侵竿ㄟ^(guò)向個(gè)體施用表達(dá)或可表達(dá)核酸而進(jìn)行的治療。在本發(fā)明的此實(shí)施方案中,核任一個(gè)。對(duì)于基因療法的方法的一般性綜述,參見(jiàn)Goldspiel等人,1993,ClinicalPharmacy12:488-505;Wu和Wu,1991,Biothempy3:87-95;Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596;Mulligan,Science260:926-932(1993);和Morgan和Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62:191-217;May,1993,TIBTECH11(5):155-215。DNA重組技術(shù)中通常已知的可使用的方法描述于Ausubel等人(編),CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,NY(1993);和Kriegler,GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY(1990)中?;虔煼ǖ母鞣N方法的詳細(xì)描述公開(kāi)于US20050042664Al中,其以引用的方式并入本文中。在另一個(gè)方面中,本申請(qǐng)的特征在于一種治療(例如治愈、抑制、改善、延遲或阻止發(fā)作或預(yù)防反復(fù)或復(fù)發(fā))或阻止個(gè)體的IL-13相關(guān)病癥的方法。所述方法包括向個(gè)體施用足以治療或預(yù)防IL-13相關(guān)病癥的量的IL-13結(jié)合劑(尤其拮抗劑),例如如本文中描述的抗IL-13抗體或其片段??蓡为?dú)或組合如本文中描述的其它治療形式將IL-13拮抗劑,例如抗IL-13抗體或其片段施用給個(gè)體。在一個(gè)實(shí)施方案中,個(gè)體為哺乳動(dòng)物,例如患有一種或多種IL-13相關(guān)病癥的人類(lèi),這樣的病癥包括例如呼吸病癥(例如哮喘(例如過(guò)敏性和非過(guò)敏性哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD),和其它病癥,包括呼吸道炎癥、嗜酸粒細(xì)胞增多、纖維化和粘液過(guò)量產(chǎn)生);特異反應(yīng)性病癥(例如特異反應(yīng)性皮炎和過(guò)敏性鼻炎);皮膚、胃腸器官的炎性和/或自身免疫性病癥(例如炎性腸病(IBD),例如潰瘍性結(jié)腸炎和/或克羅恩氏病)和肝臟的炎性和/或自身免疫性病癥(例如硬化、纖維化);硬皮??;腫瘤或癌癥,例如如本文描述的霍奇金淋巴瘤。因此,公開(kāi)內(nèi)容包括IL-13結(jié)合劑(例如本文中描述的抗IL-13抗體或其片段)用于本文中描述的治療的用途,和IL-13結(jié)合劑(例如本文中描述的抗IL-13抗體或其片段)用于制備用于本文中描述的治療的藥劑的用途。IL-13相關(guān)病癥的實(shí)例包括^旦不限于選自以下的一種或多種病癥呼吸病癥,例如詳喘(例如過(guò)敏性和非過(guò)敏性哮喘(例如因(例如)呼吸道合胞病毒(RSV)感染所致的(例如)幼兒哞喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)和其它病癥,包括呼吸道炎癥、嗜酸粒細(xì)胞增多、纖維化和粘液過(guò)量產(chǎn)生),例如嚢性纖維化和肺纖維化;特異反應(yīng)性病癥,例如因IL-13敏感性增加所致的特異反應(yīng)性病癥(例如特異反應(yīng)性皮炎、蕁麻滲、濕滲、過(guò)敏性鼻炎和過(guò)敏性腸胃炎);皮膚(例如特異反應(yīng)性皮炎)、胃腸器官(例如炎性腸病(IBD),例如潰瘍性結(jié)腸炎和/或克羅恩氏病)、肝臟(例如硬化肝細(xì)胞癌)的炎性和/或自身免疫病癥和硬皮??;肺瘤或癌癥(例如,軟組織或?qū)嶓w胂瘤),例如白血病、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和淋巴瘤,例如霍奇金淋巴瘤;病毒感染(例如自HTLV-1病毒感染);其它器官纖維化,例如肝臟纖維化(例如,由B型肝炎和/或C型肝炎病毒所致的纖維化);和如本文中描述的保護(hù)性1型免疫反應(yīng)表達(dá)的抑制(例如在疫苗接種期間)。在其它實(shí)施方案中,本申請(qǐng)?zhí)峁┝酥委?例如降低、改善)或預(yù)防一種或多種與以下病癥相關(guān)的癥狀的方法呼吸病癥,例如哮喘(例如過(guò)敏性和非過(guò)敏性哞喘);過(guò)敏癥;慢性阻塞性肺病(COPD);包括呼吸道炎癥、嗜酸粒細(xì)胞增多、纖維化和粘液過(guò)量產(chǎn)生的病癥,例如嚢性纖維化和肺纖維化。例如,哮喘癥狀包括但不限于喘息、氣促、支氣管收縮、氣管高反應(yīng)性、降低的肺活量、纖維化、呼吸道炎癥和粘液產(chǎn)生。所述方法包含向個(gè)體施用足以治療(例如降低、改善)或預(yù)防一種或多種癥狀的量的IL-13拮抗劑,例如IL-13抗體或其片段。IL-13抗體可治療性或預(yù)防性或兩者性質(zhì)地施用??蓡为?dú)或組合如本文中描述的其它治療形式將IL-13拮抗劑,例如抗IL-13抗體或其片段施用個(gè)體。個(gè)體優(yōu)選為哺乳動(dòng)物,例如患有如本文中所述的IL-13相關(guān)病癥的人類(lèi)。在另一個(gè)方面中,本申請(qǐng)?zhí)峁┝擞糜隗w外檢測(cè)樣品(例如生物樣品,例如血清、血漿、組織、活組織切片)中IL-13的存在的方法。本方法可用于診斷例如免疫細(xì)胞相關(guān)病癥的病癥。所述方法包括(i)使樣品或?qū)φ諛悠放c抗IL-13抗體或其如本文中描述的片段接觸;且(ii)檢測(cè)抗IL-13抗體或其片段與樣品或?qū)φ諛悠分g復(fù)合體的形成,其中相對(duì)于對(duì)照樣品,樣品中復(fù)合體形成的統(tǒng)計(jì)上顯著變化指示樣品中IL-13存在。在另一個(gè)方面中,本申請(qǐng)?zhí)峁┝擞糜隗w內(nèi)檢測(cè)IL-13存在的方法(例如在個(gè)體體內(nèi)成像中)。本方法可用于診斷例如IL-13相關(guān)病癥的病癥。所述方法包括(i)在容許抗體或片段與IL-13結(jié)合的條件下,向個(gè)體或?qū)φ諅€(gè)體施用抗IL-13抗體或其如本文中描述的片段;且(ii)檢測(cè)抗體或片段與IL-13之間復(fù)合體的形成,其中相對(duì)于對(duì)照個(gè)體,個(gè)體中復(fù)合體形成的統(tǒng)計(jì)上顯著變化指示IL-13存在。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分可單獨(dú)或組合使用以治療這樣的117疾病。應(yīng)理解本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分可單獨(dú)或組合其它例如治療劑的藥劑使用,所述其它藥劑經(jīng)本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇用于其預(yù)定目的。例如,所述其它藥劑可為本領(lǐng)域公認(rèn)的有效于治療本發(fā)明的抗體所治療的疾病或病癥的治療劑。所述其它藥劑也可為給治療組合物賦予有利特征的藥劑5例如影響組合物的粘度的藥劑。合。;文闡述的^劑用于說(shuō)明目的且并非意欲限制。屬于本發(fā)明的組合可為本發(fā)明的抗體與選自下表的至少一種其它藥劑。如所述組合使得所形成組合物可進(jìn)行其預(yù)定作用,則所述組合也可包括一種以上其它藥劑,例如兩種或三種其它藥劑。如本文中所描述,組合療法可包括一種或多種IL-13拮抗劑,例如抗IL-13抗體或其片段,其與一種或多種其它治療劑共配制和/或共施用,所述或這樣的其它治療劑例如一種或多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子抑制劑、免疫抑制劑、消炎劑(例如全身消炎劑)、抗纖維化劑、代謝抑制物、酶抑制劑和/或細(xì)胞毒素或細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑??膳c一種或多種IL-13拮抗劑(例如抗IL-13抗體或其片段)共施用和/或共配制的其它優(yōu)選的治療劑的實(shí)例包括但不限于以下的一或多者經(jīng)吸入甾類(lèi)藥物;|3-激動(dòng)劑,例如短效或長(zhǎng)效p-激動(dòng)劑;白三烯或白三烯受體拮抗劑;例如ADVAIR的組合藥物;IgE抑制劑,例如抗IgE抗體(例如XOLAIR);磷酸二酯酶抑制劑(例如PDE4抑制劑);黃嘌呤;抗膽堿劑藥物;肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑,例如色甘酸;IL-4抑制劑;IL-5抑制劑;嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子/CCR3抑制劑;組胺或其包括H1、H2、H3和H4的受體的拮抗劑;和前列腺素D或其受體(DP1和CRTH2)的拮抗劑。這樣的組合可用于治療哮喘和其它呼吸病癥。可與一種或多種抗IL-13抗體或其片段共同給藥和/或共配制的治療劑的其它實(shí)例尤其包括以下的一種或多種TNF拮抗劑(例如TNF受體的可溶性片段,TNF受體例如p55或p75人類(lèi)TNF受體或其衍生物,例如75kDTNFR-IgG(75kDTNF受體-IgG融合蛋白,ENBREL));TNF酶拮抗劑,例如TNF轉(zhuǎn)化酶(TACE)抑制劑;蕈毒^咸受體拮抗劑;TGF-卩拮抗劑;干擾素Y;潑氟尼東;化學(xué)治療劑,例如曱氨蝶呤、來(lái)氟米特或西羅莫司(雷帕霉素)或其類(lèi)似物,例如CCI-779;COX2和cPLA2抑制劑;NSAID;免疫調(diào)節(jié)劑;p38抑制劑、TPL-2、MK-2和NFkB抑制劑。118其它優(yōu)選的組合為細(xì)胞因子抑制性消炎藥物(CSAID);其它人類(lèi)細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子的抗體或拮抗劑,例如IL-1、IL-2、IL畫(huà)3、IL腸4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21、IL-31、干擾素、EMAP曙II、GM-CSF、FGF、EGF、PDGF和內(nèi)皮素-1以及這些細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的受體。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分可與細(xì)胞表面分子的例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA的抗體或其包括CD154的配體(gp39或CD40L)組合。治療劑的優(yōu)選的組合可在不同點(diǎn)干擾炎性級(jí)聯(lián);優(yōu)選的實(shí)例包括TNF拮抗劑,如嵌合、人源化或人類(lèi)TNF抗體,D2E7(PCT公開(kāi)第WO97/29131號(hào)),CA2(RemicadeTM),CDP571和可溶性p55或p75TNF受體,其衍生物(p75TNFRlgG(EnbrelTM)或p55TNFRlgG(Lenercept),以及TNF轉(zhuǎn)化酶(TACE)抑制劑;類(lèi)似地IL-1抑制劑(介白素-l-轉(zhuǎn)化酶抑制劑、IL-1RA等)出于相同因素可為有效的。其它優(yōu)選的組合包括介白素4。另一優(yōu)選的組合為哮喘反應(yīng)的其它關(guān)鍵隊(duì)員參與因素,其可與IL-13功能平行,依賴(lài)于其作用或與其協(xié)同作用;尤其優(yōu)選為包括IL-9抗體的IL-9拮抗劑。已顯示IL-13和IL-9具有重疊但不同功能,且兩者拮抗劑的組合可最有效。另一優(yōu)選的組合為抗IL-5抗體。其它優(yōu)選的組合包括趨化因子和趨化因子受體的拮抗劑,這樣的趨化因子包括MCP-1、MCP-4、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、RANTES、MDC、CCL-12和CCL-17(TARC),這樣的趨化因子受體包括CCR2、CCR3、CCR4和CXCR4。組合可包括譯喘介體的拮抗劑,這樣的哮喘介體包括酸哺乳動(dòng)物殼多糖酶、CRHT2、胃促胰酶、S1P1、S1P2、Tyk2、ROCKII、Stat6、p38、NFkB、磷酸二酯酶4(PDE-4)、肥大細(xì)胞類(lèi)胰蛋白酶、NO、腺噪呤核香、IKK2、GATA3、ICAM-1、VCAM-1和ICOS。本發(fā)明的藥物組合物可包括"治療有效量,,或"預(yù)防有效量"的本發(fā)明抗體或抗體部分。"治療有效量,,是指在劑量下且歷時(shí)必要時(shí)段有效于取得所需治療結(jié)果的量。可由本領(lǐng)域技術(shù)人員測(cè)定治療有效量的抗體或抗體部分且其可根據(jù)例如個(gè)體疾病病況、年齡、性別和體重的因素和抗體或抗體部分引起所需個(gè)體反應(yīng)的能力而變。治療有效量也為治療有利效應(yīng)優(yōu)于抗體或抗體部分的任何毒性或不利影響的劑量。"預(yù)防有效量,,是指在劑量下且歷時(shí)必要時(shí)段有效于取得所需預(yù)防結(jié)果的量。通常,由于預(yù)防劑量在疾病前或在疾病早期時(shí)用于患者,因此預(yù)防有效量將小于治療有效量。給藥方案可經(jīng)調(diào)整以提供最優(yōu)選所需反應(yīng)(例如治療或預(yù)防反應(yīng))。例如,可施用單次劑量,可隨時(shí)間施用幾個(gè)分次劑量或所述劑量可如治療情況的緊急狀態(tài)所指示適當(dāng)降低或增加。為便于給藥和劑量一致性,以劑量單位形式配制胃腸外組合物尤其有利。如本文中所用劑量單位形式是指適用作用于待治療的哺乳動(dòng)物個(gè)體的單位劑量的物理上離散單位;各單位含有預(yù)定量的活性化合物,其與所需藥物載體相有關(guān)經(jīng)計(jì)算以產(chǎn)生所需治療作用。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格由以下指示且直接依賴(lài)于(a)活性化合物的獨(dú)特特征和待實(shí)現(xiàn)的特定治療或預(yù)的限制。"—、'二、、、本發(fā)明的抗體或抗體部分的治療或預(yù)防有效量的例示性、非限制范圍為0.1-20mg/kg,更優(yōu)選l-10mg/kg。應(yīng)注意劑量值可隨待減輕的病癥類(lèi)型和嚴(yán)重程度而變。應(yīng)進(jìn)一步理解對(duì)于任何特定個(gè)體,特定給藥方案應(yīng)隨時(shí)間根據(jù)個(gè)體需要和施用或監(jiān)督組合物施用的人的專(zhuān)業(yè)診斷而調(diào)節(jié),且本文闡述的劑量范圍僅為例示性的且不欲限制所主張組合物的范圍或?qū)嵺`。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員易于顯而易見(jiàn),在不背離本發(fā)明范圍或本文中公開(kāi)的實(shí)施方案的情況下,本文中描述的本發(fā)明方法的其它適當(dāng)改進(jìn)和改適為明顯的且可使用適當(dāng)?shù)刃镞M(jìn)行。現(xiàn)已詳細(xì)描述本發(fā)明,參考以下實(shí)例其將更清楚的理解,僅出于說(shuō)明目的包括這樣的實(shí)例且其不欲限制本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例1:產(chǎn)生和分離抗人類(lèi)IL-13單克隆抗體實(shí)施例1.1:鑒定抗人類(lèi)IL-13抗體的測(cè)定除非另作說(shuō)明,否則在整個(gè)實(shí)施例1中,以下測(cè)定用以鑒定和表征抗人類(lèi)IL-13抗體。實(shí)施例l.l.A:ELISA篩選結(jié)合人類(lèi)IL-13的抗體的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定進(jìn)行如下。120在4攝氏度用50jiL/孔的在磷酸鹽緩沖生理食鹽水(PBS)中的5|ng/ml特異性山羊抗小鼠IgGFc(Pierce#31170,Rockford,IL)將ELISA平板(CorningCostar,Acton,MA)涂布過(guò)夜。以含有0.05%Tween-20的PBS將平板洗滌一次。在室溫下通過(guò)添加200)nL/孔的稀釋為PBS(BioRad#170-6404,Hercules,CA)中2%的阻斷溶液將平板阻斷1小時(shí)。阻斷后,以含有0.05%Tween-20的PBS將平板洗滌一次。將50微升/孔的稀釋于含有0.10/。牛血清白蛋白(BSA)(Sigma,St.Louis,MO)的PBS中的小鼠血清或雜交瘤上清液添加至如上所述制備的ELISA平板且在室溫下培育1小時(shí)。以含有0.05%Tween-20的PBS將各孔洗滌3次。將稀釋為含有0.1%BSA的PBS中100ng/ml的50微升生物素化重組純化的人類(lèi)IL-13變體(RllOQ)添加至各孔且在室溫下培育1小時(shí)。以含有0.05%Tween-20的PBS將各平板洗滌3次。于含有0.1%BSA的PBS中按1:20000稀釋鏈霉抗生物素蛋白HRP(Pierce#21126,Rockland,IL);添加50^L/孔且在室溫下將平板培育1小時(shí)。以含有0.05%Tween-20的PBS將各平板洗滌3次。將50微升TMB溶液(Sigma弁T0440,StLouis,MO)添加至各孔且在室溫下培育10分鐘。通過(guò)添加1N;危酸停止反應(yīng)。在450nm波長(zhǎng)下分光光度計(jì)讀取平板。實(shí)施例l.l.B:使用BIACORE技術(shù)的親和力測(cè)定BIACORE測(cè)定(Biacore,Inc,Piscataway,NJ)以動(dòng)態(tài)測(cè)定結(jié)合、分解速率常數(shù)來(lái)測(cè)定抗體的親和力。在25。C以Biacore3000測(cè)試儀(BiacoreAB,Uppsala,Sweden)使用流動(dòng)HBS-EP(IOmMHEPES[pH7.4],150mMNaCl,3mMEDTA和0.005%表面活性劑P20)通過(guò)表面等離子體共振基測(cè)定來(lái)測(cè)定抗體與重組純化的人類(lèi)IL-13或重組純化的人類(lèi)IL-13變體(R110Q)的結(jié)合。所有化學(xué)品由BiacoreAB(Uppsala,Sweden)或者自文中描述的不同來(lái)源獲得。使用標(biāo)準(zhǔn)胺偶聯(lián)試劑盒根據(jù)制備商的指導(dǎo)和程序,在25ing/ml將稀釋于10mM乙酸鈉(pH4.5)中的約5000RU山羊抗小鼠IgG(Fc力片段特異性多克隆抗體(PierceBiotechnologyInc,Rockford,IL)直接貫穿CM5研究級(jí)生物傳感器芯片固定。以乙醇胺阻斷生物傳感器表面上未反應(yīng)的部分。流動(dòng)池2和4中的修飾的羧曱基葡聚糖表面用作反應(yīng)表面。流動(dòng)池1和3中無(wú)山羊抗小鼠IgG的未修飾羧曱基葡聚糖用作參考表面。對(duì)于動(dòng)力學(xué)分析,借助于Biaevaluation4.0.1軟件將源自1:1朗繆爾(Langmuir)結(jié)合模型的速率方程同時(shí)擬合至8次注射的締合和解離階段(使用全擬合分析)。將純化的抗體稀釋于HEPES-緩沖鹽水中以便通過(guò)山羊抗小鼠IgG特異性反應(yīng)表面捕捉。在反應(yīng)基質(zhì)上以5pl/min的流動(dòng)速率注射捕捉為配體的小鼠抗體(25)Lig/ml)。在25pl/min的連續(xù)流動(dòng)速率下,測(cè)定結(jié)合和分解速率常數(shù)k。n(單位M"s")和k。W單位s")。通過(guò)在范圍為10-200nM的10個(gè)不同抗原濃度下進(jìn)行動(dòng)力結(jié)合測(cè)定來(lái)獲得速率常數(shù)。隨后通過(guò)下式由動(dòng)力速率常數(shù)計(jì)算小鼠抗體與重組純化的人類(lèi)IL-13或重組純化的人類(lèi)IL-13之間的反應(yīng)的平衡解離常數(shù)(單位M):KD=k。ff/k。n。結(jié)合記錄為時(shí)間的函數(shù)且計(jì)算動(dòng)力速率常數(shù)。在此測(cè)定中,可測(cè)定到快至ioSm-V1的結(jié)合速率常數(shù)和慢至l(T6s"的分解速率常數(shù)。實(shí)施例1丄C:抗人類(lèi)IL-13抗體的功能活性為檢查本發(fā)明的抗人類(lèi)IL-13抗體的功能活性,將抗體用于下列測(cè)定抗體抑制il-13活性的能力的測(cè)定中。實(shí)施例1.1.CIA-549生物測(cè)定抗人類(lèi)IL-13抗體抑制A-549細(xì)胞經(jīng)人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)產(chǎn)生TARC(CCL-17)的能力分析如下。在笫一天將A-549細(xì)胞接種于96孔平板(2E5細(xì)胞/孔)RPMI生長(zhǎng)培養(yǎng)基(具有10%FBS)中。在第二天,以含有400ng/mlrhTNF的新鮮RPMI生長(zhǎng)培養(yǎng)基(IOOpl/孔)替換介質(zhì)。其間,在37。C下以于微量滴定板(U型底,96孔,Costar)中的100|liLRPMI完全培養(yǎng)基中的10ng/ml重組純化的人類(lèi)IL-13或IL-13變體將各種濃度的免疫小鼠血清、鼠類(lèi)雜交瘤上清液或純化的抗人類(lèi)IL-13抗體預(yù)培育1小時(shí)。隨后向TNF處理的A-549細(xì)胞添加抗體加重組純化的人類(lèi)IL-13混合物(IOOnl/孔),最終體積為200pl/孔(最終IL-13和TNF濃度分別為5ng/ml和200ng/ml)且在37。C下培育18小時(shí)。培育后,自各孔抽取150|liL不含細(xì)胞的上清液且使用人類(lèi)TARCELISA(R&DSystemsCat#DDNOO)測(cè)定所產(chǎn)生的人類(lèi)TARC的含量。A-549細(xì)胞也對(duì)包括獼猴、小鼠、大鼠和羊的其它物種的IL-13作出應(yīng)答,其ED5o值與人類(lèi)IL-13相似。因此,其使用相同實(shí)驗(yàn)方案用于交叉反應(yīng)分析其它物種的IL-13的抗hIL-13mAb。122實(shí)施例1.2:產(chǎn)生抗人類(lèi)IL-13單克隆抗體抗人類(lèi)IL-13小鼠單克隆抗體獲得如下實(shí)施例1.2.A:用人類(lèi)IL-13抗原使小鼠免疫在第1天將與完全弗氏輔助劑或免疫測(cè)定輔助劑(Qiagen,Valencia,CA)混合的20微克重組純化的人類(lèi)IL-13變體(Peprotech)皮下注射于5只6-8周齡Balb/C、5只C57B/6小鼠和5只AJ小鼠中。在第24、38和49天,將與弗氏不完全輔助劑或免疫測(cè)定輔助劑混合的20微克重組純化的人類(lèi)IL-13變體皮下注射于同一小鼠中。在第84天或第112天或第144天,以1重組純化的人類(lèi)IL-13變體靜脈內(nèi)注射小鼠。實(shí)施例1.2.B:產(chǎn)生雜交瘤根據(jù)Kohler,G.和Milstein1975,Nature,256:495中描述的確立方法,以5:1的比率將由實(shí)施例1.2.A描述的免疫小鼠獲得的脾細(xì)胞與SP2/0-Ag-14細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤。將融合產(chǎn)物以每孔2.5xl(^脾臟細(xì)胞的密度平皿接種于于96孔平板中含有重氮絲氨酸和次黃噤呤的選擇介質(zhì)中。融合后7至10天,觀(guān)察到肉眼可見(jiàn)雜交瘤集落。通過(guò)EL1SA測(cè)試來(lái)自含有雜交瘤集落的各孔上清液中IL-13變體的抗體的存在(如實(shí)施例1.1.A中所述)。隨后測(cè)試顯示IL-13變體特異活性的上清液的在TARC的A-549生物測(cè)定中和IL-13變體和IL-13野生型的能力(如實(shí)施例1.1.C中所述)。實(shí)施例鑒定和表征抗人類(lèi)IL-13單克隆抗體按比例增加產(chǎn)生結(jié)合IL-13變體的抗體、根據(jù)實(shí)施例1.2.B和1.2.C產(chǎn)生且能夠特異性地結(jié)合IL-13變體的雜交瘤和尤其在A-549生物測(cè)定中具有5nM或小于5nM的IC5o值的,且通過(guò)有限稀釋進(jìn)行克隆。在含有10。/。低IgG胎牛血清(Hyclone弁SH30151,Logan,UT)的介質(zhì)中擴(kuò)充雜交瘤細(xì)胞。平均收集250mL各雜交瘤上清液(獲自單克隆群體)、濃縮且如Harlow,E.和Lane,D.1988"Antibodies:ALaboratoryManual"中所述通過(guò)蛋白A親和層析純化。如實(shí)施例1.1.C中所述使用123A-549生物測(cè)定測(cè)定純化的mAb抑制IL-13活性的能力。表7顯示A-549生物測(cè)定中17個(gè)單克隆抗體的1(350值。表7:A-549生物測(cè)定中IL-13通過(guò)抗IL-13mAb的中和鼠類(lèi)單克隆同種型平均ICso(nM)平均ICso(nM)平均ICso(nM)抗體人類(lèi)IL-13野生型人類(lèi)IL-13變體獼猴IL-134A8IgG1入ND2.70E-10ND6C8IqGlK7.20E-103.40E-101.61E-105F1IgGlK9.70E-119.00E-111.88E-091B6IgGlK8.40E-102.40E-105.21E-105G1IqGlK7.60E-114.80E-11''6.12E-1029G5IgG2aic2.90E-102.00E-104.39E-0933C3IqGlK1.50E-101.00E-108.47E-1025C8IgG1(c2.30E-102.60E-101.88E-1013C5IqGlK1.90E-101.70E-105.00E-093E5IgG2aK1.30E-103.00E-101.61E-103H7IgG2aKNA5.80E-107.97E-105D3IqG1k7.05E-102.90E-102.91E-108B6IgGlKND4.80E-103.95E-1021D9IgG2bx6.82E-111.36E-103.40E-1014B2IgGlKND4.36E-10NA9C11IgGlK1.06E-101.70E-106.40E-1022D10IgGlK2.84E-105.40E-106.11E-09如實(shí)施例1丄B中所述使用表面等離子體共振(Biacore⑧)測(cè)定單克隆抗體對(duì)重組純化的人類(lèi)IL-13變體和野生型的結(jié)合親和力。表8顯示上文所述的18種單克隆抗體對(duì)人類(lèi)IL-13的親和力。124表8:抗IL-13mAb對(duì)人類(lèi)野生型和變體IL-13的親和力<table>tableseeoriginaldocumentpage125</column></row><table>實(shí)施例1.2.C.1:鼠類(lèi)單克隆抗人類(lèi)IL-13抗體的物種特異性為測(cè)定上文所述的17種單克隆抗體是否識(shí)別鼠類(lèi)IL-13,通過(guò)以5嗎/ml山羊抗小鼠IgG、Fc片段特異性抗體(Pierce#31170,Rockland,IL)涂布ELISA平板來(lái)設(shè)定間接ELISA。制備范圍在含有0.1%BSA的PBS中0.1至100ng/ml的各種濃度的鼠類(lèi)抗人類(lèi)IL-13mAb;將50^各抗體稀釋添加至涂布的ELISA平板且在室溫下培育1小時(shí)。以含有0.05%Tween-20的PBS將各孔洗滌3次。于含有0.1%BSA的PBS中將重組生物素化小鼠IL-13(R&DSystems)稀釋為0.1pg/ml;添加50孔且在室溫下將平板培育1小時(shí)。以含有0.05%Tween-20的PBS將各孔洗滌3次。于含有0.1%BSA的PBS中按1:20000稀釋鏈霉抗生物素蛋白HRP(Pierce#21126,Rockland,IL);添加50mL/孔且在室溫下將平板培育1小時(shí)。以含有0.05%Tween-20的PBS將各平板洗滌3次。將50微升TMB溶液(Sigma#T0440,St.Louis,MO)添加至各孔且在室溫下培育10分鐘。通過(guò)添加1N石危酸停止反應(yīng)。在450nm波長(zhǎng)下分光光度計(jì)讀取平板。間接ELISA的結(jié)果指示mAb3H7能夠結(jié)合mIL-13。在后續(xù)生物測(cè)定中顯示3H7可以以劑量依賴(lài)型方式抑制mIL-13刺激的TARC產(chǎn)生,ICs。值為2.4nM。Biacore分析也證明3H7與mlL-13陽(yáng)性結(jié)合,Ko為12nM。表8中的所有其它mAb并未顯示與小鼠IL-13的任何陽(yáng)性結(jié)合。在A-548生物測(cè)定中也測(cè)定抗hIL-13mAb抗非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)(獼猴)IL-13和羊IL-13的中和效能。為產(chǎn)生犬和羊IL-13,使用基于人類(lèi)IL-13序列的退化引物通過(guò)染色體組DNA模板的PCR獲得各蛋白的cDNA。隨后將重組犬和羊IL-13蛋白表達(dá)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染COS細(xì)胞中。在所有功能研究中,也平行產(chǎn)生野生型人類(lèi)IL-13作為對(duì)照。A-549細(xì)胞以與人類(lèi)IL-13類(lèi)似的ED5o對(duì)犬和羊IL-13作出應(yīng)答。多數(shù)mAb中和犬IL-13的活性,證明對(duì)犬IL-13的交叉反應(yīng)性(表7)。然而,抗體皆未顯示顯著羊IL-13中和。實(shí)施例1.2.C.2:鼠類(lèi)單克隆抗人類(lèi)IL-13抗體阻斷IL-13與IL-13受體(IL-13Ral和IL-13Ra2)的結(jié)合IL-13活性經(jīng)由由IL-13Ral與IL-4Ra鏈組成的受體復(fù)合體介導(dǎo)。細(xì)胞因子首先在細(xì)胞表面上與IL-13Ral進(jìn)行相對(duì)低親和力相互作用。IL-13/IL-13Ral復(fù)合體隨后招募IL-4Ra以形成完整IL-13受體,其以高親和力與其配體(IL-13)結(jié)合(Zurawski等人(1993)EMBOJ.12:2663;Zurawski等人(1995)J.Biol.Chem.270:23869)。隨后IL-13與高親和力受體的結(jié)合經(jīng)由包括轉(zhuǎn)錄(JAK-STAT)途徑的Janus激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白和活化因子的IL-4Ra鏈發(fā)送下游信號(hào),例如經(jīng)由STAT6磷酸化,其可作為對(duì)IL-13的最初細(xì)胞反應(yīng)的一個(gè)監(jiān)控(前述Murata等人)。存在另一IL-13結(jié)合受體IL-13Ra2鏈(IL-13Ra2),其以高親和力(0.25-1.2nM)與IL-13結(jié)合(Caput等人,1996J.Biol.Chem.271,16921-16926;Donaldson等人,1998J.Immunol.161,2317-2324)。已知無(wú)其它受體分子包括在IL-13/IL-13Ra2復(fù)合體中。最初認(rèn)為IL-13Ra2充當(dāng)非信號(hào)傳導(dǎo)"誘辨"受體。然而,后來(lái)發(fā)現(xiàn)其可與IL-13結(jié)合且經(jīng)由AP-1途徑傳輸信號(hào),使得在包括巨噬細(xì)胞的某些細(xì)胞類(lèi)型中TGF-卩產(chǎn)生,其接著導(dǎo)致肺部纖維化(Fichtner-Feigl.2006NatMed12:99-106)。因此,IL-13Ral/IL-4R復(fù)合體與IL-13Ra2途徑造成哮喘和其它IL-13介導(dǎo)的疾病的總病理生理學(xué)。例如表位作圖、受體結(jié)合測(cè)定、尺寸排阻層析法(SEC)和另一BIACORE分析的數(shù)種方法用以闡明本發(fā)明的抗IL-13抗體與人類(lèi)IL-13之間的相互作用。為測(cè)定上文所述的單克隆抗體是否能夠阻斷IL-13與IL-13受體(IL-13Ral和IL-13Ra2)的結(jié)合,受體結(jié)合ELISA開(kāi)展如下。在4。C下以于100nl/孔涂布緩沖液(碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖劑,Pierce)中的4|tig/ml重組IL-13Ral/Fc或IL-13Ra2/Fc(R&DSystems)涂布高結(jié)合96孔ELISA平板。16小時(shí)后,通過(guò)在接收器中輕打平板內(nèi)含物來(lái)除去涂布溶液,且以Superblock阻斷緩沖液(240jxl/孔)(Pierce)洗滌且阻斷平板4次。添加抗IL13mAb(自40jig/ml1:4系列稀釋?zhuān)?0jil/孔)和生物素-IL-13(50ili1/孑L,對(duì)于hlL-13Ral/Fc最終濃度為5nM且對(duì)于hlL-13Ra2/Fc0.5nM)且在室溫下(RT)培育2小時(shí)。以300pl0.1%PBST將平板洗滌5次,且隨后添加100ili1的按1:5000稀釋的小鼠抗-生物素MAb(JacksonImmunosciences)且在RT下培育45分鐘。以300pl0.1%PBST將平板再洗滌5次,接著添加TMB底物試劑(IOOiul/孔,Pharmingen);發(fā)展5min,且通過(guò)添加50pl2MH2S04(VWR)停止。在450nm通過(guò)分光光度測(cè)定法測(cè)定0D。另外,也通過(guò)受體結(jié)合測(cè)定使用IL-13Ra2轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞評(píng)估m(xù)Ab的受體阻斷特性。如先前所述,以125I(Amersham,ArlingtonHeights,IL)使用IODO-GEN試劑(Pierce,Rockford,IL)標(biāo)記重組人類(lèi)IL-13(ObiriNI等人,(1995)JBiolChem.270:8797-8804)。據(jù)估計(jì)放射性標(biāo)記的IL-13的比活性為158inCi/(ig蛋白。如A-549生物測(cè)定所評(píng)估,標(biāo)記的IL-13顯示與未標(biāo)記IL-13類(lèi)似的生物活性。對(duì)于結(jié)合實(shí)驗(yàn),以人類(lèi)IL-13Ra2通過(guò)脂質(zhì)胺2000(Invitrogen)瞬間轉(zhuǎn)染COS細(xì)胞且培育48小時(shí)。在4。C在1未標(biāo)記IL-13存在或不存在條件下,以1.0nM125I-IL-13將轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞(5xl()s個(gè)細(xì)胞于100(iL結(jié)合緩沖液中含有0.2%人血清白蛋白和10mmolHEPES的RPMI1640)培育2小時(shí)。通過(guò)離心經(jīng)由鄰苯二甲酸酯油梯度將細(xì)胞結(jié)合的125I-IL-13與未結(jié)合1251-化-13分離,且以y粒子計(jì)數(shù)管(Wallac,Gaithersburg,MD)測(cè)定放射能。對(duì)于抗體置換測(cè)定,如上所述在增加濃度(高達(dá)50pg/ml)的抗IL-13抗體存在或不存在條件下,以^I-IL-13(1.0nM)培育轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞。2種形式的受體結(jié)合測(cè)定均證明以下首先13C5和9C11阻斷IL-13與IL-13Ral結(jié)合;其次,13C5強(qiáng)烈阻斷IL-13與IL-13Ra2結(jié)合(在細(xì)胞表面RBA與RBELISA中ICs。值為約1-3nM),而9C11以低效能阻斷IL-13與IL-13Ra2結(jié)合(IC5o值〉10nM);且再次,5G1與3E5127未能阻斷IL-13與IL-13Ral或IL-13Ra2結(jié)合。也分析3種其它抗IL-13抗體BAK.502G9(CATPCTWO2005/007699)、mAbl3.2(WyethPCTWO2005/123126A2)和MJ2-7(WyethPCTWO2006/0073148Al)在受體結(jié)合ELISA與細(xì)胞表面RBA中阻斷人類(lèi)IL-13與人類(lèi)IL-13Ra2結(jié)合的能力??贵wmAb13.2并不阻斷IL-13與IL-13Ral或IL-13Ra2結(jié)合。BAK502G9和MJ2-7能夠阻斷IL-13與IL-13Ral結(jié)合;然而其在以高達(dá)50^g/ml(330nM)的抗體濃度阻斷IL-13與IL-13Ra2結(jié)合中顯示低效能。也在抗IL-13mAb存在下通過(guò)BIAC0RE分析IL-13與IL-13Ral/a2之間的相互作用。以幾個(gè)形式進(jìn)行此分析。首先,在存在且缺少抗IL-13mAb條件下IL-13Ral/Fc與Biacore芯片結(jié)合,且IL-13溢出芯片。MAb13C5和9C11尤其能夠阻斷IL-13與IL-13Ral結(jié)合,而5G1和3E5未能抑制IL-13與IL-13Ral結(jié)合,與受體結(jié)合測(cè)定一致。其次,IL-4R與BIACORE芯片結(jié)合,且與IL-13Ral預(yù)結(jié)合的IL-13復(fù)合體溢出芯片。在無(wú)抗IL-13mAb存在下,證明形成三分子復(fù)合體。然而,向與IL-13Ral預(yù)結(jié)合的IL-13的混合物添加抗IL-13抗體5G1預(yù)防IL-4R結(jié)合在芯片上。此指示即使5G1不能阻斷IL-13與IL-13Ral結(jié)合,其可阻斷IL-13結(jié)合至IL-4R的結(jié)合,為其IL-13中和活性提供機(jī)械基礎(chǔ)。這些觀(guān)測(cè)結(jié)果通過(guò)尺寸排阻層析法(SEC)進(jìn)一步確認(rèn),而觀(guān)察到5G1而非13C5的雜三聚復(fù)合體(mAb-IL-13-IL-13Ral/Fc)。使用蛋白酶處理mAb-IL-13復(fù)合體進(jìn)行后續(xù)表位作圖研究,接著質(zhì)量規(guī)格分析指示以下首先5G1與包括N末端ll-aa肽(GPVPPSTALRE)、覆蓋已顯示與IL-4R相互作用(Moy等人,2001JMolBiol.310:219和Horita等人,(2001)JMolBio1.310:231)的螺旋A區(qū)域的一部分的IL-13殘基結(jié)合。其次,抗體9C11與介于螺旋C與螺旋D之間的區(qū)域(VSAGQFSSLHVR)相互作用;且再次,抗體13C5與包括覆蓋螺旋D(VRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGR,對(duì)應(yīng)于SEQIDNO1的氨基酸104-130)的區(qū)域的IL-13殘基相互作用。已顯示螺旋D與IL-13受體相互作用(Moy等人,2001JMolBiol.310:219;Horita等人,2001JMolBiol.310:231;和Madhankumar等人2002JBC277:43194)。由于13C5比獼猴IL-13(KD=1800pM)更強(qiáng)烈地結(jié)合人類(lèi)IL-13變體(1^=50pM),且在此可能的13C5表位區(qū)域中人類(lèi)IL-13變體與獼猴IL-13之間的唯一序列128差異為位置120處人類(lèi)IL-13的L,而犬IL-13的V,吾人產(chǎn)生V120L突變體犬IL-13且測(cè)試此突變對(duì)13C5是否將具有相對(duì)于野生型犬IL-13增加的結(jié)合親和力?;贐iacore和生物測(cè)定結(jié)果,13C5對(duì)V120L突變體犬IL-13的結(jié)合親和力以及中和效能等于對(duì)野生型犬IL-13的結(jié)合親和力以及中和效能,指示C末端區(qū)域中位置120的此V/L差異并未促進(jìn)對(duì)于人類(lèi)IL-13變體相對(duì)于犬IL-13的13C5親和力差異,且C末端區(qū)域外須存在其它促進(jìn)13C5對(duì)人類(lèi)和犬IL-13的差示結(jié)合親和力的殘基。此與通過(guò)西方轉(zhuǎn)漬分析13C5并未識(shí)別變性人類(lèi)IL-13的觀(guān)測(cè)結(jié)果一致,指示人類(lèi)IL-13上13C5的結(jié)合表位是強(qiáng)烈構(gòu)象的。結(jié)合和表位作圖研究指示5G1并未抑制IL-13與IL-13Ral相互作用,而破壞IL-13/IL-13Ral與IL-4Ra的相互作用。認(rèn)為此破壞干擾功能IL-13信號(hào)傳導(dǎo)復(fù)合體的形成。這些觀(guān)測(cè)結(jié)果提供在例如A-549細(xì)胞的IL-13Ral/IL-4R介導(dǎo)的系統(tǒng)中中和此抗體活性的理論模型。相反,13C5阻斷IL-13與IL-13Ral和IL-13Ra2結(jié)合。有趣地,即使9C11能夠阻斷IL-13與IL-13Ral結(jié)合,其僅顯示部分(或低效能)抑制IL-13與IL-13Ra2結(jié)合。盡管IL-13Ral和Ra2采用類(lèi)似三維折疊和IL-13結(jié)合取向,其具有低序列同一性且因此負(fù)責(zé)IL-13結(jié)合的特異性殘基可變(Anma2005JBC280:24915;和Madhankumar等人2002JBC277:43194)。因而,IL-13上的結(jié)合IL-13Ral和IL-13Ra2的特異性殘基可不同,其可解釋9C11的差示受體阻斷特性。上文所述的受體結(jié)合測(cè)定、表位作圖、Biacore和生物測(cè)定共同指示中和抗IL-13抗體可經(jīng)由以下^/L制抑制IL-13相關(guān)的活性1)通過(guò)在與受體結(jié)合IL-13Ral和IL-13Ra2有關(guān)的區(qū)域中與IL-13相互作用抑制IL-13與IL-13Ral和IL-13Ra2結(jié)合。所述抗體的一實(shí)施例為13C5。這樣的抗體將經(jīng)由IL-13Ral/IL-4R復(fù)合體和IL-13Ra2抑制IL-13信號(hào)傳導(dǎo)。2)并未抑制IL-13與IL-13Ral或IL-13Ra2結(jié)合。然而,抗體抑制與IL-4受體的相互作用,因此抑制IL-13經(jīng)由IL-13Ral/IL-4R復(fù)合體傳輸信號(hào)。所述抗體不可抑制IL-13Ra2傳輸信號(hào)。這樣的抗體的實(shí)施例為5G1和mAbl3.2(WyethPCTWO2005/123126)。3)抑制IL-13與IL-13Ral結(jié)合,但低效地抑制IL-13與IL-13Ra2結(jié)合。此可由于下列理由而發(fā)生a)表位與IL-13Ral結(jié)合有關(guān)但與129IL-13Ra2結(jié)合無(wú)關(guān),或與IL-13Ra2結(jié)合不強(qiáng)烈相關(guān)的區(qū)域。一實(shí)施例為9C11;b)親和力由于IL-13Ra2具有比IL-13Ral對(duì)IL-13更高的親和力,因此在治療抗體的生理濃度下,低親和力抗體可能阻斷IL-13與IL-13Ral結(jié)合,而不阻斷與IL-13Ra2結(jié)合。一實(shí)施例為BAK502G9,如Biacore所評(píng)估其對(duì)重組野生型人類(lèi)IL-13顯示2.11nM親和力(CATPCTWO2005/007699)。另一實(shí)例為MJ2-7,如Biacore所評(píng)估其對(duì)重組野生型人類(lèi)IL-13顯示1.4nM親和力且對(duì)猴IL-13顯示更高親和力(43pM)(WyethPCTWO2006/0073148Al)。因親和力差異,此mAb可有效地抑制猴IL-13與IL-13Ra2結(jié)合;然而其以更低效能抑制人類(lèi)IL-13與相同受體結(jié)合。mAbBAK502G9和MJ2-7具有類(lèi)似表位(CATPCTWO2005/007699和WyethPCTWO2006/0073148Al)且如竟?fàn)嶦LISA所評(píng)估其竟?fàn)幣cIL-13結(jié)合。簡(jiǎn)言之,BAK502G9經(jīng)固定在ELISA平板上,接著洗滌且阻斷。隨后在各種濃度的MJ2-7(0.2ng/ml至20pg/ml)存在下將生物素化人類(lèi)IL-13(10ng/ml)添加至平板,接著洗滌且使用HRP-結(jié)合的抗生物素抗體檢測(cè)。此研究證明MJ2-7劑量依賴(lài)型與BAK502G9竟?fàn)幗Y(jié)合至人類(lèi)IL-13。陰性對(duì)照IgG并未顯示與BAK502G9竟?fàn)?。?shí)施例1.2.D:測(cè)定各鼠類(lèi)抗人類(lèi)IL-13mAb的可變域的氨基酸序列對(duì)于各氨基酸序列測(cè)定,通過(guò)離心分離約10><106雜交瘤細(xì)胞且遵循制備商的指導(dǎo)經(jīng)以Trizol處理分離總RNA(GibcoBRL/Invitrogen,Carlsbad,CA)。4吏用SuperscriptFirst-StrandSynthesisSystem(Invitrogen,Carlsbad,CA)按制備商的指導(dǎo)使總RNA經(jīng)受第一鏈DNA合成。寡(dT)用以引發(fā)第一鏈合成以選擇聚(A)+RNA。隨后通過(guò)PCR以經(jīng)設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增鼠類(lèi)免疫球蛋白可變域的引物(Ig-引物組,Novagen,Madison,WI)擴(kuò)增第一鏈cDNA產(chǎn)物。在瓊脂糖凝膠上解析PCR產(chǎn)物、切除、純化且隨后以TOPO克隆試劑盒次克隆于pCR2.1-TOPO載體(Invitrogen,Carlsbad,CA)中且經(jīng)轉(zhuǎn)化于TOP10化學(xué)上勝任大腸桿菌(Invitrogen,Carlsbad,CA)中。對(duì)轉(zhuǎn)化克隆進(jìn)行集落PCR以鑒定含有插入物的克隆。使用QIAprepMiniprep試劑盒(Qiagen,Valencia,CA)由含有插入物的克隆分離質(zhì)粒DNA。對(duì)質(zhì)粒中的插入物的2股進(jìn)行定序,以使用M13前置和M13反置引物(FermentasLifeSciences,Hanover130MD)測(cè)定可變重鏈或可變輕鏈DNA序列。實(shí)施例1.2.C中描述的17個(gè)單克隆抗體的可變重鏈和可變輕鏈序列描述在表5中。實(shí)施例2:重組抗人類(lèi)IL-13抗體實(shí)施例2.1:構(gòu)建且表達(dá)重組嵌合抗人類(lèi)IL-13抗體通過(guò)在細(xì)菌中同源性重組,由編碼含有2個(gè)鉸鏈區(qū)氨基酸突變的人類(lèi)IgGl恒定區(qū)的cDNA片段置換編碼鼠類(lèi)抗人類(lèi)IL-13單克隆抗體5G1、13C5、9C11、21D9和3H7的重鏈恒定區(qū)的DNA。這些突變?yōu)槲恢?34(EU編號(hào))的亮氨酸至丙氨酸改變和位置235的亮氨酸至丙氨酸改變(Lund等人,1991,J.Immunol.,147:2657)。由人類(lèi)K恒定區(qū)置換這些抗體的每一個(gè)的輕鏈恒定區(qū)。通過(guò)共轉(zhuǎn)染連接在pBOS表達(dá)質(zhì)粒中的嵌合重鏈和輕鏈cDNA,將全長(zhǎng)嵌合抗體瞬時(shí)表達(dá)于COS細(xì)胞中(Mizushima和Nagata,NucleicAddsResearch1990,第18巻,第5322頁(yè))。通過(guò)蛋白A瓊脂糖層析純化含有重組嵌合抗體的細(xì)胞上清液,且通過(guò)添加酸緩沖液洗脫結(jié)合的抗體。中和抗體且透析到PBS中。隨后如實(shí)施例1丄C2和1.1.C3中所述測(cè)試純化的嵌合抗人類(lèi)IL-13單克隆抗體的抑制A-549細(xì)胞經(jīng)IL-13誘導(dǎo)產(chǎn)生TARC的能力。表12顯示3種嵌合抗體的A-549生物測(cè)定的ICso值。表9:A-549生物測(cè)定中rhIL-13wt通過(guò)抗IL-13嵌合抗體的中和<table>tableseeoriginaldocumentpage131</column></row><table>實(shí)施例2.2:構(gòu)建和表達(dá)人源化抗人類(lèi)IL-13抗體實(shí)施例2.2.1:選擇人類(lèi)抗體框架使用載體NT1軟件相對(duì)于44人免疫球蛋白種系可變重鏈或46種系可變輕鏈序列(獲自NCBIIgBlast網(wǎng)站http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/retrieveig.html.)分另Jt匕只十各鼠類(lèi)可變重鏈和可變輕鏈基因序列(如表3中所述)。人源化基于氨基酸序列同源性、CDR聚類(lèi)分析、表達(dá)的人類(lèi)抗體的使用頻率和關(guān)于人類(lèi)抗體的晶體結(jié)構(gòu)可得到的信息??紤]到對(duì)抗體結(jié)合、VH-VL配對(duì)和其它因素的可能的影響,若鼠類(lèi)和人類(lèi)框架殘基不同,除數(shù)種例外,則使鼠類(lèi)殘基突變?yōu)槿祟?lèi)殘基?;谂c鼠類(lèi)抗體可變域的實(shí)際氨基酸序列具有高度同源性(也即序列相似性)人類(lèi)種系抗體序列或其亞組的分析設(shè)計(jì)其它人源化策略。使用同源性建模以鑒定經(jīng)預(yù)測(cè)對(duì)于抗體組合位點(diǎn)(CDR)的結(jié)構(gòu)關(guān)鍵的鼠類(lèi)抗體序列的獨(dú)特殘基。同源性建模為計(jì)算法,藉以產(chǎn)生蛋白的近似三維坐標(biāo)。初始坐標(biāo)和其進(jìn)一步細(xì)化的指導(dǎo)的源為第二蛋白,參考蛋白,其的三維坐標(biāo)已知且其的序列與第一蛋白的序列有關(guān)。2種蛋白的序列之間的關(guān)系用以在參考蛋白與需坐標(biāo)的蛋白(標(biāo)靶蛋白)之間產(chǎn)生對(duì)應(yīng)。將參考和標(biāo)靶蛋白的初始序列與直接自參考蛋白轉(zhuǎn)移至標(biāo)粑蛋白的2個(gè)蛋白的相同部分的坐標(biāo)對(duì)準(zhǔn)。由通用結(jié)構(gòu)模板建構(gòu)2個(gè)蛋白的自(例如)殘基突變、插入或缺失的錯(cuò)配部分的坐標(biāo),且精制能量以確保與已轉(zhuǎn)染模型坐標(biāo)一致。此計(jì)算蛋白結(jié)構(gòu)可另外精制或直接用于建模研究中。自此說(shuō)明應(yīng)清楚模型結(jié)構(gòu)的質(zhì)量由參考與標(biāo)靶蛋白相關(guān)且序列對(duì)比構(gòu)建的精度的論點(diǎn)的準(zhǔn)確度決定。對(duì)于鼠類(lèi)序列5G1、13C5和9C11,BLAST研究與視覺(jué)檢查的組合用以鑒定適當(dāng)參考結(jié)構(gòu)。認(rèn)為參考與標(biāo)靶氨基酸序列之間25%的序列同一性為嘗試同源性建模練習(xí)所必需的最小值。手動(dòng)構(gòu)建序列對(duì)比且以程序Jackal產(chǎn)生模型坐標(biāo)(參見(jiàn)Petrey,D.,Xiang,Z.,Tang,C丄.,Xie,L.,Gimpelev,M.,Mitros,T.,Soto,C.S.,Goldsmith-Fischman,S.,Kernytsky,A.,Schlessinger,A.等人2003.Usingmultiplestructurealignments,fastmodelbuilding,andenergeticanalysisinfoldrecognitionandhomologymodeling.尸rofezra53(增刊6):430-435)。所選擇抗體的鼠類(lèi)與人類(lèi)框架區(qū)域的初始序列具有顯著同一性。不同的殘基位置為在人源化序列中包括鼠類(lèi)殘基以保留所觀(guān)察到的鼠類(lèi)抗體結(jié)合效能的候選者。手動(dòng)構(gòu)建人類(lèi)與鼠類(lèi)序列之間不同的框架殘基的列表。給定框架殘基將影響抗體的結(jié)合特征的可能性依賴(lài)于其與CDR殘基的接近度。因此,使用模型結(jié)構(gòu),將鼠類(lèi)與人類(lèi)序列之間不同的殘基根據(jù)其距CDR中任何原子的距離排列。那些屬于任何CDR原子的1324.5A的殘基經(jīng)鑒定為最重要?dú)埢?,且推薦其為在人源化抗體中保留的鼠類(lèi)殘基(也即回復(fù)突變)的候選者。對(duì)于5G1可變域的人源化,以下為本發(fā)明提供的通用方法。首先,借助于計(jì)算器程序ABMOD和ENCAD(Levitt,M.,J.Mol.Biol.168:595-620(1983》構(gòu)建501可變域的分子模型。接著,基于相對(duì)于人類(lèi)V和J片段序列的同源性調(diào)查,選擇VH片段21/28(Dersimonian,H.,等人,J.Immunol.139:2496-2501(1987))和J片段JH4(Ravetch,J.V,等人,Cell27:583-591(1981))以提供Hu5Gl重鏈可變域的框架。對(duì)于5G1輕鏈可變域,使用VL片段HF-21/28(Chastagner,P.等人,Gene101:305-306(1991))和J片段JK4(Hieter,P.A.等人,J.Biol.Chem.257:1516-1522(1982))。5G1VH與受體人類(lèi)21/28和JH4片段之間的框架氨基酸同一性為72%,而5G1VL與受體人類(lèi)HF21/28和JK4片段之間的同一性為83%。在其中計(jì)算器模型表明與CDR顯著接觸的框架位置,自小鼠V區(qū)域的氨基酸取代原始人類(lèi)框架氨基酸。此在重鏈的殘基48、67、68、70、72、74和97進(jìn)行。對(duì)于輕鏈,在殘基50進(jìn)行替換。在對(duì)應(yīng)人類(lèi)V區(qū)域亞組中的個(gè)別位置僅;f艮少出現(xiàn)的框架殘基經(jīng)那些位置的人類(lèi)一致氨基酸替換。此在重鏈的殘基44和76,和輕鏈的殘基2、15、41、42、44和51進(jìn)行。對(duì)于13C5可變域的人源化,以下為本發(fā)明提供的通用方法。首先,借助于計(jì)算器程序ABMOD和ENCAD(Levitt,M.,J.Mol.Biol.168:595-620(1983))構(gòu)建13C5可變域的分子模型。接著,基于相對(duì)于人類(lèi)V和J片段序列的同源性調(diào)查,選擇VH片段M60(Schroeder,Jr.,H.W.和Wang,J.Y.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:6146-6150(1990))和J片段JH4(Ravetch,J.V,等人,Cell27:583-591(1981))以提供Hul3C5重鏈可變域的框架。對(duì)于Hul3C5輕鏈可變域,使用VL片段III-3R(Manheimer-Lory,A.等人,J.Exp.Med.174:1639-1652(1991))和J片段JK4(Hieter,P.A.等人,J.Biol.Chem.257:1516-1522(1982))。13C5VH與受體人類(lèi)M60和JH4片段之間的框架氨基酸的同一性為74%,而13C5VL與受體人類(lèi)III-3R和JK4片段之間的同一性為75%。在其中計(jì)算器模型表明與CDR顯著接觸的框架位置,自小鼠V區(qū)域的氨基酸取代原始人類(lèi)框架氨基酸。此在輕鏈的殘基22、49和71進(jìn)行。在對(duì)應(yīng)人類(lèi)V區(qū)域亞組中的個(gè)別位置僅很少出現(xiàn)的框架殘基經(jīng)133那些位置的人類(lèi)一致氨基酸替換。此在重鏈的殘基10、46、83、84、86和87和輕鏈的殘基62和73進(jìn)行。人源化mAb的VL和VH氨基酸序列顯示于表10中。表10:人源化mAb的氨基酸序列的列表SEQIDNO.蛋白區(qū)域序列123456789012345678901234567890■■■.'■70VH5(31,1SGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTY'GVSWVRQAPGQGIiEWIGEIY^GNYXJTYY■'NEKERGKATMTTDTSTS.TAY^IEIiRS'LRSDDTAVYYCSRWRTSYFSDYGYFDYWGQGTTVTvss71VL5G1.1DWMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLV'HSHGNTYLHWYQQRPGQSPRIXIYTVSNRPSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKVEIKR7'2.,'VH5G1*2EVGLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTT-YijV^WVRQAPGQGLEWIGEifY^NYMTYYNEKFRGKATLTADKSTSTAYMELSSLRSDDTAVYFCSRWRTSYPSDYGYFDYWGQGTTVTVSS73VL5G1.2DWMTQSPLSIiPVTU3QPASISCRSSQSLVHSHGNTYLHWYQQRPGQSPRLLIYTVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKVEIKR''74:VH'.'5G1.'3-''.-EVQ-LVQSGAEVKKPGASVKVS.CKASGYTFT.TirgvSWVRQAiPG'QGIjEWIG邁'IYPGN3fNTTnrNEkFRGRATliTADICSTSTAYriELS^il/RSED:TAVYYCSRWRTSYFSDYGYFDYWG^GTLVTVSS75VL5G1,3DIVMTQSPLSLPVTPGQPASISCRSSQSIiVHSHGNTYLHWYLQKPGQSPKLIjIYTVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKVEIK7€:VH1'3C5,1EVTLKESGPVLVKPTETLTI^CTFSGFSIiS■fSDMGVDWIRQPPGKALEWIjiAjH-lWWDDVKRYNPALKSRLT'i'S幼T'bKSQ^viTMTNMDPVDTATYYCARTVSSGTTI.YYAMDYWGQGTTVTVSS'77VL13C5.1DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQRKPGKWKLLIYYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSI^PEDVATYYCQQGNTLPI/TFGGGTKVEIKR7:8VH13C5.2EVTLKESGPVLVKPTETLTI/TCTFSGFSLSTSDMGVpWIRQPGKALEiyi(A^iwWDDVKR.TOPALKSRLTISK5T3KS'6vVLTMTiJMDPVDTATYYCARTVSSfiVTVYAMlJYWGQGTTVTVSS134SEQIDno.蛋白區(qū)域序列12345678901234567890123456789079VL13C5,2DIQMTQTPSSIjSASVGDRVTISCRASQDIRNYIiNWYQRKPGKWKLLIFYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYFCQQGNTIjPLTFGGGTKVEIKR80VH13C5,SEVTIjRE.SGPGIjVKPTQTLTLTCTLYGFSLSTS力MGVDWrRQPPGKGLEWLAH'SWWDDVItRYN^IiK'SRLTISKDTSKNQWLKLTSVDPVDTATYYCARTVSSGTriYYAMDlfWGQGTLiVT■'ys:s.81VL13C5,5D工QMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLIiIFYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCQQGNTIiPIiTFGGGTKVEIK82VH9C11,1EVQLVQSGAEVKK'PGASVKVSCKASGYTFTNQKFKDRATMTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASTATDFDYWGQGTTVTV:S,S83VLSCll,lDWLTQTPLSLPVTPGEPASISCRSTQTIjIiNSDGFTYLDWYIjQKPGQSPQLLiYLVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQNNYLPLTFGAGTKLEIKR84VH9C11,2EV,Q:SGA'EVKKPGASVKVSC鄉(xiāng)GYTFTS鄉(xiāng)iJWVNQA.PGQGLEWIGMI袖SpS^TRIiN(^RIJKATLTVDKSTSTAYMELSk;LkSEDTAVYYCASTATDFDYWGQGTTVTVS,S85VL9C11.2DWLTQTPLSliPVTPGEPASISCRSTQTUNSDGFTYLDWYLQKPGQSPQI^IYLVSNRPSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQNNYIPI/TFGAGTKIiEIKRVH5G1.5QVQi:VQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYGVSWVRQAPGQGIjEWIGEIYPGNYNTYyNEKFRGKATUTADKSTSTAYMELSSIjRSEDTftV#C'SRWRTSYFSDYGYFDYWC3QGTWTVS:S91VL5G1,5DIVMTQSPLSLPVTPGQPASISCRSSQSLVHSHGWmi瞎L;QKPGQSPKI;L'IYTVSNRF'SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPTfTFGGGTKVEIK80VH13C55I2B■■EVT^RESGPGliVKPTQTLTLTC^YGFSIiS'YNPALKSRLTISKDTSKNQWi;;fe牽參PV.DTATYYCARTVSSGYIYYAMDVw6(jGiliVTVSS92VL13C5,5l<2EDIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKI^IFYTSMKPRGVPSRFSGSGSGTDYTIjTISSLQPEDIATYYCQQGNTIiPI/TFGGGTKVEIK&0VH13C5,5U3;F'.'EWLRESGPGEVKPTQTI/TIjTCTIiYGFSIjSTS'DMSVDW'IRQPPGKGIiEWLAH'HWWBbVRRYNPAIiRJSRLTISKDTSKNQWLKLTSVDPVDltoYiCARTVSSGYIYYAMDYWGQGTLVT■WS:S:,93DIQMTQSPSSIiSASVGDRVTISCRASQDIRNYIiNWYQQKPGKAPKI;LIFYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDYTI/TISSLQPEDIATYYCQQGMWLTFGGGTKVEIK135<table>tableseeoriginaldocumentpage136</column></row><table>實(shí)施例2.2.2:構(gòu)建人源化抗體使用寡核苷酸更始構(gòu)建上文所述的計(jì)算機(jī)試驗(yàn)構(gòu)建的人源化抗體。對(duì)于各可變域cDNA,各60-80個(gè)核苷酸中的6個(gè)寡核香酸經(jīng)設(shè)計(jì)以由20個(gè)核苷酸在各寡核苦酸的5'和/或3'端彼此重疊。在退火反應(yīng)中,組合所有6個(gè)寡聚物、使其沸騰且在dNTP存在下退火。隨后添加DNA聚合酶I大(Klenow)片段(NewEnglandBiolabs#M0210,Beverley,MA)以填充重疊寡核苷酸之間的約40bp缺口。隨后進(jìn)行PCR以使用2個(gè)含有與修飾的pBOS載體中多個(gè)克隆位點(diǎn)互補(bǔ)的外伸序列的最外引物擴(kuò)增整個(gè)可變區(qū)域基因(Mizushima,S.且Nagata,S.,(1990)NucleicacidsResearch笫18巻,第17號(hào))。在瓊脂糖凝膠上分離源自各cDNA組裝的PCR產(chǎn)物,且切除并純化對(duì)應(yīng)于所預(yù)測(cè)可變域cDNA尺寸的條帶。通過(guò)在細(xì)菌中同源性重組將可變重鏈區(qū)域于框中插至編碼含有2個(gè)鉸鏈區(qū)氨基酸突變的人類(lèi)IgGl恒定區(qū)的cDNA片段上。這些突變?yōu)槲恢?34(EU編號(hào))的亮氨酸至丙氨酸改變和位置235的亮氨酸至丙氨酸改變(Lund等人,1991,丄Immunol.,147:2657)。通過(guò)同源性重組將可變輕鏈區(qū)域與人類(lèi)k恒定區(qū)一起插入框中。分離菌落且提取質(zhì)粒DNA;將cDNA插入物全部定序。將對(duì)應(yīng)于各抗體的正確人源化重鏈和輕鏈共轉(zhuǎn)染于COS細(xì)胞中以瞬時(shí)產(chǎn)生全長(zhǎng)人源化抗人類(lèi)IL-13抗體。對(duì)于13C5,將含有13C5重鏈移植cDNA和13C5輕鏈移植cDNA的pBOS載體共轉(zhuǎn)染于COS細(xì)胞中。通過(guò)蛋白A瓊脂糖層析純化含有重組嵌合抗體的細(xì)胞上清液且通過(guò)添加酸緩沖液洗脫結(jié)合的抗體。中和抗體且透析于PBS中。幾個(gè)人源化抗體描述在表10中。如實(shí)施例l.l.C中所述使用A-549生物測(cè)定測(cè)定純化的人源化抗體抑制IL-13活性的能力。如實(shí)施例l.l.B中所述,使用表面等離子體共振(Biacore⑧)測(cè)定來(lái)測(cè)定人源化抗體對(duì)重組人類(lèi)IL-13的結(jié)合親和力。表11顯示A-549生物測(cè)定的IC5o值和表10中描述的前6種人源化抗體對(duì)人類(lèi)IL-13wt和變體的親和力。表ll:人源化抗IL-13mAb的中和效能和親和力<table>tableseeoriginaldocumentpage137</column></row><table>使用在本領(lǐng)域中是已知的技術(shù)使人源化抗體13C5.5的CDR序列進(jìn)一步突變,且產(chǎn)生3種其它人源化抗體。如實(shí)施例l.l.C中所述使用A-549生物測(cè)定測(cè)定這些其它人源化抗體抑制人類(lèi)、獼猴和恒河猴IL-13活性的能力。如實(shí)施例1丄B中所述,使用表面等離子體共振(Biacore)測(cè)定來(lái)測(cè)定其它人源化抗體對(duì)重組人類(lèi)、獼猴和恒河猴IL-13的結(jié)合親和力。除結(jié)合和抑制人類(lèi)IL-13夕卜,這些3種其它抗體對(duì)獼猴和恒河猴IL-13顯示增強(qiáng)的親和力。表12顯示A-549生物測(cè)定的ICsG值,且表13顯示其它人源化抗體對(duì)人類(lèi)、獼猴和恒河猴IL-13的親和力。表12:其它人源化抗IL-13mAb的中和效能<table>tableseeoriginaldocumentpage138</column></row><table>:其它人源化抗IL-13mAb的結(jié)合親和力<table>tableseeoriginaldocumentpage138</column></row><table>實(shí)施例2.2.3:人源化抗IL-13抗體的表征已分離阻斷IL-13與IL-13Ral和IL-13Ra2結(jié)合的單克隆抗體。細(xì)胞表面上基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定與125-1-標(biāo)記的IL-13結(jié)合測(cè)定均證明鼠類(lèi)形式與人源化形式(也即13C5.5)的13C5均能夠有效阻斷IL-13與兩種受體的結(jié)合。與13C5相同語(yǔ)系中的包括25C8和33C3的抗體也能夠阻斷IL-13與兩種受體結(jié)合。實(shí)施例2.2.3.a:人源化抗IL-13抗體阻斷IL-13與IL-13受體的結(jié)合為測(cè)定人源化抗體13C5.5阻斷IL-13與IL-13受體(IL-13Ral和IL-13Ra2)結(jié)合的能力,使用基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定。在4。C下,以于100inl/孔涂布緩沖液(碳酸鹽-碳酸氬鹽緩沖液,Pierce)中4pg/ml的重組人類(lèi)IL-13Ral/Fc或IL-13Ra2/Fc(R&DSystems)涂布高結(jié)合96孔ELISA平板。16小時(shí)后,通過(guò)在接收器中輕打平板內(nèi)含物來(lái)除去涂布溶液,且以Superblock阻斷緩沖液(240pl/孔)(Pierce)洗滌且阻斷平板4次。添加人源化抗IL-13mAb13c5.5和對(duì)照mAb(自40|tig/ml1:4系列稀釋?zhuān)?0pl/孔)和生物素-IL-13(50(il/孔,對(duì)于hlL-13Ral/Fc最終濃度為5nM,且對(duì)于hlL-13Ra2/Fc最終濃度為0.5nM)且在室溫下(RT)培育2小時(shí)。以300)il0.1%PBST將平板洗滌5次,且隨后添加100|til按1:5000稀釋的小鼠抗生物素MAb(JacksonImmunosciences)且在RT下培育45min。以300pi0.1%PBST將平板再洗滌5次,接著添加TMB底物試劑(IOOiul/孔,Pharmingen);發(fā)展5min,且通過(guò)添力口50|lU2Mh2s04(VWR)停止。在450nm通過(guò)分光光度測(cè)定法測(cè)定OD。結(jié)果顯示于表14中。另外,也使用IL-13Ra2轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞通過(guò)基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定評(píng)估人源化mAb的受體阻斷特性。如先前所述,以125I(Amersham,ArlingtonHeights,IL)使用IODO-GEN試劑(Pierce,Rockford,IL)標(biāo)記重組人類(lèi)IL-13(ObiriNI等人,(1995)JBiolChem.270:8797-8804)。據(jù)估計(jì)放射性標(biāo)記IL-13的比活性為158pCi/^ig蛋白。如A-549生物測(cè)定所評(píng)估,標(biāo)記的IL-13顯示與未標(biāo)記IL-13類(lèi)似的生物活性。對(duì)于結(jié)合實(shí)驗(yàn),通過(guò)脂質(zhì)胺2000(Invitrogen)將COS細(xì)胞以人類(lèi)IL-13Ra2瞬時(shí)轉(zhuǎn)染且培育48小時(shí)。在4。C下,在具有或無(wú)1)liM未標(biāo)記IL-13的情況下,以1.0nM125I-IL-13將轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞(于100)il結(jié)合緩沖液中5x105細(xì)胞含有0.2%人血清白蛋白和10mmolHEPES的RPMl1640)培育2小時(shí)。通過(guò)離心經(jīng)由鄰苯二甲酸酯油梯度將細(xì)胞結(jié)合的125I-IL-13與未結(jié)合125I-IL-13分離,且以y粒子計(jì)數(shù)管(Wallac,Gaithersburg,MD)測(cè)定放射能。對(duì)于抗體置換測(cè)定,如上所述在增加濃度(高達(dá)50jig/ml)的人類(lèi)抗IL-13抗體13C5.5存在或不存在條件下,以^I-IL-13(1.0nM)培育轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞。結(jié)果顯示于表14中。表14:mAb在基于細(xì)胞表面和基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中阻斷人類(lèi)IL-13(wt)與人類(lèi)IL-13Ra2結(jié)合的效能mAb效能(IC5Q,nM)細(xì)月包表面ELISA13C5.52.71.1BAK502G975.834.35G1.5P.B.P.B.mAbl3.2P.B.P.B.MJ2-717.619.0P.B.并未達(dá)到50%抑制的部分阻斷。表15顯示人源化13C5.5抗體和其它抗IL-13抗體的結(jié)合親和力。表15:如Biacore所評(píng)估,抗IL-13mAb的結(jié)合親和力mAb親和力(Ko,nM)人類(lèi)IL-13wt人類(lèi)IL-13變體13C5.50.070.05BAK.502G92.100.17mAbl3.20.110.20MJ2畫(huà)71.140.79在基于細(xì)胞表面和基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中,13C5.5在阻斷人類(lèi)IL-13與人類(lèi)IL-13Ra2結(jié)合中顯示高效力,IC5。值在1與3nM之間。BAK502G9與MJ2-7也能夠降低結(jié)合信號(hào),其效能比13C5.5低的多(參見(jiàn)表14),至少部分因其對(duì)人類(lèi)wtlL-13(參見(jiàn)表15)的低親和力。MAb13.2不能抑制IL-13與IL-13Ra2結(jié)合,與其表位一致。另外,在兩種測(cè)定中,13C5.5在100nM(或15pg/ml)濃度下可實(shí)現(xiàn)100%抑制。140在相同濃度下,BAK502G9和MJ2-7在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定中僅分別顯示40%與70%抑制,且兩者在基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中僅顯示60%抑制。對(duì)于人類(lèi)血清半衰期在10與20天之間的治療性mAb,在每周或雙周IV或SC3mpk或以下的給藥方案情況下血清濃度通常在5-15^tg/ml之間。基于此計(jì)算,13C5.5為在單克隆抗體的習(xí)知給藥方案條件下,作為治療性mAb在100nM(或15pg/ml)的血清濃度下,當(dāng)前唯一可能完全體內(nèi)(100%)阻斷人類(lèi)IL-13與IL-13Ra2結(jié)合的抗IL-13mAb。實(shí)施例2.2.3.b:抗IL-13抗體與IL-13上特異性表位的結(jié)合使用表位切除技術(shù),接著以質(zhì)譜(MS)進(jìn)行肽分析來(lái)將人類(lèi)IL-13上抗IL-13mAb13C5、13C5.5、9C11和5G1結(jié)合的表位作圖。在表位切除中,首先使蛋白與固定的mAb結(jié)合且隨后以蛋白水解酶消化。通過(guò)使用MS和MS/MS鑒定含有表位的肽來(lái)測(cè)定蛋白上的表位區(qū)域。將CNBr活化的瓊脂糖珠粒(AmershamBiosciences,10mg/反應(yīng))懸浮于500jxL0.1MHC1中且平衡15min。將珠粒轉(zhuǎn)染于致密反應(yīng)塔(USBCorporation)中且以0.1MHC1接著以0.1MNaHC03偶聯(lián)緩沖液洗滌。將mAb(100pg)添加至懸浮液中且在緩慢旋轉(zhuǎn)條件下在室溫下培育2h。以約pH8.0的0.1MTris-HCl緩沖液洗滌與mAb共價(jià)連接的珠粒。通過(guò)以約pH8.0的0.1MTris-HCl緩沖液培育2h,實(shí)現(xiàn)CNBr瓊脂糖珠粒上的未反應(yīng)基團(tuán)的阻斷。通過(guò)以2種不同pH的緩沖液順序洗滌除去未偶聯(lián)的mAb:1)0.1M乙酸Na、0.5MNaCl,約pH4.0緩沖液;和2)0.1MTris-HCl、0.5MNaCl,約pH8.0緩沖液。使珠粒在PBS0.14MNaCl、2.7mMKCl、4.3mMNa2HP〇4、1.5mMKH2P04,pH7.2中平衡且在IL-13存在或不存在條件下在室溫下培育2h。以PBS約pH7.2洗滌珠粒后,移出懸浮液的等分試樣以用于MALDI-TOF分析。以不同蛋白酶(l:100-1:20酶底物比率)將親和力結(jié)合蛋白消化12h。所用蛋白酶包括胰蛋白酶、GluC、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶Y和胺基肽酶M。蛋白水解后,以500jliL消化緩沖液洗滌珠粒。留下最終100|LiL洗滌液作為對(duì)照。將約100|liL2%TFA添加至珠粒且收集。首先在真空下將對(duì)照和酸洗滌液濃縮至約20)iL。隨后以C18ziptip將肽脫鹽。通過(guò)MALDI-ToFMS使用VoyagerDE或VoyagerDE-Pro系統(tǒng)分析樣品。在與SciexQ-StarPulsariMS系統(tǒng)連接的Agilent1100CapillaryHPLC系統(tǒng)上進(jìn)行納米-ESI-LC-MS/MS分析。在研究13C5的表位中,2個(gè)用于連續(xù)步驟的蛋白酶得到最優(yōu)選結(jié)果。以胰凝乳蛋白酶檢測(cè)到由SEQIDNO:1的氨基酸殘基100-130組成的主要肽,指示其可含有表位。也檢測(cè)到SEQIDNO:1的氨基酸殘基103-130和104-130的少量肽。胰凝乳蛋白酶消化后使用胺基肽酶M。所檢測(cè)到的主要肽為SEQIDNO:1的氨基酸殘基104-130,暗示4N末端氨基酸殘基(80-83)不為表位的一部分。以羧肽酶Y進(jìn)一步消化使得親和力損失。消化和洗滌后未觀(guān)察到肽。使用納米-ESI-LC-MS/MS確認(rèn)所有肽序列。13C5和13C5.5的表位作圖指示其結(jié)合位點(diǎn)包括人類(lèi)IL-13的C末端螺旋D區(qū)(殘基VRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGR,對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:1的氨基酸104-130)。已提出C末端螺旋D區(qū)涉及于與IL-13受體的相互作用中(Zuegg等人2001ImmunolCellBiol.79:332-9)。實(shí)施例2.3:與IL-13復(fù)合的抗IL-13的結(jié)晶使13C5.5的Fab部分與人類(lèi)IL-13復(fù)合且復(fù)合體的晶體產(chǎn)生如下。實(shí)施例2.3丄13C5.5Fab片段的制備和純化為制備13C5.5Fab片段,首先使用Ultrafree-15Biomax10kDa分子量截?cái)?MWCO)離心過(guò)濾裝置(Millipore)將于0.15MPBS緩沖液中的13C5.5IgG濃縮至2mg/ml。以1:1體積比緩沖液A(20mMNa2HP04、10mMEDTA、20mM半胱氨酸)預(yù)洗滌木瓜蛋白酶凝月交漿液(Pierce)且饋入2-3X。隨后將濃縮的抗體與50%木瓜蛋白酶凝膠漿液混合且在37。C下在劇烈振蕩下培育24小時(shí)。離心(Beckman6KR)抗體/漿液混合物且將上清液裝載于PBS預(yù)平衡的S叩erdex75上。洗脫主要峰且匯集蛋白。通過(guò)以100mLPBS洗滌來(lái)制備25mL蛋白A瓊脂糖4快速流動(dòng)親和柱(AmershamPharmacia)。將所匯集抗體片l史施加于親和柱(流動(dòng)速率2mL/min)上。在流出物中收集含有13C5.5Fab片段的級(jí)份(通過(guò)280nm下的UV吸光度監(jiān)控)。匯集含有濃度大于0.3mg/ml的13C5.5Fab片段(通過(guò)280nm下的UV吸光度測(cè)定)的級(jí)份且冷凍于-80。C下。以SDS-PAGE評(píng)估樣品純度。實(shí)施例2.3.2:IL-13/13c5.5Fab復(fù)合體制備將重組人類(lèi)IL-13表達(dá)于哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中且隨后使用在本領(lǐng)域中熟知的技術(shù)純化。以1:1摩爾比混合重組人類(lèi)IL-13與13C5.5Fab蛋白且在4。C下培育1小時(shí)。以0.5ml/min將復(fù)合體樣品負(fù)載于預(yù)平衡(20mMTrispH7.5,150mMNaCl)的Superdex200管柱上。將復(fù)合體匯集且使用Ultrafree-15Biomax10kDa分子量截止(MWCO)離心過(guò)濾裝置(Millipore)濃縮至24mg/ml且冷凍于-80。C下。以SDS-PAGE評(píng)估樣品純度。實(shí)施例2.3.3:IL-13/13c5.5Fab復(fù)合體的結(jié)晶在水上將冷凍IL-13/13C5.5復(fù)合體儲(chǔ)備液(約24mg/ml)解凍。使復(fù)合體(l.OiuL)與1.0^L儲(chǔ)集器溶液(1.75M石危酸銨,100mMMES,pH6.5,10mMCaCl2)混合。在約18°C下將所得滴劑混合于儲(chǔ)液器的沈滴孔(CrysChem沉滴板)中。一周后出現(xiàn)菱形晶體。實(shí)施例2.3.4:IL-13/13C5.5Fab復(fù)合體晶體的低溫保護(hù)和急驟冷卻使用纖維環(huán)在母液+20%甘油中收集IL-13/13C5.5Fab復(fù)合體的晶體。隨后通過(guò)投入液氮中將晶體急驟冷卻。實(shí)施例2.3.5:IL-13/13C5.5Fab復(fù)合體的X射線(xiàn)衍射數(shù)據(jù)收集在IMCA光束線(xiàn)下在Argonne,IL的高級(jí)光子源下收集IL-13/13C5.5Fab晶體的X射線(xiàn)衍射數(shù)據(jù)。在數(shù)據(jù)收集期間以O(shè)xfordCryosystemsCryostream冷卻器將晶體維持在100K的溫度下。在1.0°的振蕩范圍內(nèi)總計(jì)收集到180個(gè)框架。以HKL2000程序組(Otwinowski和Minor,1997)處理數(shù)據(jù)。測(cè)定晶體取向后,以DENZO整合數(shù)據(jù)且標(biāo)定并以SCALEPACK合并,且置于絕對(duì)溫標(biāo)上并以TRUNCATE(French和Wilson,1978)減小為結(jié)構(gòu)因子幅度。以隨機(jī)方式將5%的獨(dú)特反射指定為"自由,,設(shè)定,以用于計(jì)算自由R因子(Rfree)(Brtinger,1992);剩余95%的反射構(gòu)成"工作"設(shè)定,用于計(jì)算R因子(R)。X射線(xiàn)衍射數(shù)據(jù)概括于表16中。以下列出標(biāo)定晶型的指數(shù)(l)1L-13/13C5.5143Fab:空間群P2(l)2(l)2(l)、a=163.578A、b=163.318A、c=228.627A、a=90.0°、卩=90.0°、y=90.0°。表17列出數(shù)據(jù)庫(kù)的X射線(xiàn)衍射統(tǒng)計(jì)。表16:IL-13/13C5.5Fab復(fù)合體的晶體學(xué)晶胞信息的總結(jié)晶體空間群(A)b(A)c(A)1P2(l)2(l)2(l)163.578163.318228.627表17:IL-13/13C5.5Fab復(fù)合體的X射線(xiàn)衍射數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的總結(jié)晶體空間群分辨率獨(dú)特反射Rsym覆蓋度(%)*多重性*(A)(%)*1P2(l)2(l)2(l)47.1-2.60188,9370.085(0.562)100.0(100.0)7.3(7.3)*圓括號(hào)中是最高分辨率實(shí)施例2.3.6:IL-13/13C5.5Fab復(fù)合體晶體結(jié)構(gòu)的分子替換方案和精制使用程序PHASER(Read,2001)測(cè)定最大似然分子替換方案。在3.0A分辨率下在空間群P2(1)2(1)2(1)中解決總共六個(gè)13C5.5單體。檢索模型為先前報(bào)導(dǎo)的Fab晶體結(jié)構(gòu)(ProteinDataBankentry1BJ1;Muller等人1998)。基于分子替換方案產(chǎn)生坐標(biāo)。以上文所述的分子替換方案坐標(biāo)起始在空間群P2(l)2(l)2(l)中細(xì)化IL-13/13C5.5Fab復(fù)合體晶體結(jié)構(gòu)。使用剛性軀體精制通過(guò)CCP4程序^式劑盒(Murshudov等人,1997,CollaborativeComputationalProject,1994)中可獲得的程序REFMAC開(kāi)始精制,其在2.6A產(chǎn)生以下統(tǒng)計(jì)R40.00%(Rfree39.00%)。觀(guān)察到更始IL-13電子密度。以公共IL-13NMR結(jié)構(gòu)lIJZ(Moy等人,2001)使用分子圖形程序O(Jones等人,1991)和2Fo-Fc和Fo-Fc電子密度圖檢查指導(dǎo)6個(gè)IL-13單體的手動(dòng)構(gòu)建。精制程序REFMAC(Murshudov等人,1997)用于限制精制的迭代輪,產(chǎn)生以下統(tǒng)計(jì)R25.8%(Rfree30.5%)。結(jié)果顯示于表18中。144表18:晶體學(xué)精制統(tǒng)計(jì)IL-13/13C5.5Fab復(fù)合體的總結(jié)<table>tableseeoriginaldocumentpage145</column></row><table>實(shí)施例2.3.6:IL:13/13C5.5Fab復(fù)合體結(jié)構(gòu)觀(guān)察到人類(lèi)IL-13與幾個(gè)13C5.5CDR廣泛接觸??贵w-抗原界面上所隱匿面積為1415.50人2。接觸由使界面穩(wěn)定的關(guān)鍵氫鍵與疏水性相互作用組成。包含多數(shù)界面接觸的2個(gè)最小序列片段處于IL-13螺旋A和D上(對(duì)于IL-13的結(jié)構(gòu),參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)第2003-0013851Al號(hào),其以引用的方式并入本文中)。這些接觸使得CDR的LI與L3,且H2與H3接合?;谏鲜?,表位13C5.5結(jié)合范圍包含由SEQIDNO.l的Ser26-Asn38、Lysl23-Argl30界定的局部區(qū)域。表位13C5.5結(jié)合范圍更優(yōu)選包含由SEQIDNO1的Arg30-Asn38、Lysl23-Arg127界定的局部區(qū)域。實(shí)施例2.4:人源化IL-13抗體的體內(nèi)效力抗hlL-13抗體的體內(nèi)效力評(píng)估如下。實(shí)施例2.4.1:人源化IL-13抗體在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中的體內(nèi)效力在小鼠人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中測(cè)試抗hlL-13抗體5G1、13C5和13C5.5的效力。以劑量為50|il無(wú)菌PBS中1pg、以微型噴霧器使用嚙齒動(dòng)物喉鏡以檢驗(yàn)氣管打開(kāi)遞送至氣管中的重組人類(lèi)IL-13激發(fā)小鼠。在研究的第1和2天,給予總計(jì)2個(gè)劑量的IL-13,且最終激發(fā)24小時(shí)后,在支氣管-肺泡灌洗液體中測(cè)定氣管高反應(yīng)性(AHR;Hoymann,H.G.;JPharmacolToxicolMethods.2007年1-2月;55(1):16-26)以及粘液、酸性哺乳動(dòng)物殼多糖酶(AMC酶;DonnellyLE,BarnesPJ.,1:TrendsPharmacolSci.2004年10月;25(10):509-11)和胸腺和活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC;BissetLR,Schmid-GrendelmeierP.,CurrOpinPulmMed.2005Jan;11(1):35-42)。在以IL-13第一次激發(fā)前一天,通過(guò)腹膜內(nèi)注射施用100、300和或IL-13Ra2結(jié)合的5G1抗體在此體內(nèi)^t型中不能以與使用5G1處理的動(dòng)物中^f企測(cè)到的AHR、AMC酶和Muc5ac相當(dāng)?shù)乃街泻虸L-13生物活性。相反,阻斷與al和a2受體結(jié)合的13C5抗體有效于降低所有參數(shù)。以IL-13處理使得氣管阻力自3.6cmH20/ml/sec增加至5.7cmH20/ml/sec。以13C5(1000pg)治療將氣管阻力降低至4.3cmH20/ml/sec。在以抗體治療情況下,如muc5ac含量所測(cè)定的粘液分泌過(guò)多自356.5單位降低至最大211U,對(duì)應(yīng)于40%降低。類(lèi)似地AMC酶含量自202U降低至68U,對(duì)應(yīng)于66%的降低,與TARC含量所觀(guān)察到的降低可比0=10,p<.05,所有劑量)。重組人源化抗體13C5.5在此;f莫型中證明類(lèi)似結(jié)果。以30pg/ml乙酰甲膽堿激發(fā)后,IL-13誘導(dǎo)氣管阻力自3.9增加至5.5cmH20/ml/sec??贵w13C5.5在100、300和1000ILig劑量分別抑制氣管阻力至4.1、4.45和4.3cmH20/ml/sec。在100、300和1000pg抗體治療劑量下,如muc5ac含量所測(cè)定,粘液分泌過(guò)多自由IL-13處理誘導(dǎo)的247U分別降低至154、30.2和11.1U。此表示以此抗體粘液產(chǎn)生的38、88和96%抑制。IL-13處理誘導(dǎo)130UAMC酶活性,其通過(guò)抗體治療(IOO、300和1000)iig劑量)降低至113、98和55U,表示14、24和68%抑制。這些數(shù)據(jù)證明阻斷IL-13與IL-Ral和a2結(jié)合的13C5和重組人源化抗體13C5.5可中和IL-13誘導(dǎo)的肺中AHR、粘液和AMC酶產(chǎn)生反應(yīng),而并未阻斷IL-13與al和a2受體結(jié)合的抗體無(wú)法有效阻斷所有這些生物反應(yīng)。表19:抗人類(lèi)IL-13抗體在IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中的效力<table>tableseeoriginaldocumentpage147</column></row><table>*p<0.05,學(xué)生T-檢驗(yàn),**p<0.05,ANOVA,Bonfer腦i檢驗(yàn),***p<0.01,ANOVA,Bonfer匪i檢驗(yàn)在另一研究中,在小鼠人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中比較抗hIL-13抗體BAK502G9、MJ2-7和13C5.5的效力。以劑量為50pi無(wú)菌PBS中1|ig、在輕度鎮(zhèn)靜下經(jīng)鼻遞送的重組人類(lèi)IL-13激發(fā)小鼠。在研究的笫1和2天給予總共2劑量的IL-13,且在最終激發(fā)24小時(shí)后在支氣管肺泡灌洗液體中測(cè)定氣管高反應(yīng)性以及粘液和AMC酶。在首次以以IL-13激發(fā)前一天通過(guò)腹膜內(nèi)注射施用1000pg抗體劑量。研究的結(jié)果概括于表20中。阻斷IL-13與IL-13al和a2受體結(jié)合的13C5.5抗體有效于顯著降低所有參數(shù)。以30mg/ml乙酰曱膽堿激發(fā)后,IL-13處理使得氣管阻力自4.2cmH20/ml/sec增加至7.2cmH20/ml/sec。13C5.5(1000pg)治療使得氣管阻力降低至4.6cmH20/ml/sec,降低86.8%。以抗體治療情況下,如由muc5ac含量所測(cè)定的粘液分泌過(guò)多自768.2單位降低至412.9U,對(duì)應(yīng)于58.8°/。的降低。類(lèi)似地,AMC酶含量自316.5U降低至147U,對(duì)應(yīng)于52%的降低0=10,p<.001)。抑制IL-13與IL畫(huà)13Ral結(jié)合但并不有效地抑制IL-13與IL-13Ra2結(jié)合的BAK502G9和MJ2-7抗體在此才莫型中證明可比的中和IL-13誘導(dǎo)的AHR的能力??贵wBAK502G9和MJ2-7僅分別將氣管阻力自7.2抑制至5.96cmH20/ml/sec和5.93cmH20/ml/sec,表示42%和41.5%的AHR降<氐。在1000pg抗體劑量下,如由muc5ac含量所測(cè)定的粘液分泌過(guò)多自由IL-13處理所誘導(dǎo)的768.2U降至627.8和380U,分別對(duì)應(yīng)于BAK502G9或MJ2-7抗體的23%和64%抑制。與13C5.5或MJ2-7抗體相比,BAK502G9抗體抑制AMC酶的有效性較低。IL-13處理誘導(dǎo)316.5UAM酶活性,其由BAK502G9或MJ2-7抗體處理(1000)ag劑量)降低至279和169U,分別表示8%和45%抑制。這些數(shù)據(jù)證明阻斷IL-13與IL-13Ral和a2結(jié)合的重組人源化抗體13C5.5最有效于中和肺中IL-13誘導(dǎo)的AHR、粘液和AMC產(chǎn)生反應(yīng),而以低親和力阻斷IL-13與IL-13a2受體結(jié)合的抗體不太有效于阻斷這些造成哮喘發(fā)病機(jī)制的生物反應(yīng)。表20:IL-13誘導(dǎo)的哮喘才莫型中13C5.5、BAK502G9與MJ2-7抗體的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage148</column></row><table>實(shí)施例2.4.2:IL-13抗體在OVA-誘導(dǎo)的嗜喘小鼠模型中的體內(nèi)效力為測(cè)定受體阻斷特性(尤其關(guān)于IL-13Ra2)是否影響mAb在哮喘小鼠才莫型中的體內(nèi)效力,如受體結(jié)合ELISA使用mlL-13Ral/Fc和mlL-13Ra2/Fc蛋白(R&DSystems)(參見(jiàn)表21)所測(cè)定,產(chǎn)生一組顯示不同受體阻斷特性的大鼠抗小鼠IL-13抗體。由于抗hlL-13mAb3H7與小鼠IL-13交叉反應(yīng),其抗mIL-13特性也包括在表21中。使用BIACORE測(cè)定相對(duì)于重組小鼠IL-13(R&DSystems)測(cè)定抗體對(duì)小鼠IL-13的結(jié)合親和力,且通過(guò)A-549生物測(cè)定相對(duì)于重組小鼠IL-13測(cè)定抗體抗小鼠IL-13的效能(IC5Q)。51D9和48D3的可變域序列顯示于表22中。表21.抗mIL-13單克隆抗體的表征克隆#同種型Kd(M)IC50(M)阻斷小鼠IL-13結(jié)合mlL'13RalmlL-13Ra23H7小鼠IgGl112E-082.43E-9是是51D9大鼠lgGlK1.45E-103.43E-10是是48D3大鼠IgGlK1.05E-104.91E-11是否53F5大鼠IgGlK2.82E-102.89E-10否否74H2大鼠IgG2aK3.92E-109.76E-10否否25C7大鼠IgG2aX4.22E-106.09E-10是是54D1大鼠IgGlK3.40E-112.40E-11是曰疋149表22.大鼠抗mIL-13mAb的VH和VL區(qū)域的氨基酸序列的列表<table>tableseeoriginaldocumentpage150</column></row><table>對(duì)于鼠類(lèi)譯喘模型的體內(nèi)效力研究,動(dòng)物(雌性Balb/c小鼠)購(gòu)自Taconic,在AbbottBioresearchCenter圏養(yǎng),且在8-12周齡時(shí)使用。所有方案經(jīng)IACUC批準(zhǔn)。在第0和7天,腹膜內(nèi)注射于2mg礬(Pierce)中的8OVA使小鼠經(jīng)OVA敏化(Sigma,根據(jù)制備商的方案使用DetoxiGd(Pierce)將內(nèi)毒素自卵白蛋白中移出且最終材料含有小于0.1EU/mg的蛋白)。在第14和16天,動(dòng)物接受于50ml無(wú)菌PBS中的0.3mgOVA的鼻內(nèi)激發(fā)。在第13天以于無(wú)菌PBS中的單一腹膜內(nèi)注射形式施用抗體51D9和48D3(根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序由雜交瘤克隆51D9和48D3的上清液純化,其含有小于O.lEU/mg的蛋白且通過(guò)PCR測(cè)試對(duì)于嚙齒動(dòng)物病原體為陰性)。在第13-17天以3mg/kg的劑量經(jīng)口每天施用一次地塞米松(Dexamethasone)(Sigma)。在第17天,第二次OVA攻擊24后分析所有終點(diǎn)。使用全血體積描記法評(píng)估氣管高反應(yīng)性(AHR)。簡(jiǎn)言之,以腹膜內(nèi)注射開(kāi)他敏(ketamine)和曱苯噻。秦(xylazine)誘導(dǎo)麻醉的手術(shù)平面。將氣管套管手術(shù)插于第三與第四氣管環(huán)之間。通過(guò)經(jīng)頸靜脈內(nèi)注射泮庫(kù)溴銨(pancuroniumbromide)預(yù)防自發(fā)呼吸,且將動(dòng)物置于全身體體積描記器(Buxco)中且以0.2ml室內(nèi)空氣在每分鐘150次呼吸下使用體積受控通風(fēng)機(jī)(HarvardApparatus)以機(jī)械方式通風(fēng)。使用變換器測(cè)定肺部壓力和體積描記器內(nèi)的氣流,且使用BiosystemXa軟件將肺阻力計(jì)算為壓力/氣流。測(cè)定基線(xiàn)阻力以及以使用管內(nèi)超音噴霧器遞送的乙酰曱膽堿(3、10&30mg/ml)激發(fā)后的阻力。完成肺功能測(cè)試后,以0.5ml無(wú)菌PBS將肺灌洗4次。分析灌洗液體的TARC、AMC酶和細(xì)胞滲透。收集血清以量化研究結(jié)束時(shí)的抗體含量。通過(guò)ELISA(R&D)根據(jù)制備商的方案測(cè)定鼠類(lèi)TARC含量。在支氣管肺泡灌洗(BAL)液體(在80|LiM4-曱基傘形基卩-D-N,N'-二乙?;鶜ざ强?chitobioside)存在下,以O(shè).OP/oBSA、30mM檸檬酸鈉、60mM磷酸鈉pH5.2稀釋1至IO倍)中測(cè)定AMC酶活性。在室溫下將反應(yīng)物培育15分鐘,且通過(guò)添加100|uL1M甘氨酸/NaOHpH10.6終止。通過(guò)在460nm的熒光發(fā)射,使用在385nm的激發(fā)在FluoroskanAscent焚光計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物形成。為評(píng)估杯狀細(xì)胞增生,以10%中性緩沖的福爾馬林在22cm高度下使肺膨脹15分鐘以實(shí)現(xiàn)肺表面的區(qū)域一致。將切片嵌入石蠟中,切開(kāi)且以高碘酸雪夫氏(schiff)(PAS)染色。使用ImageProPlus軟件將沿左肺的主支氣管的PAS陽(yáng)性細(xì)胞區(qū)域定量。通過(guò)ELISA測(cè)定Muc5ac含量。以BAL液體涂布96孔平板,干燥過(guò)夜,且隨后添加生物素化抗-Muc5ac抗體且以HRP結(jié)合的鏈霉抗生物素蛋白檢測(cè),接著裂解比色底物TMB。在標(biāo)準(zhǔn)型式的卵白蛋白誘導(dǎo)的小鼠哮喘中測(cè)試IL-13Ral和a2對(duì)譯喘發(fā)病機(jī)制的相對(duì)貢獻(xiàn)。通過(guò)在以卵白蛋白局部激發(fā)1天前以抗體處理動(dòng)物來(lái)測(cè)試阻斷IL-13與al和a2受體結(jié)合的抗體(51D9、54D1和3H7分別以340、24和2430pM的效能)以及僅阻斷IL-13與al受體結(jié)合的抗體(48D3,效能為50pM)且結(jié)果提供于表23中。以乙酰曱膽堿激發(fā)后,OVA攻擊誘導(dǎo)肺阻力增加,如BAL液體中增加的Muc5ac含量所測(cè)定的粘液分泌過(guò)多,以及通過(guò)組織學(xué)評(píng)估增加的上皮細(xì)胞PAS陽(yáng)性染色,肺經(jīng)嗜伊紅性粒細(xì)胞&T細(xì)胞浸潤(rùn)且產(chǎn)生。孝喘有關(guān)蛋白AMC酶和TARC。阻斷IL-13與IL-13Ral和a2結(jié)合的抗體均證明試劑的效力和體內(nèi)效能根據(jù)其體外所測(cè)定的效能變化。在100、300和1000itig/小鼠的151劑量下測(cè)試51D9。與非哮喘動(dòng)物的3.6cmH20/ml/sec相比,以30mg/ml乙酰曱膽石成激發(fā)后,OVA處理導(dǎo)致氣管阻力增加至6.2cmH20/ml/sec。以51D9處理小鼠完全阻止肺阻力增加,其值與非哞喘對(duì)照動(dòng)物中所觀(guān)察到的對(duì)于劑量100、300和1000iug分別為4.1、4.0和3.5cmH2O/ml/sec(n-8-10/組,p〈.05)的值可比。以51D9觀(guān)察到的抑制的量與以類(lèi)固醇處理(3.3cmH20/ml/sec)所取得的量可比。在以1000pg51D9處理的動(dòng)物中,以51D9處理也劑量依賴(lài)型地自404單位Muc5ac降至55U抑制粘液分泌過(guò)多。通過(guò)組織學(xué)評(píng)估PAS反應(yīng)性上皮細(xì)胞也觀(guān)察到抑制粘液分泌過(guò)多。以300和1000pg劑量的51D9抗體,陽(yáng)性細(xì)胞百分比區(qū)域自1.0%降低至0.6%和0.5%,分別表示47-65%(n=8,p<.01)的降低。51D9處理也抑制TARC和AMC酶。OVA攻擊誘導(dǎo)61pg/ml的TARC,以1000pg51D9處理其降低至7.8pg/ml(n=10,p<.05)。OVA攻擊誘導(dǎo)96任意單位的AMC酶活性,以100、300和1000jxg的抗體其分別以51D9劑量依賴(lài)型地降低至52、45和21U(n=9-10,p<.01)。具有大出10倍的體外效能(24pM)的54D1在30pg劑量以氣管阻力自6.58cmH20/ml/sec降低至4.4cmH20/ml/sec證明AHR的抑制,且以300ng抗體處理觀(guān)察到氣管阻力降低至3.65cmH20/ml/sec的值的最大抑制。對(duì)于粘液、AMC酶和TARC產(chǎn)生的抑制觀(guān)察到類(lèi)似效能。具有2.5nM的效能的笫三抗體3H7證明AHR、粘液和AMC酶的抑制,但僅在1000)iig抗體處理的劑量下,此與體外生物測(cè)定中所描述的效能10倍變化一致。以抗體48D3測(cè)試4又阻斷IL-13與IL-13Ral結(jié)合的抗體效力。以30、100、300和1000iig/小鼠處理動(dòng)物。與4.1cmH20/ml/sec相比,在非哮喘PBS處理的動(dòng)物中OVA攻擊誘導(dǎo)氣管阻力升至5.69cmH20/ml/sec。以30嗎48D3處理對(duì)OVA誘導(dǎo)的肺阻力無(wú)效,而以100、300和100048D3處理抑制OVA誘導(dǎo)的肺阻力變化至4.4cmH20/ml/sec的最大量或至OVA對(duì)照含量的80%(11=10,p<.05)。與51D9所觀(guān)察到的效應(yīng)相對(duì)比,如Muc5acELISA或PAS反應(yīng)性上皮細(xì)胞所測(cè)定48D3并未抑制OVA誘導(dǎo)的粘液分泌過(guò)多。48D3在30劑量處理觀(guān)察到粘液的略微但統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著降低(30%),而所有其它劑量等于OVA攻擊的動(dòng)物。PAS陽(yáng)性染色的組織學(xué)定量證明OVA攻擊的動(dòng)物中0.6%對(duì)OVA攻擊且以1000昭48D3處理的動(dòng)物中0.8%。在這些研究152中,48D3在30、100、300和1000pg劑量下將OVA誘導(dǎo)的AMC酶表達(dá)自O(shè)VA處理的動(dòng)物中檢測(cè)到的196U分別抑制至63、90、87和96U??贵w含量的分析指示在抗體處理的小鼠的血清與BAL液體中可檢測(cè)到可比含量的48D3和51D9。盡管與51D9抗體相比48D3抗體的7倍更大效能和2種抗體的等效暴露,48D3抗體不能抑制AHR或AMC酶至與阻斷IL-13與IL-13Ral和a2結(jié)合的抗體相同的程度,且不能減弱粘液產(chǎn)生??偠缘?,這些數(shù)據(jù)暗示IL-13Ra2在調(diào)節(jié)OVA誘導(dǎo)的粘液過(guò)度分泌中起重要作用,且IL-13Ra2有助于體內(nèi)調(diào)節(jié)哮喘表型。表23:抗-小鼠IL-13抗體在卵白蛋白誘導(dǎo)的哞喘鼠類(lèi)模型中的效力<table>tableseeoriginaldocumentpage153</column></row><table>*表示p<.05,ANOVA權(quán)利要求1.包含抗原結(jié)合域的結(jié)合蛋白,所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合IL-13,所述抗原結(jié)合域包含至少一個(gè)CDR,該CDR包含選自以下的氨基酸序列CDR-H1.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQIDNO64),其中X1為T(mén)、D、G或S;X2為S;X3為D;X4為M、S、Y、L或H;X5為G、W、Y、A、S或N;X6為V、I或M;且X7為D、H、S、Y、N或G;CDR-H2.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQIDNO65),其中X1為M、E、H、R、S、G或L;X2為I或不存在;X3為H、Y、A、D、S或W;X4為P、S、W或G;X5為S、G、E或D;X6為D、G、S、E或N;X7為S、Y或G;X8為E、N、Y、V或R;X9為T(mén)、I或K;X10為R、Y、I、D或A;X11為L(zhǎng)、Y、D或F;X12為N、P、S或D;X13為Q、E、D、P或S;X14為K、M、S、T、A或V;X15為F、L、V或M;X16為K、R或Q;且X17為D、G或S;CDR-H3.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14(SEQIDNO66),其中X1為W、T、G、Y、D或I;X2為R、A、S、G或V;X3為T(mén)、F、Y或S;X4為S、T或Y;X5為Y、F或G;X6為F或Y;X7為S、Y、I或F;X8為D、L、Y或P;X9為Y;X10為G;X11為Y、A、P或E;X12為F、M、S、L或I;X13為D、V、N或K;且X14為Y或F;CDR-L1.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQIDNO67),其中X1為K或R;X2為S或A;X3為S或T;X4為Q、K或L;X5為N、S、T、G或E;X6為L(zhǎng)、T或S;X7為L(zhǎng)、Q或V;X8為Y、N、H、D或T;X9為S、I或T;X10為S、D、N、H或Y;X11為N或G;X12為Q;X13為K、F、N、E或S;X14為N、T或S;X15為Y或F;X16為L(zhǎng)、A或M;且X17為A、D、E、H或N;CDR-L2.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQIDNO68),其中X1為L(zhǎng)、S、K、T、W或Y;X2為V、T或A;X3為S或N;X4為N、K、T、M或R;X5為R、K或L;X6為F、D、E、H、P或A;且X7為S、R或P;和CDR-L3.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(SEQIDNO69),其中X1為F、W、Q或A;X2為Q或L;X3為H、G、Y、W或N;X4為N、S、T、L或Y;X5為Y、T、S、E或H;X6為L(zhǎng)、V、F、Y、N、G、P或D;X7為P或H;X8為L(zhǎng)、F、Y、W或R;且X9為T(mén)或V。2.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白,其中所述至少一個(gè)CDR包含選自下列的氨基酸序列SEQIDNOSEqIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEqIDNOSEQIDNO32的殘基31-35;32的殘基50-66;32的殘基99-105;33的殘基24-39;33的殘基55-61;33的殘基94-102;34的殘基31-35;34的殘基50-66;34的殘基99-105;SE(5IDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEqIDNO47的殘基24-34;47的殘基50-56;47的殘基89-97;48的殘基31-37;48的殘基52-67;48的殘基100-112;49的殘基24-34;49的殘基50-56;49的殘基89-97;SEQIDNO:35的殘基24-39;SEQIDNO:35的殘基55-61;SEQIDNO:35的殘基94-102;SEQIDNO:36的殘基31-35;SEQIDNO:36的殘基50-66;SEQIDNO:36的殘基99-109;SEQIDNO:37的殘基24-39;SEQIDNO:37的殘基55-61;SEQIDNO:37的殘基94-102;SEQIDNO:38的殘基31-35;SEQIDNO:38的殘基50畫(huà)66;SEQIDNO:38的殘基99-109;SEQIDNO:39的殘基31-35;SEQIDNO:39的殘基50-66;SEQIDNO:39的殘基99-112;SEQIDNO:40的殘基24-39;SEQIDNO:40的殘基55-61;SEQIDNO:40的殘基94-102;SEQIDNO:41的殘基31國(guó)35;SEQIDNO:41的殘基50-66;SEQIDNO:41的殘基99-112;SEQIDNO:42的殘基31-35;SEQIDNO:42的殘基50-66;SEQIDNO:42的殘基99-100;SEQIDNO:43的殘基24-39;SEQIDNO:43的殘基55-61;SEQIDNO:43的殘基94-102;SEQIDNO:44的殘基31-35;SEQIDNO:44的殘基50-65;SEQIDNO:44的殘基98-106;SEQIDNO:45的殘基24-40;SEQIDNO:45的殘基56-62;SEQIDNO:50的殘基31-37;SEQIDNO:50的殘基52-67;SEQIDNO:50的殘基100-112;SEQIDNO:51的殘基24-34;SEQIDNO:51的殘基60-66;SEQIDNO:51的殘基89-97;SEQIDNO:52的殘基31-35;SEQIDNO:52的殘基50-66;SEQIDNO:52的殘基99-107;SEQIDNO:53的殘基23-36;SEQIDNO:53的殘基52-58;SEQIDNO:53的殘基91-99;SEQIDNO:54的殘基31-35;SEQIDNO:54的殘基50-65;SEQIDNO:54的殘基98-107;SEQIDNO:55的殘基24-38;SEQIDNO:55的殘基54-60;SEQIDNO:55的殘基93-101;SEQIDNO:56的殘基31-35;SEQIDNO:56的殘基50-65;SEQIDNO:56的殘基98-107;SEQIDNO:57的殘基24-38;SEQIDNO:57的殘基54-60;SEQIDNO:57的殘基93-101;SEQIDNO:58的殘基31-35;SEQIDNO:58的殘基50-65;SEQIDNO:58的殘基98-107;SEQIDNO:59的殘基24-38;SEQIDNO:59的殘基54-60;SEQIDNO:59的殘基93-101;SEQIDNO:60的殘基31-35;SEQIDNO:60的殘基50-65;SEQIDNO:45的殘基95-103;SEQIDNO:46的殘基32-38;SEQIDNO:46的殘基52-67;SEQIDNO:46的殘基100-112SEQIDNO:62的殘基31-35;SEQIDNO:62的殘基50-65;SEQIDNO:62的殘基98-107;SEQIDNO:63的殘基24-38;SEQIDNO:63的殘基54-60;和SEQIDNO:63的殘基93-101。3.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白包含至少3個(gè)CDR。4.據(jù)權(quán)利要求3的結(jié)合蛋白,其中所迷至少3個(gè)CDR選自下列可變域CDR組<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>VL29G5CDR國(guó)L2SEQIDNO:49的殘基50-56VL29G5CDR-L3SEQIDNO:49的殘基89-97VH33C3CDR組VH33C3CDR-H1SEQIDNO50的殘基31-37VH33C3CDR-H2SEQIDNO50的殘基52-67VH33C3CDR畫(huà)H3SEQIDNO50的殘基100-112VL33C3CDR組VL33C3CDR-L1SEQIDNO51的殘基24-34VL33C3CDR-L2SEQIDNO51的殘基60-66VL33C3CDR-L3SEQIDNO51的殘基89-97VH4A8CDR組VH4A8CDR-H1SEGIDNO52的殘基31-35VH4A8CDR-H2SEQIDNO52的殘基50-66VH4A8CDR-H3SEQIDNO52的殘基99-1074A8CDR組VL4A8CDR-L1SEQIDNO53的殘基23-36VL4A8CDR-L2SEQIDNO53的殘基52-58VL4A8CDR-L3SEQIDNO53的殘基91-99VH1B6CDR組VH1B6CDR-H1SEQIDNO54的殘基31-35VH1B6CDR-H2SEQIDNO54的殘基50-65VH1B6CDR-H3SEQIDNO54的殘基98-107VL1B6CDR組VL1B6CDR-L1SE(^IDNO,55的殘基24-38VL1B6CDR-L2SEQIDNO55的殘基54-60VL1B6CDR-L3SEQIDNO.55的殘基93-101VH3E5CDR組VH3E5CDR-H1SEQIDNO:56的殘基31-35VH3E5CDR畫(huà)H2SEQIDNO.56的殘基50-65VH3E5CDR-H3SEQIDNO56的殘基98-107VL3E5CDR組9<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>。5.根據(jù)權(quán)利要求4的結(jié)合蛋白,其包含至少2個(gè)可變域CDR組。6.根據(jù)權(quán)利要求5的結(jié)合蛋白,其中所述至少2個(gè)可變域CDR組選自VH25C8CDR組&VL25C8CDR組;VH9C11CDR組&VL9C11CDR組;VH21D9CDR組&VL21D9CDR組;VH22D10CDR組&VL22D10CDR組;VH5F1CDR組&VL5F1CDR組;VH5G1CDR組&VL5G1CDR組;VH3H7CDR組&VL3H7CDR組;VH14B2CDR組&VL14B2CDR組;VH13C5CDR組&VL13C5CDR組;VH29G5CDR組&VL29G5CDR組;VH33C3CDR組&VL33C3CDR組;VH4A8CDR組&VL4A8CDR組;VH1B6CDR組&VL1B6CDR組;VH3E5CDR組&VL3E5CDR組;VH6C8CDR組&VL6C8CDR組;VH5D3CDR組&VL5D3CDR組;和VH8B6CDR組&VL犯6CDR組。7.根據(jù)權(quán)利要求6的結(jié)合蛋白,其還包含人類(lèi)接納體框架。8.根據(jù)權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白,其中所述人類(lèi)接納體框架包含選自下列的氨基酸序列SEQIDNO.6SEQIDNO.16SEQIDNO.26SEQIDNO.7SEQIDNO.17SEQIDNO.27SEQIDNO.8SEQIDNO.18SEQIDNO.28SE(5IDNO.9SEQIDNO.19SEQIDNO.29SEQIDNO.10SEQIDNO.20SEQIDNO.30SEQIDNO.11SEQIDNO.21和SEQIDNO.12SEQIDNO.22SEqIDNO.,31SEQIDNO.13SEQIDNO.23SEQIDNO.14SEQIDNO.24SEQIDNO.15SEQIDNO.259.根據(jù)權(quán)利要求7(或9)的結(jié)合蛋白,其中所述人類(lèi)接納體框架包含至少一個(gè)框架區(qū)域氨基酸取代,其中該框架的氨基酸序列與所述人類(lèi)接納體框架的序列至少65%相同且包含至少70個(gè)與所述人類(lèi)接納體框架相同的氨基酸殘基。10.根據(jù)權(quán)利要求8的結(jié)合蛋白,其中所述人類(lèi)接納體框架在關(guān)鍵殘基處包含至少一個(gè)框架區(qū)域氨基酸取代,所述關(guān)鍵殘基選自鄰近于CDR的殘基;糖基化位點(diǎn)殘基;稀有殘基;能夠與人類(lèi)IL-13相互作用的殘基;能夠與CDR相互作用的殘基;規(guī)范殘基;重鏈可變區(qū)與輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基;Vernier區(qū)中的殘基;和在Chothia定義的可變重鏈CDRl與Kabat定義的第一重鏈框架之間重疊的區(qū)域中的殘基。11.根據(jù)權(quán)利要求9的結(jié)合蛋白,其中關(guān)鍵殘基選自2L、15L、22L、41L、42L、44L、49L、50L、51L、62L、71L、73L、麗、術(shù)、46H、48H、67H、68H、70H、72H、74H、76H、83H、84H、86H、87H和97H。12.根據(jù)權(quán)利要求11的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白為共有人類(lèi)可變域。13.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)具有選自以下的氨基酸序列的可變域SEQIDNO.70SEQIDNO.81SEQIDNO.71SEQIDNO.82SEGIDNO.72SEQIDNO.83SEQIDNO.73SEQIDNO.84SEQIDNO.74SEQIDNO.85SEQIDNO.75SEQIDNO.92SEQIDNO.76SEQIDNO.93SEQIDNO.77和SEQIDNO.78SEQIDNO.:94SEGIDNO.79SEQIDNO.8014.根據(jù)權(quán)利要求13的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白包含2個(gè)可變域,其中該2個(gè)可變域具有選自下列的氨基酸序列SEqIDNO70&SEQIDNO71;SEQIDNO72&SEQIDNO73;SEQIDNO74&SEQIDNO75;SEQIDNO76&SEQIDNO77;SEQIDNO78&SEQIDNO79;SEQIDNO80&SEQIDNO81;SEQIDNO82&SEGIDNO83;SEQIDNO84&SEQIDNO85;SEQIDNO80&SEQIDNO92;SEQIDNO80&SEQIDNO93;SEQIDNO80&SEQIDNO94。15.根據(jù)權(quán)利要求11的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)具有選自下列的氨基酸序列的可變域SEQIDNO.70SEQIDNO.78SEQIDNO.:92SEQIDNO.71SEQIDNO.79SEQIDNO.:93SEQIDNO.72SEQIDNO.80和SEQIDNO.73SE(5IDNO.81SEQIDNO.:94SE(5IDNO.74SEQIDNO.82SEQIDNO.75SEQIDNO.83SEQIDNO.76SEGIDNO.84SE(5IDNO.77SEQIDNO.8516.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白結(jié)合IL-13。17.根據(jù)權(quán)利要求14的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白結(jié)合IL-13。18.根據(jù)權(quán)利要求17的結(jié)合蛋白,其中該結(jié)合蛋白能夠調(diào)節(jié)IL-13的生物學(xué)功能。19.根據(jù)權(quán)利要求17的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白能夠中和IL曙13。20.根據(jù)權(quán)利要求17的結(jié)合蛋白,其中如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定,所述結(jié)合蛋白對(duì)所述標(biāo)靶具有選自下列的結(jié)合速率常數(shù)(k。n):至少約10W;至少約lOW1;至少約ltyVV1;至少約Wm-V1;和至少約1()6m-V1。21.根據(jù)權(quán)利要求17的結(jié)合蛋白,其中如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定,所述結(jié)合蛋白對(duì)所述標(biāo)靶具有選自下列的分解速率常數(shù)(k。ff):至多約10—Y、至多約1(TV、至多約10'5s";和至多約10、"。22.根據(jù)權(quán)利要求17的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白對(duì)所述標(biāo)靶具有選自下列的解離常數(shù)(KD):至多約10^M;至多約1(^M;至多約1(T9M;至多約10—1C)M;至多約1(T"M;至多約10^M;和至多10—13M。23.抗體構(gòu)建體,其包含根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白,所述抗體構(gòu)建體還包含接頭多肽或免疫球蛋白恒定區(qū)。24.根據(jù)權(quán)利要求23的抗體構(gòu)建體,其中所述結(jié)合蛋白選自免疫球蛋白分子,二硫化物連接的Fv,單克隆抗體,scFv,嵌合抗體,單域抗體,CDR移植抗體,雙功能抗體,人源化抗體,多特異性抗體,F(xiàn)ab,雙重特異抗體,和Fab',雙特異性抗體。F(ab,)2,Fv,25.根據(jù)權(quán)利要求23的抗體構(gòu)建體,其中所述結(jié)合蛋白包含選自下列的重鏈免疫球蛋白恒定域人類(lèi)IgM恒定域,人類(lèi)IgGl恒定域,人類(lèi)IgG2恒定域,人類(lèi)IgG3恒定域,人類(lèi)IgG4恒定域,人類(lèi)IgE恒定域,和人類(lèi)IgA恒定域。26.根據(jù)權(quán)利要求23的抗體構(gòu)建體,其包含具有選自下列的氨基酸序列的免疫球蛋白恒定域SEQIDNO.:2SEQIDNO.:3SEQIDNO.:4和SEQIDNO.:5。27.抗體綴合物,其包含根據(jù)權(quán)利要求24的抗體構(gòu)建體,所述抗體綴合物還包含選自免疫粘附分子、造影劑、治療劑和細(xì)胞毒性劑的試劑。28.根據(jù)權(quán)利要求27的抗體綴合物,其中所述試劑為選自放射性標(biāo)記、酶、熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、磁性標(biāo)記和生物素的造影劑。29.根據(jù)權(quán)利要求27的抗體綴合物,其中所述造影劑為選自3H、14C、35S、9。Y、"Tc、mln、125I、131I、177Lu、166Ho和153Sm的放射性才示t己。30.根據(jù)權(quán)利要求27的抗體綴合物,其中所述試劑為選自抗代謝物、烷基化劑、抗生素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環(huán)霉素、毒素和細(xì)胞凋亡劑的治療劑或細(xì)胞毒性劑。31.根據(jù)權(quán)利要求24的抗體構(gòu)建體,其中所述結(jié)合蛋白具有人類(lèi)糖基化模式。32.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白為結(jié)晶結(jié)合蛋白。33.根據(jù)權(quán)利要求23的抗體構(gòu)建體,其中所述抗體構(gòu)建體為結(jié)晶抗體構(gòu)建體。34.根據(jù)權(quán)利要求33的抗體構(gòu)建體,其中所述結(jié)晶抗體構(gòu)建體為不含載體的藥物控釋結(jié)晶抗體構(gòu)建體。35.根據(jù)權(quán)利要求34的抗體構(gòu)建體,其中所述抗體構(gòu)建體比所述抗體構(gòu)建體的可溶性對(duì)應(yīng)物具有更大體內(nèi)半衰期。36.根據(jù)權(quán)利要求34的抗體構(gòu)建體,其中所述抗體構(gòu)建體保留生物學(xué)活性。37.分離的核酸,其編碼根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白氨基酸序列。38.分離的核酸,其編碼根據(jù)權(quán)利要求23的抗體構(gòu)建體氨基酸序列。39.載體,其包含根據(jù)權(quán)利要求38的分離的核酸。40.#4居權(quán)利要求39的載體,其中所述載體選自pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV和pBJ。41.宿主細(xì)胞,其包含根據(jù)權(quán)利要求39的載體。42.根據(jù)權(quán)利要求41的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞。43.根據(jù)權(quán)利要求42的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌。44.根據(jù)權(quán)利要求41的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞。45.根據(jù)權(quán)利要求44的宿主細(xì)胞,其中所述真核細(xì)胞選自原生生物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞和真菌細(xì)胞。46.才艮據(jù)權(quán)利要求44的宿主細(xì)胞,其中所述真核細(xì)胞為選自哺乳動(dòng)物細(xì)胞、鳥(niǎo)類(lèi)細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞的動(dòng)物細(xì)胞。47.根據(jù)權(quán)利要求44的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞為CHO細(xì)胞。48.根據(jù)權(quán)利要求44的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞為COS。49.根據(jù)權(quán)利要求44的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞為酵母細(xì)胞。50.根據(jù)權(quán)利要求49的宿主細(xì)胞,其中所述酵母細(xì)胞為釀酒酵母。51.根據(jù)權(quán)利要求44的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞為昆蟲(chóng)Sf9細(xì)胞。52.產(chǎn)生能夠結(jié)合IL-13的蛋白的方法,所述方法包括在培養(yǎng)基中在足以產(chǎn)生能夠結(jié)合IL-13的結(jié)合蛋白的條件下,培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求41的宿主細(xì);9包。53.根據(jù)權(quán)利要求52的方法產(chǎn)生的蛋白。54.用于釋放結(jié)合蛋白的組合物,所述組合物包含(a)制劑,其中所述制劑包含根據(jù)權(quán)利要求33的結(jié)晶結(jié)合蛋白和組分;和(b)至少一種聚合載體。55.根據(jù)權(quán)利要求54的組合物,其中所述聚合載體為選自下列的一種或多種聚合物聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(縮肽)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或PLGA、聚(p-羥基丁酸酯)、聚(己內(nèi)酯)、聚(二氧雜環(huán)己酮);聚(乙二醇)、聚((羥丙基)曱基丙烯酰胺)、聚[(有機(jī))磷腈]、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、順丁烯二酸酐-烷基乙烯基醚共聚物、復(fù)合多元醇、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素和纖維素衍生物、膠原、血纖蛋白、明膠、透明質(zhì)酸、寡糖、葡糖胺聚糖、硫酸化多糖、其混合物和共聚物。56.根據(jù)權(quán)利要求54的組合物,其中所述組分選自白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明膠、羥丙基-P-環(huán)糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。57.用于治療哺乳動(dòng)物的方法,所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求54的組合物的步驟。58.藥物組合物,其包含根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白和藥物學(xué)上可接受的載體。59.根據(jù)權(quán)利要求58的藥物組合物,其中所述藥物學(xué)上可接受的載體起用于增加所述結(jié)合蛋白的吸收或分散的輔助劑的作用。60.根據(jù)權(quán)利要求59的藥物組合物,其中所述輔助劑為透明質(zhì)酸酶。61.根據(jù)權(quán)利要求58的藥物組合物,其還包含至少一種用于治療其中IL-13活性起有害作用的病癥的其它治療劑。62.根據(jù)權(quán)利要求61的藥物組合物,其中所述其它治療劑選自治療劑、造影劑、細(xì)胞毒性劑、血管生成抑制劑;激酶抑制劑;協(xié)同刺激分子阻斷劑;粘著分子阻斷劑;抗細(xì)胞因子抗體或其功能片段;曱胺蝶呤;環(huán)孢菌素;雷帕霉素;FK506;可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)道基因;TNF拮抗劑;抗風(fēng)濕劑;肌肉松弛劑、麻醉藥、非甾類(lèi)消炎藥物(NSAID)、止痛藥、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻斷劑、抗菌劑、牛皮癬治療劑、皮質(zhì)類(lèi)固醇、合成代謝類(lèi)固醇、紅血球生成素、免疫、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑郁劑、抗精神病劑、刺激劑、哮喘藥劑、卩激動(dòng)劑、經(jīng)吸入甾類(lèi)藥物、口服甾類(lèi)藥物、腎上腺素或類(lèi)似物、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子拮抗劑。63.降低人類(lèi)IL-13活性的方法,所述方法包括使人類(lèi)IL-13與根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白接觸而使得人類(lèi)IL-13活性降低。64.降低患有其中IL-13活性起有害作用的病癥的人類(lèi)個(gè)體中的人類(lèi)IL-13活性的方法,所述方法包括向所述人類(lèi)個(gè)體施用根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白,以使得所述人類(lèi)個(gè)體中的人類(lèi)IL-13活性降低。65.通過(guò)向個(gè)體施用根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白來(lái)治療所述個(gè)體的其中IL-13活性起有害作用的疾病或病癥的方法。66.根據(jù)權(quán)利要求65的方法,其中所述病癥選自呼吸病癥;哮喘;過(guò)敏性和非過(guò)敏性哮喘;因感染所致的哞喘;因呼吸道合胞病毒(RSV)感染所致的哮喘;慢性阻塞性肺病(COPD);其它涉及氣管炎癥的病癥;嗜酸粒細(xì)胞增多;纖維化和粘液過(guò)量產(chǎn)生;嚢性纖維化;肺纖維化;特異反應(yīng)性病癥;特異反應(yīng)性皮炎;蕁麻滲;濕瘆;過(guò)敏性鼻炎;和過(guò)敏性腸胃炎;皮膚的炎性和/或自身免疫病癥;胃腸器官的炎性和/或自身免疫病癥;炎性腸病(IBD);潰瘍性結(jié)腸炎;克羅恩氏??;肝臟的炎性和/或自身免疫病癥;肝硬化;肝臟纖維化;由B型肝炎和/或C型肝炎病毒所致的肝臟纖維化;硬皮??;腫瘤或癌癥;肝細(xì)胞癌;成膠質(zhì)細(xì)胞瘤;淋巴瘤;霍奇金淋巴瘤;病毒感染;HTLV-1感染(例如來(lái)自HTLV-1);保護(hù)性1型免疫反應(yīng)表現(xiàn)的抑制和在疫苗接種期間保護(hù)性1型免疫反應(yīng)表現(xiàn)的抑制。67.根據(jù)權(quán)利要求63的方法,其中所述病癥選自類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、萊姆關(guān)節(jié)炎、牛皮癉性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、脊推關(guān)節(jié)病、全身性紅斑性狼瘡癥、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸病、胰島素依賴(lài)型糖尿病、曱狀腺炎、哮喘、過(guò)敏性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、移植物對(duì)抗宿主疾病、器官移植排斥反應(yīng)、與器官移植相關(guān)的急性或慢性免疫疾病、肉狀瘤病、動(dòng)脈粥樣硬化、彌漫性血管內(nèi)凝血、川崎氏疾病、格雷氏疾病、腎病綜合征、慢性疲勞綜合征、韋格納肉芽腫病、過(guò)敏性紫癜、腎微觀(guān)血管炎、慢性活動(dòng)型肝炎、葡萄膜炎、膿毒性休克、中毒性休克綜合征、膿毒癥綜合征、惡病質(zhì)、傳染性疾病、寄生疾病、獲得性免疫缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓舞蹈病、帕金森病、阿爾茨海默病、中風(fēng)、原發(fā)性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡性疾病、心臟衰竭、心肌梗塞、阿狄森氏病、多腺缺乏I型和多腺缺乏II型、施密特綜合征、成人(急性)呼吸窘迫綜合征、脫發(fā)、斑形脫發(fā)、血清陰性關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)病、菜特爾氏病、牛皮辨性關(guān)節(jié)病、潰瘍性大腸炎性關(guān)節(jié)病、腸病性滑膜炎、衣原體病、耶爾森氏菌和沙門(mén)氏菌相關(guān)關(guān)節(jié)病、脊推關(guān)節(jié)病、動(dòng)脈粥樣化疾病/動(dòng)脈硬化、特異反應(yīng)性過(guò)敏、自身免疫大皰疾病、尋常天皰瘡、葉型天皰瘡、類(lèi)天皰瘡、線(xiàn)性IgA疾病、自身免疫溶血性貧血癥、庫(kù)姆陽(yáng)性溶血性貧血癥、后天性惡性貧血、幼年型惡性貧血、肌痛性腦炎/RoyalFree疾病、慢性皮膚粘膜念珠菌病、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、原發(fā)性硬化型肝炎、隱性自身免疫肝炎、后天免疫缺陷疾病綜合征、后天免疫缺陷相關(guān)疾病、B型肝炎、C型肝炎、常見(jiàn)變異免疫缺損(常見(jiàn)變異低丙種球蛋白血病)、擴(kuò)張型心肌病、女性不育癥、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維化肺疾病、隱性纖維性肺泡炎、炎癥后間質(zhì)性肺病、間質(zhì)肺炎、結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺病、混合性結(jié)締組織病相關(guān)肺病、全身性硬化相關(guān)間質(zhì)性肺病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)間質(zhì)性肺病、全身性紅斑性狼瘡癥相關(guān)肺病、皮肌炎/多發(fā)性肌炎相關(guān)肺病、修格蘭氏疾病相關(guān)肺病、強(qiáng)直性脊推炎相關(guān)肺病、脈管炎擴(kuò)散肺病、含鐵血黃素沉著癥相關(guān)肺病、藥物誘導(dǎo)之間質(zhì)性肺病、纖維化、放射性纖維化、閉塞性細(xì)支氣管炎、慢性嗜酸細(xì)胞性肺炎、淋巴細(xì)胞滲透性肺病、感染后間質(zhì)性肺病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、自身免疫肝炎、1型自身免疫肝炎(典型自身免疫或狼瘡樣肝炎)、2型自身免疫肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自身免疫介導(dǎo)的低血糖、具有黑棘皮病的B型抗胰島素癥、曱狀旁腺機(jī)能減退、與器官移植相關(guān)的急性免疫疾病、與器官移植相關(guān)的慢性免疫疾病、骨關(guān)節(jié)病、原發(fā)性硬化性膽管炎、1型牛皮褲、2型牛皮褲、特發(fā)性白血球減少、自身免疫性嗜中性白血球減少癥、腎病NOS、絲球體腎炎、腎微觀(guān)血管炎、萊姆病、盤(pán)狀紅斑狼瘡、特發(fā)性或NOS男性不育癥、精液自身免疫性、多發(fā)性硬化癥(所有亞型)、交感性眼炎、結(jié)締組織病后繼發(fā)的肺動(dòng)脈高血壓、古德帕斯徹氏綜合征、肺多發(fā)性結(jié)節(jié)性動(dòng)脈炎特征、急性風(fēng)濕熱、類(lèi)風(fēng)濕性脊推炎、斯蒂爾氏病、系統(tǒng)性硬化、修格蘭氏綜合征、高安氏疾病/動(dòng)脈炎、自身免疫血小板減少癥、特發(fā)性血小板減少癥、自身免疫性甲狀腺病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、曱狀腺腫自身免疫曱狀腺機(jī)能減退(橋本氏病)、萎縮性自身免疫曱狀腺機(jī)能減退、原發(fā)性粘液水腫、晶狀體源性葡萄膜炎、原發(fā)性血管炎、白斑癥急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘導(dǎo)的肝臟損傷、膽汗郁積、特質(zhì)性肝病、藥物誘導(dǎo)的肝炎、非酒精性脂肪變性肝炎、過(guò)敏和哮喘、B組鏈球菌(GBS)感染、精神錯(cuò)亂(例如抑郁和精神分裂癥)、Th2型和Thl型介導(dǎo)的疾病、急性和l曼性疼痛(各種疼痛)和癌癥(例如肺、乳房、胃、膀胱、結(jié)腸、胰腺、卵巢、前列腺和直腸癌)和造血惡性疾病(白血病和淋巴瘤)、無(wú)卩脂蛋白血病、手足發(fā)紺、急性和慢性寄生或傳染性過(guò)程、急性白血病、急性成淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、急性或慢性細(xì)菌感染、急性胰腺炎、急性腎功能衰竭、腺癌、空中異位搏動(dòng)、AIDS癡呆并發(fā)癥、酒精誘導(dǎo)的肝炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎、過(guò)敏性接觸性皮炎、過(guò)敏性鼻炎、同種異體移植排斥、a-l-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎縮性側(cè)索硬化、貧血、心絞痛、前角細(xì)胞退化、抗cd3療法、抗磷脂綜合征、抗受體過(guò)敏性反應(yīng)、主動(dòng)脈瘤和周?chē)鷦?dòng)脈瘤、主動(dòng)脈剝離、高動(dòng)脈壓、動(dòng)脈硬化、動(dòng)靜脈瘺、共濟(jì)失調(diào)、心房顫動(dòng)(持續(xù)性或突發(fā)性)、心房樸動(dòng)、房室傳導(dǎo)阻滯、B細(xì)胞淋巴瘤、骨移植排斥反應(yīng)、骨髓移植(BMT)排斥反應(yīng)、房室束支傳導(dǎo)阻滯、伯基特氏淋巴瘤、灼傷、心律不整、心臟頓抑綜合征、心臟腫瘤、心肌病、心肺旁路炎癥反應(yīng)、軟骨移植排斥反應(yīng)、小腦皮質(zhì)退化、小腦病癥、混亂或多灶性房性心動(dòng)過(guò)速、化學(xué)療法相關(guān)的病癥、鉻髓細(xì)胞性白血病(CML)、慢性醇中毒、慢性炎性病癥、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸鹽中毒、結(jié)腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結(jié)膜炎、接觸性皮炎、肺心病、冠狀動(dòng)脈病、庫(kù)賈氏病、培養(yǎng)物陰性膿毒癥、嚢性纖維化、細(xì)胞因子療法相關(guān)的病癥、拳擊員癡呆、脫髓鞘疾病、登革熱出血熱、皮炎、皮膚病學(xué)病癥、糖尿病、糖尿病、糖尿病性動(dòng)脈硬化性疾病、彌漫性雷維小體疾病、擴(kuò)張型充血型心肌病、基底神經(jīng)節(jié)病癥、中年唐氏綜合征、通過(guò)藥物誘發(fā)的阻斷CNS多巴胺受體的藥物誘發(fā)運(yùn)動(dòng)病癥、藥物過(guò)敏、濕滲、腦脊髓炎、心內(nèi)膜炎、內(nèi)分泌病、會(huì)厭炎、埃-巴二氏病毒感染、紅斑性肢痛病、錐體束外和小腦病癥、家族性噬血細(xì)胞淋巴組織細(xì)胞增生癥、胎兒胸腺植入排斥反應(yīng)、弗里德棘希氏共濟(jì)失調(diào)、功能性周邊動(dòng)脈病癥、真菌膿毒癥、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球性腎炎、任何器官或組織的移植排斥反應(yīng)、革蘭氏陰性膿毒癥、革蘭氏陽(yáng)性膿毒癥、因細(xì)胞內(nèi)生物而致的肉芽瘤、毛細(xì)胞白血病、霍-史氏疾病、橋本氏曱狀腺炎、枯草熱、心臟移植排斥反應(yīng)、血色素沉著癥、血液透析、溶血尿毒癥綜合征/溶栓血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A)、希氏束心律不整、HIV感染/HIV神經(jīng)病、霍奇金病、多動(dòng)性運(yùn)動(dòng)障礙、過(guò)敏性反應(yīng)、過(guò)敏性肺炎、高血壓、運(yùn)動(dòng)功能減退性運(yùn)動(dòng)障礙、下視丘垂體腎上腺軸評(píng)估、特發(fā)性阿狄森氏病、特發(fā)性肺纖維化、抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、衰弱、嬰兒脊髓性肌萎縮、主動(dòng)脈炎癥、流行性感冒a、電離輻射暴露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經(jīng)炎、局部缺血-再灌注損傷、局部缺血性中風(fēng)、幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型脊髓性肌萎縮癥、卡波西氏肉瘤、腎臟移植排斥反應(yīng)、軍團(tuán)菌,利什曼病、麻瘋病、脊髓皮質(zhì)系統(tǒng)病變、脂肪水腫、肝臟移植排斥反應(yīng)、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細(xì)胞病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血癥、代謝/特發(fā)性、偏頭痛、線(xiàn)粒體多系統(tǒng)功能異常、混合性結(jié)締組織病、單克隆丙種球蛋白病、多發(fā)性骨髓瘤、多發(fā)性系統(tǒng)退化(MencelDejerine-ThomasShi-Drager和Machado-Joseph)、重癥肌無(wú)力、胞內(nèi)烏分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌、骨髓增生異常綜合征、心肌梗塞、心肌局部缺血癥、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎變病、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)性I肌肉萎縮、嗜中性白血球低下發(fā)燒、非霍奇金淋巴瘤、腹主動(dòng)脈和其旁支閉塞癥、動(dòng)脈閉塞癥、okt3療法、睪丸炎/副睪丸炎、睪丸炎/輸精管切除術(shù)反向程序、臟器腫大、骨質(zhì)疏松癥、胰腺移植排斥反應(yīng)、胰腺癌、肺瘤伴隨綜合征/惡性血鈣過(guò)多、甲狀旁腺移植排斥反應(yīng)、骨盆炎性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、周邊動(dòng)脈粥樣硬化疾病、周邊血管性病癥、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺嚢蟲(chóng)肺炎、肺炎、POEMS綜合征(多神經(jīng)病、臟器肺大、內(nèi)分泌病、單克隆丙種球蛋白病和皮膚變化綜合征)、灌注后綜合征、泵后綜合征、Mi心切開(kāi)術(shù)后綜合征、子癇前期、進(jìn)行性核上麻痹、原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、放射治療、雷諾氏現(xiàn)象和疾病、雷諾氏疾病、雷富孫氏病、常見(jiàn)窄QRS心動(dòng)過(guò)速、腎血管高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、雷維小體型老年癡呆癥、血清陰性關(guān)節(jié)病、休克、鐮刀形細(xì)胞貧血癥、同種移植皮膚排斥反應(yīng)、皮膚變化綜合征、小腸移植排斥反應(yīng)、實(shí)體腫瘤、特定心律不整、脊推共濟(jì)失調(diào)、脊髓小腦退化、鏈狀球菌肌炎、小腦結(jié)構(gòu)損害、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統(tǒng)梅毒、全身過(guò)敏反應(yīng)、全身炎性反應(yīng)綜合征、全身發(fā)作幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、T細(xì)胞或FABALL、毛細(xì)血管擴(kuò)張、血栓閉塞性脈管炎、血小板減少、毒性、移植、外傷/出血、III型過(guò)敏性反應(yīng)、IV型過(guò)敏性反應(yīng)、不穩(wěn)定絞痛、尿毒癥、尿膿毒病、蕁麻滲、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動(dòng)、病毒和真菌感染、致命腦炎/無(wú)菌性腦膜炎、生命攸關(guān)的噬血細(xì)胞綜合征、韋尼克-科爾薩科夫綜合征、威爾森氏癥、任何器官或組織的異種移植排斥反應(yīng)、急性冠狀綜合征、急性特發(fā)性多發(fā)性神經(jīng)炎、急性炎性脫髓鞘多神經(jīng)根神經(jīng)病、急性局部缺血、成人斯蒂爾氏病、斑形脫發(fā)、過(guò)壽丈性反應(yīng)、抗^粦脂抗體綜合征、再生障礙性貧血、動(dòng)脈硬化、特異反應(yīng)性濕滲、特異反應(yīng)性皮炎、自身免疫皮炎、與鏈球菌感染相關(guān)的自身免疫病癥、自身免疫性腸病、自身免疫性耳聾、自身免疫性淋巴組織增生綜合征(ALPS)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢早衰、瞼炎、支氣管擴(kuò)張、大皰性類(lèi)天皰瘡、心血管疾病、惡性抗磷脂綜合征、乳糜瀉、頸脊推病、慢性局部缺血、瘢痕型類(lèi)天皰瘡、具有多發(fā)性硬化癥風(fēng)險(xiǎn)的臨床上獨(dú)立的綜合征(CIS)、結(jié)膜炎、兒童期發(fā)作的精神錯(cuò)亂、慢性阻塞性肺病(COPD)、淚嚢炎、皮肌炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病、腰推間盤(pán)突出癥、腰推間盤(pán)下垂、藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血、心內(nèi)膜炎、子宮內(nèi)膜異位、內(nèi)眼炎、鞏膜表層炎、多形性紅斑、主要多形性紅斑、妊娠期類(lèi)天皰瘙、古立安-白瑞綜合征(GBS)、枯草熱、休氏綜合征、特發(fā)性帕金森病、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、IgE介導(dǎo)的過(guò)敏、免疫性溶血性貧血、包涵體肌炎、傳染性眼部炎性疾病、炎性髓鞘脫失病、炎性心臟病、炎性腎病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、角結(jié)膜干燥癥、庫(kù)斯毛爾氏癥或庫(kù)斯毛爾氏-梅爾癥、蘭德里麻痹、藍(lán)氏細(xì)胞組織細(xì)胞增多病、網(wǎng)狀青斑、黃斑變性、微觀(guān)多血管炎、MorbusBechterev、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病癥、粘膜類(lèi)天皰瘡、多發(fā)性器官衰竭、重癥肌無(wú)力、脊髓發(fā)育不良綜合征、心肌炎、神經(jīng)根病癥、神經(jīng)病、非A非B型肝炎、視神經(jīng)炎、骨質(zhì)溶解、少關(guān)節(jié)型JRA、周邊動(dòng)脈閉塞疾病(PAOD)、周邊血管疾病(PVD)、周邊動(dòng)脈疾病(PAD)、靜脈炎、多發(fā)性結(jié)節(jié)性動(dòng)脈炎(或結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周?chē)?、多軟骨炎、風(fēng)濕性多肌痛、灰發(fā)癥、多關(guān)節(jié)型JRA、多內(nèi)分泌腺缺乏綜合征、多發(fā)性肌炎、風(fēng)濕性多肌痛(PMR)、泵后綜合征、原發(fā)性帕金森氏綜合征、前列腺炎、純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、原發(fā)性腎上腺機(jī)能不全、復(fù)發(fā)性視神經(jīng)脊髓炎、再狹窄、風(fēng)濕性心臟病、SAPHO(滑膜炎、粉刺、黃水瘡、骨肥厚和骨炎)、硬皮病、繼發(fā)性淀粉樣變性、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經(jīng)痛、繼發(fā)性腎上腺機(jī)能不全、聚硅氧相關(guān)結(jié)締組織病、史年登-威金森皮膚病、強(qiáng)直性脊推炎、多形糜爛性紅斑(SJS)、全身炎性反應(yīng)綜合征、顳動(dòng)脈炎、弓形體性視網(wǎng)膜炎、中毒性表皮壞死溶解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(腫瘤壞死因子受體、l型過(guò)敏反應(yīng)、II型糖尿病、蕁麻滲、常見(jiàn)間質(zhì)性肺炎(UIP)、血管炎、春季結(jié)膜炎、病毒性視網(wǎng)膜炎、柳一原田綜合征(VKH綜合征)、濕性黃斑變性和傷口愈合。68.治療患有其中IL-13起有害作用的病癥的患者的方法,所述方法包括以下步驟在施用第二藥劑之前、同時(shí)或在之后施用根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白,其中所述第二藥劑選自經(jīng)吸入甾類(lèi)藥物;卩-激動(dòng)劑;短效或長(zhǎng)效(3-激動(dòng)劑;白三烯或白三烯受體拮抗劑;ADVAIR;IgE抑制劑;抗IgE抗體;XOLAIR;磷酸二酯酶抑制劑;PDE4抑制劑;黃嘌呤類(lèi)藥物;抗膽堿能藥物;肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑;色甘酸;IL-4抑制劑;IL-5抑制劑;嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子/CCR3抑制劑;組胺酸或其包括H1、H2、H3和H4的受體的拮抗劑;前列腺素D或其受體DPI和CRTH2的拮抗劑;TNF拮抗劑;TNF受體的可溶性片段;ENBREL;TNF酶拮抗劑;TNF轉(zhuǎn)化酶(TACE)抑制劑;蕈毒堿受體拮抗劑;TGF-卩拮抗劑;干擾素y;潑氟尼東;化學(xué)治療劑,曱氨蝶呤;來(lái)氟米特;西羅莫司(雷帕霉素)或其類(lèi)似物,CCI-779;COX2或cPLA2抑制劑;NSAID;免疫調(diào)節(jié)劑;p38抑制劑;TPL-2、MK-2和NFkB抑制劑;布替耐德;表皮生長(zhǎng)因子;皮質(zhì)類(lèi)固醇;環(huán)孢菌素;柳氮磺胺吡啶;氨基水楊酸鹽;6-巰基嘌呤;硫唑噪呤;甲硝唑;脂肪氧合酶抑制劑;馬色拉。秦;奧色拉。秦;巴柳氮;抗氧化劑;血栓烷抑制劑;IL誦1受體拮抗劑;抗IL-1I3抗體;抗IL-6抗體;生長(zhǎng)因子;彈性蛋白酶抑制劑;吡咬基-咪唑化合物;TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、1L-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL畫(huà)17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL陽(yáng)23、IL-24、IL-25、IL國(guó)26、1L-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGF或PDGF的抗體或激動(dòng)劑;CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配體的抗體;FK506;雷帕霉素;霉酚酸嗎啉乙酯;布洛芬;潑尼龍;磷酸二酯酶抑制劑;腺苷激動(dòng)劑;抗血栓形成劑;補(bǔ)體抑制劑;腎上腺素能劑;IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑;IL-1|3轉(zhuǎn)化酶抑制劑;TNFa轉(zhuǎn)化酶抑制劑;T-細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑;金屬蛋白酶抑制劑;6-巰基嘌呤;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑;可溶性細(xì)胞因子受體;可溶性p55TNF受體;可溶性p75TNF受體;sIL-lRI;sIL-lRII;sIL-6R;消炎細(xì)胞因子;IL-4;IL-10;IL國(guó)ll和TGF卩。69.根據(jù)權(quán)利要求65的方法,其中所述對(duì)個(gè)體的施用是通過(guò)至少一種選自下列的方式胃腸外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、嚢內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、大腸內(nèi)、宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸腔內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、快速濃注、經(jīng)陰道、經(jīng)直腸、經(jīng)頰、舌下、鼻內(nèi)和經(jīng)皮。70.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,且在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定中以下述IC5Q抑制所述IL-13與IL-13a2受體結(jié)合,其中1。50選自約1》1。-8至lxl(T8M、lxl(T8至I,-9M、10-9至10—1GM和10-10至l(T11M;或在基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中以下述IC5o抑制所述IL-13與IL-13a2受體結(jié)合,其中1。50選自約1.8x10-8至lxlCT8M、lxl0-8至lxl(T9M、10-9至10"。M和10—1()至10—^M。71.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13且在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中將AHR抑制約50%。72.根據(jù)權(quán)利要求70的抗體,其中所述抗體在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中將AHR抑制約80%。73.根據(jù)權(quán)利要求72的抗體,其中所述抗體為13C5.5。74.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,并且在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的譯喘模型中將AHR抑制約50%且將粘液產(chǎn)生抑制約40%。75.根據(jù)權(quán)利要求74的抗體,其中所述抗體為13C5.5。76.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,并且在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定中或在基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中,在100nM的濃度下將所述IL-13與IL-13a2受體的結(jié)合抑制約70-100%。77.根據(jù)權(quán)利要求70的抗體,其中所述抗體不是BAK502G9、mAbl3.2或MJ2-7。78.根據(jù)權(quán)利要求70的抗體,其中所述抗體為13C5.5。79.根據(jù)權(quán)利要求76的抗體,其中所述抗體為13C5.5。80.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以選自下列的結(jié)合特征結(jié)合IL-13:a)約1()5m"s"至1()6M"s"或約1()6m"s"至1()7M"s"的結(jié)合速率常數(shù)(k。n);b)如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定的約10、"至l(T5s";或約10V至IOV的分解速率常數(shù)(k。ff);和c)約1.5xlO"。至lxl(T"或約10-10至10—"M的解萬(wàn)常數(shù)(Kd)。81.根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)IL-13具有選自下列的結(jié)合速率常數(shù)(k。n):6.68xl05M-V、7.86x1。5m"s—1、8.35xl()5NfV1、S^xloW1、9.15xl05M"s-1、1.26x1()6m"s—1、1.7x106M-1s"和2.51x1()6m"s國(guó)1。82.根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定,所述抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)IL-13具有選自下列的分解速率常數(shù)(k。ff):1.23xl(T4s—!;1.76x10V1;4.74x10、";1.91xlCT5s-1;2.14xl0-5s-1;3.82xlO—5V;8.81xl(T5s—、和9.65xl0-5s—1。83.根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)IL-13具有選自下列的解萬(wàn)常數(shù)(Kd):1.05xlO-1QM;7.10xlO"。M;lxlO"M;2.20xl()-UM;2.72xl(T11M;4.17x10-uM;5.68xlO-11m;7.01xlO-11m;7.10x10-Hm;和9.79xm。84.根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠調(diào)節(jié)IL-13的生物功能。85.根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠中和IL-13。86.根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述人源化抗體或其抗原結(jié)合片段選自免疫球蛋白分子、單克隆抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、人源化抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二碌"匕物連接的Fv、scFv、單域抗體、雙功能抗體、多特異性抗體、雙重特異抗體和雙特異性抗體。87.根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段為人源化抗體。88.根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段為13C5.5抗體。89.藥物組合物,其包含根據(jù)權(quán)利要求80的抗體或其抗原結(jié)合片段和藥物學(xué)上可接受的載體。90.根據(jù)權(quán)利要求89的藥物組合物,其還包含至少一種用于治療其中IL-13活性起有害作用的病癥的其它治療劑。91.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Ser26-Thr27-Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34-Glu35畫(huà)Leu36-Val37-Asn38與Lysl23-Lysl24-Leul25-Phel26-Argl27-Glu-128-Glyl29-Arg130界定的表位結(jié)合。92.根據(jù)權(quán)利要求91的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34國(guó)Glu35-Leu36-VaB7陽(yáng)Asn38和Lysl23-Lysl24-Leul25畫(huà)Phel26-Arg127界定的表位結(jié)合。93.根據(jù)權(quán)利要求91的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13a2受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Ser26-Thr27-Ala28-Leu29畫(huà)Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34-Glu35-Leu36曙Val37誦Asn38和Lysl23-Lysl24-Leul25-Phel26'Argl27-Glu-128-Glyl29國(guó)Arg130界定的表位結(jié)合。94.根據(jù)權(quán)利要求91的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人類(lèi)IL-13,使得具有所述抗體或其抗原結(jié)合片段的IL-13被抑制而不能與IL-13ot2受體結(jié)合,所述抗體或其抗原結(jié)合片段與由SEQIDNo.1的局部區(qū)域Ser26-Thr27-Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32國(guó)Ile33-Glu34-Glu35-Leu36-Val37誦Asn38和Lysl23-Lysl24-Leul25國(guó)Phel26-Argl27-Glu國(guó)128-Glyl29國(guó)Arg130界定的表位結(jié)合,條件是所述抗體不是BAK502G9或MJ2-7。95.根據(jù)權(quán)利要求91的抗體,其中所述抗體為13C5.5。96.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合SEQIDNO1的氨基酸104-130。97.根據(jù)權(quán)利要求96的批體,其中所述抗體為13C5.5。98.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以選自下列的結(jié)合特征結(jié)合IL-13,并且阻止IL-13與IL-13a2受體結(jié)合a.與IL-13上包括螺旋A和D的表位結(jié)合;b.結(jié)合速率常數(shù)(k。n)為約1()5m"s"至1()6M"s"或約1()6m"s"至10M"s";c.如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定的分解速率常數(shù)(k。ff)為約10-4s"至KrY1;或約10-5s"至10-V1;和d.解離常數(shù)(KD)為約1.5xlO"o至lxlO"。M或約10-10至l(T11M。99.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以選自下列的結(jié)合特征結(jié)合變體IL-13:a.與IL-13上包括螺旋A和D的表位結(jié)合;b.結(jié)合速率常數(shù)(k。n)為約1()5m"s"至1()6M"s"或約1C)6m"s"至10M"s";c.如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定的分解速率常數(shù)(k。ff)為約10—4s"至10—Y1;或約10—5s—!至l(T6s—、和d.解離常數(shù)(KD)為約1.5xlO"o至lxlO"OM或約10-10至l(T11M。100.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以選自下列的結(jié)合特征結(jié)合野生型IL-13和變體IL-13:a.與IL-13上包括螺旋A和D的表位結(jié)合;b.結(jié)合速率常數(shù)(k。n)為約1()5m"s"至1()6M"s"或約106m-V!至107M-V;c.如通過(guò)表面等離子體共振所測(cè)定的分解速率常數(shù)(k。ff)為約10—、"至lCrY1;或約10-5s"至10-6s";和d.解離常數(shù)(Ko)為約1.5xlO"o至lxlO^M或約10,至l(T11M。101.根據(jù)權(quán)利要求94的分離的抗體,其中所述抗體在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中將AHR抑制約50%。102.根據(jù)權(quán)利要求94的分離的抗體,其中所述抗體在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中將粘液產(chǎn)生抑制約50%。103.根據(jù)權(quán)利要求94的分離的抗體,其中所述抗體在人類(lèi)IL-13誘導(dǎo)的哮喘模型中將TARC抑制約50%。全文摘要本發(fā)明包括IL-13結(jié)合蛋白。具體而言,本發(fā)明涉及嵌合抗體、CDR移植抗體和人源化抗體。優(yōu)選的抗體對(duì)hIL-13具有高親和力并且在體外和體內(nèi)中和hIL-13活性。本發(fā)明的抗體可為全長(zhǎng)抗體或其抗原結(jié)合部分。還提供了本發(fā)明抗體的制備方法和使用方法。本發(fā)明的抗體或抗體部分適用于例如在患有其中hIL-13活性起有害作用的病癥的人類(lèi)個(gè)體中檢測(cè)hIL-13和抑制hIL-13活性。文檔編號(hào)C12P21/08GK101512008SQ200780033285公開(kāi)日2009年8月19日申請(qǐng)日期2007年9月7日優(yōu)先權(quán)日2006年9月8日發(fā)明者C·A·卡夫,J·P·貝爾克,M·A·阿吉里亞迪,P·R·欣頓,R·W·迪克松,S·庫(kù)馬,T·L·梅林,吳辰斌,華銀,炎陳申請(qǐng)人:艾博特公司
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