含烏司他丁的藥物組合物在制備治療食管癌藥物中的用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了含烏司他丁的藥物組合物在制備治療食管癌藥物中的用途。本發(fā)明證明，使用烏司他丁和丹參素鈉組合給藥可顯著抑制人食管癌細(xì)胞Eca?109細(xì)胞的增殖。同時(shí)，經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)證明，使用烏司他丁和丹參素鈉聯(lián)合治療食管癌裸鼠，能顯著緩解裸鼠的體重減輕并抑制腫瘤增長(zhǎng)，具有較高的抑瘤率。烏司他丁和丹參素鈉組合給藥通過增加裸鼠腫瘤組織中促凋亡蛋白Bax和細(xì)胞凋亡終末剪切酶caspase?3的表達(dá)，降低抑凋亡蛋白Bcl?2的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，最終達(dá)到抗食管癌的目的。本發(fā)明所述的烏司他丁和丹參素鈉聯(lián)合給藥不良反應(yīng)少，毒副作用低，安全性高，且成本低廉。
【專利說明】
含烏司他丁的藥物組合物在制備治療食管癌藥物中的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了含烏司他丁的藥物組合物在制備治療食管 癌藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 烏司他丁是一種廣譜的蛋白酶抑制劑，屬于人類內(nèi)源性抑制炎癥物質(zhì)。其主要在 肝臟中合成，由腎臟代謝隨尿液排出，且其分解形成的低分子量成分也具有很強(qiáng)的抑制水 解酶的作用。具有較強(qiáng)的抗炎、免疫調(diào)節(jié)、改善微循環(huán)、抗休克、抗組織缺血和神經(jīng)保護(hù)作 用。也有研究表明烏司他丁對(duì)肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、宮頸癌等癌癥細(xì)胞有較好的抑制作 用。
[0003] 丹參素是丹參中的主要水溶性有效成分，具有明顯的藥理活性，包括心肌保護(hù)、抑 制血栓形成、神經(jīng)保護(hù)、防治肝纖維化及抗腫瘤、抗炎和增強(qiáng)免疫等作用，由于它是一種游 離酸，不穩(wěn)定，故將其制成鈉鹽，稱為丹參素鈉。
[0004] 食管癌是人類常見的消化道惡性腫瘤之一，近年來全球食管癌的發(fā)病率和死亡率 呈上升趨勢(shì)。我國(guó)是食管癌的高發(fā)地區(qū)，其發(fā)病率居全國(guó)各類惡性腫瘤第5位，死亡率居第4 位。食管癌已成為嚴(yán)重威脅我國(guó)人們生命的危險(xiǎn)因素。
[0005] 近年來對(duì)食管癌的治療多采用綜合治療，即以手術(shù)為主，聯(lián)合化療、放療以及生物 治療的綜合治療。其中，化療無論是術(shù)前化療、術(shù)后輔助化療還是姑息性化療，在綜合治療 中占據(jù)舉足輕重的地位。目前常用的化療藥物多以長(zhǎng)春瑞濱、紫杉醇、氟尿嘧啶、順鉑、5-氟 尿嘧啶為主，其產(chǎn)生的化療反應(yīng)，如惡心嘔吐較強(qiáng)烈以及對(duì)肝腎功能和骨髓損害等，一定程 度上限制了其應(yīng)用。且因?yàn)槭彻馨┒鄶?shù)為分化程度差異較大的鱗狀細(xì)胞癌，以及腫瘤細(xì)胞 抗藥性存在等因素，使較多患者對(duì)多種化療方案不敏感，從而導(dǎo)致預(yù)后療效較低，但仍較單 純手術(shù)切除治療取得較好的預(yù)后治療效果。郭國(guó)強(qiáng)等發(fā)表的題為"烏司他丁對(duì)食管癌患者 術(shù)后并發(fā)癥的預(yù)防作用"的論文中研究了烏司他丁對(duì)食管癌患者術(shù)后并發(fā)癥的預(yù)防作用， 結(jié)果顯示，烏司他丁的應(yīng)用可以降低術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生率，尤其是肺部術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生 率，可能是通過改善肺臟的通氣及氧合功能降低了手術(shù)、麻醉等對(duì)肺部生理功能的損害。史 敏科等發(fā)表的題為"烏司他丁對(duì)食管癌患者術(shù)后應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的影響"的論文中證明烏 司他丁能夠減輕食管癌患者術(shù)后的創(chuàng)傷應(yīng)激、抑制術(shù)后炎癥因子的過度釋放，從而減少術(shù) 后并發(fā)癥的發(fā)生，有利于機(jī)體的康復(fù)。以上公開的資料表明烏司他丁對(duì)食管癌患者術(shù)后機(jī) 體的恢復(fù)以及減少術(shù)后并發(fā)癥，降低手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)具有良好的效果，但未有相關(guān)報(bào)道表明烏司 他丁對(duì)食管癌具有治療效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供含烏司他丁的藥物組合物在制備治療食管癌藥物中的用 途，為食管癌患者提供一種新的治療方案。
[0007] 本發(fā)明提供了含烏司他丁的藥物組合物在制備治療食管癌藥物中的用途，所述藥 物組合物包括烏司他丁和丹參素鈉。
[0008] 進(jìn)一步地，所述藥物組合物中烏司他丁與丹參素鈉的質(zhì)量比為1:0.2~0.5。
[0009] 進(jìn)一步地，所述藥物組合物中烏司他丁與丹參素鈉的質(zhì)量比為1:0.4。
[0010] 進(jìn)一步地，所述藥物組合物為注射液或凍干粉針劑。
[0011] 進(jìn)一步地，所述注射液或凍干粉針劑以烏司他丁和丹參素鈉為有效成分，配以藥 學(xué)可接受的添加劑制備而成。
[0012] 更進(jìn)一步地，所述注射液可接受的添加劑選自注射用水、甘露醇、氯化鈉和葡萄糖 中的至少一種;所述凍干粉針劑可接受的添加劑選自甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉和葡 萄糖中的至少一種。
[0013]本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)體外人食管癌細(xì)胞Eca-109細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中，烏司他丁可顯著抑制 食管癌細(xì)胞的增殖，效果與氟尿嘧啶相當(dāng)，而丹參素鈉抑制食管癌細(xì)胞增殖的效果不明顯， 當(dāng)烏司他丁和丹參素鈉組合給藥，對(duì)食管癌細(xì)胞增殖的抑制效果顯著增加，優(yōu)于兩者單獨(dú) 給藥的抑癌效果。
[0014] 另外，本發(fā)明通過裸鼠移植人食管癌細(xì)胞系Eca-109細(xì)胞制備食管癌裸鼠模型，研 究烏司他丁和丹參素鈉組合給藥對(duì)食管癌的治療效果。結(jié)果表明，使用烏司他丁和丹參素 鈉聯(lián)合治療食管癌裸鼠，能顯著緩解裸鼠的體重減輕并抑制腫瘤增長(zhǎng)，具有較高的抑瘤率。 烏司他丁和丹參素鈉組合給藥通過增加裸鼠腫瘤組織中促凋亡蛋白Bax和細(xì)胞凋亡終末剪 切酶caspase-3的表達(dá)，降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，最終達(dá)到抗食管 癌的目的。以上結(jié)果表明，本發(fā)明烏司他丁對(duì)治療食管癌具有顯著的治療效果。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于:本發(fā)明提供了含烏司他丁的藥物組合物在 制備治療食管癌藥物中的用途，具體為以烏司他丁和丹參素鈉組合給藥進(jìn)行食管癌治療， 為食管癌患者提供一種新的治療方案，所述的烏司他丁和丹參素鈉聯(lián)合給藥不良反應(yīng)少， 毒副作用低，安全性高，對(duì)人食管癌細(xì)胞Eca-109細(xì)胞增殖具有顯著的抑制作用，對(duì)食管癌 裸鼠同樣具有較佳的治療效果。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 以下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0017] 實(shí)施例1、含烏司他丁的藥物組合物的凍干粉針劑制備 處方：烏司他T 5% 丹參素鈉20 g
[0018] 甘露醇 20 g 注射用水_2000ml.
[0019] 制備方法:取處方量的烏司他丁、丹參素鈉和甘露醇，加入適量注射用水溶解，使 用枸櫞酸緩沖液調(diào)節(jié)pH到中性，加注射用水至2000ml，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無菌過濾，分裝 于1000個(gè)西林瓶中，無菌條件下冷凍干燥，即得。
[0020] 實(shí)施例2、含烏司他丁的藥物組合物的凍干粉針劑制備
[0021] 處方i鳥司他丁 ：50g 丹參素鈉25g 甘露醇 20 g 注射用水2000π?:1
[0022] 制備方法同實(shí)施例1。
[0023] 實(shí)施例3、含烏司他丁的藥物組合物的凍干粉針劑制備 處方：烏司他丁 50g 丹參素鈉 1%
[0024] 甘露醇 20 g 注射用水2000ml
[0025] 制備方法同實(shí)施例1。
[0026] 實(shí)施例4、含烏司他丁的藥物組合物的注射液制備 處方：烏司他丁 50g 丹參素鈉20 g
[0027] 甘露醇 20 g 注射用水2000ml
[0028] 制備方法:取處方量的烏司他丁、丹參素鈉和甘露醇，加入適量注射用水溶解，使 用枸櫞酸緩沖液調(diào)節(jié)pH到中性，加注射用水至2000ml，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無菌過濾，分裝 于1000個(gè)西林瓶中，即得。
[0029] 對(duì)比例1、含烏司他丁的藥物組合物的凍干粉針劑制備 處方：烏司他丁 50g 丹參素鈉5_Og_
[0030] 甘露醇 20 g 注射用水2000ml
[0031] 制備方法同實(shí)施例1，本對(duì)比例與實(shí)施例1的區(qū)別在于，烏司他丁和丹參素鈉以等 質(zhì)量比組成。
[0032] 試驗(yàn)例一、含烏司他丁的藥物組合物對(duì)人食管癌細(xì)胞Eca-109細(xì)胞的增殖抑制作 用研究
[0033] 1.試驗(yàn)材料
[0034]人食管癌細(xì)胞Eca-109細(xì)胞購(gòu)自購(gòu)自上海中科院細(xì)胞庫(kù);丹參素鈉購(gòu)自深圳瑞吉 特生物科技有效公司;氟尿嘧啶購(gòu)自費(fèi)森尤斯卡比(武漢)醫(yī)藥有限公司。
[0035] 2.試驗(yàn)方法
[0036] Eca-109細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基（含100U · ml-1青霉素和 0.111^*1111_1鏈霉素），于37°(：，5%0)2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞呈單層生長(zhǎng)，達(dá)80%左右融合 時(shí)傳代。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的食管癌細(xì)胞Eca-109，用0.25%的胰酶和0.02 %EDTA混合消化液消 化收集后，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，用新鮮的RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋Eca-109至2Xl〇MVml，100yl/ 孔接種于96孔板，置于37 °C，5 % C02的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)24h后，更換培養(yǎng)液，進(jìn) 行給藥，給藥組分為氟尿嘧啶組、烏司他丁組、丹參素鈉組、試驗(yàn)A組、試驗(yàn)B組、試驗(yàn)C組和對(duì) 比例組，各給藥組中藥物在培養(yǎng)液的終濃度分別為：
[0037] 氟尿嘧啶組：2.5μg/ml;
[0038] 烏司他丁組:0.4mg/ml;
[0039] 丹參素鈉組:0· 16mg/ml;
[0040] 試驗(yàn)A組:0.4mg/ml的烏司他丁+0.08mg/ml的丹參素鈉組；
[0041 ] 試驗(yàn)B組:0.4mg/ml的烏司他丁+0.16mg/ml的丹參素鈉組；
[0042] 試驗(yàn)C組:0.4mg/ml的烏司他丁+0.20mg/ml的丹參素鈉組；
[0043] 對(duì)比例組:0.4mg/ml的烏司他丁+0.4mg/ml的丹參素鈉組；
[0044]陰性對(duì)照組加入等體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，空白對(duì)照組(無細(xì)胞)加入等體積PBS，用于 調(diào)零，培養(yǎng)24h后，棄去各孔培養(yǎng)液，每孔加入20μ1 5mg/ml的MTT溶液和80μ1培養(yǎng)基，繼續(xù)培 養(yǎng)4h。棄去各孔殘液，每孔加入二甲基亞砜100μΙ，置搖床上低速振蕩30min，使結(jié)晶物充分 溶解。用酶標(biāo)儀檢測(cè)490nm波長(zhǎng)處測(cè)量各孔的吸光值(A 490)。
[0045] 細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（％) = [(陰性對(duì)照組A49q-空白組A49q)-(給藥組A49q-空白組 A490 ) ] / (陰性對(duì)照組A490-空白組A490 ) X 100 %。
[0046] 3.試驗(yàn)結(jié)果
[0047]表1各給藥組對(duì)人食管癌細(xì)胞Eca-109細(xì)胞增長(zhǎng)抑制率 [0048]
[0049] 注:與氟尿嘧啶組比較，*P<0.05廣P<0.01;與烏司他丁組比較，^?<0.01;與丹 參素鈉組比較，_P < 0.001。
[0050]由上表可知，烏司他丁單獨(dú)給藥對(duì)人食管癌細(xì)胞Eca-109細(xì)胞增長(zhǎng)具有一定的抑 制效果，而丹參素鈉單獨(dú)給藥的抑癌效果較差，但是兩者結(jié)合給藥的抑癌效果顯著增加，明 顯優(yōu)于單獨(dú)給予烏司他丁和丹參素鈉的抑癌效果，且與氟尿嘧啶組比較，具有極顯著性差 異，表明烏司他丁和丹參素鈉組合用藥產(chǎn)生協(xié)同的抑癌效果，丹參素鈉可顯著增強(qiáng)烏司他 丁對(duì)食管癌細(xì)胞增長(zhǎng)的抑制作用。烏司他丁和丹參素鈉以1:0.2~0.5的質(zhì)量比組合給藥， 對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)65%以上，當(dāng)兩者以1:1質(zhì)量比組合給藥，抑癌效果降低。表明烏司 他丁和丹參素鈉以適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量比組合給藥，可產(chǎn)生較好的抑癌效果，且當(dāng)烏司他丁與丹參 素鈉以1:0.4的質(zhì)量比組合給藥時(shí)對(duì)食管癌細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)。
[0051 ]試驗(yàn)例二、含烏司他丁的藥物組合物對(duì)裸鼠移植食管癌治療作用的研究
[0052] 1.試驗(yàn)動(dòng)物
[0053] SPF級(jí)BALB/c裸鼠90只，6~8周齡，體重20~24g，雌雄各半，由廣東醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí) 驗(yàn)中心提供;裸鼠自由攝取常規(guī)飼料和自來水，飼養(yǎng)室溫為22°C_25°C。
[0054] 2.試驗(yàn)方法
[0055]取80只裸鼠麻醉后，于裸鼠左前肢腋窩皮下注射200μ1人食管癌細(xì)胞系Eca-109細(xì) 胞，細(xì)胞數(shù)濃度為IX l〇Vml，接種后每?jī)商煊^察裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況及其全身狀況，掌握腫 瘤的形成時(shí)間及生長(zhǎng)情況，觀察小鼠一般活動(dòng)及營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等。每?jī)商煊糜螛?biāo)卡尺測(cè)量腫瘤 長(zhǎng)徑，待腫瘤的直徑長(zhǎng)至5-7mm，即表明造模成功。篩選造模成功的裸鼠72只，隨機(jī)分為6組， 每組12只，分別為模型組、氟尿嘧啶治療組、烏司他丁組、丹參素鈉組、烏司他丁+丹參素鈉 組和對(duì)比例組。另取剩余12只正常裸鼠作為空白對(duì)照組，測(cè)定給藥前各組裸鼠的體重。 [0056] 各組給藥劑量如下：
[0057]空白對(duì)照組:腹腔注射等體積的生理鹽水；
[0058]模型組:腹腔注射等體積的生理鹽水；
[0059]氟尿嘧啶治療組:腹腔注射25mg/kg氟尿嘧啶；
[0060]烏司他丁組:腹腔注射25mg/kg的烏司他丁；
[0061 ]丹參素鈉組:腹腔注射10mg/kg的丹參素鈉；
[0062]烏司他丁+丹參素鈉組:腹腔注射25mg/kg的烏司他丁+1 Omg/kg的丹參素鈉；
[0063] 對(duì)比例組:腹腔注射25mg/kg的烏司他丁+25mg/kg的丹參素鈉；
[0064]各組每周給藥3次，連續(xù)給藥4周。每天觀察裸鼠的狀態(tài)、如體重、食欲和精神等，4 周后稱重，處死裸鼠，取出腫瘤并稱重，計(jì)算抑瘤率=(對(duì)照組瘤重-用藥組瘤重)/對(duì)照組瘤 重X100%，采用免疫組化方法檢測(cè)腫瘤組織中Bax、Bcl_2和caspase-3的表達(dá)，并對(duì)裸鼠尸 體進(jìn)行全面尸檢，肉眼觀察裸鼠心、肝、腎、肺、脾、胸腺、腸道等主要器官的變化。
[0065] 3.試驗(yàn)結(jié)果
[0066] 表2各組裸鼠治療前后的體重變化
[0067]
[0068] 注：與治療前體重比較，乍<0.05 ;與空白對(duì)照組比較，ΛΛΡ<0.01，與模型組比 較，##Ρ<0·01。
[0069]裸鼠造模后，食欲降低，體重下降，單獨(dú)給予烏司他丁和丹參素鈉治療均可緩解裸 鼠體重降低，并以烏司他丁的效果較為顯著，與氟尿嘧啶相當(dāng)；當(dāng)烏司他丁和丹參素鈉以1: 0.4質(zhì)量比組合給藥時(shí)緩解裸鼠體重減輕的效果最佳，優(yōu)于兩者以1:1質(zhì)量比組合給藥時(shí)的 效果。
[0070] 表3各組裸鼠的瘤重(g)和抑瘤率（％ )
[0071]
[0072] 注：與模型組比較，#P<0 · 05，##P<0 · 01。
[0073] 由表3可知，烏司他丁和丹參素鈉以1:0.4質(zhì)量比組合給藥可顯著減輕腫瘤的重 量，優(yōu)于兩者以1:1質(zhì)量比組合給藥時(shí)的效果，其抑瘤率達(dá)49.77%，與模型組比較具有極顯 著性差異，其效果優(yōu)于單獨(dú)給予烏司他丁和丹參素鈉的治療效果，并較氟尿嘧啶的治療效 果更佳。
[0074] 表4各組裸鼠腫瘤組織中的Bax、Bcl_2和caspase-3的表達(dá)比較(0D值）
[0075]
[0076] 注:與空白對(duì)照組比較，ΔΡ<0.05;與模型組比較，#P<0.05， ##P<0.01。
[0077] 由表4可知，食管癌裸鼠腫瘤組織中的抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)增加，促凋亡蛋白Bax 表達(dá)減少，給予氟尿嘧啶和烏司他丁治療均可顯著增加促凋亡蛋白Bax和細(xì)胞凋亡終末剪 切酶caspase-3表達(dá)，減少抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)，促進(jìn)食管癌腫瘤組織凋亡，發(fā)揮抗腫瘤的 作用。此外，當(dāng)烏司他丁和丹參素鈉以1:0.4質(zhì)量比組合給藥時(shí)的效果最佳，優(yōu)于單獨(dú)給予 烏司他丁和丹參素鈉的效果，且優(yōu)于氟尿嘧啶的效果。
[0078] 此外，對(duì)各試驗(yàn)組裸鼠進(jìn)行全面尸檢，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，烏司他丁和丹參素鈉組合治療組 與氟尿嘧啶治療組的裸鼠的心、肝、腎、肺、脾、胸腺、腸道、胃部均沒有出現(xiàn)異常，表明烏司 他丁和丹參素鈉組合給藥的安全性較高，與臨床應(yīng)用的抗癌藥物氟尿嘧啶的安全性相當(dāng)。
[0079] 雖然本發(fā)明己以較佳實(shí)施例公開如上，但它們并不是用來限定本發(fā)明，本發(fā)明的 保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以本申請(qǐng)的權(quán)利要求保護(hù)范圍所界定的內(nèi)容為準(zhǔn)。任何熟習(xí)本技術(shù)領(lǐng)域者， 在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，所作的各種變化或等同替換，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 含烏司他丁的藥物組合物在制備治療食管癌藥物中的用途，其特征在于，所述藥物 組合物包括烏司他丁和丹參素鈉。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述烏司他丁和丹參素鈉的質(zhì)量比為1: 0 · 2~0 · 5〇3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述烏司他丁和丹參素鈉的質(zhì)量比為1: 0.4。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述藥物組合物為注射液或凍干粉針劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述注射液或凍干粉針劑以烏司他丁和丹 參素鈉為有效成分，配以藥學(xué)可接受的添加劑制備而成。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述注射液可接受的添加劑選自注射用 水、甘露醇、氯化鈉和葡萄糖中的至少一種;所述凍干粉針劑可接受的添加劑選自甘露醇、 乳糖、水解明膠、氯化鈉和葡萄糖中的至少一種。
【文檔編號(hào)】A61K38/57GK106039297SQ201610562132
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年7月14日
【發(fā)明人】趙菁, 何少靈, 侯維靜, 宋建東
【申請(qǐng)人】廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司