小關(guān)節(jié)治療用納米注射液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物材料領(lǐng)域，具體涉及一種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液及其制備方法，其包括以下重量份組分：1?4wt％的透明質(zhì)酸鈉、0.5?1.5wt％的膠原蛋白、2?5wt％的幾丁糖、0.5?1wt％的羥基磷灰石、0.1?0.5wt％的非甾體抗炎藥、0.05?0.1wt％的交聯(lián)劑和0.05?0.08wt％的脫水劑，余量為去離子水。本發(fā)明制備的注射液，可以有效的保護(hù)小關(guān)節(jié)，并具有緩釋抗炎作用。
【專利說明】
小關(guān)節(jié)治療用納米注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物材料領(lǐng)域，具體涉及一種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨關(guān)節(jié)炎又稱退行性骨關(guān)節(jié)炎，是中老年人常見多發(fā)病。目前，國(guó)內(nèi)外針對(duì)骨關(guān)節(jié) 炎的治療方法分為非藥物治療、藥物治療、手術(shù)治療3種。骨關(guān)節(jié)炎為一種退行性病變，系由 于增齡、肥胖、勞損、創(chuàng)傷、關(guān)節(jié)先天性異常、關(guān)節(jié)畸形等諸多因素引起的關(guān)節(jié)軟骨退化損 傷、關(guān)節(jié)邊緣和軟骨下骨反應(yīng)性增生，又稱骨關(guān)節(jié)病、退行性關(guān)節(jié)炎、老年性關(guān)節(jié)炎、肥大性 關(guān)節(jié)炎等。臨床表現(xiàn)為緩慢發(fā)展的關(guān)節(jié)疼痛、壓痛、僵硬、關(guān)節(jié)腫脹、活動(dòng)受限和關(guān)節(jié)畸形 等。根據(jù)有無局部和全身致病因素，將骨關(guān)節(jié)炎分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類。
[0003] 骨關(guān)節(jié)炎依據(jù)發(fā)病部位又細(xì)分為膝關(guān)節(jié)炎、髖關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)炎、腕掌關(guān)節(jié)炎、踝 關(guān)節(jié)炎、妬趾關(guān)節(jié)炎、下頌骨關(guān)節(jié)炎等多關(guān)節(jié)炎。
[0004] 髖關(guān)節(jié)炎是指由于髖關(guān)節(jié)面長(zhǎng)期負(fù)重不均衡所致的關(guān)節(jié)軟骨變性或骨質(zhì)結(jié)構(gòu)改 變的一類骨關(guān)節(jié)炎性疾病。其主要表現(xiàn)為臀外側(cè)、腹股溝等部位的疼痛(可放射至膝）、腫 脹、關(guān)節(jié)積液、軟骨磨損、骨刺增生、關(guān)節(jié)變形、髖的內(nèi)旋和伸直活動(dòng)受限、不能行走甚至臥 床不起等。一般治療包括患者的健康教育、自我訓(xùn)練、減肥、有氧操、關(guān)節(jié)活動(dòng)度訓(xùn)練、肌力 訓(xùn)練、助行工具的使用、膝內(nèi)翻的楔形鞋墊、職業(yè)治療及關(guān)節(jié)保護(hù)、日常生活的輔助設(shè)施等 等。藥物治療包括關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉等多糖類關(guān)節(jié)腔潤(rùn)滑保護(hù)劑、氨基葡萄糖、非甾 體鎮(zhèn)痛抗炎藥。其中透明質(zhì)酸鈉為關(guān)節(jié)腔滑液的主要成分，為軟骨基質(zhì)的成分之一，在關(guān)節(jié) 起到潤(rùn)滑作用，減少組織間的摩擦，關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入后可明顯改善滑液組織的炎癥反應(yīng)，增強(qiáng) 關(guān)節(jié)液的黏稠性和潤(rùn)滑功能，保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨，緩解疼痛，增加關(guān)節(jié)的活動(dòng)度。常于關(guān)節(jié)內(nèi)注 射，1次25mg，l周1次，連續(xù)5周，須嚴(yán)格無菌操作。髖關(guān)節(jié)炎癥狀十分嚴(yán)重、藥物治療無效的， 且影響患者的日常生活，就應(yīng)該考慮手術(shù)干預(yù)。但由于關(guān)節(jié)置換手術(shù)存在一定的近期和遠(yuǎn) 期并發(fā)癥，如部件的松動(dòng)和磨損、骨溶解，這些并發(fā)癥目前還不能完全解決。由于人工關(guān)節(jié) 置換的效果與手術(shù)時(shí)間的長(zhǎng)短、醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)、患者術(shù)前的身體條件、圍手術(shù)期處理和康復(fù)訓(xùn) 練等因素密切相關(guān)。因此實(shí)施人工關(guān)節(jié)置換手術(shù)需要謹(jǐn)慎。
[0005] 肩關(guān)節(jié)常見類型的診療方法
[0006] (1)關(guān)節(jié)囊型活動(dòng)受限:首先應(yīng)確定是主動(dòng)活動(dòng)還是被動(dòng)活動(dòng)受限，前者多為神經(jīng) 病變，若同時(shí)具備則應(yīng)考慮是否是非關(guān)節(jié)囊型活動(dòng)受限。關(guān)節(jié)囊型多為滑囊炎和關(guān)節(jié)病變 兩大類:滑囊炎分為創(chuàng)傷性和非創(chuàng)傷性，前者包括偶發(fā)的大創(chuàng)傷和反復(fù)的小創(chuàng)傷，后者包括 風(fēng)濕性疾病、膿毒性關(guān)節(jié)炎、Reiter's綜合癥;而關(guān)節(jié)病變則分為原發(fā)性和繼發(fā)性，前者主 要是退行性變，后者主要是創(chuàng)傷引起的退行性變。IAC也是GHJ關(guān)節(jié)囊型活動(dòng)受限的一種常 見病因，糖尿病是危險(xiǎn)因素之一。關(guān)節(jié)囊型活動(dòng)受限病人發(fā)病后2-9個(gè)月，進(jìn)入"凍結(jié)肩" 期，再過4一 12個(gè)月進(jìn)入"解凍期"。臨床上常用治療方法有：囊內(nèi)注射藥物，麻醉下操作 (MUA)和非手術(shù)性修復(fù)。囊內(nèi)注射皮質(zhì)激素的量影響預(yù)后，Dejong等報(bào)道關(guān)節(jié)囊內(nèi)注射糖皮 質(zhì)激素可以大大減輕"凍結(jié)肩"的癥狀，并且改善疼痛和睡眠障礙的程度比改善運(yùn)動(dòng)障礙程 度更明顯。病人處于不同的時(shí)期，治療的方法不同。GHJ創(chuàng)傷性滑囊炎和原發(fā)性關(guān)節(jié)炎臨床 上分為三級(jí):一級(jí)活動(dòng)輕度受限，外展小于5度，不影響睡眠體位，治療主要是制動(dòng)和家庭鍛 煉;二級(jí)活動(dòng)中度受限，中等疼痛可放射至肘部，睡眠時(shí)患側(cè)向上，治療需囊內(nèi)注射皮質(zhì)激 素，其余同一級(jí);三級(jí)重度疼痛放射至肘部，GHJ不能內(nèi)旋，治療應(yīng)絕對(duì)制動(dòng)，囊內(nèi)注射皮質(zhì) 激素，緩解后才能進(jìn)行功能鍛煉。對(duì)IAC的治療還可以聯(lián)合MUA，Ader S〇n對(duì)24例處于"凍結(jié) 肩"期的病人進(jìn)行持續(xù)被動(dòng)移動(dòng)(CPM)后發(fā)現(xiàn)79%的病人癥狀減輕或無疼痛。還有人報(bào)道對(duì) IAC病人進(jìn)行CPM后再使用液壓膨脹法效果更明顯。目前用關(guān)節(jié)鏡松解IAC也被證明是有效 的。
[0007] (2)非關(guān)節(jié)囊型活動(dòng)受限：除關(guān)節(jié)囊病變以外所有可以引起活動(dòng)受限的肩關(guān)節(jié)部 位病變均屬于此類型。盡管所有肩部病變都可能引起活動(dòng)受限，但臨床上這類病人還是有 一定的特異性。肩峰下滑囊炎即屬于此類型，表現(xiàn)為主動(dòng)和被動(dòng)直臂抬高受限，治療以休息 和肩峰下滑囊內(nèi)注射類固醇藥物為主。投擲或網(wǎng)球運(yùn)動(dòng)員常常在肩關(guān)節(jié)功能性外旋的基礎(chǔ) 上出現(xiàn)內(nèi)旋受限，最好的治療辦法是在特定的體位下進(jìn)行GHJ松解術(shù)。
[0008] (3)疼痛無活動(dòng)受限:ACJ和SCJ急性病變多為此類型。
[0009] (4)肩部損傷:肩部許多軟組織傷可以表現(xiàn)為肩部疼痛而不伴有活動(dòng)受限。
[0010]腰椎小關(guān)節(jié)是典型的滑膜軟骨關(guān)節(jié)，組織學(xué)研究證實(shí)滑膜、關(guān)節(jié)囊會(huì)傳導(dǎo)疼痛。隨 著年齡的增加，小關(guān)節(jié)發(fā)生骨性關(guān)節(jié)炎，文獻(xiàn)報(bào)道小關(guān)節(jié)源性的腰痛占到全部腰痛的15-44%。小關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn)不典型，診斷金標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)小關(guān)節(jié)腔注入局麻藥進(jìn)行診斷性 封閉。治療小關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎注射皮質(zhì)激素是無效的，而射頻燒灼腰神經(jīng)內(nèi)側(cè)支是有效的，但 這是一種毀損性手術(shù)。膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射HA證明可以改善關(guān)節(jié)軟骨的炎癥，HA注射已有35年 歷史，并逐漸用于髖、踝、骶髂關(guān)節(jié)、髕股關(guān)節(jié)等，甚至如顳下頌關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)也開始應(yīng)用，證 明是安全有效；當(dāng)然，除膝關(guān)節(jié)外，其余關(guān)節(jié)的使用都是標(biāo)識(shí)用途之外的。腰椎小關(guān)節(jié)注射 HA的可行性及療效尚未得到廣泛的認(rèn)證，文獻(xiàn)里有少量的報(bào)道，結(jié)果偏差較大。據(jù)統(tǒng)計(jì)， 70 %的人一生中要發(fā)生腰痛，如能證實(shí)該方法有效，對(duì)于減輕腰椎小關(guān)節(jié)源性腰痛，降低手 術(shù)率，減少副作用，具有重大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
[0011]骨關(guān)節(jié)炎是軟骨基質(zhì)降解超過合成的一種病變。HA是滑膜液粘彈性的反映，可以 潤(rùn)滑關(guān)節(jié)和吸收震蕩。骨關(guān)節(jié)炎時(shí)HA的凝集度和分子量下降，所以粘彈性下降，潤(rùn)滑性下 降，所以導(dǎo)致軟骨和骨進(jìn)一步破壞。HA的粘彈性對(duì)軟骨和骨的過載是一種保護(hù)。
[0012] 粘彈性補(bǔ)充治療(Viscosupplementation)，即補(bǔ)充外源性的HA，能夠有效緩解膝 骨關(guān)節(jié)炎疼痛的機(jī)制為:HA可以增加基質(zhì)蛋白、粘多糖、硫酸軟骨素、硫酸角質(zhì)素、蛋白聚 糖；改變炎癥調(diào)節(jié)因子、細(xì)胞因子、前列腺素、蛋白酶，調(diào)低軟骨細(xì)胞凋亡;HA還在壞死骨周 圍形成保護(hù)，疼痛誘因減少;HA可以降低神經(jīng)的閾值電位，減少去極化和傷害感受器活性， 疼痛傳導(dǎo)減少;減少前列腺素 E2(PGE2)、血管舒緩激肽、P物質(zhì)合成。總之，多糖類及其衍生 物產(chǎn)品能夠保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨。
[0013]踝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎有其獨(dú)特性，其最常見原因是創(chuàng)傷，創(chuàng)傷導(dǎo)致關(guān)節(jié)的炎性病變，繼 而發(fā)生骨性結(jié)構(gòu)的改變。踝關(guān)節(jié)的原發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎很少見。年齡似乎對(duì)踝關(guān)節(jié)的作用不大。 踝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的終末期，關(guān)節(jié)功能將嚴(yán)重受限，跖屈、背伸活動(dòng)范圍明顯減小，甚至完全 僵硬?？梢酝瑫r(shí)伴有明顯的內(nèi)、外翻畸形和步態(tài)的改變。疼痛導(dǎo)致患者的生活質(zhì)量明顯下 降。最近一項(xiàng)多中心、前瞻性的研究，比較終末期踝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎和終末期髖關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎 患者，采用SF-36評(píng)分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與終末期髖關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎一樣，踝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎對(duì)與健康 相關(guān)的生活質(zhì)量指數(shù)(health-related quality of life，HRQOL)有著同樣嚴(yán)重的負(fù)面影 響。
[0014] 踝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎治療主要包括非手術(shù)治療和手術(shù)治療兩項(xiàng)，非手術(shù)治療:保守治 療如穿矯形鞋，戴矯形支具，理療，藥物治療，包扎固定等方法，但很少有證據(jù)能證明這些方 法能緩解疼痛、改善功能。手術(shù)治療：目前，終末期踝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的手術(shù)治療方法爭(zhēng)議很 大。焦點(diǎn)集中于踝關(guān)節(jié)融合和踝關(guān)節(jié)置換。踝關(guān)節(jié)融合術(shù)(Ankle arthr〇desis，AA)是治療 踝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的傳統(tǒng)首選方法，尤其在上世紀(jì)七八十年代，第一代全踝關(guān)節(jié)置換(total ankle replacements(TAA))治療效果不佳后，它的首選地位得到更大認(rèn)可。然而，最近關(guān)于 踝關(guān)節(jié)融合術(shù)后長(zhǎng)期隨訪的研究發(fā)現(xiàn):AA以后，同側(cè)后足關(guān)節(jié)發(fā)生代償性的骨關(guān)節(jié)炎，患者 的最終結(jié)果較差。因而，AA的指證受到懷疑。有研究證實(shí)踝關(guān)節(jié)內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉等可有效 緩解關(guān)節(jié)炎患者的疼痛，效果持久，安全多高。且踝關(guān)節(jié)炎多數(shù)是由于創(chuàng)傷所引起的關(guān)節(jié)疼 痛，手術(shù)治療隱患較大，預(yù)后較差，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)更傾向于非手術(shù)治療法治療踝關(guān)節(jié)炎。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015] 本發(fā)明主要提供了一種小關(guān)節(jié)治療用注射液及其制備方法，可以有效的保護(hù)小關(guān) 節(jié)，并具有緩釋抗炎作用。其技術(shù)方案如下：
[0016] -種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其包括以下組分：l-4wt %的透明質(zhì)酸鈉、0.5-1 · 5wt %的膠原蛋白、2-5wt %的幾丁糖、0 · 5-lwt %的羥基磷灰石、0 · 1-0 · 5wt %的非甾體抗 炎藥、0.05-0. lwt%的交聯(lián)劑和0.05-0.08wt%的脫水劑，余量為去離子水。
[00?7] 優(yōu)選的，3wt %的透明質(zhì)酸鈉 、lwt %的膠原蛋白、3wt %的幾丁糖、0.7wt %的羥基 磷灰石、〇. 3wt %的非甾體抗炎藥、0.08wt %的交聯(lián)劑和0.06wt %的脫水劑，余量為去離子 水。
[0018] 優(yōu)選的，非留體抗炎藥選自阿司匹林、雙氯芬酸、布洛芬和美洛昔康中的一種或幾 種。
[0019] 優(yōu)選的，交聯(lián)劑為戊二醛、鄰苯二甲醛、雙酚淀粉和京尼平中的一種或幾種。
[0020] 優(yōu)選的，所述脫水劑為乙醇、甲醇和丙酮中的一種或幾種。
[0021 ] 優(yōu)選的，透明質(zhì)酸鈉的分子量為200-300萬道爾頓，幾丁糖的分子量為50-200萬道 爾頓。
[0022] -種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液的制備方法，包括以下步驟：
[0023] (1)取配方量的透明質(zhì)酸鈉溶于去離子水中制成透明質(zhì)酸鈉水溶液，將膠原蛋白 溶于去離子水中制成膠原蛋白水溶液，將幾丁糖溶于去離子水中制成幾丁糖水溶液；
[0024] (2)將透明質(zhì)酸鈉水溶液、膠原蛋白水溶液、幾丁糖水溶液混合，加入配方量的脫 水劑，并加入交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)，連續(xù)攪拌10-15h;
[0025] (3)向交聯(lián)后的試劑中加入羥基磷灰石復(fù)合；
[0026] (4)向復(fù)合后的試劑中加入非留體抗炎藥，進(jìn)行充分混合，得混合液；
[0027] (5)將得到的混合液進(jìn)行冷凍干燥，干燥完成后進(jìn)行納米制粒；
[0028] (6)將制得的納米微球與配方量的去離子水充分混合，混合后的懸濁液即為用于 小關(guān)節(jié)治療用的納米注射液。
[0029] 優(yōu)選的，步驟(6)中納米微球的粒徑為10-1000nm。
[0030] 采用上述小關(guān)節(jié)治療用注射液及其制備方法，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0031] 本案中幾丁糖的粘性比較大，制備的納米注射液可以在關(guān)節(jié)損傷處富集，富集的 目的為一可以保護(hù)關(guān)節(jié)，二可以把有效的抗炎藥包裹在里面，具有緩釋作用，促進(jìn)軟骨愈合 和軟骨下骨作用。藥效相較于現(xiàn)有的關(guān)節(jié)治療用的注射液作用時(shí)間更長(zhǎng)，藥效持久。同時(shí)， 小關(guān)節(jié)損傷的根本原因在于軟骨缺損和軟骨磨損，導(dǎo)致關(guān)節(jié)腔潤(rùn)滑液減少，本發(fā)明的注射 液通過增加關(guān)節(jié)腔自潤(rùn)滑，從根本解決小關(guān)節(jié)炎問題。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 一、具體實(shí)施例
[0033] 實(shí)施例1
[0034] 1.注射液配方
[0035] 一種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其包括以下組分:3wt %的透明質(zhì)酸鈉 、lwt %的膠 原蛋白、3wt %的幾丁糖、0.7wt %的羥基磷灰石、0.3wt %的阿司匹林、0.08wt %的京尼平和 0.06wt%的乙醇，余量為去離子水。
[0036]其中，透明質(zhì)酸鈉的分子量為200萬道爾頓，幾丁糖的分子量為200萬道爾頓。
[0037] 注射液中納米微球的粒徑為1 OOOnm。
[0038] 2.注射液的制備方法
[0039] (1)取配方量的透明質(zhì)酸鈉溶于去離子水中制成透明質(zhì)酸鈉水溶液，將膠原蛋白 溶于去離子水中制成膠原蛋白水溶液，將幾丁糖溶于去離子水中制成幾丁糖水溶液；
[0040] (2)將透明質(zhì)酸鈉水溶液、膠原蛋白水溶液、幾丁糖水溶液混合，加入配方量的乙 醇，并加入京尼平進(jìn)行交聯(lián)，連續(xù)攪拌12h;
[0041] (3)向交聯(lián)后的試劑中加入羥基磷灰石復(fù)合；
[0042] (4)向復(fù)合后的試劑中加入阿司匹林，進(jìn)行充分混合，得混合液；
[0043] (5)將得到的混合液進(jìn)行冷凍干燥，干燥完成后進(jìn)行納米制粒；
[0044] (6)將制得的納米微球與配方量的去離子水充分混合，混合后的懸濁液即為用于 小關(guān)節(jié)治療用的納米注射液。
[0045] 實(shí)施例2
[0046] 1.注射液配方
[0047] 一種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其包括以下組分：lwt %的透明質(zhì)酸鈉、0.5wt %的 膠原蛋白、5wt %的幾丁糖、0 · 5wt %的羥基磷灰石、0 · 1 wt %的雙氯芬酸、0 · 05wt %的雙酸淀 粉和0.05wt%的丙酮，余量為去尚子水。
[0048]其中，透明質(zhì)酸鈉的分子量為300萬道爾頓，幾丁糖的分子量為100萬道爾頓。
[0049] 注射液中納米微球的粒徑為1 Onm。
[0050] 2.注射液的制備方法
[0051 ] (1)取配方量的透明質(zhì)酸鈉溶于去離子水中制成透明質(zhì)酸鈉水溶液，將膠原蛋白 溶于去離子水中制成膠原蛋白水溶液，將幾丁糖溶于去離子水中制成幾丁糖水溶液；
[0052] (2)將透明質(zhì)酸鈉水溶液、膠原蛋白水溶液、幾丁糖水溶液混合，加入配方量的丙 酮，并加入雙酚淀粉進(jìn)行交聯(lián)，連續(xù)攪拌lOh;
[0053] (3)向交聯(lián)后的試劑中加入羥基磷灰石復(fù)合；
[0054] (4)向復(fù)合后的試劑中加入雙氯芬酸，進(jìn)行充分混合，得混合液；
[0055] (5)將得到的混合液進(jìn)行冷凍干燥，干燥完成后進(jìn)行納米制粒；
[0056] (6)將制得的納米微球與配方量的去離子水充分混合，混合后的懸濁液即為用于 小關(guān)節(jié)治療用的納米注射液。
[0057] 實(shí)施例3 [0058] 1.注射液配方
[0059] 一種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其包括以下組分:4wt %的透明質(zhì)酸鈉、1.5wt %的 膠原蛋白、2wt%的幾丁糖、lwt%的羥基磷灰石、0.5wt%的布洛芬、0. lwt%的鄰苯二甲醛 和0.08wt%的甲醇，余量為去離子水。
[0000]其中，透明質(zhì)酸鈉的分子量為250萬道爾頓，幾丁糖的分子量為50萬道爾頓。
[0061 ] 注射液中納米微球的粒徑為500nm。
[0062] 2.注射液的制備方法
[0063] (1)取配方量的透明質(zhì)酸鈉溶于去離子水中制成透明質(zhì)酸鈉水溶液，將膠原蛋白 溶于去離子水中制成膠原蛋白水溶液，將幾丁糖溶于去離子水中制成幾丁糖水溶液；
[0064] (2)將透明質(zhì)酸鈉水溶液、膠原蛋白水溶液、幾丁糖水溶液混合，加入配方量的甲 醇，并加入鄰苯二甲醛進(jìn)行交聯(lián)，連續(xù)攪拌15h;
[0065] (3)向交聯(lián)后的試劑中加入羥基磷灰石復(fù)合；
[0066] (4)向復(fù)合后的試劑中加入布洛芬，進(jìn)行充分混合，得混合液；
[0067] (5)將得到的混合液進(jìn)行冷凍干燥，干燥完成后進(jìn)行納米制粒；
[0068] (6)將制得的納米微球與配方量的去離子水充分混合，混合后的懸濁液即為用于 小關(guān)節(jié)治療用的納米注射液。
[0069] 實(shí)施例4
[0070] 1.注射液配方
[0071] 一種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其包括以下組分:2wt %的透明質(zhì)酸鈉、0.8wt %的 膠原蛋白、4wt %的幾丁糖、0.6wt %的羥基磷灰石、0.2wt %的美洛昔康、0.05wt %的戊二醛 和0.06wt%的甲醇，余量為去離子水。
[0072]其中，透明質(zhì)酸鈉的分子量為200萬道爾頓，幾丁糖的分子量為50萬道爾頓。
[0073] 注射液中納米微球的粒徑為500nm。
[0074] 2.注射液的制備方法
[0075] (1)取配方量的透明質(zhì)酸鈉溶于去離子水中制成透明質(zhì)酸鈉水溶液，將膠原蛋白 溶于去離子水中制成膠原蛋白水溶液，將幾丁糖溶于去離子水中制成幾丁糖水溶液；
[0076] (2)將透明質(zhì)酸鈉水溶液、膠原蛋白水溶液、幾丁糖水溶液混合，加入配方量的甲 醇，并加入戊二醛進(jìn)行交聯(lián)，連續(xù)攪拌15h;
[0077] (3)向交聯(lián)后的試劑中加入羥基磷灰石復(fù)合；
[0078] (4)向復(fù)合后的試劑中加入美洛昔康，進(jìn)行充分混合，得混合液；
[0079] (5)將得到的混合液進(jìn)行冷凍干燥，干燥完成后進(jìn)行納米制粒；
[0080] (6)將制得的納米微球與配方量的去離子水充分混合，混合后的懸濁液即為用于 小關(guān)節(jié)治療用的納米注射液。
[0081 ] 對(duì)比例1
[0082] (1)將殼聚糖配制成質(zhì)量濃度0.4%的殼聚糖水溶液，膠原蛋白用40°C的溫水配成 質(zhì)量濃度2%的膠原蛋白水溶液。透明質(zhì)酸先分散于水中，待充分溶脹后緩慢攪拌，配制成 質(zhì)量濃度〇. 2 %的透明質(zhì)酸水溶液。
[0083] (2)先把2.5g膠原蛋白水溶液與50g透明質(zhì)酸水溶液混合，加入0.04gEDC，再加入 l〇〇g復(fù)合溶劑，復(fù)合溶劑由乙醇、丙二醇和二丙二醇組成，乙醇、丙二醇和二丙二醇的重量 比為4:0.5:0.5,攪拌均勻后再加入50g殼聚糖水溶液，攪拌均勻后靜置2小時(shí)形成水凝膠， 將水凝膠倒入300目網(wǎng)袋中，用雙蒸水洗滌除雜，最后冷凍干燥48h制成海綿。
[0084] 對(duì)比例2
[0085] 一種關(guān)節(jié)腔用地塞米松幾丁糖納米注射液，其包括以下組分:0.5wt%的地塞米 松、1 · 2wt%的幾丁糖、1 · Owt%的氯化鈉、1 · 5wt%的吐溫_80、0 · 15wt%的三磷酸鈉和磷酸 鹽緩沖液，余量為去離子水，磷酸鹽緩沖液的加入量為使組合物的pH為7.0。
[0086] 其中，地塞米松呈微粉狀，其D50為3 · 5μπι，最大粒徑<30μπι，且粒徑< ΙΟμπι的微粉 顆粒占總量的90%，其中粒徑在1_5μπι的微粉顆粒量占粒徑彡ΙΟμπι的微粉顆粒總量的65%， 粒徑在5-10μηι的微粉顆粒量占粒徑<10μηι的微粉顆粒總量的20%，粒徑<1μηι的微粉顆粒 量占粒徑< 1 〇μηι的微粉顆?？偭康?5 %。
[0087]制備方法包括以下步驟：
[0088] (1)稱取配方量的幾丁糖溶于40%體積的去離子水中，并加入配方量的三磷酸鈉， 充分?jǐn)嚢杈鶆蛐纬蓭锥√羌{米顆粒溶液；
[0089] (2)將配方量的地塞米松加入幾丁糖納米顆粒溶液中，并加入吐溫-80,充分?jǐn)嚢?均勻；
[0090] (3)向步驟(2)的溶液中加入氯化鈉并加入余量去離子水，再加入磷酸鹽緩沖液調(diào) 節(jié)pH至5.0-8.0，即得節(jié)腔用地塞米松幾丁糖納米注射液。
[0091] 二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0092] 本實(shí)驗(yàn)主要研究小關(guān)節(jié)用納米注射液對(duì)創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎家兔模型療效觀察，具體步 驟如下：
[0093] (1)選取8~15月齡2.0~3.0kg(罕）家兔40只，30只用于造模，10只為正常對(duì)照；
[0094] (2)將30只造模的兔子用戊巴比妥鈉麻醉后，選擇動(dòng)物腰椎小關(guān)節(jié)消毒，按文獻(xiàn)的 方法進(jìn)行半月板切除術(shù)，然后將皮膚縫合，當(dāng)天開始進(jìn)行青霉素肌注，共7天；
[0095] (3)將30只造模的兔子隨機(jī)分成A、B、C三組，每組10只，A組兔子用實(shí)施例1制備的 注射液給予每次2ml治療，3天注射一次，連續(xù)6周注射;B組兔子用對(duì)比例1注射液給予每次 2ml治療，3天注射一次，連續(xù)6周注射;C組用對(duì)比例2注射液給予每次2ml治療，3天注射一 次，連續(xù)6周注射;10只正常對(duì)照組為D組，D組的兔子正常未受傷；
[0096] (4)術(shù)后12、14、16周后各取一次動(dòng)物血液標(biāo)本檢測(cè)血樣中TNF-α含量。將TNF-α標(biāo) 準(zhǔn)品加緩沖液lmL，調(diào)節(jié)濃度分別為0.3、0.9、2.7、8.1、24.3yg/L，各取100yL加入試管中，再 依次加入125I-TNF及抗TNF-a血清lOOyL至標(biāo)準(zhǔn)管中，充分混勻后40°C放置24h，再加入PR分 離劑500yL混勾，放置20min，4°C離心，3500r/min離心25min。吸棄上清，在自動(dòng)γ計(jì)數(shù)器上 測(cè)定沉淀數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣品濃度，統(tǒng)計(jì)方差分析組間差異。檢測(cè)結(jié)果如表1所示：
[0097] 表1家兔不同時(shí)間點(diǎn)血漿、關(guān)節(jié)液中TNF-α含量結(jié)果
[0098]
[0099] (5)結(jié)果：四組家兔關(guān)節(jié)情況為祕(mì)且<(：組<六組<D組。造模后12周，A組、B組、C組血 漿及關(guān)節(jié)沖洗液了即-€(含量均明顯高于0組(？<0.01)。且12、14、16、18周各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的了即-α含量，C組和B組顯著高于A組、D組，A組、B組、C組三組中，A組各時(shí)間點(diǎn)的TNF-α含量均最低 (p<0.05)，見表1。由此可知，A組效果最為顯著。
[0100]對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，可根據(jù)以上描述的技術(shù)方案以及構(gòu)思，做出其它各種 相應(yīng)的改變以及形變，而所有的這些改變以及形變都應(yīng)該屬于本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍 之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其包括以下組分：l-4wt %的透明質(zhì)酸鈉、Ο . 5-1 · 5wt %的膠原蛋白、2-5wt %的幾丁糖、0 · 5-lwt %的羥基磷灰石、0 · 1-0 · 5wt %的非甾體抗 炎藥、0.05-0. lwt%的交聯(lián)劑和0.05-0.08wt%的脫水劑，余量為去離子水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其包括以下組分:3wt%的透明質(zhì) 酸鈉、1 wt %的膠原蛋白、3wt %的幾丁糖、0.7wt %的羥基磷灰石、0.3wt %的非甾體抗炎藥、 0.08wt%的交聯(lián)劑和0.06wt%的脫水劑，余量為去離子水。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其特征在于:非留體抗炎藥選自阿 司匹林、雙氯芬酸、布洛芬和美洛昔康中的一種或幾種。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其特征在于:交聯(lián)劑為戊二醛、鄰 苯二甲醛、雙酚淀粉和京尼平中的一種或幾種。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其特征在于:所述脫水劑為乙醇、 甲醇和丙酮中的一種或幾種。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小關(guān)節(jié)治療用納米注射液，其特征在于:透明質(zhì)酸鈉的分子量 為200-300萬道爾頓，幾丁糖的分子量為50-200萬道爾頓。7. -種制備如權(quán)利要求1所述的小關(guān)節(jié)治療用納米注射液的方法，其特征在于:包括以 下步驟： (1) 取配方量的透明質(zhì)酸鈉溶于去離子水中制成透明質(zhì)酸鈉水溶液，將膠原蛋白溶于 去離子水中制成膠原蛋白水溶液，將幾丁糖溶于去離子水中制成幾丁糖水溶液； (2) 將透明質(zhì)酸鈉水溶液、膠原蛋白水溶液、幾丁糖水溶液混合，加入配方量的脫水劑， 并加入交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)，連續(xù)攪拌l〇_15h; (3) 向交聯(lián)后的試劑中加入羥基磷灰石復(fù)合； (4) 向復(fù)合后的試劑中加入非留體抗炎藥，進(jìn)行充分混合，得混合液； (5) 將得到的混合液進(jìn)行冷凍干燥，干燥完成后進(jìn)行納米制粒； (6) 將制得的納米微球與配方量的去離子水充分混合，混合后的懸濁液即為用于小關(guān) 節(jié)治療用的納米注射液。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備小關(guān)節(jié)治療用納米注射液的方法，其特征在于:步驟(6) 中納米微球的粒徑為10_1000nm 〇
【文檔編號(hào)】A61K31/196GK105997859SQ201610537418
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月8日
【發(fā)明人】張軍東, 陳晚華, 吳劍英, 常臻
【申請(qǐng)人】上海建華精細(xì)生物制品有限公司