一種能促進(jìn)創(chuàng)傷愈合減輕創(chuàng)后瘢痕的多肽組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種能促進(jìn)創(chuàng)傷愈合減輕創(chuàng)后瘢痕的多肽組合物及其制備方法，本發(fā)明所述的多肽組合物，含有凝血酶肽衍生物TP508和安基奧101，兩者的重量比為1∶1～5。TP508與安基奧101聯(lián)合應(yīng)用組成復(fù)方對(duì)創(chuàng)傷愈合有促進(jìn)作用，并有助于愈后瘢痕的控制。
【專利說明】
-種能促進(jìn)創(chuàng)傷愈合減輕創(chuàng)后癒痕的多化組合物及其制備 方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及外科用藥領(lǐng)域，更為具體的說是設(shè)及用于創(chuàng)傷后促進(jìn)傷口愈合外用多 膚組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 創(chuàng)傷后愈合是外傷治療中重點(diǎn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)。創(chuàng)傷愈合的過程是免疫細(xì)胞、成纖維 細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞共同發(fā)揮各自作用的過程。其中，免疫細(xì)胞清除抗原、成纖維細(xì)胞 構(gòu)成肉芽組織、內(nèi)皮細(xì)胞生產(chǎn)血管、最終由上皮細(xì)胞完成修復(fù)，創(chuàng)傷愈合。促進(jìn)組織再生、縮 短創(chuàng)傷愈合時(shí)間、減輕愈合后癒痕體征對(duì)傷者尤其是大面積外傷患者的肌體康復(fù)、屯、理康 復(fù)具有重要意義。
[0003] 凝血酶膚衍生物TP508具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用，其作用機(jī)理是激活凝血酶受體 NPAR，釋放凝血酶，進(jìn)而加速成纖維細(xì)胞增殖促進(jìn)肉芽組織、血管延伸及新血管生成、刺激 內(nèi)皮細(xì)胞增殖加速傷口愈合。
[0004] 安基奧101是一個(gè)含有45個(gè)氨基酸的多膚，序列為N肥-MSDKP化SEVET抑KSKLKKT NT邸KNTLPSKETIQ犯KEYNQRS-C00H。作用機(jī)制是促進(jìn)表皮干細(xì)胞再分布，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分 化，尤其對(duì)肉芽組織有很好的促生成作用。 陽005]目前尚未有TP508與安基奧101聯(lián)合應(yīng)用的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種能夠促進(jìn)傷口愈合并有助于減輕癒痕的多膚組合物及 其制備方法。
[0007] 本發(fā)明所述的多膚組合物，含有凝血酶膚衍生物TP508和安基奧101，兩者的重量 比為1 : 1~5。
[000引所述的多膚組合物中還含有穩(wěn)定劑，其中穩(wěn)定劑選自糖類、多元醇類、氨基酸類、 大分子化合物類中的一種或其組合。其中糖類選自葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、薦糖、麥芽 糖、乳糖、海藻糖、棉巧糖、菊糖、纖維素中的一種或其組合；多元醇選自甘油、甘露醇、山梨 醇、聚乙二醇、肌醇中的一種或其組合；氨基酸選自甘氨酸、谷氨酸、精氨酸中的一種或其組 合；大分子化合物選自牛血清白蛋白、右旋糖巧、明膠中的一種或其組合。
[0009] 所述的多膚組合物中還含有基質(zhì)，其中基質(zhì)選自卡波姆、簇甲基纖維素鋼、纖維素 中的一種或其組合。
[0010] 各組分的構(gòu)成比例為TP508 :安基奧101 :穩(wěn)定劑：基質(zhì)=1 : 1~5 : 100~ 500 : 10000 ~100000。 陽011] W上皮化率為指標(biāo)對(duì)制劑進(jìn)行考查。并且運(yùn)用改良Burgi氏公式，對(duì)TP508與安 基奧101的相互作用進(jìn)行了研究（q> 1. 15為協(xié)同，q< 0.85為括抗，介于0.85與1. 15之 間為相加）。
[0012] 結(jié)果表明TP508與安基奧101聯(lián)合應(yīng)用組成復(fù)方對(duì)創(chuàng)傷愈合有促進(jìn)作用，并有助 于愈后癒痕的控制。
【具體實(shí)施方式】 陽〇1引實(shí)施例1
[0014] 本實(shí)施例所描述的復(fù)方制劑所需原料質(zhì)量配比為lOmg TP508、10mg安基奧101、 3g菊糖、Ig卡波姆，各組分按如下描述配制：
[0015] 將Ig卡波姆加入到lOOg去離子水中，攬拌使其溶脹，降至1-5°C得混合液A。
[0016] 將TP508、安基奧101加至PBS緩沖液中溶解與甘露醇在1-4°C下均勻混合保溫30 分鐘，將此混合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。
[0017] 實(shí)施例2
[0018] 本實(shí)施例所描述的復(fù)方制劑所需原料質(zhì)量配比為lOmg TP508、50mg安基奧101、 3g甘露醇、Ig卡波姆，各組分按如下描述配制：
[0019] 將Ig卡波姆加入到lOOg去離子水中，攬拌使其溶脹，降至1-5°C得混合液A。
[0020] 將TP508、安基奧101加至PBS緩沖液中溶解與甘露醇在1-4°C下均勻混合保溫30 分鐘，將此混合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。 陽OW 實(shí)施例3
[0022] 本實(shí)施例所描述的復(fù)方制劑所需原料質(zhì)量配比為Img TP508、15mg安基奧101、3g 甘露醇、Ig簇甲基纖維素鋼，各組分按如下描述配制：
[0023] 將Ig簇甲基纖維素鋼加入到lOOg去離子水中，加熱使其糊化，降至1-5°C得混合 液A。
[0024] 將TP508、安基奧101加至PBS緩沖液中溶解與甘露醇在1-4°C下均勻混合保溫30 分鐘，將此混合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。 陽〇2引 實(shí)施例4
[0026] 本實(shí)施例所描述的復(fù)方制劑所需原料質(zhì)量配比為lOmg TP508、25mg安基奧101、 3g甘露醇、Ig簇甲基纖維素鋼，各組分按如下描述配制：
[0027] 將Ig簇甲基纖維素鋼加入到lOOg去離子水中，加熱使其糊化，降至1-5°C得混合 液A。
[0028] 將TP508、安基奧101加至PBS緩沖液中溶解與甘露醇在1-4°C下均勻混合保溫30 分鐘，將此混合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。
[0029] 實(shí)施例5
[0030] 本實(shí)施例所描述的復(fù)方制劑所需原料質(zhì)量配比為lOmg TP508、35mg安基奧101、 3g甘露醇、Ig簇甲基纖維素鋼，各組分按如下描述配制：
[0031] 將Ig簇甲基纖維素鋼加入到lOOg去離子水中，加熱使其糊化，降至l-5°c得混合 液A。
[0032] 將TP508、安基奧101加至PBS緩沖液中溶解與甘露醇在1-4°C下均勻混合保溫30 分鐘，將此混合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。 陽〇3引 實(shí)施例6
[0034] 本實(shí)施例所描述的復(fù)方制劑所需原料質(zhì)量配比為lOmg TP508、45mg安基奧101、 3g甘露醇、Ig簇甲基纖維素鋼，各組分按如下描述配制：
[0035] 將Ig簇甲基纖維素鋼加入到lOOg去離子水中，加熱使其糊化，降至1-5°C得混合 液A。
[0036] 將TP508、安基奧101加至PBS緩沖液中溶解與甘露醇在1-4°C下均勻混合保溫30 分鐘，將此混合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。
[0037] 實(shí)施例7
[0038] 本實(shí)施例所描述的復(fù)方制劑所需原料質(zhì)量配比為lOmg TP508、45mg安基奧101、 0. 5g半乳糖、Ig甘油、0.1 g右旋糖巧、Ig簇甲基纖維素鋼，各組分按如下描述配制：
[0039] 將Ig簇甲基纖維素鋼加入到lOOg去離子水中，加熱使其糊化，降至1-5°C得混合 液A。
[0040] 將TP508、安基奧101與甘油在1-4°C下均勻混合保溫30分鐘，加入右旋糖巧、半 乳糖均勻混合攬拌5分鐘，加 PBS緩沖液中超聲乳化得混合物B。
[0041] 將混合物B加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。
[0042] 實(shí)施例8 PBS緩沖液的配制 陽0創(chuàng)本發(fā)明所用PBS緩沖液濃度為0.1mol/L，抑=7. 4 ;配制方法如下：
[0044] 甲液：0.1mol/L化2HP04溶液：稱取憐酸氨二鋼9. 465g 7. 099g，加蒸饋水至 1000ml ；
[0045] 乙液：0. 05mol/L K肥P04溶液：稱取憐酸二氨鐘，9. 07g 6. 803g，加蒸饋水至 1000ml。
[0046] 將甲乙液分裝在棟色瓶?jī)?nèi)，于4°C冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按4/1比例混合 即得。
[0047] 實(shí)施例9 TP508凝膠的制備 W48] 本實(shí)施例所描述的制劑所需原料質(zhì)量配比為lOmg ΤΡ508、0. 5g半乳糖、Ig甘油、 0.1 g右旋糖巧、Ig卡波姆，各組分按如下描述配制：
[0049] 將Ig卡波姆加入到lOOg去離子水中，攬拌使其溶脹，降至1-5°C得混合液A。
[0050] 將TP508加至PBS緩沖液中溶解與甘露醇、右旋糖巧在1-4°C下均勻混合保溫30 分鐘，將此混合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。
[0051] 實(shí)施例10安基奧101凝膠的制備
[0052] 本實(shí)施例所描述的制劑所需原料質(zhì)量配比為50mg安基奧101、0. 5g半乳糖、Ig甘 油、0.1 g右旋糖巧、Ig卡波姆，各組分按如下描述配制：
[0053] 將Ig卡波姆加入到lOOg去離子水中，攬拌使其溶脹，降至1-5°C得混合液A。
[0054] 將安基奧101加至PBS緩沖液中溶解與甘露醇、右旋糖巧在1-4°C下均勻混合保溫 30分鐘，將此混合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。
[0055] 實(shí)施例11空白基質(zhì)的制備
[0056] 本實(shí)施例所描述的制劑所需原料質(zhì)量配比為0. 5g半乳糖、Ig甘油、0.1 g右旋糖 巧、Ig卡波姆，各組分按如下描述配制：
[0057] 將Ig卡波姆加入到lOOg去離子水中，攬拌使其溶脹，降至1-5°C得混合液A。
[005引將PBS緩沖液中溶解與甘露醇、右旋糖巧在1-4°C下均勻混合保溫30分鐘，將此混 合物加至混合液A中超聲乳化既得終產(chǎn)品。 陽059] 試驗(yàn)例
[0060] 創(chuàng)傷模型分組
[0061] 試驗(yàn)小鼠雌雄各半，體重20g±2g，溫度20°C ±2°C，濕度50% ±2%，模擬自然光 照條件，隨機(jī)分成5組每組各45只，分別編號(hào)為1-5。
[0062] 創(chuàng)傷模型建立
[0063] 用20%烏拉坦腹腔注射麻醉，剪去背毛，用脫毛劑脫毛洗凈擦干；用75%酒精消 毒后在背部同一部位切除直徑為2毫米的圓形全層皮膚。
[0064] 1組為陽性對(duì)照組，涂覆重組人表皮生長(zhǎng)因子凝膠，每隔24小時(shí)一次，每次約 0.1 g，外用紗布包裹膠布固定。 陽0化]2組為單組份對(duì)照組涂覆實(shí)施例9所述TP508凝膠，每隔24小時(shí)一次，每次約 0.1 g，外用紗布包裹膠布固定。
[0066] 3組為單組份對(duì)照組涂覆實(shí)施例10所述安基奧101凝膠，每隔24小時(shí)一次，每次 約0.1 g，外用紗布包裹膠布固定。
[0067] 4組為給藥組涂覆實(shí)施例2所述復(fù)方制劑，每隔24小時(shí)一次，每次約0. 05g，外用 紗布包裹膠布固定。
[0068] 5組為空白對(duì)照組涂覆實(shí)施例11所述空白基質(zhì)，每隔24小時(shí)一次，每次0.1 g，外 用紗布包裹膠布固定
[0069] 分別于ld、：M、6d、9d隨機(jī)處死10只小鼠，于距離創(chuàng)緣2毫米正常皮膚至創(chuàng)面取 材，分別取樣測(cè)定上皮化率后，切片光鏡觀察。
[0070] 試驗(yàn)結(jié)果如下：
[0071] 上皮化率測(cè)試結(jié)果如表1上皮化率結(jié)果
[0072] 表1上皮化率結(jié)果
[0073]
陽074] 各組與空白組P<0.05 陽0巧]運(yùn)用改良Burgi氏公式計(jì)算各天的q值
[0076]
[0077] W、3d復(fù)方給藥組相對(duì)于TP508對(duì)照組、安基奧101對(duì)照組有明顯的協(xié)同增強(qiáng)作 用，6d復(fù)方給藥組、TP508對(duì)照組、安基奧101對(duì)照組基本完全愈合無法比較藥物相互作用。 復(fù)方給藥組與陽性對(duì)照組藥效相當(dāng)。
[0078] 光鏡檢查結(jié)果：
[0079] 術(shù)后Id各組傷口均見滲出，少量炎癥細(xì)胞浸潤；1-4組挪皮完整明顯，可見凝膠層 覆蓋位于創(chuàng)面上方；5組挪皮不完整可見凝膠層覆蓋位于創(chuàng)面上方。
[0080] 術(shù)后3dl-4組挪下肉芽組織生長(zhǎng)、炎細(xì)胞浸潤、微血管擴(kuò)張延伸；5組仍有滲出，光 鏡下肉芽組織出現(xiàn)、有壞死現(xiàn)象、未見微血管擴(kuò)張。
[0081] 術(shù)后6dl-4組肉芽組織增厚、組織開始分化、炎癥細(xì)胞減少、上皮組織覆蓋傷口。 3、4組可辨識(shí)出組織分化跡象。5組直接觀察仍有滲出，光鏡下炎細(xì)胞明顯，上皮組織未完 全覆蓋。
[0082] 術(shù)后9dl-7組肉芽組織生長(zhǎng)完好，未見炎細(xì)胞，3、4組光鏡下觀察到毛囊生成。5 組上皮組織生長(zhǎng)，炎細(xì)胞明顯，肉芽組織增殖加快。
[0083] 術(shù)后21d直接觀察各組，各給藥組傷口均已愈合，開始長(zhǎng)毛。3、4組絨毛茂盛，4組 毛下癒痕較1組明顯。空白組傷口愈合但毛未長(zhǎng)出。光鏡下給藥組創(chuàng)口已愈合，上皮完整， 毛囊分布均勻；空白組上皮完整但未長(zhǎng)平，僅傷口邊緣有毛囊出現(xiàn)。
[0084] 各實(shí)施例中 陽0化]TP508由上海膚和生物科技有限公司生產(chǎn)
[0086] 安基奧101由西安美聯(lián)生物科技有限公司生產(chǎn)
[0087] 卡波姆由廣州漢普醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)
[0088] 簇甲基纖維素鋼由日本旭化成公司生產(chǎn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種多肽組合物，含有凝血酶肽衍生物TP508和安基奧101，兩者的重量比為 I : 1 ~5〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽組合物，其特征在于，含有穩(wěn)定劑和基質(zhì)，各組分的重量 比例為TP508 :安基奧101 :穩(wěn)定劑：基質(zhì)=1 : 1~5 : 100~500 : 10000~100000。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽組合物，其特征在于，所述的穩(wěn)定劑選自糖類、多元醇、 氨基酸、大分子化合物中的一種或其組合。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的多肽組合物，其特征在于，所述的糖類選自葡萄糖、果糖、半 乳糖、核糖、鹿糖、麥芽糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖、菊糖、纖維素中的一種或其組合。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的多肽組合物，其特征在于，所述的多元醇選自甘油、甘露醇、 山梨醇、聚乙二醇、肌醇中的一種或其組合。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的多肽組合物，其特征在于，所述的氨基酸選自甘氨酸、谷氨 酸、精氨酸中的一種或其組合。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的多肽組合物，其特征在于，所述的大分子化合物選自牛血清 白蛋白、右旋糖苷、明膠中的一種或其組合。8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽組合物，其特征在于，所述的基質(zhì)選自卡波姆、羧甲基纖 維素鈉、纖維素中的一種或其組合。
【文檔編號(hào)】A61P17/02GK105879010SQ201510027563
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2015年1月17日
【發(fā)明人】林波, 王欣, 盧媛麗, 宮曉暉, 韓風(fēng)雨, 李洪澤
【申請(qǐng)人】?jī)?nèi)蒙古天奇生物科技有限公司, 內(nèi)蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司, 赤峰陸爾草中蒙藥科技有限公司