皮膚創(chuàng)傷修復(fù)外用溶液制劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是關(guān)于一種皮膚創(chuàng)傷修復(fù)外用溶液制 劑及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 在日常生活中，皮膚創(chuàng)傷時(shí)常發(fā)生，皮膚愈合過(guò)程較慢，處理不當(dāng)還會(huì)引發(fā)進(jìn)一步 感染，甚至引起更嚴(yán)重潰爛。常見的傷口包括皮膚燙傷、燒傷、挫傷、擦傷、以及外科手術(shù)、婦 科手術(shù)、整形手術(shù)引起的皮膚創(chuàng)傷等。如何加快傷口愈合的同時(shí)又能避免瘢痕的形成，一直 都是醫(yī)學(xué)科研工作者試圖解決的一大難題。
[0003]目前市面上用于創(chuàng)傷護(hù)理產(chǎn)品眾多，其主要作用是防止傷口感染，利用皮膚自身 的修復(fù)作用對(duì)傷口進(jìn)行自我修復(fù)。還有一些商品化的產(chǎn)品通過(guò)添加促表皮細(xì)胞增殖的作用 加速角質(zhì)屏障的形成，如人表皮生長(zhǎng)因子（EGF)，是一種人體自有的廣泛存在于皮膚細(xì)胞 內(nèi)的小分子蛋白，由53個(gè)氨基酸組成，能有效促進(jìn)和調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，對(duì)保護(hù) 和療養(yǎng)皮膚、黏膜具有十分獨(dú)特的功效。EGF已被廣泛應(yīng)用于皮膚外傷修復(fù)領(lǐng)域，包括治療 燒傷、燙傷、手術(shù)傷、機(jī)械傷、微創(chuàng)以及皮膚其它病患如潰瘍、皰疹、炎癥、濕疹、過(guò)敏等；以及 防止治療上述皮膚外傷過(guò)程中疤痕形成。此外，EGF還被廣泛應(yīng)用于護(hù)膚化妝品領(lǐng)域，包括 調(diào)節(jié)人體自我修復(fù)功能，深層解決皮膚問(wèn)題，全面提高皮膚質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)延緩皮膚衰老、收縮 毛孔、緊致皮膚、增進(jìn)皮膚光潔度和彈性、祛皺、淡化色斑等功效。
[0004] 然而當(dāng)角質(zhì)屏障快速形成之后，人表皮生長(zhǎng)因子（EGF)天然的物理屏障則阻礙了 蛋白類藥物的皮膚滲透，藥物無(wú)法繼續(xù)作用于表層皮膚，使得皮膚無(wú)法完成正常修復(fù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種外用溶液制劑，能夠加速皮膚創(chuàng)傷的修復(fù)與愈 合。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明的皮膚創(chuàng)傷修復(fù)外用溶液制劑以透皮EGF和蛋清溶菌酶為原料，以甘油、 海藻糖、和羥丙基甲基纖維素為輔料制成。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，所述外用溶液制劑的配方如下：
[0011] 根據(jù)本發(fā)明，所述的溶液制劑的形式包括噴劑、乳劑、凝膠、軟膏、硬膏和油劑。
[0012] 本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種上述皮膚創(chuàng)傷修復(fù)外用溶液制劑的制備方法， 該方法包括以下步驟：
[0013] A、將透皮EGF、甘油、海藻糖、羥丙基甲基纖維素、蛋清溶菌酶按上述配比準(zhǔn)備好， 備用；
[0014] B、配制溶液基質(zhì)：
[0015] 將步驟A中的羥丙基甲基纖維素、海藻糖、甘油加入容器中，加入去離子水，攪拌 混勻，高溫高壓滅菌，取出，冷卻，備用；
[0016] C、加入原料，在無(wú)菌條件下，將步驟A中的透皮EGF過(guò)濾除菌；
[0017] D、用去離子水溶解溶菌酶，并過(guò)濾除菌；
[0018] E、將過(guò)濾好的透皮EGF溶液和溶菌酶溶液加入到溶液基質(zhì)中，加去離子水，采用 滅菌玻璃棒攪拌均勻，分裝至滅菌的噴霧瓶中，15ml/瓶。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明，步驟B中的高溫高壓滅菌時(shí)間為20min。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明，步驟C和步驟D均采用0. 22um針頭過(guò)濾器過(guò)濾除菌。
[0021] 本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種上述外用溶液制劑的用于皮膚創(chuàng)傷修復(fù)與愈 合的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明的皮膚創(chuàng)傷修復(fù)外用溶液制劑，其有益效果是：在皮膚修復(fù)動(dòng)態(tài)過(guò)程中，其 比常規(guī)EGF具有明顯優(yōu)勢(shì)，愈合時(shí)間更短，同等劑量下治療效果更佳。
【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1為藥效學(xué)試驗(yàn)中正常組對(duì)燙傷模型小鼠的治療作用皮膚組織病理學(xué)照片。
[0024] 圖2為藥效學(xué)試驗(yàn)中模型組對(duì)燙傷模型小鼠的治療作用皮膚組織病理學(xué)照片。
[0025] 圖3為藥效學(xué)試驗(yàn)中陽(yáng)性組對(duì)燙傷模型小鼠的治療作用皮膚組織病理學(xué)照片。
[0026] 圖4為藥效學(xué)試驗(yàn)中透皮EGF(0. 004% )組對(duì)燙傷模型小鼠的治療作用皮膚組織 病理學(xué)照片。
[0027] 圖5為藥效學(xué)試驗(yàn)中透皮EGF(0. 008% )組對(duì)燙傷模型小鼠的治療作用皮膚組織 病理學(xué)照片。
[0028] 圖6為藥效學(xué)試驗(yàn)中透皮EGF(0. 012% )組對(duì)燙傷模型小鼠的治療作用皮膚組織 病理學(xué)照片。
[0029] 圖7為藥效學(xué)試驗(yàn)中透皮EGF(0. 016% )組對(duì)燙傷模型小鼠的治療作用皮膚組織 病理學(xué)照片。
[0030] 圖8為藥效學(xué)試驗(yàn)中透皮EGF(0. 02% )組對(duì)燙傷模型小鼠的治療作用皮膚組織病 理學(xué)照片。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本 發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0032] 本實(shí)施例中所述的透皮EGF為中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102247603B中公開的透皮EGF，是 一種通過(guò)將蛋白類藥物與透皮增強(qiáng)肽融合組成的融合蛋白。
[0033] 實(shí)施例1-5皮膚創(chuàng)傷修復(fù)外用溶液制劑的制備
[0034] 本實(shí)施例的皮膚創(chuàng)傷修復(fù)外用溶液制劑的配方如以下表1所示：
[0035] 表1外用溶液制劑配方
[0037] 按表1所示的配方，通過(guò)以下步驟制備外用溶液制劑：
[0038] A、將原料和輔料按表1的用量準(zhǔn)備好，備用；
[0039] B、配制溶液基質(zhì)：
[0040] 將步驟A中的羥丙基甲基纖維素、海藻糖、甘油加入容器中，加入去離子水，攪拌 混勻，高溫高壓滅菌，取出，冷卻，備用；
[0041] C、加入原料，在無(wú)菌條件下，將步驟A中的透皮EGF過(guò)濾除菌；
[0042] D、用去離子水溶解溶菌酶，并過(guò)濾除菌；
[0043] E、將過(guò)濾好的透皮EGF溶液和溶菌酶溶液加入到溶液基質(zhì)中，加去離子水，采用 滅菌玻璃棒攪拌，攪拌均勻，分裝至滅菌的噴霧瓶中，15ml/瓶。
[0044] 其中，步驟B中的高溫高壓滅菌時(shí)間為20min ;步驟C和步驟D均采用0. 22 μ m針 頭過(guò)濾器過(guò)濾除菌。
[0045] 實(shí)施例6外用溶液制劑的藥效學(xué)試驗(yàn)
[0046] 本實(shí)施例中的外用溶液制劑均為噴劑，采用實(shí)施例1-5的配方制成。
[0047] 1、動(dòng)物種屬及試驗(yàn)分組：
[0048] 本實(shí)施例采用的動(dòng)物種屬為昆明種小鼠，體重18~22g，性別為雄性。取體重 18~22g雄性小鼠80只，適應(yīng)性飼養(yǎng)5天后，稱重、編號(hào)，隨機(jī)均分為8組，每組10只，即正 常對(duì)照組（無(wú)創(chuàng)傷組）、模型對(duì)照組（創(chuàng)傷，無(wú)藥物處理）、陽(yáng)性藥物組（燙傷治療藥物金因 肽處理組）、本實(shí)施例1-5的受試藥物組（外用溶液制劑組）。
[0049] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0050] (1)燙傷建模的方法
[0051] 于實(shí)驗(yàn)前1天背部脫毛2cmX2cm，次日除正常對(duì)照組（10只小鼠）外，取70只小 鼠腹腔注射10%水合氯醛〇. 〇3ml/10g麻醉，將去毛的背部皮膚浸入90°C恒溫水浴中持續(xù) 6s，使之造成燙傷（淺ΙΓ燙傷），燙傷面積為直徑18_。以1/5000呋喃西林清潔傷口，隨 后腹腔注射滅菌生理鹽水I. 5ml/只。造模后可見皮膚發(fā)紅、水腫，將造模小鼠隨機(jī)均分為7 組（雌雄各半），分別為受試藥物組、陽(yáng)性對(duì)照組和模型對(duì)照組。其中，受試藥物組為五組， 分別噴實(shí)施例1-5所述的五個(gè)濃度的外用溶液制劑；模型對(duì)照組（生理鹽水處理）為一組， 行燙傷處理，但不接受藥物治療；陽(yáng)性對(duì)照組為一組，經(jīng)燙傷治療藥物金因肽處理。各組噴 藥后均以紗布、保鮮膜覆蓋，膠布固定，每天保持燙傷部位與藥物接觸6h。6h后以生理鹽水 洗凈藥物，連續(xù)用藥12天。
[0052] (2)檢測(cè)指標(biāo)
[0053] 燙傷創(chuàng)面面積計(jì)算：于燙傷第1天、第4天及第8天以硫酸紙覆蓋燙傷潰瘍面沿創(chuàng) 緣描記，剪下描繪的圖形，再將圖形描至小方格紙，測(cè)定小方格的格數(shù)表示燙傷創(chuàng)面面積。
[0054] 燙傷皮膚病理組織學(xué)檢查：末次用藥后次日，小鼠處死，剪取燙傷部位皮膚，固定 于10%甲醛溶液中，石蠟包埋切片，HE染色，顯微鏡下觀察比較各組小鼠燙傷皮膚的愈合 程度：〃_〃皮膚角質(zhì)層、鱗狀上皮層、皮下組織的毛囊、毛囊腺均正常；〃+〃皮膚角質(zhì)層、鱗狀 上皮層、皮下組織的大量炎細(xì)胞侵潤(rùn)；〃++〃皮膚角質(zhì)層、鱗狀上皮層壞死，皮下組織的大量 炎細(xì)胞侵潤(rùn)；〃+++〃皮膚角質(zhì)層鱗狀上皮層、皮下組織的毛囊、毛囊腺均壞死。
[0055] (3)統(tǒng)計(jì)方法
[0056] 將試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPASS軟件統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以i土S表示，并進(jìn)行t檢驗(yàn)，Ρ〈0· 05有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0057] (4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0058] 1)外用溶液制劑對(duì)模型小鼠燙傷皮膚面積的影響
[0059] 造模第1天，小鼠燙傷部位皮膚出現(xiàn)明顯紅斑及水腫，各組無(wú)明顯差別，說(shuō)明分 組均勻。造模第4天、第8天，各用藥組小鼠皮膚明顯好轉(zhuǎn)，燙傷面積顯著縮小，與模型組 比較有顯著性差異（Ρ〈〇. 01)，且在0. 004%、0. 008%、0. 016%、0. 02%劑量間，呈現(xiàn)一定的 量-效依賴關(guān)系；在同等用藥體積下，受試藥物組各組小鼠燙傷面積明顯小于陽(yáng)性組，與其 比較有顯著性差異（Ρ〈〇. 05或Ρ〈0. 01)，詳見表2-1。
[0060] 表2_1外用溶液制劑對(duì)小鼠燙傷皮膚面積的影響（X土s，)
[0062] 注：與模