(DCM)和N-N-二甲基甲酰胺(DMF)體積比9:1的復(fù)合溶劑作為紡絲溶劑，加入聚乳酸(PLA)溶解，制成質(zhì)量濃度為5 %的聚乳酸，再加入質(zhì)量濃度2 %的電極化β-TCP檸檬酸鈉分散液，作為以皮層預(yù)電紡液I ；質(zhì)量濃度為2 %的殼聚糖醋酸水溶液中加入bFGF 0.5yg，磁力攪拌6h后使藥物分散均勻，作為芯層預(yù)電紡液2。
[0037](3)將以上制備的兩種預(yù)電紡液分別裝在內(nèi)徑不同的注射器嵌入推注栗中，調(diào)節(jié)電壓至101^，流速為0.021111711，溫度為22°(:，接收距離為15011，用細(xì)質(zhì)銅網(wǎng)(10011\10011)作為接收裝置，從接收輥上取下纖維膜，真空干燥12h去除溶劑，得到復(fù)合纖維膜。
[0038](4)2°C下將(3)中的纖維膜浸沒在EDC(0.lmol/L)/NHS(0.ImoI/L)乙醇的水溶液(乙醇與水的體積比為9:1)中交聯(lián)24h，然后用去離子水浸泡沖洗3遍，凍干。
[0039]實(shí)施例2:
[0040](I)將磷酸三鈣(β-TCP)置于直徑4cm，高1.5cm氧化鋁環(huán)中，在4KV/cm—1直流電場作用下，200°C空氣中進(jìn)行極化2小時(shí)，得到的極化后的β-TCP，備用。
[0041](2)室溫下，以二氯甲烷(DCM)和N-N-二甲基甲酰胺(DMF)體積比2:1的復(fù)合溶劑作為紡絲溶劑，加入聚乳酸(PLA)溶解，制成質(zhì)量濃度為20 %的聚乳酸，再加入質(zhì)量濃度5 %的電極化β-TCP檸檬酸鈉分散液，作為以皮層預(yù)電紡液I ；質(zhì)量濃度為5 %的殼聚糖醋酸水溶液中加入bFGF 0.75yg，磁力攪拌6h后使藥物分散均勻，作為芯層預(yù)電紡液2。
[0042](3)將以上制備的兩種預(yù)電紡液分別裝在內(nèi)徑不同的注射器嵌入注射栗中，調(diào)節(jié)電壓至151^，流速為0.11111711，溫度為22°(:，接收距離為15011，用細(xì)質(zhì)銅網(wǎng)(10011\10011)作為接收裝置，從接收輥上取下纖維膜，真空干燥24h去除溶劑，得到復(fù)合纖維膜。
[0043](4)2°C下將(3)中的纖維膜浸沒在EDC(0.lmol/L)/NHS(0.ImoI/L)乙醇的水溶液(乙醇與水的體積比為8:2)中交聯(lián)24h，然后用去離子水浸泡沖洗3遍，凍干。
[0044]實(shí)施例3:
[0045](I)將磷酸三鈣(β-TCP)置于直徑6cm，高2.0cm氧化鋁環(huán)中，在6KV/cm—1直流電場作用下，400°C空氣中進(jìn)行極化I小時(shí)，得到的極化后的β-TCP，備用。
[0046](2)室溫下，以丙酮和N-N-二甲基乙酰胺體積比3:1的復(fù)合溶劑作為紡絲溶劑，加入聚乳酸(PLA)溶解，制成質(zhì)量濃度為15 %的聚乳酸，再加入質(zhì)量濃度5 %的電極化β-TCP檸檬酸鈉分散液，作為以皮層預(yù)電紡液I;質(zhì)量濃度10%的殼聚糖醋酸水溶液中加入bFGF0.25yg，磁力攪拌6h后使藥物分散均勻，作為芯層預(yù)電紡液2。
[0047](3)將以上制備的兩種預(yù)電紡液分別裝在內(nèi)徑不同的注射器嵌入注射栗中，調(diào)節(jié)電壓至201^，流速為0.81111711，溫度為25°(:，接收距離為20011，用細(xì)質(zhì)銅網(wǎng)(10011\10011)作為接收裝置接受，從接收輥上取下纖維膜，真空干燥36h去除溶劑，得到復(fù)合纖維膜。
[0048](4)2°C下將(3)中的纖維膜浸沒在EDC(0.lmol/L)/NHS(0.1moI/L)乙醇的水溶液(乙醇與水的體積比為7:3)中交聯(lián)24h，然后用去離子水浸泡沖洗3遍，凍干。
[0049]實(shí)施例4:
[0050](I)將磷酸三鈣(β-TCP)置于直徑8cm，高3.0cm氧化鋁環(huán)中，在8KV/cm—1直流電場作用下，600°C空氣中進(jìn)行極化2小時(shí)，得到的極化后的β-TCP，備用。
[0051](2)室溫下，以氯仿作為紡絲溶劑，加入聚乳酸(PLA)溶解，制成質(zhì)量濃度為20%的聚乳酸，再加入質(zhì)量濃度4 %的電極化β-TCP檸檬酸鈉分散液，作為以皮層預(yù)電紡液I;質(zhì)量濃度為2%的殼聚糖醋酸水溶液中加入bFGF 0.5yg，磁力攪拌6h后使藥物分散均勻，作為芯層預(yù)電紡液2。
[0052](3)將以上制備的兩種預(yù)電紡液分別裝在內(nèi)徑不同的注射器嵌入注射栗中，調(diào)節(jié)電壓至25kV，流速為2mL/h，溫度為25°C，接收距離為10cm，用細(xì)質(zhì)銅網(wǎng)(1cmX 1cm)作為接收裝置，從接收輥上取下纖維膜，真空干燥36h去除溶劑，得到復(fù)合纖維膜。
[0053](4)2°C下將(3)中的纖維膜浸沒在EDC(0.lmol/L)/NHS(0.ImoI/L)乙醇的水溶液(乙醇與水的體積比為9:1)中交聯(lián)24h，然后用去離子水浸泡沖洗3遍，凍干。
[0054]實(shí)施例5:
[0055](I)將磷酸三鈣(β-TCP)置于直徑8cm，高3.0cm氧化鋁環(huán)中，在8KV/cm—1直流電場作用下，600°C空氣中進(jìn)行極化2小時(shí)，得到的極化后的β-TCP，備用。
[0056](2)室溫下，以六氟異丙醇作為紡絲溶劑，加入聚乳酸(PLA)溶解，制成質(zhì)量濃度為25 %的聚乳酸，再加入質(zhì)量濃度8 %的電極化β-TCP檸檬酸鈉分散液，作為以皮層預(yù)電紡液I;質(zhì)量濃度為6%的殼聚糖醋酸水溶液中加入bFGF 0.75yg，磁力攪拌6h后使藥物分散均勻，作為芯層預(yù)電紡液2。
[0057](3)將以上制備的兩種預(yù)電紡液分別裝在內(nèi)徑不同的注射器嵌入注射栗中，調(diào)節(jié)電壓至20kV，流速為2mL/h，溫度為25°C，接收距離為18cm，用細(xì)質(zhì)銅網(wǎng)(1cmX 1cm)作為接收裝置，從接收輥上取下纖維膜，真空干燥48h去除溶劑，得到復(fù)合纖維膜。
[0058](4)2°C下將(3)中的纖維膜浸沒在EDC(0.lmol/L)/NHS(0.ImoI/L)乙醇的水溶液(乙醇與水的體積比為7:3)中交聯(lián)24h，然后用去離子水浸泡沖洗3遍，凍干。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.具有電刺激作用的仿生納米纖維支架制備方法，其特征在于包括以下步驟: 1)將β-磷酸三鈣置于直徑2-8cm，高0.5-3cm氧化鋁環(huán)中，在2?8KV/cm-l直流電場作用下，于200?600 0C空氣中進(jìn)行極化0.5?3h，得到極化后的β-TCP ； 2)聚乳酸溶解于有機(jī)溶劑，再加入上述極化后的β-TCP粉末，制備得到PLA/i3-TCP預(yù)電紡液I;在殼聚糖醋酸水溶液中加入生物活性藥物，攪拌分散均勻，制備得到CS/生物活性藥物預(yù)電紡液2; 3)以PLA/i3-TCP為皮層預(yù)電紡液1，以CS/生物活性藥物為芯層預(yù)電紡液2，通過同軸電紡絲制備 PLA/CS/0-TCP ； 其中，取兩個(gè)規(guī)格2?1ml的注射器，分別吸取皮層預(yù)電紡液I和芯層預(yù)電紡液2，插入規(guī)格18G?26G的不銹鋼針頭，調(diào)節(jié)電壓1KV?30KV; 調(diào)節(jié)注射栗速率，使注射器中溶液勻速流出，皮層預(yù)電紡液I推注流速為0.0I?2ml /h，芯層預(yù)電紡液2推進(jìn)速度0.02?2ml/h，皮層的流速大于芯層； 取1cmX 1cm細(xì)質(zhì)銅網(wǎng)在接地滾軸上作為接收裝置，控制噴絲頭與接收裝置的接收距離10?25cm，得到電紡纖維膜； 真空干燥12?48h去除溶劑，浸沒在EDC和NHS的乙醇水溶液中交聯(lián)24h，去離子水洗滌、凍干得到仿生納米纖維支架。2.如權(quán)利要求1所述具有電刺激作用的仿生納米纖維支架制備方法，其特征在于步驟2)所述有機(jī)溶劑為N-N-二甲基甲酰胺與或四氫呋喃或丙酮或氯仿或二氯甲烷的混合。3.如權(quán)利要求1所述具有電刺激作用的仿生納米纖維支架制備方法，其特征在于步驟2)溶劑中聚乳酸質(zhì)量濃度為5%?30%，電極化β-TCP質(zhì)量濃度為2%?20% ;殼聚糖醋酸水溶液質(zhì)量濃度2%?10%。4.如權(quán)利要求1所述具有電刺激作用的仿生納米纖維支架制備方法，其特征在于步驟2)所述的生物活性藥物為神經(jīng)生長因子(NGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、神經(jīng)營養(yǎng)因子、表皮生長因子中的一種。5.如權(quán)利要求1所述具有電刺激作用的仿生納米纖維支架制備方法，其特征在于步驟3)所述EDC和NHS濃度均為0.lmol/L，乙醇與水的體積比為7: 3?9:1。6.如權(quán)利要求1所述具有電刺激作用的仿生納米纖維支架制備方法，其特征在于步驟3)電紡絲制備PLA/CS/0-TCP過程中溫度:25?40°C ;相對濕度:30?70%。7.如權(quán)利要求1所述具有電刺激作用的仿生納米纖維支架制備方法，其特征在于所述仿生納米纖維支架用于外周圍神經(jīng)損傷修復(fù)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有電刺激作用的復(fù)合仿生納米纖維支架的制備方法。將β-磷酸三鈣在2～8KV/cm-1直流電場作用下，于200～600℃空氣中進(jìn)行極化0.5～3h，得到極化后的β-TCP；聚乳酸溶解于有機(jī)溶劑，再加入上述極化后的β-TCP粉末，制備得到PLA/β-TCP預(yù)電紡液1；在殼聚糖醋酸水溶液中加入生物活性藥物，攪拌分散均勻，制備得到CS/生物活性藥物預(yù)電紡液2；通過同軸電紡絲制備PLA/CS/β-TCP。本發(fā)明制備的具有電刺激的納米纖維支架具有雙層內(nèi)部結(jié)構(gòu)、表面積大可以實(shí)現(xiàn)對神經(jīng)營養(yǎng)因子及各類藥物的適時(shí)、適量的控制釋放，生物相容性好，性能穩(wěn)定易于保存，在外周圍神經(jīng)損傷修復(fù)等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中具有良好的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A61L27/54, D01D5/00, D01D1/02, A61L27/20, A61L27/18, A61L27/22, A61L27/12, A61L27/50, D01D5/34
【公開號】CN105664240
【申請?zhí)枴緾N201610027910
【發(fā)明人】徐海星, 李依萍, 許沛虎, 黃志軍, 張凌溪, 李燕, 郭興蕾, 吳峰政
【申請人】武漢理工大學(xué)
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年1月15日