一種荷葉黃酮的組合物的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種天然藥物領域，具體涉及一種荷葉黃酮的組合物和制備方法。
【背景技術】
[0002]荷葉為睡蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera 6aertn.)的葉片，主產(chǎn)于江蘇、浙江、湖南、湖北、安徽等地，資源十分豐富，產(chǎn)量巨大。荷葉除含有碳水化合物、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、單寧等常規(guī)化學成分外，還主要含有生物堿、多酚和黃酮三大類化合物，它在食用和藥用領域均有較廣泛的應用。由于荷葉具有較好的抗氧化、去脂減肥、降血壓、抑菌等作用，而且來源廣泛、價格低廉，是最有開發(fā)價值的植物之一。但目前荷葉植物資源的利用率很低，每年僅百噸左右應用于食品、醫(yī)藥生產(chǎn)、中草藥煎劑或其它保健品的輔料，剩余大部分荷葉都是作為肥料腐爛在荷田中，荷葉資源沒有得到有效的利用?，F(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，荷葉具有調(diào)血脂、清除自由基、抑菌等作用，毒性極小，其主要的藥理活性成分為黃酮類物質(zhì)。
[0003]CN 101095724 A公開了:一種提取荷葉黃酮的工藝。涉及從荷葉中提取黃酮的制備工藝。采用沉淀-萃取-超濾-大孔吸附樹脂吸附聯(lián)用技術精制荷葉黃酮，濃縮脫醇后沉淀去除了水不溶性雜質(zhì)，石油醚萃取脫除脂溶性雜質(zhì)，超濾膜去除水溶性大分子雜質(zhì)，大孔吸附樹脂選擇性吸附荷葉黃酮，分步洗脫收集不同類型的高純度黃酮，為醫(yī)藥行業(yè)使用提供規(guī)模化生產(chǎn)的提取荷葉黃酮的工藝。
[0004]CN 104844551A公開了:一種同時分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，采用堿性水溶液浸提荷葉后，得到提取液，通過DA-201、D101和DM-301的大孔樹脂組合物對提取液中的荷葉黃酮和多糖進行吸附，先采用水沖洗大孔樹脂柱，將多糖分離，然后采用乙醇溶液沖洗大孔樹脂柱得到荷葉黃酮；本發(fā)明利用荷葉黃酮和多糖的性質(zhì)差異，充分考慮了各種成分提取過程中的相互影響、活性和提取率，采用DA-201、D101和DM-301的大孔樹脂組合物對荷葉黃酮和多糖同時進行提取，具有提取率高、純度高的優(yōu)點；采用大孔樹脂組合物對其進行分離提純，具有工藝簡單、生產(chǎn)成本低、產(chǎn)品質(zhì)量高、生產(chǎn)周期短的優(yōu)點，適合規(guī)?；a(chǎn)。
[0005]CN1923829A公開了:聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法，以荷葉粗提物、膜分離除雜的荷葉提取物或樹脂分離純化的荷葉提取物為原料，加水攪成懸浮液，聚酰胺吸附荷葉黃酮，未被吸附部分經(jīng)減壓回收溶劑真空濃縮成荷葉生物堿；吸附在聚酰胺上的荷葉黃酮用水洗去極性雜質(zhì)和色素并用極性有機溶劑水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)減壓回收溶劑真空濃縮成荷葉黃酮；
[0006]CN 101139320 A公開了:采用酸性親水性有機溶劑提取荷葉堿和荷葉黃酮，提取液回收部分溶劑后，采用陽離子交換樹脂富集純化荷葉堿，殘留的料液進一步采用聚酰胺吸附純化荷葉黃酮。
[0007]CN 104926766A公開了:一種從荷葉中同步提取槲皮素和荷葉堿的方法，荷葉堿不溶于水，類似生物堿也難溶于堿水，而荷葉黃酮溶于熱水，易溶于堿水；先用堿水提取荷葉黃酮后再用高純度甲醇在堿性環(huán)境中提取荷葉生物堿，堿提液幾乎沒有生物堿，醇提液中尚有部分黃酮，醇提液回收醇濃縮后用酸溶解生物堿，黃酮類物不溶于酸，經(jīng)過濾除去生物堿中的黃酮類物質(zhì)，酸水堿化得生物堿沉淀，堿提取液經(jīng)酸沉后過濾得黃酮粗品與醇提部分的酸不溶物(黃酮類)合并處理，將醇提部分的堿化堿水和堿提部分的上清液合并上柱，用D101樹脂吸附，回收廢液中殘留的部分生物堿和黃酮類。
[0008]《高效制備液相色譜法從荷葉中分離制備黃酮類化合物》(《色譜》，2007年1月)公開了::采用高效制備液相色譜法從荷葉(N elum bo nucifera Gaertn)中分離制備荷葉黃酮類化合物。用60%乙醇回流提取荷葉，粗提液濃縮后經(jīng)D-101柱及聚酰胺柱色譜分離，再在Symmetry PrepTM C18柱上分離，以水-乙腈為流動相進行梯度洗脫(流速為5.0mL/min)，得到了 3種黃酮類化合物。經(jīng)紫外光譜、紅外光譜、核磁共振及質(zhì)譜分析，確定該3種物質(zhì)分別為金絲桃苷、異槲皮苷和紫云英苷。所制備的3種化合物的純度都在97%以上，其中紫云英苷為首次從荷葉中分離得到。
[0009]《AB-8大孔樹脂純化荷葉總黃酮的工藝研究》(《中國食品添加劑》)公開了:濃度為2.0mg/mL的荷葉黃酮提取液100mL通過AB-8大孔樹脂的吸附柱，間隔10mL收集黃酮殘液，:當樹脂徑高比1: 10 ;吸附流速3BV/h ;上樣液pH值5.0 ;上樣液濃度在2.0mg/mL ;使用3BV用量90%的乙醇作為洗脫劑；解析流速為1.5BV/h時，荷葉黃酮純度為53.44%。
[0010]《荷葉黃酮提取、分離純化及其抗氧化活性的研究》(安徽工程大學碩士論文，2014年)公開了:采用水提法從荷葉中提取粗黃酮，用半制備HPLC對經(jīng)AB-8大孔樹脂初步純化后的荷葉黃酮進行分離分析，建立了荷葉黃酮高效分離及測定的最佳色譜分析條件:色譜柱為Waters C18反相柱(150mmx〗0mm 1.D.，5fim)，流動相A:乙腈(色譜純)，流動相B:超純水(含0.1 %甲酸)，進樣量為600pL，流速為3mL/min，柱溫為30°C，檢測波長為254mn，梯度洗脫條件為:0-20min，5% A95% B-40% A60% B。分析所得到的五種荷葉黃酮單體為槲皮素-3-0-桑布二糖苷、金絲桃苷、槲皮素-3-0-葡萄糖醛酸、異槲皮苷和槲皮素。
[0011]目前有關荷葉總黃酮的研究報道較多，但具體成分不明確，為此，需要建立一種簡便、經(jīng)濟的方法來得到成分明確的荷葉黃酮粉末，為進一步制備得到高純度的單體化合物提供原料。專門針對荷葉中槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的分離純化工藝未見任何相關專利和文獻報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明涉及:
[0013]—種荷葉黃酮的組合物，組合物中黃酮的重量含量為40-98%。
[0014]—種荷葉黃酮的組合物，組合物中黃酮的重量含量為40-98%，組合物中槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為30-65%。
[0015]—種荷葉黃酮的組合物，組合物中黃酮的重量含量為65-70%。
[0016]—種荷葉黃酮的組合物，組合物中黃酮的重量含量為65-70%，組合物中槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為60-65%。
[0017]5、一種荷葉黃酮的組合物，組合物中黃酮的重量含量為90-98%。
[0018]—種荷葉黃酮的組合物，組合物中黃酮的重量含量為90-98%，組合物中槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為81-96%。
[0019]—種荷葉黃酮的組合物，組合物中槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為 90-98%。
[0020]一種荷葉黃酮的組合物，
[0021]荷葉黃酮的組合物經(jīng)HPLC液相分析，22-23min出現(xiàn)主峰槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷，HPLC液相分析的條件是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.4-1.0mL/min,
[0022]流動相為:乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-7K、甲醇-水四種流動相；
[0023]流動相優(yōu)選為:乙臆_水:20_80體積比等度洗脫。
[0024]—種荷葉黃酮的組合物，
[0025]荷葉黃酮的組合物經(jīng)HPLC液相分析，22-23min出現(xiàn)主峰槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷，23-24min出現(xiàn)另一色譜峰；主峰與另一色譜峰的峰面積之比為12: 1 ;HPLC液相分析的條件是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.4-1.0mL/min，
[0026]流動相為:乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-7K、甲醇-水四種流動相；
[0027]流動相優(yōu)選為:乙臆_水:20_80體積比等度洗脫。
[0028]—種荷葉黃酮的組合物的提取方法，
[0029](1)將荷葉在60°C以下烘干、粉碎后制備得到荷葉粗粉；
[0030](2)在荷葉粗粉中加入30-80 %的乙醇溶液進行熱回流提取，提取溫度為60-95°C，提取料液比以質(zhì)量與體積之比計為1: 10-1: 50，提取時間2-4h，重復浸提2-4次，提取液濃縮干燥后得到黃酮重量含量為3-5%的提取物；上述提取物采用蒸餾水溶解，混懸液進一步采用大孔吸附樹脂純化；
[0031](3)采用8-12倍柱床體積的蒸餾水和15-25%乙醇洗脫，除去多糖、蛋白等水溶性雜質(zhì)；
[0032](4)米用30_40%乙醇對大孔樹脂洗脫；
[0033](5)將30-40%乙醇洗脫液經(jīng)濃縮、干燥、粉碎、混合均勻，得到提取物，提取物中槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為提取物的60-65% ;
[0034](6)上述粉末經(jīng)蒸餾水溶解，離心后用制備型高效液相色譜儀進行分離制備，以乙腈-水為流動相，流速為10-30mL/min，揮干溶劑、真空干燥，得到組合物，組合物中黃酮的重量含量為90-98%，組合物中槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為81-96%。
[0035]—種荷葉黃酮的組合物的提取方法，
[0036](1)將荷葉在60°C以下烘干、粉碎后制備得到荷葉粗粉；
[0037](2)在荷葉粗粉中加入30-80 %的乙醇溶液進行熱回流提取，提取溫度為60-95°C，提取料液比以質(zhì)量與體積之比計為1: 10-1: 50，提取時間2-4h，重復浸提2-4次，提取液濃縮干燥后得到黃酮重量含量為3-5%的提取物；上述提取物采用蒸餾水溶解，混懸液進一步采用大孔吸附樹脂純化。
[0038](3)采用8-12倍柱床體積的蒸餾水和15-25%乙醇洗脫，除去多糖、蛋白等水溶性雜質(zhì)；
[0039](4)米用30-40%乙醇對大孔樹脂洗脫；
[0040](5)將30-40%乙醇洗脫液經(jīng)濃縮、干燥、粉碎、混合均勻，得到提取