時，在第一次注射劑量后還可W再次施用較大劑量的 抗癌組合物。例如，第一次施用5-lOml灌注劑量。然后，緩慢地施用第二份20-50ml的相 同組合物，例如給藥時間為約20-40分鐘。如果需要還可W再次給藥。例如，可W再次應(yīng)用 送種治療，如每周或每月給藥一次。當腫瘤為5到lOg時，在第一次注射劑量后還可W再次 施用較大劑量的抗癌組合物。例如，第一次施用10-20ml灌注劑量。然后，緩慢地施用第二 份20-50ml的相同組合物，例如給藥時間為20-40分鐘。如果需要還可W再次給藥。例如， 可W再次應(yīng)用送種治療，如每周或每月給藥一次。對于大于15g的腫瘤，第一次給藥的灌注 劑量可W至多為50-80ml，隨后可W應(yīng)用更大的劑量。
[0039] 在某些實施方案中，上述藥物W注射、灌注或植入的方式給藥，任選地，藥物可W 口服或靜脈給藥，也可W經(jīng)動脈、體腔、瘤腔、瘤內(nèi)給藥，例如動脈注射、體腔注射等。
[0040] 在優(yōu)選的實施方案中，所述藥物經(jīng)局部給藥。將此組合物局部應(yīng)用于乳腺或乳腺 癌內(nèi)。局部給藥包括將藥物應(yīng)用于乳腺和/或癌細胞或腫瘤內(nèi)或其附近，優(yōu)選為腫瘤內(nèi)。 局部給藥還包括用藥物包圍乳腺和/或癌性腫瘤或?qū)⑺幬飸?yīng)用于乳腺和/或癌性腫瘤的表 面。例如，局部應(yīng)用治療有效量的腸胃外組合物的水溶液來治療乳腺癌。優(yōu)選地，該量足W 降解乳腺腫瘤，治愈或減輕乳腺癌。在一實施方案中，將藥物通過直接的乳腺內(nèi)注射或灌注 給藥于癌癥局部。例如，小容量如約5-lOml或更少的藥物通過注射給藥。而較大的容量如 5mlW上的藥物則通過緩慢灌注約10-40分鐘給藥。
[0041] 在優(yōu)選的實施方案中，所述藥物經(jīng)乳腺內(nèi)注射、乳腺癌內(nèi)或癌周注射、或乳腺癌 手術(shù)后瘤腔內(nèi)注射給藥，優(yōu)選地經(jīng)乳腺癌內(nèi)注射給藥。例如，注射的組合物的量通常為 l-80ml。在另一實施方案中，所述藥物經(jīng)乳腺內(nèi)植入、乳腺癌內(nèi)或癌周植入、或乳腺癌手術(shù) 后瘤腔內(nèi)植入給藥，優(yōu)選地經(jīng)乳腺癌內(nèi)植入給藥。
[0042] 可選地，為了在原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腫瘤所在部位獲得有效濃度，藥物組合物可W經(jīng) 多種途徑聯(lián)合給藥，如選擇靜脈、淋己管、皮下、肌肉、腔內(nèi)（如腹腔、胸腔、關(guān)節(jié)腔內(nèi)及椎管 內(nèi)）或動脈注射的同時結(jié)合局部給藥，局部給藥可選擇局部注射或局部植入。送種多途徑 聯(lián)合給藥特別適用于實體腫瘤的治療。最優(yōu)選的方案是瘤內(nèi)、瘤周注射的同時結(jié)合全身注 射。
[0043] 可W選用其他的方式例如利用不同的藥物載體將組合物遞送到祀部位。通常，合 適的載體將治療劑遞送到其祀點而不會喪失特異性或反應(yīng)性。優(yōu)選地，載體能與膠原酶II 連接且可保持復(fù)合物狀態(tài)直到遞送完成。優(yōu)選地，載體應(yīng)避免觸發(fā)導(dǎo)致本發(fā)明組合物生物 降解或失活?？蒞應(yīng)用緩釋組合物，例如可W用緩釋植入法提供送種制劑，或W微膠囊或吸 附于生物可降解聚合物提供送種制劑。在其他實施方案中，可W將抗體應(yīng)用于本發(fā)明的膠 原酶II脂質(zhì)體載體系統(tǒng)，如人-鼠（嵌合的）單克隆抗體，W實現(xiàn)對祀部位的特異性定位。 還可W將膠原酶II包埋在組蛋白、血紅細胞（RBC)空胞（曲ost)、聚乳酸和其它生物可降解 膜或合成的微膠囊，W增加和維持溶解的蛋白酶在乳腺組織中的定向、定位和活性。
[0044] 另一方面，提供了用本發(fā)明的組合物治療乳腺癌的方法，該方法包括給予患病個 體治療有效量的抗癌活性成分。優(yōu)選地，所述抗癌活性成分包含膠原酶II或者膠原酶II與 其他基質(zhì)金屬蛋白酶的組合。所述治療有效量是指能緩解、治愈、抑制或防止乳腺癌或者預(yù) 防或減輕乳腺癌擴散的量。
[0045] 在優(yōu)選的實施方案中，上述抗癌組合物包含的抗癌有效成分選自膠原酶II或者膠 原酶II與其他基質(zhì)金屬蛋白酶的組合。在更優(yōu)選的實施方案中，抗癌組合物中的有效成分 為膠原酶II。
[0046] 在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗癌有效成分、優(yōu)選為膠原酶II的給藥劑量為每 千克個體體重給予0. 01到5, 000, 000U，優(yōu)選為1到500, 000U，更優(yōu)選為10-100, 000U。 在更優(yōu)選的實施方案中，膠原酶II的給藥劑量為10-50,000U/kg體重，例如為10-4, 000U/ kg體重。組合物中膠原酶的濃度可W為方便配制而定，可W為任意的。
[0047]按接受治療的個體的情況，用于治療乳腺癌組合物的體積例如可W為0.001ml到100ml，優(yōu)選地含有1-500,OOOU/ml膠原酶II，優(yōu)選為10-50,OOOU/ml，更優(yōu)選為 200-10,000U/ml。在一實施方案中，藥物組合物含有10,000U/ml膠原酶II，用于治療小 白鼠乳腺癌，每周瘤內(nèi)注射一次，每次5ml，共3次。在另一實施方案中，藥物組合物含有 5,OOOU/ml膠原酶II，用于治療小白鼠乳腺癌，每3天瘤內(nèi)注射一次，每次3ml，共3次。送 些劑量范圍表示估計能有效治療乳腺癌的組合物各成分的量。但組合物的劑量可W按患者 的年齡、腫瘤部位和大小、組合物的效力及給藥途徑等變化。用于治療乳腺癌的組合物可W 每天、每周或每月注射。
[0048] 對于轉(zhuǎn)移的乳腺癌，可W通過影像學檢測到的或可用手觸及到的病變均可按照原 發(fā)灶一樣處理，可W多點注射或先后不同點處理。
[0049] 本發(fā)明抗癌組合物中的有效成分較單一，療效易于控制和確認；不良反應(yīng)少。在一 些實施方案中，抗癌有效成分W相當?shù)偷膭┝烤湍軌蛉〉妹黠@的抗癌功效，例如給藥劑量 為10U-900U/kg個體體重的膠原酶II能夠W劑量依賴性方式顯著抑制乳腺腫瘤的生長。
[0050] 本申請所述的"個體"，是指哺乳動物，包括但不限于靈長類動物、牛、馬、豬、綿羊、 山羊、狗、貓W及諸如大鼠和小鼠的喃齒類動物。
[0051] 本文中，有效成分、活性成分W及活性組分可W交替使用，除非另有所指。本文中 的膠原酶II也可W與MMP-8互換使用。
[0052] 本說明書和權(quán)利要求書中，詞語"包括"、"包含"和"含有"意指"包括但不限于"， 且并非意圖排除其他部分、添加物、組分、或步驟。
[0053] 應(yīng)該理解，在本發(fā)明的特定方面、實施方案或?qū)嵤├忻枋龅奶卣?、特性、組分或 步驟，可適用于本文所描述的任何其他的方面、實施方案或?qū)嵤├桥c之矛盾。
[0054] 上述公開內(nèi)容總體上描述了本發(fā)明，通過下面的實施例進一步示例本發(fā)明。描述 送些實施例僅為說明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的范圍。盡管本文中使用了特殊的術(shù)語和 值，送些術(shù)語和值同樣被理解為示例性的，并不限定本發(fā)明的范圍。除非特別指明，本說明 書中的實驗方法和技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法和技術(shù)。
[00財 實施例
[0056] W下實施例中使用的實驗動物為體重20-26g的雄性昆明小鼠，購自山東魯抗醫(yī) 藥集團中必實驗動物室。注射的乳腺癌瘤細胞由山東省醫(yī)學科學院提供。實驗中使用的膠 原酶II、MMP-12 W及MMP-7購自Life Technologies公司。
[0057] 腫瘤體積的測量方法：用游標卡尺分別測量腫瘤的長徑和短徑，腫瘤體積的計算 公式為；V=(長徑*短徑2)/2。
[0058] 統(tǒng)計學方法；結(jié)果W均值+標準誤表示。兩組數(shù)據(jù)間采用t-檢驗分析，多組結(jié)果 比較采用單因素方差分析化key檢驗俯le-way AN0VA化key's test)進行分析，P<0. 05為 差異有顯著性。
[0059] 實施例1不同劑量的膠原酶體內(nèi)抑瘤效果比較
[0060] 將2xl05個乳腺癌瘤細胞經(jīng)皮下注射于小白鼠的季肋部，待腫瘤生長7天后將其 分為W下10組（每組6只，見表1)。第1組為對照組，第2-4組為MMP-8 (即膠原酶II)治 療組，第5-7組為MMP-12治療組，第8-10組為MMP-7治療組。藥物經(jīng)瘤內(nèi)注射，劑量按公 斤體重（mg/kg)計算（具體劑量見表1)。每天給藥一次，共3次。治療后第15天測量腫 瘤體積大小，比較各組的治療效果（參見表1)。所用膠原酶II(MMP-8)的活力為342U/mg， MMP-12的活力為180U/mg，MMP-7的活力為18抓/mg。其他實施