酶II所導(dǎo)致的 MMPs家族成員間的平衡失調(diào)可能對于治療乳腺癌發(fā)揮重要作用。因此，選擇性維護(hù)MMPs家 族成員間的平衡和破壞其已有的平衡對有效預(yù)防和治療乳腺癌及其它腫瘤將會發(fā)揮潛在 作用。本發(fā)明應(yīng)用的外源性膠原酶II可能在體內(nèi)的其它蛋白水解酶存在的情況下，降解膠 原或結(jié)締組織、腫瘤血管和/或腫瘤細(xì)胞基膜，通過對間質(zhì)的水解作用使腫瘤生長失去支 撐和必要的營養(yǎng)。結(jié)果，腫瘤的供血減少或停止，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。膠原酶II降解蛋白多 糖、降解基質(zhì)膠原的過程W及降解產(chǎn)物不僅能夠直接限制腫瘤細(xì)胞生長，其可能觸發(fā)的抗 腫瘤免疫反應(yīng)也可能發(fā)揮一定的抗腫瘤作用，因?yàn)樽钚碌难芯勘砻髂z原酶II能夠?qū)е掳捉?素6和8等炎癥因子的激活。因此認(rèn)為外源性膠原酶II可能會導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)向腫瘤進(jìn) 一步的攻擊，有助于減輕或防止乳腺癌的發(fā)展和擴(kuò)散。除此之外，高濃度的膠原酶II對腫瘤 細(xì)胞本身也可能具有直接抑制作用。
[0024]本申請所述的"藥學(xué)上可接受的載體"指不干擾活性成分的生物活性有效性的載 體。本申請的藥學(xué)上可接受的載體可W為固體或液體，包括藥學(xué)上可接受的賦形劑、緩沖 劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、稀釋劑、封裝劑、填充劑等。例如，藥學(xué)上可接受的緩沖劑進(jìn)一 步包括磯酸鹽、醋酸鹽、巧樣酸鹽、測酸鹽W及碳酸鹽等。
[00巧]本申請的藥物組合物可W呈現(xiàn)為單位劑量形式，并且可W通過任一制藥領(lǐng)域公知 的方法制備。所有方法都包括將本申請的活性成分與一種或幾種藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合 的步驟。通常，通過將活性成分與液體載體、固體載體或二者結(jié)合來制備組合物，隨后根據(jù) 需要來定型制備的產(chǎn)物。例如，適于胃腸外給藥的組合物可W是包含活性組分的無菌水性 或非水性制劑?？蒞根據(jù)已知的方法，使用合適的分散劑或濕潤劑W及懸浮劑制備上述制 劑。在可接受的載體或溶劑中，可W使用水、林格氏液W及等滲的氯化鋼溶液等。
[0026] 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的抗癌組合物被配制成藥學(xué)上或臨床上可接受 的多種劑型，包括但不限于注射劑、片劑、膠囊、軟膏、噴霧劑、貼劑、緩釋劑、植入劑等。在 優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述劑型為緩釋劑。更優(yōu)選地，配制的劑型為緩釋植入劑。緩釋劑、植 入劑、緩釋劑植入劑的制備可參考已公開的專利（CN200610201195. 1、CN200610201190. 9、CN200610201201. 3.CN200610201187. 7.CN200610201182. 4.CN200610201186. 2. CN200610201184. 3.CN200610201180. 5.CN200610201173. 5.CN200610201343.X. CN200810304640. 6)。此外，已發(fā)現(xiàn)靜脈內(nèi)注射膠原酶對試驗(yàn)動(dòng)物的危害極小。大鼠急性靜 脈注射的LD-50可達(dá)1200U/kg。對小鼠而言，靜脈注射的LD-50為400mg/kg體重。已有研 究表明，膠原酶的口服水溶液在劑量高到10,OOOmg/kg體重時(shí)仍無毒性。
[0027] 本發(fā)明的"注射劑"是指由藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液（包括乳濁液和混懸液） W及供臨用前配成溶液或混懸液的粉末或溶液。所述注射劑包括但不限于水溶液注射劑、 微球注射劑、凝膠型注射劑、脂質(zhì)體注射劑、納米粒注射劑、儲庫型控釋注射劑、無針注射釋 藥系統(tǒng)等。
[0028]本發(fā)明的"植入劑"一般指將藥物與輔料制成的小塊狀或條狀供植入體內(nèi)的無菌 固體制劑。植入劑可采用特制的注射器植入，也可用手術(shù)切開植入。本發(fā)明的植入劑還包 括W液體形式注射于人體、在生理?xiàng)l件下轉(zhuǎn)變?yōu)楣腆w或半固體藥物膽庫的植入劑形式，即 注射型原位形成植入劑（inject油leinsi1:uformingimplants)。
[0029] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將本發(fā)明的抗癌組合物制備成局部應(yīng)用的水溶液。可選地， 也可W將本發(fā)明的抗癌組合物先冷凍干燥，置于安剖瓶中，臨用前將其配制成適用于注射 的藥學(xué)上可接受的水溶液，優(yōu)選含有1-500,OOOU/ml膠原酶II，更優(yōu)選10-50,OOOU/ml，進(jìn) 一步優(yōu)選含有200-10,OOOU/ml的膠原酶II。
[0030] 在一實(shí)施方案中，將冷凍干燥的膠原酶II用生理鹽水溶解配制，所得溶液的濃度 為 1-500,OOOU/ml,優(yōu)選 10-50,OOOU/ml,更優(yōu)選 200-10,OOOU/ml。當(dāng)在 4°CW冷凍干燥保 存時(shí)，酶是穩(wěn)定的。在開啟前將裝有冷凍干燥酶的冷小管升溫至室溫。一般將重新溶解的 酶溶液避光存儲于2-8°C，當(dāng)在工作臺進(jìn)行操作使將它們置于冰浴中?？蒞按照本領(lǐng)域已知 的方法來配制本發(fā)明的組合物。
[0031] 優(yōu)選地，用新鮮蒸傭的去離子無菌水制備用于可注射用溶液的緩沖液。可W使用 任何合適的緩沖溶液如磯酸緩沖液、Ringers緩沖液或Tris緩沖液來配制抗癌組合物。優(yōu) 選的緩沖液的抑為生理抑，范圍約為6. 4到7. 6,優(yōu)選為6. 8-7. 2。例如，可W使用濃度為 約0. 1-0. 3mol/L、優(yōu)選0. 15-0. 25mol/L的氯化鋼來溶解或稀釋組合物。再例如，使用巧樣 酸鹽緩沖液，其濃度為0. 01-0. 2mol/l，優(yōu)選為0. 05-0. 15mol/Lo
[0032] 本發(fā)明所用的膠原酶II可W自制，也可W商購。膠原酶II可W是重組的蛋白，也可 W是從人及動(dòng)物組織細(xì)胞分離純化的。由于潛在的免疫問題，膠原酶II優(yōu)選是人類的酶或 由重組方法產(chǎn)生的酶。在一實(shí)施方案中，膠原酶II從LifeTechnologies公司購得，冷凍干 燥的膠原酶II的酶活力為342-784U/mg，用無熱原的鹽水重新溶解至所需的濃度。所有酶的 活性都W每mg國際單位表示。一個(gè)單位膠原酶活性的可W定義為在巧離子存在時(shí)，在溫度 為37°CW及抑為7. 4的條件下，5小時(shí)內(nèi)能從天然膠原釋放膚（相當(dāng)于巧Η麗顏色）成1 微摩爾k亮氨酸的膠原酶量?？蒞按本領(lǐng)域已知的方法確定膠原酶II和其它酶的活性。
[0033] 另一方面，提供了上述組合物在治療乳腺癌中的用途。
[0034] 本文所用的"治療"包括抑制、治愈和減輕乳腺癌或其癥狀和預(yù)防或延緩乳腺癌的 轉(zhuǎn)移。
[0035] 另一方面，提供了本發(fā)明的組合物在制備用于治療乳腺癌的藥物中的用途。在優(yōu) 選的實(shí)施方案中，所述藥物的有效成分選自膠原酶II或者膠原酶II與其他基質(zhì)金屬蛋白酶 的組合，優(yōu)選地，所述其他基質(zhì)金屬蛋白酶選自MMP-1、MMP-12或其組合。
[0036] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗癌有效成分、優(yōu)選為膠原酶II的給藥劑量為每 千克個(gè)體體重給予0. 01到-5, 000, 000U，優(yōu)選為1到500, 000U，更優(yōu)選為10到100, 000 U，最優(yōu)選為10到50, 000U，例如為10-4, 000U。膠原酶II的劑量在實(shí)際應(yīng)用時(shí)可W按照醫(yī) 生的要求選用。
[0037] 給藥劑量隨患者的年齡、病癥的特性、腫瘤大小、給藥部位、給藥途徑及組合物 的效力等變化。如上所述，按患者體重計(jì)算，給藥劑量可為0. 01-5, 000,OOOU/kg，優(yōu)選 l-500,000U/kg，更優(yōu)選10-100,000U/kg。組合物中膠原酶II的濃度可為任意的，選自 1-500,OOOU/ml，優(yōu)選10-50,OOOU/ml，更優(yōu)選200-10,OOOU/ml。組合物的給藥體積可W為 0. 001到100ml，優(yōu)選0. 01至IJ50ml，更優(yōu)選為0. 02到40ml。根據(jù)實(shí)際需要，組合物可一次 性給藥，也可分次給藥。例如，瘤內(nèi)注射可W第一次給藥0.01-0. 1ml,W后每天或每周注 射。
[0038] 為了確定合適的劑量，先確定腫瘤的尺寸，因?yàn)檩^大的腫瘤可能需要應(yīng)用較高濃 度的本發(fā)明的組合物。例如，對小于Ig的腫瘤，可W應(yīng)用單次灌輸?shù)膭┝俊９噍攧┝靠蒞為 0. 01-5ml，優(yōu)選地含有10-500,OOOU/ml的膠原酶II。緩慢地將藥物注射入腫瘤，如約10-40 分鐘。如果需要，在此注射后還可進(jìn)行再次注射。例如，在1周或1個(gè)月內(nèi)，也可重復(fù)應(yīng)用 如每周或每月一次。當(dāng)腫瘤為3到5g