刺五加甙e作為腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種刺五加甙E的醫(yī)藥新用途，具體涉及刺五加甙E在制備腫瘤多藥 耐藥逆轉(zhuǎn)劑、聯(lián)合抗腫瘤藥物應(yīng)用于多藥耐藥性腫瘤的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是危害人類健康重大疾病之一，化療是治療腫瘤的主要手段。然而在腫瘤 的化療過程中人們發(fā)現(xiàn)化療藥物會出現(xiàn)耐藥性，而且往往是多藥耐藥（multipledrug resistance，MDR)，這已成為腫瘤治療失敗最常見又難以解決的問題。因此，尋找高效、低毒 的逆轉(zhuǎn)劑在抗腫瘤藥物開發(fā)中有重要意義。
[0003] 刺五加甙E是我國傳統(tǒng)中藥刺五加的重要成分之一，來源十分廣泛，并且具有多 種生物活性，例如抗疲勞、抗輻射、抗應(yīng)激、耐缺氧、提高機(jī)體對溫度變化的適應(yīng)力、解毒作 用、抗心律失常、改善大腦供血量、調(diào)節(jié)血壓、止咳、祛痰、抗炎、抗菌和抗病毒等作用。近期 還發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤作用，但是其對多藥耐藥性腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用尚未有報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供刺五加甙E新的藥物用途。
[0005] 中藥刺五加的重要成分之一刺五加戒E，分子式為C35H4S016，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0006]
[0007] 其特征在于，其作為腫瘤多藥耐藥性逆轉(zhuǎn)劑的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明所提供的刺五加甙E不但具有殺滅腫瘤細(xì)胞的作用，而且能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì) 胞多藥耐藥性。可作為腫瘤化療藥物的增效劑，從而提高多耐藥性腫瘤細(xì)胞對化療藥物的 敏感性，提高化療藥物的殺癌細(xì)胞效應(yīng)，應(yīng)用前景廣泛。
【附圖說明】
[0009] 圖1刺五加甙E對多藥耐藥性細(xì)胞MCF-7/ADM的逆轉(zhuǎn)作用；
[0010] 圖2刺五加甙E對MCF-7/ADM細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積量的影響；
[0011] 圖3刺五加甙E對MCF-7/ADM細(xì)胞內(nèi)耐藥基因MDR1表達(dá)的影響。
【具體實施方式】
[0012] 實施案例1 :刺五加甙E對多藥耐藥性人乳腺癌細(xì)胞MCF-7/ADM的逆轉(zhuǎn)作用
[0013] 將對數(shù)生長期的MCF-7/ADM細(xì)胞接種于96孔板中，接種密度約為每孔5000個細(xì) 胞。培養(yǎng)24h后，分組加入藥物，一組加入10μΜ刺五加甙E和0-50μΜ的阿霉素；另一組 加入0-50μΜ的阿霉素，繼續(xù)培養(yǎng)48h。培養(yǎng)結(jié)束后每孔加入5g噸1的ΜΤΤ溶液20μL，繼 續(xù)培育4h。吸去培養(yǎng)基，每孔加入150μL的DMS0,振蕩，混勻1。用酶標(biāo)儀在492nm處測定 各孔0D值，記錄結(jié)果。以細(xì)胞存活率對劑量作圖求IC5。值。
[0014] 實驗結(jié)果如圖1所示，MCF-7/ADM細(xì)胞經(jīng)過10μΜ刺五加甙E處理之后，該細(xì)胞株 對化療藥物阿霉素的IC5。值從34. 7μΜ降低到6. 3μΜ，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為約5. 5倍。說明刺五加 甙Ε具有提高阿霉素對耐藥人乳腺癌細(xì)胞MCF-7/ADM的細(xì)胞毒性作用，即可逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞 的多藥耐藥性。
[0015] 實施案例2 :刺五加甙Ε對MCF-7/ADM細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積量的影響
[0016] 將對數(shù)生長期的MCF-7和MCF-7/ADM細(xì)胞接種于6孔板中，接種密度約為1.ΟΧ105 個細(xì)胞/ml，孵育24小時。對照組加入10μΜ的阿霉素，其他各組分別加入10μΜ的阿霉素 和10μΜ的刺五加甙Ε，繼續(xù)培養(yǎng)3小時。離心細(xì)胞，PBS洗滌3次，加入0. 5ΜHC1-50%乙 醇溶液，破碎細(xì)胞，12000r/min離心，取上清，用熒光分光光度計在470/590nm處測熒光強(qiáng) 度，計算阿霉素含量。
[0017] 實驗結(jié)果表明（圖2)，刺五加甙E可顯著影響阿霉素在MCF-7/ADM細(xì)胞內(nèi)的蓄積 量。加入10μΜ的刺五加甙E后，使得細(xì)胞內(nèi)阿霉素的蓄積量提高了 2. 3倍。結(jié)果說明刺 五加甙Ε是通過增加抗腫瘤藥物的在細(xì)胞內(nèi)的蓄積量而實現(xiàn)逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性 的作用。
[0018] 實施案例3 :刺五加甙Ε對多藥耐藥基因MDR1表達(dá)水平的影響
[0019] 將對數(shù)生長期的MCF-7/ADM細(xì)胞接種到6孔板中，密度為4Χ105個細(xì)胞/孔，培 養(yǎng)24小時后分別加入10、20μΜ的刺五加甙Ε，繼續(xù)培養(yǎng)48小時。PBS洗滌3次，收集細(xì) 胞，提取總RNA，收集進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。B-actin引物：5' -GTTGCTATCCAGGCTGTGC-3'，5'-GCATC CTGTCGGCAATGC-3' ；MDR1引物：MDR1-F為5' -CATCGAGTCACTGCCTAATAAATA-3'，MDR1-R為 5' -GCTTCTTGGACAACCTTTTCACT-3'。反應(yīng)條件：94°C預(yù)變性3min;94°C30s, 60°C退火30s， 72°C延伸lmin，30個循環(huán)。B-actin為內(nèi)參對PCR產(chǎn)物凝膠電泳。凝膠電泳結(jié)束后成像，分 析結(jié)果。
[0020] 實驗結(jié)果如圖3所示，與空白對照相比，在加入不同濃度的刺五加甙E后，MCF-7/ ADM細(xì)胞內(nèi)的MDR1表達(dá)量明顯下調(diào)，并呈劑量相關(guān)性。結(jié)果說明刺五加甙E逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞 的多藥耐藥性的作用可能是通過抑制多藥耐藥基因MDR1的表達(dá)來實現(xiàn)的。
【主權(quán)項】
1. 一種刺五加戒E，分子式為C35H4S016，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：其作為腫瘤多藥耐藥性逆轉(zhuǎn)劑的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了刺五加甙E作為腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的用途<b>,</b>屬于醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域。涉及刺五加甙E的醫(yī)藥新用途，具體涉及刺五加甙E制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑、聯(lián)合抗腫瘤藥物應(yīng)用于多藥耐藥性腫瘤的新用途。
【IPC分類】A61P35/00, A61K31/7048
【公開號】CN105250321
【申請?zhí)枴緾N201510662861
【發(fā)明人】李俊, 李增, 孟曉明, 劉晨, 黃成 , 張磊, 徐濤
【申請人】安徽醫(yī)科大學(xué)
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年10月12日