一種透明質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅復(fù)合物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種透明質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅復(fù)合物及其制備方 法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，納米材料作為一種安全、高效的藥用載體，在腫瘤的治療中表現(xiàn)出廣闊的發(fā) 展空間，作為載體材料，應(yīng)具有粒徑小，毒性低，生物相容性好，性能穩(wěn)定等特點(diǎn)。中空介孔 硫化銅具有獨(dú)特的籠狀結(jié)構(gòu)，載藥能力突出，且粒徑小，物化性質(zhì)穩(wěn)定，對生物體毒性小，通 過對其修飾一些基團(tuán)來增強(qiáng)其水溶性及靶向性，有利于載體在生物體內(nèi)隨著血液流動，到 達(dá)腫瘤部位，減小對正常組織的損害，提高治療效果。
[0003] 硫化銅納米粒作為一種新的光熱轉(zhuǎn)換材料，具有很強(qiáng)的近紅外吸收，這是由于Cu2+ 間的d -d能級之間的躍迀和銅硫族納米顆粒的SPR效應(yīng)共同作用的結(jié)果，其吸收峰不會隨 著離子的形狀和大小改變，具有良好的光熱穩(wěn)定性和較高的光熱轉(zhuǎn)換效率，在腫瘤治療方 面具有很大的潛能。并且硫化銅納米粒子有較低的生物毒性，能夠被生物體所降解，因此作 為光熱轉(zhuǎn)換材料在腫瘤治療方面獲得了廣泛的關(guān)注。硫化銅納米粒在近紅外光下可以產(chǎn)生 活性氧進(jìn)行光動力學(xué)治療，硫化銅納米粒子在近紅外的照射下，其內(nèi)部會發(fā)生振動，可以用 于光聲成像，對腫瘤部位進(jìn)行診斷治療。通過將熱療、化療、光聲成像結(jié)合起來可有效降低 副作用，并增強(qiáng)腫瘤治療效果。
[0004] 盡管硫化銅是一種極具潛力的光熱化療載體材料，但要實(shí)現(xiàn)其在制備腫瘤治療藥 物中的應(yīng)用，仍面臨諸多挑戰(zhàn)，如：水分散性性差，腫瘤細(xì)胞靶向性低等，難以實(shí)現(xiàn)藥物的靶 向轉(zhuǎn)運(yùn)及高效、低毒的光熱聯(lián)合化療。因此，如何制備一種透明質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅 復(fù)合物，以實(shí)現(xiàn)在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，是需要認(rèn)真解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種透明質(zhì)酸修 飾的中空介孔硫化銅復(fù)合物及其制備方法與應(yīng)用，可有效解決硫化銅水溶性弱，靶向性差， 生物相容性低的問題。
[0006] 本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，中空介孔硫化銅納米顆粒鍵合在硫化銅納米粒的表 面，連接上巰基乙胺，通過酰胺鍵反應(yīng)修飾上透明質(zhì)酸，成透明質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅 復(fù)合物，粒徑為50-250nm，透明質(zhì)酸和中空介孔硫化銅的質(zhì)量比為1-3 : 3,所述透明質(zhì)酸 分子量為40-400kDa。由以下步驟實(shí)現(xiàn)：
[0007] (1)、將0?7-0. 8g 的 CuS04 *51120 溶解于 180-220ml 水中，攪拌，加入 5. 5-6. 5g 聚乙 烯吡咯烷酮，室溫反應(yīng)10~20min，加入1. 1-1. 3g氫氧化鈉，攪拌均勻，滴加10-14ml水合 肼，攪拌5~lOmin，再加入1. 2-1. 4ml硫酸按，攪拌lh，用超純水在15000rpm離心5-10min， 水洗至中性，冷凍干燥46-50h，成中空介孔硫化銅納米顆粒；
[0008](2)、將中空介孔硫化銅納米粒180-220mg加入180-220ml超純水，超聲分散10~ 30min，再在攪拌下加入360-440mg疏基乙胺，攪拌24h，15000rpm離心5-10min得沉淀，沉 淀用超純水復(fù)溶，再15000rpm離心5-10min，得沉淀，沉淀再用超純水復(fù)溶，如此重復(fù)2~3 遍，直至中性，冷凍干燥，得氨基化中空介孔硫化銅復(fù)合物（CuS-NH 2);
[0009] (3)、將750-850mg透明質(zhì)酸加入pH7~9的磷酸鹽緩沖液46-54ml中，攪拌溶解， 加入2-2. lg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺、1. 2-1. 3g羥基琥珀酰亞胺為活化 劑，室溫攪拌30min，成活化的透明質(zhì)酸；
[0010] (4)、在冰浴下，將步驟（2)制備的氨基化中空介孔硫化銅復(fù)合物（CuS-NH2)用pH =7~9的磷酸鹽緩沖液分散，得分散液，將活化的透明質(zhì)酸緩慢加入分散液中，升至室溫， 反應(yīng)3h，15000rpm離心5-1 Omin得沉淀，沉淀加水分散，在水中透析2d，冷凍干燥，即得透明 質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅復(fù)合物（HA-CuS)。
[0011] 本發(fā)明選擇具有良好生物相容性、腫瘤細(xì)胞靶向性的天然多糖一一透明質(zhì)酸 (hyaluronic acid, HA)，對硫化銅納米粒進(jìn)行修飾，構(gòu)建了一種新型光熱治療聯(lián)合化療的 納米載體。該載體的合成工藝簡單，并將硫化銅顯著的光熱敏感性、強(qiáng)大的藥物負(fù)載特性， 透明質(zhì)酸獨(dú)特的腫瘤細(xì)胞靶向性、輔助的抗腫瘤活性、良好的生物相容性有機(jī)的整合于一 體，加之可以物理負(fù)載具有抗腫瘤活性的化療藥物，既可克服傳統(tǒng)光熱療、化療技術(shù)的非靶 向性難題，降低治療過程中對正常組織的損傷，與傳統(tǒng)光熱療法相比具有高效、可控的優(yōu) 勢，并且，其光熱治療與化療技術(shù)的結(jié)合更體現(xiàn)癌癥綜合治療，具有強(qiáng)大的藥物負(fù)載特性， 在透明質(zhì)酸酶存在下具有敏感釋藥和近紅外敏感釋藥的特性，構(gòu)建熱療-化療-腫瘤診斷 綜合治療一體化轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，同時具有生物相容性高、靶向性好、成本低廉等特點(diǎn)，經(jīng)濟(jì)和社 會效益巨大。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 以下結(jié)合實(shí)施例和具體情況對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0013] 本發(fā)明在具體實(shí)施中可由以下實(shí)施例給出
[0014] 實(shí)施例1
[0015] 本發(fā)明透明質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅復(fù)合物在具體實(shí)施中，由以下方法實(shí)現(xiàn)：
[0016](1)、將0?75g的CuS04.5H20溶解于200ml水中，攪拌，加入6. 0g聚乙烯吡咯烷酮， 室溫反應(yīng)10~20min，加入1. 2g氫氧化鈉，攪拌均勻，滴加12ml水合肼，攪拌5~lOmin， 再加入1. 29ml硫酸按，攪拌lh，用超純水在15000rpm離心5-10min，水洗至中性，冷凍干燥 48h，成中空介孔硫化銅納米顆粒；
[0017](2)、將中空介孔硫化銅納米粒200mg加入200ml超純水，超聲分散10~30min， 再在攪拌下加入400mg疏基乙胺，攪拌24h，15000rpm離心5-10min得沉淀，沉淀用超純水 復(fù)溶，再15000rpm離心5-10min，得沉淀，沉淀再用超純水復(fù)溶，如此重復(fù)2~3遍，直至中 性，冷凍干燥，得氨基化中空介孔硫化銅復(fù)合物（CuS-NH 2);
[0018] (3)、將800mg透明質(zhì)酸加入pH7~9的磷酸鹽緩沖液50ml中，攪拌溶解，加入 2. 072g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺、1.24g羥基琥珀酰亞胺為活化劑，室溫攪 拌30min，成活化的透明質(zhì)酸；
[0019](4)、在冰浴下，將步驟（2)制備的氨基化中空介孔硫化銅復(fù)合物（CuS-NH2)用pH =7~9的磷酸鹽緩沖液分散，得分散液，將活化的透明質(zhì)酸緩慢加入分散液中，升至室溫， 反應(yīng)3h，15000rpm離心5-1 Omin得沉淀，沉淀加水分散，在水中透析2d，冷凍干燥，即得透明 質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅復(fù)合物（HA-CuS)。
[0020] 實(shí)施例2
[0021] 本發(fā)明透明質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅復(fù)合物在具體實(shí)施中，由以下步驟實(shí)現(xiàn)：
[0022] (1)、將0? 7g的CuS04 *5H20溶解于180ml水中，攪拌，加入5. 5g聚乙烯吡咯烷酮， 室溫反應(yīng)10~20min，加入1. lg氫氧化鈉，攪拌均勾，滴加10ml水合肼，攪拌5~lOmin， 再加入1. 2ml硫酸按，攪拌lh，用超純水在15000rpm離心5-10min，水洗至中性，冷凍干燥 46-50h，成中空介孔硫化銅納米顆粒；
[0023](2)、將中空介孔硫化銅納米粒180mg加入180ml超純水，超聲分散10~30min， 再在攪拌下加入360mg疏基乙胺，攪拌24h，15000rpm離心5-10min得沉淀，沉淀用超純水 復(fù)溶，再15000rpm離心5-10min，得沉淀，沉淀再用超純水復(fù)溶，如此重復(fù)2~3遍，直至中 性，冷凍干燥，得氨基化中空介孔硫化銅復(fù)合物（CuS-NH 2);
[0024] (3)、將750mg透明質(zhì)酸加入pH7~9的磷酸鹽緩沖液46ml中，攪拌溶解，加入2g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺、1. 2g羥基琥珀酰亞胺為活化劑，室溫攪拌30min， 成活化的透明質(zhì)酸；
[0025](4)、在冰浴下，將步驟（2)制備的氨基化中空介孔硫化銅復(fù)合物（CuS_NH2)用pH =7~9的磷酸鹽緩沖液分散，得分散液，將活化的透明質(zhì)酸緩慢加入分散液中，升至室溫， 反應(yīng)3h，15000rpm離心5-1 Omin得沉淀，沉淀加水分散，在水中透析2d，冷凍干燥，即得透明 質(zhì)酸修飾的中空介孔硫化銅復(fù)合物（HA-CuS)。