用于肌萎縮性側(cè)索硬化的治療劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于肌萎縮性側(cè)索硬化的治療劑，其包含生長激素促分泌素受體激動(dòng) 劑作為活性成分。
【背景技術(shù)】
[0002] 肌萎縮性側(cè)索硬化（在下文中，被稱作ALS)，即成年人的最常見運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病，是 涉及上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的選擇性和系統(tǒng)性死亡的神經(jīng)變性疾病。作為運(yùn)動(dòng)神經(jīng) 元死亡的結(jié)果，發(fā)生上肢和下肢的肌萎縮和肌無力，而在大多數(shù)情況下，所述疾病的進(jìn)展也 涉及延髓性麻痹癥狀諸如言語或吞咽困難和呼吸肌麻痹。ALS主要發(fā)生在中年人或老年人 中。該疾病如此嚴(yán)重，以致于許多患者在發(fā)病以后2-3年內(nèi)死于呼吸衰竭，除非使用呼吸機(jī) 進(jìn)行呼吸管理。盡管存在肌肉（包括呼吸?。┑南到y(tǒng)性萎縮和無力，但高階功能諸如智力和 感覺得到維持（非專利文獻(xiàn)1)。
[0003] Cu/Zn超氧化物歧化酶（SODl)基因被視作ALS的成因基因之一。在攜帶從ALS患 者分離的突變體SODl基因的轉(zhuǎn)基因小鼠或大鼠中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元在成熟以后選擇 性地死亡且骨骼肌萎縮或肌無力發(fā)生，從而導(dǎo)致死亡，如在人ALS的病理學(xué)中的那樣。這些 攜帶突變體SODl基因的轉(zhuǎn)基因小鼠或大鼠已經(jīng)被確認(rèn)為ALS動(dòng)物模型并常規(guī)地用在ALS 的病理學(xué)分析或該疾病的治療劑的搜索中。具體地，使用表達(dá)通過用Ala (A)置換93-位處 的Gly (G)而從人SODl衍生出的突變蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠（即，攜帶突變體SODl基因（G93A) 的轉(zhuǎn)基因小鼠（在下文中，被稱作S0Dl e93M、鼠））的研宄已經(jīng)成為最先進(jìn)的，并且歐洲ALS/ MND組推薦使用這些動(dòng)物的評價(jià)（非專利文獻(xiàn)2)。
[0004] 目前全世界被批準(zhǔn)用于ALS的唯一治療劑是利魯唑。該藥物拮抗谷氨酸鹽毒性， 該毒性據(jù)報(bào)道是ALS發(fā)病的引起因素之一。但是，該藥物會產(chǎn)生僅幾個(gè)月的生命延長作用， 且因而僅僅在有限程度上是有效的（非專利文獻(xiàn)1)。
[0005] 葛瑞林是被發(fā)現(xiàn)為生長激素促分泌素受體（在下文中，被稱作GHS-R)的內(nèi)源性配 體的肽激素（非專利文獻(xiàn)3)。葛瑞林會促進(jìn)人類和動(dòng)物中的生長激素（在下文中，被稱作 GH)分泌（非專利文獻(xiàn)4，等）。
[0006] 已知GH會促進(jìn)肝臟和骨骼肌中的胰島素-樣生長因子-1 (在下文中，被稱作 IGF-1)產(chǎn)生，而IGF-I已知是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的營養(yǎng)因子。將含有IGF-I基因的重組AAV4病毒 載體注射進(jìn)S0Dl e93M、鼠的側(cè)腦室中，會顯著延長它們的存活期并顯著抑制運(yùn)動(dòng)功能和肌 肉強(qiáng)度的下降（專利文獻(xiàn)1)。盡管該報(bào)道表明這樣的效應(yīng)通過IGF-I在腦中的強(qiáng)迫表達(dá)而 實(shí)現(xiàn)，但是人IGF-I在S0Dl e93A小鼠的骨骼肌中的過表達(dá)對運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元死亡或存活期沒有影 響（非專利文獻(xiàn)5)。當(dāng)在臨床試驗(yàn)中將GH或IGF-I施用給ALS患者時(shí)，GH治療是無效的 (非專利文獻(xiàn)6)，且IGF-I對ALS患者的肌肉強(qiáng)度、功能結(jié)果和存活期中的任一種沒有表現(xiàn) 出效力（非專利文獻(xiàn)7)。因而，周圍GH或IGF-I系統(tǒng)的活化對于ALS而言是無效的。葛瑞 林也會促進(jìn)從腦下垂體分泌GH和增加血液中的GH濃度（例如，非專利文獻(xiàn)3和4)，但是不 知道具有增加腦或脊髓中的IGF-I的作用。因此，不確定葛瑞林是否對于ALS的病理學(xué)而 目是有效的。
[0007] 并且，葛瑞林是唯一已知的周圍促進(jìn)食欲肽，據(jù)報(bào)道其會增加人類和動(dòng)物中的食 物攝入（例如，非專利文獻(xiàn)4)。ALS是涉及由運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元死亡引起的骨骼肌萎縮和肌肉強(qiáng) 度減小的疾病，從而導(dǎo)致死亡。葛瑞林的施用可以增加食物攝入并由此維持體重或骨骼肌 質(zhì)量。但是，葛瑞林的這種作用和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元死亡的抑制之間的關(guān)聯(lián)是未知的。因此，不確 定葛瑞林是否對于ALS的病理學(xué)而言是有效的。
[0008] 在ALS患者中，具有高血液LDL/HDL比率并表現(xiàn)出高脂血癥的患者已經(jīng)被報(bào)道會 表現(xiàn)出比其它ALS患者長至少12個(gè)月的存活期，從而指示高脂血癥是ALS患者的存活的預(yù) 后因素（非專利文獻(xiàn)8)。同樣地，具有高血液膽固醇或甘油三酯濃度的ALS患者已經(jīng)被報(bào) 道具有良好的預(yù)后（非專利文獻(xiàn)9)。
[0009] 根據(jù)一篇報(bào)道，葛瑞林向小鼠的施用對它們的血液甘油三酯濃度沒有影響，但是 會增加血液總膽固醇濃度（非專利文獻(xiàn)10)。根據(jù)另一篇報(bào)道，葛瑞林可用于治療高脂血癥 (專利文獻(xiàn)2)。
[0010] 并且，給具有慢性呼吸炎癥的患者重復(fù)施用葛瑞林3-周，會改善他們的體重或營 養(yǎng)狀態(tài)，但是對血液膽固醇濃度沒有影響（非專利文獻(xiàn)11)。
[0011] 如上所述，關(guān)于葛瑞林對血液膽固醇或甘油三酯的影響，尚未得到明確的發(fā)現(xiàn)。
[0012] 據(jù)報(bào)道，當(dāng)通過離子霉素治療胎兒大鼠海馬神經(jīng)元來升高細(xì)胞內(nèi)鈣（Ca)水平從 而誘導(dǎo)細(xì)胞死亡時(shí)，GHS-R激動(dòng)劑化合物大鼠葛瑞林、普拉莫瑞林（生長激素釋放肽-2 (在 下文中，被稱作GHRP-2))、海沙瑞林和MK-0677會表現(xiàn)出細(xì)胞死亡抑制作用。在該報(bào)道中， ALS被稱作所述化合物集合對其有效的非缺血性神經(jīng)變性疾?。▽＠墨I(xiàn)3)。ALS是涉及 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的選擇性死亡的成年發(fā)作疾病，其中海馬細(xì)胞沒有受到損傷。因此，即使GHRP-2 或葛瑞林在體外抑制由Ca濃度的升高誘導(dǎo)的胎兒大鼠海馬神經(jīng)元死亡，也不確定這些化 合物是否對ALS有效。
[0013] 已經(jīng)報(bào)道葛瑞林會抑制體外大鼠器官型脊髓培養(yǎng)系統(tǒng)中由谷氨酸鹽誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng) 神經(jīng)元死亡（非專利文獻(xiàn)12和13)。不幸的是，所述體外器官型脊髓培養(yǎng)系統(tǒng)可能不足以 反映復(fù)雜疾病(諸如ALS)的病理學(xué)。
[0014] 已經(jīng)報(bào)道，與對照組相比，普拉莫瑞林（GHRP-2)會使比細(xì)胞大小大1. 5倍的具有 樹突和軸突的大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤衍生的PC-12細(xì)胞的比例增加大約1. 2倍（專利文獻(xiàn) 4)。由于所述細(xì)胞不是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，不可以判定GHRP-2是否可用于ALS。
[0015] 根據(jù)關(guān)于1，2-二乙?；降氖┯谜T導(dǎo)的近側(cè)軸突病變的小鼠模型的報(bào)道，GHS-R 激動(dòng)劑生長激素釋放肽-6 (在下文中，被稱作GHRP-6)和細(xì)胞生長因子EGF的同時(shí)施用會 在行為方面改善小鼠的行走能力，并且也顯著地改善骨骼肌的動(dòng)作電位，盡管單獨(dú)每種化 合物的施用僅僅加速改變的步態(tài)型式的恢復(fù)（非專利文獻(xiàn)14)。由于在該實(shí)驗(yàn)中使用的動(dòng) 物模型具有與ALS相比不同的臨床病理學(xué)，不可以判定GHRP-6是否可用于或不可用于ALS。
[0016] 其它報(bào)道公開稱，葛瑞林受體GHS-R拮抗劑可用于治療ALS (專利文獻(xiàn)5和6)。 因而，不可假定GHS-R激動(dòng)劑(包括葛瑞林）可用于治療ALS。
[0017] 引文列表 專利文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn) I: W02007/146046 專利文獻(xiàn)2:日本專利特開號2008-127377 專利文獻(xiàn) 3: W001/047558 專利文獻(xiàn)4:日本專利特開號2005-239712 專利文獻(xiàn)5: US7829589 專利文獻(xiàn) 6: US2012/0080747 非專利文獻(xiàn) 非專利文獻(xiàn) I: Expert Opinion on Emerging Drugs (2011)，第 16卷（第 2 期），第 537-558 頁 非專利文獻(xiàn) 2: Amyotrophic Lateral Sclerosis (2010)，第 11 卷，第 38-45 頁 非專利文獻(xiàn)3: Nature (1999)，第402卷，第656-660頁 非專利文獻(xiàn) 4: Physiological Reviews (2005)，第 85 卷，第 495-522 頁 非專利文獻(xiàn) 5: Experimental Neurology (2007)，第 207 卷，第 52-63 頁 非專利文獻(xiàn) 6: Muscle & Nerve (1993)，第 16 卷（第6 期），第 624-633 頁 非專利文獻(xiàn) 7: Neurology (2008)，第 71 卷，第 1770-1775 頁 非專利文獻(xiàn) 8: Neurology (2008)，第 70 卷，第 1004-1009 頁 非專利文獻(xiàn)9: Journal of Neurology (2011)，第 258 卷（第 4 期），第 613-617 頁 非專利文獻(xiàn) 10: Nature Neuroscience (2010)，第 13 卷（第 7 期），第 877-883 頁 非專利文獻(xiàn) 11: Pulmonary Pharmacology & Therapeutics (2008)，第 21 卷（第 5 期），第774-779頁 非專利文獻(xiàn) 12: Experimental Neurology (2011)，第 230 卷，第 114-122 頁 非專利文獻(xiàn) 13: Korean Journal of Physiology and Pharmacology (2012)，第 16 卷（第I期），第43-48頁 非專利文獻(xiàn) 14: Neurotoxicity Research (2011)，第 19 卷，第 195-209 頁。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0018] 技術(shù)問題 利魯唑(一種現(xiàn)有的用于ALS的治療劑)在臨床上在有限程度上是有效的。盡管自該藥 物首創(chuàng)以來已經(jīng)過去了 15年或更多年并且同時(shí)已經(jīng)在臨床上開發(fā)了多種化合物，用于ALS 的新治療劑仍然有待開發(fā)。因而，對ALS有效的治療劑的開發(fā)，存在強(qiáng)烈的未得到滿足的醫(yī) 學(xué)需求。本發(fā)明的一個(gè)目的是，提供用于不存在有效藥物的ALS的治療劑，所述治療劑能夠 抑制ALS的病理學(xué)進(jìn)展和有效地治療該疾病。
[0019] 問題的解決方案 本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)對不存在完全（或充分）有效藥物(特別是與唯一存在的藥物利 魯唑相比能夠更有效地治療ALS的藥物)的ALS的有用治療劑進(jìn)行了勤奮研宄。所以，本發(fā) 明的發(fā)明人通過以下發(fā)現(xiàn)已經(jīng)完成了本發(fā)明：GHS-R激動(dòng)劑表現(xiàn)出比現(xiàn)有藥物更有效的運(yùn) 動(dòng)神經(jīng)元保護(hù)作用。具體地，本發(fā)明包括下述方面： (1)用于施用給具有肌萎縮性側(cè)索硬化和不嚴(yán)重吞咽困難的個(gè)體的、用于肌萎縮性側(cè) 索硬化的治療劑，其包含生長激素促分泌素受體激動(dòng)劑或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成 分。
[0020] (2)根據(jù)（1)所述的治療劑，其中所述個(gè)體對肌萎縮性側(cè)索硬化的現(xiàn)有治療劑也 無應(yīng)答或不充分應(yīng)答。
[0021] (3)根據(jù)⑴或⑵所述的治療劑，其中所述治療劑與肌萎縮性側(cè)索硬化的現(xiàn)有治 療劑聯(lián)合使用。
[0022] (4)根據(jù)⑵或⑶所述的治療劑，其中所述肌萎縮性側(cè)索硬化的現(xiàn)有治療劑是利 魯唑。
[0023] (5)根據(jù)（1)或（2)所述的治療劑，其中所述治療劑通過皮下注射來施用。
[0024] (6)根據(jù)（1)至（5)中的任一項(xiàng)所述的治療劑，其中所述生長激素促分泌素受體激 動(dòng)劑是葛瑞林、普拉莫瑞林、GHRP-6、海沙瑞林、伊莫瑞林、甲