￡0 10勵8:84、85、87、88、89、 91、92以及93的氨基酸序列的⑶R2兩者。
7. 分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至活化蛋白C并抑制抗凝活性、但對未活化 蛋白C具有最低結(jié)合，其中所述抗體包含含有選自SEQ ID NOs :64、65、67、68、69、71、72以 及73的氨基酸序列的⑶R3。
8. 如權(quán)利要求7的分離的單克隆抗體，其中所述抗體進(jìn)一步包含：(a)含有選自SEQ ID NOs :44、45、47、48、49、51、52 以及 53 的氨基酸序列的 CDR1，（b)含有選自 SEQ ID NOs :54、 55、57、58、59、61、62 以及 63 的氨基酸序列的 CDR2,或（c)含有選自 SEQ ID NOs :44、45、47、 48、49、51、52以及53的氨基酸序列的CDRl以及含有選自SEQ ID NOs :54、55、57、58、59、 61、62以及63的氨基酸序列的⑶R2兩者。
9. 如權(quán)利要求5的分離的單克隆抗體，其中所述抗體進(jìn)一步包含含有選自SEQ ID NOs :64、65、67、68、69、71、72 以及 73 的氨基酸序列的 CDR3。
10. 如權(quán)利要求9的分離的單克隆抗體，其中所述抗體進(jìn)一步包含：(a)含有選自SEQ ID NOs :74、75、77、78、79、81、82 以及 83 的氨基酸序列的 CDR1，（b)含有選自 SEQ ID NOs : 84、85、87、88、89、91、92 以及 93 的氨基酸序列的 CDR2，（c)含有選自 SEQ ID N0s:44、45、 47、48、49、51、52以及53的氨基酸序列的CDR1，以及（d)含有選自SEQ ID NOs :54、55、57、 58、59、61、62以及63的氨基酸序列的CDR2。
11. 如權(quán)利要求4的抗體，其中所述抗體包含含有下列的重鏈與輕鏈可變區(qū)： a) 輕鏈可變區(qū)，其包含含有SEQ ID NOs :44、54與64的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)， 其包含含有SEQ ID NOs :74、84與94的氨基酸序列； b) 輕鏈可變區(qū)，其包含含有SEQ ID NOs :45、55與65的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)， 其包含含有SEQ ID NOs :75、85與95的氨基酸序列； c) 輕鏈可變區(qū)，其包含含有SEQ ID NOs :47、57與67的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)， 其包含含有SEQ ID NOs :77、87與97的氨基酸序列； d) 輕鏈可變區(qū)，其包含含有SEQ ID NOs :48、58與68的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)， 其包含含有SEQ ID NOs :78、88與98的氨基酸序列； e) 輕鏈可變區(qū)，其包含含有SEQ ID NOs :49、59與69的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)， 其包含含有SEQ ID NOs :79、89與99的氨基酸序列； f) 輕鏈可變區(qū)，其包含含有SEQ ID NOs :51、61與71的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)， 其包含含有SEQ ID NOs :81、91與101的氨基酸序列； g) 輕鏈可變區(qū)，其包含含有SEQ ID NOs :52、62與72的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)， 其包含含有SEQ ID NOs :82、92與102的氨基酸序列；以及 h) 輕鏈可變區(qū)，其包含含有SEQ ID NOs :53、63與73的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)， 其包含含有SEQ ID NOs :83、93與103的氨基酸序列。
12. 如權(quán)利要求4的分離的單克隆抗體，其進(jìn)一步包含一個或多個氨基酸修飾。
13. 如權(quán)利要求11的分離的單克隆抗體，其進(jìn)一步包含一個或多個氨基酸修飾。
14. 分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至活化蛋白C且抑制抗凝活性、但對未活化 蛋白C具有最低結(jié)合，其中所述抗體包含含有SEQ ID NO :8的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，其 中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸修飾。
15. 如權(quán)利要求13的分離的單克隆抗體，其中所述修飾為置換。
16. 如權(quán)利要求14的分離的單克隆抗體，其中所述置換選自下列的位置：A10、T13、 G52、N53、N54、R56、P57、S58、S78、R81、S82、Q91、Y93、S95、S96、L97、S98、G99、SlOO 以及 VlOlo
17. 如權(quán)利要求15的分離的單克隆抗體，其中所述置換選自下列：A10V、T13A、G52S、 G52Y、G52H、G52F、N53G、N54K、N54R、R56K、P57G、P57W、P57N、S58V、S58F、S58R、S78T、R81Q、 S82A、Q91R、Q91G、Y93W、S95F、S95Y、S95G、S95W、S95E、S96G、S96A、S96Y、S96W、S96R、L97M、 L97G、L97R、L97V、S98L、S98W、S98V、S98R、G99A、G99E、S100A、S100V、V101Y、VlOlL 以及 VlOlE0
18. 分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至活化蛋白C且抑制抗凝活性、但對未活化 蛋白C具有最低結(jié)合，其中所述抗體包含含有SEQ ID NO :18的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)， 其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸修飾。
19. 如權(quán)利要求18的分離的單克隆抗體，其中所述修飾為置換。
20. 如權(quán)利要求19的分離的單克隆抗體，其中所述置換選自N54以及S56的位置。
21. 如權(quán)利要求20的分離的單克隆抗體，其中所述置換選自下列：N54G、N54Q、N54A、 S56A 以及 S56G。
22. 分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至活化蛋白C且抑制抗凝活性、但對未活化 蛋白C具有最低結(jié)合，其中所述抗體包含含有SEQ ID NO :12的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)， 其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸修飾。
23. 如權(quán)利要求22的分離的單克隆抗體，其中所述修飾為置換。
24. 如權(quán)利要求23的分離的單克隆抗體，其中所述置換選自下列的位置：T25、D52、 N53、N54、N55、D95、N98 以及 G99。
25. 如權(quán)利要求24的分離的單克隆抗體，其中所述置換選自下列：T25S、D52Y、D52F、 D52L、D52G、N53C、N53K、N53G、N54S、N55K、D95G、N98S、G99H、G99L 以及 G99F。
26. 結(jié)合至人活化蛋白C(人aPC，SEQ ID NO :3)的表位的分離的單克隆抗體，其中所 述表位包含來自人aPC重鏈的殘基。
27. 結(jié)合至人活化蛋白C(人aPC，SEQ ID NO :3)的表位的分離的單克隆抗體，其中所 述表位包含SEQ ID NO :3的S195。
28. 結(jié)合至人活化蛋白C的表位的分離的單克隆抗體，其中所述表位包含選自下列的 一個或多個殘基：SEQ ID NO :3 的 D60、K96、S97、T98、T99、E170、V171、M172、S173、M175、 A190、S195、W215、G216、E217、G218 以及 G218。
29. 結(jié)合至活化蛋白C的活性位點的分離的單克隆抗體。
30. 分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至活化蛋白C且抑制抗凝活性、但對未活化 蛋白C具有最低結(jié)合，其中所述抗體為完全人抗體。
31. 如權(quán)利要求1-30的分離的單克隆抗體，其中所述抗體選自下列：IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgM、IgAl、IgA2、分泌型IgA、IgD、IgE抗體以及抗體片段。
32. 如權(quán)利要求1-30的分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至人活化蛋白C。
33. 如權(quán)利要求32的分離的單克隆抗體，其中所述抗體進(jìn)一步結(jié)合至非人物種的活化 蛋白C。
34. 如權(quán)利要求1-30的抗體，其中凝血時間在所述抗體存在下被縮短。
35. 與如權(quán)利要求1-30的抗體競爭的抗體。
36. 藥物組合物，其包含治療有效量的如權(quán)利要求1-30中任一項的單克隆抗體以及藥 學(xué)上可接受的載體。
37. 治療凝血方面的遺傳性或后天缺乏或缺陷的方法，其包含向患者施用治療有效量 的如權(quán)利要求36的藥物組合物。
38. 治療凝血紊亂的方法，其包含向患者施用治療有效量的如權(quán)利要求36的藥物組合 物。
39. 如權(quán)利要求38的方法，其中所述凝血紊亂為A型血友病、B型血友病或C型血友 病。
40. 如權(quán)利要求38的方法，其中所述凝血紊亂選自創(chuàng)傷引起的凝血紊亂或重度出血患 者。
41. 如權(quán)利要求38的方法，其進(jìn)一步包含施用凝血因子。
42. 如權(quán)利要求41的方法，其中所述凝血因子選自因子Vila、因子VIII或因子IX。
43. 縮短出血時間的方法，其包含向患者施用治療有效量的如權(quán)利要求36的藥物組合 物。
44. 編碼結(jié)合至活化蛋白C且抑制抗凝活性、但對未活化蛋白C具有最低結(jié)合的抗體的 分離的核酸分子，其中所述抗體包含含有選自SEQ ID NOs:14、15、17、18、19、21、22以及23 的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
45. 編碼結(jié)合至活化蛋白C且抑制抗凝活性、但對未活化蛋白C具有最低結(jié)合的抗體的 分離的核酸分子，其中所述抗體包含含有選自SEQ ID NOs :4、5、7、8、9、11、12以及13的氨 基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
【專利摘要】本文提供對其酶原蛋白C(PC)有最低結(jié)合的針對人活化蛋白C(aPC)的抗體、抗原-結(jié)合抗體片段(Fab)以及其它蛋白質(zhì)支架。此外，這些aPC結(jié)合蛋白可潛在地阻斷aPC的抗凝活性以誘導(dǎo)凝血。這些結(jié)合體的治療用途及淘選以及篩選特異性抗體的方法描述于本文。
【IPC分類】A61K39-00, C07K16-24, C07K16-00, A61K39-395
【公開號】CN104812402
【申請?zhí)枴緾N201380062159
【發(fā)明人】X-Y.趙, Z.王, J-M.古, J-Y.金, M.鮑宗, J.E.墨菲, K.麥克萊恩, F.金, T.馬夸特, X.王, A.威爾門
【申請人】拜爾健康護(hù)理有限責(zé)任公司
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2013年11月27日
【公告號】CA2892750A1, EP2925351A1, WO2014085596A1