炎性皮膚病癥的治療的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及使用有效量的活化蛋白C(APC)來治療個體的特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚病癥的方法。
【專利說明】炎性皮膚病癥的治療 發(fā)明領域
[0001] 本發(fā)明涉及特征在于角質化細胞過度增殖的皮膚病癥，包括但不限于牛皮癬；以 及對所述皮膚病癥的治療。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 在說明書中提及任何現(xiàn)有技術都不且不應視為承認或以任何形式暗示該現(xiàn)有技 術構成澳大利亞或任何其它管轄區(qū)域的公知常識的一部分或該現(xiàn)有技術可合理地被預期 由本領域技術人員確定為、理解為以及認為是相關的。
[0004] 牛皮癬作為最突出的自體免疫性疾病在性質上是慢性和復發(fā)性的。它的特征在于 屏障功能受損、表皮角質化細胞過度增殖和炎性細胞顯著浸潤。
[0005] 最近的數(shù)據(jù)表明盡管炎性T細胞對于疾病是必要的，但角質化細胞通過整合對白 介素（IL)-l、IL-6、IL-8、IL-17、干擾素（INF-y)和TNF-a (1，2)的反應和活化核因子 NF-kB(-種維持表皮角質化細胞的免疫體內平衡的信號傳導分子）（3,4)而成為牛皮癬 中病原性炎癥的關鍵驅動者。
[0006] 不存在對牛皮癬的治愈。局部用藥物、光照療法、傳統(tǒng)全身性藥劑和生物劑僅提供 用于管理其癥狀的選項。藥劑的組合常為中度至重度病例所需，且積極長期成果要求藥物 依從（5)。
[0007] 通常，局部化疾?。?0%體表面積）是通過局部用藥物來管理，而較大面積需要光 照療法或全身性療法。定位于手掌和腳底的疾病常加以全身性治療，因為此區(qū)域中的皮膚 厚度不可經受表面療法。
[0008] 表面治療劑包括皮質類固醇，如氯倍他索（clobetasol);和維生素D類似物，如鈣 三醇（calcitriol)或卡泊三烯（calcipotriene) (6,7)。皮質類固醇通過減輕炎癥、抑制有 絲分裂活性以及導致靶向區(qū)域中的血管收縮來起作用。維生素D類似物作用的機理未被完 全了解，但它似乎調控角質化細胞增殖和分化（6)。因此，兩種治療的組成部分包括抑制細 胞增殖，但這是非特異性的。
[0009] 局部用皮質類固醇可導致受影響區(qū)域中皮膚萎縮、刺激和干燥。維生素D類似物 通常是安全的，但可導致刺激，而如果極其大劑量使用，那么存在高鈣血癥的風險（8)。
[0010] 就廣泛牛皮癬疾病而言，使用光照療法或全身性治療。用于廣泛牛皮癬的一線治 療是通過紫外光，如UVB和UVA來達成。然而，此治療伴有灼傷和皮膚癌的較大風險，特 別是在膚色較淺的患者中。如果紫外光療法被證明無效，那么也可使用低劑量甲氨蝶呤 (methotrexate)。甲氨蝶呤相當有效控制牛皮癬，但因嚴重毒性作用而嚴重受限。
[0011] 隨著對疾病的免疫性質的認識的增加，靶向T淋巴細胞、TNF-a、IL-12和IL-23 的生物藥劑已成功用于中度至重度牛皮癬中（8)。三種通常使用的TNF抑制劑包括恩博 (Enbrel)(依那西普（etanercept))、修美樂（Humira)(阿達木單抗（adalimumab))和類 克（Remicade)(英夫利昔單抗（infliximab))。優(yōu)特克單抗（Ustekinumab)作為一種革巴向 IL-12和IL-23的新型藥劑在2009年被批準上市，從而提供與抗TNF藥劑類似的功效和安 全性分布（9)。
[0012] 生物藥劑提供超過先前可用全身性療法的可觀優(yōu)勢，然而，這些藥物的臨床試驗 顯示所述化合物的活性長期伴有許多缺點（10-11)。首先，在患有潛在結核分枝桿菌（TB) 感染的患者中，活動性TB可在啟始用英夫利昔單抗治療之后不久滋長。此外，采用TNF抑 制劑的患者的機會性真菌感染的風險增加，所述感染如肺和播散性組織胞漿菌病、球孢子 菌病和芽生菌病。其次，包括淋巴瘤和皮膚癌的惡性腫瘤的風險呈劑量依賴性增加適用于 一些治療。第三，一定比例的患者不對藥劑起反應，或未能維持初始反應。生物藥劑的可用 性也受限于它的高經濟成本。
[0013] 活化蛋白C(APC)誘導抗細胞凋亡人基因bcl-2和MIHB的基因表達?；诖丝辜?胞凋亡功能，APC已被提及用于使其中細胞凋亡是有關的廣泛范圍的病狀中的細胞凋亡減 至最少，所述病狀包括大范圍的器官特異性和非特異性炎性疾病、自體免疫性疾病、瘤形成 和感染性疾病。值得注意的是，使用APC并未表明可治療這些病狀中的所有疾病癥狀，而僅 僅使細胞凋亡減至最少(參見TO2001/072328)。
[0014] 此外，本領域中許多人持以下觀點：抗細胞凋亡作用(如W02001/072328中所提出 的）應使得APC不適于治療其中存在功能異常性細胞增殖調控的病癥，尤其是涉及角質化 細胞過度增殖的病癥。具體來說，已知除通過由APC防止細胞凋亡來減弱鈣誘導的細胞死 亡之外，APC也對角質化細胞增殖具有強力刺激作用，且APC以自分泌方式通過EPCR、表皮 生長因子受體和活化ERK1/2來促進角質化細胞存活、生長和遷移（17, 20)。
[0015] 需要用于治療表征在于角質化細胞過度增殖的疾病或病癥（如牛皮癬）或使所述 疾病或病癥的進展或癥狀減至最輕的新方法和療法。
[0016] 發(fā)明概述
[0017] 本發(fā)明設法解決一個或多個以上問題或限制，且在某些實施方案中提供一種治療 個體的特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚病癥的方法，其包括：
[0018] 提供具有特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚區(qū)域的個體；
[0019] 使所述皮膚區(qū)域與治療有效量的活化蛋白C(APC)接觸；
[0020] 從而治療所述個體的所述皮膚病癥。
[0021] 在其它實施方案中，提供一種治療個體的牛皮癬的方法，其包括：
[0022] 提供具有牛皮癬斑塊的個體；
[0023] 向所述斑塊涂覆包含治療有效量的活化蛋白C(APC)的組合物；
[0024] 從而治療所述個體的牛皮癬。
[0025] 在其它實施方案中，提供一種治療個體的粉刺的方法，其包括：
[0026] 提供患有粉刺的個體；
[0027] 向所述粉刺涂覆包含治療有效量的活化蛋白C(APC)的組合物；
[0028] 從而治療所述個體的粉刺。
[0029] 在其它實施方案中，提供一種治療個體的異位性皮炎的方法，其包括：
[0030] 提供患有異位性皮炎的個體；
[0031] 向所述異位性皮炎或含有所述異位性皮炎的皮膚區(qū)域涂覆包含治療有效量的活 化蛋白C(APC)的組合物；
[0032] 從而治療所述個體的異位性皮炎。
[0033] 在其它實施方案中，提供一種治療個體的壞疽性膿皮?。≒yoderma gangrenosam) 的方法，其包括：
[0034] 提供患有壞疽性膿皮病的個體；
[0035] 向所述壞疽性膿皮病或含有所述壞疽性膿皮病的皮膚區(qū)域涂覆包含治療有效量 的活化蛋白C(APC)的組合物；
[0036] 從而治療所述個體的壞疽性膿皮病。
[0037] 在另一實施方案中，提供一種誘導患有特征在于角質化細胞過度增殖的病癥的皮 膚區(qū)域中的傷口愈合或組織再生的方法，其包括：
[0038] 提供具有患有特征在于存在過度增殖性角質化細胞的病癥的皮膚區(qū)域的個體；
[0039] 使所述皮膚區(qū)域與治療有效量的活化蛋白C(APC)接觸；
[0040] 從而誘導所述皮膚區(qū)域中的傷口愈合或組織再生。
[0041] 在其它實施方案中，提供一種用于在個體中使特征在于存在過度增殖性角質化細 胞的皮膚病癥減至最輕或治療牛皮癬、粉刺或異位性皮炎的包含治療有效量的APC的組合 物。
[0042] 在其它實施方案中，提供一種APC制造在個體中用于使特征在于存在過度增殖性 角質化細胞的皮膚病癥減至最輕或用于治療牛皮癬、粉刺或異位性皮炎的藥劑的用途。
[0043] 在其它實施方案中，提供一種APC在個體中用于使特征在于存在過度增殖性角質 化細胞的皮膚病癥減至最輕或用于治療牛皮癬、粉刺或異位性皮炎的用途。
[0044] 在其它實施方案中，提供一種包括組合物和書面說明書的試劑盒，所述組合物包 含治療有效量的APC，所述書面說明書是關于在治療特征在于存在過度增殖性角質化細胞 的病癥的方法中使用所述APC或關于治療個體的牛皮癬、粉刺或異位性皮炎，所述方法如 本文所述。
[0045] 附圖簡述
[0046] 圖1. (A)人新生兒包皮角質化細胞用APC預處理4小時，接著將TNF-a和細胞 孵育72小時且通過MTT測定來檢測增殖。相較于相關對照，*P < 0. 05, **P < 0. 01。（B) APC對正常小鼠真皮成纖維細胞（MDF)、正常人真皮成纖維細胞（HDF)和人類風濕性滑液成 纖維細胞（RSF，用紅色表示）的生長的作用，使用結晶紫測定所測量（平均值+SD)。N = 4 個單獨實驗。相較于相關對照，*、$、#P < 0. 01，ANOVA。（C)RSF用APC處理24小時。通 過蛋白質印跡測量P21和p27。
[0047] 圖2 :外源性或內源性APC刺激培養(yǎng)的角質化細胞增殖且阻止其細胞凋亡。A)使 用MTT測定測量增殖且數(shù)據(jù)表示為相較于對照的細胞增殖％。B)在72小時之后，角質化細 胞反應于PC siRNA和APC處理的增殖，如通過MTT測定所檢測。細胞增殖表示為對照的百 分比。C和D)角質化細胞用PC siRNA(0. 5iim)處理。在48小時之后，細胞用于TUNEL(末 端dUTP缺口末端標記）測定以檢測凋亡細胞（黑色箭號指示凋亡細胞）（C)并通過根據(jù)高 倍顯微術（X20)對凋亡細胞計數(shù)來定量（D)。數(shù)據(jù)表示為15個視區(qū)中每個視區(qū)的平均凋 亡細胞數(shù)（平均值土S. E，n = 3)。各圖代表三個獨立實驗之一。各圖像代表三個獨立實 驗之一。*p < 0? 05, **p < 0? 01。標尺：40 u m。
[0048] 圖3 :PC或EPCR siRNA處理抑制HUVEC的生長且促進其細胞凋亡。A)在存在或不 存在外源性APC或PC下，HUVEC反應于對照、PC siRNA或EPCR siRNA(500nM)處理的增殖 速率，如通過MTT測定所檢測。細胞增殖表示為歷經72小時的對照百分比（平均值+SD)。 相較于對照（第1棒條），#P < 〇? 01，相較于PCsiRNA (第2棒條），##P < 0? 01。B)在存 在或不存在重組APC下，HUVEC反應于針對EPCR的阻斷抗體（RCR252)的增殖。細胞增殖 表示為歷經72小時的對照百分比（平均值+SD)。相較于對照（第1棒條），*P < 0. 05,相 較于單獨 APC(第 5 棒條），#P < 0. 05。C-E)HUVEC 用對照、PC siRNA 或 EPCR siRNA(兩者 均在500nM下）處理。在36小時之后，轉染的細胞用重組APC(liig/ml)處理12小時，且 在48小時收集細胞。通過免疫熒光染色來檢測活性卡斯帕酶-3 (白色箭號指示活性卡斯 帕酶-3陽性細胞）（C)且通過原位細胞死亡檢測試劑盒來檢測凋亡細胞（白色箭號指示凋 亡細胞）0)。各圖像代表三個獨立實驗之一。標尺40 ii m。E)通過根據(jù)顯微術對用DAPI 共染色的細胞計數(shù)來定量凋亡細胞（來自D)。數(shù)據(jù)表示為根據(jù)高倍率（40X)的平均凋亡 細胞數(shù)（平均值土 SEM，n = 3)。相較于對照（第1棒條），*P < 0? 05, #P < 0? 01，相較 于 PCsiRNA 處理（第 2 棒條），#P < 0? 05。
[0049] 實施方案詳述
[0050] 如在本發(fā)明時先前所提及，角質化細胞被認為關鍵性地涉及于一定范圍的皮膚炎 性病癥（包括牛皮癬）的病理學中。許多長久消炎性療法被認為有益地使炎性細胞的復制 減至最少，且鑒于抑制炎性細胞的生長和/或復制是優(yōu)選的，已被預測具有抗細胞凋亡性 的那些化合物不被考慮來臨床用于治療這些疾病。這些是為何盡管具有消炎性功能，但在 本發(fā)明之前，APC從未被建議使特征在于角質化細胞的增殖具有過度增殖性、增生性或另外 調控異常的皮膚病癥減至最輕或消除的一些原因。實際上，在本發(fā)明之前，注意到關于APC 對角質化細胞增殖的刺激作用的公開數(shù)據(jù)暗示APC療法將對炎性皮膚疾病，如牛皮癬、粉 刺和特征在于角質化細胞過度增殖的其它皮膚病癥有害。
[0051] 如本文所述，發(fā)明人已驚人地發(fā)現(xiàn)APC抑制緩慢生長或正常人角質化細胞或細胞 的細胞凋亡，但對抑制異常或快速生長角質化細胞或細胞的增殖無影響，后者是廣泛范圍 的炎性皮膚病癥的介導者。
[0052] 從而，發(fā)明人已認識到在與角質化細胞過度增殖相關的皮膚病癥中，就對抗細胞 凋亡APC介導的信號的反應而言，存在兩個群體的角質化細胞。具體來說，對APC起反應 (即反應于基底水平的APC不經受細胞凋亡）的那些是緩慢生長、正常、非炎性細胞。此外， 對APC起反應（即反應于基底水平的APC經受細胞凋亡）的那些是較快生長、異常炎性細 胞。
[0053] 重要的是，發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)盡管APC可刺激較慢生長的正常細胞的增殖，但它具有 抑制快速生長細胞的增殖的獨特選擇性能力。本文顯示數(shù)據(jù)表明在基底條件下，APC增強緩 慢生長或正常人細胞，包括內皮和角質化細胞的增殖且抑制細胞凋亡。然而，根據(jù)本發(fā)明， 視細胞的炎性狀態(tài)而定，APC差異性調控細胞增殖-具體來說，APC抑制TNF- a刺激的角質 化細胞和來自類風濕性關節(jié)炎滑膜的快速生長滑液成纖維細胞的生長。
[0054] 根據(jù)本文所述的研究，發(fā)明人已設想與本發(fā)明之前的文獻的理解相反，APC的消炎 性益處可能在需要治療特征在于角質化細胞過度增殖的皮膚病癥的患者中得以實現(xiàn)，因為 盡管消炎性作用將施加于炎性細胞，但抗細胞凋亡作用將選擇性或特異性施加于非炎性角 質化細胞而非炎性角質化細胞。
[0055] 此外，所述治療的結果應為非炎性角質化細胞持續(xù)正常增殖（由APC的抗細胞凋 亡功能引起）以及通過施用APC，會提供各種狀況，包括消炎以及有可能使炎性、過度增殖 性角質化細胞逐漸凋亡。
[0056] A.定義
[0057] 如本文所用，除上下文另外要求之外，術語"包含（comprise) "和所述術語的變化 形式（如"包含（comprising) "、"包含（comprises)"和"包含（comprised)"）不意圖排除 其它添加物、組分、整數(shù)或步驟。
[0058] "角質化細胞"通常是指合成角蛋白和其它蛋白質以及固醇的表皮細胞。這些細胞 占表皮的95%，由未分化或基底細胞在真皮-表皮接合處形成。它的特征性中間絲蛋白質 是細胞角蛋白（cytokeratin)。在它的各種連續(xù)階段，角蛋白形成棘細胞層和粒細胞層，其 中細胞變得平化且緩慢死亡以形成最終層角質層，其逐漸剝離。
[0059] "過度增殖"通常是指細胞通過快速分裂達成異常較高增殖速率。在一些情形下， 過度增殖可由主要存在于細胞周期的h、S或G 2期的細胞引起。過度增殖也可被稱為增生， 且過度增殖性細胞可被稱為增生性細胞或組織。
[0060] "過度增殖性角質化細胞"通常是傾向于存在于細胞周期的間期階段，如Gi、S或G2 的角質化細胞。這些細胞不同于正常角質化細胞，因為正常角質化細胞通常存在于作為與 間期分開的階段的&(間隙零）或在限制點（見于匕結束時的細胞周期檢查點）之后的延 伸h期中。過度增殖性角質化細胞的特征也通常在于具有炎性基因，且具體來說NF-kB信 號傳導路徑中涉及的基因的表達。
[0061] "正常角質化細胞"通常是傾向于存在于G?；蜓由?amp;期中的角質化細胞。一般 來說，這些角質化細胞通常是尚未被TNF- a刺激的那些角質化細胞，且它們通常不具有 NF-kB信號傳導路徑的基因的表達。
[0062] "活化蛋白C"或"APC"通常是指通過結合蛋白質S和蛋白水解性失活因子Va 和Villa以及通過中和纖維蛋白溶酶原活化因子抑制劑以刺激纖維蛋白溶解來充當抗凝 血劑的絲氨酸蛋白酶。Walker 等，F(xiàn)ASEB J.6,2561_2567(1992) ;Esmon，Arterioscle;r. Thromb. 12,135-145(1992) ;van Hinsbergh 等，Blood 65,444-451(1985)。前體蛋白 C 主要在肝中產生?；罨峭ㄟ^在蛋白C的重鏈的N末端處移除十二肽來達成。當凝血酶 (thrombin)結合內皮細胞表面蛋白質血栓調節(jié)蛋白（thrombomodulin)且蛋白C結合內皮 細胞蛋白C受體時，蛋白C路徑被啟動。通過使因子Va和Villa失活，APC限制形成的凝 血酶的量。Esmon，Arterioscler. Thromb. 12,135-145 (1992)。
[0063] "治療（treating) "和"治療（treatment) "通常是指出于抗擊疾病、病狀或病癥的 目的來管理和照護患者以消除所述疾病、病狀或病癥，或防治性預防所述疾病、病理性病狀 或病癥的癥狀或并發(fā)癥的發(fā)作。
[0064] "特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚病癥"通常是指其中過度增殖性角 質化細胞占優(yōu)勢，且具體來說相較于正常組織，過度增殖性角質化細胞充裕的疾病、病狀、 綜合征等。病癥可為炎性病癥，且通常涉及以下一者或多者：基底層（生發(fā)層）、棘層、顆粒 層、透明層和角質層。皮膚病癥的實例包括膿皰性（化膿性）和非膿皰性（非化膿性）牛 皮癬，包括本文所述的形式；以及粉刺，包括尋常痤瘡或囊性痤瘡。
[0065] "治療有效量"通常是指醫(yī)藥化合物提供所需臨床結果的量。在某些實施方案中， 治療有效量的APC通常提供對正常角質化細胞的抗細胞凋亡作用，且可或可不提供對過度 增殖性角質化細胞的細胞凋亡作用。在一個實施方案中，治療有效量的APC可終止過度增 殖性角質化細胞的增殖和/或提供消炎性作用。相關量可根據(jù)本文公開的本發(fā)明方法確立 或確定。
[0066] "細胞凋亡誘導量"通常是指APC提供誘導過度增殖性角質化細胞的細胞凋亡的 量。
[0067] "生長刺激量"通常是指APC提供誘導非過度增殖性角質化細胞，且具體來說緩慢 生長、正常、非炎性角質化細胞的增殖的量。
[0068] "消炎量"通常是指APC提供使特征在于角質化細胞過度增殖的皮膚病癥的炎癥減 至最輕的量。
[0069] B.治療方法
[0070] 在了解APC不阻止炎性過度增殖性角質化細胞經受細胞凋亡下，發(fā)明人已認識 到APC可用于向如牛皮癬和粉刺的病癥提供消炎性作用而不加劇或惡化這些病狀，如先前 在本發(fā)明之前所認為，如果炎性角質化細胞被阻止免遭細胞凋亡或另外被誘導來增殖或生 長，那么將另外發(fā)生所述加劇或惡化這些病狀。因此，在某些實施方案中，提供一種治療個 體的特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚病癥的方法。所述方法包括：
[0071] -提供具有特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚區(qū)域的個體；
[0072] _使所述皮膚區(qū)域與治療有效量的活化蛋白C(APC)接觸；
[0073] 從而治療所述個體的所述皮膚病癥。
[0074] 根據(jù)所述方法，APC是通過使所述APC或含有所述APC的制劑與相關區(qū)域接觸來 直接遞送至特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚部位或區(qū)域中。部位或區(qū)域可為如 存在于粉刺或膿皰性牛皮癬中的開放性傷口或被破壞皮膚表面，或它可不被實質上破壞， 即它可更像斑塊或其它鼓起、硬化或纖維化組織。當部位或區(qū)域在被破壞等的意義上是開 放的時，APC可涂覆于破壞周圍的表面和/或通常潛伏在皮膚表面下的暴露組織（例如基 底層（生發(fā)層）、棘層、顆粒層、透明層）。
[0075] 在此情形下，發(fā)明人的一項重要發(fā)現(xiàn)是APC可被遞送在其中皮膚實質上未破損的 所需部位處，例如在破壞膿皰周圍的區(qū)域處，或在另外實質上未破壞的皮膚表面處。這使得 能夠通過使APC或相關制劑與部位直接接觸來進行局部遞送，此完全不同于先前臨床全身 性施用APC治療散播性疾病或病狀，如敗血癥。根據(jù)本發(fā)明局部施用APC對局部性而非散 播性或全身性疾病而言是有利和可適用的，因為這限制與向局部區(qū)域中遞送APC相關的風 險，且實質上使與例如通過連續(xù)輸注來全身性遞送APC相關的風險降至最低。
[0076] 向有關部位中局部遞送APC顯著偏離本領域中已知的用于治療其它疾病和病狀 的APC施用。根據(jù)在本發(fā)明時本領域中已知的方法，對于人患者，APC是優(yōu)選胃腸外，最優(yōu) 選靜脈內在約1 y g/天至約500mg/天或約lIU/kg/天至約6000IU/kg/天的劑量下施用。 參見例如美國專利號5, 151，268和5, 571，786。對于重度敗血癥，Xigris?是通過在約 12 y g/kg/h至約30 y g/kg/h的速率下連續(xù)輸注以在輸注約兩小時之后得到穩(wěn)態(tài)血漿濃度 約45ng/ml APC來施用。本發(fā)明大體上不基于通過全身性施用來連續(xù)輸注。更確切而言， 它是基于通過使皮膚區(qū)域與如本文所述的治療有效量的APC接觸來局部施用APC。
[0077] 與治療有效量的APC接觸的皮膚區(qū)域可為發(fā)炎的，或炎癥可處于消退中。在一個 實施方案中，皮膚病癥的特征在于一個或多個或所有以下過程：細胞凋亡、炎癥、屏障功能 受損。
[0078] 在一個實施方案中，皮膚區(qū)域是發(fā)炎的。一個特別重要的實例是與慢性炎癥相關 的皮膚區(qū)域。此皮膚可出現(xiàn)牛皮癬斑塊，且伴隨顯現(xiàn)膿皰，但斑塊可實質上是非膿皰性的。
[0079] 皮膚病癥可選自由牛皮癬、皰疹樣皮炎、尋常天皰瘡、白癜風和尋常痤瘡或囊性痤 瘡組成的組。
[0080] 皮膚病癥可為非膿皰性牛皮癬，例如尋常性牛皮癬或紅皮病性牛皮癬。
[0081] 皮膚病癥可為膿皰性牛皮癬，例如全身性膿皰性牛皮癬、掌跖膿皰病、環(huán)狀膿皰性 牛皮癬、連續(xù)性肢端皮炎或皰疹樣膿皰病。
[0082] 通常，當病狀是牛皮癬時，與APC接觸的皮膚區(qū)域是牛皮癬斑塊。因此，在另一實 施方案中，提供一種治療個體的牛皮癬的方法。所述方法包括：
[0083]-提供具有牛皮癬斑塊的個體；
[0084] -向所述斑塊涂覆包含治療有效量的活化蛋白C(APC)的組合物；
[0085] 從而治療所述個體的牛皮癬。
[0086] 當病狀是尋常痤瘡時，與APC接觸的皮膚區(qū)域可包括破壞和未破壞的皮膚。因此， 在另一實施方案中，提供一種治療個體的粉刺的方法。所述方法包括：
[0087]-提供患有粉刺的個體；
[0088] -向所述粉刺涂覆包含治療有效量的活化蛋白C(APC)的組合物；
[0089] 從而治療所述個體的粉刺。
[0090] 當病狀是異位性皮炎時，與APC接觸的皮膚區(qū)域可包括破壞和未破壞的皮膚。因 此，在另一實施方案中，提供一種治療個體的異位性皮炎的方法。所述方法包括：
[0091] -提供患有異位性皮炎的個體；
[0092] -向所述異位性皮炎涂覆包含治療有效量的活化蛋白C(APC)的組合物；
[0093] 從而治療所述個體的異位性皮炎。
[0094] 異位性皮炎可為選自由內源性濕疹、屈部濕疹、嬰兒濕疹組成的組的一種濕疹 形式，且它也可稱為"貝尼耶癢疹（prurigo Besnier)"，神經性皮炎"或"素質性癢疹 (prurigo diath6sique)，'。
[0095] 盡管如前所述，但本領域技術人員應了解的是APC、蛋白C、增加蛋白C的合成的 藥劑和/或蛋白C活化劑的劑量將隨所用特定化合物或化合物的組合、待治療的疾病或病 狀、疾病或病狀的嚴重性、局部施用的類型、化合物的排泄速率、治療的持續(xù)時間、向動物施 用的任何其它藥物的身份、動物的年齡、身材和物種、以及醫(yī)學領域中已知的類似因素而變 化。一般來說，化合物或化合物的組合的適合每日劑量將為有效產生治療作用的最低劑量 的那個量。施用的劑量、劑型和模式將由照護醫(yī)師在合理醫(yī)學判斷的范圍內確定。施用各 種化合物和化合物的組合的有效劑量、劑型和模式可憑經驗確定且作出所述確定在本領域 的技術范圍之內。
[0096] 在某些實施方案中，重要的是提供APC以便使得APC能夠與皮膚角質化細胞接觸， 因為盡管不想要受假設束縛，但據(jù)信通過此接觸，APC會提供本發(fā)明的選擇性抗細胞凋亡活 性（即對非炎性非過度增殖性細胞具有選擇性）和消炎活性。通常，已與APC接觸的細胞 可由于具有以下特征而被識別：活化的基質金屬蛋白酶（MMP)_2和內皮蛋白C受體（EPCR) 的水平較高以及活化的MAP激酶ERK的活性較低，且因此細胞與APC接觸以及因此治療的 治療功效可通過評估這些細胞表型來確定。
[0097] 在某些實施方案中，治療有效量的APC通常提供對正常角質化細胞的抗細胞凋亡 作用和對過度增殖性角質化細胞的細胞凋亡作用。此結果可如下加以評估：測量細胞存活 /增殖（MTT)測定和細胞細胞凋亡（TUNEL測定），從而確定是否已提供治療有效量的APC。 本文進一步顯示一種示例性方法。
[0098] 在一個實施方案中，治療有效量的APC可終止過度增殖性角質化細胞的增殖和/ 或提供消炎性作用。此結果可如下加以評估：
[0099] -測量細胞活力/增殖（MTT測定）；
[0100] -針對炎性細胞因子11-1、幾-6、11-10、11-17、11-21/23或了嚦-〇的酶聯(lián)免疫吸 附測定（ELISA)或
[0101] -針對EPCR的ELISA(R&DSystems，Inc.，MN);
[0102] -用碘化丙啶（PI)或PI加膜聯(lián)蛋白進行的針對細胞凋亡的FACS分析；
[0103] -用以檢測如NF-K B的炎性信號傳導分子的蛋白質??；
[0104] 從而確定是否已提供治療有效量的APC。
[0105] 在另一實施方案中，以上結果是通過確定皮膚區(qū)域中的APC的局部組織濃度是每 克皮膚組織lug至lOOmgAPC來獲得。這可通過在局部麻醉劑下自同一慢性斑塊獲取皮膚 穿孔活檢體來確定?？山又ㄟ^本領域中已知的方法來測定APC的量。在一個實例中，在 冰上切碎并溶解活檢體組織。在離心之后，澄清上清液用于通過ELISA測量PC濃度，且通 過顯色底物Spectrozyme PCa測定（American Diagnostica)測量APC活性。酶活性是通 過測量在A 450nm下每單位時間產生的游離發(fā)色團的吸光度增加來測定。
[0106] 在某些實施方案中，APC的治療有效量是APC所涂覆的每平方厘米皮膚區(qū)域 0. 1 ii g至5000 ii gAPC，或APC所涂覆的每平方厘米皮膚區(qū)域1 ii g至2000 ii g APC，或APC 所涂覆的每平方厘米皮膚區(qū)域10 u g至1000 u g APC，或APC所涂覆的每平方厘米皮膚區(qū)域 10 y g M 200 y g、$ 10 y g M 400 y g、$ 10 y g M 800 y g APC。
[0107] 視病狀的性質而定，APC可每周一次直至每日兩次加以施用。通常持續(xù)至多20周 的連續(xù)日或至多6周的連續(xù)日來提供它。
[0108] B. 1治療方法-局部
[0109] 當相關皮膚區(qū)域是含有被破壞皮膚表面的皮膚區(qū)域時，例如使用糊劑、凝膠劑、霜 齊U、油劑、洗劑、泡沫劑、軟膏劑或類似物質的局部治療方法是特別適用的，因為這允許APC 滲透至皮膚組織的駐留有炎性角質化細胞的相關層中。然而，當皮膚表面實質上未破壞時， 也可例如向牛皮癬斑塊涂覆這些治療劑。
[0110] 在一個實施方案中，APC的治療有效量可為每平方厘米皮膚區(qū)域0. 1至2000 ilg、 優(yōu)選20至200 y gAPC。當皮膚更嚴重受影響時，較高量通常是優(yōu)選的，且通常就其中病變 伴有潰瘍而存在的重度慢性斑塊型牛皮癬[牛皮癬面積和嚴重性指數(shù)（PASI)大于或等于 12,體表面積（BSA)大于或等于10]而言是優(yōu)選的，其中APC可促進潰瘍愈合。當皮膚未嚴 重受影響時，例如當病變不伴有潰瘍而存在時，較低量可為優(yōu)選的。
[0111] 制劑中的APC濃度可在約10ug/ml與lmg/ml之間，且涂覆于皮膚區(qū)域的組合物的 體積是約l〇〇ul至10ml。
[0112] 通常，當相關病狀是牛皮癬時，通常用無菌表面，如手指或藥勺向皮膚的至多約 l〇mm厚度、優(yōu)選約3mm厚度的層中提供組合物。它可接著被摩擦或按摩至皮膚區(qū)域和周圍 區(qū)域中。涂覆通常是每天一次至每周一次，且通常不長于20周或不長于12周。
[0113] 類似涂覆工序和劑量方案可應用于治療粉刺或異位性皮炎。
[0114] 在一個實施方案中，含有APC的組合物可涂覆于固體基質，即繃帶、敷料等，且接 著將基質固定于相關皮膚區(qū)域。
[0115] B. 2治療方法-皮內灃射
[0116] 在某些實施方案中，以上結果是通過建立局部APC濃度高于基線至少2倍來獲得。 APC的此量可通過使用如上提及的ELISA和顯色底物Spectrozyme PCa測定測量皮膚活檢 體的APC活性來測量。當角質層是完整的且具有APC有限滲透過表面皮膚層的所述性質時， 皮內或皮下注射通常優(yōu)選作為施用途徑。通常，可使用lml注射器上的關于（約28-34G) 針的精細規(guī)格針?？山o與多次注射以覆蓋皮膚表面積，其中每厘米對應約1次注射。每次 注射的量將自10U 1至lml變化，其中典型量是50iU。通常，自每天一次至每周一次給與 施用，且通常不長于20周。皮內或皮下注射可與表面涂覆APC同時使用。優(yōu)選適應癥是牛 皮癬或異位性皮炎，但特征在于角質化細胞過度增殖的其它病狀可經受此治療。
[0117] 皮下/皮內施用的一示例性實施方案可適用于重度慢性斑塊型牛皮癬[牛皮癬面 積和嚴重性指數(shù)（PASI)彡12,體表面積（BSA)彡10]，其中病變伴有或不伴有潰瘍而存在。 視斑塊或病變的尺寸而定，APC是在200-2000 y g的劑量下，一周兩次持續(xù)12周皮下施用， 繼之以4周追蹤時期。注射是通過30號針以總體積500 ill至5ml，優(yōu)選lml來進行。APC 是在病變周圍相等間隔的部位處多次（皮內或皮下）注射一如果病變< l〇cm2,那么存在4 個部位，且部位數(shù)目和劑量隨病變尺寸增加而成比例增加。將APC溶解于水中以制備等張 緩沖鹽溶液。必要時，此治療可與表面治療組合。呈液體形式的APC可被每日涂覆在病變 上，持續(xù)與皮下治療相同的時期。在兩個研究（用或不用表面治療）中，可分析PASI、靜態(tài) 醫(yī)師整體評估（sPGA)、皮膚學生活質量指數(shù)（DLQI)、不利事件以及常規(guī)血液學和實驗室數(shù) 值（例如細胞因子、組織學檢查、PC/APC活性）。預期結果：預期在第12周時，所有患者的 PASI都改善> 30%且50%患者的PASI改善> 60%。
[0118] 在一個實施方案中，上述方法包括使皮膚區(qū)域與消炎量的APC接觸的步驟。
[0119] 在一個實施方案中，上述方法包括使皮膚區(qū)域與生長刺激量的APC接觸的步驟。
[0120] 在一個實施方案中，上述方法包括使皮膚區(qū)域與細胞凋亡誘導量的APC接觸的步 驟。
[0121] C.APC及其制劑
[0122] 用于上述方法中的APC可采用組合物形式，或另外通過如下所述的方法獲得。
[0123] APC可通過體外活化自血漿純化或通過用本領域中熟知的方法執(zhí)行重組DNA技術 制備的蛋白C來制備。參見例如美國專利號4, 981，952、5, 151，268、5, 831，025、6, 156, 734、 6, 268, 344 和 6, 395, 270。
[0124] 或者，APC可直接通過重組DNA技術來制備。參見例如美國專利號4, 981，952、 5, 151，268、6, 156, 734、6, 268, 344和6, 395, 270。重組活化蛋白C可通過體外活化重組人 蛋白C酶原或通過直接自細胞分泌活化形式的蛋白C來產生。蛋白C可在轉基因動物、轉 基因植物或多種真核細胞中產生，包括例如以酶原形式自人腎293細胞分泌，接著通過為 熟練技術人員所知的技術來純化并活化。
[0125] APC可來自任何動物物種，但人APC是優(yōu)選的。
[0126] APC的片段和衍生物可用于實施本發(fā)明，前提是它們展現(xiàn)本文所述的活性。參 見例如美國專利號 5, 151，268、5, 453, 373 和 5, 516, 650 以及 PCT 申請 TO 89/12685、W0 01/56532、TO 01/59084 和 TO01/72328。
[0127] APC可為人APC的具有人APC的蛋白水解、酰胺水解、酯水解和生物（抗凝血、消炎 或促纖維蛋白溶解）活性特征的衍生物。蛋白C衍生物的實例由Gerlitz，等，美國專利號 5, 453, 373以及Foster，等，美國專利號5, 516, 650加以描述，所述專利的全部教導據(jù)此以 引用的方式并入本文。
[0128] ACC的適合藥物組合物包含APC和藥學上可接受的載體。參見例如美國專利號 6, 395, 270 和 6, 159, 468 以及 PCT 申請 W0 98/48818、W0 01/56532 和 W0 01/72328。含有 ACC的組合物可通常為作為具有高純度的穩(wěn)定凍干產物的包含增積劑（如蔗糖、甘露糖醇、 海藻糖和棉子糖）、鹽（如氯化鈉和氯化鉀）、緩沖劑（如檸檬酸鈉、Tris-乙酸鹽和磷酸鈉） 和ACC的組合物。舉例來說，穩(wěn)定凍干組合物可包含重量比約1份ACC、約7-8份之間的鹽、 和約5-7份之間的增積劑。所述穩(wěn)定凍干組合物的一實例是：每個小瓶5. 0mgACC、30mg鹿 糖、38mg NaCl 和 7. 56mg 朽1 檬酸鹽，pH 6. 0。
[0129] C. 1局部施用的制劑
[0130] 在一個特別優(yōu)選實施方案中，ACC是以適合于根據(jù)在以上章節(jié)B下所述的方法向 患有相關病癥的受試者的相關皮膚病變、斑塊或其它皮膚表面進行局部施用的組合物或制 劑形式提供。所述制劑的實例包括可直接向相關表面涂覆，從而使得能夠向相關部位局部 施用ACC的制劑。這些制劑包括凝膠劑、油劑、噴霧劑、滾球式制劑、軟膏劑、洗劑、泡沫劑 等。在一個實施方案中，APC是以甲基纖維素凝膠劑形式提供且可含有穩(wěn)定劑，如碳水化合 物和鹽。
[0131] 皮膚軟膏劑可為有機、健康、美容或醫(yī)學成分通常于石油基質中的組合。這賦予皮 膚軟膏劑稠密、水溶性較小的配方，其在身體表面上停留較長久以使成分可更有效起治療 廣泛多種問題的作用。存在可自公司（如Therapex)定購的許多天然和有機皮膚軟膏劑。
[0132] 也可使用丙酸氯倍他索（CP)泡沫劑（0.05% )。這是一種在美國已用于治療皮 質類固醇反應性皮膚病的炎性和瘙癢性表現(xiàn)形式以及在加拿大用于中度至重度異位性皮 炎的炎性和瘙癢性表現(xiàn)形式的乳液氣霧泡沫劑（Olux-E(丙酸氯倍他索）泡沫劑，0. 05% Stiefel Laboratories Inc, Research Triangle Park, NC(2011))〇
[0133] 當制劑是凝膠劑時，它可以每克凝膠劑10-5000 ii g的量含有APC。
[0134] C. 2可灃射制劑
[0135] APC 的一特別優(yōu)選制劑是由 Eli Lilly and Co. (Indianapolis，Indiana)在商標 Xigris?下銷售的產品。Xigris?是以供靜脈內輸注的無菌凍干粉末形式供應。Xigris? 的5mg小瓶含有5. 3mg/小瓶的人重組APC、31. 8mg/小瓶的鹿糖、40. 3mg/小瓶的NaCl 和10. 9mg/小瓶的檸檬酸鈉，而Xigris?的20mg小瓶含有20. 8mg/小瓶的人重組APC、 124. 9mg/小瓶的鹿糖、158. lmg/小瓶的NaCl和42. 9mg/小瓶的朽1檬酸鈉。小瓶是用USP 無菌注射用水復原以得到約2!^/!111濃度的4?(：，且此稀釋的4?(：被接著添加至0.9%氯化 鈉注射液中以得到約100至約5000 y g/ml濃度的APC供向患者施用。這是用于通過如以 上在章節(jié)B下所述的皮下注射技術施用APC的特別優(yōu)選制劑。
[0136] 無論以表面方式抑或通過皮下注射來施用，在某些實施方案中，相關制劑都可含 有蛋白C作為APC的替代物，或除APC之外，也可含有蛋白C。舉例來說，可施用有效量的蛋 白C，其在體內將通過內源性蛋白C路徑活化以產生APC。參見例如美國專利號5, 151，268 和PCT申請W0 93/09807。如上所指示，蛋白C可自血漿純化或可通過重組DNA技術來 制備。參見例如美國專利號 4,959,318、4,981，952、5,093, 117、5, 151，268、5,571，786、 6, 156, 734、6, 268, 344和6, 395, 270。包含蛋白C的適合藥物組合物是已知的（參見例如 美國專利號 5, 151，268 和 5, 571，786)。
[0137] 也可通過施用一定量的增加蛋白C在動物中的合成的試劑來增加APC的內源 性產量。參見例如PCT申請W0 93/09807。適合試劑包括合成代謝類固醇（例如達那唑 (danazolol))。參見例如 PCT 申請 TO 93/09807。
[0138] 在某些實施方案中，可通過施用有效導致體內自內源性合成的蛋白C和/或自共 施用的蛋白C產生APC的一定量的蛋白C活化劑來增加APC的內源性產量。參見例如PCT 申請W0 93/09807。蛋白C活化劑是導致或增加APC產生的任何化合物。適合蛋白C活 化劑包括凝血酶、a -凝血酶、活性位點?；?、凝血酶類似物和突變體（例如凝血酶 E192Q和凝血酶K52E)、可溶性凝血酶-血栓調節(jié)蛋白復合物、將阻止凝血酶-血栓調節(jié)蛋 白復合物的清除或衰退的試劑、增強血栓調節(jié)蛋白的合成或延遲血栓調節(jié)蛋白的清除的試 齊U、毒物（如普羅太克（Protac)或拉塞爾（Russel)蝰蛇毒物）、因子Xa、纖維蛋白溶酶、胰 蛋白酶以及能夠導致或增加自蛋白C產生APC的任何其它毒物、酶或化合物。參見例如PCT 申請W0 93/09807。優(yōu)選蛋白C活化劑是凝血酶和活性位點酰化凝血酶。
[0139] 在一些實施方案中，APC可與用于控制炎癥、細胞增殖和細胞凋亡的一者或多 者的另一藥劑一起施用。一種特別優(yōu)選藥劑是抗IL-17抗體，具體來說是伊賽珠單抗 (Ixekizumab)，其在患有慢性斑塊牛皮癬的患者中進行的II期研究中顯示相較于安慰劑， 在皮膚疾病嚴重性計分方面顯著改善（NEJM，2012)。用于控制炎癥的藥劑的其它實例包括 TNF-a抑制劑以及消炎性細胞因子和生物醫(yī)藥。
[0140] 應了解的是，在本說明書中公開和定義的本發(fā)明延伸至兩個或更多個提及的或根 據(jù)正文或圖式顯而易見的個別特征的所有替代性組合。所有這些不同組合構成本發(fā)明的各 個替代性方面。
[0141] 本發(fā)明的其它方面和先前段落中所述的各方面的其它實施方案將根據(jù)通過舉例 方式以及參照隨附圖式所給出的以下描述而變得顯而易見。 實施例
[0142] 實施例1.確立APC對緩慢牛長非炎件角質化細朐和牛皮癬皮膚角質化細朐的詵 擇件抗細朐凋亡活件的臨床前試駘
[0143] 招募6名患有活動性慢性斑塊牛皮癬的患者和6名正常個體。他們在取樣之前至 少4周尚未接受任何治療。在局部麻醉劑下自同一慢性斑塊獲取兩個6mm穿孔活檢體。如 先前所述（20)分離角質化細胞。
[0144] 正常角質化細胞用細胞因子[IL-1 a (l0ng/ml)、IL_6 (5ng/ml)、TNF_ a (5ng/ml)、 IL-17A(10ng/ml)]的混合物處理以誘導牛皮癬表型。在l、10iig/ml下添加APC至角質化 細胞中且處理24、48和72小時。使用MTT測定、Brdu增殖測定考查細胞增殖/存活。通過 TUNEL測定、流動式細胞測量術（碘化丙啶（PI)或PI加膜聯(lián)蛋白-V)來考查細胞凋亡。通 過RT實時PCR和EL ISA來檢測細胞因子產量和四個所選牛皮癬相關基因TNF、DEFB4、CAMP、PI3。通過蛋白質印跡來檢測細胞凋亡信號分子卡斯帕酶（capase)_3、卡斯帕酶-8和卡斯 帕酶-9以及MAK激酶ERK的活化和表達。
[0145] 結果將顯示APC誘導牛皮癬性角質化細胞的細胞凋亡且減緩其生長，而它刺激正 常角質化細胞的生長和存活。APC也降低炎性細胞因子IL-1、TNF-a、IL-17和IL-6以及 牛皮癬相關分子TNF、DEFB4、CAMP、PI3的水平。在用炎性介體處理的正常對照細胞中，細 胞生長得以增強且添加APC使此作用逆轉。總之，結果將明確顯示APC不僅可抑制與牛皮 癬性角質化細胞相關的炎癥，而且它也降低與這些細胞相關的特征性過度增殖。
[0146] 實施例2.用皮下APC歷經12周的2期預試駘
[0147] 患者選擇：招募5名患有重度慢性斑塊型牛皮癬[牛皮癬面積和嚴重性指數(shù) (PASI)彡12,體表面積（BSA)彡10]的患者。主要納入標準包括患者是18至70歲，已患有 穩(wěn)定斑塊牛皮癬至少6個月。主要排除標準包括：i)患者患有非斑塊或藥物誘發(fā)性牛皮癬； ii)在研究之前28天內使用生物制劑，如利妥昔單抗（rituximab)、阿巴西普（abatacept)、 英夫利昔單抗、阿達木單抗（adalimumab)、環(huán)孢靈（cyclosporine)或霉酚酸和依那西普 (etanercept)或阿那白滯素（anakinra) ;iii)患者在研究之前8周期間已接受抗牛皮癬 治療，包括任何光照療法，以及在研究之前4周期間用除溫和潤膚劑以外的針對牛皮癬的 任何標準表面療法治療；iv)在研究期間使用的表面療法限于僅在頭皮、腋窩和腹股溝上 使用的III至VII類糖皮質素；v)有任何活動性或新近感染的跡象或有惡性腫瘤或其它自 體免疫性疾病的病史，妊娠婦女也是排除標準。
[0148] 治療：一周兩次向患者皮下施用400ugAPC/斑塊，持續(xù)多達12周或當斑塊消除時。 圍繞（如先前所述）周邊以及在牛皮癬斑塊下均勻注射APC，且類似地向對稱地位于身體 另一側的對照斑塊中注射單獨媒介物（安慰劑）。接著在最終治療之后再持續(xù)4周追蹤患 者。
[0149] 測量：分析PASI、靜態(tài)醫(yī)師整體評估（sPGA)、皮膚學生活質量指數(shù)（DLQI)、不利事 件以及常規(guī)血液學和實驗室數(shù)值（例如細胞因子、組織學檢查、PC/APC活性）。安全性考慮 包括流血風險、頭痛、疲勞、感染和過敏。相關細胞和生物化學事件包括白血球、嗜中性白細 胞和血小板計數(shù)；凝血活性、PC/APC水平和血清中針對APC的抗體形成。獲取4mm活檢體 以進行PC/APC和EPCR的組織學檢查，以及評估主要牛皮癬性參數(shù)，如棘皮癥、表皮角化病 和角化不全、表皮的有絲分裂活性、乳頭狀水腫、毛細管擴張和扭曲、及分別在真皮、棘層以 及角質層中的嗜中性白細胞。
[0150] 統(tǒng)計分析：使用1側2樣本t檢驗在顯著水平0. 05下比較基線值和在治療期間的 各周和治療之后4周時的值。
[0151] 結果和討論：APC治療將顯示是安全的和良好耐受的，且患者將顯示牛皮癬病變 消除至少60%，其中5名患者中的3名顯示斑塊完全消除。在4周追蹤期間，APC的作用將 得以持續(xù)。所有患者都將顯示PASI、sPGA、DLQI改善以及無不利作用且反應于治療無APC 抗體形成?？捎^察到表皮厚度和皮膚中炎性細胞顯著降低，且EPCR的角質化細胞表達增 力口，然而，循環(huán)PC/APC水平不受影響?？傊?，結果將顯示APC針對牛皮癬斑塊是安全的，良 好耐受的和高度有效的。
[0152] 實施例3用皮下aPC在10名患者中講行的針對尋常癉瘡的2期預試駘
[0153] 患者選擇：招募10名患有尋常痤瘡的患者。主要納入標準包括：患者是18至30 歲，已患有雙側性面部粉刺至少6個月。主要排除標準包括有任何活動性或新近感染的跡 象；或有惡性腫瘤或其它自體免疫性疾病的病史；妊娠婦女。
[0154] 治療：一天一次以凝膠劑形式向患者施用200ug APC，持續(xù)12周或當粉刺消除時。 向患者提供以兩管標記有L和R的凝膠劑且建議向指定受影響區(qū)域涂覆自管擠壓的2cm凝 膠劑（L在左側臉上而R在右側臉上），并均勻摩擦。接著在最終治療之后再持續(xù)4周追蹤 患者。
[0155] 測量：在治療之前以及每4周進行照相且使用電腦輔助的圖像分析計算粉刺面 積。分析不利事件以及常規(guī)血液學和實驗室數(shù)值（例如細胞因子、組織學檢查、PC/APC活 性）。監(jiān)測安全性，包括流血風險、頭痛、疲勞、感染、過敏。相關細胞和生物化學事件包括白 血球、嗜中性白細胞和血小板計數(shù)；凝血活性、PC/APC水平和血清中針對APC的抗體形成。
[0156] 統(tǒng)計分析：使用1側2樣本t檢驗在顯著水平0. 05下比較基線值和在治療期間的 各周和治療之后4周時的值。
[0157] 結果和討論：APC治療將顯示是安全的和良好耐受的，且患者將顯示粉刺消除至 少50%。在4周追蹤期間，APC的作用將得以持續(xù)。將不存在不利作用且反應于治療無APC 抗體形成。應存在表皮厚度和皮膚中炎性細胞顯著降低，EPCR的角質化細胞表達增加，然 而，循環(huán)PC/APC水平不受影響。總之，我們的結果將顯示APC針對尋常痤瘡是安全的，良好 耐受的和高度有效的。
[0158] 實施例4凝膠制劑和治療涂覆
[0159] 此實施例提供一種非無菌性、低生物負荷、防腐羧甲基纖維素鈉基表面凝膠劑，其 含有活性成分活化蛋白C和以下非活性成分：羧甲基纖維素鈉、冰乙酸、1-賴氨酸鹽酸鹽、 間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、三水乙酸鈉、氯化鈉和注射用水。每克凝膠 劑含有l(wèi)〇〇ug活化蛋白C。
[0160] 實施例5凝膠制劑和治療涂覆
[0161] Ca.l'b〇p〇l(、?_ *Ultrez 30 聚合物（Lubrizol Advanced Materials, Inc)與黃原 膠組合在1%水楊酸和5%含電解質提取物存在下在此冷法制劑（pH 4)中提供良好粘度。 GlucamTM*E 20保濕劑連同甘油一起賦予保濕性。以下是配方。
【權利要求】
1. 一種治療個體的特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚病癥的方法，其包括： 提供具有特征在于存在過度增殖性角質化細胞的皮膚區(qū)域的個體； 使所述皮膚區(qū)域與治療有效量的活化蛋白C(APC)接觸； 從而治療所述個體的所述皮膚病癥。
2. 如權利要求1所述的方法，其中所述治療有效量的APC使所述皮膚區(qū)域中的炎癥減 至最輕。
3. 如權利要求1或權利要求2所述的方法，其中所述治療有效量的APC使所述皮膚區(qū) 域中的細胞凋亡減至最少。
4. 如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述治療有效量的APC不抑制正常角質 化細胞的生長，或誘導正常角質化細胞的增殖。
5. 如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述治療有效量的APC是每平方厘米所 述皮膚區(qū)域lug至5mg APC。
6. 如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述APC是以凝膠劑、霜劑、軟膏劑、噴 霧劑、洗劑或適合于與皮膚表面接觸的類似制劑形式提供來與所述皮膚區(qū)域接觸。
7. 如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述APC是以適合于皮下注射的組合 物形式提供來與所述皮膚區(qū)域接觸。
8. 如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述皮膚病癥的特征在于以下過程中的 一個或多個：細胞凋亡、炎癥、屏障功能受損。
9. 如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述皮膚病癥選自由牛皮癬、皰疫樣皮 炎、尋常天皰瘡和白癜風組成的組。
10. 如權利要求1至9中任一項所述的方法，其中所述皮膚病癥是非膿皰性牛皮癬。
11. 如權利要求10所述的方法，其中所述牛皮癬是尋常性牛皮癬或紅皮病性牛皮癬。
12. 如權利要求1至9中任一項所述的方法，其中所述皮膚病癥是膿皰性牛皮癬。
13. 如權利要求12所述的方法，其中所述牛皮癬是全身性膿皰性牛皮癬、掌跖膿皰病、 環(huán)狀膿皰性牛皮癬、連續(xù)性肢端皮炎或皰疹樣膿皰病。
14. 如前述權利要求中任一項所述的方法，其中與APC接觸的所述皮膚區(qū)域是牛皮癬 斑塊。
15. 如前述權利要求中任一項所述的方法，其包括向所述個體提供抗炎劑的其它步驟。
16. -種治療個體的牛皮癬的方法，其包括： 提供具有牛皮癬斑塊的個體； 向所述斑塊涂覆包含治療有效量的活化蛋白C(APC)的組合物； 從而治療所述個體的牛皮癬。
17. -種治療個體的粉刺的方法，其包括： 提供患有粉刺的個體； 向所述粉刺涂覆包含治療有效量的活化蛋白C(APC)的組合物； 從而治療所述個體的粉刺。
18. -種治療個體的異位性皮炎的方法，其包括： 提供患有異位性皮炎的個體； 向所述異位性皮炎涂覆包含治療有效量的活化蛋白C(APC)的組合物； 從而治療所述個體的異位性皮炎。
19. 一種包含治療有效量的APC的組合物，其用于使個體的特征在于存在過度增殖性 角質化細胞的皮膚病癥減至最輕。
【文檔編號】A61P17/06GK104394883SQ201380034024
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2013年7月4日 優(yōu)先權日:2012年7月4日
【發(fā)明者】克里斯托弗·約翰·杰克遜, 薛妹朗 申請人:悉尼大學