抗原能夠容納兩個(gè)對(duì)應(yīng)抗體同時(shí)結(jié)合，則表位被稱為是個(gè)別的（獨(dú)特的）。
[0050] 術(shù)語(yǔ)"競(jìng)爭(zhēng)抗體"如本文所用，意指結(jié)合至與對(duì)抗如本文所述aPC的抗體大概、實(shí) 質(zhì)上或基本上相同、或甚至相同表位的抗體。"競(jìng)爭(zhēng)抗體"包括具有重疊表位特異性的抗體。 因此，競(jìng)爭(zhēng)抗體能夠有效與如本文所述抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至aPC。在一些實(shí)施方式中，競(jìng)爭(zhēng)抗體 可結(jié)合至與如本文所述抗體相同的表位。換個(gè)角度來(lái)看，競(jìng)爭(zhēng)抗體具有與如本文所述抗體 相同的表位特異性。
[0051] 如本文所述，"保守性置換"意指多肽修飾，其涉及將一或多個(gè)氨基酸置換成具有 相似生物化學(xué)特性但不造成多肽的生物或生物化學(xué)功能喪失的氨基酸。"保守性氨基酸置 換"是其中將氨基酸殘基以具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基取代。具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘 基家族在本領(lǐng)域中已經(jīng)定義。該家族包括下列：具有堿性側(cè)鏈（例如賴氨酸、精氨酸、組氨 酸）、酸性側(cè)鏈（例如天冬氨酸、谷氨酸）、不帶電極性側(cè)鏈（例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰 胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸）、非極性側(cè)鏈（例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨 酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸）、0分支側(cè)鏈（例如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸） 以及芳香族側(cè)鏈（例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸）的氨基酸。本公開內(nèi)容的抗體 可具有一或多個(gè)仍保留抗原結(jié)合活性的保守性氨基酸置換。
[0052] 關(guān)于核酸以及多肽，術(shù)語(yǔ)"實(shí)質(zhì)同源性"表示兩個(gè)核酸或兩個(gè)多肽或其指定序列 在應(yīng)用適當(dāng)核苷酸或氨基酸插入或缺失最佳比對(duì)并比較時(shí)，在至少約80%的核苷酸或氨基 酸，通常至少約85%，在一些實(shí)施方式中約90%、91%、92%、93%、94%或95%，在至少一個(gè)實(shí)施方 式中至少約96%、97%、98%、99%、99. 1%、99. 2%、99. 3%、99. 4%或99. 5%的核苷酸或氨基酸中是 相同的?？蛇x地，當(dāng)區(qū)段在選擇雜交條件下會(huì)與該鏈的互補(bǔ)體雜交時(shí)，存在核酸的實(shí)質(zhì)同源 性。與本文陳述的特定核酸序列以及氨基酸序列具有實(shí)質(zhì)同源性的核酸序列以及多肽序列 也包括在內(nèi)。
[0053] 兩個(gè)序列之間的同一性百分比是序列所共有的相同位置的數(shù)目的函數(shù)（也 即，％同源性=相同位置數(shù)/位置總數(shù)X 100)，考慮空位數(shù)以及各個(gè)空位長(zhǎng)度，其需要被 引入用于兩個(gè)序列的最佳比對(duì)。序列比較以及兩個(gè)序列之間的同一性百分比測(cè)定可使 用數(shù)學(xué)計(jì)算法來(lái)完成，例如而非限制，為VectorNTI ?的AlignX ?模塊（Invitrogen Corp.，Carlsbad, CA)。對(duì)于AlignX ?，多重比對(duì)的缺省參數(shù)為：空位開放罰分：10 ;空位 延伸罰分：〇. 05 ;空位分離罰分范圍：8 ;比對(duì)延遲的同一性％ :40(更多詳細(xì)內(nèi)容見于http : //www.invitrogen.com/site/us/en/home/T,TNNRA-QnI ine~Gui des/T,TNNRA-Communi ti es/ Vector-NTI-Community/Sequence-analysis-and-data-management-software-for-PCs/ AlignX-Module-for-Vector-NTI-Advance. reg. us. html)〇
[0054] 測(cè)定查詢序列（本公開內(nèi)容的序列）以及目標(biāo)序列之間的最佳整體匹配的 另一個(gè)方法也稱為全局序列比對(duì)（global sequence alignment)，其可使用CLUSTALW 計(jì)算機(jī)程序（Thompson et al.，Nucleic Acids Research, 1"4, 2 (22) :4673_468〇) 來(lái)測(cè)定，該計(jì)算機(jī)程序是以Higgins等人的算法（Computer Applications in the Biosciences(CABIOS)，1992, 8(2) :189-191)為基礎(chǔ)。在序列比對(duì)時(shí)，查詢序列以及目標(biāo)序 列均為DNA序列。該全局序列比對(duì)的結(jié)果是以同一性百分比來(lái)表示?？捎糜贒NA序列的 CLUSTALW比對(duì)中以通過(guò)成對(duì)比對(duì)來(lái)計(jì)算同一性百分比的參數(shù)為：矩陣=IUB、k-tupIe=1、頂 對(duì)角數(shù)目（Number of Top Diagonals) =5、空位罰分=3、空位開放罰分=10、空位延伸罰分 =〇. 1。關(guān)于多重比對(duì)，可使用下列CLUSTALW參數(shù)：空位開放罰分=10、空位延伸罰分=0.05 ; 空位分離罰分范圍=8 ;比對(duì)延遲的同一,性％=40。
[0055] 核酸可存在于整個(gè)細(xì)胞中、在細(xì)胞裂解物中、或呈部分純化或?qū)嵸|(zhì)上純的形式。當(dāng) 從在天然環(huán)境中與核酸通常締合的其它細(xì)胞組分純化出來(lái)時(shí)，核酸是"分離的"或"使其實(shí) 質(zhì)上純的"。為了分離核酸，可使用諸如下列的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)：堿/SDS處理、CsCl成帶、柱層析、 瓊脂糖凝膠電泳以及本領(lǐng)域熟知的其它技術(shù)。
[0056] 針對(duì)活化蛋白C的單克隆抗體 已知aPC的抗凝特性。在血友病中或在傷口導(dǎo)致止血暫時(shí)喪失的創(chuàng)傷患者中穩(wěn)態(tài)失調(diào) 的出血性病癥可通過(guò)aPC抑制劑治療?？贵w、其抗原-結(jié)合片段以及其它aPC特異性蛋白 質(zhì)支架可用于提供靶向特異性來(lái)抑制aPC蛋白質(zhì)的子集發(fā)揮作用，同時(shí)保留余者。假定血 漿中aPC濃度（<4ng/ml)對(duì)PC(4ug/ml)差異為至少1000倍，任一種潛在aPC抑制劑療法 的增加的特異性有助于阻斷aPC在高循環(huán)過(guò)量PC存在下發(fā)揮作用。
[0057] 阻斷aPC的抗凝功能的aPC特異性抗體可作為治療劑用于患有出血性病癥的患 者，出血性病癥包括，例如血友病、帶有抑制劑的血友病患者、創(chuàng)傷引起的凝血紊亂、在通過(guò) aPC治療敗血癥期間嚴(yán)重出血的患者、擇期手術(shù)引起的出血諸如移植、心臟手術(shù)、整形外科 手術(shù)、或月經(jīng)過(guò)多引起的過(guò)度出血。
[0058] 具有長(zhǎng)循環(huán)半衰期的抗-aPC抗體可用于治療慢性疾病如血友病。具有較短半衰 期的aPC抗體片段或aPC-結(jié)合蛋白質(zhì)支架對(duì)于急性用途（例如在創(chuàng)傷中的治療用途）可 更為有效。因?yàn)閍PC是多功能蛋白質(zhì)，包括抗體、抗原-結(jié)合抗體片段、aPC-特異性蛋白質(zhì) 支架的親和性與靶向特異性增加的選擇性aPC功能阻斷劑（SAFB)可選擇性地僅只阻斷一 個(gè)aPC功能而不影響其它aPC功能。
[0059] 通過(guò)淘選以及篩選對(duì)抗人aPC的人抗體庫(kù)來(lái)鑒定aPC-結(jié)合抗體。經(jīng)鑒定的抗體 表現(xiàn)不結(jié)合或最低結(jié)合至人PC。對(duì)分離的每一單克隆抗體的重鏈可變區(qū)以及輕鏈可變區(qū)進(jìn) 行測(cè)序并鑒定其CDR區(qū)。對(duì)應(yīng)于aPC-特異性單克隆抗體每一個(gè)的重鏈區(qū)與輕鏈區(qū)的序列 標(biāo)識(shí)號(hào)（"SEQ ID NO : "）歸納于表1中。
[0060] 表1.人抗aPC抗體
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至活化蛋白C并抑制抗凝活性、但對(duì)未活化 蛋白C具有最低結(jié)合，其中所述抗體包含含有選自SEQ ID N0s:14、15、17、18、19、21、22、 23、109、111、113、115、117以及119的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
2. 分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至活化蛋白C并抑制抗凝活性、但對(duì)未活化 蛋白C具有最低結(jié)合，其中所述抗體包含含有選自SEQ ID N0s:4、5、7、8、9、ll、12、13、108、 110、112、114、116以及118的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
3. 如權(quán)利要求1的分離的單克隆抗體，其進(jìn)一步包含含有選自SEQ ID NOs :4、5、7、8、 9、11、12、13、108、110、112、114、116以及118的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
4. 如權(quán)利要求3的分離的單克隆抗體，其中所述抗體包含含有下列的重鏈與輕鏈可變 區(qū)： a) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :14的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :4的氨基酸序列； b) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :15的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :5的氨基酸序列； c) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :17的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :7的氨基酸序列； d) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :18的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :8的氨基酸序列； e) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :19的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :9的氨基酸序列； f) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :21的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 11的氨基酸序列； g) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :22的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 12的氨基酸序列； h) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO :23的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 13的氨基酸序列； i) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO: 109的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 108的氨基酸序列； j) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO: 111的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 110的氨基酸序列； k) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO: 113的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 112的氨基酸序列； l) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO: 115的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 114的氨基酸序列； m) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO: 117的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 116的氨基酸序列；以及 n) 重鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO: 119的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其含有SEQ ID NO : 118的氨基酸序列。
5. 分離的單克隆抗體，其中所述抗體結(jié)合至活化蛋白C并抑制抗凝活性、但對(duì)未活化 蛋白C具有最低結(jié)合，其中所述抗體包含含有選自SEQ ID N0s:94、95、97、98、99、101、102 以及103的氨基酸序列的⑶R3。
6. 如權(quán)利要求5的分離的單克隆抗體，其中所述抗體進(jìn)一步包含：(a)含有選自SEQ ID NOs :74、75、77、78、79、81、82 以及 83 的氨基酸序列的 CDR1，（b)含有選自 SEQ ID NOs :84、 85、87、88、89、91、92 以及 93 的氨基酸序列的 CDR2,或（c)含有選自 SEQ ID NOs :74、75、77、 78、79、81、82以及83的氨基酸序列的〇?1以及含有選自5