一種辣木葉總黃酮的提取方法及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種辣木葉總黃酮的提取方法及其用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 尿酸是一種含有碳、氮、氧、氫的雜環(huán)化合物，是人類嘌呤代謝的最終產(chǎn)物，通常由 黃嘌呤氧化酶催化生成，正常情況下，人體內(nèi)尿酸的生產(chǎn)和排泄保持著動(dòng)態(tài)平衡，若尿酸生 產(chǎn)過多或排出不足造成體內(nèi)尿酸的生成量和排泄量不平衡，從而導(dǎo)致血尿酸含量升高，弓丨 起一系列的并發(fā)癥，例如出現(xiàn)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性腎臟病變、痛風(fēng)性腎結(jié)石、痛風(fēng)性心臟 病、痛風(fēng)性高血壓等嚴(yán)重并發(fā)癥，嚴(yán)重的影響著人類的身體健康。
[0003] 隨著人們生活水平提高和飲食結(jié)構(gòu)改變，高尿酸血癥的患病率日益上升，嚴(yán)重威 脅到人類的健康。降低尿酸主要有三種途徑：一是防止細(xì)胞內(nèi)核酸的氧化分解，該途徑的治 療方法是長(zhǎng)期服用一些抗核酸氧化的物質(zhì)，如蝦青素、花青素，但是該類物質(zhì)主要用于治療 尿酸升高引起的痛風(fēng)疾病，對(duì)其他高尿酸引起的并發(fā)癥治療效果不顯著；二是阻斷尿酸的 繼續(xù)產(chǎn)生或新生尿酸的形成，該途徑的治療主要采用別嘌呤醇抑制黃嘌呤氧化酶的活性， 阻斷尿酸的繼續(xù)產(chǎn)生或新生尿酸的形成，但是該藥物對(duì)已經(jīng)生產(chǎn)的尿酸不起作用，而且由 于黃嘌呤氧化酶的活性受抑，可造成尿酸前體物質(zhì)黃嘌呤和次黃嘌呤的堆積，而黃嘌呤和 次黃嘌呤也有腎毒性。三是促進(jìn)尿酸的排泄，食用堿性食物或降尿酸茶能適度堿化尿液，以 促進(jìn)尿酸排泄，但是該途徑降尿酸效果較慢，無法達(dá)到治療經(jīng)尿酸的作用。所以，研宄開發(fā) 一種毒副作用小，降尿酸效果明顯的天然降尿酸藥物，是目前亟需解決的難題。
[0004] 目前，隨著現(xiàn)代社會(huì)生活水平的提高，人們的平均壽命逐年上升，全球人口老年化 現(xiàn)象嚴(yán)峻。與高尿酸血癥一樣，老年癡呆癥的發(fā)病率不斷上升，成為危害老年人健康的頭號(hào) 殺手。老年癡呆癥是一種起病隱匿的進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。臨床上表現(xiàn)為 記憶障礙、失語、失用、失認(rèn)、視空間技能損害、執(zhí)行功能障礙以及人格和行為改變等特征， 隨著疾病的發(fā)展，患者會(huì)逐漸喪失生活自理能力，給患者的個(gè)人家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù) 擔(dān)。鑒于目前治療老年癡呆癥的西藥效果不明顯，人們開始更多的關(guān)注中藥藥物的研宄和 開發(fā)，許多中藥成分在改善老年癡呆癥的記憶能力，認(rèn)知功能及延緩衰老方面具有良好的 作用，而且中藥成分具有毒副作用低，對(duì)患者的身體具有一定的調(diào)節(jié)作用，更有利于患者的 康復(fù)。因此，中藥成分在治療老年癡呆癥疾病具有潛在的優(yōu)勢(shì)和廣闊的開發(fā)前景。
[0005] 辣木（MoringaoleiferaLam.)為辣木科辣木屬的植物，是多年生熱帶落葉喬木， 廣泛種植在亞洲和非洲熱帶和亞熱帶地區(qū)，對(duì)土壤條件和降雨量有很強(qiáng)的適應(yīng)性。我國 廣東、臺(tái)灣等地亦有栽培，辣木既可以供觀賞，而且根、葉和嫩果可食用；種子可榨油，含油 30%左右，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。經(jīng)研宄發(fā)現(xiàn)，辣木除了具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值外，在抗氧化、 降血糖、降血脂、抗真菌方面亦表現(xiàn)出良好的活性，而且辣木葉中的黃酮類化合物和多糖類 化合物具有降血糖、降脂、降壓、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、治療心血管病、改善睡眠等功效， 是具有極大研宄開拓潛力的植物。
[0006] 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)公開了辣木葉總黃酮的提取方法及其降血糖的作用（Vol. 26 No. 4Jul. 2007)經(jīng)試驗(yàn)證明辣木葉的總黃酮對(duì)降血糖具有顯著的作用，但辣木葉中總黃酮 對(duì)降尿酸和老年癡呆癥的作用尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)用于高尿酸血癥和老年癡呆癥的藥物治療效果不顯著，毒副作 用的大的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種辣木葉總黃酮的提取方法及其用途，以解決以 上缺陷。
[0008] 本發(fā)明提供的一種辣木葉總黃酮的提取方法，包括以下步驟： (1) 備料：稱取Ikg辣木葉于50°C干燥2-3h，粉碎，過40-50目篩，得辣木葉粉備用； (2) 脫脂：取步驟（1)辣木葉粉，加入辣木葉粉質(zhì)量2-4倍體積的石油醚，在68°C下回 流脫脂3次，每次5-7h，過濾去濾液，將濾渣干燥，得干燥濾渣備用； (3) 提取：往步驟（2)得到的干燥濾渣中加入濾渣質(zhì)量10-15倍體積的65%-75%乙 醇，在微波功率500-600W下處理6-8min，置75°C-80°C溫水浴中超聲提取2次，每次提取 20-30min，過濾得提取液，合并提取液，得辣木葉總黃酮粗提取液； (4) 純化：將步驟（3)得到的辣木葉總黃酮粗提液加入吸附樹脂柱中，依次用蒸餾水2 倍柱體積，體積分?jǐn)?shù)30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇各3倍體積進(jìn)行梯度洗脫，調(diào)節(jié)體積流量 為2mL/min，每管收集15min，以NaNO2-Al(NO3) 3_NaOH體系顯色檢測(cè)，在波長(zhǎng)為510nm下測(cè) 定吸光度檢識(shí)，收集50%和70%的乙醇洗脫液，合并洗脫液，將洗脫液減壓回收乙醇并濃縮 置原體積的1/5,得濃縮液，將濃縮液置于60°C水浴蒸干至相對(duì)密度0. 16-0. 25的浸膏，在 50°C低溫干燥至恒重，得辣木葉總黃酮粉末。
[0009] 本發(fā)明的辣木葉總黃酮的提取方法中步驟（2)中石油醚的沸程為60~90°C。其 中本發(fā)明步驟（3)中的吸附樹脂柱為AB-8型大孔吸附樹脂柱。
[0010] 本發(fā)明的辣木葉總黃酮的提取方法優(yōu)選為： (1) 備料：稱取Ikg辣木葉于50°C干燥2.5h，粉碎，過45目篩，得辣木葉粉備用； (2) 脫脂：取步驟（1)辣木葉粉，加入辣木葉粉質(zhì)量3倍體積的石油醚，在68°C下回流 脫脂3次，每次6h，過濾去濾液，將濾渣干燥，得干燥濾渣備用； (3) 提?。和襟E（2)得到的干燥濾渣中加入濾渣質(zhì)量12倍體積的70%乙醇，在微波功 率600W下處理7min，置80°C溫水浴中超聲提取2次，每次提取25min，過濾得提取液，合并 提取液，得辣木葉總黃酮粗提取液； (4) 純化：將步驟（3)得到的辣木葉總黃酮粗提液加入AB-8型大孔吸附樹脂柱中，依 次用蒸餾水2倍柱體積，體積分?jǐn)?shù)30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇各3倍體積進(jìn)行梯度洗脫， 調(diào)節(jié)體積流量為2mL/min，每管收集15min，以NaNO2-Al(NO3) 3-NaOH體系顯色檢測(cè)，在波長(zhǎng) 為510nm下測(cè)定吸光度檢識(shí)，收集50%和70%的乙醇洗脫液，合并洗脫液，將洗脫液減壓回 收乙醇并濃縮置原體積的1/5,得濃縮液，將濃縮液置于60°C水浴蒸干至相對(duì)密度0. 20的 浸膏，在50°C低溫干燥至恒重，得辣木葉總黃酮粉末。
[0011] 本發(fā)明的提取方法是經(jīng)石油醚脫脂、微波-超聲波協(xié)同萃取和AB-8型大孔吸附 樹脂柱除雜得到辣木葉總黃酮，為了保證總黃酮的質(zhì)量，本發(fā)明用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇、50% 乙醇、70%乙醇各3倍體積進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)以NaNO2-Al(NO3) 3-NaOH體系顯色檢測(cè)，在波 長(zhǎng)為510nm下測(cè)定吸光度檢識(shí)，發(fā)現(xiàn)辣木葉總黃酮在50%乙醇和70%乙醇中的含量較高， 即收集經(jīng)50%乙醇和70%乙醇洗脫的洗脫液，大大提高純化效率，因此，本發(fā)明以在510nm 的檢測(cè)波長(zhǎng)下有很大吸收的峰作為辣木葉黃酮類化合物特征吸收峰，辣木葉總黃酮含量為 18%-35%〇
[0012] 本發(fā)明的微波_超聲波協(xié)同萃取辣木葉總黃酮是利用微波能使細(xì)胞內(nèi)部的溫度 迅速上升，細(xì)胞內(nèi)部壓力增高使細(xì)胞破裂，藥材內(nèi)有效成分流出，并在較低的溫度下溶于萃 取液。該方法加熱均勻，熱效率較高，提取速度快。與比傳統(tǒng)的回流提取具有高效、省時(shí)、 節(jié)能的優(yōu)點(diǎn)，在中藥提取中具有良好的應(yīng)用前景。
[0013] 另外，本發(fā)明還提供了辣木葉總黃酮在制備治療高尿酸血癥藥物中的用途。降尿 酸的主要途徑是防止細(xì)胞內(nèi)核酸的氧化分解，而辣木葉中總黃酮具有清除自由基、抗炎、抗 菌、抗病毒、抗氧化、降血糖的多種作用，辣木葉總黃酮的氧化作用可以有效的防止細(xì)胞內(nèi) 核酸的氧化分解，從而達(dá)到將尿酸的作用。
[0014] 經(jīng)本發(fā)明的試驗(yàn)例證實(shí)，本發(fā)明的辣木葉黃酮高、中和低劑量組的降尿酸作用強(qiáng) 于別嘌呤醇，而且在一定的范圍內(nèi)，辣木葉黃酮?jiǎng)┝吭蕉嘟的蛩嶙饔迷矫黠@，本發(fā)明辣木葉 黃酮除了能降低尿酸外，對(duì)膽固醇、三酰甘油、尿素氮、肌酐、黃嘌呤氧化酶也有顯著的降低 作用，通過降低膽固醇、三酰甘油、尿素氮、肌酐、黃嘌呤氧化酶等降低尿酸生成、直接分解 尿酸、改善腎功能促進(jìn)尿酸排泄、保護(hù)血管等多個(gè)層面降低尿酸，更有利于尿酸血癥患者的 康復(fù)。
[0015] 本發(fā)明還提供了辣木葉總黃酮在制備治療老年癡呆癥藥物中的用途。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn) 證明，本發(fā)明的辣木葉總黃酮的低、中和高劑量組的小鼠逃避潛伏期與模型組相比具有顯 著性差異，均顯著縮短小鼠的逃避潛伏期，其中第20天，本發(fā)明的高劑量組的小鼠逃避潛 伏期與模型組相比具有極顯著性差異，證明辣木葉總黃酮對(duì)A0 :_42所致小鼠老年癡呆癥癥 模型具有顯著的治療效果，尤其是本發(fā)明的黃酮高劑量組效果最顯著。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的辣木葉提取方法采用微波-超聲波協(xié)同萃取辣木葉總 黃酮，與比傳統(tǒng)的回流提取具有高效、省時(shí)、節(jié)能的優(yōu)點(diǎn)，在中藥提取中具有良好的應(yīng)用前 景。
[0017]
【具體實(shí)施方式】：