使用nk細(xì)胞增效化合物提高治療性抗體功效的方法和組合物的制作方法
【專利說明】使用NK細(xì)胞増效化合物提高治療性抗體功效的方法和組 合物
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00480021421. 7、申請(qǐng)日為2004年7月23日、發(fā)明名稱為"使 用NK細(xì)胞增效化合物提高治療性抗體功效的方法和組合物"發(fā)明申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明總體上涉及提高治療性抗體功效的方法和組合物。更具體而言，本發(fā)明涉 及治療性抗體與阻斷自然殺傷細(xì)胞的抑制性受體或刺激自然殺傷細(xì)胞的活化受體的化合 物的聯(lián)合使用，從而使得哺乳動(dòng)物患者的自然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性效用增強(qiáng)，尤其是通過 提升ADCC機(jī)制以增強(qiáng)在人類患者中的治療功效。
【背景技術(shù)】
[0003] 人類的許多治療方案都是建立在使用治療性抗體的基礎(chǔ)之上。這些包括，例如使 用已開發(fā)的治療性抗體來使靶細(xì)胞衰竭，特別是病態(tài)細(xì)胞如病毒侵染的細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞或 其它病源細(xì)胞。這些抗體是典型的IgG類的單克隆抗體，典型的是具有人IgGl或IgG3Fc 部分。這些抗體可以是天然抗體或重組抗體，并且通常是"人源化"的小鼠抗體（即，包括 來自各種物種的功能域，典型的是人或非人靈長(zhǎng)類的Fc部分、并帶有小鼠源的可變區(qū)或互 補(bǔ)決定區(qū)（CDR))?？蛇x替代的是，該單克隆抗體可以在具有人Ig位點(diǎn)的轉(zhuǎn)基因的小鼠中通 過免疫作用而完全人源化，或通過由衍生自人類細(xì)胞的cDNA文庫(kù)獲得。
[0004] 該治療性抗體的一個(gè)特殊的例子是利妥昔單抗（rituximab)(美羅華 Mabtliem' Rituxan')，它是一種由人丫1和κ恒定區(qū)（因而帶有人IgGlFc部分） 與帶有CD20特異性的鼠可變區(qū)連接成的嵌合抗-CD20單克隆抗體。在過去的幾年中，利 妥昔單抗已經(jīng)極大地改變了對(duì)B淋巴細(xì)胞增生性癌變，尤其是非霍奇金淋巴瘤（NHL)的治 療方案。人源化的IgGl抗體的其它例子包括用于治療B細(xì)胞惡性腫瘤（癌變）的阿來組 單抗（alemtuzumab)( Campath-1H? )、和用于治療乳腺癌的曲妥珠單抗（trastuzumab) (Herceptin?:)。開發(fā)中的治療性抗體的其它例子正在本領(lǐng)域中出現(xiàn)。
[0005] 治療性抗體的作用機(jī)制仍然是一個(gè)爭(zhēng)論的話題。注入抗體，導(dǎo)致帶有被該抗體特 異性識(shí)別抗原的細(xì)胞的衰竭。該衰竭作用可以通過至少3種機(jī)制來介導(dǎo)：抗體介導(dǎo)的細(xì)胞 毒性（ADCC)、補(bǔ)體依賴型溶解、和通過作為抗體靶標(biāo)的抗原給出的信號(hào)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的直接 抗腫瘤抑制。
[0006] 盡管這些抗體代表了一種人類治療，尤其是對(duì)于治療腫瘤，的全新和有效的方法， 但是它們并不都具有很強(qiáng)的療效。例如，盡管利妥昔單抗單獨(dú)施用（給予）或與化療藥物 聯(lián)合施用（給予）顯示出對(duì)于治療中低度和高度NHL有效，但是30 %至50 %的低度NHL患 者對(duì)于利妥昔單抗沒有臨床反應(yīng)。有人提出淋巴細(xì)胞表面上的CD20表達(dá)水平、治療期間存 在的高腫瘤負(fù)荷、或血清中利妥昔單抗的低濃度可以解釋為什么在一些患者中利妥昔單抗 沒有療效。然而，治療失敗的實(shí)際原因在很大程度上仍然是未知的。
[0007] 另外，由于施用治療性抗體的副作用，使得治療性抗體的使用受到了限制。例如， 在患者中出現(xiàn)的發(fā)熱、頭痛、惡心、低血壓、哮喘、皮瘆、感染和許多其它可能出現(xiàn)的副作用 潛在地限制了施用抗體的可能劑量或頻率。
[0008] 因此，提高治療性抗體的療效或者能夠減少抗體的使用劑量來實(shí)現(xiàn)療效從而盡量 減少可能產(chǎn)生的副作用，是令人感興趣的。本發(fā)明將著手解決這些問題及其它需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明披露了增強(qiáng)治療性抗體功效的新方法。無須受下述理論的限制，我們認(rèn) 為使用本發(fā)明方法所得到驚人的結(jié)果是由于：當(dāng)注入治療性抗體時(shí)，它們?cè)隗w內(nèi)能夠強(qiáng)化 ADCC機(jī)制。實(shí)際上，本發(fā)明提供的全新的組合物和方法能夠克服目前與治療性抗體療效相 關(guān)的困難。在本發(fā)明中可以看到來自個(gè)體的NK細(xì)胞由于缺少NK細(xì)胞的活化，即通過在抑制 NK細(xì)胞上的抑制受體，而具有很差的治療性單克隆抗體（mAb)介導(dǎo)的ADCC。優(yōu)選地，ADCC 機(jī)制的提高是通過施用阻斷在自然殺傷細(xì)胞上的抑制受體或刺激在自然殺傷細(xì)胞上的活 化受體的化合物，從而促進(jìn)哺乳動(dòng)物患者增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用來實(shí)現(xiàn)的。優(yōu) 選的化合物是抗體或其片段。
[0010] 所述抗體或其它化合物可以與NK細(xì)胞的抑制性受體（例如殺傷細(xì)胞抑制性受體 (KIR或NKG2A/C)分子進(jìn)行反應(yīng)，或與其活化受體（例如NK細(xì)胞上的NKp30、NKp44或NKp46 這樣的NCR)反應(yīng)，從而中和細(xì)胞的抑制作用并且增加了其ADCC活性。
[0011] 更具體而言，本發(fā)明披露了治療患者的方法，其中阻斷NK細(xì)胞抑制性受體或刺激 其活化受體的化合物，優(yōu)選是抗體或其片段，與治療性抗體聯(lián)合施用于患者。本文中發(fā)明人 證明了治療性抗體通過如共注射方式與優(yōu)選為抗體或其片段的這類化合物聯(lián)合施用，通過 例如阻斷NK細(xì)胞的抑制性受體或刺激NK細(xì)胞的活化受體而克服了 NK細(xì)胞的抑制，從而可 以極大地增強(qiáng)其治療功效。
[0012] 本發(fā)明還涉及包括治療性抗體和阻斷NK細(xì)胞的抑制性受體或刺激NK細(xì)胞活化受 體的化合物的藥物組合物，該化合物優(yōu)選為抗體或其片段。本發(fā)明還涉及包括治療性抗體 和阻斷NK細(xì)胞的抑制性受體或刺激NK細(xì)胞的活化受體的化合物的試劑盒，該化合物優(yōu)選 為抗體或其片段。
[0013] 本發(fā)明還涉及將阻斷NK細(xì)胞的抑制性受體或刺激NK細(xì)胞的活化受體的化合物 (優(yōu)選為抗體或其片段）用于增加治療性抗體的治療功效，或用于提高用治療性抗體進(jìn)行 治療的患者體內(nèi)的ADCC的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明還涉及阻斷NK細(xì)胞的抑制性受體或刺激其活化受體的化合物（優(yōu)選為抗 體或其片段）和治療性抗體用于制備治療疾病的藥物中的應(yīng)用。更具體而言，該疾病的治 療需要消除（耗盡）靶細(xì)胞，優(yōu)選為患病的細(xì)胞，如病毒感染的細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞或其它病原 細(xì)胞。優(yōu)選地，該疾病是癌、傳染性疾病或免疫疾病。更優(yōu)選的是，該疾病選自包括癌癥、自 身免疫疾病、炎癥、和病毒性的一組病癥。該疾病還涉及移植排斥，更為具體的是同種異體 移植排斥和移植物抗宿主疾病（GVHD)。
[0015] 本發(fā)明還包括用于減少治療性抗體（例如通過Fcy受體結(jié)合的抗體，優(yōu)選為 CD16 (Fe γ RIIIa))劑量的方法。例如，治療性抗體與阻斷NK細(xì)胞上的抑制性受體或刺激 NK細(xì)胞上的活性受體的化合物的聯(lián)合施用可以允許使用低劑量的治療性抗體。這類抗體可 以以比沒有該化合物時(shí)的推薦劑量少20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或更低 的劑量使用。
[0016] 另外，本發(fā)明提供了用于測(cè)定治療性抗體（例如由CD16結(jié)合的抗體）的有效治療 量和減小劑量的方法。該方法包括：i)將第一濃度的治療性抗體與靶細(xì)胞和NK細(xì)胞共同孵 育，并且沒有阻斷NK細(xì)胞上的抑制性受體或刺激其上的活化受體的化合物存在；ii)將第 二較低濃度的治療性抗體與靶細(xì)胞和NK細(xì)胞共同孵育，并且存在阻斷NK細(xì)胞上的抑制性 受體或刺激其上的活化受體的化合物；iii)測(cè)定步驟ii)中所觀察到的靶細(xì)胞的消除（耗 竭）是否與步驟i)中所觀察到的消除一樣多。如果觀察到步驟ii)與步驟i)同樣有效， 那么可以改變化合物和治療性抗體的相對(duì)濃度，并且觀察消除（耗竭）情況，從而確定適用 于特定患者的不同條件，例如針對(duì)患者的不同需要最大程度地消除靶細(xì)胞，并盡量減少治 療性抗體的劑量或盡量減少化合物的劑量。
[0017] 在一個(gè)特定方面，本發(fā)明提供了一種在有需要的人類患者體內(nèi)治療疾病的方法， 包括：a)對(duì)所述患者施用阻斷NK細(xì)胞的抑制性受體或刺激其活化受體的化合物；以及b) 對(duì)所述患者施用可以通過CD16進(jìn)行結(jié)合的治療性抗體。
[0018] 在一個(gè)實(shí)施例中，將該治療性抗體和化合物同時(shí)施用于患者。在另一實(shí)施例中，在 施用治療性抗體1周內(nèi)、4日內(nèi)、3日內(nèi)或同日內(nèi)（即24小時(shí)內(nèi)）將該化合物施用于該患者。 在另一實(shí)施例中，該疾病是癌、傳染性（感染性）疾病或免疫疾病。
[0019] 在一個(gè)實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括一個(gè)附加步驟，其中在施用該化合物之前或 之后測(cè)量患者體內(nèi)的NK細(xì)胞的活性或數(shù)量。在另一個(gè)實(shí)施例中，該附加步驟包括：i)在施 藥之前從患者體內(nèi)獲得NK細(xì)胞；ii)在有該化合物/無該化合物的情況下，將NK細(xì)胞在存 在一種或多種可被該治療性抗體識(shí)別的靶細(xì)胞的情況下孵育；以及iii)測(cè)量該化合物對(duì) NK細(xì)胞消除（消耗）靶細(xì)胞能力的影響；當(dāng)發(fā)現(xiàn)該化合物增強(qiáng)了 NK細(xì)胞消除靶細(xì)胞的能 力時(shí)表明該化合物適用于該方法，并且該方法適用于該患者。
[0020] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包括：一治療性抗體（例如可以通過 CD16結(jié)合的抗體），一個(gè)抑制NK細(xì)胞