一種預(yù)防豬流行性腹瀉疾病的疫苗的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種預(yù)防豬流行性腹瀉疾病的疫苗。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬流行性腹瀉病毒為豬流行性腹瀉疾?。≒orcine epidemic diarrhea，PED)的病 原，該病以產(chǎn)房1-7日齡仔豬淡黃色水樣腹瀉、嚴(yán)重脫水為主，剖檢可見仔豬腸道內(nèi)脹氣、 有黃色乳凝塊。PEDV主要通過糞-口途徑傳播，產(chǎn)房仔豬通過消化道攝入病毒后，病毒主要 入侵空腸和回腸部位小腸黏膜上皮細(xì)胞，并開始病毒復(fù)制。PEDV的感染導(dǎo)致上皮細(xì)胞膜表 面的雙糖酶（乳糖酶、蔗糖酶、麥芽糖酶）、氨肽酶、堿性磷酸酶的活性下降；同時(shí)，腸絨毛上 皮細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)破壞并發(fā)生細(xì)胞破碎，造成腸絨毛萎縮，腸道表面積減少，從而導(dǎo)致小腸消 化不良、吸收不良等機(jī)能障礙，誘發(fā)仔豬發(fā)生腹瀉并脫水。
[0003] PEDV最早在英國發(fā)現(xiàn)，并流行于歐洲從上世紀(jì)八十年代以后，中國、日本、韓國也 開始有所報(bào)導(dǎo)。2010年至今，該病已廣泛流行于中國、韓國、泰國、美國等國。該病對產(chǎn)房仔 豬極高的發(fā)病率和致死率、較高的治療成本及防控成本，以及病毒基因發(fā)生變異造成強(qiáng)毒 株的出現(xiàn)，對世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失。
[0004] 隨著PEDV分子生物學(xué)研宄的深入，PEDV免疫機(jī)理基本清楚，屬于典型的局部黏膜 免疫為主，存在于血清中PEDV IgG不能提供有效保護(hù)，而腸道黏膜免疫所產(chǎn)生的分泌型抗 體（SIgA)才能抵抗PEDV感染，仔豬通過初乳來獲得母源SIgA，從而產(chǎn)生對流行性腹瀉的被 動免疫保護(hù)。
[0005] 目前大多都是傳統(tǒng)型滅活苗和弱毒苗，但是它存在毒力返強(qiáng)及散毒的風(fēng)險(xiǎn)，需要 改進(jìn)。為了研制出更為安全、高效、成本低廉、保存和使用方法簡易的豬流行性腹瀉疫苗，人 們開始利用基因工程手段開發(fā)黏膜免疫疫苗，以期達(dá)到進(jìn)一步預(yù)防和控制該病的目的。如， 徐麗麗等構(gòu)建了可表達(dá)PEDV S蛋白COE區(qū)域、SD區(qū)域的減毒沙門氏菌重組疫苗，其包含的 抗原基因長，菌株穩(wěn)定性越差，同時(shí)其包含crp毒力基因，安全性難以保證。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種新的疫苗。
[0007] 本發(fā)明提供了包含SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的重組沙門氏菌在制備預(yù)防豬流 行性腹瀉疾病的藥物中的用途。
[0008] PEDV S499.的核苷酸序列（SEQ ID NO :1):
[0009]
[0010]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 包含SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的重組沙門氏菌在制備預(yù)防豬流行性腹瀉疾病 的藥物中的用途。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：所述重組沙門氏菌包含攜帶有SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列的重組pVAXl質(zhì)粒。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：所述藥物包含致免疫有效量的重組沙門 氏菌。
4. 一種疫苗，其特征在于：它是由包含SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的重組沙門氏菌 和藥學(xué)上可接受的輔料或者載體制備而成。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述重組沙門氏菌包含攜帶有SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列的重組pVAXl質(zhì)粒。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述的輔料或者載體為免疫佐劑和/或 防腐劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述佐劑為霍亂毒素、大腸桿菌不耐熱腸 毒素或大腸桿菌不耐熱腸毒素 B單位。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述防腐劑為硫柳汞。
9. 權(quán)利要求4-8任意一項(xiàng)所述的疫苗在制備預(yù)防豬流行性腹瀉疾病的藥物中的用途。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于：所述的防豬流行性腹瀉疾病的藥物是口 服制劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了包含SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的重組沙門氏菌在制備預(yù)防豬流行性腹瀉疾病的藥物中的用途，還公開了一種由包含SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的重組沙門氏菌和藥學(xué)上可接受的輔料或者載體制備而成的預(yù)防豬流行性腹瀉疾病的疫苗。本發(fā)明疫苗可產(chǎn)生的針對豬流行性腹瀉病毒的特異性抗體水平高，對豬流行性腹瀉疾病有良好的保護(hù)作用，臨床應(yīng)用前景優(yōu)良。
【IPC分類】A61K39-215, A61P31-14, A61K48-00, A61P1-12, C12N1-21, C12R1-42
【公開號】CN104645326
【申請?zhí)枴緾N201510058568
【發(fā)明人】文翼平, 黃小波, 梁恩濤, 文心田, 曹三杰, 伍銳, 陳杰, 張雨迪, 段素芬, 朱書權(quán)
【申請人】四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月4日