專利名稱：使用生育三烯酚類治療和預(yù)防骨病的組合物及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用生育三烯酚類治療和預(yù)防骨疾病，本發(fā)明特別地涉及到使用一種包括了單獨(dú)的生育三烯酚、生育三烯酚的混合物，一種或多種生育三烯酚與其他壯骨物質(zhì)的混合物的組成成分。該發(fā)明的組成成分及方法極好地適用于治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松及其它的骨質(zhì)退化癥，如佩吉特氏膿腫(再發(fā)性膿腫)和高歇氏病(家族性脾性貧血)。
與本發(fā)明相關(guān)的背景技術(shù)骨質(zhì)疏松是以減少骨物質(zhì)和增加對骨折的易感性為特征的進(jìn)行性的疾病。骨質(zhì)疏松主要發(fā)生在絕經(jīng)后的婦女和老年男子身上。盡管骨質(zhì)疏松的發(fā)展存在諸多風(fēng)險(xiǎn)因素，但這些風(fēng)險(xiǎn)因素是通過骨質(zhì)再造、骨代謝和骨再生間接地起作用的(W.B.Ershler etal..Dev.Comp.Immunol..21(6),PP.+87-99(1997))。
骨質(zhì)疏松藥物調(diào)節(jié)的目的是通過抑制骨吸收和\或增強(qiáng)骨形成來增加骨物質(zhì)。骨吸收同骨折增多的情形有關(guān)。近期的研究表明，增加的骨活性細(xì)胞漿(bone active cytokines)的分泌物，如來自成骨細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的interieukin-6(IL-6)，在增加骨折活性和骨質(zhì)疏松的病因方面，起了關(guān)鍵作用(G.S.Kim et al..J.Bone Miner.Res..12(6).pp.896-902(1997)):E.Sporeno.et.al..Blood.87(11)pp.4510-19(1996))。IL-6也被確認(rèn)為可增加破骨細(xì)胞復(fù)原及骨吸收(E.Bomefalk et al..J.Bone Miner.Res..12(2),pp.228-33(1997)。除了它的破骨細(xì)包生成特性，IL-6也顯現(xiàn)出對定型的成骨細(xì)胞促進(jìn)分化而趨向于更成熟型(T.Bellido.et.Al Endocrinology 138(9),pp.3666-76(1997))。許多公認(rèn)的壯骨物質(zhì)影響IL-6的產(chǎn)生。例如，已知雌激素對調(diào)節(jié)IL-6在骨髓細(xì)胞中的表達(dá)度是重要的。(H.K.Vaananen andP.L.Harkonen.Maturitas.23 Suppi.pp.s65-9(1996))。血漿中鈣的濃度，通過一個(gè)直接的鈣感應(yīng)機(jī)制(E.Bomefalk et al..supra)和雙磷酸酯的溢出，來抑制由成骨細(xì)胞產(chǎn)生的IL-6(N.Giuliani et al.,Wxand.J.Rhematol.,27(1),pp.3841(1998))，影響來自單核血細(xì)胞的IL-6的分泌物。
對骨質(zhì)疏松的首要的預(yù)防性療法，常常包括行為和飲食調(diào)整。對于絕經(jīng)期婦女的第二種預(yù)防方法，常常包括雌激素置換治療(J.Y.Reginstar et al.,Rev.Rhum.Ed.Fr.,61(10),pp.1555S-64S(1994))。除雌激素外，有許多其它制劑被用于預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松和其他的變性性骨病。這些對于骨質(zhì)疏松預(yù)防性的和治療性的選擇，一般被分成兩個(gè)輔助部分，即抑制骨吸收和刺激骨形成。在第一類中包括鈣(包括鈣鹽)、抗雌激素(如他莫西芬)、環(huán)境雌激素(如擬雌內(nèi)脂，甲氧烷，雙酚A和右環(huán)十四酮酚)、維生素D(包括它的類似物和代謝物)、性腺和合成代謝類固醇以及降血鈣素。類黃酮(如5羥基黃酮，柚苷，桔皮素，柑桔黃酮，nobiletin，櫟精，芹黃素，異黃酮genestein和大豆黃酮衍生物，異丙氧黃酮)，酪氨酸激酶抑制劑(如herbimycin)，蛋白質(zhì)激酶C調(diào)制劑(如佛波醇酯類)和異黃酮(如阿侖磷酸、利塞磷酸、羥基磷酸)。第一類中的一些制劑也歸入了第二類，但被廣泛使用的，用于刺激骨質(zhì)形成的制劑是氟化物(通常為氟化鈉的形式)。合成副甲狀腺激素，維生素K(包括K1和K2)和環(huán)狀的雙磷酸酯也被用作壯骨劑(bone-enhancing agents)(C.Genera.et al.,Drug Serf,11(3),pp.179-95(1994)and P.Weber,Int.J.Vita.Nut.Res.,67(5),pp.350-56(1997))。
盡管存在著多種預(yù)防和治療的選擇，但骨質(zhì)疏松和其他的骨病仍嚴(yán)重地威脅著健康。因此，仍然存在著對用來預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松和其他骨病的新制劑的需求。
發(fā)明簡述本發(fā)明用以滿足對新的有效預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松和其它骨病的制劑的需求。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供了一種防止患者骨質(zhì)疏松和其他骨病的方法，包括這樣一個(gè)步驟，即對患者進(jìn)行一種預(yù)防性的有效量的組合物給藥，該組合物包括一種生育三烯酚、一種生育三烯酚類的混合物、一種或多種生育三烯酚類與一種或多種其它的壯骨物質(zhì)組成的組合物。
本發(fā)明的另一實(shí)施例提供了一種治療患者骨質(zhì)疏松和其他骨病的方法，包括這樣一個(gè)步驟，即對患者進(jìn)行一種治療性的有效量的組合物給藥，該組合物包括一種生育三烯酚、一種生育三烯酚類的混合物、一種或多種生育三烯酚類與一種或多種其它的壯骨物質(zhì)組成的組合物。
本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施例，提供了新的組合物，由一種或多種生育三烯酚類同一種或更多種其它的壯骨物質(zhì)組成的新組合物，該組合物特別適用于治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松和其他骨病。
發(fā)明詳述本文中以下的定義適用于(個(gè)例注釋除外)“壯骨物質(zhì)”是指對骨狀況具有益影響的制劑。優(yōu)選的是，這些壯骨物質(zhì)可抑制骨吸收和/或刺激新的骨組織形成，更為優(yōu)選的是，這些壯骨物質(zhì)是從這里涉及的獨(dú)特的壯骨劑中挑選出來的，現(xiàn)有技術(shù)中已有用于測定其活性的標(biāo)記及測試手段(見例M.Gambacciani et al.,Calcif.Tissue Int.,61S1,pp.S15-18(1997))。
本文所用“組合物”是指以任何現(xiàn)有常規(guī)技術(shù)可接受方式給藥的制劑的制備，所述的給藥途徑非限定性地包括經(jīng)口、鼻、吸入給藥、非腸道給藥和局部給藥?！敖M合物”既包括藥物成分，也包括食品補(bǔ)充劑、食品原料、食品添加劑，等等。
“患者”是指熱血哺乳動(dòng)物，尤指人類。需要預(yù)防性治療以預(yù)防骨質(zhì)疏松和其他骨病(包括佩吉特氏膿腫和高歇氏病)的患者，是指那些在骨質(zhì)疏松的發(fā)展上有一個(gè)或多個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素(包括絕經(jīng)期婦女、老年男子(50歲以上)及鈣吸收不足的患者)，以及具有同其他骨病有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素的患者。需要治療骨質(zhì)疏松和其他骨病的患者，是指那些有著一種或多種骨質(zhì)疏松癥狀，包括骨物質(zhì)減少的患者和對骨折及其它骨病的癥狀的易感性增加的患者(如佩吉特氏膿腫，即由于骨節(jié)加大而導(dǎo)致的疼痛和畸形)。
“P18生育三烯酚”是指具有以下分子式的生育三烯酚
P18生育三烯酚和P18是生物有機(jī)化學(xué)有限公司(亞利桑那州菲尼克斯)的商標(biāo)。
“P25生育三烯酚”指生育三烯酚3,4-二氫-2-(4,8,12-三甲基十三烷-3’(E).7’(E).11”-三烯)-2H-1-苯并芘-6-醇，其具有以下分子式 在此處援引過的一些文獻(xiàn)中，該化合物也稱作didesmethyl-生育三烯酚。P25生育三烯酚和P25是生物有機(jī)化學(xué)有限公司(亞利桑那州菲尼克斯)的商標(biāo)。
“預(yù)防性有效量”是指充足的一定量的活性成分，以阻止患者臨床上一種或多種骨質(zhì)疏松或其他骨病的發(fā)作，或阻止一種或多種骨質(zhì)疏松或其他骨病癥狀。上述患者具有一種或多種與骨質(zhì)疏松或其他骨病有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素?！傲钊藵M意的預(yù)防方法”是指能有效地提供預(yù)防作用的方法。
“生育三烯酚(Tocotrienol)”，當(dāng)用來指一種特定的化合物時(shí)，是指3,4-二氫-2-甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷-3’(E),7’(E.),11-三烯)-2H-1-苯并芘-6-醇。當(dāng)廣義地用來描述此類化合物時(shí)，其定義見下文。
“生育三烯酚”廣義上是指具有以下三個(gè)結(jié)構(gòu)特征的化合物(1)一個(gè)氫的供給基團(tuán)(或一個(gè)能水解而給出氫的基團(tuán))，吸引在芳香環(huán)系統(tǒng)上；(2)一個(gè)連接在芳香環(huán)系統(tǒng)上的側(cè)鏈，包括一個(gè)或多個(gè)類異戊烯或其類似物；(3)一個(gè)亞甲基單元或者一個(gè)官能團(tuán)，具有至少一對孤對電子與原子相鄰，通過該原子，側(cè)鏈與芳香環(huán)系統(tǒng)連接，所述的電子(最好是CH2C=O,CHOH,O,S，或NH)。特別地，類異戊烯單元包括平面的類異戊烯和被部分飽和或未被部分飽和的斷鏈或全長的類異戊烯，及用OH,NH2和C1-C6支鏈或沒有支鏈的烷基或烷氧基，任意取代。在本發(fā)明方法中優(yōu)選使用的生育三烯酚是那些天然產(chǎn)物(包括生育三烯酚，α生育三烯酚、β生育三烯酚、γ生育三烯酚、δ生育三烯酚、P25和P18)，它們也可以被單獨(dú)使用或結(jié)合使用。那些天然存在的生育三烯酚可以方便地從生物材料中分離，或由可利用的商業(yè)性原材料人工合成。優(yōu)選用于本發(fā)明方法中的生育三烯酚是從穩(wěn)定的生物原材料中獲得并分離出來的，如在PCT出版物WO91/17985中所描述的(全卷披露在此引為參考)。生物材料生育三烯酚，及人工合成、自然提取獲得的生育三烯酚的方法，其優(yōu)選例在美國專利5.591,772和PCT出版物WO91/17985(全部披露在此引為參考)。本發(fā)明方法和組成物中優(yōu)選的和有用的生育三烯酚可從以下生物原材料中獲得，包括針葉樹、豆莢、菊科、麗春紅以及棕櫚，更特別的，富含生育三烯酚提取物可從老化的糠皮中(尤其是老化的稻谷糠皮)、亞麻籽、大麥、松子、向日葵、花生米、棕櫚果、小米、鱷梨樹、檜柏、漿果、雪松葉、芒果、松針、橡膠樹葉、番茄以及莧菜中獲得。除上面所描述的生育三烯酚類(tocotrienols)外，“生育三烯酚(tocotrienol)”也包括法呢基化的(the famesvlated)四氫化-萘和單環(huán)的生育三烯酚類似物，被描述(既是一般的也是特殊的)于美國專利5,204,373和5,393,776中。
本發(fā)明特別優(yōu)選的生育三烯酚類包括以下分子式(Ⅰ)
其中R1和R3分別獨(dú)立地選自下組物質(zhì)H、鹵素、OH、OCH3、和C1-C6支鏈或沒有支鏈的烷基，(優(yōu)選的是H、鹵素和C1-C3支鏈的和沒有支鏈的烷基，并且首選為H和甲基)；R2選自下組物質(zhì)鹵素(優(yōu)選的是氯)和氫的供給基團(tuán)，選自O(shè)H、NHR8、CO2Y或C(R8)2CO2H和OH、NHR8、CO2Y或C(R8)2CH2H取代的C1-C8支鏈或沒有支鏈的烷基；(優(yōu)選的是OH和用OH取代的C1-C3支鏈和沒有支鏈的烷基，首選為OH)；R4選自下組物質(zhì)O、NH、CH-R9、C=O和CH-OH(優(yōu)選的是O、CH2、和C=O)；R5選自下組物質(zhì)CH2、C=O、CHOH、O、S、和NH(優(yōu)選的是O、CH2和C=O，最好是O、C=O)R6選自下組物質(zhì)H和C1-C6支鏈和沒有支鏈的烷基(尤指H和C1-C3支鏈和沒有支鏈的烷基、最好是H和甲基)；R7選自下組物質(zhì)異戊間二烯和異戊間二烯類似物側(cè)鏈組成，尤指具有分子式(a)-(c)結(jié)構(gòu)式的側(cè)鏈 并且也包括在側(cè)鏈(a)-(c)上一種或多種重復(fù)單元的組合，并且，如果在側(cè)鏈(a)表示的重復(fù)的單元存在，它的一種或多種未飽和的類似物也存在，或者側(cè)鏈(c)表示的重復(fù)的單元存在，它的一種或多種被氧化的類似物也存在(包括酮基和它的雙酮基類似物)，并且，這里每個(gè)R10獨(dú)立地選自H、OH、NH2和C1-C6支鏈或沒有支鏈的烷基或烷氧基，R11選自H和C1-C6有支鏈或沒有支鏈的烷基或烷氧基，CH2OH、CO2H(和它的C1-C6烷基酯)和OH(優(yōu)選的是，R7是結(jié)構(gòu)式(a)的側(cè)鏈，其中R10和R11各自獨(dú)立地選自H和C1-C3有支鏈或沒有支鏈的烷基，更好的是H和甲基)；每個(gè)R8和R9獨(dú)立地選自H和C1-C6有支鏈和沒有支鏈的烷基(優(yōu)選的是，H和C1-C3有支鏈或沒有支鏈的烷基，并且更好的是H和甲基)；
Y是H或C1-C18有支鏈或沒有支鏈的烷基(優(yōu)選的是H和C1-C6有支鏈或沒有支鏈的烷基，最好是H和C1-C4有支鏈或沒有支鏈的烷基)；Z是選自H、鹵素、OH、CH2OH、CH3、OCH3和COCH3(優(yōu)選的是H和CH3)；n是一個(gè)整數(shù)，選自0、1、2、3、和4(最好是0和1)；并且m是一個(gè)整數(shù)，選自1-30(優(yōu)選的是1-20，更好的是3-10，并且最好的是3-7)；本發(fā)明更優(yōu)選的生育三烯酚類包括，生育三烯酚，α生育三烯酚、β生育三烯酚、γ生育三烯酚、δ生育三烯酚、P18生育三烯酚和P25生育三烯酚。
本發(fā)明特別包含生育三烯酚的前藥形式，通過供給患者前體藥物，經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化生成它們的活性結(jié)構(gòu)。前藥包括本發(fā)明所采用生育三烯酚的包含一個(gè)羰基官能團(tuán)的酯化形式。
本發(fā)明的方法與組合物所用的生育三烯酚類，可以是同分異構(gòu)體的單一形式或異構(gòu)體的混合物。例如，本發(fā)明中的生育三烯酚可以d-或l-異構(gòu)體或d,l-外消旋體混合物的形式存在。天然形成的異構(gòu)體(通常是d-異構(gòu)體)和d,l-外消旋體的混合物被視為首選。
“TRF”是指通過固定和提純而從生物來源中獲得的一種生育三烯酚的濃縮餾分。典型的“TRF”含有各不相同量的生育三烯酚、α生育三烯酚、β生育三烯酚、γ生育三烯酚、δ生育三烯酚，并且還可能含有一定量的P18生育三烯酚和P25生育三烯酚。最常見的，TRF包含至少約25％到90％的生育三烯酚w/w(重量比)(理想的是至少約35％到90％，更理想的至少50％到90％)?！癟RF25”是指一種P25生育三烯酚占很大百分比重量的TRF。理想的是，“TRF25”含有至少約5％或更多的P25生育三烯酚，較好一些，含有至少約10％或更多的P25生育三烯酚，更理想的是，含有至少約15％的P25生育三烯酚(以重量比計(jì)算)。一個(gè)特定的“TRF25”的制備的例子，闡述于A.A.Qureshi et al.Nutr.Biochem.8.pp.290-98(1997)之中。TRF25是文中所述方法的組合物中的推薦組分。TRF25是生物有機(jī)化學(xué)有限公司(亞利桑那州菲尼克斯)的商標(biāo)。文中所述的任何方法及組合物可用TRF和TRF25，可以單一的生育三烯酚或其混合物形式應(yīng)用。
文中援引過的全部文獻(xiàn)，包括其圖表，全部列為參考資料。
不希望受任何特定理論的限制，很明顯，由于生育三烯酚有著獨(dú)特的與抗氧化劑結(jié)合和抗炎特性，可被用于預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松及其他骨病。與常規(guī)療法相比，前者靶向?qū)е潞鸵鸸琴|(zhì)疏松和其他骨病的單一機(jī)理，而生育三烯酚類則靶向多重機(jī)理。生育三烯酚抑制各種細(xì)胞漿(包括IL-6)的產(chǎn)生，該細(xì)胞漿與骨質(zhì)疏松及其他骨病的起因及組織結(jié)構(gòu)有關(guān)。而且，生育三烯酚可以調(diào)解過氧化物和可能調(diào)解氮氧化物產(chǎn)生的水平。這些因素與骨折骨吸收的過程有關(guān)(P.M.Gallop et al.,Connect.Tissue Res.29(2)pp.153-61(1993)andD.M.Evans and S.H.Ralston,J.Bone Miner.Res.,11(3),pp.30005(1996))。特別地，胺丙黃酮的壯骨作用已歸因于，至少部分地歸因于其主要代謝產(chǎn)物之一(7-異丙基-3-(4-羥基苯基)-4H-1-苯并芘-4-酮)的作用，以抑制脂糖(LPS)誘導(dǎo)的氧化氮的釋放(S.Koncz andE.J.Horvath,Acta Physiol.Hung.,84(3),pp.223-38(1996))。生育三烯酚還與高血糖最終產(chǎn)物(AGEs)的減少有關(guān)。AGEs的產(chǎn)物最近也被與骨折誘導(dǎo)的骨質(zhì)再吸收聯(lián)系起來(T.Myata et al.,J.Am.Soc.Nephral.,8(2),pp.260-70(1997))。由于其所結(jié)合的獨(dú)有特性，對于骨質(zhì)疏松和其他骨病，生育三烯酚類能夠抵制其深層的成因及遏制其退化作用。
本發(fā)明的組合物是通過將一種或多種生育三烯酚類與一種可接受的載體結(jié)合起來制備的。作為本發(fā)明的藥學(xué)成分，其載體必須是為藥學(xué)所接受的。(如在給藥標(biāo)準(zhǔn)上，載體對患者應(yīng)是無毒的，且不應(yīng)破壞活性組分的活性)?？山邮艿妮d體，包括藥物學(xué)上可接受的載體，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是應(yīng)知的。
本發(fā)明的組合物，可以任何治療性或預(yù)防性的可接受的方法，對需要治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松的患者給藥。例如，本發(fā)明的組合物可通過口服、鼻飼、局部、皮下注射或非腸道給藥。應(yīng)對這些組合物計(jì)算配方，以得到時(shí)間-藥物釋放的效應(yīng)?？诜M合物制成片劑、膠囊、糖衣片、乳劑、微脂粒、懸混劑、粉劑等等。局部給藥的組合物非限定性地包括，凝膠劑、洗劑、霜?jiǎng)?。非腸道給藥為無菌溶液形式和乳劑形式等等；靜脈內(nèi)給藥的形式非限定性地包括無菌溶液。口服為首選的給藥途徑。
劑量標(biāo)準(zhǔn)和需要量是本領(lǐng)域公知技術(shù)，可從公眾可獲來源得到。典型的劑量標(biāo)準(zhǔn)范圍是每次劑量介于約0.1到10,000毫克的生育三烯酚或生育三烯酚的混合物。其活性成分的范圍更適宜每次劑量介于約0.1到5,000毫克之間(最好能夠在0.1到1000毫克之間)。連續(xù)劑量應(yīng)按照一定時(shí)間間隔給藥，以獲得最佳藥效。特定劑量和治療方案將取決于如下因素，如患者全面的身體狀況，患者病情的嚴(yán)重程度和病因，或者醫(yī)生的判斷和處置。可按需要使用較高或較低的劑量。
在本文中所描述的方法中，生育三烯酚類和它的混合物同壯骨劑結(jié)合使用。這些附加的治療和預(yù)防制劑，可以同生育三烯酚或它的混合物分開給藥，或者一起按配方制成單一藥劑使用，這種合并療法有利于使用較低劑量的其他壯骨劑，可以減少或避免單獨(dú)使用這類壯骨劑可能引起的毒性，或者產(chǎn)生更理想療效。除用于治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松方面的常規(guī)制劑，本發(fā)明的方法中使用的生育三烯酚類也可同任何常規(guī)的抗炎或抗氧化劑結(jié)合使用。這些常規(guī)制劑最好有獨(dú)立的壯骨特性。在一個(gè)特別的優(yōu)選實(shí)施例中，一種或多種生育三烯酚類可以用來與一種或多種壯骨物質(zhì)聯(lián)合使用鈣(包括鈣鹽)、雌激素、抗雌激素(如它莫昔芬)、環(huán)境雌激素(如擬雌內(nèi)酯、甲氧氯，雙酚A和右環(huán)十四酮酚)，維生素D(包括其類似物和代謝物，如鈣化醇和1-α羥基維生素D3)，生殖腺的和合成代謝的類固醇，降血鈣素，鈣化醇(如桑黃素，柑桔黃素，橙皮素，紅桔素，蜜桔素，櫟精，芹甙元，異黃酮，genestein和大豆黃酮以及異黃酮衍生物)；黃烷類(如其代謝物)，酪氨酸激酶抑制劑(如鎮(zhèn)痛藥herbimycin)，蛋白質(zhì)激酶C調(diào)節(jié)劑(如佛波醇酯類)，雙磷酸類(包括環(huán)狀雙磷酸類和alendronate,risedronate和etidronate)，氟化物(如氟化鈉)，合成副甲狀腺激素，維生素K(包括K1和K2)，細(xì)胞漿介質(zhì)(如IL-I抑制劑丙丁酚和硫辛酸，IL-6抑制劑，IL-11抑制劑，TNF抑制劑，INF-γ抑制劑，生育酚類(如α-生育酚(維生素E))和硒)。首選的組合物包括一種或多種生育三烯酚與一種或多種選自鈣(包括鈣鹽)、類黃酮(最適宜為依普黃酮)，維生素D，維生素K，硫辛酸和生育酚類。
對本發(fā)明方法非常有用的，用以獲得并提純生育三烯酚類及其混合物(包括TRF)的方法，被描述于美國專利5,591.772中的實(shí)施例部分。美國專利5,591,772中的實(shí)施例1說明了米糠的穩(wěn)定化。美國專利5,591,772的實(shí)施例2-4部分說明了TRF,P25生育三烯酚和P18生育三烯酚的提純。
以下特定原始記錄可以用于米糠油的生產(chǎn)，從米糠油當(dāng)中可分離出生育三烯酚類及其混合物。
原始記錄Ⅰ干燥加熱穩(wěn)定化擠壓機(jī)Wenger型X-25標(biāo)準(zhǔn)螺紋/圓筒裝置
標(biāo)準(zhǔn)沖模設(shè)備
原始記錄Ⅱ干燥加熱后的濕熱穩(wěn)定化干燥加熱階段原始記錄Ⅰ潮濕加熱階段擠壓機(jī)安德森4英寸螺紋圓筒結(jié)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)切割行程沖模裝置直徑0.1875英寸長度0.75英寸操作情況給料率378lbs/hr轉(zhuǎn)速279rpm蒸汽噴射36lbs/hr(32psi at#8hole)機(jī)械壓力750psi(ast.)給料濕度11.4％出料濕度15％出料率450lbs/hr出料溫度121℃原始記錄Ⅲ干燥/冷卻步驟潮濕加熱使原始記錄Ⅱ(15％的濕度)的產(chǎn)品穩(wěn)定化，該產(chǎn)品置于鋁盤之上推出，且裝盤放置在101.1℃的烘箱中，直至濕度達(dá)到8-10％，(大約1.5小時(shí))。之后，盤子被置于盤托架上，允許隨周圍的溫度冷卻(大約20℃)。
在溫和的溫度(40℃)，輕度真空狀態(tài)下，乙烷被從萃取物中去除掉。
原始記錄V脫蠟20磅原油置于-15.6℃進(jìn)行24小時(shí)冷藏。表面浮物(含脫蠟油)從凝固的石蠟中倒出。之后石蠟被離心力分離出夾帶的油脂，石蠟流出量為0.59磅，脫蠟油流出量為19.41磅。
生育三烯酚的活性評估實(shí)施例1生育三烯酚(TRF混合物和單獨(dú)的生育三烯酚類的形式)，對雞的凝血惡烷B2和血小板因子4的血漿水平的作用已被確定。已知這些水平與IL-6中的炎性細(xì)胞漿水平相關(guān)聯(lián)。采用的飼養(yǎng)條件如下每組六只雞(6周雌性白色萊亨雞)，喂食一種搗碎的雞飼料，控制進(jìn)食或限定一種或多種飼料添加劑。各組進(jìn)食量與對照組進(jìn)行比較。喂食期為4周。所述禽類在屠宰前14小時(shí)被禁食。
控制進(jìn)食雞飼料包含下列成分
每公斤飼料含礦物質(zhì)混合物一個(gè)結(jié)晶水的硫酸鋅，110mg；五個(gè)結(jié)晶水的硫酸錳，70mg；一個(gè)結(jié)晶水的檸檬酸鐵，500mg；五個(gè)結(jié)晶水的硫酸銅，16mg；亞硒酸鈉，0.2mg；DL-蛋氨酸，2.5mg；維生素B復(fù)合體氯化物(50％),1.5g；促長啉(1,2-二氫-6-乙氧基-2,2,4-三甲基喹啉)，125mg；以及維生素B1 HCL,1.8mg。每公斤飼料含維生素混合物維生素A,1,500單位；維生素D3,400單位；維生素E,10單位；核黃素3.6mg；泛酸鈣，10mg；煙堿酸，25mg；維生素B6 HCL,3mg；葉酸0.55mg；維生素H,0.15mg；維生素B12,0.01mg和維生素K1,0.55mg。
結(jié)果用平均值±偏差表示，對比值百分?jǐn)?shù)列于圓括號內(nèi)，以下為所得結(jié)果實(shí)驗(yàn)1
對補(bǔ)充了TRF的調(diào)整飼料喂養(yǎng)的小雞，觀察到明顯得血凝惡烷B2和血小板因素4血漿水平的減少。
實(shí)驗(yàn)2
對補(bǔ)充了TRF和單獨(dú)的生育三烯酚的調(diào)整飼料喂養(yǎng)的小雞，觀察到明顯得血凝惡烷B2和血小板因素4血漿水平的減少。
實(shí)施例2生育三烯酚(TRF混合物和單獨(dú)的生育三烯酚類的形式)，對豬的凝血惡烷B2和血小板因子4的血漿水平的作用已被確定。已知這些水平與炎性細(xì)胞漿(包括IL-6)中的水平相關(guān)聯(lián)。采用的飼養(yǎng)條件如下每組三頭豬(攜帶Lpd5和Lpu1突變體等位基因的5月齡豬)被給予控制進(jìn)食，或控制進(jìn)食中補(bǔ)充一種或多種添加劑。在飼養(yǎng)期開始的第42天，禁食12小時(shí)后采集血樣。
豬的控制進(jìn)食包含下列成分
每公斤飼料含礦物混合物一個(gè)結(jié)晶水的硫酸鋅，110mg；五個(gè)結(jié)晶水的硫酸錳，70mg；一個(gè)結(jié)晶水的檸檬酸鐵.，500mg；五個(gè)結(jié)晶水的硫酸銅，16mg；亞硒酸鈉，0.2mg；DL-蛋氨酸，2.5g；維生素B復(fù)合體氯化物(50％),1.5g；促長啉(1,2-二氫-6-乙氧基-2,2,4-三甲基喹啉)，125mg；以及維生素B1 HCL,1.8mg。每公斤飼料含維生素混合物維生素A,1,500單位；維生素D3,400單位；維生素E,10單位；核黃素3.6mg；泛酸鈣，10mg；煙堿酸，25mg；維生素B6 HCL,3mg；葉酸0.55mg；維生素H,0.15mg；維生素B12,0.01mg和維生素K1,0.55mg。所有組按體重的增加可與對比組比較。
結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。對比值百分?jǐn)?shù)列于圓括號內(nèi)，獲得的結(jié)果如下
對補(bǔ)充了TRF和單獨(dú)的生育三烯酚類的調(diào)整飼料喂養(yǎng)的小雞，觀察到明顯得血凝惡烷B2和血小板因素4血漿水平的減少。
實(shí)施例3γ-生育三烯酚對人體外周血液嗜中性粒細(xì)胞的過氧化物釋放的作用已被確定。過氧化物使得炎癥反應(yīng)加重，對應(yīng)增加骨的再吸收。
所述被測試的嗜中性粒細(xì)胞通過密度離心分離器在Ficoll-Hypaque梯度上被離析出來，使用常規(guī)的方法(見E.serbinovaet al.,Free Rad.Bio.And Med.,10,pp.263-75(1991))。該嗜中性粒細(xì)胞被置于一個(gè)96槽-容器盤中。γ-生育三烯酚和佛波醇十四烷酸鹽醋酸酯(phorbol myristate acetate)也同時(shí)加入到容器槽中。過氧化物的分泌物通過可抑制歧化酶亞鐵細(xì)胞色素C還原被測定。這項(xiàng)研究結(jié)果如

圖1所示。
在γ-生育三烯酚的濃度為10-6和10-5的控制之下，該過氧化物的釋放量被減少，從19.7nmole(5×105細(xì)胞/小時(shí))，分別減少到的8.0和0.0nmole。
實(shí)施例4以下范例可以用于評估生育三烯酚用于預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松及其他骨病的療效R.Civitelli et al.,Calcif.Tissue Int.,56,pp.215-19(1995)描述了一個(gè)鼠模型以測試骨的生物力學(xué)，撞擊強(qiáng)度和礦物質(zhì)骨密度。
K.Notova et al.,Calcif Tissue Int.58(2),pp.88-94(1996)描述了一個(gè)鼠模型以測試下例切除了單側(cè)坐骨神經(jīng)，被固定的鼠的骨再生情況。
N.Giuliani et al.,supra，描述了一個(gè)試管內(nèi)模型，用以評估在人類成骨細(xì)胞系MG-63中IL-6的產(chǎn)品。
對工藝熟悉的人對本發(fā)明的各種調(diào)整和變化亦非常熟悉，但這些并不背離本發(fā)明的范圍和宗旨。即便本發(fā)明是與其適宜的特殊實(shí)施例一起闡述的，應(yīng)該明了的是，權(quán)利要求的發(fā)明不應(yīng)該被不適當(dāng)?shù)叵拗圃谶@些特殊實(shí)施例里。確實(shí)，對那些對工藝熟悉的人來說，對所描述的實(shí)施本發(fā)明模式的各種調(diào)整已經(jīng)非常熟悉。這些調(diào)整都在隨后所附的權(quán)利要求范圍內(nèi)。
其他實(shí)施例在本發(fā)明權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1 一種組成物包括一種或多種生育三烯酚，及一種或多種選自鈣，鈣鹽，胺丙黃酮，維生素D和維生素K的壯骨劑；
2 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組成物，其中所述的壯骨劑是指胺丙黃酮；
3 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組成物，其中所述的組成物包括TRF或TRF25；
4 一種飲食補(bǔ)充物包括根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求3所述的組合物；
5 一種食品包括根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求3所述的組合物；
6 一種藥用組合物包括根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求3所述的組合物；
7 一種預(yù)防患者骨質(zhì)疏松或其他骨病的方法，包括對患者進(jìn)行一種預(yù)防性的有效量的，包含一種或多種生育三烯酚的組合物給藥步驟；
8 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的組合物包括TFR或TRF25；
9 根據(jù)權(quán)利要求7或權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的組合物包括一種或多種附加的壯骨物質(zhì)；
10 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中附加的壯骨物質(zhì)選自骨吸收抑制劑和骨形成刺激劑；
11 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的附加壯骨物質(zhì)選自鈣、雌激素、抗雌激素、環(huán)境雌激素、維生素D、生殖腺及組成代謝的類固醇、降血鈣素、類黃酮、酪氨酸激酶抑制劑、蛋白質(zhì)激酶C調(diào)制劑、雙磷酸酯、氟化物、合成副甲狀腺荷爾蒙、維生素K、細(xì)胞漿介質(zhì)和硒；
12 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的附加壯骨物質(zhì)選自鈣鹽，雌激素，他莫西芬，擬雌內(nèi)酯，甲氧烷，雙酚A，右環(huán)十四酮酚，鈣化醇，1-α羥基膽鈣化甾醇，桑黃素，柑桔黃素，橙皮素，紅桔素，蜜桔黃素，櫟精，芹甙元，genstein和大豆黃酮，胺丙黃酮，鎮(zhèn)痛劑，佛波醇酯，環(huán)狀雙磷酸酯，阿侖磷酸，利塞磷酸、羥基磷酸，氟化鈉，維生素K1和維生素K2，丙丁酚，硫辛酸和α生育酚；
13 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的附加壯骨物質(zhì)選自包括鈣鹽，胺丙黃酮，genestein，維生素D，維生素K，硫辛酸和生育酚類；
14 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的組合物包括一種或多種生育三烯酚類，選自生育三烯酚、α生育三烯酚、β生育三烯酚、γ生育三烯酚、δ生育三烯酚、P18生育三烯酚和P25生育三烯酚；
15 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的組成物采用口服給藥；
16 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的組成物每劑大約包含0.1到大約5000mg的生育三烯酚；
17 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，進(jìn)一步包括給向患者給藥一種或多種附加的壯骨物質(zhì)的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用生育三烯酚類治療和預(yù)防骨疾病，本發(fā)明特別地涉及到包括單獨(dú)的生育三烯酚類、生育三烯酚的混合物及一種或多種生育三烯酚與其他壯骨物質(zhì)的混合物的組合物的使用。本發(fā)明的組合物及方法特別適用于治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松及其它的骨質(zhì)退化癥，如佩吉特氏膿腫(再發(fā)性膿腫)和高歇氏病(家族性脾性貧血)。
文檔編號A61K31/352GK1316903SQ99810684
公開日2001年10月10日 申請日期1999年7月8日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月8日
發(fā)明者羅納德·H·雷恩 申請人:麗珀詹尼克絲公司