專利名稱：土貝母苷乙用于制備預(yù)防和治療腫瘤的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用土貝母苷乙及含土貝母苷乙的土貝母皂苷制備預(yù)防和治療腫瘤的藥物。
眾所周知，惡性腫瘤是一種嚴重危害健康的常見病、多發(fā)病。統(tǒng)計結(jié)果表明，惡性腫瘤是僅次于心腦血管疾患的人類第二大死因。對于惡性腫瘤，常規(guī)方法有外科手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)藥物治療和生物調(diào)節(jié)劑治療等。目前常用化療藥物多有較強的副作用，而天然有效抗腫瘤藥物不僅價昂，臨床使用中病人難以承受，且有些原料多屬稀有保護物種。
在中國專利說明書94104124.7，95113751.4中描述了土貝母苷乙的天然衍生物土貝母苷甲主治陰道炎、宮頸炎、宮頸糜爛、宮頸息肉、直腸炎、直腸癌等。土貝母苷甲還能殺傷白血病細胞并對白血病細胞有誘導(dǎo)分化作用。上述專利申請在此作為參考。
土貝母苷乙是從中藥土貝母中分離出來的一種單體有效成分，分子式為C63H98O30，分子量為1334，化學(xué)結(jié)構(gòu)見

圖1。它與土貝母苷甲的區(qū)別是土貝母苷甲苷元16位碳上是氫，而土貝母苷乙苷元16位碳上是羥基。土貝母苷乙與土貝母苷甲一樣，水溶性好、穩(wěn)定性強，唯得率較苷甲低(苷乙約0.5％，苷甲約1.8％)。土貝母皂苷系指不含土貝母苷丙的土貝母中的皂苷組分，它的制備工藝簡單易行，得率也較高，約2.2％。
土貝母苷乙或土貝母皂苷的提取方法參見文獻(王永清、于立堅等陜西新醫(yī)藥，1055，1981；Kasai，Ret al.，Phytochemistry，271439-1446，1988)本發(fā)明涉及土貝母苷乙或土貝母皂苷作為預(yù)防和治療各種腫瘤的藥物組合物，該藥物組合物包括土貝母苷乙或土貝母皂苷及可藥用的載體。
本發(fā)明涉及如權(quán)利要求1所定義的藥物組合物的制備方法，該方法包括土貝母苷乙或土貝母皂苷單獨與可藥用的載體混合或溶解。
本發(fā)明涉及土貝母苷乙或土貝母皂苷作為預(yù)防和治療各種惡性腫瘤藥物在需要進行這種預(yù)防或治療的哺乳動物中的應(yīng)用。
土貝母苷乙或土貝母皂苷可與任何可藥用的載體混合或溶解，如經(jīng)皮膚、粘膜、胃腸內(nèi)和胃腸外給藥的可藥用載體。該藥物組合物以常規(guī)藥用制劑的形式使用，如固體形式的片劑、顆粒劑、粉劑、膠囊劑、扁囊劑、拴劑等，或半固體形式的油膏、軟膏等，或液體形式的針劑、懸浮劑、糖漿劑、乳劑、搽劑等。該藥物組合物中使用可藥用的賦形劑和添加劑，這些可藥用的賦形劑和添加劑包括無毒的可相容的填料、粘合劑、崩解劑、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、矯味劑、增稠劑、著色劑、乳化劑、穩(wěn)定劑等。如乳糖、檸檬酸、硬脂酸、硬脂酸鎂石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、鹽酸普魯卡因、鹽酸利多卡因、抗壞血酸等。該藥物組合物可按各種制劑的常規(guī)工藝制備。
本發(fā)明涉及土貝母苷乙或土貝母皂苷作為預(yù)防惡性腫瘤的藥物，可作為食品添加劑、化妝品添加劑加入到食品或化妝品中，亦可作為藥物組合物治療各種癌前病變，如食道增生、外陰白斑、萎縮性胃炎、慢性宮頸炎、宮頸息肉、直腸息肉等。
本發(fā)明涉及土貝母苷乙或土貝母皂苷作為治療惡性腫瘤的藥物組合物，可用于白血病，亦可用于各種實體形腫瘤，如食道癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、鼻煙癌、口腔癌、唇癌、皮膚癌、膀胱癌、絨毛膜上皮癌、腮腺瘤、淋巴瘤、骨瘤、黑色素瘤和各種顱內(nèi)腫瘤等。所制成的各種口服藥物組合物中土貝母苷乙或土貝母皂苷的含量為每日每kg體重大約0.001-100mg，優(yōu)選約0.01-50mg，更優(yōu)約0.05-30mg，最佳約0.1-10mg。每日分2-4次服用，10-30天為一療程，一般用藥3-6個療程，每個療程間隔10-30天。所制成的注射用藥物組合物，可供肌肉注射或靜脈點滴，其中土貝母苷乙或土貝母皂苷的含量為每日每kg體重0.001-50mg，優(yōu)選約0.01-25mg/kg，更優(yōu)約0.05-15mg，最佳約0.1-3mg。每日分1-3次使用，10-30天為一療程，一般用藥3-6個療程，每個療程間隔10-30天。然而，精確的劑量應(yīng)由醫(yī)生確定，主要取決于病人的年齡、體重、病情、反應(yīng)等。
我們在實驗中發(fā)現(xiàn)，土貝母苷乙或土貝母皂苷表現(xiàn)出特別的抗炎癥作用，能顯著抑制人惡性腫瘤細胞和小鼠移植性腫瘤的生長，延長荷瘤小鼠生存期，對人早幼粒白血病細胞(HL-60細胞)有誘導(dǎo)分化效果，能對抗促癌劑對小鼠皮膚腫瘤發(fā)生的促進作用。
下面列舉實驗內(nèi)容及其結(jié)果，作為土貝母苷乙或土貝母皂苷可用于制備各種預(yù)防和治療惡性腫瘤藥物的證據(jù)。一.藥效試驗1.抗炎性水腫試驗在7周齡雌性ICR小鼠耳廓兩面涂布12-O-十四酰佛波-13-乙酸酯(以下簡稱TPA，2μg溶于20μl丙酮)誘發(fā)水腫。涂布TPA之前30分鐘局部應(yīng)用不同濃度的土貝母苷乙溶液。試劑對照組僅涂布同體積的溶劑(丙酮)。在TPA處理5小時后用游標卡尺測量鼠耳厚度，精確到0.01，耳水腫用耳的厚度增加來表示。上述實驗條件下TPA處理5小時后鼠耳厚度增加達到最大值。土貝母苷乙的用量分為4個劑量組7.5×10-3μmol/耳、3.7×10-2μmol/耳、7.5×10-2μmol/耳、1.1×10-1μmol/耳。結(jié)果表明，土貝母苷乙對TPA誘發(fā)的鼠耳水腫有明顯的抑制效果(見表1)，而且量效依賴關(guān)系顯著。土貝母皂苷的抗炎性水腫效果略遜于土貝母苷乙，但優(yōu)于土貝母苷甲(資料未顯示)。土貝母苷乙對鼠耳炎性水腫的抑制率按下式計算
表1土貝母苷乙局部應(yīng)用對TPA誘發(fā)的鼠耳炎性水腫的抑制作用實驗條件 鼠耳厚度的增加 抑制率 P值bP值c(×10-2mm)a(％)對照(TPA 2μg/耳) 10.6±0.76土貝母苷甲7.5×10-3μmol/耳 7.8±0.51 24.8 ＜0.053.7×10-2μmol/耳 6.8±0.48 35.2 ＜0.017.5×10-2μmol/耳 5.6±0.55 46.7 ＜0.0011.1×10-1μmol/耳 1.8±0.22 83.8 ＜0.001土貝母苷乙7.5×10-3μmol/耳 6.8±0.48 38.1 ＜0.01 ＞0.053.7×10-2μmol/耳 4.6±0.43 59.0 ＜0.001 ＜0.017.5×10-2μmol/耳 1.6±0.34 86.3 ＜0.001 ＜0.0011.1×10-1μmol/耳 0.0±0.23 100.0 ＜0.001 ＜0.05a、平均值±標準誤。b、P值(t檢驗)，與對照組比較。c、P值(t檢驗)，與相同劑量土貝母苷甲組比較。
2.對人惡性腫瘤細胞生長的抑制作用試驗藥物土貝母苷乙試驗瘤株人早幼粒白血病細胞(HL-60)。
試驗方法將HL-60細胞接種于直徑為35mm的塑料小碟內(nèi)，培養(yǎng)基為含有10％胎牛血清的1640，置于37℃、濕度飽和、95％空氣、5％二氧化碳的孵育箱中培養(yǎng)。把不同濃度的土貝母苷乙溶液加入培養(yǎng)基內(nèi)，分別觀察對瘤細胞生長的抑制效果。與此同時，加入相同體積的無菌生理鹽水于同樣的培養(yǎng)物中作對照實驗。加入土貝母苷乙后1-3天內(nèi)，每天用臺盼藍法計數(shù)活細胞數(shù)。
試驗結(jié)果圖2表示土貝母苷乙對HL-60細胞株生長的抑制效果。土貝母苷乙對HL-60細胞生長的抑制作用優(yōu)于土貝母苷甲(參見專利CN 1146895A)。土貝母皂苷對HL-60細胞株生長的抑制作用略遜于土貝母苷乙，但優(yōu)于土貝母苷甲(資料未顯示)。
3.對小鼠可移植性腫瘤生長及動物生存期的影響試驗藥物土貝母苷乙試驗動物BALB/c小鼠試驗?zāi)[瘤小鼠可移植性肉瘤180(S180)、艾氏腹水癌(Ehrlich ascitescarcinoma)。
試驗方法隨機分組。各組小鼠于實驗開始日稱體重并在左鼠蹊皮下或腹腔內(nèi)注射107個腫瘤細胞。接種后第二天開始肌肉或腹腔注射不同濃度的土貝母苷乙溶液。陰性對照組和陽性對照組接種相同數(shù)目瘤細胞，同時肌肉或腹腔注射相同體積的無菌生理鹽水或5-氟尿嘧啶溶液或土貝母苷甲溶液。皮下接種腫瘤細胞后5-6日可捫及瘤塊。皮下接種腫瘤細胞后13日，稱體重后引頸處死小鼠、完整剝離腫瘤稱重。計算各組平均瘤重及其標準誤。抑瘤率按下式計算抑瘤率(％)＝(1-A/B)×100其中A代表試驗組的平均瘤重，B代表對照組的平均瘤重。
腹腔接種瘤細胞者，記錄荷瘤動物的死亡情況，直至腫瘤接種后35天。
試驗結(jié)果表2顯示土貝母苷乙對動物腫瘤生長的影響。表3顯示土貝母苷乙對荷瘤動物生存期的延長。土貝母皂苷對動物腫瘤生長的抑制作用和對荷瘤動物生存期的延長效果略遜于土貝母苷乙，但優(yōu)于土貝母苷甲(資料未顯示)。表2土貝母苷乙對小鼠移植性腫瘤肉瘤180(S180)生長的抑制作用動劑量(mg/組別 物 Kg/日體重b(g) 瘤重b(g)抑瘤率cPd數(shù) ×日數(shù))a處理前 處理后 (％)對照 1018.5±0.31 19.6±0.54 2.68±0.285-氟尿嘧啶 10 3×12 18.6±0.28 18.6±0.95 1.95±0.24 27.2＜0.05土貝母苷甲 10 1×12 18.5±0.24 20.0±0.61 2.06±0.25 23.3＜0.05土貝母苷甲 10 2×12 18.5±0.24 19.3±0.57 1.85±0.13 31.3＜0.05土貝母苷甲 10 3×12 18.7±0.36 18.1±0.55 1.26±0.31 52.9＜0.01土貝母苷乙 10 1×12 18.4±0.19 20.2±0.43 1.52±0.21 43.3＜0.01土貝母苷乙 10 2×12 18.5±0.24 19.2±0.52 1.35±0.17 49.8＜0.01土貝母苷乙 10 3×12 18.5±0.27 18.0±0.47 1.07±0.13 60.1＜0.001a、腹腔用藥。b、平均值±標準誤。c、抑瘤率(％)＝(1-A/B)×100，A代表實驗組的平均瘤重，B代表對照組的平均瘤重。d、P值(t檢驗)，與對照組比較。表3 土貝母苷乙對荷瘤BALB/c小鼠生存期的影響劑量a(mg/Kg/小鼠數(shù) 平均生存日數(shù)瘤種 組 別T/Cb日×日數(shù)(只)(均值±SD)艾氏腹水癌對 照 020 18.13±3.24土貝母苷乙 2.5×10 20 32.52±4.16 1.79土貝母苷甲 2.5×10 20 27.20±3.11 1.50S180 對 照 020 14.40±1.88土貝母苷乙 2.5×10 20 27.60±3.64 1.92土貝母苷甲 2.5×10 20 20.30±1.95 1.41a.腹腔接種瘤細胞后隔日肌肉注射藥液。b.T/C其中T代表實驗組的平均生存日數(shù)，C代表對照組的平均生存日數(shù)。
4.對HL-60細胞的誘導(dǎo)分化作用試驗藥物土貝母苷乙試驗方法在HL-60細胞培養(yǎng)液中加入2.4μmol/L的土貝母苷乙水溶液，按2所述的條件培養(yǎng)5天，觀察形態(tài)變化，并對HL-60細胞進行氮藍四唑(NBT)還原試驗，酵母多糖吞噬試驗，以及非特異性酯酶染色試驗。對照組分為陽性對照和陰性對照組。在HL-60細胞培養(yǎng)液中加入1mmol/L維甲酸或2.4μmol/L的土貝母苷甲水溶液，并按實驗組的方法進行實驗，即為陽性對照。
試驗結(jié)果與土貝母苷乙共同孵育的HL-60細胞分化后的細胞形態(tài)類似正常晚幼粒細胞，非特異性酯酶染色陰性，而陰性對照組被誘導(dǎo)分化的細胞不超過6％。試驗結(jié)果(見表4)表明，土貝母苷乙對HL-60細胞有誘導(dǎo)分化效果。土貝母皂苷對HL-60細胞的誘導(dǎo)分化效果略遜于土貝母苷乙，但優(yōu)于土貝母苷甲(資料未顯示)。表4 土貝母苷乙對HL-60細胞的誘導(dǎo)分化作用a組別 培養(yǎng)晚幼粒細胞或中性 氮藍四唑還原 酵母多糖吞噬率天數(shù) 粒細胞(％)b(％)b(％)b對照34.44±0.41 5.77±0.502.97±0.2154.74±0.35 6.21±0.423.75±0.34維甲酸 3 68.27±8.11 65.57±6.60 63.56±6.14(1mmol/L) 5 65.26±5.08 52.06±4.55 61.54±4.68土貝母苷乙 3 33.40±2.98 27.35±2.56 32.46±3.86(2.4μmol/L) 5 65.56±5.21 57.89±6.86 44.86±3.76土貝母苷甲 3 28.60±3.35 22.84±2.64 28.96±4.49(2.4μmol/L) 5 60.84±3.64 53.16±6.33 40.58±3.76a.三份平行試驗的平均結(jié)果。b.平均值±標準誤。二.毒理試驗1.急性毒性試驗選用ICR小鼠用肌肉和腹腔注射給藥法進行試驗。
試驗結(jié)果肌肉注射土貝母苷乙的LD50為45.66mg/Kg，土貝母苷甲的LD50為40.28mg/Kg，土貝母皂苷的LD50為42.36mg/Kg。腹腔給藥的土貝母苷乙的LD50為20.9mg/Kg，土貝母苷甲的LD50為18.7mg/Kg。，土貝母皂苷的LD50為19.6mg/Kg。
2.對正常培養(yǎng)細胞的毒性作用采用比色法測試了土貝母苷乙對體外培養(yǎng)的T-淋巴母細胞樣細胞株(MT-2細胞)的毒性作用，試驗結(jié)果(見表5)表明，當土貝母苷乙的濃度由80μg/ml降至40μg/ml時，細胞毒性顯著下降，濃度低于40μg/ml時，毒性很低。土貝母乙細胞毒的CD50為68μg/ml，土貝母苷甲細胞毒的CD50為59μg/ml。土貝母皂苷細胞毒的CD50為64μg/ml。表5土貝母苷乙對MT-2細胞的毒性作用濃度(μg/ml)細胞中毒百分率(％)土貝母苷乙 10 1.520 2.04010.08084.6土貝母苷甲 10 2.220 6.54013.08096.43.防癌試驗采用經(jīng)典的誘發(fā)小鼠二階段皮膚乳頭狀瘤的實驗?zāi)Ｐ停枚谆讲⑤旒ぐ?，TPA促癌。實驗組在促癌的同時每鼠每次用0.5mg土貝母苷乙溶液涂抹背部皮膚，實驗持續(xù)18周。
試驗結(jié)果背部皮膚涂抹土貝母苷乙完全抑制小鼠皮膚上出現(xiàn)腫瘤(與每鼠每次用1mg土貝母苷甲的效果相同，參見專利CN 1146895A)，而對照組的帶瘤率為80％，每鼠平均腫瘤數(shù)為11.36個(圖3)。土貝母苷乙的應(yīng)用并不妨礙小鼠體重的增加。土貝母皂苷的防癌效果略遜于土貝母苷乙，但優(yōu)于土貝母苷甲(資料未顯示)。三、防治惡性腫瘤作用機理試驗1、對腫瘤細胞脫氧核糖核酸(DNA)合成的影響用3H-胸苷摻入法測定土貝母苷乙及土貝母苷甲對人胰癌和胃癌細胞DNA合成的影響。將胰癌或胃癌細胞培養(yǎng)24小時，加入土貝母苷乙作為實驗組或加入其溶媒作為對照組。胰癌或胃癌細胞培養(yǎng)24、48、72小時后，然后以3H-胸苷標記1小時，并測定其摻入酸不溶性物質(zhì)的放射活性。試驗結(jié)果表明土貝母苷乙抑制3H-胸苷摻入DNA組分(見表6)，提示這些腫瘤細胞DNA的正常合成和成熟受到了土貝母苷乙的抑制。試驗結(jié)果還表明，不同癌細胞DNA合成的抑制發(fā)生在不同時期。土貝母皂苷對腫瘤細胞DNA合成的抑制作用略遜于土貝母苷乙，但優(yōu)于土貝母苷甲(資料未顯示)。表6土貝母苷乙對人胰癌和胃癌細胞DNA合成的影響*3H-胸苷摻入DNA合成培養(yǎng)日期(日)細胞 條件12 3胰癌 對照 3.96±0.17 4.03±0.13 6.54±0.71(100) (100)(100)土貝母苷乙 3.32±0.46 3.16±0.38 2.48±0.42(3μg/ml)(93.3) (87.1) (50.7，P＜0.001)土貝母苷甲 3.85±0.41 3.77±0.31 3.92±0.42(3μg/ml)(97.1) (93.3) (59.9)胃癌 對照 9.18±0.5111.35±0.35 8.33±0.21(100) (100)(100)土貝母苷乙 5.96±0.68 5.88±0.76 4.98±0.65(10μg/ml) (69.7) (58.5) (66.4)土貝母苷甲 6.51±0.38 7.57±0.66 6.26±0.45(10μg/ml) (70.9) (66.7) (75.2)*表中給出的值代表三份平行試驗的平均值，括號中的值是以對照作為100％的百分數(shù)2、3H摻入培養(yǎng)細胞C3H10T1/2克隆8磷脂試驗將C3H10T1/2克隆8細胞接種于培養(yǎng)瓶中，用含有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，置于37℃、濕度飽和、95％空氣、5％二氧化碳的孵育箱中培養(yǎng)。細胞經(jīng)胰酶處理后轉(zhuǎn)移到直徑為35mm的塑料小碟內(nèi)，使其密度為2×105細胞/ml。培養(yǎng)48小時后，土貝母苷乙以水溶液的形式加入，使其在培養(yǎng)基中的終濃度分別為5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml。與此同時，對照組加入相同體積的無菌蒸溜水，在相同條件下培養(yǎng)。細胞經(jīng)1小時培養(yǎng)后，試驗組和對照組同時加入TPA(5×10-8mol/L)和3H膽堿(4μci/碟)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。
與3H膽堿一起孵育過的細胞經(jīng)胰酶處理后收集，并以磷酸鹽緩沖液涮洗后懸浮在150μl的磷酸鹽緩沖液中。細胞中的脂質(zhì)以改進的Bligh和Dyer法提取。即將細胞凍融一次后，加入300μl的氯仿/甲醇(1/2，v/v)，其中甲醇含2％乙酸。細胞懸液以冰浴型超聲波發(fā)生器處理，再加入100μl氯仿，振蕩混勻，混合液經(jīng)離心機離心后分為氯仿相和液相。用液體閃爍計數(shù)器測定氯仿相的放射性。蛋白質(zhì)含量用改良的Lowry氏法測定。
試驗結(jié)果如圖4所示，土貝母苷乙具有抑制TPA增強3H摻入細胞磷脂的作用，當土貝母苷乙的濃度低于5μg/ml時仍可測出這一效果，而且表現(xiàn)出量效依賴關(guān)系。土貝母苷乙抑制TPA增強3H摻入細胞磷脂的作用比土貝母苷甲強(參見專利CN 1146895A)。土貝母皂苷抑制TPA增強3H摻入細胞磷脂的作用略遜于土貝母苷乙，但優(yōu)于土貝母苷甲(資料未顯示)。
3.土貝母苷甲與TPA競爭HL-60細胞內(nèi)的受體實驗HL-60細胞用含有10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。
試驗方法離心收集培養(yǎng)的HL-60細胞，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后，懸浮在含50mM Tris-HCl的緩沖液中，用超聲細胞破碎儀處理，收集上清液，得細胞提取物，在細胞提取中加入Tris-HCl緩沖液調(diào)整蛋白濃度至200μg/ml，再加入不同濃度的土貝母苷乙及3H標記的TPA，放入溫箱，39℃孵育20分鐘，立即加入濾膜抽濾，用丙酮沖洗濾膜后，把濾膜放入閃爍瓶，用液體閃爍計數(shù)儀測定其放射性。
試驗結(jié)果土貝母苷乙競爭性抑制TPA在HL-60細胞內(nèi)的受體。四、土貝母苷乙的藥代動力學(xué)試驗1.土貝母苷乙的吸收試驗取NIH小鼠14只，用土貝母苷乙溶液灌胃(100mg/kg)給藥，給藥后不同時間各處死2只小鼠，取出全部胃腸道和內(nèi)容物，制成勻漿，用同法作空白對照，對照組給藥后即處死小鼠，測定殘存于消化道及內(nèi)容物中的藥物含量。
試驗結(jié)果給藥后即刻處死者胃腸中土貝母苷乙的回收率為99.0％，給藥后0.5、1、2、4、8、12小時的回收率分別為88.8％、79.3％、56.7％、38.0％、16.6％和0。
2.組織分布試驗取NIH小鼠20只，大鼠4只，每鼠肌肉注射土貝母苷乙60mg/kg，1小時后，取心、肝、脾、肺、腎、和腦組織1克，加生理鹽水3ml勻漿，測定各組織中土貝母苷乙的含量。
試驗結(jié)果土貝母苷乙在肝和脾內(nèi)含量最高，在血液、肺、和心臟內(nèi)含量次之，在腎和腦內(nèi)含量最低。
3.土貝母苷乙與血漿蛋白、組織蛋白的結(jié)合試驗采用平衡透析法測定土貝母苷乙與血漿、肝、腎組織蛋白的結(jié)合率。
試驗結(jié)果土貝母苷乙與血漿蛋白及肝、腎組織蛋白的結(jié)合率分別為16.3％、26.0％、18.1％。
4.排泄試驗取NIH小鼠10只，肌肉注射60mg/kg土貝母苷乙，收集24小時尿液并取膽汁，測定其中土貝母苷乙含量。
試驗結(jié)果在膽汁和尿液中無土貝母苷乙，推測土貝母苷乙可能以代謝產(chǎn)物的形式從尿液或膽汁中排出。
五、臨床初試結(jié)果1.發(fā)明人采用本發(fā)明第實施例4制備的含土貝母苷乙的土貝母皂苷栓劑進行了臨床試驗觀察。
病例選擇宮頸炎病人36例，宮頸息肉病人10例，宮頸間變病人3例，宮頸癌病人8例。
使用方法慢性宮頸炎、宮頸息肉、宮頸間變、宮頸癌病人先用無菌棉棒擦凈分泌物，然后將栓劑置入宮頸處。隔日一次，十次為一療程。治療1-5個療程，視病情而定。
試驗結(jié)果本發(fā)明對慢性宮頸炎的療效十分顯著，有效率達99％。對慢性宮頸炎的合并癥，如宮頸息肉、宮頸糜爛、宮頸肥厚等有顯著療效。本發(fā)明可使宮頸間變發(fā)生逆轉(zhuǎn)，對早期宮頸癌有明顯的療效。無局部刺激性，不引起過敏反應(yīng)。
2.發(fā)明人采用本發(fā)明第實施例1制備的含土貝母苷乙的土貝母皂苷片劑進行了臨床試驗觀察。
病例選擇晚期食道癌病人8例，食道癌手術(shù)后病人12例，晚期胃癌病人7例，胃癌手術(shù)后病人9例。
使用方法每日服用3次，每次1片(含土貝母皂苷50mg)，20天為一療程，用藥4個療程，每個療程間隔10天。
試驗結(jié)果晚期食道癌病人生存期平均延長126天，食道癌手術(shù)后病人生存期平均延長626天。晚期胃癌病人生存期平均延長183天，胃癌手術(shù)后病人生存期平均延長742天。
圖1土貝母苷甲、苷乙和苷丙的化學(xué)結(jié)構(gòu)式圖2局部應(yīng)用土貝母苷乙對小鼠促癌過程的抑制作用。
圖中橫坐標為促癌周數(shù)，A圖中縱坐標表示帶瘤鼠數(shù)(％)，B圖中縱坐標代表腫瘤個數(shù)/鼠。○--○，代表對照組，●--●，代表實驗組。
圖3土貝母苷乙對TPA增強3H摻入培養(yǎng)細胞磷脂的抑制效果。
圖中橫坐標代表土貝母苷乙的濃度(μg/ml)，縱坐標為抑制率(％)。
圖4土貝母苷乙對HL-60細胞生長的抑制作用。
圖中橫坐標為培養(yǎng)天數(shù)，縱坐標為活細胞數(shù)(活細胞數(shù)/ml)。○-○代表對照(培養(yǎng)液中同時加同體積溶劑)，●--●代表土貝母苷乙用量1.9μmol/L，×-×代表土貝母苷乙用量3.8μmol/L，△--△代表土貝母苷乙用量7.6μmol/L，■--■代表土貝母苷乙用量15.2μmol/L。
六、實施例下面的配方舉例說明了本發(fā)明的劑型。
實施例1片劑，NO組分用量mg/片mg/片1土貝母苷乙(或土貝母皂苷) 50 1002乳糖USP122 1233玉米淀粉，食品級，呈 304010％的純水漿狀物4玉米淀粉，食品級95 1305硬脂酸鎂 3 7合計 300 400制造方法在適當?shù)幕旌蠙C中混合第1項和第2項組分15分鐘，第3組分與混合物粒化。如果需要，通過一個初篩研磨潮濕的顆粒，并使之干燥。如果需要，將干燥的顆粒過篩，并與第4項混合10-15分鐘。加入第5項混合1-3分鐘。在適當?shù)膲浩瑱C中將混合物壓成適當?shù)某叽绾椭亓俊?br> 實施例2膠囊劑NO 組分 用量mg/粒mg/粒1 土貝母苷乙(或土貝母皂苷) 50 1002 乳糖USP106 1203 玉米淀粉，食品級 40 734 硬脂酸鎂NF 47合計 200 300制造方法將第1、2和第3項在適當?shù)幕旌蠙C中混合10-15分鐘，加入第4項混合1-3分鐘。在適當?shù)陌覚C上將該混合物裝入適當?shù)哪z囊中。
實施例3注射液土貝母苷乙(或土貝母皂苷) 10g或50g葡萄糖490g或450g注射用水 加至10000ml實施例4栓劑以生產(chǎn)發(fā)明產(chǎn)品10000粒為例所用的原料及其配比為土貝母苷乙(或土貝母皂苷) 300g或600g吐溫80800g或800g可可豆酯(或半合成脂肪酸甘油) 加至10000g制造方法混合按本實施例的配比稱取土貝母苷乙(或土貝母皂苷)、吐溫80和可可豆酯(或半合成脂肪酸甘油)，將可可豆酯(或半合成脂肪酸甘油)放入不銹鋼鍋水浴加熱至大部分溶化，停止加熱，然后分別加入吐溫80和土貝母苷乙(或土貝母皂苷)，用不銹鋼攪拌機攪拌至混合均勻，便得到本發(fā)明的混合藥物。潤滑劑的配制用軟肥皂和甘油各一份與5倍的80％醫(yī)用酒精充分混合攪拌均勻，制成潤滑劑。成型在栓模上涂上已配制的潤滑劑。將本發(fā)明的混合藥物倒入栓模中至溢出?？冢屍渥匀焕鋮s。待完全凝固后，用刀切去溢出部分。然后開啟模具，將栓劑從模具中取出。無菌包裝將所制備的拴劑進行質(zhì)量檢查，每粒重量應(yīng)為1g，含土貝母苷乙(或土貝母皂苷)30mg或60mg。檢查合格后包裝，鈷60滅菌。
權(quán)利要求
1.預(yù)防和治療各種腫瘤的藥物組合物，該藥物組合物包括土貝母苷乙或土貝母皂苷及可藥用的載體。
2.如權(quán)利要求1所定義的藥物組合物的制備方法，該方法包括土貝母苷乙或土貝母皂苷單獨與可藥用的載體混合或溶解。
3.土貝母苷乙或土貝母皂苷在制造用于預(yù)防和治療各種腫瘤的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及土貝母苷乙及含土貝母苷乙的土貝母皂苷用于制備預(yù)防和治療腫瘤的藥物。苷乙是從土貝母中提取出來的一種化學(xué)成分,是土貝母苷甲的天然衍生物;土貝母皂苷是不含土貝母苷丙的土貝母中的皂苷組分。苷乙和皂苷表現(xiàn)了特別的抗炎癥作用,能顯著抑制人惡性腫瘤細胞和小鼠移植性腫瘤的生長,延長荷瘤小鼠生存期,對HL－60細胞有誘導(dǎo)分化效果,能對抗促癌劑對小鼠皮膚腫瘤發(fā)生的促進作用。苷乙和皂苷可用于預(yù)防和治療哺乳動物,特別是人的各種腫瘤。
文檔編號A61P35/00GK1273113SQ9910620
公開日2000年11月15日 申請日期1999年5月5日 優(yōu)先權(quán)日1999年5月5日
發(fā)明者于廷曦, 于立堅, 馬潤娣 申請人:于廷曦