一種素馨苦苷溶液的制備方法及應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開一種素馨苦苷溶液的制備方法及應(yīng)用，其中，所述應(yīng)用是將所述素馨苦苷用于制備預(yù)防或治療阿爾茨海默病的藥物或保健品。本發(fā)明首先確定素馨苦苷對Aβ體外聚集具有抑制作用，然后進(jìn)一步檢測到素馨苦苷在細(xì)胞水平上能夠影響對AD經(jīng)典通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，并且素馨苦苷對新生鼠原代神經(jīng)元TAU?ps396的分布及表達(dá)變化也有影響，因此本發(fā)明可以確定素馨苦苷具有預(yù)防或治療阿爾茨海默病的效果，素馨苦苷可發(fā)展為預(yù)防和治療AD的藥物或保健品。
【專利說明】
一種素馨苦苷溶液的制備方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種素馨苦苷溶液的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茲海默癥(Alzheimer's disease，簡稱AD)是老年人常見的神經(jīng)退行性疾 病，以記憶與認(rèn)知功能障礙為主要癥狀，其典型的病理特征是腦內(nèi)形成老年斑（senile plaques, SP)和神經(jīng)纖維纏結(jié)（neurofibrilIary tangles, NFT)。
[0003] AD的發(fā)病機(jī)制是多種發(fā)病因素、多種通路和分子機(jī)制的相互參與，在AD發(fā)病機(jī)制 的眾多假說中，Α?3級聯(lián)假說被廣泛認(rèn)同。該假說認(rèn)為由Αβ異常聚集形成老年斑而產(chǎn)生的毒 性可能是導(dǎo)致AD發(fā)生的主要原因[5,6]。邰在體內(nèi)是由淀粉樣前體蛋白（APP)經(jīng)過β-分泌酶 與γ-分泌酶剪切而成，在正常的情況下，Αβ代謝保持平衡，不會產(chǎn)生細(xì)胞毒性，而病理情況 下Αβ代謝異常形成有毒聚集體從而引起神經(jīng)毒性，導(dǎo)致AD病理學(xué)表現(xiàn)。
[0004] 另一病理假說是在阿爾茨海默病患者體內(nèi)，異常過度磷酸化的Tau蛋白以配對 螺旋絲結(jié)構(gòu)形成神經(jīng)原纖維纏結(jié)并在神經(jīng)元內(nèi)聚積，Tau蛋白異常在AD患者神經(jīng)變性和 學(xué)習(xí)記憶障礙的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，細(xì)胞內(nèi)tau蛋白過度磷酸化是AD最早出現(xiàn)的病理 改變之一。最近國外報(bào)道一些抗AD新藥臨床試驗(yàn)失敗，其原因可能是治療時(shí)間太晚和藥 物靶點(diǎn)單一。國內(nèi)外尚無能根本治療AD的藥物，最為常用的膽堿酯酶抑制劑僅能緩解癥 狀，而不能改變疾病的進(jìn)程，并且西藥效果欠佳，且易形成耐藥性，不良反應(yīng)明顯。
[0005] 素馨苦苷作為一種抑菌活性物已有研究，但是至今尚未有任何關(guān)于素馨苦苷用于 治療AD的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種素馨苦苷溶液的制備方法 及應(yīng)用，主要是將素馨苦苷用于制備預(yù)防或治療阿爾茨海默病的藥物或保健品，旨在提供 一種素馨苦苷的新應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 一種素馨苦苷溶液的配制方法，其中，包括將素馨苦苷溶解在DMSO或乙醇溶液中，振蕩 混勻，制備成素馨苦苷母液，通過添加PBS緩沖液將所述素馨苦苷母液稀釋成不同濃度的素 馨苦苷溶液。
[0008] 所述的素馨苦苷溶液的配制方法，其中，所述素馨苦苷母液的濃度為5mmol/L。
[0009] -種素馨苦苷的應(yīng)用，其中，將所述素馨苦苷用于制備預(yù)防或者治療阿爾茨海默 病的藥物或保健品。
[0010] 有益效果:本發(fā)明首先確定素馨苦苷對Αβ體外聚集具有抑制作用，然后進(jìn)一步檢 測到素馨苦苷在細(xì)胞水平上能夠影響對AD經(jīng)典通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，并且素馨苦苷對 新生鼠原代神經(jīng)元TAU-p S396的分布及表達(dá)變化也有影響，通過本發(fā)明可以確定素馨苦苷 具有預(yù)防或治療阿爾茨海默病的效果，素馨苦苷可發(fā)展為預(yù)防和治療AD的藥物或保健品。
【附圖說明】
[0011] 圖1為本發(fā)明中ThT熒光法檢測不同時(shí)間點(diǎn)素馨苦苷對Αβ體外聚集熒光強(qiáng)度變化 圖。
[0012] 圖2為本發(fā)明中圓二色譜法檢測素馨苦苷對Αβ成纖維結(jié)構(gòu)變化圖。
[0013]圖3為本發(fā)明素馨苦苷與Αβ共孵育Oh和12h的成纖維變化圖。
[0014]圖4a至4f為本發(fā)明檢測的AD相關(guān)通路蛋白的凝膠顯影圖。
[0015]圖5a至5i為本發(fā)明western blotting檢測素馨苦苷作用后AD相關(guān)通路蛋白的表 達(dá)變化圖。
[0016] 圖6為本發(fā)明AD新生小鼠海馬區(qū)原代神經(jīng)元圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 本發(fā)明提供一種確定中藥活性成分素馨苦苷具有治療阿爾茨海默病的方法，為使 本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解， 此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0018] 本發(fā)明提供一種素馨苦苷溶液的配制方法，其中，包括將素馨苦苷溶解在DMSO或 乙醇溶液中，振蕩混勻，制備成素馨苦苷母液，通過添加PBS緩沖液將所述素馨苦苷母液稀 釋成不同濃度的素馨苦苷溶液。
[0019] 本發(fā)明中用于治療阿爾茨海默病的中藥活性成分是迎春花素(為觀辦仏），迎春花 素又叫做素馨苦苷，是從木犀科茉莉花屬植物迎春花中提煉出來的裂環(huán)烯醚萜葡萄苷類 (seco ir ido idglucos ides )，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式
_單體具有一定的抑菌活性， 對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度(MIC)為lmg/ml，對痢疾桿菌、大腸桿菌的最小抑菌濃度 為0.5mg/ml，并且有研究表明，素馨苦苷可誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞顯著分泌TNF-α，同時(shí)還可激 活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路。
[0020] 進(jìn)一步，本發(fā)明制備的所述素馨苦苷母液的濃度通常為5mmol/L，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要通 常通過添加I3BS緩沖液將母液進(jìn)行稀釋，通常制備的素馨苦苷終濃度為5ym 〇l/L，10ym〇l/L， 20ymol/L，50ymol/L 和100ymol/L和2 mmol/L等。
[0021] 進(jìn)一步，本發(fā)明還提供一種素馨苦苷的應(yīng)用，其中，將所述素馨苦苷用于制備預(yù)防 或者治療阿爾茨海默病的藥物或保健品。所述素馨苦苷可以為液體或者粉末狀。由于傳統(tǒng) 中藥具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多方式的作用機(jī)制，如今中藥在治療AD方面已經(jīng)起到越來越重要 的作用。但是現(xiàn)如今通過使用素馨苦苷來治療AD方面的研究尚未有報(bào)道，而素馨苦苷由于 其獨(dú)特的藥性可作為預(yù)防或治療AD的有效藥物或保健品。。
[0022] 下面通過實(shí)施例結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。但本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理 解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。
[0023]本發(fā)明通過先采用硫磺素T熒光法、圓二色譜法和原子力顯微鏡觀察法去觀察素 馨苦苷體外作用Αβ聚集的作用效果，初步確定素馨苦苷對Αβ體外聚集具有抑制作用，然后 進(jìn)一步檢測細(xì)胞水平上素馨苦苷對AD經(jīng)典通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響，最后用免疫熒光 法檢測新生鼠原代神經(jīng)元TAU-p S396的分布及表達(dá)變化。本發(fā)明通過應(yīng)用多種方法和手段 從分子水平到細(xì)胞水平，檢測素馨苦苷對AD的治療效果，結(jié)果表明中藥活性成分素馨苦苷 具有治療阿爾茨海默病的效果，素馨苦苷可以成為預(yù)防或治療AD的藥物或保健品。
[0024] 實(shí)施例1 ThT熒光法檢測素馨苦苷對Αβ體外聚集的抑制效果 本發(fā)明采用硫磺素T法檢測素馨苦苷對Αβ體外聚集的抑制效果，硫磺素T(Thioflavin T，ThT)是一種陽離子熒光試劑，1993年研究發(fā)現(xiàn)ThT分子可作為識別Α?3纖維結(jié)構(gòu)并與之結(jié) 合的熒光探針，因而ThT法成為了監(jiān)測與檢測Αβ聚集的理想方法。具體地，首先對Αβ樣品進(jìn) 行預(yù)處理，取Αβ樣品lmg，加入2ml的六氟異丙醇(HFIP)，振蕩溶解過夜，取出樣品水浴超聲 15-20分鐘，氮?dú)獯蹈桑缓笤偌尤脒m量的DMSO(Sigma)充分溶解樣品，水浴超聲15-20分鐘， 將樣品-80 °C保存?zhèn)溆?；之后配制各種母液，ThT溶解在Tris buffer (50 mmol/L Tris-base, 100 mmol/L NaCl，pH 7 · 4)中，濃度為I mmol/L;處理過的Αβ1_42溶解在110 yL的 DMSO中，濃度為2 mmol/L;Jasminin溶解在DMSO中，濃度為5imimol/L;EGCG溶解在ddH20中， 濃度為5 mmol/L;最后采用EGCG作為陽性對照組，體系總體積為100μΙ，設(shè)置組別如表1。
[0025] ThT終濃度為50ymol/L，Af3終濃度為50ymol/L，Jasminin終濃度設(shè)4個(gè)梯度分別為 10ymol/L，20ymol/L，50ymol/L 和100μ mol/L 〇EGCG終濃度為50ymol/L。將體系各成分加入 到96孔黑色酶標(biāo)板中，在酶標(biāo)儀中37°C孵育，檢測熒光時(shí)間點(diǎn)分別為0，5，15，25，45，65，85， 115，145，205，265，325時(shí)的熒光值，根據(jù)得到的各組不同時(shí)間點(diǎn)的熒光值后作圖，如圖1所 示，圖1為ThT熒光法檢測不同時(shí)間點(diǎn)Jasminin對Αβ體外聚集熒光強(qiáng)度的變化圖，從圖中可 以看出Jasminin對Αβ體外聚集有明顯的抑制作用，并且不同濃度的Jasminin對Αβ體外聚集 的抑制效果也不同，其中20μηιο1/1的Jasminin的抑制效果最佳，50ymol/L次之，lOOymol/L 再次之，l〇Miol/L的Jasminin在180分鐘后效果不佳。
[0026] 實(shí)施例2 圓二色譜檢測素馨苦苷對Αβ成纖維結(jié)構(gòu)的影響 本發(fā)明采用圓二色譜檢測素馨苦苷對Αβ成纖維結(jié)構(gòu)的影響，具體地，通過圓二色譜 (circular dichroism spectra，CD)分析Jasminin對Αβ二級結(jié)構(gòu)的影響，將蛋白溶解到5 mmol/L PBS，pH10.0的緩沖液中，以BCA法進(jìn)行蛋白定量，濃度為400 ymol/L，將Jasminin溶 解于乙醇中，濃度為4mmo 1/L;將EGCG溶解于ddH20，濃度為5mmo 1/L。制備三組樣品：（1 )Αβ， 終濃度為2 mmol/L; (2)Jasminin和Αβ終濃度均為2 mmol/L;(3)EGCG和Αβ終濃度均為2 mmol/L〇
[0027] 各組樣品混合均勻并室溫孵育12 h，采用J-815圓二色譜儀(JASCOJAPAN)于25°C 測定Αβ的⑶譜，參數(shù)設(shè)置如下，波長范圍：255~190 nm;掃描速度:50 nm/min;靈敏度:50 mdeg;反應(yīng)時(shí)間：0.25 s;帶寬：1 nm;掃描次數(shù):3,所得結(jié)果用0rigin8.0軟件作圖。如圖2 所示，圖2為圓二色譜檢測Jasminin對Αβ成纖維結(jié)構(gòu)變化圖，從圖2中可以看出，β折疊在 218 m m處有一特征峰，但不明顯，原因是A β單體在孵育12 h后在溶液中形成沉淀，加入 Jasminin或EGCG孵育后，β折疊特征峰消失，并且在230mm處出現(xiàn)一個(gè)大而寬的負(fù)峰，由此可 知Jasminin和EGCG確實(shí)改變Αβ纖維結(jié)構(gòu)，改變β折疊的形成。
[0028] 實(shí)施例3 原子力顯微鏡觀察素馨苦苷對Αβ成纖維形態(tài)及數(shù)量變化的作用效果 進(jìn)一步，本發(fā)明還采用原子力顯微鏡來觀察素馨苦苷對Αβ成纖維形態(tài)及數(shù)量變化的作 用效果，具體地，將Αβ與Jasminin于37°C條件下共孵育12h，使Αβ終濃度為5ymol/L， Jasminin終濃度為20ymol/L，分別在0h、12h取樣進(jìn)行AFM制樣，充分干燥后進(jìn)行AFM 掃描觀察。結(jié)果如圖3所示，圖3為Jasminin與Αβ共孵育Oh與12h成纖維結(jié)構(gòu)及數(shù)量的變化， 從圖3中可以看出，加入Jasminin孵育12h后Αβ形成纖維明顯變短，數(shù)量較少，說明Jasminin 具有抑制Αβ聚集的作用。
[0029] 實(shí)施例4 在細(xì)胞水平上用western blotting法檢測素馨苦苷作用后AD相關(guān)通路蛋白表達(dá)水平 的變化 本發(fā)明進(jìn)一步在細(xì)胞水平上用western blotting法檢測Jasminin作用后AD相關(guān)通路 蛋白表達(dá)水平的變化，其包括步驟： 1)、配置SDS-聚丙烯酰胺凝膠對蛋白樣品進(jìn)行電泳，首先配置分離膠，需根據(jù)將要檢測 的目的蛋白分子量大小，計(jì)算出膠的濃度;待分離膠凝集后，吸去酒精，配置濃縮膠，插入預(yù) 先準(zhǔn)備好的梳子；待膠凝集好后，上蛋白樣品，每孔蛋白上樣量l〇-15yg左右，蛋白預(yù)染 Marker上樣3μ1，上樣要避免產(chǎn)生氣泡，電泳時(shí)上層濃縮膠用80V電壓，當(dāng)樣品至下層分離膠 時(shí)，用120V電壓，一般電泳時(shí)間在2h左右，電泳時(shí)，內(nèi)槽采用新配置的I X SDS電泳液，外槽可 用回收的電泳液。
[0030] 2)、電泳后采用PVDF膜進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，具體地，電泳完成后將凝膠板放在電泳緩沖液中 浸泡幾分鐘。打開膠板，將膠放置于平板上，切除濃縮膠，根據(jù)Marker大小分離出所要的分 離膠并泡在電轉(zhuǎn)液中。根據(jù)所取分離膠的大小剪取濾紙(三層），并根據(jù)濾紙大小剪取PVDF 膜，轉(zhuǎn)膜前先將膜浸泡一下甲醇，盡量避免污染濾紙和膜，將已裁好濾紙和膜完全浸泡于電 泳轉(zhuǎn)移緩沖液中以驅(qū)除留于濾紙的氣泡。打開轉(zhuǎn)移盒，將浸透后的海綿墊放于轉(zhuǎn)移盒壁上， 再放一張電泳轉(zhuǎn)移緩沖液浸濕的濾紙于海綿上。按"黑色膠板一海綿一3層濾紙（大)一凝 膠一膜一3層濾紙(小)一海綿"的順序裝置好(注意每放一層都需要趕走氣泡），再倒一些電 轉(zhuǎn)液到膜上，保持海綿，濾紙，膜的濕潤。將緩沖液槽裝入冰盒，將4 °C預(yù)冷的電泳轉(zhuǎn)移緩沖 液注滿電泳槽。連接好轉(zhuǎn)移電極恒流100 mA轉(zhuǎn)移1.5 h。將轉(zhuǎn)膜后凝膠用考馬斯亮蘭染色 30min-lh，經(jīng)脫色液脫色至無背景色后，觀察膠上是否還有殘余的蛋白條帶，用于檢測轉(zhuǎn)膜 的效果，或用麗春紅對PVDF膜進(jìn)行染色，觀察轉(zhuǎn)膜條帶并于封閉前洗掉麗春紅。
[0031] 3)、轉(zhuǎn)膜結(jié)束后將膜放入5%脫脂牛奶中37°C水平搖床上封閉2h。
[0032] 4)、一抗孵育，將所需檢測抗體稀釋至適當(dāng)倍數(shù)加入封閉液中達(dá)到工作濃度，保證 膜的所有部分同溶液接觸，一般采用37°C搖床孵育2h或4°C過夜，可根據(jù)抗體量和膜上抗原 量適當(dāng)延長或縮短時(shí)間。
[0033] 5)、一抗孵育完成后，將膜取出放置于干凈平皿中，加入1XTBST，在搖床上洗滌 15min，換液，反復(fù)3~5次。
[0034] 6)、二抗孵育，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和設(shè)計(jì)選擇合適的酶標(biāo)二抗和稀釋濃度（5%BSA稀 釋），洗滌完成后加入二抗3ml左右室溫下于搖床孵育2h，保證膜的所有部分同溶液接觸。
[0035] 7)、二抗孵育完成后，將膜條取出放置于干凈的培養(yǎng)皿中，加入IX TBST，在搖床上 洗滌15min，換液，重復(fù)3次。
[0036] 8)、采用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行顯色，具體地，先將兩種顯色底物A液Iml，B液2μ1進(jìn) 行混合，將混合物均勻滴加覆蓋在膜表面1-2分鐘，可見發(fā)光的條帶，取出PVDF膜并用保 鮮膜把PVDF膜包起來，擦去多余的顯色液，放入夾板中，在暗室中將X光片剪至合適大小， 覆蓋在PVDF膜的上面，夾好夾子，進(jìn)行壓片曝光，曝光時(shí)間根據(jù)蛋白顯現(xiàn)的熒光亮度決定， 也可不同時(shí)間多次壓片，曝光完成，打開夾子，迅速將膠片放入顯影液中，待出現(xiàn)條帶后， 即可終止，取出放入定影液中，以膠片變透明為止，再用自來水沖洗，晾干，掃描拍照，得到 照片如圖4a-4f所示。
[0037] 9)、數(shù)據(jù)圖片整理及分析，利用quantity one光密度分析軟件對圖片進(jìn)行灰度值 分析，并進(jìn)行組間t檢驗(yàn);利用Graphpad軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理作圖分析，p〈0.05具有顯著性的 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所得分析結(jié)果如圖5a_5i所示。
[0038] 本發(fā)明采用western blotting法主要檢測的AD相關(guān)通路蛋白有APP, BACE-I， sAPPa，sAPP0，PP2A, p-PP2A，PSD95, Tau5，Tau_ps396，Tau-ps404，Tau_ps422,通過分析 得到的結(jié)果如圖4a-4f、圖5a-5i所示，從圖5a-5i中可以看出，Jasminin作用后，AD相關(guān)通路 的蛋白表達(dá)量發(fā)生了變化，具體地，Jasminin作用后，AD相關(guān)通路降低了 APP、Tau-ps396、 Tau-pS404、Tau-ps422的表達(dá)，升高了 PSD95的表達(dá)，并且其變化是具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的。 [0039] 實(shí)施例5 免疫熒光法觀察素馨苦苷作用后新生鼠原代神經(jīng)元TAU-pS396的分布及表達(dá)變化 進(jìn)一步，本發(fā)明采用免疫熒光法觀察素馨苦苷作用后新生鼠鼠原代神經(jīng)元PTAU396的 分布及表達(dá)變化，具體地，首先將3 X Tg AD新生鼠海馬區(qū)原代神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)在含有細(xì)胞爬 片的24孔板中，然后將培養(yǎng)好的原代神經(jīng)細(xì)胞(第八天），以Iml的4% PFA固定20-30 min，以 4°C的I3BS洗2次，每次5 min，接著往孔板中加入0.2%TritonX-100，每孔加500μ1靜置IOmin 后，用I3BS洗滌2次，每次5min;洗滌完成后，采用I 3BST配制10%goat抗體，4°C封閉Ih，往孔板 中加入一抗（MAP-2 :1:10000稀釋，chicken polyclonal，Abeam: synaptophysin: 1: 200 稀釋，rabbit monoclonal, Abcam，10% goat配制），每孔加300yl，4°C孵育過夜，孵育后米 用PBS洗滌3次，每次洗滌時(shí)間依次為5min，IOmin，15min;洗滌完成后，往孔板中加入二抗 (goat-anti-chichen_Alexa594或goat-anti-rabbit_Alexa488，均為 1: 200稀釋，Abeam， 10% goat配制），每孔加入300μ1，室溫孵育lh，孵育后采用I3BS洗滌3次，每次洗滌時(shí)間依次 為5min，10min，15min;洗滌完成后再往孔板中加入5μg/ml DAPI進(jìn)行染色，每孔加入500μ1， 染色時(shí)間為4min，染色后采用PBS洗滌3次，每次洗滌時(shí)間依次為5min，10min，15min;接著采 用甘油或者PBS溶液進(jìn)行封片，用中性樹脂固定好細(xì)胞爬片并使其保持在4°C且避光，最后 采用共聚焦顯微鏡處理和分析數(shù)據(jù)。
[0040] 本發(fā)明通過免疫熒光法得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示，圖6為Jasminin作用后AD新生 鼠海馬區(qū)原代神經(jīng)元圖，從圖6中可以看出，在加入Jasminin培養(yǎng)24h后的原代神經(jīng)元樹突 較多，且長，樹突分支末端與兩個(gè)對照組相比，Tau-ps396形成點(diǎn)狀聚集較少，說明Jasminin 減少Tau-ps396含量，對微管結(jié)構(gòu)起穩(wěn)定作用。
[0041]綜上所述，本發(fā)明首先確定素馨苦苷對Αβ體外聚集具有抑制作用，然后進(jìn)一步檢 測到素馨苦苷在細(xì)胞水平上能夠影響對AD經(jīng)典通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，并且素馨苦苷新 生鼠鼠原代神經(jīng)元TAU-pS396的分布及表達(dá)變化也有影響，通過本發(fā)明確定素馨苦苷具有 預(yù)防或治療阿爾茨海默病的效果，素馨苦苷可發(fā)展為預(yù)防和治療AD的藥物或保健品。
[0042]應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可 以根據(jù)上述說明加以改進(jìn)或變換，所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保 護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種素馨苦苷溶液的配制方法，其特征在于，包括將素馨苦苷溶解在DMSO或乙醇溶 液中，振蕩混勻，制備成素馨苦苷母液，通過添加 PBS緩沖液將所述素馨苦苷母液稀釋成不 同濃度的素馨苦苷溶液。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的素馨苦苷溶液的配制方法，其特征在于，所述素馨苦苷母液的 濃度為5mmol/L。3. -種素馨苦苷的應(yīng)用，其特征在于，將所述素馨苦苷用于制備預(yù)防或者治療阿爾茨 海默病的藥物或保健品。
【文檔編號】A61K36/63GK105963245SQ201610253704
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年4月22日
【發(fā)明人】應(yīng)明, 鐘亦逸, 劉瓊, 賀震旦, 倪嘉纘
【申請人】深圳大學(xué)