專利名稱：一種從海綿中提取的膽甾醇醋酸酯及制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從海綿中提取分離，并通過化學(xué)方法獲得膽甾醇醋酸酯的方法。
海綿是最原始的多細胞動物之一，種類繁多，分布極廣，以海產(chǎn)為主。我國南海地處熱帶和亞熱帶，海洋生物物種極為豐富，特別是海綿，約占世界總數(shù)的一半，人們已從海綿生物中發(fā)現(xiàn)了許多結(jié)構(gòu)獨特的有機化合物如萜類、甾體、苷類、生物堿、多肽和聚醚類等，其中許多具有抗腫瘤、抗心血管病、抗菌和抗病毒等生理活性，不少化合物具有潛在的臨床應(yīng)用價值，特別是以這些化合物為模式經(jīng)過化學(xué)結(jié)構(gòu)的修飾，獲得生理活性更強、毒性更低的有機化合物，更加引起關(guān)注。
本發(fā)明所述的膽甾醇醋酸酯化學(xué)名稱為25(29)-亞甲基-26-甲基-26-乙基膽甾醇醋酸酯(英文名稱Rhabdasterol acetate)，該化合物結(jié)構(gòu)式為
中國專利96122199.2所公開的膽甾醇在結(jié)構(gòu)上的不同之處是增加一個乙?；瑴p少一個氫原子，即原結(jié)構(gòu)中氫原子被乙?；〈?，該化合物的物理常數(shù)如下m.p.102～104℃；[α]D20(CH2Cl2,C=9.76mg/ml,C=0.97)-44.6°；νmaxKBr(cm-1):3438,2937,2823,1731,1641,1463,1371,1332,1249,1135,1039,962,887,833；δ1H(CDCl3):5.38(1H,d,J=4.5Hz,6-H),4.70(2H,S,29-H),4.61(1H,m,3α-H),2.03(3H,S,-OCH3),1.02(3H,S,19-CH3),1.00(3H,d,J=6.95Hz,30-CH3),0.95(3H,d,J=6.64Hz,21-CH3),0.84(3H,t,J=7.40,28-CH3),0.69(3H,S,18-CH3)；δ13C(CDCl3):170.53(C=O),155.28(C25),139.65(C5),122.61(C6),107.08(C29),73.99(C3),56.68(C14),55.99(C17),50.80(C10),50.05(-OCH3),42.35(C4),41.70(C13),39.74(C26),38.12(C12),36.99(C1),36.59(C20),35.76(C22),34.63(C7),31.88(C8),31.88(C9),30.39(C23),28.28(C2),28.16(C24),27.77(C27).24.26(C16),21.38(C15),21.03(C11),19.79(C19),19.28(C30),18.72(C21),11.94(C28),11.84(C18)；m/z:408(15.4),394(61.7),296(100),147(54.62),145(60.33),81(71.6),69(54.6),55(71.4),43(77.6)。
該化合物的提取、分離以及化學(xué)反應(yīng)的方法包括如下過程曬干的南海海綿切碎后用95％工業(yè)乙醇浸泡，抽提三次，將抽提物減壓除去乙醇獲得漿狀物，將漿狀物分散于適量的蒸餾水中，以等量的乙酸乙酯萃取三次，萃取物經(jīng)減壓除去乙酸乙酯獲得棕色漿狀物，此漿狀物經(jīng)硅膠柱層析，以不同比例的石油醚-乙酸乙酯和丙酮進行梯度淋洗，獲得五個不同極性的洗出液，經(jīng)濃縮獲得A,B,C,D,E五個組分，B組分再經(jīng)硅膠柱層析獲得粗產(chǎn)物。將此粗產(chǎn)物用丙酮-甲醇重結(jié)晶二次，獲得無色針狀晶體，在針狀晶體中加入相應(yīng)量的醋酸酐和吡啶，在25～85℃的溫度下，攪拌反應(yīng)1～3小時，反應(yīng)完全后，經(jīng)減壓除去吡啶和多余的酸酐，再經(jīng)柱層析獲得白色固體物。
本發(fā)明所述化合物的藥理作用由中山大學(xué)藥學(xué)系測試，初步藥效學(xué)試驗表明1．該化合物對正常大鼠的血壓、心率有一定的作用，在4mg/kg藥量下，降壓率達4.1％，心率變化率為4.2％。
2．該化合物對豚鼠右心房自律性有一定的影響，在終濃度0.06mg/ml下，收縮力最大反應(yīng)為-4.3％。
由上述的試驗數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明所述的化合物不但具有新的結(jié)構(gòu)，而且對動物正常血壓、心率失?，F(xiàn)象有較強的影響，因此該化合物具有重要的理論價值和應(yīng)用前景。
實施例1．南海海綿Rhabdastrella sp.曬干(3.0kg)，切碎后用95％工業(yè)乙醇(5kg)于室溫下抽提三次，合并抽提物并減壓濃縮至漿狀物，將漿狀物均勻分散于500ml蒸餾水中，以乙酸乙酯(500ml)萃取三次，合并萃取物并減壓濃縮得棕色漿狀物71g。該漿狀物經(jīng)硅膠(200g，青島海洋化工廠，硅膠H,10～40μ)柱層析(φ=3.6×48cm)，以500ml不同比例的乙酸乙酯-石油醚(10％,15％,20％,30％)和500ml30％丙酮-石油醚進行梯度淋洗，獲得五個不同極性的洗出液，將其中15％的乙酸乙酯-石油醚組分經(jīng)減壓濃縮得固體物2.8g，再進行硅膠(120g，青島海洋化工分廠，300～400目)柱層析(φ=2.4×48cm，洗脫劑15％乙酸乙酯-石油醚)，獲得粗產(chǎn)物2.1g，將此粗產(chǎn)物用丙酮-甲醇在室溫下進行二次重結(jié)晶，獲得無色針狀晶體350mg。經(jīng)紅外，質(zhì)譜和核磁共振譜等數(shù)據(jù)確定此化合物為25(29)-亞甲基-26-甲基-26-乙基膽甾醇(1)。2．乙?；饔?
①在25ml單口圓底燒瓶中加入113.0mg化合物(1),1.5ml醋酸酐，1.5ml吡啶。在室溫密封體系下，磁攪拌反應(yīng)3小時(通過TLC判斷反應(yīng)已完全)，減壓除去溶劑和多余酸酐，再通過硅膠(10g,300～400目)柱層析(φ=1.2×43cm，洗脫劑2％乙酸乙酯-石油醚)獲得化合物(2)103.2mg，以膽甾醇計算產(chǎn)率為83.2％。②在25ml單口圓底燒瓶中加入115.0mg化合物(1),1.5ml醋酸酐，1.5ml吡啶?？刂茰囟仍?5℃下，裝上氯化鈣干燥管，磁攪拌反應(yīng)1小時(通過TLC判斷反應(yīng)已完全)，減壓除去吡啶和多余酸酐，再通過硅膠(10g,300～400目)柱層析(φ=1.2×43cm，洗脫劑2％乙酸乙酯-石油醚)獲得化合物(2)112.0mg，產(chǎn)率為88.7％。經(jīng)紅外光譜，質(zhì)譜和核磁共振譜等數(shù)據(jù)確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)為
權(quán)利要求
1．一種從海綿中提取的膽甾醇醋酸酯，其特征在于該化合物從南海海綿中用權(quán)利要求2中所述的方法提取分離并經(jīng)化學(xué)反應(yīng)獲得，結(jié)構(gòu)式如下
化學(xué)名稱25(29)-亞甲基-26-甲基-26-乙基膽甾醇醋酸酯，該化合物物理常數(shù)為m.p.102～104℃；[α]D20(CH2Cl2,C=9.76mg/ml,C=0.97)-44.6°；νmaxKBr(cm-1):3438,2937,2823,1731,1641,1463,1371,1332,1249,1135,1039,962,887,833；δ1H(CDCl3):5.38(1H,d,J=4.5Hz,6-H),4.70(2H,S,29-H),4.61(1H,m,3α-H),2.03(3H,S,-OCH3),1.02(3H,S,19-CH3),1.00(3H,d,J=6.95Hz,30-CH3),0.95(3H,d,J=6.64Hz,21-CH3),0.84(3H,t,J=7.40,28-CH3),0.69(3H,S,18-CH3)；δ13C(CDCl3):170.53(C=O),155.28(C25),139.65(C5),122.61(C6),107.08(C29),73.99(C3),56.68(C14),55.99(C17),50.80(C10),50.05(-OCH3),42.35(C4),41.70(C13),39.74(C26),38.12(C12),36.99(C1),36.59(C20),35.76(C22),34.63(C7),31.88(C8),31.88(C9),30.39(C23),28.28(C2),28.16(C24),27.77(C27),24.26(C16),21.38(C15),21.03(C11),19.79(C19),19.28(C30),18.72(C21),11.94(C28),11.84(C18)；m/z:408(15.4),394(61.7),296(100),147(54.62),145(60.33),81(71.6),69(54.6),55(71.4),43(77.6)。
2．一種專門制備權(quán)利要求1中所述的化合物的方法，其特征在于海綿用乙醇提取，提取物經(jīng)濃縮至漿狀物，分散于水中，以乙酸乙酯萃取，萃取物經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，通過丙酮-甲醇混合液二次結(jié)晶得針狀晶體，再經(jīng)乙酰化反應(yīng)獲得權(quán)利要求1中的化合物。
3．根據(jù)權(quán)利要求2中所述的方法，其特征在于所述的硅膠柱層析以不同比例的石油醚-乙酸乙酯和丙酮進行梯度淋洗，洗出液再經(jīng)硅膠柱層析獲粗產(chǎn)物。
4．根據(jù)權(quán)利要求2中所述方法，其特征在于乙?；?5～85℃的溫度下進行。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從海綿中提取獲得膽甾醇醋酸酯的方法,該新化合物被命名為:25(29)－亞甲基－26－甲基－26－乙基膽甾醇醋酸酯(Rhabdasterol acetate)化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:該化合物是由南海海綿經(jīng)提取、分離、硅膠柱層析和重結(jié)晶及乙?；^程而制得,不但具有新的化學(xué)結(jié)構(gòu)而且具有較強的降血壓和抗心率失常的作用,因此有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
文檔編號A61P9/12GK1222525SQ9812222
公開日1999年7月14日 申請日期1998年11月26日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月26日
發(fā)明者鄧松之, 章勤, 肖定軍 申請人:中國科學(xué)院廣州化學(xué)研究所