專利名稱：一種具有免疫抑制作用的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于自身免疫溶血性貧血、腎炎、結(jié)締組織以及臟器移植排斥反應(yīng)的新免疫抑制性化合物。
目前開發(fā)的免疫抑制劑，其藥物選擇性強(qiáng)，專一性地調(diào)節(jié)某一免疫細(xì)胞的亞族。代表藥物如環(huán)孢菌素A，能選擇性抑T制輔助細(xì)胞的克隆(無性繁殖系)的增殖，在器官移植方面取得了可喜的成績，并已廣泛用于臨床。然而，電發(fā)現(xiàn)一些副作用，如個(gè)別患者用藥后有急性和慢性腎中毒、輕度震顫、神經(jīng)病變、齒齦肥厚和多毛等副作用。最近發(fā)現(xiàn)的FK-506屬于大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(C44H19NO5)，雖然實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果滿意，但因生產(chǎn)復(fù)雜，限制了臨床上廣泛應(yīng)用。
本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有免疫抑制的各種缺點(diǎn)，尋找更理想代藥物化合物。
本發(fā)明的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
上述結(jié)構(gòu)中C12a和C6a的H原子為反式結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎，有別于迄今所有的免疫抑制劑，分子量小，結(jié)構(gòu)簡單，便于修飾。研究表明，本化合物的免抑制作用與環(huán)孢菌素A相似或稍強(qiáng)，同時(shí)有抑制腫瘤細(xì)胞的作用，有可能成為更有特點(diǎn)的新一代免疫抑制劑。
體內(nèi)、體外藥效學(xué)試驗(yàn)顯示，本化合物具有好的免疫抑制作用，其細(xì)胞免疫強(qiáng)度與當(dāng)今臨床上廣泛使用的免疫抑制劑--環(huán)孢菌素A相當(dāng)，其體液免疫抑制作用明顯優(yōu)于環(huán)孢菌素A，同時(shí)其急性毒性很低，LD50(口服)為1000mg/kg，比治療劑量10mg/kg大100倍，所以有望開發(fā)成為一個(gè)新的免疫抑制藥物。
本化合物的理化性質(zhì)如下(1)黃色針晶(2)元素分析C19H18O5實(shí)驗(yàn)值C69.58 H5.60(3)分子量及分子式

圖1為本發(fā)明的質(zhì)譜圖本化合物的質(zhì)譜，在m/z326處有(M+)的分子離子峰；因此可確定其分子式C19H18O5，分子量326。
(4)紫外吸收光譜圖2為本發(fā)明紫外吸收光譜圖。
在232nm處有一特征性的吸收峰；在350nm處出現(xiàn)一個(gè)肩峰。
(5)紅外吸收光譜圖3為本發(fā)明紅外吸收光譜。
用KBr溶劑法測定，其主要吸收極大波數(shù)如下3400，1690，1640(cm-1)。
(6)核磁共振譜圖4為本發(fā)明核磁共振譜使用400M Hzin，在DMSO-d6中測定的1H的核磁共振譜如圖4所示。
(7)溶解性溶于甲醇、乙醇、丙酮，不溶于水、石油醚。
(8)熔點(diǎn)170℃(分解)(9)旋光度[α]250＝+150(c1×10-4M eOH)(10)TLCRf值(silica ge160M erck5715)苯-甲醇＝9∶1 Rf＝0.43氯仿-甲醇＝9∶1Rf＝0.48(11)單晶X光衍射圖5為本發(fā)明分子結(jié)構(gòu)圖將單晶(晶體大小0.3×0.3×0.4mm)置于NICOLET R3M/EX射線衍射儀上，用石墨晶體單色器λ＝1.5417810×10-10m。晶體數(shù)據(jù)屬正文晶系，空間群為P212121，晶胞參數(shù)為a＝9.275(4)，b＝10.994(5)，c＝15.683(7)×10-10m。晶胞內(nèi)分子數(shù)z＝4，體積v＝1599.1×10-30M3。應(yīng)用SHELXTL程序分析塊矩陣最小二乘方法修正結(jié)構(gòu)參數(shù)，差值電子密度法確定氫原子的坐標(biāo)，最終的偏離因子R＝0.0683，分子結(jié)構(gòu)如圖5所示。
生物學(xué)性質(zhì)本化合物對枯草菌6633和金葡萄菌15等有弱抗菌活性。
免疫抑制作用一、細(xì)胞免疫抑制作用1、對T-淋巴細(xì)胞增殖的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同劑量K-C和CyA一樣對絲裂原ConA刺激T-淋巴細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，它們的抑制率分別為20.7％、47.2％、71.7％和18.9％、52.8％、84.9％，二藥在相同劑量情況下，抑制T-細(xì)胞增殖的作用程序無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
2、對小鼠DNFB所致遲發(fā)性超敏反應(yīng)和大劑量環(huán)磷酰胺所致增強(qiáng)型遲發(fā)性超敏反應(yīng)的作用。
不同劑量(12.5，25，50mg/kg/d×g)K-C可明顯抑DNFB制所致的遲發(fā)性超敏反應(yīng)及環(huán)磷酰胺增強(qiáng)的DNFB遲發(fā)性超敏反應(yīng)，其作用強(qiáng)度與相同劑量的CyA無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
3、對心臟和皮膚移植存活期的影響。
本化合物和環(huán)孢菌素A一樣對心臟和皮膚移植物的存活期能顯著延長，表明本化合物和環(huán)孢菌素A對移植物排斥反應(yīng)有抑制作用。
4、本化合物對腹腔滲出細(xì)胞吞噬作用的影響。
CyA和K-C高劑量組與對照組相比吞噬作用不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。提示CyA和K-C對巨噬細(xì)胞吞噬作用可能無影響。
二、體液免疫抑制作用1、本化合物對脾細(xì)胞分泌抗體的作用。
致敏對照與致敏溶劑組溶血素含量均較非致敏組含量高，提示致敏動物抗體含量高，致敏溶劑組與致敏對照組相比較其溶血素含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示溶劑對脾細(xì)胞抗體生成無明顯影響。環(huán)孢菌素A和本化合物高、中、低三個(gè)劑量組溶血素含量均比致敏對照組低(P＜0.001)，提示兩藥對脾細(xì)胞抗體生存存在抑制作用。而且，本化合物三個(gè)劑量對抗體的生成作用影響較環(huán)孢菌素A弱。
2、本化合物對小鼠脾混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的影響。
3、本化合物對小鼠活化B淋巴細(xì)胞所致脾細(xì)胞增殖的影響。
由上述2、3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本化合物比CyA具有更好的體液免疫抑制作用。
權(quán)利要求
1.一種具有免疫抑制作用的化合物，其特征在于該化合物具有下述結(jié)構(gòu)
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于自身免疫溶血性貧血、腎炎、結(jié)締組織以及臟器移植排斥反應(yīng)的新免疫抑制性化合物。試驗(yàn)證明,本發(fā)明具有分子量小,結(jié)構(gòu)簡單,便于修飾等特點(diǎn)。研究表明,本化合物的免抑制作用與環(huán)孢菌素A相似或稍強(qiáng),同時(shí)有抑制腫瘤細(xì)胞的作用,有可能成為更有特點(diǎn)的新一代免疫抑制劑。
文檔編號A61K31/12GK1196348SQ9810190
公開日1998年10月21日 申請日期1998年5月12日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月12日
發(fā)明者王南金 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所