專利名稱：：裝有用于診斷和治療的多相組合物的容器的制作方法本申請是1993年11月30日申請的序號為No.159,687的美國申請的部分后續(xù)申請，而No.159,687又是1993年6月11日申請的序號為No.076,239的美國申請的部分后續(xù)申請，而No.076,239又是1991年6月18日申請的序號為No.717,084和No.716,899的美國申請的部分后續(xù)申請，而No.717,084和No.716,899又都是1990年8月20日申請的序號為No.569,828的美國申請的部分后續(xù)申請，而No.569,828又是1989年12月22日申請的序號為No.455,707的美國申請的部分后續(xù)申請。本申請也是1993年11月30日申請的序號為No.160,232的美國申請的部分后續(xù)申請，而No.160,232又是1993年6月11日申請的序號為No.076,250的美國申請的部分后續(xù)申請，而No.076,250又是1991年6月18日申請的序號為No.717,084和No.716,899的兩個美國申請的部分后續(xù)申請，而No.717,084和No.716,899又都是1990年8月20日申請的序號為No.569,828的美國申請的部分后續(xù)申請，而No.569,828又是1989年12月22日申請的序號為No.455,707的美國申請的部分后續(xù)申請。本申請還是1994年3月11日申請的序號為No.212,533的美國申請的部分后續(xù)申請，而No.212,533又是1993年6月11日申請的序號為No.076,239和No.076,250的兩個美國申請的部分后續(xù)申請。No.076,239和No.076,250的兩個美國申請的來龍去脈如上文所列。本申請在此要求這些申請的優(yōu)先權(quán)，并且這些申請均以其全文所公開的內(nèi)容引入本文作參考。本發(fā)明的背景超聲是一種比其它診斷方法有許多優(yōu)越性的診斷顯影技術(shù)。與核醫(yī)學(xué)和X射線等顯影技術(shù)不同，超聲不使患者遭受電離輻射的有害影響。而且，相對來講超聲不貴并且可進(jìn)行便攜式檢查。在超聲顯影中，聲音是通過轉(zhuǎn)換器被傳遞到患者或動物體內(nèi)的。當(dāng)聲波通過體內(nèi)傳播時，它們會碰到組織和流體的界面。取決于體內(nèi)的組織和流體的聲學(xué)性質(zhì)，超聲波部分地或全部地被反射或吸收。當(dāng)聲波被界面反射時，它們被轉(zhuǎn)換器內(nèi)的接收器探測并被加工以形成影像。體內(nèi)的組織和流體的聲學(xué)性質(zhì)，決定了所得影像的對比度。核磁共振顯影(MRI)是相對新穎的顯影技術(shù)，與X射線不同，它不利用電離輻射。同計算機化X射線斷層照相術(shù)一樣，MRI能產(chǎn)生身體的橫斷面影像，然而，MRI還有可在任何掃描平面(即，軸向的、頭頂?shù)?、前后向的或正交?產(chǎn)生影像的優(yōu)點。MRI利用磁場、高頻能量和磁場梯度來產(chǎn)生身體的影像。組織間的對比或信號強度的差異大體反映了組織的T1和T2松馳值和質(zhì)子密度(有效地反映了自由水的含量)。近幾年在診斷超聲和MRI技術(shù)方面已經(jīng)取得了進(jìn)展。然后，盡管已在各方面進(jìn)行了技術(shù)改進(jìn)，超聲和MRI在許多方面還仍不完美，尤其是在肝臟、脾臟、腎臟、心臟和脈管系統(tǒng)的顯影和疾病的探查(包括血流的測量)方面。對這些區(qū)域的探測能力以及進(jìn)行所述測量的能力，依賴于組織或流體與其周圍組織或流體間的聲學(xué)性質(zhì)(超聲)或T1和T2的信號強度(MRI)差異。因此，人們一直在尋求使組織或流體與其周圍組織或流體間差異增加以及改善超聲或核磁共振顯影和疾病檢查的造影劑。本發(fā)明通過提供裝有類脂水懸浮液相和與該類脂水懸浮液相基本分離的氣相的便利容器來解決這些以及其它的問題，在使用前振蕩所述的便利容器，產(chǎn)生用于諸如超聲或核磁共振顯影以及其它用途的極佳的氣體填充的脂質(zhì)體造影劑。因造影劑是在使用之前剛剛制備的，則可避免其儲藏有效期穩(wěn)定性的問題。本發(fā)明概述本發(fā)明提供一種容器，容器內(nèi)裝有(i)類脂水懸浮液相和(ii)與該類脂水懸浮液相基本分離的氣相。在使用前，可以振蕩容器的內(nèi)容物，由此產(chǎn)生氣體填充的脂質(zhì)體組合物，該組合物是用于例如超聲或核磁共振顯影以及治療應(yīng)用的具極佳均一性的造影劑。根據(jù)本發(fā)明剛好在使用前才制備造影劑的能力避免了現(xiàn)有技術(shù)中的許多造影劑遇到的儲藏有效期穩(wěn)定性的問題。本發(fā)明的自給裝置使滅菌也很容易。下面對本發(fā)明的這些和其它的方面及優(yōu)點進(jìn)行更詳細(xì)地討論。附圖的簡要說明圖1是裝有類脂水懸浮液和與之基本分離的液面上氣體的容器的側(cè)切視圖。圖2是振蕩裝置圖，它可用于振蕩圖1的容器，由此混合類脂水懸浮液和氣體，并產(chǎn)生用于超聲或核磁共振顯影的造影劑。圖3是用圖1所示的容器和圖2所示的振蕩裝置產(chǎn)生的氣體填充的脂質(zhì)體的顯微照片。本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明的容器裝有類脂水懸浮液相和基本分離的氣相。在使用前，可振蕩容器及其內(nèi)容物，使類脂和氣相混合，導(dǎo)致氣體填充脂質(zhì)體的形成，該脂質(zhì)體包裹了氣體。所得的氣體填充的脂質(zhì)體提供了用于診斷顯影、尤其是用于超聲或核磁共振顯影的極佳的強造影劑。許多類脂可用于所述的類脂水懸浮液相。根據(jù)需要，類脂可以懸飽和的或不飽和的，可以是直鏈的或支鏈形的。這樣的類脂可以包括，例如，含有寬范圍碳原子數(shù)、優(yōu)選在大約12個碳原子和大約22個碳原子之間的脂肪酸分子。也可使用由類異戊二烯單元、異戊烯基、和/或甾醇部分(例如膽甾醇、膽甾醇硫酸酯、及其類似物)組成的烴類。如果需要，類脂也可以帶有聚合物鏈如兩親聚合物聚乙二醇(PEG)或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或其衍生物(用于體內(nèi)靶向)，或帶電荷氨基酸如聚賴氨酸或聚精氨酸(用于結(jié)合帶負(fù)電荷的化合物)或糖類(用于體內(nèi)靶向)例如記載于No.4,310,505的美國專利中的糖類、或糖脂(用于體內(nèi)靶向)、或抗體及其它的肽及蛋白質(zhì)(用于體內(nèi)靶向)等等?？蓪邢蚧蚪Y(jié)合化合物簡單地加入到類脂水懸浮液相中，或者將其特異性地化學(xué)連接到類脂上。如果需要，類脂也可以是陰離子類脂或陽離子類脂，以便它們自己也能與其它化合物如藥物、遺傳物質(zhì)、或其它治療劑結(jié)合。適當(dāng)?shù)念愔吞貏e適當(dāng)?shù)念愔悇e的例子包括磷脂酰膽堿類，如二油酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、和二硬脂酰磷脂酰膽堿；磷脂酰乙醇胺類，如二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺和N-琥珀酰-二油酰磷脂酰乙醇胺；磷脂酰絲氨酸類；磷脂酰甘油類；鞘脂類；糖脂類(glycolipids)如神經(jīng)節(jié)苷脂GM1；糖脂類(glucolipids)；硫苷脂類；糖鞘脂類；磷脂酸類如二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)；棕櫚酸類；硬脂酸類；花生四烯酸類；月桂酸類；肉豆蔻酸類；月桂烯酸類；抹香鯨酸類；9-十四碳烯酸類；9-十六碳烯酸類；6-十八碳烯酸類；油脂酸類；異月桂酸類；異肉豆蔻酸類；異棕櫚酸類；異硬脂酸類；膽甾醇和膽甾醇的衍生物如膽甾醇半琥珀酸酯、膽甾醇硫酸酯、和膽甾醇-(4′-三甲氨基)-丁酸酯；聚氧乙烯脂肪酸酯類；聚氧乙烯脂肪酸醇類；聚氧乙烯脂肪酸醇醚；聚氧乙烯化的山梨糖醇酐脂肪酸酯；甘油聚乙烯乙二醇羥基硬脂酸酯；甘油聚乙烯乙二醇蓖麻醇酸酯；乙氧基化的大豆甾醇類；乙氧基化的蓖麻油；聚氧乙烯-聚氧丙烯脂肪聚合物類；聚氧乙烯脂肪酸硬脂酸酯類；12-(((7′-二乙氨基香豆素-3-基)-羰基)-甲氨基)-十八烷酸；N-[12-(((7′-二乙氨基-香豆素-3-基)-羰基-甲基-氨基)十八烷?；鵠-2-氨基-棕櫚酸；1，2-二棕櫚?；?Sn-甘油；1，2-二棕櫚?；?Sn-3-琥珀酰甘油；1，3-二棕櫚酰基-2-琥珀?；?甘油；和1-十六烷基-2-棕櫚?；?甘油磷酰乙醇胺和棕櫚酰基高半胱氨酸；月桂基三甲基溴化銨(月桂基＝十二烷基)；鯨臘基三甲基溴化銨(鯨臘基＝十六烷基)；肉豆蔻基三甲基溴化銨(肉豆蔻基＝十四烷基)；烷基二甲基芐基氯化銨，如其中的烷基為C12、C14或C16烷基；芐基二甲基十二烷基溴化銨；芐基二甲基十二烷基氯化銨；芐基二甲基十六烷基溴化銨；芐基二甲基十六烷基氯化銨；芐基二甲基十四烷基溴化銨；芐基二甲基十四烷基氯化銨；鯨臘基二甲基乙基溴化銨；鯨臘基二甲基乙基氯化銨；溴化鯨臘基吡啶翁；氯化鯨臘基吡啶翁；N-[1-(2，3-二油酰氧基)-丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨(DOTMA)；1，2-二油酰氧基-3-(三甲氨基)丙烷(DOTAP)；和1，2-二油酰基-e-(4′-三甲氨基)-丁?；?Sn-甘油(DOTB)。一旦本領(lǐng)域的技術(shù)人員掌握了本發(fā)明公開的內(nèi)容，對于他們來講，顯然上面所列的類脂僅是示例性的并且也可使用其它的類脂、脂肪酸、和衍生物以及它們的混合物，而且這些額外的化合物也將落入本文所用的術(shù)語類脂的范圍之內(nèi)。正如熟練的技術(shù)人員會認(rèn)識到的，所述的類脂和/或其混合物，可通過振蕩容器形成脂質(zhì)體(也就是具有內(nèi)部空腔的脂質(zhì)球)，所述脂質(zhì)體在其內(nèi)部空腔包裹了來自氣相的氣體。該脂質(zhì)體可由單層類脂層(類脂單層)組成，也可由兩層類脂層(類脂雙層)或兩層以上的類脂層(類脂多層)組成。一般說來，類脂優(yōu)選以其凝膠狀態(tài)存在，也就是說，在低于類脂物質(zhì)的凝膠態(tài)向液晶態(tài)轉(zhuǎn)變的相變溫度(Tm)下存在，尤其是在振蕩期間。各種不同類脂的凝膠態(tài)向液晶態(tài)轉(zhuǎn)變的相變溫度是已知的。用已熟知的技術(shù)也可容易地將這些溫度計算出來。下表1摘自DerekMarsh的“CRCHandbookofLipidBilayers”(CRC類脂雙層手冊)，139頁，CRC出版，BocaRaton，佛羅里達(dá)州(1990)。表1顯示了例如，各種有代表性的飽和膽堿磷酸類脂的主鏈相變溫度。表1飽和的二脂?；?Sn-甘油基-(3)-膽堿磷酸類主鏈熔解轉(zhuǎn)變在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，含水類脂相還包含聚合物，優(yōu)選兩親聚合物，并優(yōu)選與類脂直接結(jié)合(即，化學(xué)連接)的聚合物。兩親化合物優(yōu)選為聚乙二醇或其衍生物。最優(yōu)選的組合是與聚乙二醇(PEG)、特別是平均分子量為約5000的PEG結(jié)合的類脂二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)(DPPE-PEG5000)。PEG或其它聚合物可以通過共價鍵如酰胺鍵、氨基甲酸酯鍵或胺鍵與DPPE或其它類脂結(jié)合。另外，酯鍵、醚鍵、硫酯鍵、硫代酰胺鍵或二硫鍵(硫酯鍵)可用于PEG或其它聚合物而使聚合物與，例如，膽甾醇或其它磷脂類結(jié)合起來。特別優(yōu)選的類脂組合是DPPC、DPPE-PEG5000和DPPA，尤其是以DPPC∶DPPE-PEG5000∶DPPA＝約82％∶8％∶10％(摩爾百分比)的組合。為制備含水相，可以將類脂與水(優(yōu)選蒸餾水)、正常(生理)鹽水、磷酸鹽緩沖液或其它水溶液混合，這一點對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯然的。許多不同的氣體可以用于本發(fā)明的氣相。優(yōu)選的氣體是基本上不溶于類脂水懸浮液相的?！盎旧舷氯苡凇保侵笟怏w在20℃和1個大氣壓下其在水中的溶解度維持在等于或小于18毫升氣體/千克水。如此說來，基本上不溶的氣體具有的溶解度小于氮氣的溶解度。溶解度在20℃和1個大氣壓下優(yōu)選等于或小于15毫升氣體/千克水，更優(yōu)選等于或小于10毫升氣體/千克水。在前面所述的溫度和壓力下，一類優(yōu)選的氣體的溶解度為約0.001-約18毫升氣體/千克水，或為約0.01-約15毫升氣體/千克水，或為約0.1-約10毫升氣體/千克水，或為約1-約8毫升氣體/千克水，或為約2-約6毫升氣體/千克水。例如，在20℃和1個大氣壓下，全氟代烴和氟化氣體六氟化硫的溶解度小于10毫升氣體/千克水，因此它們是優(yōu)選的。不是基本上不溶的氣體，如本文所定義的，是指可溶解的氣體。其它合適的基本上不溶或可溶的氣體包括(但不限于)六氟丙酮、異丙基乙炔、丙二烯、四氟丙二烯、三氟化硼、1，2-丁二烯、1，2-丁二烯、1，2，3-三氯丁二烯、2-氟-1，3-丁二烯、2-甲基-1，3-丁二烯、六氟-1，3-丁二烯、丁二炔、1-氟丁烷、2-甲基丁烷、十氟丁烷(全氟丁烷)、十氟異丁烷(全氟異丁烷)、1-丁烯、2-丁烯、2-甲基-1-丁烯、3-甲基-1-丁烯、全氟-1-丁烯、全氟-2-丁烯、4-苯基-3-丁烯-2-酮、2-甲基-1-丁烯-3-炔、硝酸丁酯、1-丁炔、2-丁炔、2-氯-1，1，1，4，4，4-六氟-丁炔、3-甲基-1-丁炔、全氟-2-丁炔、2-溴-丁醛、硫化羰、丁烯腈、環(huán)丁烷、甲基環(huán)丁烷、八氟環(huán)丁烷(全氟環(huán)丁烷)、全氟異丁烷、3-氯環(huán)戊烯、環(huán)丙烷、1，2-二甲基環(huán)丙烷、1，1-二甲基環(huán)丙烷、乙基環(huán)丙烷、甲基環(huán)丙烷、聯(lián)二炔、3-乙基-3-甲基二氮丙啶、1，1，1-三氟重氮乙烷、二甲胺、六氟二甲胺、二甲基乙基胺、雙-(二甲基膦)胺、2，3-二甲基-2-降冰片烷、全氟二甲胺、氯化二甲基氧翁、1，3-二氧戊環(huán)-2-酮、1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1-三氟乙烷、1，1，12，2-四氟乙烷、1，1，1-三氟乙烷、1，1，2，2-四氟乙烷、1，1，2-三氯-1，2，2-三氟乙烷、1，1-二氯乙烷、1，1-二氯-1，2，2，2-四氟乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氯-1，1，2，2，2-五氟乙烷、2-氯-1，1-二氟乙烷、1-氯-1，1，2，2，2-五氟乙烷、2-氯-1，1-二氟乙烷、1-氯-1，1，2，2-四氟乙烷、2-氯-1，1-二氟乙烷、氯乙烷、氯五氟乙烷、二氯三氟乙烷、氟乙烷、硝基五氟乙烷、亞硝基五氟-乙烷、全氟乙烷、全氟乙胺、乙基乙烯基醚、1，1-二氯乙烯、1，1-二氯-1，2-二氟-乙烯、1，2-二氟乙烯、甲烷、三氟甲烷磺酰氯、三氟甲烷磺酰氟、(五氟硫代)三氟甲烷、溴代-二氟代-亞硝基-甲烷、溴代-氟代-甲烷、溴代-氯代-氟代-甲烷、溴代-三氟代-甲烷、氯代-二氟代-硝基-甲烷、氯代-二硝基-甲烷、氯代-氟代-甲烷、氯代-三氟代-甲烷、氯代-二氟代-甲烷、二溴代-二氟代-甲烷、二氯代-二氟代-甲烷、二氯代-氟代-甲烷、二氟代-甲烷、二氟代-碘代-甲烷、二硅甲烷、氟代-甲烷、碘甲烷-碘代-三氟代-甲烷、硝基-三氟代-甲烷、亞硝基-三氟代-甲烷、四氟代-甲烷、三氯代-氟代-甲烷、三氟代-甲烷、三氟甲烷亞磺酰氯、2-甲基丁烷、甲醚、甲基異丙基醚、乳酸甲酯、亞硝酸甲酯、二甲硫、甲基乙烯基醚、新戊烷、氮氣(N2)、氧化氮、1，2，3-十九烷三羧酸-2-羥基三甲基酯、1-壬烯-3-炔、氧氣(O2)、氧17(17O2)、1，4-戊二烯、正-戊烷、十二氟戊烷(全氟戊烷)、十四氟己烷(全氟己烷)、全氟異戊烷、全氟新戊烷、4-氨基-4-甲基-2-戊酮、1-戊烯、2-戊烯(順式)、2-戊烯(反式)、3-溴-1-戊烯、全氟代-1-戊烯、四氯代-苯二甲酸、2，3，6-三甲基-哌啶、丙烷、1，1，1，2，2，3-六氟-丙烷、1，2-環(huán)氧-丙烷、2，2-二氟丙烷、2-氨基-丙烷、2-氯-丙烷、七氟代-1-硝基-丙烷、七氟代-1-亞硝基-丙烷、全氟丙烷、丙烯、1，1，1，2，3，3-六氟-2，3-二氯-丙烷、1-氯-丙烯、氯丙烯(反式)、2-氯-丙烯、3-氟-丙烯、全氟代-丙烯、丙炔、3，3，3-三氟丙炔、3-氟-苯乙烯、六氟化硫、十氟化二硫(S2F10)、2，4-二氨基-甲苯、三氟乙腈、三氟甲基過氧化物、二(三氟甲基)硫、六氟化鎢、乙烯基乙炔、乙烯基醚、氖氣、氦氣、氪氣、氙氣(特別是富含銣的超極化的氙氣)、二氧化碳、氦氣、和空氣。優(yōu)選氟化的氣體(即，含有一個或多個氟分子的氣體如六氟化硫)、碳氟化物氣體(即，是氟化的碳或氣體的氟化氣體)、全氟化碳?xì)怏w(即，被完全氟化的碳氟化物氣體如全氟丙烷和全氟丁烷)。雖然從理論上來講，任何氣體都可用于本發(fā)明的氣相，但可對特定的氣體加以選擇，以使所得造影劑的所需特征最佳，并滿足特定診斷應(yīng)用的要求。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，例如，某些氣體在振搖后形成比其它氣體更穩(wěn)定的氣體填充的脂質(zhì)體，從而這些氣體是優(yōu)選的。還發(fā)現(xiàn)，某些氣體在診斷顯影如超聲或MRJ時產(chǎn)生較好的顯影結(jié)果。作為提高氣體填充的脂質(zhì)體穩(wěn)定性的例子，人們發(fā)現(xiàn)二氧化碳＜氧氣＜空氣＜氮氣＜氖氣＝氦氣＜全氟化碳?xì)怏w。由于這些以及其它方面的原因，氟化的氣體、尤其是全氟化碳?xì)怏w是優(yōu)選的。另外，雖然在一些情況下，可溶性氣體可起到與本發(fā)明的氣相同樣適當(dāng)?shù)淖饔?，但是基本上不溶的氣體傾向于比具有較高溶解度的氣體產(chǎn)生更大的穩(wěn)定性，特別是在通過振蕩產(chǎn)生造影劑的時候。而且，根據(jù)本發(fā)明，在振蕩前很容易使這些不溶性氣體形成的氣相基本上與含水類脂相保持分離。因此，如上文所定義的基本上不溶的氣體是優(yōu)選的。超聲顯影的質(zhì)量和超聲顯影的持續(xù)時間也與氣體在含水環(huán)境中的溶解度有關(guān)。一般說來，氣體的溶解度降低，可使超聲得到持續(xù)時間較長、分辨率較高的圖像。另外，已普遍觀察到振蕩產(chǎn)生的氣體填充的脂質(zhì)體的大小與氣體在含水環(huán)境中的溶解度有關(guān)，氣體的溶解度較大導(dǎo)致產(chǎn)生較大的氣體填充的脂質(zhì)體。人們也相信脂質(zhì)體的大小會受到氣體與脂質(zhì)體的內(nèi)壁間的相互作用的影響。具體地講，人們相信介面上的相互作用影響張力，結(jié)果使內(nèi)部氣體作用在脂質(zhì)體的類脂內(nèi)壁上的外向力受到影響。張力的減弱使脂質(zhì)體變得較小，它是通過減小內(nèi)部氣體產(chǎn)生的力，從而使含水環(huán)境在脂質(zhì)體的外面的力引起氣體填充的脂質(zhì)體收縮。由于Henry′s公式通常適用于在直至大約1個大氣壓下對微溶的氣體的計算，可用該公式估算氣體在含水溶劑中的溶解度(Daniels，F(xiàn).和Alberty，R.A.，PhysicalChemistry(物理化學(xué))，第三版，Wiley&amp;Sons公司，紐約，1966)。例如，空氣在25℃時的溶解度為18.68ml/kg水，氮氣在25℃的溶解度為約18.8mlkg-1。另一方面，六氟化硫在25℃的溶解度為約5.4mlkg-1?？傊捎诜€(wěn)定性、不溶解性、和所得脂質(zhì)體的大小方面的原因，優(yōu)選氟化的氣體、氟化碳?xì)怏w、以及全氟化碳?xì)怏w。尤其優(yōu)選的是氟化的氣體六氟化硫、以及全氟化碳?xì)怏w全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟甲烷、全氟乙烷、和全氟戊烷，特別優(yōu)選的是全氟丙烷和全氟丁烷。應(yīng)注意到具有少于5個碳原子的全氟化碳在室溫下是氣體。例如，全氟戊烷在直到約27℃時還是液體。在該溫度以上，它將占據(jù)容器的液面上空間。然而，已證明即使在室溫下也可用全氟戊烷來填充空間液面上(也就是管形瓶內(nèi)類脂懸浮液相上面的空間)。通過選擇計算出的填充液面上空間的液體全氟戊烷的限定值并在低溫下(例如在-20℃)將液體加入到容器中，然后對容器抽真空(有效地除去液面上空間的空氣)并使容器密封，全氟戊烷將在低于其在1個大氣壓下的沸點的溫度下進(jìn)行液相到氣相的轉(zhuǎn)變。因此，在室溫下它將以氣體占據(jù)液面上的部分或全部空間。正如本領(lǐng)域的技術(shù)人員所能認(rèn)識到的，人們可以通過運用通常的“拇指規(guī)則”估測法來估計出液相向氣相轉(zhuǎn)變溫度的降低。具體地講，壓力每降低一半，沸點將下降約10℃。另外，人們可用建立在基于Boyle(玻義耳)定律的理想氣體定律上的關(guān)系，計算出作為降低的壓力函數(shù)的溫度的降低。另一個用全氟戊烷填充液面上空間的方法是，先對液面上空間抽真空，然后在27℃以上用全氟戊烷填充液面上空間。當(dāng)然，該方法不僅限用于全氟戊烷、它適用于所有的全氟化碳?xì)怏w以及一般的氣體，條件是氣體的沸點是已知的。如果需要，兩種或更多的不同氣體可以一起用來填充液面上空間。氣體的混合物在所得的氣體填充的脂質(zhì)體的多種應(yīng)用方面(如超聲顯影、MR顯影等應(yīng)用)有許多優(yōu)點。還發(fā)現(xiàn)將少量的基本不溶的氣體與可溶的氣體混合提供了比該混合所預(yù)期的穩(wěn)定性更大的穩(wěn)定性。例如，可以將少量的(例如，通常至少為約1摩爾％)全氟化碳?xì)怏w與空氣、氮氣、氧氣、二氧化碳或其它更易溶的氣體混合。振蕩后產(chǎn)生的氣體填充的脂質(zhì)體造影劑比空氣、氮氣、氧氣、二氧化碳或其它溶解性更強的氣體本身更穩(wěn)定。另外，氣體混合物的使用可用于彌補氣體填充的脂質(zhì)體大小的增大，否則要被注射到體內(nèi)的含有純?nèi)細(xì)怏w的脂質(zhì)體將會在體內(nèi)發(fā)生增大。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，一些全氟化碳?xì)怏w可以吸收或吸入其它氣體如氧氣。因此，如果靜脈注射全氟化碳?xì)怏w時，它可以吸收溶解于循環(huán)血液中的氧氣或其它可溶性氣體。然后，作為該吸收的結(jié)果，所得的氣泡可在體內(nèi)長大。掌握了這些現(xiàn)象的知識，人們可以將全氟化碳?xì)怏w與可溶性氣體如空氣、氮氣、氧氣、二氧化碳預(yù)混合，因而使全氟化碳的吸收或吸入性質(zhì)飽和。結(jié)果，這將防止甚至根除氣體填充的脂質(zhì)體在血流中膨脹的可能性。如果脂質(zhì)體能膨脹到大于10μm的大小，將其施用于血液中則可能發(fā)生危險的栓塞事件，基于這一事實，防止或根除氣體填充的脂質(zhì)體在血流中膨脹的可能性是重要的。通過用比全氟化碳?xì)怏w更易溶的氣體與全氟化碳?xì)怏w一起填充液面上空間，在注射到體內(nèi)后，氣體填充的脂氣體將一般不發(fā)生所述增大。因此，作為本發(fā)明的結(jié)果，脂質(zhì)體膨脹產(chǎn)生栓塞事件的問題可通過產(chǎn)生根除了或有效地阻止了所述膨脹的脂質(zhì)體而得以克服。因此，根據(jù)本發(fā)明，如果需要，可將基本上不溶的氣體與可溶的氣體混合來有效地產(chǎn)生高效而穩(wěn)定的氣體填充的脂質(zhì)體。下表2列出了以不同比例的基本不溶的氣體全氟丙烷(PFP)和空氣作為液面上空間氣體所制備的氣體填充的脂質(zhì)體樣品的分析結(jié)果。以3300RPM振蕩60秒，將氣體與含水類脂相混合。用光學(xué)顆粒大小測定儀(OpticalParticalSizer(ParticleSizingSystem，SantaBarbara，CA))分析氣體填充的脂質(zhì)體大小和總數(shù)。每次分析用5微升的樣品，每次測定用4個樣品。如表2所示，即使僅20％的氣體是PFP(基本上不溶的氣體)而80％的氣體是空氣(可溶性氣體的混合物)時，也產(chǎn)生了比僅用空氣(0％的PFP)時多100倍的脂質(zhì)體。而且，當(dāng)僅使用空氣時(0％的PFP)，脂質(zhì)體更不穩(wěn)定并且大多數(shù)的脂質(zhì)體的大小在10微米以上。20％PFP和80％空氣的脂質(zhì)體，看來與80％PFP和20％空氣的脂質(zhì)體以及其它含中間濃度的PFP的樣品同樣地穩(wěn)定，而且20％PFP和80％空氣所產(chǎn)生的氣體填充的脂質(zhì)體與80％PFP和20％空氣所產(chǎn)生的脂質(zhì)體大約同樣多。表2全氟丙烷的比例對氣泡大小和數(shù)目的影響</tables>在表2中，STDev＝標(biāo)準(zhǔn)偏差，CV＝偏離系數(shù)，E+表示一定冪的指數(shù)，例如，5.45E+05＝5.45×105。簡言之，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定脂質(zhì)體僅需少量的相對不溶的氣體(如PFP)，而絕大部分的氣體是可溶性氣體。雖然按下式計算的兩種或兩種以上的混合氣體的有效溶解度與可溶性氣體的溶解度僅有微小的差異，但僅加入少量的不溶性氣體，仍有大量的氣體填充的脂質(zhì)體存在并且氣體填充的脂質(zhì)體的穩(wěn)定性高。雖然不受任何操作理論的束縛，人們相信基本上不溶的氣體對于膜的穩(wěn)定作用是重要的。事實上，人們相信基本上不溶的氣體(如PFP)起到了脂質(zhì)膜的屏障作用，可能有效地在膜的內(nèi)表面形成層，阻止了可溶性氣體(如空氣、氮氣等等)的向外逸出。這一發(fā)現(xiàn)既令人驚奇又十分有用，因為這使人們可僅用少量的基本上不溶的氣體(如全氟化碳或其它氟化氣體)和主要是生物相容性更好的(潛在毒性更小的)氣體(如空氣或氮氣)來占據(jù)脂質(zhì)體的大部分體積。正如本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識到的，基本上不溶的氣體和可溶氣體在任何混合物中的量可在很寬的范圍內(nèi)變化。然而，基本上不溶的氣體通常占?xì)怏w總量的至少約0.01％，優(yōu)選占至少約0.1％，更優(yōu)選占至少約1％，并最優(yōu)選占至少約10％?；旧喜蝗艿臍怏w的適當(dāng)范圍的變化取決于各種不同的因素如另外使用的可溶氣體、類脂的類型、具體的應(yīng)用等等。示例性的范圍包括約0.01-99％、優(yōu)選約1-95％、更優(yōu)選約10-90％、并最優(yōu)選約30-85％的基本上不溶的氣體。對于診斷超聲顯影以外的其它用途如診斷核磁共振顯影(MRI)，雖然也可使用其它氣體，但優(yōu)選使用順磁氣體如強順磁氣體氧17氣體(17O2)、氖、氙(特別是富含銣的超極化氙氣)或氧氣(雖然氧氣的順磁性還不強)來填充液面上空間。氧17氣體(17O2)、氖氣、富含銣的超極化氙氣或氧氣最優(yōu)選與基本上不溶的氣體如全氟化碳?xì)怏w混合。順磁氣體在本領(lǐng)域是已知的，適當(dāng)?shù)捻槾艢怏w對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來講是顯然的。不管是單獨使用還是與其它氣體聯(lián)合使用，對于MRI應(yīng)用來講最優(yōu)選的氣體是17O2。通過使用混合氣體，17O2或其它順磁氣體提供了最佳對比度并且全氟化碳穩(wěn)定了振蕩后被裹進(jìn)氣體中的17O2。在不加入全氟化碳?xì)怏w的情況下，如17O2樣的氣體通常效果較差，因為它在靜脈注射后由于它的溶解性而從類脂包被中擴散出來。另外，17O2氣體很昂貴。將全氟化碳?xì)怏w與17O2聯(lián)合使用大大增加了產(chǎn)物的功效、并通過更有效地利用昂貴的17O2氣體而使費用降低。其它具有所需順磁性質(zhì)的氣體如氖氣可同樣地與全氟化碳?xì)怏w混合。如下面的表3所示，在MR顯影中可使用各種不同的氣體。表3示出了氣體填充的脂質(zhì)體中的不同氣體的R2(1/T2/毫摩爾/升·秒-1)。如表3所示，不同氣體填充的脂質(zhì)體的應(yīng)力松弛性差異極大，R2松弛值越高表明作為MR顯影劑的脂質(zhì)體越有效。在所示的氣體中，空氣具有最高的R2值。人們相信，空氣的值最高是由于空氣中氧氣的順磁效應(yīng)。然而純氧氣卻不那么有效，可能是由于氧氣的溶解度較高和氧氣進(jìn)入脂質(zhì)體周圍含水環(huán)境中達(dá)到平衡而引起的。對于空氣，氮氣(空氣的大約80％是氮氣)有助于穩(wěn)定脂質(zhì)體中的氧氣。氮氣在水中的溶解性比空氣小得多。如上所述，可將PFP或其它全氟化碳?xì)怏w與磁活性較強的氣體如空氣、氧氣、17O2或富含銣的超極化的氙氣混合。這樣，可制備出穩(wěn)定的磁活性高的氣體填充的脂質(zhì)體。表3大小分布和松弛性按需要，可在環(huán)境壓力下、減壓或加壓下下將氣體填充到容器的液面上空間。在本發(fā)明的容器中，氣相與類脂的含水懸浮液相是基本上分離的。術(shù)語“基本上分離的”是脂在振蕩前，與含水類脂相混合的氣體少于約50％。與含水類脂相混合的氣體優(yōu)選少于約40％、更優(yōu)選少于約30％、還更優(yōu)選少于約20％、并最優(yōu)選少于約10％。使氣相與含水類脂相基本上保持分離狀態(tài)，直到使用的時候，使用時振蕩容器，氣相與含水類脂相混合形成氣體填充的脂質(zhì)體的水懸浮液。這種方式產(chǎn)生了用于超聲或核磁共振顯影的極佳的造影劑。而且，因造影劑是在使用之前剛剛制備的，減少了貯藏有效期穩(wěn)定性的問題?？梢砸愿鞣N方式進(jìn)行振蕩，所述方式包括機械和/或手動振蕩，以及通過其它裝置如超聲(聲波)進(jìn)行振蕩。機械和/或手動振蕩是優(yōu)選的。例如可通過振搖、攪拌、渦旋、振動等來進(jìn)行振蕩?？蓛?yōu)選使用如圖2所示的振蕩裝置。具體地講，圖2示出了機械振蕩裝置10。用開--關(guān)按鈕11可啟動和停止振蕩。振蕩裝置10還包含旋鈕12，該旋鈕用于變速(RPM)的調(diào)節(jié)。向順時針方向旋轉(zhuǎn)旋鈕12，振蕩速度(以RPM表示)增加。反之，向反時針方反旋轉(zhuǎn)旋鈕12，振蕩速度減小。通過將本發(fā)明的容器置于振蕩裝置10的調(diào)節(jié)架13之中可使容器中的內(nèi)容物得到振蕩。該調(diào)節(jié)架13起到了振蕩裝置10的振蕩器的作用。為保證容器被牢固地置于調(diào)節(jié)架中以備振蕩，使用了螺釘14。本發(fā)明的容器可以采用各種不同的方式。如果需要，它可以是如圖1所示的容器1，該容器1具有主體2和帽3，該容器內(nèi)裝有彼此基本上分離的液面上氣體4和類脂的水懸浮液相5。另外，容器也可以采用預(yù)填注射器的形式，如果需要，注射器中可以填有一種或多種填料。在本發(fā)明中，注射器用含水相和預(yù)先選擇的液面上氣體填充。通常使注射器的長軸垂直于振搖方向?qū)⑺鼈冎糜谡駬u裝置中。振搖之后，在注射器里產(chǎn)生了氣體填充的脂質(zhì)體，備用。無論容器是如圖1所示形式的容器、注射器還是其它類型的容器，容器及其內(nèi)容物優(yōu)選是滅菌的?？捎酶鞣N不同的材料如玻璃、硼硅酸鹽玻璃、硅酸鹽玻璃、聚乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚丙烯酸酯類、聚苯烯或其它塑料來制造本發(fā)明的容器(包括注射器)。優(yōu)選的容器(包括注射器)在填充氣體前，是不透氣的或是被不透氣的外層屏障包裹的。當(dāng)然，這是為了維持預(yù)先選擇氣體在容器中的整體性。具有氣密性能的注射器材料的例子可包括(但無論如何不限于)玻璃硅酸酯或硼硅酸酯，適于二氧化硅融熔的注射器或鑰(Luer)-鎖型注射器、鑲特氟隆的或特氟隆包被的柱塞。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到，一旦掌握了本文公開的實質(zhì)，可以向本發(fā)明的類脂含水懸浮液相中加入各種添加劑以穩(wěn)定該相，或在振蕩時穩(wěn)定氣體填充的脂質(zhì)體。如需要，可將這些添加劑在振蕩前加入到類脂含水相中，或在振蕩及制備氣體填充的脂質(zhì)體之后加入到組合物中。當(dāng)然，這類添加劑的使用依賴于所得氣體填充的脂質(zhì)體的具體應(yīng)用，這一點對本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員而言是顯然的?？梢垣@得許多可用于本發(fā)明的穩(wěn)定劑，包括xanthan樹膠、阿拉伯樹膠、瓊脂、瓊脂糖、藻酸、藻酸鹽、藻酸鈉、角叉萊膠、葡聚糖、糊精、明膠、瓜爾樹膠、黃蓍膠、刺槐豆(膠)、黃蓍糖膠、刺梧桐樹膠、阿拉伯樹膠、果膠、酪蛋白、膨潤土、末純化的膨潤土、純化的膨潤土、膨潤土糊、膠態(tài)膨潤土、纖維素、微晶纖維素微、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈉12、及其它天然的或修飾的天然纖維素、吐溫、carbomer934P、硅酸鎂鋁、單硬脂酸鋁、聚環(huán)氧乙烷、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯酮、聚乙二醇、丙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、地氧化硅、膠態(tài)的二氧化硅、而且，還可用全氟辛基溴(PFOB)、全氟辛基碘、全氟三丙基胺、和全氟三丁基胺之類的化合物作為類脂相的穩(wěn)定劑。具有多于5個碳原子的全氟化碳通常在體溫下為液態(tài)，而亦優(yōu)選這樣的全氟化碳作為穩(wěn)定劑。合適的全氟化碳包括全氟己烷、全氟庚烷、全氟辛烷、全氟萘烷和十二氟代萘。此外，也可用全氟化的類脂或部分氟化的類脂以幫助穩(wěn)定。本發(fā)明所描述的類脂的全氟化的或部分氟化的各種類似物均可使用，這一點對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯然的。由于烴類脂具有相對的疏水性質(zhì)，這類全氟化的或部分氟化的類脂具有穩(wěn)定的優(yōu)點。全氟化的或部分氟化的類脂的例子是F6C11磷脂酰膽堿(PC)和F8C5PC。例如，這些類似物在Santaella等的FederationofEuropeanBiochemicalSocieties(FEBS)(《歐洲生化聯(lián)合會》)，336卷，第3期，418-484頁(1993)中有描述，該文獻(xiàn)公開的內(nèi)容以其全部引入本文作參考。為有助于穩(wěn)定化的目的，也可使用各種生物相容性的油如花生油、Canola油、橄欖油、紅花油、玉米油、杏仁油、棉籽油、桃仁油、芝麻油、大豆油、礦物油、礦物輕油、油酸乙酯、十四烷基醇、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、辛基十二烷醇、丙二醇、甘油、角鯊烯或其它公知可被消化的油。這些物質(zhì)也可包括卵磷脂、神經(jīng)鞘磷脂、膽甾醇、膽甾醇硫酸酯和甘油三酯、穩(wěn)定化作用也可通過加入各種粘度改性劑(即粘度調(diào)節(jié)劑)來實現(xiàn)，這些粘度改性劑起本發(fā)明的穩(wěn)定劑的作用。這類化合物包括(但無論如何不限于)1)糖類及其磷酸化和磺化的衍生物；2)分子量范圍在400到8000的聚醚類；3)二和三羥基鏈烷烴和分子量范圍在800到8000之間的它們的聚合物。脂質(zhì)體也可與乳化劑和/或穩(wěn)定劑結(jié)合使用，所述乳化劑和/或穩(wěn)定劑包括(但無論如何不限于)阿拉伯樹膠、膽甾醇、二乙醇胺、單硬脂酸甘油酯、羊毛脂醇、卵磷脂、甘油-酯和甘油二酯、單乙醇胺、油酸、油醇、poloxamer、硬脂酸-50-聚氧乙烯酯、聚烴氧基-35-蓖麻油、聚烴氧基-10-油基醚、聚烴氧基-20-鯨臘硬脂基(cetostearyl)醚、硬脂酸-40-聚烴氧基酯、吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、丙二醇二乙酸酯、丙二醇單硬脂酸酯、月桂基硫酸鈉、硬脂酸鈉、脫水山梨醇單月桂酸酯、脫水山梨醇酯單油酸酯、脫水山梨醇單棕櫚酸酯、脫水山梨醇單硬脂酸酯、硬脂酸、三乙醇胺、乳化臘、PluronicF61、PluronicF64和、PluronicF68?？杉尤氲钠渌噭┌ㄗ萄a劑如多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙烯醇、聚乙二醇、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇、氯化鈉等)。如需要，配方中也可包括抗菌劑和/或防腐劑。這類試劑包括苯甲酸鈉、所有的季銨鹽、疊氮化鈉、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、山梨酸、山梨酸鉀、山梨酸鈉、抗壞血酸基棕櫚酸酯(ascorbylpalmitate)、丁基化的羥基苯甲醚、丁化羥基甲苯、氯丁醇、脫氫乙酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、單硫甘油、苯甲酸鉀、偏亞硫酸氫鉀、山梨酸鉀、亞硫酸氫鈉鉀、二氧化硫和有機汞鹽。如果需要，可用滲透劑來控制滲透性。合適的有滲透活性的材料包括生理上相容的化合物如單糖、二糖、糖醇、氨基酸及各種合成的化合物。適當(dāng)?shù)膯翁腔蛱谴及ǎ?，赤蘚糖、蘇糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、來蘇糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、艾杜糖、半乳糖、塔羅糖、海藻糖、核酮糖、果糖、山梨糖醇、甘露糖醇和景天庚酮糖，其中優(yōu)選的單糖是果糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇和山梨糖醇。適當(dāng)?shù)亩前?，例如，乳糖、庶糖、麥芽糖和纖維二糖。適當(dāng)?shù)陌被岚?，例如，甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸和組氨酸。合成的化合物包括，例如，甘油、丙二醇、聚丙二醇、乙二醇、聚乙二醇、和聚乙烯基吡咯烷酮。對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，其它適當(dāng)?shù)木邼B透活性的各種材料是熟知的，這些材料也涵蓋在本文所用的術(shù)語“滲透活性劑”的范圍之內(nèi)。也可為各種不同的目的和用途加入如上面所討論的那些各種聚合物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到，依據(jù)具體的最終用途，按需要或目的，可將大范圍量的添加劑(如上面所述的懸浮劑)加入到本發(fā)明的類脂水懸浮液相中。所述的添加劑量雖然可更高或更低，但通常占所得造影劑配方的0.01％(體積)-95％(體積)。一般講來，懸浮劑的量一般為至少約0.5％(體積)，優(yōu)選為至少約1％(體積)、更優(yōu)選為至少約10％(體積)。懸浮劑的存在量通常少于約50％(體積)、優(yōu)選少于約40％(體積)、更優(yōu)選少于約30％(體積)。例如，懸浮劑的量一般為20％(體積)。而且，一般地，為達(dá)到通常優(yōu)選的滲透性范圍，使用的具滲透活性的材料的量為少于約25/l，優(yōu)選少于約20g/l，更優(yōu)選少于約15g/l，還更優(yōu)選少于約10g/l，而在某些情況不使用具滲透活性的材料。具滲透活性的材料的最優(yōu)選的范圍一般是約0.002g/l至10g/l。添加劑的這些及其它合適的范圍，對于掌握了本發(fā)明的本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯然的。通過將所需的治療或診斷試劑簡單地加入到類脂水懸浮液相中，也可將各種不同的治療和/或診斷試劑摻入到所述類脂相中。一旦本領(lǐng)域的技術(shù)人員掌握了公開的內(nèi)容，適當(dāng)?shù)闹委熀驮\斷試劑及其適當(dāng)?shù)牧繉τ谒麄兌允秋@而易見的。這些試劑可被摻入到類脂膜內(nèi)或膜上，或被包裹于所得脂質(zhì)體中。為進(jìn)一步改善用于MRI的所得的氣體填充脂質(zhì)體的磁效應(yīng)，例如，可加入一種或多種MRI造增強劑如順磁或超順磁造影增強劑。有用的MRI造影增強劑包括順磁離子如過渡金屬元素(包括鐵(Fe+3)、銅(Cu+2)、和錳(Mn+2))、鑭系元素如釓(Gd+3)和鏑(Dy+3)、氧化氮、氧化鐵(Fe3O4)、硫化鐵和順磁粒子如錳(Mn+2)取代的羥基磷灰石。而且，鉻(Cr+3)、鎳(Ni+2)、鈷(Co+2)和銪(Eu+2)是其它可以使用的順磁離子的例子。也可使用其它造影增強劑如氧化氮自由基或任何其它帶有未成對自旋電子、有順磁性的原子。雖然在脂質(zhì)體制備后加入造影增強劑也是可行的，但理想的是在振蕩前將之加入到類脂水懸浮液相中，這樣可使造影增強劑在振蕩后摻入到所得的氣體填充的脂質(zhì)體的表面之中或之上。所得的氣體填充的脂質(zhì)體具有大大提高了的松弛性，是核磁共振顯影的極為有效的造影劑。例如，當(dāng)在含水類脂相中使用了磷脂酰膽堿或磷脂酰絲氨酸時，錳(Mn+2)將摻入到類脂的頭部基團上。如果需要，可用例如在Unger等的美國專利No.5,312,617中所述的脂溶性化合物螯合該金屬，Unger的專利No.5,312,617以其全文公開的內(nèi)容引入本文作參考。因為所述的脂溶性化合物易于摻入到脂質(zhì)體膜中，它們非常有用。為使氧化鐵和其它顆粒摻入到脂質(zhì)體膜之中或之上的效果達(dá)到最佳，它們通常應(yīng)較小，優(yōu)選小于約1μm，更優(yōu)選小于約200nm，最優(yōu)選小于約100nm。為改善摻入情況，可使用由脂肪族化合物或親脂化合物包被的氧化鐵，因為脂肪族或親脂化合物本身易于摻入到泡沫表面的類脂層中。在類脂的水懸浮液相中含有可引起不能自發(fā)地產(chǎn)生凝膠的類脂聚合物和金屬產(chǎn)生凝膠作用或增強凝膠作用的組分，也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)?？墒褂靡荒z凝劑如多價金屬陽離子、糖和多元醇。用作凝膠劑的多價金屬陽離子包括鈣、鋅、錳、鐵和鎂。有用的糖包括單糖如葡萄糖、半乳糖、果糖、阿拉伯糖、阿洛糖和阿卓糖；二糖如麥芽糖、蔗糖、纖維二糖和乳糖；和多糖如淀粉。糖優(yōu)選簡單的糖，即單糖或二糖?？捎糜诒景l(fā)明的多元醇膠凝劑包括，例如，縮水甘油、肌醇、甘露糖醇、山梨糖醇、季戊四醇、galacitol和聚乙烯醇。用于本發(fā)明的膠凝劑最優(yōu)選庶糖和/或鈣。本領(lǐng)域的技術(shù)人員一旦掌握了本文公開的內(nèi)容，對他們而言可用于本發(fā)明各種配方的具體的膠凝劑是顯而易見的?？蓪㈩愔缌字崤c鈣鹽或鎂鹽以及聚合物如藻酸、透明質(zhì)酸或羧甲基纖維素混合，用以穩(wěn)定類脂。據(jù)推測，在類脂/聚合物系統(tǒng)內(nèi)二價陽離子在類脂和聚合物之間形成金屬鍵，穩(wěn)定氣體填充的脂質(zhì)體。可類似地制備含有脫乙酰幾丁質(zhì)(或基于幾丁質(zhì)的物質(zhì))、聚賴氨酸、聚乙烯亞胺和藻酸(或其衍生物)或透明質(zhì)酸的混合物的懸浮液。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)振蕩的速率、含水類脂相中類脂的量、以及密閉容器的大小均會影響任何氣體填充的脂質(zhì)體的最終大小。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這類試劑的比例對于氣體填充的脂質(zhì)體的大小分布也很重要。當(dāng)與振搖速率、管形瓶大小和類脂濃度一起考慮時，人們相信氣體填充的脂質(zhì)體介面與含水環(huán)境間的表面張力是決定氣體填充的脂質(zhì)體最終大小的另一個決定因素。在裝有含水相和液面上氣體的無菌容器中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了怎樣進(jìn)行簡單方便的變化以改變振搖后脂質(zhì)體的大小，從而獲得具有所需大小分布的脂質(zhì)體產(chǎn)品。此外，還可進(jìn)行過濾以進(jìn)一步細(xì)化振搖后的造影劑的大小分布。下文回顧了怎樣改變本發(fā)明的組分以調(diào)整脂質(zhì)體的大小。首先，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)含水相中不同的材料對于控制所得氣體填充的脂質(zhì)體的大小是重要的。表4列出了通過振搖裝有含水相和液面上的氮氣的無菌容器而產(chǎn)生的脂質(zhì)體的大小。在所有的情況下，脂質(zhì)體的大小均由ParticleSizingSystem770型不可見光顆粒大小測定儀(ParticleSizingSystems，SantaBarbara，CA)測定。如數(shù)據(jù)所示，在含水相中的類脂的比率影響所得的氣體填充的脂質(zhì)體的大小分布。具體地講，下表4列出了類脂組合物對脂質(zhì)體平均大小的影響。表4類脂組合物對脂質(zhì)體平均大小的影響二棕櫚酰磷脂酰膽堿∶二棕櫚酰磷脂酸∶二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-PEG5000的比率，以mole％表示。表5顯示了脂質(zhì)體平均大小對特定類脂組合物混合物的濃度的依賴。如表5所示，類脂總濃度的變化對于影響振搖后的脂質(zhì)體大小也是重要的。在這些試驗中，三種不同類脂組分的比率保持衡定，而在含水相中類脂的濃度在0.5-50mgml-1之間變化。所用的氣體是氮氣。當(dāng)含水相中的類脂濃度為1.0mgml-1時，用液面上的全氟丁烷產(chǎn)生了用于超聲診斷的最佳大小的氣泡。表5類脂濃度對脂質(zhì)體平均大小的影響*對于所有的樣品，類脂的濃度均基于mole％，二棕櫚酰磷脂酰膽堿∶二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰乙醇胺-PEG5000的比率為82∶10∶8。所用的氣體為氮氣。脂質(zhì)體的大小除了依賴于穩(wěn)定化介質(zhì)(即類脂)的濃度外，還依賴于液面上氣體的組成。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用氮氣時，1.0mgml-1的類脂濃度產(chǎn)生的氣體填充的脂質(zhì)體的直徑大小與使用全氟丁烷時5.0mgm-1的類脂濃度產(chǎn)生的大小大體相等。然而，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)較高的濃度可導(dǎo)致分布更偏向于形成較大的氣體填充的脂質(zhì)體。這種現(xiàn)象反映了在類脂濃度較高時，氣體填充的脂質(zhì)體的穩(wěn)定性增加了。因此，人們相信較高的類脂濃度或者由于起到含水相中穩(wěn)定劑的作用而有助于穩(wěn)定性的提高，或者在氣體周圍產(chǎn)生更多的薄層，使它們更穩(wěn)定，并因此使較高比例的較大的脂質(zhì)體存在下來。另外還發(fā)現(xiàn)，也可用液面上氣體體積的大小來影響氣體填充的脂質(zhì)體的大小。相對于含水相的體積而言，較大的液面上空間含有成比例地更多的氣體，較大的液面上空間通常比較小的液面上空間產(chǎn)生的脂質(zhì)體大。振蕩速度對于產(chǎn)生適當(dāng)大小的脂質(zhì)體來講是重要的。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在100-10,000轉(zhuǎn)/分(RPMs)的振蕩速度可用于制備脂質(zhì)體，然而，在快速地和可重復(fù)地產(chǎn)生特定大小的脂質(zhì)體方面仍有最佳值。本文所用的術(shù)語“一轉(zhuǎn)”是指一次前后、上下、一邊到另一邊、環(huán)狀的運動，該運動開始于和終止于(即返回到)原點。表3顯示由82％(摩爾)的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、10％(摩爾)的二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)和8％(摩爾)的二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-PEG5000(DPPE-PEG5000)組成的含水相和含全氟丙烷的液面上氣體產(chǎn)生的脂質(zhì)體的大小。將制劑在Wig-L-BugTm(CrescentDentalMfg.，Lyons，Ill.)上振搖2分鐘。用裝有含水類脂相和液面上氣體的2ml的琥珀色管形瓶(WheatonIndustries，Millville，NJ；實際體積為3.7ml)，將本發(fā)明的多相容器置于Wig-L-BugTm之上，以Co-PalmerModel08210PistolGrip轉(zhuǎn)速表(Code-Palmer，Nile，Ill.)測速度。表6列出了結(jié)果，并表明了振蕩速度對所得的脂質(zhì)體平均大小的影響。表6振蕩速率對脂質(zhì)體平均大小的影響</tables>確實，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)存在著產(chǎn)生所需大小的脂質(zhì)體的最佳振蕩速度。在最佳速度時，氣體填充的脂質(zhì)體的形成非?？?，在不到5分鐘內(nèi)、甚至在一兩分鐘內(nèi)、更甚至在30秒或更少的時間內(nèi)形成。注意到振搖的方法和動作對于形成適當(dāng)大小的脂質(zhì)體是十分重要的。具體地講，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)振搖的往復(fù)動作以弧形進(jìn)行時，形成最佳大小的脂質(zhì)體。動作的弧度優(yōu)選為2°-20°。動作的弧度范圍更優(yōu)選為4°-10°。動作的弧度范圍還更優(yōu)選為5°-8°。動作的弧度范圍最優(yōu)選為6°-7°。在本發(fā)明的另一實施方案中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)RPM的值優(yōu)選在約500-約10,000之間，更優(yōu)選在約1000-約5000之間，并最優(yōu)選在約2500-約4000之間。本發(fā)明的另一個重要的發(fā)現(xiàn)是振蕩液體物質(zhì)時獲得的液面上氣體的體積的大小、形狀、和數(shù)量對于形成最佳大小的氣體填充的脂質(zhì)體亦是至關(guān)重要的。例如，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用實際體積為3.7ml的管形瓶(Wheaton300硼硅玻璃，WheatonIndustries，Millville，NJ，稱為2ml大小，直徑×高＝15mm×32mm)時，含氣體的液面上空間的體積優(yōu)選占管形瓶總體積的約10％-約60％。雖然根據(jù)具體的環(huán)境和應(yīng)用目的，更多或更少的氣體也許更為合適，但管形瓶內(nèi)含氣體的液面上空間通常占該管形瓶總體積的約10％至約80％。液面上空間更優(yōu)選占總體積的約30％至約70％。含氣體的液面上空間的體積通常最優(yōu)選占管形瓶總體積的約60％。因此，從上面對本發(fā)明的討論中可以清楚地看出最佳大小的產(chǎn)生依賴于各種因素，包括振蕩的強度及動作、管形瓶的大小、形狀以及實際的填充體積。雖然可以使用各種不同的振蕩裝置來制備氣體填充的脂質(zhì)體，例如使用涂料混合器、桌面振搖器和渦旋機，但振搖的幾何形狀和速度對于使氣體填充的脂質(zhì)體的形成最佳化是重要的。Wig-L-BugTm是最優(yōu)選的振蕩裝置。無菌容器的大小、容器的幾何形狀以及容器相對于振搖裝置的定向，在決定氣體填充的脂質(zhì)體的大小方面是重要的。當(dāng)無菌容器的重量超過一定值時，振搖裝置(如，Wig-L-BugTm)通常振搖得較慢。標(biāo)準(zhǔn)的Wig-L-BugTm對2ml管形瓶(實際體積為3.7ml)比10ml的管形瓶振搖得快。該試驗使用10ml透明的管形瓶(WheatonIndustries，Millville，NewJersey)和2ml(實際體積為3.7ml)琥珀色管形瓶(WheatonIndustries，Millville，NewJersey)。再次Code-PalmerPistolGrip轉(zhuǎn)速計(Code-Palmer，Nile，Ill.)測振搖速率。結(jié)果列于表7。表7顯示了電動振蕩器的振搖速率對進(jìn)行振搖所用的管形瓶大小的依賴關(guān)系。表7管形瓶大小對Wig-L-BugTm振搖速率的影響</tables>一般說來，以無菌容器來實踐本發(fā)明，所述容器中已有含水相存在。然而對于選定的應(yīng)用，可將穩(wěn)定介質(zhì)以干燥的或凍干的狀態(tài)貯存于容器中。在此情況下，含水的溶液(如，無菌磷酸鹽緩沖液)是在振搖前才加入到無菌容器中的。這樣一來，在含水相中再水化的穩(wěn)定介質(zhì)再次在搖過程中與液面上氣體相互作用，從而產(chǎn)生上述的氣體填充的脂質(zhì)體。干燥的或凍干的懸浮介質(zhì)的再水化必然進(jìn)一步使產(chǎn)物變得復(fù)雜，這一般是人們所不希望的，但對于進(jìn)一步延長某些制劑的貯藏期卻是有用的。例如，某些治療劑如環(huán)磷酰胺、多肽和遺傳物質(zhì)(如DNA)長期在含水環(huán)境中貯存可能會被水解。將預(yù)先凍干的樣品在振搖前再水化形成含水相和液面上空間，可以制備含有化合物的氣體填充的脂質(zhì)體，否則這些化合物不可能會有足夠長的貯藏期。上文列出了決定氣體填充的脂質(zhì)體大小的各種參數(shù)。脂質(zhì)體大小在使產(chǎn)物的功效最大和毒性最小方面是重要的。另外，脂質(zhì)體應(yīng)盡可能地柔韌，以使功效最大并使對組織的副作用如在肺中的滯留時間最小。本發(fā)明可產(chǎn)生具有極薄的柔韌膜的所需大小的脂質(zhì)體。因為脂質(zhì)體的膜是極薄并有柔韌性的(例如只需1mgml-1的類脂以穩(wěn)定該膜)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可使用較大直徑的氣體填充的脂質(zhì)體而不產(chǎn)生肺動脈高血壓。例如，對豬給予5倍于診斷顯影所需劑量的劑量，而沒有任何肺動脈高血壓的征兆。相反，很低劑量的較小直徑的白蛋白包被的空氣泡在這些動物中引起嚴(yán)重的肺動脈高血壓。因為本發(fā)明的脂質(zhì)體是十分柔韌和可改變形狀的，它們易于在肺毛細(xì)血管內(nèi)滑過。另外，用于本發(fā)明類脂(例如帶有聚乙二醇的類脂)的包被技術(shù)使肺部的副作用減小并同時使產(chǎn)品在體內(nèi)、體外的穩(wěn)定性和功效提高。由于當(dāng)頻率使氣體填充的脂質(zhì)體在Rayleigh散射范圍時，其反向散射或超聲效應(yīng)與半徑的6次方成正比，用作普通超聲造影劑的氣體填充的脂質(zhì)體的大小應(yīng)盡可能地大(在不引起栓塞效應(yīng)的情況下)。對于MRI，也優(yōu)選較大的本發(fā)明的脂質(zhì)體。本發(fā)明的制備和應(yīng)用潛在的毒性效應(yīng)較低的較大脂質(zhì)體的能力，使其相對于其它產(chǎn)品的效能增加了。影響超聲對比的另外的參數(shù)是脂質(zhì)體膜的彈性。彈性越大，對比效果越強。因為本脂質(zhì)體是由超薄的類脂膜包被的，其彈性與裸氣的彈性十分相近，而且反射性和對比效果是最大的。本發(fā)明的振蕩步驟易于在無菌容器內(nèi)從含水相和液面上氣體中產(chǎn)生脂質(zhì)體。本發(fā)明足以產(chǎn)生用于超聲或核磁共振顯影的具有極需性質(zhì)的脂質(zhì)體。然而對于選定的應(yīng)用，可用濾器來產(chǎn)生大小分布更為均勻的具有所需直徑的脂質(zhì)體。例如，為了使用氣體填充的脂質(zhì)體的諧振現(xiàn)象在體內(nèi)測量對超聲的壓力，使脂質(zhì)體的直徑非常固定地限定在極窄的大小范圍是有用的。這一點可通過將脂質(zhì)體(通過振搖裝有含水相和液面上氣體的容器而產(chǎn)生)注射通過特定大小的濾器容易地完成。所得的脂質(zhì)體不大于極接近于濾膜上濾孔大小的近似值。如上所述，對于許多超聲或MRI應(yīng)用，需要使氣體填充的脂質(zhì)體盡可能地大。然而對于某些應(yīng)用，需要更小的氣體填充的脂質(zhì)體。例如，在靶向腫瘤或其它疾病組織時，必須使氣體填充的脂質(zhì)體離開血管而進(jìn)入組織間隙中。更小的氣體填充的脂質(zhì)體可用于這些應(yīng)用?？赏ㄟ^改變含水相中的化合物(改變組成和濃度)及改變液面上氣體(氣體組成及液面上體積)，或者通過使之注射通過濾器來很大程度地產(chǎn)生這些較小的氣體填充的脂質(zhì)體(例如，最好直徑在1μm以下)。將脂質(zhì)體注射通過例如0.22μm的濾器，可產(chǎn)生大小基本上均勻的極小的氣體填充的脂質(zhì)體。所得的納米大小的氣體填充的脂質(zhì)體可具有用于靶向的性質(zhì)。上述類脂懸浮液的實例也可用高壓滅菌器使之滅菌，而懸浮液的體積無可察覺的變化。可用高壓滅菌器和/或通過無菌過濾在振蕩步驟之前或之后，或通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的其它方式對造影劑進(jìn)行滅菌。在容器中裝入了含水相和預(yù)先選擇的液面上氣體后，密閉的瓶子可無限期地貯存。不會有顆粒沉淀出來，不會有氣體填充的脂質(zhì)體爆發(fā)出來，在氣體填充的脂質(zhì)體、顆粒、膠體或乳劑之間也不會有非定向的相互作用。裝有含水相和液面上氣體的容器的貯存期依賴于含水相中所含化合物的穩(wěn)定性。長的貯存期及可消毒性這些性質(zhì)使本發(fā)明比現(xiàn)有技術(shù)有明顯的優(yōu)越性。本文已經(jīng)述及了穩(wěn)定性的問題，如超聲造影劑領(lǐng)域中普遍存在的聚集和顆粒沉淀現(xiàn)象。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過振蕩本發(fā)明的多相容器產(chǎn)生的氣體填充的脂質(zhì)體，具有作為診斷顯影如超聲或核磁共振顯影的造影劑的極好的實用性。該脂質(zhì)體通?？捎糜诨颊叩娘@影、和/或特異地診斷患者的患病組織的存在。通過對患者施用本發(fā)明的氣體填充的脂質(zhì)體，然后用超聲或核磁共振對患者掃描以獲得患者體內(nèi)區(qū)域和/或該區(qū)域內(nèi)的任何患病組織的可見圖像，來進(jìn)行顯影過程。術(shù)語“患者區(qū)域”是指整個患者、或患者的特定區(qū)域或部分區(qū)域。脂質(zhì)體造影劑可用于產(chǎn)生脈管系統(tǒng)、心臟、肝臟和脾的圖像，以及胃腸腔區(qū)域或其它體腔的顯影，或以對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言顯而易見的其它方式用于，例如，組織鑒定、郁血顯影等等。在本發(fā)明的實踐中可以使用各種不同類型的超聲或核磁共振顯影裝置，裝置的具體類型或型號對于本發(fā)明的方法而言是不重要的。正如本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以認(rèn)識到的，亦可用本發(fā)明的氣體填充的脂質(zhì)體向患者傳遞各種治療劑以進(jìn)行各種疾病或病痛的治療。而且，可用磁活性的脂質(zhì)體通過MRI估測壓力。脂質(zhì)體使體積感受性增加，并因此使T2松馳增加，但更使T2*松馳增加。因為靜電場梯度效應(yīng)主要由自旋回旋試驗(根據(jù)180°射頻再聚焦脈沖進(jìn)行)補償，當(dāng)靜電場效應(yīng)未被補償時，脂質(zhì)體對T2的效應(yīng)不如對T2*加權(quán)脈沖序列的效應(yīng)顯著。壓力的增加導(dǎo)致脂質(zhì)體的損失或脂質(zhì)體的破裂(對于更易溶的氣體而言)，并導(dǎo)致脂質(zhì)體直徑的減小。因此，1/T2隨著壓力的增加而減小。而壓力釋放后，剩下的一些脂質(zhì)體再度膨脹，1/T2再次略微增高。隨著壓力的變化，由約80％PFP和20％空氣組成的脂質(zhì)體的穩(wěn)定性提高，1/T2略有下降，所述壓力在壓力釋放后返回到基線上(也就是說，脂質(zhì)體是穩(wěn)定的，但略微顯示出1/T2壓力效應(yīng))。當(dāng)?shù)玫搅颂荻然夭▓D像并測定了信號強度時，這些效應(yīng)更為顯著。隨著壓力的增加，信號強度增加(1/T2*隨著壓力的增加而減小)。因為試驗進(jìn)行得相對較快(進(jìn)行梯度回波圖像顯影所花的時間比測T2所花時間的十分之一還少)。暴露于壓力的期間少得多，并且在壓力釋放后，氮氣填充的脂質(zhì)體幾乎返回到基線(即，脂質(zhì)體幾乎沒有損失)。因此，壓力返回到環(huán)境壓力時，對梯度回波的信號強度幾乎降回到基線。對于通過MRI進(jìn)行的壓力測量，可以將脂質(zhì)體設(shè)計成或者隨著壓力的增加而破裂，或者是穩(wěn)定的，但隨著壓力的增加脂質(zhì)體的直徑減小。因為在MRI中脂質(zhì)體的半徑影響1/T2*，可用該關(guān)系通過MRI估測壓力。正如本領(lǐng)域的技術(shù)人員所能認(rèn)識到的，以各種方式如通過靜脈內(nèi)或動脈內(nèi)注射、口服或直腸對患者進(jìn)行氣體填充的脂質(zhì)體的給藥。給藥的劑量和給藥的具體方式將取決于年齡、體重和具體的哺乳動物以及要被掃描或治療的區(qū)域、所使用的具體的造影劑或治療劑。一般，起始劑量較低，逐漸增加直到達(dá)到所需的對比增強或治療效果。患者可以是任何類型的哺乳動物，但人是最優(yōu)選的。意欲以下列實施例來描述本發(fā)明是怎樣被利用的以及本發(fā)明的一些超凡的用途。這些實施例僅是示例性的，并不應(yīng)看成是對所附權(quán)利要求的限制。實施例實施例1氮氣填充的脂質(zhì)體的形成在2只20ml的管形瓶中，以含有正常(生理)鹽水∶丙二醇∶甘油(8∶1∶1，體積比)的6ml稀釋液制備氣體填充的類脂雙層。向該瓶中加入摩爾百分比為82∶10∶8(mole％)的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)∶二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)∶二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-PEG5000(DPPE-PEG5000)的混合物，使其終濃度為5mgml-1。然后用氣密的可維持壓力的隔膜帽使樣品密封。然后用氮氣(99.98％，ArizonaWeldingCo.，Tueson，AZ)對它們至少清掃(Purgedandevacuated)3次。接著將樣品在BarnsteadC57835型蒸氣滅菌鍋(Barnstead/ThermolyneCorporation，Dubuque，Iowa)中于120℃高壓滅菌15分鐘，或者使之通過0.22μm的Nuclepore濾器(Costar，Pleasanton，CA)進(jìn)行無菌過濾一到三次。然后將樣品從高壓鍋中取出，使之冷卻至接近于環(huán)境溫度。接著使樣品在Wig-L-Bug渦旋機(CrescentDentalMfg.Co.，Lyons，IL)上渦旋2分鐘。所得的混合物顯示有明顯的氣體填充的雙層(看起來象泡沫)形成。在PatideSizingSystems770型不可見光探測儀(PartileSizingSystems，SantaBarbara，CA)上、在裝有校準(zhǔn)目鏡的Reichert-Jung150型光學(xué)顯微鏡(CambridgeInstruments，Buffalo，NY)上、和在CoulterModel(CoulterIndustries，LutonBeds，England)上，以三種方法測量氣體填充的類脂雙層的大小。樣品的數(shù)量加權(quán)平均大小為5-7μm，其中有至少95％的顆粒小于10μm。實施例2全氟戊烷氣體填充的脂質(zhì)體的形成在2只20ml的管形瓶中，以含有正常(生理)鹽水∶丙二醇∶甘油(8∶1∶1，體積比)的6ml的稀釋液制備氣體填充的類脂雙層。向該瓶中加入摩爾百分比為82∶10∶8(mole％)的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)∶二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)∶二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-PEG5000(DPPE-PEG5000的混合物，使終濃度在1mgml-1至5mgml-1之間變化。向該混合物中加入50μl(30.1μmole)的全氟戊烷(PCR，Gainesville，F(xiàn)L)。在-20℃下制備樣品，并用氣密的和可維持壓力的隔膜帽密封樣品。接著將樣品在BarnsteadC57835型蒸氣滅菌鍋(Barnstead/ThermalyneCorporation，Dubuque，Iowa)中于120℃高壓滅菌15分鐘。然后從高壓鍋中取出樣品，并使之冷卻至接近40℃。接著使樣品在Wig-L-BugTm渦旋機(CrescentDentalMfg.Co.，Lyons，IL)上渦旋2分鐘。所得的混合物顯示有明顯的氣體填充的雙層(看起來象泡沫)形成。記錄泡沫的體積和高度，將一份樣品置于-20℃冷凍箱(KenmoreBrand，Sears-Roebuck，Chicago，IL)中。3個小時后取出樣品，此時注意到原始體積的近90％保留下來。將樣品在冷凍箱中放置過夜(約17個小時)，取出，此時發(fā)現(xiàn)原始體積的50％保留了下來。余下的管形瓶用作對照，使之保存于30℃的溫箱中達(dá)同樣的時間。發(fā)現(xiàn)沒有發(fā)生體積損失，這表明冷卻使氣體填充的雙層內(nèi)的氣體收縮，因此氣體的體積減小了。最后，將冷樣品置于30℃的溫箱中，發(fā)現(xiàn)過了大約45分鐘之后，有20％的原始泡沫體積得以恢復(fù)。這表明壓縮的氣體再次揮發(fā)使氣體填充的脂質(zhì)體的大小膨脹這一事實。實施例3全氟丙烷氣體填充的脂質(zhì)體的形成除了所用的氣體是全氟丙烷(99.99％，AlconSurgical，F(xiàn)ortWorth，TX)和所用的管形瓶的大小為2ml琥珀色管形瓶(實際體積為3.7ml)(Wheaton，Millville，NJ)外，采用與實施例1中所用的相同的步驟。管形瓶中裝有1.5ml的類脂/稀釋劑載體混合物。用與實施例1中的方法相同的方法測大小，然而這次產(chǎn)生的大小為4-6μm，而多95％顆粒小于10μm。實施例4全氟丁烷氣體填充的脂質(zhì)體的形成除了所用的氣體是全氟丁烷(97+％，F(xiàn)luraCorporation，Nashville，TN)和所用的管形瓶的大小為2ml琥珀色管形瓶(實際體積為3.7ml)(Wheaton，Millville，NJ)外，采用與實施例1中所用的相同的步驟。管形瓶中裝有1.5ml的類脂/稀釋劑載體混合物。用與實施例1中的方法相同的方法測大小，然而這次產(chǎn)生的大小為4-6μm，而多于95％的顆粒小于10μm。實施例5全氟環(huán)丁烷氣體填充的脂質(zhì)體的形成除了所用的氣體是全氟環(huán)丁烷(99.8％，Pfaltz&amp;Bauer，Waterbury，Conneticut)和所用的管形瓶的大小為2ml琥珀色管形瓶(實際體積為3.7ml)(Wheaton，Millville，NJ)外，采用與實施例1中所用的相同的步驟。管形瓶中裝有1.5ml的類脂/稀釋劑載體混合物。用與實施例1中的方法相同的方法測大小，然而這次產(chǎn)生的大小為4-6μm，而多于95％的顆粒小于10μm。實施例6六氟化硫氣體填充的脂質(zhì)體的形成除了所用的氣體是六氟化硫(99.99％，AlconSurgical，F(xiàn)ortWorth，TX)和所用的管形瓶的大小為2ml琥珀色管形瓶(實際體積為3.7ml)(Wheaton，Millville，NJ)外，采用與實施例1中所用的相同的步驟。管形瓶中裝有1.5ml的類脂/稀釋劑載體混合物。用與實施例1中的方法相同的方法測大小，然而這次產(chǎn)生的大小為4-6μm，而多于95％的顆粒小于10μm。實施例7使用體外聲頻衰減試驗全氟丁烷氣體填充的脂質(zhì)體在壓力下的穩(wěn)定性如實施例4所述，形成全氟丁烷氣體填充的類脂雙層。將類脂濃度在1mgml-1-5mgml-1間變化的樣品分成200μl的等份，用生理鹽水作稀釋劑進(jìn)行10,000∶1的稀釋。開始用磁力攪拌器混合樣品，以產(chǎn)生均勻性，然后關(guān)閉。使用不銹鋼盤作為極好的反射器，將之安置于離轉(zhuǎn)換器的起點約25cm之處。所用的轉(zhuǎn)換器是5.0MHz寬譜帶非聚焦浸沒式轉(zhuǎn)換器(Panametries，WalthamMA)。所有的數(shù)據(jù)均經(jīng)488.2GPIB板(NationalInstruments，Austin，TX)傳遞，并由Gateway200080486處理器處理。在對氣體填充的類脂雙層取樣之前，基線對照僅在生理鹽水中進(jìn)行測量。在對照條件建立之后，立即將200μl的等份加入到鹽水溶液中，并使數(shù)據(jù)在環(huán)境溫度下(20℃)積累90秒。聲波的衰減在90秒內(nèi)保持恒定(參見圖4)，衰減率為2.0±0.5dBcm-1。將樣品的壓力升高到120mmHg，得到了第二個樣品，并記錄下衰減。如同在環(huán)境溫度試驗中一樣，衰減保持恒定，在90秒的試驗期間幾乎沒有變化，然而衰減率約為0.9dBcm-1。然后在37℃的恒溫條件下對另一樣品進(jìn)行測定。在90秒的期間內(nèi)，衰減再交保持恒定，且衰減率約為0.9dbem-1。終樣品在37℃、120mmHg的壓力下進(jìn)行測量。此次衰減在90秒內(nèi)以線性的方式從0.9dBcm-1隨時間衰減到0.4dBcm-1。這證明了該配方較氮氣填充的類脂雙層的穩(wěn)定性有所增高。實施例8使用體外聲頻衰減試驗氮氣填充的脂質(zhì)體在壓力下的穩(wěn)定性除了氣體填充的類脂雙層含有如實施例1中所描述的氮氣外，進(jìn)行如實施例7同樣的試驗。在環(huán)境溫度(20℃)和人體溫(37℃)下穩(wěn)定衰減，衰減率很明顯，然而當(dāng)稀釋的內(nèi)容暴露于120mmHg壓力時，衰減立即下降到接近于基線對照值。這證明與全氟丁烷填充的類脂雙層相比，在壓力下氮氣填充的類脂雙層缺乏穩(wěn)定性。實施例9類脂的濃度對全氟環(huán)丁烷氣體填充的脂質(zhì)體的數(shù)量加權(quán)平均大小的影響除了3種不同的類脂配方濃度外，如實施例5所述制備全氟環(huán)丁烷氣體填充的類脂雙層。配方內(nèi)含有稀釋劑，所述稀釋劑含有正常(生理)鹽水∶丙二醇∶甘油(8∶1∶1，體積比)。向其中加入二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)∶二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)∶二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-PEG5000(DPPE-PEG5000)為82∶10∶8(mole％)摩爾比的混合物，使之終濃度在1mgml-1-5mgml-1之間變化。樣品在2ml管形瓶(實際體積＝3.7ml)(WheatonIndustries，Millville，NJ)內(nèi)制備，以ParticleSizingSystemsModel770不可見光大小測定系統(tǒng)測大小。下表列出了結(jié)果。表9以全氟環(huán)丁烷為例，表明了類脂濃度對全氟化碳?xì)怏w填充的類脂雙層平均大小的影響。表9類脂濃度對全氟環(huán)丁烷氣體填充的脂質(zhì)體的影響</tables>實施例10使用基本上不溶的氣體填充的脂質(zhì)體顯示血液動力學(xué)改變的缺乏用全氟丙烷(PFP)、全氟環(huán)丁烷(PFCB)、全氟丁烷(PFB)和六氟化硫(SHF)，以1mgml-1和3mgml-1類脂的總類脂濃度制備含有如實施例3、4、5和6中所述的含有類脂混合物的氣體填充的類脂雙層樣品。用裝有5兆赫茲轉(zhuǎn)換器的5200s型AcousticImaging超聲儀，在重量為約28kg的Mongrel狗中進(jìn)行顯影。該動物以戊巴比妥鈉鎮(zhèn)定，用室內(nèi)空氣進(jìn)行換氣，并監(jiān)測其肺動脈血壓、系統(tǒng)動脈血壓和脈搏次數(shù)。在短軸位置對心臟進(jìn)行顯影，使動物接受劑量為每千克5ml的PFP、PFCB、PFB和SHF丸劑，每種均測驗1mgml-1和3mgml-1的類脂濃度。每次注射應(yīng)間隔至少15分鐘，以清除任何殘留的造影劑。在所有的全氟化碳填充的脂質(zhì)體(PFP、PFCB和PFB)中，1mgml-1的類脂顯示心肌灌注增加，但PFB比其它的類脂的作用更強。PFP在3mgml-1時作用提高。SHF填充的脂質(zhì)體在類脂為1mg/ml時，不顯洋心肌灌注增強，但當(dāng)類脂為3mg/ml時，卻顯示明顯的心肌增強。在另一只狗身上基本上重復(fù)上述試驗并得到了相同的結(jié)果。用全氟丙烷填充的脂質(zhì)體在另一只狗身上進(jìn)行了血液動力學(xué)研究。該動物按接受高至300微升/千克(即，高于顯影劑量的50倍)的多劑快速丸。盡管是多劑量，該動物在血液動力學(xué)參數(shù)方面絕對未顯示出任何變化，表明該藥物有高度的血液動力學(xué)安全性。實施例11基于Balb/c小鼠的毒性試驗確定治療比用重約20-25克的Balb/c小鼠進(jìn)行毒性試驗。通過快速膠丸測定包裹有全氟丙烷(PFP)、全氟環(huán)丁烷(PFCB)、全氟丁烷(PFB)、和六氟化硫(SHF)的類脂濃度為1mgml-1的脂質(zhì)體的LD50。PFCB、PFB和PFP各樣品的LD50均大于12ml/kg，而對于SHF氣體填充的類脂雙層，大于30mgkg-1，這表明可用于超聲診斷的這些產(chǎn)品的治療指數(shù)分別大于2400∶和6000∶1.實施例12全氟戊烷氣體填充的脂質(zhì)體用作超聲造影劑給新西蘭白兔肌肉注射1cckg-1的RabbitMix(8∶5∶2，體積比，甲苯噻嗪(20mgml-1)氯胺酮(10mgml-1)乙酰丙嗪(100mgml-1)使之麻醉。兔子在AcousticImagingModel5200診斷超聲儀及AcousticImagingMoclel5200s診斷彩色多普勒儀(AcousticImaging，Phoenix，AZ)上顯像。用23G蝶形導(dǎo)管通過耳緣靜脈對兔子進(jìn)行注射。在5-10秒鐘內(nèi)對兔子給予劑量為0.01cckg-1-0.1cckg-1的全氟戊烷填充的類脂雙層在20分鐘到超過1小時的時間范圍內(nèi)，用7.5MH2的轉(zhuǎn)換器在長軸方向上顯示出心臟的全部四個室和心肌的鮮艷圖像。然后將轉(zhuǎn)換器移到肝區(qū)，在此處觀察到了肝靜脈、肝門靜脈以及肝竇的對比鮮明圖像。然后將轉(zhuǎn)換器移到腎臟，顯示出髓質(zhì)區(qū)和皮質(zhì)區(qū)的明顯差別以及腎動脈的圖像。然后用彩色多普勒儀替換超聲診斷轉(zhuǎn)換器，觀察到了動物體的所有血管化組織的持久鮮明的對比。實施例13不同的全氟丙烷和空氣濃度對氣體填充的脂質(zhì)體的數(shù)目和大小的影響將2ml管形瓶(實際體積為3.7ml)(WhentonIndustries，Millville，NJ)內(nèi)的溶于生理鹽水∶甘油∶丙二醇為8∶1∶1(重量比)的類脂溶液(每毫升1毫克，PPPC∶DPPA∶DPPE-PEG-5000為82∶10∶8mole％)的樣品置于容積為4立方英尺的改進(jìn)了的EdwardsModelSO4凍干器上，并進(jìn)行減壓。對管形瓶的液面上空間充以80％PFP和20％空氣、60％PFP和40％空氣、50％PFP和50％空氣、20％PFP和80％空氣、或100％空氣。不同樣品的液面上空間內(nèi)的氣體百分含量用帶有HewlettPackardChemTm軟件的1050L型惠普氣相色譜儀進(jìn)行的氣相色譜證實。檢測的方式是火焰電離檢測。然后用Wig-L-BugTm使樣品以3，300RPM振搖60秒，如前所述用光學(xué)顆粒大小測定法測定質(zhì)脂體的大小和數(shù)目。所得結(jié)果列于表2。本文所引用的每篇專利和文獻(xiàn)公開的內(nèi)容均以其全部引入本文作參考。對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，從前面的描述中，除了本文所述和所示的那些外，顯然可對本發(fā)明進(jìn)行各種改進(jìn)。這些改進(jìn)也將落入所附權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種容器，裝有類脂水懸浮液相和與所述類脂相基本分離的氣相。2.權(quán)利要求1的容器，其中所述的氣相由氟化的氣體組成。3.權(quán)利要求2的容器，其中所述的氟化的氣體是全氟化碳?xì)怏w。4.權(quán)利要求3的容器，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟乙烷、全氟戊烷和全氟甲烷。5.權(quán)利要求4的容器，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟丙烷和全氟丁烷。6.權(quán)利要求2的容器，其中所述的氟化的氣體是六氟化硫。7.權(quán)利要求1的容器，其中所述的氣體是順磁氣體。8.權(quán)利要求1的容器，其中所述的順磁氣體選自氧氣、氖氣、氙氣、和氧17。9.權(quán)利要求1的容器，其中所述的氣相由選自空氣、氮氣、氧氣、氖氣、氦氣、氪氣、氙氣和氧17的氣體組成。10.權(quán)利要求1的容器，其中所述的氣相由選自全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟甲烷、全氟乙烷、全氟戊烷、六氟化硫、空氣、氮氣、氧氣、氖氣、氦氣、氪氣、氙氣和氧17的氣體組成。11.權(quán)利要求1的容器，其中所述的氣相由基本上不溶的氣體組成。12.權(quán)利要求1的容器，其中所述的氣相由基本上不溶的氣體和可溶的氣體組成。13.權(quán)利要求1的容器，其中所述的基本上不溶的氣體是全氟化碳?xì)怏w。14.權(quán)利要求13的容器，其中所述的可溶的氣體選自空氣、氧氣、二氧化碳和氮氣。15.權(quán)利要求1的容器，其中所述的類脂水懸浮液相由選自磷脂的類脂組成。16.權(quán)利要求15的容器，其中所述的磷脂選自二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。17.權(quán)利要求1的容器，其中所述的類脂水懸浮液相還含有靶向配體。18.權(quán)利要求17的容器，其中所述的靶向配體是聚乙二醇。19.權(quán)利要求15的容器，其中所述的磷脂選自二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-PEG5000。20.權(quán)利要求19的容器，其中所述的磷脂選自二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-PEG5000，其摩爾百分比為約82％∶10％∶8％。21.權(quán)利要求1的容器，其中所述的類脂水懸浮液相還含有懸浮劑。22.權(quán)利要求1的容器，其中所述的類脂水懸浮液相還含有粘度調(diào)節(jié)劑。23.權(quán)利要求22的容器，其中所述的粘度調(diào)節(jié)劑選自甘油、丙二醇和聚乙烯醇。24.權(quán)利要求1的容器，其中所述的類脂水懸浮液相還含有治療或診斷劑。25.權(quán)利要求24的容器，其中所述的診斷劑是MRI造影增強劑。26.權(quán)利要求25的容器，其中所述的MRI造影增強劑是順磁離子。27.權(quán)利要求1的容器，其中所述的類脂水懸浮液相還含有聚合物。28.權(quán)利要求1的容器，其中所述的容器是無菌的。29.氣體填充的脂質(zhì)體，包含基本上不溶的氣體和可溶的氣體。30.權(quán)利要求29的氣體填充的脂質(zhì)體，其中所述的基本上不溶的氣體是全氟化碳?xì)怏w。31.權(quán)利要求29的氣體填充的脂質(zhì)體，其中所述的可溶的氣體選自空氣、氧氣、氮氣和二氧化碳。32.權(quán)利要求29的氣體填充的脂質(zhì)體，其中所述的基本上不溶的氣體是全氟化碳?xì)怏w，所述的可溶的氣體選自空氣、氧氣、氮氣和二氧化碳。33.權(quán)利要求29的氣體填充的脂質(zhì)體，其中所述的脂質(zhì)體由類脂單層組成。34.權(quán)利要求29的氣體填充的脂質(zhì)體，其中所述的脂質(zhì)體由類脂雙層組成。全文摘要本發(fā)明公開了裝有類脂水懸浮液相和與含水穩(wěn)定化相基本上分離的氣相的容器，該容器可用于診斷顯影如超聲和核磁共振顯影以及可用于治療應(yīng)用。文檔編號A61M5/31GK1158082SQ95195094公開日1997年8月27日申請日期1995年7月26日優(yōu)先權(quán)日1994年9月16日發(fā)明者艾文·C·安格爾,特里·O·馬斯安納格,大衛(wèi)·耶柔赫爾申請人:ImaRx藥物公司