專利名稱：用于治療全身性炎癥和炎性肝炎的嘧啶核苷酸前體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及包括胞苷，尿苷和乳清酸之?；苌锏泥奏ず塑账崆绑w且涉及這些化合物的預(yù)防和治療用途。本發(fā)明還涉及將這些化合物單獨(dú)或組合，與或不與其他試劑一起給動(dòng)物用藥。這些化合物能增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素和其它炎性刺激物及炎性介質(zhì)的抗性。
發(fā)明的背景膿毒也稱為膿毒綜合征，它是細(xì)菌、真菌或病毒嚴(yán)重感染的結(jié)果。在美國(guó)每年的死亡人數(shù)中膿毒癥占千分之十。它是引起手術(shù)特護(hù)病房中病人死亡的主要原因。
膿毒癥是一種炎癥性疾病，其中與諸如細(xì)菌內(nèi)毒素(革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁成份)的炎性刺激物發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生或釋放的內(nèi)源性細(xì)胞因子和其他生物活性分子引起包括發(fā)熱，嗜中性白細(xì)胞減少癥，血液凝集疾病，低血壓，休克，和器官損傷的各種癥狀。
膿毒癥(或其更嚴(yán)重的形式，膿毒休克)是稱為“全身性發(fā)炎反應(yīng)癥狀” (SIRS)的一個(gè)廣義類型的例子，它是對(duì)諸如內(nèi)毒素(存在于無菌血癥的血液中，例如，由于革蘭氏陰性細(xì)菌的內(nèi)毒素從感染部位或從腸道泄露進(jìn)循環(huán)中)的炎癥刺激物的一種生物體反應(yīng)；SIRS也能由革蘭氏陽性細(xì)菌，真菌，病毒引起，也可能是自身免疫疾病或施用治療性炎性細(xì)胞因子的結(jié)果。
SIRS的一般治療涉及循環(huán)和呼吸支持，但未直接致力于改善對(duì)諸如內(nèi)毒素的炎癥刺激物或炎性介質(zhì)的組織抗性。
中和內(nèi)毒素或介質(zhì)的生理效應(yīng)的單克隆抗體正在研制。然而，在內(nèi)毒素中毒癥狀發(fā)作前，在易感病人中使用抗體作為預(yù)防劑很昂貴或不實(shí)用。而且，難以確定何種病人可能受益于抗體治療，因?yàn)榕囵B(yǎng)和鑒定傳染性生物體所需的時(shí)間常超過完成有效治療的時(shí)間限制。在使用象白細(xì)胞介素-1的特定炎性介質(zhì)的受體拮抗劑的嘗試中也碰到相似的問題。
內(nèi)毒素毒性部分受巨噬細(xì)胞，Kupffer細(xì)胞(肝臟中的固著巨噬細(xì)胞)和與內(nèi)毒素發(fā)生反應(yīng)的其它細(xì)胞類型中釋放的內(nèi)源性細(xì)胞因子和其它生物活性分子的介導(dǎo)。在這些介質(zhì)中最有意義的是腫瘤壞死因子(TNF)和白細(xì)胞介素-1(IL-1)。其它包括血小板激活因子(PAF)，白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞三烯及其它花生四烯酸衍生物。施用這些細(xì)胞因子或介質(zhì)導(dǎo)致與至少一些由內(nèi)毒素引發(fā)的癥狀相似的癥狀。不同于細(xì)菌內(nèi)毒素的藥物或病理情況能引起TNF或IL-1的生產(chǎn)或活性(或靈敏性)提高，導(dǎo)致組織損傷。這類情況包括革蘭氏陽性菌，病毒或真菌感染或肝損傷。如果過量存在，炎性細(xì)胞因子能產(chǎn)生組織損傷，但當(dāng)以合適量存在時(shí)，它們?cè)趯?duì)感染性生物體或病毒的防御中是重要的。例如，抗TNF的抗體能減少用藥劑量的內(nèi)毒素的毒性(經(jīng)過阻斷由內(nèi)毒素引發(fā)的TNF的負(fù)效應(yīng))，但在一些細(xì)菌感染的情況下具有有害效應(yīng)，將感染的亞致死狀態(tài)轉(zhuǎn)變成勢(shì)不可擋的致死感染(Havell，免疫學(xué)雜志，1987，1394225-4231；Echtenacher et al.，免疫學(xué)雜志，1990，1453762-3766)。因此，在用直接滅活炎性細(xì)菌因子的試劑治療膿毒癥或SIRS的方法中存在內(nèi)在的問題。
肝臟是清除或解毒內(nèi)毒素(Farrar and Corwin，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1966，133668-684)和類似TNF的炎性蛋白的主要部位；因此，肝臟易于被內(nèi)毒素及其介質(zhì)損傷。由許多起因(例如，四氯化碳，膽堿缺陷，病毒感染，Reye’s綜合癥，乙醇)引起的肝臟損傷部分由細(xì)菌內(nèi)毒素或即使當(dāng)不存在全身性膿毒綜合征時(shí)由內(nèi)毒素引起的介質(zhì)介導(dǎo)(Nolan，胃腸病學(xué)，1975，691346-1356；Nolan，血液學(xué)，1989，10887-891)。在有意識(shí)地注射對(duì)治療癌癥可能有效的內(nèi)毒素的病人中肝臟毒性是劑量限制的(Engelhardt et al.，癌癥研究，1991，512524-2530)。據(jù)報(bào)道在膿毒休克中肝臟是表現(xiàn)出病理變化的最主要的器官(Kang et al.，組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)雜志，1988，36665-678)。而且，肝機(jī)能障礙在膿毒的早期發(fā)生并可能隨后引發(fā)器官衰竭(Wang et al.，外科學(xué)報(bào)，1991，126219-224)。
肝臟在調(diào)節(jié)動(dòng)物對(duì)內(nèi)毒素的敏感性中是重要的。損害肝臟功能或代謝的各種治療，如乙酸鹽，環(huán)己亞胺，放線菌素D或半乳糖胺中毒可能增加動(dòng)物對(duì)內(nèi)毒素或TNF的敏感性，在有些情況下會(huì)增加幾個(gè)數(shù)量級(jí)。
半乳糖胺引起的肝臟損傷的獨(dú)特性在于在發(fā)生細(xì)胞死亡前的一段時(shí)間內(nèi)它容易被逆轉(zhuǎn)。半乳糖胺經(jīng)過抑制肝臟尿嘧啶核苷進(jìn)入使它們不能轉(zhuǎn)變成游離核苷酸UDP-己糖胺通路而選擇性地減少肝臟尿嘧啶核苷酸，如果尿嘧啶核苷酸的減少充分延長(zhǎng)，由于RNA和蛋白質(zhì)合成受損，這能導(dǎo)致肝臟損傷。由半乳糖胺引起的生化缺陷可經(jīng)過施用尿嘧啶易于逆轉(zhuǎn)，它補(bǔ)充了由半乳糖胺捕獲的尿嘧啶核苷。因此，在施用半乳糖胺之前短時(shí)間內(nèi)或施用半乳糖胺后施用尿嘧啶核苷可減小半乳糖胺引起的肝損傷，從而將對(duì)內(nèi)毒素的敏感性恢復(fù)到正常值(Galanos et al.，PNAS 1979，765939-5943)。
同樣，在故意用嚙齒類肝毒劑TCDD處理的小鼠中內(nèi)毒素過敏過經(jīng)過施用尿嘧啶核苷部分逆轉(zhuǎn)(Rosenthal et al.，毒理學(xué)，1989，56239-251)。
然而與其中尿嘧啶核苷部分逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的對(duì)內(nèi)毒素的抗性的情況相反，已報(bào)道尿嘧啶核苷在用內(nèi)毒素攻擊的正常小鼠中無保護(hù)性效應(yīng)(Markley et al.，哮喘雜志1970，10598-607)，即，它不導(dǎo)致比正常更大的對(duì)內(nèi)毒素的抗性。
已試驗(yàn)了尿苷，胞苷和乳清酸在肝疾病和在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭袑?duì)肝功能影響的混合結(jié)果。Shafer和Isselbacher(胃腸病學(xué)，1961，40782-784)報(bào)道了給肝硬化病人每天靜脈輸注25至100毫克胞苷和尿苷3至7天后對(duì)臨床癥狀無影響。以1％的濃度給大鼠飲食中加入乳清酸導(dǎo)致肝臟的脂肪浸潤(rùn)(Von Euler et al，J Biol Chem 1963，2382464-2469)；經(jīng)腹膜內(nèi)注射施用乳清酸在用四氯化碳，二氯乙烷，DDT和9，10-二甲基-1，2-苯并蒽處理的大鼠中可減小肝損傷(Pates et al.，F(xiàn)armakol Toksikol.，1968，31717-719)。賴氨酸-乳清酸增加蘑茹毒捕蠅蕈肝毒提取物的毒性；乳清酸鈉和乳清酸對(duì)捕蠅蕈屬提取物的毒性無影響(Halacheva et al.，Toticon、1988，26571-576)。乳清酸已臨床施用給人類用于治療新生兒高膽紅素血癥和用于促進(jìn)心肌梗塞的恢復(fù)(O’Sullivan，Aust.N.Z.J.Med.1973，3417-422)?？诜盟幒螅榍逅嵛詹缓?，部分是由于可溶性差。
Hata等(美國(guó)專利4,027,017和4,058,601)公開了尿苷二磷酸和尿苷二磷酸葡糖醋酸減小血液乙醇濃度并在施用乙醇后抑制肝臟中性脂的積累。
涉及施用尿嘧啶的臨床試驗(yàn)(例如，為了減小抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶的宿主毒性)由于尿苷本身的生物學(xué)特征而較復(fù)雜?？诜盟幒竽蜍针y以吸收；對(duì)人類而言腹瀉限制了劑量(Van Groeningen等，Proceedings of the AACR.1987，28195)。尿嘧啶的腸胃外用藥需要使用中央靜脈導(dǎo)管(引起不舒適并有感染的危險(xiǎn))，因?yàn)楫?dāng)經(jīng)過臂靜脈導(dǎo)管施用尿嘧啶時(shí)在早期臨床試驗(yàn)中靜脈炎是一個(gè)問題(VanGroeningen et al.Cancer Treat Ren 1986，70745-50)。
施用易于從消化道吸收進(jìn)血液并然后在循環(huán)中水解產(chǎn)生游離尿苷或胞苷的尿苷和胞苷?；苌锟朔擞坞x核苷口服吸收困難的問題(美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)438,493,115,929和903,107，此處引用以供參考)。
發(fā)明的目的本發(fā)明的主要目的是提供對(duì)提高存活率和防止全身性發(fā)炎反應(yīng)綜合征(包括膿毒癥)損傷組織有效的治療和預(yù)防試劑。
本發(fā)明的主要目的是提供能有效增強(qiáng)對(duì)全身性炎癥之抗性的化合物族。在接觸內(nèi)毒素或其它炎性刺激物之前，期間或之后將這些化合物施用給動(dòng)物以防止或治療全身性發(fā)炎的影響。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于治療在其病原學(xué)上涉及炎性刺激物或炎性細(xì)胞因子的各類疾病的化合物族。
本發(fā)明的另一目的是提供在受到內(nèi)毒素中毒或其他全身性發(fā)炎疾病的動(dòng)物中提高存活率或改善生理功能的化合物族。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供治療或防止炎性肝炎的化合物族。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供能經(jīng)口服或腸胃外用藥的化合物。發(fā)明概述本發(fā)明的這些和其它目的經(jīng)過可施用給動(dòng)物(包括諸如人類的哺乳動(dòng)物)的諸如乳清酸或其鹽，尿苷，胞苷的嘧啶核苷酸前體或包括酰基衍生物或磷酸酯的這些試劑的前藥(prodrug)衍生物來實(shí)現(xiàn)。這些化合物單獨(dú)或結(jié)合用藥在治療或防止全身性炎癥的后果中有用。全身性發(fā)炎由細(xì)菌，真菌或病毒，細(xì)菌，真菌或病毒的組成成份(例如，分別是內(nèi)毒素，多糖或病毒蛋白)感染，炎性介質(zhì)或作為自身免疫疾病的結(jié)果引起。
因此，本發(fā)明的化合物單獨(dú)或結(jié)合在治療和防止膿毒癥或炎性細(xì)胞因子的毒性效應(yīng)中有用，在有膿毒危險(xiǎn)的病人，例如進(jìn)行外科手術(shù)或患有嚴(yán)重?zé)齻蚴軅蜃鳛閷?duì)癌癥或其它疾病化療的結(jié)果而免疫受損的病人中作為預(yù)防劑有用。
本發(fā)明的一個(gè)重要方面是發(fā)現(xiàn)了諸如乳清酸，尿苷或胞苷的嘧啶核苷酸前體和這些化合物的酰基衍生物具有意想不到的治療特征。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及將本發(fā)明的化合物和組合物用于治療和防止在諸如治療癌癥時(shí)治療上施用炎性細(xì)胞因子期間出現(xiàn)的毒性。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及將本發(fā)明的化合物和組合物用于治療和防止炎性肝炎。
發(fā)明的化合物在增強(qiáng)對(duì)炎性刺激物或炎性介質(zhì)的抗性中有用的化合物具有下面結(jié)構(gòu)除非另有說明在所有情況下，在本發(fā)明化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)中字母和具有表示可變?nèi)〈南聵?biāo)的字母僅適用于緊接該標(biāo)記描述前的結(jié)構(gòu)。
(1)具有下式的尿苷或尿苷?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}
其中R1，R2，R3和R4相同或不同且各是氫或代謝物的?；鶊F(tuán)。(2)具有下式的胞苷或胞苷?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}
其中R1，R2，R3和R4相同或不同，且各是氫或代謝物的?；鶊F(tuán)。
(3)具有下式的尿苷酰基衍生物
其中R1，R2和R3相同或不同，且各是氫或下列物質(zhì)的?；鶊F(tuán)a.具有5至22個(gè)碳原子的非分支脂肪酸，b.選自甘氨酸，L型丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羥脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，賴氨酸，組氨酸，肉毒堿和鳥氨酸的氨基酸，c.具有3-22個(gè)碳原子的二羧酸，d.選自一個(gè)或多個(gè)羥基乙酸，丙酮酸，乳酸，烯醇式丙酮酸，硫辛酸，泛酸，乙酰乙酸，對(duì)-氨基苯甲酸，β-羥基丁酸，乳清酸和肌酸。
(4)具有下式的胞苷?；苌?
其中R1，R2，R3和R4相同或不同，各是氫或下列物質(zhì)的?；鶊F(tuán)a.具有5至22個(gè)碳原子的非分支脂肪酸，b.選自甘氨酸，L型的苯丙氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羥脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，賴氨酸，組氨酸，肉毒堿和鳥氨酸的氨基酸，c.具有3-22個(gè)碳原子的二羧酸，d.選自一個(gè)或多個(gè)羥基乙酸，丙酮酸，乳酸，烯醇式丙酮酸，硫辛酸，泛酸，乙酰乙酸，對(duì)-氨基苯甲酸，β-羥基丁酸，乳清酸和肌酸的羧酸。
(5)具有下式的尿苷?；苌?
其中，R1，R2或R3中至少有一個(gè)是含2-26個(gè)碳原子的烴氧羰基部分，剩下的R取代基獨(dú)立地是一個(gè)烴氧羰基或烴基羰基基團(tuán)或H或磷酸。
(6)具有下式的胞苷?；苌?
其中R1，R2，R3或R4至少一個(gè)是含2-26個(gè)碳原子的烴氧羰基基團(tuán)，剩余的R取代基獨(dú)立地是烴氧羰基或烴基羰基或H或磷酸。
(7)乳清酸或其鹽
乳清酸的藥用上可接受的鹽包括那些其中鹽的陽離子成份是鈉，鉀，諸如精氨酸或賴氨酸的堿性氨基酸，甲基葡萄糖胺，膽堿或具有分子量不超過大約1000道爾頓的任何其它基本上無毒性的水溶性陽離子。
(8)醇取代的乳清酸衍生物
其中R1是以酯鍵連接到乳清酸上的含1至20個(gè)碳原子的醇基團(tuán)。
本發(fā)明還包含上述化合物的藥用上可接受的鹽。
本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)化合物是尿苷或胞苷的短鏈(2至6個(gè)碳原子)脂肪酸酯。特別有優(yōu)勢(shì)的化合物是三乙酰尿苷，三乙酰胞苷或乳清酸鹽。尿苷磷酸化酶抑制劑作為上述嘧啶核苷酸前體的替代或補(bǔ)充，下列化合物可用于本發(fā)明。這些試劑經(jīng)過抑制內(nèi)源性或外源性尿苷的分解代謝而提高組織尿苷核苷酸水平。尿苷磷酸化酶抑制劑與嘧啶核苷酸前體一起施用減少了為獲得治療效益所需的核苷酸前體的量。
尿苷磷酸化酶抑制劑的例子包括但不限于5-芐基巴比妥鹽或5-亞芐基巴比妥鹽衍生物，包括5-芐基巴比妥鹽，5-芐氧基芐基巴比妥鹽，5-芐氧基芐基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥鹽，5-芐氧基芐基乙?；?1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥鹽，和5-甲氧基芐基乙酰基無環(huán)巴比妥鹽，2，2’-脫水-5-乙基尿苷，無環(huán)尿苷化合物，特別是5-芐基取代的無環(huán)尿苷同類物，包括但不限于芐基無環(huán)尿苷，芐氧基-芐基無環(huán)尿苷，氨甲基-芐基無環(huán)尿苷，氨甲基芐氧基芐基無環(huán)尿苷，羥甲基-芐基無環(huán)尿苷和羥甲基-芐氧基芐基無環(huán)尿苷。也見WO 89/09603和WO91/16315，本文引用以供參考。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及包括胞苷，尿苷和乳清酸的?；苌锏泥奏ず塑账崆绑w以及這些化合物和/或尿苷磷酸化酶抑制劑在治療或防止包括人類的動(dòng)物中內(nèi)毒素和其它炎性刺激物或介質(zhì)的病理后果中的應(yīng)用。
本文公開的本發(fā)明涉及增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)炎性刺激物和介質(zhì)的抗性的方法。下面提供的實(shí)施例說明了對(duì)內(nèi)毒素和其它炎性刺激物引起的毒性的預(yù)防和治療。本發(fā)明的方法可用于與其它方法結(jié)合治療和防止膿毒癥和全身性發(fā)炎。A.定義本文使用的術(shù)語“嘧啶核苷酸前體”指給動(dòng)物用藥后轉(zhuǎn)變成嘧啶核苷酸的化合物。它特別地包括胞苷，尿苷或乳清酸或這些化合物的前藥(包括酰基衍生物)。
本文使用的術(shù)語“?；苌铩敝膏奏ず塑昭苌?，其中來自羧酸的基本上無毒性的有機(jī)?；〈镆怎ユI與氧嘌呤核苷之核糖部分的一個(gè)或多個(gè)的自由羥基連接和/或其中該取代物從酰胺鍵連接于胞苷嘌呤環(huán)的胺取代物上。該?；〈飦碜贼人?，它包括，但不限于選自由脂肪酸，氨基酸，煙酸，二羧酸，乳酸，對(duì)氨基苯甲酸和乳清酸的化合物。有優(yōu)勢(shì)的?；〈锸钦Ｇ闆r下存在于體內(nèi)(作為食物組份或中間代謝產(chǎn)物)的化合物。
本文使用的術(shù)語“藥用上可接受的鹽”指衍生物的具有藥用上可接受的酸加成鹽的鹽，它包括但不限于硫酸，鹽酸或磷酸。
術(shù)語“共同用藥”指在一個(gè)時(shí)間段內(nèi)施用至少2種本發(fā)明的化合物，其中各自的藥學(xué)活性期限重疊。
本文使用的術(shù)語“氨基酸”包括但不限于甘氨酸，L型丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羥基脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，半胱氨酸，胱氨酸，甲硫氨酸，色氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，賴氨酸，組氨酸，鳥氨酸，羥基賴氨酸，肉毒堿和其它天然存在的氨基酸。
本文使用的術(shù)語“脂肪酸”指具有2-22個(gè)碳原子的脂肪族羧酸。該脂肪酸可以是飽和的，部分飽和的或多聚不飽和的。
本文使用的術(shù)語“二羧酸”指具有第二個(gè)羧酸取代物的脂肪酸。
本文使用的術(shù)語“治療上有效量”指對(duì)給定癥狀和用藥方式提供治療效力的量。
本文使用的術(shù)語“膿毒癥”是全身性發(fā)炎疾病，其中內(nèi)源性細(xì)胞因子和其它生物活性分子在對(duì)諸如細(xì)菌內(nèi)毒素(革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的一種成份)的炎性刺激物發(fā)生反應(yīng)時(shí)被產(chǎn)生或釋放，引起各種癥狀，包括發(fā)熱，嗜中性白細(xì)胞減少癥，血凝集疾病，低血壓，休克和器官損傷。
本文使用的術(shù)語“炎性刺激物”指在動(dòng)物中觸發(fā)發(fā)炎反應(yīng)的外源性試劑。炎性刺激物的例子包括細(xì)菌，真菌，病毒，細(xì)菌(如內(nèi)毒素)，真菌或病毒的非活性片段或成份，或觸發(fā)變態(tài)或過敏反應(yīng)的試劑。在自身免疫疾病的情況下，為病人組織的內(nèi)源性成份，例如特別是發(fā)揮炎性刺激物功能的細(xì)胞蛋白質(zhì)。
本文使用的術(shù)語“介質(zhì)”指典型地介導(dǎo)內(nèi)毒素或諸如真菌多糖的其它炎性刺激物的生物學(xué)效應(yīng)的內(nèi)源性或外源性(例如重組多肽)生物活性化合物，蛋白質(zhì)或多肽。這些試劑的例子包括但不限于腫瘤壞死因子(TNF)，白細(xì)胞介素-1(IL-1)，白細(xì)胞介素-6(IL-6)，血纖維蛋白溶酶原激活抑制劑(PAI)，白細(xì)胞三烯，補(bǔ)體級(jí)聯(lián)成份，氧化氮，或血小板激活因子。B.發(fā)明的化合物本發(fā)明的首要特征是意想不到地發(fā)現(xiàn)了尿苷和其它嘧啶核苷酸前體事實(shí)上保護(hù)另外的正常動(dòng)物(例如，機(jī)體未接受象半乳糖胺或TCDD-樣的與臨床無關(guān)的肝毒致敏劑的動(dòng)物模型)抵抗通過誘發(fā)內(nèi)源性炎性介質(zhì)產(chǎn)生組織損傷的細(xì)菌內(nèi)毒素和其它炎性刺激物引起的毒性。
經(jīng)過施用一些前體可提高組織尿苷核苷酸水平。尿苷和胞苷可經(jīng)過在5’位磷酸化摻入細(xì)胞核苷酸庫(kù)；胞苷和尿苷核苷酸可通過酶促氨基化和去氨基化反應(yīng)互相轉(zhuǎn)換。乳清酸是嘧啶核苷酸從頭生物合成的關(guān)鍵中間體。乳清酸摻入核苷酸庫(kù)需要細(xì)胞磷酸核糖焦磷酸(PRPP)。作為選擇(或除了供應(yīng)外源性核苷酸前體外)，經(jīng)過施用抑制尿苷磷酸化酶(尿苷降解途徑中的第一個(gè)酶)的化合物可增強(qiáng)組織對(duì)尿苷的獲取。在增強(qiáng)對(duì)內(nèi)毒素或炎性介質(zhì)的抗性中有用的本發(fā)明的化合物包括尿苷，胞苷，乳清酸，這些嘧啶核苷酸前體的前藥形式，特別是?；苌锖土姿狨ィ约澳蜍樟姿峄傅囊种苿?。本發(fā)明的化合物具有下面結(jié)構(gòu)除非另有說明在所有情況下，在本發(fā)明的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)中的字母和具有表示可變?nèi)〈聵?biāo)的字母僅適用于緊接該標(biāo)記前的描述的結(jié)構(gòu)。
(1)具有下式的尿苷的酰基衍生物或其藥用上可接受的鹽
其中，R1，R2，R3和R4相同或不同，且分別是氫或代謝物的酰基基團(tuán)，前提是至少一個(gè)所說的R取代基不是氫。(2)具有下式的胞苷的酰基衍生物或其藥用上可接受的鹽
其中，R1，R2，R3和R4相同或不同，分別是氫或代謝物的?；鶊F(tuán)，前提是至少一個(gè)所說的R取代基不是氫。
在增強(qiáng)對(duì)內(nèi)毒素的抗性中有用的本發(fā)明的化合物包括(3)具有下式的尿苷的酰基衍生物
其中R1，R2和R3相同或不同，分別是氫或下列物質(zhì)的酰基基團(tuán)a.具有5至22個(gè)碳原子的非分支的脂肪酸，b.選自甘氨酸，L型丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羥基脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，賴氨酸，組氨酸，肉毒堿和鳥氨酸的氨基酸，c.具有3-22個(gè)碳原子的二羧酸，d.選自一個(gè)或多個(gè)羥基乙酸，丙酮酸，乳酸，烯醇式丙酮酸，硫辛酸，泛酸，乙酰乙酸，對(duì)氨基苯甲酸，β羥基丁酸，乳清酸和肌酸的羧酸。(4)具有下式的胞苷的?；苌?
其中，R1，R2，R3和R4相同或不同，且分別是氫或下列物質(zhì)的?；鶊F(tuán)a.具有5至22個(gè)碳原子的非分支脂肪酸，b.選自甘氨酸，L型苯丙氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羥基脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，賴氨酸，組氨酸，肉毒堿和鳥氨酸的一個(gè)氨基酸，c.具有3-22個(gè)碳原子的二羧酸，d.選自一個(gè)或多個(gè)羥基乙酸，丙酮酸，乳酸，烯醇式丙酮酸，硫辛酸，泛酸，乙酰乙酸，對(duì)氨基苯甲酸，β-羥基丁酸，乳清酸和肌酸的羧酸。
(5)具有下式的尿苷的?；苌?
其中R1，R2，或R3中至少一個(gè)是含2-26個(gè)碳原子的烴氧基羰基基團(tuán)且剩余的R取代基獨(dú)立地是烴氧基羰基或烴基羰基部分或H或磷酸。
(6)具有下式的胞苷的?；苌?
其中，R1，R2，R3或R4中至少有一個(gè)是含2-26個(gè)碳原子的烴氧羰基部分，剩余的R取代基獨(dú)立地是烴氧基羰基基團(tuán)或烴基羰基部分或H或磷酸。
(7)乳清酸或其鹽
乳清酸的藥用上可接受的鹽包括那些其中鹽的陽離子成份是鈉，鉀，諸如精氨酸或賴氨酸的堿性氨基酸，甲基葡糖胺，膽堿，或具有分子量小于大約1000道爾頓的任何其它基本上無毒性的水溶性陽離子。
(8)醇取代的乳清酸衍生物
其中R1是經(jīng)過酯鍵連接到乳清酸上的含1至20個(gè)碳原子的醇基團(tuán)。
本發(fā)明還包括上述化合物的藥用上可接受的鹽。
本發(fā)明的具優(yōu)勢(shì)的化合物是尿苷或胞苷的短鏈(2至6個(gè)碳原子)脂肪酸酯。特別具優(yōu)勢(shì)的化合物是三乙酰尿苷或三乙酰胞苷。尿苷磷酸化酶的抑制劑尿苷磷酸化酶抑制劑的例子包括但不限于5-芐基巴比妥鹽或5-亞芐基巴比妥鹽衍生物，包括5-芐基巴比妥鹽，5-芐氧基芐基巴比妥鹽，5-芐氧基芐基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥鹽，5-芐氧基芐乙?；?1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥鹽，和5-甲氧基芐基乙?；鶡o環(huán)巴比妥鹽，2，2’-脫水-5-乙基尿苷，5-乙基-2-脫氧尿苷和無環(huán)尿苷化合物，特別是5-芐基取代的無環(huán)尿苷同類物，包括但不限于芐基無環(huán)尿苷，芐氧基芐基無環(huán)尿苷，氨基甲基-芐基無環(huán)尿苷，氨甲基芐氧基芐基無環(huán)尿苷，羥甲基-芐基無環(huán)尿苷和羥甲基-芐氧基無環(huán)尿苷。也見WO89/09603和WO91/16315，本文引用以供參考。發(fā)明的組合物在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，新藥用組合物包含作為活性劑的選自尿苷，胞苷或乳清酸或其鹽的一個(gè)或多個(gè)嘧啶核苷酸前體，和這些嘧啶核苷酸前體的?；苌铮约八幱蒙峡山邮艿妮d體。
組合物根據(jù)目的用途和用藥途徑以液體，懸液，片劑，膠囊，糖衣藥丸，可注射溶液或栓劑(見下面配方的討論)的形式生產(chǎn)。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，組合物包含至少一個(gè)嘧啶核苷酸前體和一種抑制尿苷降解的試劑，如尿苷磷酸化酶抑制劑。尿苷磷酸化酶抑制劑的例子包括但不限于5-芐基巴比妥鹽或5-亞芐基巴比妥鹽衍生物，包括5-芐基巴比妥鹽，5-芐氧基芐基巴比妥鹽，5-芐氧基芐基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥鹽，5-芐氧基芐基乙酰基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥鹽和5-甲氧基芐基乙?；鶡o環(huán)巴比妥鹽，2，2’-脫水-5-乙基尿苷和無環(huán)尿苷化合物，特別是5-芐基取代的無環(huán)尿苷類似物(ongerers)，包括但不限于芐基無環(huán)尿苷，芐氧基芐基無環(huán)尿苷，氨甲基-芐基無環(huán)尿苷，氨甲基芐氧基芐基無環(huán)尿苷，羥甲基-芐基無環(huán)尿苷和羥甲基-芐氧基無環(huán)尿苷。也見US 5077280和WO91/16315，本文引用以供參考。
而且，為了提高組織對(duì)內(nèi)毒素或炎性介質(zhì)的抗性而單獨(dú)使用尿苷磷酸化酶抑制劑且不共同施用嘧啶核苷酸前體也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包括除了本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)化合物外，至少還有一種在治療內(nèi)毒素毒性或膿毒中也有用的下列化合物結(jié)合內(nèi)毒素，TNF或IL-1的抗體或其它蛋白質(zhì)；結(jié)合到多聚體支持物基質(zhì)上的多粘菌素B(為了減少多粘菌素B的毒性而利用其結(jié)合且滅活內(nèi)毒素的能力)；IL-1或TNF受體拮抗劑；抗生素；花生四烯酸級(jí)聯(lián)抑制劑；精氨酸或鳥氨酸；皮質(zhì)甾類；葡萄糖；ATP；嘌呤核苷酸前體，包括肌苷，腺苷或其?；苌铮画h(huán)AMP或其?；苌铩?br> 在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，組合物包含至少一種本發(fā)明的化合物和一種抗細(xì)菌，抗真菌或抗病毒化合物。發(fā)明的化合物和組合物的治療應(yīng)用本發(fā)明的化合物，組合物和方法在增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)內(nèi)毒素或其它炎性刺激物或介質(zhì)的抗性中有用。該化合物包括嘧啶核苷酸前體以及抑制尿苷酶促降解的化合物。
本發(fā)明的化合物和組合物在治療包括人類的哺乳動(dòng)物中有用；然而，本發(fā)明并不打算局限于此，施用本發(fā)明的活性化合物而實(shí)現(xiàn)有益效應(yīng)的對(duì)所有動(dòng)物的治療也在本發(fā)明的構(gòu)想內(nèi)。
本發(fā)明的首要特征是發(fā)現(xiàn)了施用尿苷核苷酸前體導(dǎo)致對(duì)體內(nèi)內(nèi)毒素或其它炎性刺激物介質(zhì)的毒性或致死效應(yīng)的超正?？剐?。
而且，本發(fā)明包含口服或全身性施用含有嘧啶核苷酸前體和/或抑制尿苷降解代謝之試劑的藥用化合物或組合物以增強(qiáng)對(duì)內(nèi)毒素，其它炎性刺激物或其介質(zhì)的抗性。SIRS，膿毒癥和膿毒休克本發(fā)明的化合物，組合物和方法對(duì)于減少由于被細(xì)菌(革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌)，病毒，真菌或寄生(例如瘧疾)生物觸發(fā)的全身性發(fā)炎反應(yīng)綜合征(SIRS)(包括膿毒癥)對(duì)組織的損傷有用。所有這些類型的感染性生物刺激內(nèi)源性炎性介質(zhì)的形成或釋放并導(dǎo)致組織損傷。
本發(fā)明的化合物和組合物可施用給具有膿毒癥狀，例如發(fā)熱，嗜中性白細(xì)胞減少癥，低血壓等的病人或預(yù)防具有膿毒癥危險(xiǎn)的病人，例如外科病人，具有各種燒傷或傷口的病人或帶尿道插管的病人。
本發(fā)明的化合物可任選與在治療膿毒中有用的其它試劑聯(lián)合施用，它包括但不限于一種或多種下列物質(zhì)結(jié)合內(nèi)毒素，TNF或IL-1的抗體或其它蛋白質(zhì)；與多聚體支持基質(zhì)結(jié)合的多粘菌素B(為了減少多粘菌素B毒性而利用其結(jié)合和滅活內(nèi)毒素的能力)；IL-1或TNF受體的拮抗劑；抗生素；花生四烯酸級(jí)聯(lián)反應(yīng)的抑制劑；白細(xì)胞三烯拮抗劑；精氨酸或鳥氨酸；皮質(zhì)甾類；葡萄糖；ATP；肌苷；環(huán)AMP或其?；苌铩Ｔ趧?dòng)物或病人接觸一種或多種這些其它試劑前，后或期間施用本發(fā)明的化合物。
為了治療或防止因膿毒引起的組織損傷，根據(jù)治療反應(yīng)和病人的狀態(tài)可施用的本發(fā)明的化合物的劑量范圍為每天大約0.5到大約40克，優(yōu)選每天3到30克。在具有嚴(yán)重膿毒癥的病人中，本發(fā)明的化合物典型地經(jīng)鼻胃管(nasogastric)，(特別是為了傳送營(yíng)養(yǎng)懸液或其它腸營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)物而已放置該導(dǎo)管時(shí))以液體或懸液形式施用。具有不太嚴(yán)重的疾病的病人以液體形式或膠囊或片劑接受本發(fā)明的化合物。不能耐受口服施用本發(fā)明的化合物和組合物的病人(例如由于胃腸道損傷而全部依賴腸胃外營(yíng)養(yǎng)的病人)經(jīng)靜脈內(nèi)輸注接受充分水溶的本發(fā)明的化合物，如尿苷本身。
經(jīng)歷一陣休克，創(chuàng)傷或膿毒癥后，病人常進(jìn)入持久的代謝亢進(jìn)狀態(tài)，這可能導(dǎo)致多個(gè)器官衰竭，通常以肝損傷開始。代謝亢進(jìn)時(shí)期是由于內(nèi)毒素或其介質(zhì)對(duì)代謝調(diào)節(jié)的影響(Cerra et al.，膿毒休克的分子和細(xì)胞機(jī)制，265-277，Alan R.Liss，1989)。代謝亢進(jìn)性器官衰竭是在外科特護(hù)病人中引起死亡的一個(gè)原因。正如在實(shí)施例中所證實(shí)的，本發(fā)明的化合物，組合物和方法在減小組織損傷并提高接受內(nèi)毒素或其它膿毒誘導(dǎo)劑和器官衰竭的動(dòng)物中的存活中有效。本發(fā)明的化合物，組合物和方法在治療有代謝亢進(jìn)性器官衰竭危險(xiǎn)的病人中有用。
膿毒癥的嚴(yán)重后果是傾向于凝血疾病，特別是傳播性血管內(nèi)凝血(DIC)。在DIC中，血凝結(jié)和血纖維蛋白溶解作用被激活，使血凝固因子迅速消耗并在循環(huán)中以凝血酶形式聚集。DIC可導(dǎo)致出血和/或血栓形成。肝臟是凝血因子合成及從循環(huán)中清除凝血酶微聚集體的主要部位。本發(fā)明的化合物，組合物和方法的保護(hù)性和治療性效果減少了在血液凝固中的膿毒誘導(dǎo)的病變(見實(shí)施例11)。治療性細(xì)胞因子毒性的降低內(nèi)毒素和其它炎性刺激物的許多生物學(xué)效應(yīng)由從靶細(xì)胞，特別是巨噬細(xì)胞和Kupffer細(xì)胞(肝臟中的固著型巨噬細(xì)胞)釋放內(nèi)源性生物活性分子(介質(zhì))來介導(dǎo)。其證據(jù)是在小鼠C3H/HEJ品系中巨噬細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素在遺傳上無反應(yīng)(關(guān)于與內(nèi)毒素接觸時(shí)釋放細(xì)胞因子)，在該品系中內(nèi)毒素相對(duì)無毒性。然而這些小鼠對(duì)正常情況下從巨噬細(xì)胞中釋放的生物活性肽，例如腫瘤壞死因子(TNF)敏感，經(jīng)過移植正常巨噬細(xì)胞LPS的毒性可恢復(fù)。一般認(rèn)定TNF是內(nèi)毒素毒性的主要介質(zhì)，但白細(xì)胞介素-1(IL-1)和其它試劑也參與內(nèi)毒素毒性和膿毒的表達(dá)。
因此，本發(fā)明的化合物，組合物和方法在修飾炎性細(xì)胞因子的生物學(xué)效應(yīng)中有用，不管該細(xì)胞因子是內(nèi)源性產(chǎn)生的(特別是來自巨噬細(xì)胞)還是從外部來源導(dǎo)入身體的(例如，由重組DNA和發(fā)酵技術(shù)產(chǎn)生的多肽)。
各種炎性細(xì)胞因子和甚至是內(nèi)毒素本身具有潛在的治療應(yīng)用。腫瘤壞死因子顧名思義可破壞腫瘤且在抑制病毒感染中與干擾素α協(xié)同作用。因此，TNF和甚至是細(xì)菌內(nèi)毒素本身(誘導(dǎo)內(nèi)源性TNF釋放)已被施用給病人用于治療癌癥。因具有治療活性和毒性而限制其臨床應(yīng)用的炎性細(xì)胞因子類型包括TNF，白細(xì)胞介素，和干擾素。本發(fā)明的化合物，組合物和方法在防止或治療在治療性施用該細(xì)胞因子以及炎性刺激物期間產(chǎn)生的毒性中有用。
當(dāng)內(nèi)毒素經(jīng)靜脈內(nèi)輸注給癌癥病人用藥時(shí)，肝毒性限制了可施用的內(nèi)毒素的劑量(Engelhardt R. et al.，癌癥研究，1991512524-30)。在非肝癌中，為了使其抗腫瘤效力達(dá)到最大，針對(duì)內(nèi)毒素的肝臟保護(hù)允許施用更高劑量的內(nèi)毒素。內(nèi)毒素也具有免疫刺激特性。因此，本發(fā)明的化合物在改進(jìn)內(nèi)毒素，內(nèi)毒素類似物或衍生物(例如，類脂A，類脂X，單磷脂酰脂A等)或其介質(zhì)的治療指標(biāo)中有用。在腸道施用TNF給人類期間，肝毒性也是限制劑量的(Kimura et al.，癌癥化療藥理學(xué)1987，20223-229)。酵母或真菌來源的炎性刺激物，如多糖類葡聚糖或蘑菇多糖也在治療上用作治療感染或癌癥的免疫調(diào)節(jié)劑(Seljelid，Scand.J.Immunol.1989，29181-92；Bowers etal.，J.Surg.Res.1989；47183-8)。雙鍵RNA，如多聚肌苷-多聚胞苷在作為治療癌癥或感染的炎性刺激物時(shí)也具有治療活性。
介導(dǎo)一些內(nèi)毒素作用的炎性肽白細(xì)胞介素-1(IL-1)同樣具有重要治療潛力(例如，由癌癥化療引起損傷后的造血恢復(fù))，但其應(yīng)用受到毒性副作用的限制，該毒性可利用本發(fā)明的化合物，組合物和方法來減小。
白細(xì)胞介素-2(IL-2)在臨床上用于治療各種癌癥；在作為治療各種感染和調(diào)節(jié)與疫苗的反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)劑中也具有潛在的活性。在接受治療劑量的IL-2以治療癌癥的病人中針對(duì)IL-2的肝毒性并非少見(Viens et al.，J.Immunother.199211218-24)。在施用伴刀豆球蛋白A給小鼠誘導(dǎo)的自身免疫性肝炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，?jù)報(bào)道肝損傷與內(nèi)源性IL-2產(chǎn)生增多相關(guān)(Tiegs et al.，J.Clin.Invest.199290196-203)；如實(shí)施例10所證實(shí)的，本發(fā)明的化合物，組合物和方法在減輕該模型肝損傷中有效。當(dāng)與IL-2結(jié)合用藥時(shí)，本發(fā)明的化合物，組合物和方法在減小副作用中有用；而且，本發(fā)明的化合物，組合物和方法在治療自身免疫性肝炎中有用。
在改善血小板生成中有療效的白細(xì)胞介素6誘導(dǎo)肝TNF受體，從而增強(qiáng)對(duì)TNF的組織敏感性。因此本發(fā)明的化合物，組合物和方法在與IL-6或影響對(duì)TNF的組織敏感性或TNF產(chǎn)生的相似試劑結(jié)合使用時(shí)有用(Van Bladet et al.，細(xì)胞因子，19913149-54)。
特定治療性細(xì)胞因子和嘧啶核苷酸前體和/或尿苷磷酸化酶抑制劑聯(lián)合用于治療已知特定治療性細(xì)胞因子對(duì)其有效的疾病。例如，白細(xì)胞介素2用于治療直腸癌，結(jié)腸癌，黑色素瘤，淋巴癌，白血病和其它腫瘤癥狀。TNF對(duì)各種類型的癌具有抗腫瘤效力，但其治療用途一直受其毒性限制(Kimura et al.，Cancer.Chemother.Pharmacol.1987；20223-9)。內(nèi)毒素已顯示出明顯的抗腫瘤效力(Engelhardt. R etal.，癌癥研究1991512524-30)。
為了防止或治療由于施用治療性細(xì)胞因子而產(chǎn)生的毒性，根據(jù)細(xì)胞因子治療的持續(xù)時(shí)間每天施用大約0.5到40克嘧啶核苷酸前體，持續(xù)1到7天。在施用治療性細(xì)胞因子前，期間或之后施用嘧啶核苷酸前體。治療性細(xì)胞因子按實(shí)驗(yàn)和臨床治療各類癌癥已建立的特定劑量和方式用藥，除了當(dāng)施用本發(fā)明的嘧啶核苷酸前體時(shí)可耐受更高劑量的細(xì)胞因子，這可在對(duì)各細(xì)胞因子或炎性刺激物的簡(jiǎn)單劑量-逐步升級(jí)(dose-escalation)實(shí)驗(yàn)中測(cè)定。炎性肝炎與內(nèi)毒素或介質(zhì)相關(guān)的肝疾病肝臟容易受內(nèi)毒素或其介質(zhì)的損傷，尤其是當(dāng)肝臟功能受損時(shí)。由增強(qiáng)對(duì)內(nèi)毒素的肝敏感性或抑制內(nèi)毒素清除的許多起因(例如，膽堿缺陷，Reye氏綜合癥或醇)引起的肝損傷部分受細(xì)菌內(nèi)毒素(正常情況下由于從腸道泄露少量進(jìn)入血液而存在于門靜脈循環(huán)中)或由內(nèi)毒素誘導(dǎo)的介質(zhì)介導(dǎo)(Nolan，胃腸病學(xué)，1975691346-1356；Nolan，肝病學(xué)1989 10887-91)。在治療癌癥可能有效的接受腸道注射內(nèi)毒素的病人中，肝毒性限制了劑量(Engelhardt et al.，癌癥研究，1991 512524-2530)。
如在下面實(shí)施例中所證實(shí)的，本發(fā)明的化合物，組合物和本發(fā)明的方法明顯減少由內(nèi)毒素和其它炎性刺激物和介質(zhì)誘導(dǎo)的肝損傷。本發(fā)明的化合物，組合物和方法在其病因?qū)W上涉及由內(nèi)毒素或其它炎性刺激物或介質(zhì)引起的肝毒性的許多癥狀(不管是否存在全身性膿毒綜合癥)中治療，防止或減輕肝損傷有用。其中涉及內(nèi)毒素或其介質(zhì)(例如TNF)對(duì)肝的損傷的癥狀包括但不限于下列疾病狀態(tài)A.Reye氏綜合征Reye氏綜合征的特征在于快速的肝功能衰竭，它作為一種流感和其它病毒性感染綜合征在兒童中最常見，阿斯匹林可能是一種危險(xiǎn)因子。據(jù)信Reye氏綜合征的病因?qū)W涉及內(nèi)毒素或炎性介質(zhì)。在具有Reye氏綜合征的大多數(shù)或全部病人中發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素血癥(endotoxemia)；Reye綜合征的動(dòng)物模型涉及用內(nèi)毒素和阿斯匹林結(jié)合處理大鼠(Ki；patriok etal.，Metabolism，1989，3873-7)。B.醇類肝損傷除了與損傷精神相關(guān)的問題和與乙醇中毒相關(guān)的身體控制外，過多地消費(fèi)乙醇是人類肝損傷的明顯病因。內(nèi)毒素和TNF導(dǎo)致與乙醇接觸相聯(lián)系的肝疾病。(Nolan JP.肝病學(xué)198910887-91；Arai M.Nakano S.Okuno F.et al.肝病學(xué)1989；9846-851；McClain CJ and Cohen DA，肝病學(xué)1989；9349-351)。C.暴發(fā)性肝炎在暴發(fā)性肝炎的病因?qū)W和進(jìn)展中涉及腫瘤壞死因子，它能迅速導(dǎo)致肝衰竭和死亡(Aderka et al.，Med Hypotheses，1988 27193-6)。D.病毒性肝炎在病毒性肝炎期間內(nèi)毒素導(dǎo)致出現(xiàn)肝細(xì)胞損傷。病毒性肝炎減小了動(dòng)物模型中內(nèi)毒素的LD50，從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物排除內(nèi)源性內(nèi)毒素(經(jīng)結(jié)腸切除術(shù)或經(jīng)使用無菌嚙齒動(dòng)物)減小了由病毒性攻擊引起的肝損傷(Gut etal.，傳染病雜志，1984，149621)。在一些肝炎例子中，由T淋巴細(xì)胞或巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)肝病毒感染的免疫或發(fā)炎反應(yīng)導(dǎo)致肝損傷。在每一種情況下，本發(fā)明的化合物，組合物和方法對(duì)于治療與病毒性感染相關(guān)的肝損傷有用。實(shí)施例14證實(shí)了本發(fā)明的化合物和方法提高了病毒性肝炎動(dòng)物模型的存活率。
在人類病毒性肝炎中免疫病理學(xué)導(dǎo)致肝損傷。乙肝和丙肝病毒未必直接損傷細(xì)胞。大量證據(jù)表明對(duì)感染細(xì)胞的免疫反應(yīng)明顯導(dǎo)致肝損傷。激活的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞攻擊攜帶抗原的感染細(xì)胞，但也釋放細(xì)胞因子，如干擾素-γ，它接著補(bǔ)充并激活肝臟中的炎性白細(xì)胞并增強(qiáng)對(duì)象內(nèi)毒素的巨噬細(xì)胞激活劑的肝敏感性(Ando et al.，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志1781541-1554，1993)。在實(shí)施例10和12中，本發(fā)明的化合物，組合物和方法在模擬具有和不具有由內(nèi)毒素引起的二級(jí)惡化的T細(xì)胞介導(dǎo)的肝發(fā)炎損傷的關(guān)鍵特征的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭刑峁┯幸嫘Ч＿@些實(shí)施例支持了本發(fā)明的化合物，組合物和方法在病毒性肝炎以及在自身免疫肝炎和細(xì)胞介導(dǎo)的肝移植排斥中的應(yīng)用。E.寄生蟲感染在瘧疾感染期間發(fā)生的肝損傷和發(fā)病部分由TNF介導(dǎo)(Clark etal.，美國(guó)病理學(xué)雜志1987，129192-9)。F.在全部腸胃外營(yíng)養(yǎng)期間的肝損傷在接受全部腸胃外營(yíng)養(yǎng)(TPN)且無潛在的肝疾病的病人中常見肝并發(fā)癥；在TPN期間也發(fā)生先存的肝損傷的惡化。Pappo et al.(J.Surg.Res.，1991，51106-12)報(bào)道了來自腸革蘭氏-陰性細(xì)菌過度生長(zhǎng)的內(nèi)毒素(LPS)負(fù)責(zé)TPN相關(guān)的肝脂肪變性，腸去污和多粘菌素B的特異性抗-LPS活性減少TPN期間肝臟的脂肪浸潤(rùn)。結(jié)合并滅活LPS的多粘菌素B在人體有毒性，但可用于證實(shí)在TPN期間觀察到的肝病事實(shí)上部分由內(nèi)毒素或TNF介導(dǎo)。因此，在TPN溶液中包含的有效量的本發(fā)明的化合物在減小TPN-誘導(dǎo)的肝損傷以及治療潛在的炎性肝損傷中有用。本發(fā)明的化合物，特別是尿苷，胞苷，乳清酸或其水溶性鹽和酯既可包含在TPN制劑中，又可單獨(dú)用藥，但與TPN輸注并存。典型的TPN制劑含有以靜脈內(nèi)用藥可接受形式的補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)需要所需的基本營(yíng)養(yǎng)成份。因此，以部分或完全消化的形式，例如氨基酸或糖提供象蛋白質(zhì)或淀粉的大分子食譜成份。典型的TPN制劑不僅含有氨基酸和糖，而且還有其它所需營(yíng)養(yǎng)成份，如維生素，礦物質(zhì)和脂肪。與TPN制劑聯(lián)合或作為其組成成份使用的本發(fā)明的化合物的優(yōu)選劑量范圍是每天1到40克(常用范圍為每天2到20克)，既可作為大丸劑注射，又可作為持久性輸注。
在本發(fā)明的該實(shí)施方案的內(nèi)容中，為了獲得本發(fā)明的化合物，組合物和方法的益處，病人不必經(jīng)腸胃外途徑接受其全部營(yíng)養(yǎng)需要。然而，本發(fā)明的該實(shí)施方案在病人經(jīng)靜脈輸注接受50％或更多的其營(yíng)養(yǎng)需要時(shí)特別有優(yōu)勢(shì)。鉛中毒鉛中毒可顯著增加對(duì)內(nèi)毒素的敏感性。鉛對(duì)內(nèi)毒素毒性的影響涉及鉛誘導(dǎo)的對(duì)肝代謝的干擾(Taki et al.，Eur.Surg.Res.1985，17140-9)。H.部分肝切除部分肝切除后(例如，為了去掉癌組織)，肝功能衰竭引起的發(fā)病率和死亡率并不少見。在動(dòng)物中部分肝切除后進(jìn)行再生的肝組織對(duì)內(nèi)毒素和介質(zhì)的有害影響過敏(Shirai，et al.，Acta Pathol.Jpn.，1987，371127-1134)。I.麻醉后肝炎吸入諸如鹵烷的麻醉劑可誘導(dǎo)肝炎，特別是如果肝血流也受損時(shí)。在麻醉后肝炎的病因中涉及內(nèi)毒素(Lomanto et al.，Anesth.Analg.，1972，51264-270)；因此，本發(fā)明的化合物對(duì)于施用給進(jìn)行麻醉劑吸入的病人(預(yù)防上，治療上或兩者)以防止和治療肝炎時(shí)有用。外傷本身可導(dǎo)致麻醉后肝炎。外傷常進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)菌和內(nèi)毒素經(jīng)血流從消化道轉(zhuǎn)位到其它組織。外科手術(shù)病人是最易于內(nèi)毒素中毒(由于感染)的群體。因此，用嘧啶核苷酸前體治療手術(shù)病人(手術(shù)前，期間或后)明顯改善其對(duì)內(nèi)毒素中毒的抗性。J.膽汁郁積型肝炎由于膽汁導(dǎo)管阻塞或肝內(nèi)膽汁郁積引起的肝損傷部分由腸道產(chǎn)生的內(nèi)毒素引起(Shibayama Y.1989，J.Pathol.159335-9)。K.肝移植在接受肝移植的病人中，外科手術(shù)前和在肝缺失末期存在高水平的內(nèi)毒素或炎性介質(zhì)與移植失敗和高死亡率相關(guān)。其移植體開始無功能的病人典型地具有嚴(yán)重內(nèi)毒素血癥。內(nèi)毒素血癥是手術(shù)期間并發(fā)癥和移植失敗的原因而不是結(jié)果(Yokoyama et al，1989，Transplant Proc.213833-41)。在臨床情況下，動(dòng)物(如人類)在移植后經(jīng)腸道或腸胃外途徑接受本發(fā)明的化合物，其劑量范圍為每天大約1到大約40克，盡管典型地是2到20克，優(yōu)選分成1到大約4個(gè)劑量或以連續(xù)的或間歇性的腸道或腸胃外輸注用藥。本發(fā)明的化合物也任選在用藥前摻入腸道或腸胃外營(yíng)養(yǎng)制劑中。病人在肝臟移植7天后常接受靜脈內(nèi)等滲(5％)葡萄糖作為獲得更完全的腸胃外或腸道營(yíng)養(yǎng)的一個(gè)選擇。本發(fā)明的化合物，特別是尿苷或胞苷優(yōu)選在1到10％葡萄糖的水溶液中配制。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，每天施用1到40克，優(yōu)選2到20克嘧啶核苷酸前體。在肝臟疾病或在移植恢復(fù)中嘧啶核苷酸前體的第二個(gè)益處是增加外周葡萄糖的利用。
在移植進(jìn)受體前或期間，供體肝臟也可用含本發(fā)明的化合物，優(yōu)選尿苷，胞苷，乳清酸或其鹽或?；苌锏娜芤汗嘧ⅰ｀奏ず塑账崆绑w，特別是尿苷以10微摩爾到10毫摩爾的濃度范圍包含于肝灌注液(也含有合適的離子和其它代謝物，如葡萄糖)中。
在其它肝疾病中也涉及內(nèi)毒素和炎性介質(zhì)；上面討論的具體例子的多樣性用于說明本發(fā)明的化合物，組合物和方法在治療或防止大范圍的肝疾病中有用。
為了治療炎性肝炎，每天施用0.5到40克(優(yōu)選3到30克)嘧啶核苷酸前體，有優(yōu)勢(shì)的是分成一到大約4個(gè)劑量。治療方案的持續(xù)時(shí)間取決于臨床癥狀的改善；急性炎性肝疾病比慢性變性癥狀典型地需要更短的療程。其它疾病如在實(shí)施例2，4-6和9中所證實(shí)的，本發(fā)明的化合物保護(hù)非肝臟組織，例如肌肉，以在用內(nèi)毒素或真菌炎性試劑酵母聚糖處理的動(dòng)物中的血清肌酸磷酸激酶(CPK)水平表示。作為骨骼肌或心肌損傷的結(jié)果血清CPK活性升高。
惡病質(zhì)是一種體重?fù)p失，組織消耗和不能利用營(yíng)養(yǎng)的綜合癥，在具有癌癥的病人中它是一種常見的并發(fā)癥。惡病質(zhì)狀態(tài)的起動(dòng)和維持涉及TNF和其它炎性細(xì)胞因子；“惡液質(zhì)素”是TNF的異名。本發(fā)明的化合物，組合物和方法對(duì)治療惡病質(zhì)病人有用。
除了乙醇脫氫酶水平外，從循環(huán)清除乙醇是一種在很大程度上依賴于肝臟能量代謝和氧化還原平衡的過程。實(shí)施例13表明本發(fā)明的化合物改善了嚴(yán)重乙醇中毒的恢復(fù)。本發(fā)明的化合物和組合物在減輕因乙醇中毒的精神和身體損傷的嚴(yán)重性以及諸如肝損傷的慢性乙醇攝入的較長(zhǎng)期健康后果中有用。本發(fā)明的化合物(例如，三乙酰尿苷，尿苷或胞苷)在乙醇攝入前，期間或后以每天0.5至40克的劑量，優(yōu)選1到20克經(jīng)口服用藥。獸醫(yī)學(xué)應(yīng)用在馬和其它大型動(dòng)物中，有一種稱為蹄葉炎的常見綜合癥，它是內(nèi)毒素從消化道進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的結(jié)果(常在動(dòng)物過多地食用了碳水化合物豐富的食物后，改變了消化道中的細(xì)菌群)。由于它們減輕了由內(nèi)毒素引起的組織損傷，本發(fā)明的化合物，組合物和方法在治療或防止蹄葉炎和動(dòng)物中內(nèi)毒素中毒的其它影響時(shí)有用。發(fā)明的化合物和組合物的用藥和配制本發(fā)明的化合物和組合物根據(jù)所要治療的癥狀和病人的狀態(tài)經(jīng)口服、腸胃外注射、靜脈內(nèi)或其它方式用藥。
本發(fā)明的化合物和組合物可按需經(jīng)慢性，間歇性或急性用藥。在涉及內(nèi)毒素毒性或全身性發(fā)炎綜合癥的事件的情況下，可在該事件前，期間或之后施用該化合物和組合物。
藥物學(xué)活性化合物任選與包含賦形劑和利于活性化合物加工的輔助劑的合適的藥用上可接受的載體聯(lián)合。這些可作為片劑，糖衣藥丸，膠囊和栓劑用藥。該組合物可經(jīng)過例如口服，直腸，陰道或通過口腔袋釋放用藥，可以液體形式經(jīng)注射，口服或局部用藥來使用。該組合物可含有從大約0.1到99％，優(yōu)選從大約50到90％的活性化合物以及賦形劑。
為了經(jīng)注射或靜脈內(nèi)輸注進(jìn)行腸胃外用藥，將活性化合物懸浮于或溶解于諸如無菌水或鹽溶液的含水介質(zhì)中?？勺⑸涞娜芤夯驊乙喝芜x含有諸如聚氧乙烯山梨聚糖酯，山梨聚糖酯，聚氧乙烯醚的表面活性劑或象丙二醇或乙醇的溶解劑。該溶液典型地含有1至25％的活性化合物。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，含水介質(zhì)是在水或等滲鹽水中的1至10％葡萄糖的溶液。在一些情況下，同時(shí)靜脈施用葡萄糖和本發(fā)明的化合物，特別是尿苷具有優(yōu)勢(shì)。尿苷(和尿苷的酰基衍生物)增進(jìn)葡萄糖的外周葡萄糖利用，胰島素(對(duì)葡萄糖或其它碳水化合物或一些氨基酸作出反應(yīng)，一般從胰腺釋放)增強(qiáng)了細(xì)胞對(duì)核苷的吸收和利用。
為了與腸胃外營(yíng)養(yǎng)聯(lián)合使用，將本發(fā)明的化合物溶于或懸于腸胃外營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中，這可在該產(chǎn)品生產(chǎn)期間或在它們給病人施用前不久進(jìn)行。在腸胃外營(yíng)養(yǎng)制劑中調(diào)節(jié)嘧啶核苷酸前體的濃度使在腸胃外營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品輸注期間每天傳遞1到40克，一般2到20克。典型的腸胃外營(yíng)養(yǎng)配方含有和傳送適于靜脈內(nèi)用藥的溶于無菌組合物中的氨基酸，碳水化合物，脂肪，維生素和礦物質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)上足夠的部分。
合適的賦形劑包括填充劑，如糖類，例如乳糖，蔗糖，甘露糖或山梨醇，纖維素制品和/或磷酸鈣，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及結(jié)合劑，如淀粉膏，例如使用玉米淀粉，小麥淀粉，稻米淀粉或馬鈴薯淀粉，明膠，黃蓍膠，甲基纖維素，羥丙甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。
輔助劑包括流動(dòng)調(diào)節(jié)劑和潤(rùn)滑劑，例如，硅膠，滑石，硬脂酸或其鹽，如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇。用合適的包膜提供糖衣藥丸顆粒，如果需要，它對(duì)消化液有抗性。為達(dá)到該目的，使用濃縮的糖溶液，它任選含有阿拉伯膠，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化鈦，紫膠漆溶液和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為了生產(chǎn)對(duì)消化液有抗性的包膜，使用合適的纖維素制品溶液，如乙?；w維素鄰苯二甲酯或羥丙甲基纖維素鄰苯二甲酯。任選向片劑或糖衣藥丸包膜中加入染料或色素，例如用于鑒定或?yàn)榱髓b定不同的化合物劑量。
本發(fā)明的藥用制品以本身已知的方式生產(chǎn)，例如，借助于常規(guī)混合，顆粒形成，糖衣藥丸制造，溶解或凍干過程。因此，口服用途的藥用制品的獲得可經(jīng)過結(jié)合活性化合物與固體賦形劑，如果需要或必要，在加入合適的輔助劑后任選磨碎所得的混合物并加工顆?；旌衔镆垣@得片劑或糖衣藥丸顆粒。
對(duì)口服傳遞有用的其它藥用制品包括由明膠制成的適于推進(jìn)的膠囊以及由明膠和諸如甘油或山梨醇的增塑劑制成的軟封型膠囊。適于推進(jìn)的膠囊含有顆粒形式的活性化合物，它任選與諸如乳糖的填充劑，諸如淀粉的結(jié)合劑和/或諸如滑石或硬脂酸鎂的潤(rùn)滑劑和任選的穩(wěn)定劑混合。在軟膠囊中，活性化合物優(yōu)選溶于或懸于諸如脂肪油，液體石蠟，或聚乙二醇的合適液體中。另外，任選加入穩(wěn)定劑。其它口服用藥的制劑包括溶液，懸液或乳劑。特別是適于經(jīng)腸插管，例如鼻胃管用藥的液體形式具有優(yōu)勢(shì)，特別是對(duì)于臥床不起或無意識(shí)的病人而言。
經(jīng)直腸使用的藥用制品包括例如，由活性化合物與栓劑基質(zhì)聯(lián)合組成的栓劑。合適的栓劑基質(zhì)是，例如，天然或合成的甘油三酯，石蠟烴，聚乙二醇或高級(jí)烷醇。而且由活性化合物與基質(zhì)聯(lián)合組成的明膠直腸膠囊是有用的。例如，基質(zhì)材料包括液體甘油三酯，聚乙二醇或石蠟烴。
腸胃外用藥的合適制劑包括以水溶性形式，例如水溶性鹽的活性化合物的水溶液。而且，活性化合物的懸液以合適的油狀注射懸液用藥。合適的親脂溶劑或載體包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如，乙基油酸或甘油三酯。含水注射懸液任選包括增強(qiáng)該懸液粘度的物質(zhì)，例如，它包括羧甲基纖維素鈉，山梨醇和/或葡聚糖。懸液任選含穩(wěn)定劑。本發(fā)明化合物的合成經(jīng)過將嘧啶核苷或同類物與活化的羧酸反應(yīng)合成嘧啶核苷的?；苌??；罨聂人崾怯煤线m的試劑處理以使其羧酸碳比原始羧酸更易受親核攻擊的羧酸。用于合成本發(fā)明的化合物的有用的活化羧酸的例子是酰氯，酸酐，n-羥基琥珀酰亞胺酯或用BOP-DC活化的羧酸。羧酸也用偶聯(lián)劑象二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)連接到嘧啶核苷酸或類似物上。
在制備本發(fā)明的酰基化合物的過程中，當(dāng)所需酰基衍生物的酸源具有干擾?；磻?yīng)的基團(tuán)，例如羥基或氨基時(shí)，在制備酸酐前分別用諸如t-丁基二甲基甲硅烷基酯或t-BOC基團(tuán)的保護(hù)性基團(tuán)封閉這些基團(tuán)。例如，乳酸用t-丁基二甲基氯甲硅烷轉(zhuǎn)變成2-t-丁基二甲基硅丙酸，接著用含水堿水解所得的甲硅烷基酯。經(jīng)過將保護(hù)性酸與DCC反應(yīng)形成酐。對(duì)于氨基酸，使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備N-t-BOC衍生物，然后它與DCC反應(yīng)轉(zhuǎn)變成酸酐。對(duì)于含超過一個(gè)羧酸基團(tuán)的酸(例如琥珀酸，延胡索酸或己二酸)，所需的二羧酸的酸酐與嘧啶核苷在吡啶或吡啶加二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中反應(yīng)。
以標(biāo)準(zhǔn)方法，使用在合適溶劑中的DCC，特別是(i)二氯甲烷和(ii)二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺的混合物將氨基酸偶聯(lián)到胞苷環(huán)外氨基上或偶聯(lián)到嘧啶核苷或其類似物醛糖部分的羥基上。
在無水條件下在諸如吡啶或吡啶加二甲基甲酰胺的溶劑中將核苷酸與合適的氯甲酸羰基酯(Carbylchloroformate)反應(yīng)制備非甲基化的嘧啶核苷的羧氧羰基衍生物。在真空中去掉溶劑并經(jīng)柱色譜純化殘余物。
可使用其它的合成方法制備本發(fā)明的化合物，這對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。
下面的實(shí)施例是說明性的，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的方法和組合物的限制。對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的在臨床治療中正常遇到的各種條件和參數(shù)的其它合適的修飾和改動(dòng)也在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)。
實(shí)施例實(shí)施例1三乙酰尿苷和尿苷提高用殺死的大腸桿菌處理的小鼠的存活率目的膿毒綜合征可由革蘭氏陰性細(xì)菌起動(dòng)，即使細(xì)菌不是活的，因?yàn)槭滓挠|發(fā)物是內(nèi)毒素，即一種細(xì)菌細(xì)胞壁的成份。本實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定口服三乙酰尿苷和腸胃外用尿苷對(duì)用致死劑量的殺死的大腸桿菌細(xì)菌處理的小鼠存活率的影響。方法18只雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各6只動(dòng)物的組。全部小鼠接受經(jīng)超聲處理懸浮于0.2ml鹽水中的500微克大腸桿菌的丙酮粉末(血清型0111B4)。在施用大腸桿菌前2小時(shí)，一組小鼠經(jīng)i.p.注射接受尿苷(2000mg/kg溶于0.2ml鹽水)。另一組小鼠經(jīng)口腔插管接受三乙酰尿苷(6000mg/kg溶于含2.5％Tween 80的1∶1玉米油/水載體中)。監(jiān)測(cè)存活率一周。
A.n＝6大腸桿菌(對(duì)照)B.n＝6大腸桿菌(對(duì)照)+Urdi.p.
C.n＝6大腸桿菌(對(duì)照)+TAUp.o.結(jié)果對(duì)照組的動(dòng)物似乎休克且在施用大腸桿菌粉末后18小時(shí)降溫。處理組的動(dòng)物活躍且保持體溫，盡管在觀察期間的前48小時(shí)其覆蓋物單薄。存活48小時(shí)的動(dòng)物完全恢復(fù)。所有僅用大腸桿菌處理的小鼠在48小時(shí)內(nèi)死亡。所有用尿苷或三乙酰尿苷處理的小鼠在施用殺死作用的大腸桿菌后存活。實(shí)施例2尿苷在保護(hù)組織抵抗內(nèi)毒素?fù)p傷中的劑量反應(yīng)研究目的本實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定尿苷在防止內(nèi)毒素(LPS)引起的炎性組織損傷中的劑量反應(yīng)特征。方法雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各6只動(dòng)物的6組。一組動(dòng)物未作處理以提供組織損傷血清化學(xué)指數(shù)的基值。剩余的5組小鼠經(jīng)i.p.注射接受溶于0.2ml鹽水中的100微克鼠傷寒沙門氏菌(SalmonellaTyphimurium)內(nèi)毒素。在內(nèi)毒素用藥前2小時(shí)，5組小鼠分別以0，500，1000，2000和4000mg/kgi.p.(溶于0.2ml鹽水)的劑量接受尿苷。內(nèi)毒素用藥18小時(shí)后，收集血樣用于測(cè)定組織損傷指標(biāo)的血清化學(xué)值。結(jié)果尿苷對(duì)施用內(nèi)毒素的損傷產(chǎn)生劑量依賴性組織保護(hù)。ALT，AST，和SDH是肝損傷的指標(biāo)；CPK是肌肉損傷的指標(biāo)；LDH從肝臟和肌肉中釋放。在本實(shí)驗(yàn)的小鼠中最有效的尿苷劑量是2000mg/kg。表1尿苷減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損傷ALTASTLDH CPK SDH基礎(chǔ)(無LPS)198±124137±26 708±177906±211 49±2對(duì)照(LPS) 3786±482 4176±459 8406±850 11628±2398 1170±157尿苷5002568±678 3090±871 5988±1225 8832±1089 834±192尿苷1000 1338±401*1206±314*3101±860*4431±1529*404±95*尿苷2000 605±236*620±174*1990±642*4531±2139*125±45*尿苷4000 1120±970*744±457*344±2378*8680±6746*135±75**＝與對(duì)照(LPSi.p.)的差異，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST＝天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶LDH＝乳酸脫氫酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脫氫酶實(shí)施例3口服三乙酰尿苷提高用致死劑量的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素處理的小鼠的存活率目的由革蘭氏陰性細(xì)菌引起的膿毒綜合征主要通過內(nèi)毒素，細(xì)菌細(xì)胞壁的一種脂多糖成份介導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定口服用藥的尿苷前藥(三乙酰尿苷；TAU)對(duì)用致死劑量的純化的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(LPS)處理的小鼠存活率的影響。方法20只雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各10只動(dòng)物的2組。所有小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)注射接受溶于0.2ml鹽水中的100微克鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素。一組小鼠經(jīng)口腔插管接受三乙酰尿苷(以6000mg/kg溶于含2.5％Tween 80的1∶1玉米油/水的載體中)。監(jiān)測(cè)存活率一周。結(jié)果僅接受內(nèi)毒素的10只動(dòng)物在48小時(shí)內(nèi)全部死亡。接受口服TAU的10只小鼠中9只在7天觀察期存活并似乎完全恢復(fù)。實(shí)施例4口服三乙酰尿苷減輕由內(nèi)毒素引起的組織損傷目的細(xì)菌內(nèi)毒素引起肝臟和其它器官的損傷，這可經(jīng)過測(cè)定酶和組織完整性和功能的其它標(biāo)記物的血清水平進(jìn)行評(píng)價(jià)和定量。本實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定口服施用三乙酰尿苷(TAU)在減輕由內(nèi)毒素引起的組織損傷中的劑量反應(yīng)特征。方法雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各5只動(dòng)物的小組。一組動(dòng)物未作處理以提供誘導(dǎo)組織損傷的血清化學(xué)指數(shù)的基值。在其它4組小鼠中經(jīng)i.p.注射接受溶于0.2ml鹽水中的100微克鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素。3組內(nèi)毒素處理的小鼠在內(nèi)毒素處理前2小時(shí)經(jīng)口腔插管接受在0.4ml體積中的2000，4000，和6000mg/kg的TAU。TAU在1％羧甲基纖維素水溶液中配成懸液。剩余組(對(duì)照)經(jīng)口腔插管接受羧甲基纖維素載體。結(jié)果口服TAU用藥減小了組織損傷的血清化學(xué)指示劑水平。防止內(nèi)毒素毒性誘導(dǎo)的器官損傷的有益效應(yīng)是劑量依賴型的。表2TAU減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損傷ALT AST LDH SDH基值(無LPS) 130±46 148±32 563±132 41±5對(duì)照(LPS) 3679±703 4798±927 6998±10641128±174TAU 20002632±915 3151±1085 5419±1561793±294TAU 40001463±382*1940±456*3878±672*345±106*TAU 6000365±91*403±61*1221±181*104±18**＝與對(duì)照不同(LPSi.p.+載體p.o.)，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST＝天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶LDH＝乳酸脫氫酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脫氫酶實(shí)施例5尿苷減輕用角叉藻聚糖作為內(nèi)毒素毒性增效劑處理的小鼠中的組織損傷角叉藻聚糖是來自海藻的調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活性的多糖，它是對(duì)內(nèi)毒素的全身性發(fā)炎反應(yīng)的主要細(xì)胞介質(zhì)。巨噬細(xì)胞釋放炎性肽和其它化合物與內(nèi)毒素發(fā)生反應(yīng)。角叉藻聚糖預(yù)處理致敏巨噬細(xì)胞使誘發(fā)嚴(yán)重全身性發(fā)炎反應(yīng)所需的內(nèi)毒素比正常少得多。而且在角叉藻聚糖加內(nèi)毒素的結(jié)合的毒性效應(yīng)中比僅用內(nèi)毒素相比涉及某種不同譜系的炎性介質(zhì)(Franks et al.，感染和免疫，592609-2614)。本實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定尿苷對(duì)角叉藻聚糖和內(nèi)毒素結(jié)合誘導(dǎo)的組織損傷的影響。方法雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各6只動(dòng)物的5組。一組動(dòng)物未作處理以提供組織損傷的血清化學(xué)指數(shù)基礎(chǔ)值。在其它4組中小鼠經(jīng)i.p.注射接受溶于0.2ml鹽水中的2mgλ角叉藻聚糖；其中3組在1小時(shí)后也以i.p.注射接受溶于0.2ml鹽水中的2微克鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素。其中接受過角叉藻聚糖和內(nèi)毒素的組中的2組還接受尿苷(2000mg/kgi.p.，溶于0.2ml鹽水中)；一組在施用內(nèi)毒素后30分鐘用尿苷處理，另一組在內(nèi)毒素用藥前24，6和2小時(shí)以2000mg/kg/劑i.p.接受3次尿苷預(yù)處理。施用內(nèi)毒素18小時(shí)后，收集血樣以測(cè)定組織損傷指標(biāo)的血清化學(xué)值。結(jié)果角叉藻聚糖與低劑量的內(nèi)毒素(2mg)聯(lián)合經(jīng)血清化學(xué)指數(shù)評(píng)價(jià)時(shí)導(dǎo)致明顯的組織損傷。在施用內(nèi)毒素前或后用尿苷處理導(dǎo)致由角叉藻聚糖-內(nèi)毒素聯(lián)合引起的組織損傷明顯減輕。數(shù)據(jù)如下所示。表3尿苷減輕角叉藻聚糖致敏的小鼠中內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損傷ALTASTLDHCPK SDH基礎(chǔ)值 223±77141±35700±145 747±278 33±1(無LPS)對(duì)照(LPS)1937±235 2072±149 7360±35411612±1513 107±17尿苷 817±202*989±139*4385±454*5485±1638*80±12*尿苷 770±141*891±79*4416±283*5033±565*117±9(后處理)*＝與對(duì)照不同，P＜.05ALT＝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST＝天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶LDH＝乳酸脫氫酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脫氫酶實(shí)施例6尿苷提高經(jīng)酵母聚糖處理的小鼠的存活率目的酵母聚糖是一種酵母成份，主要是多糖，它誘導(dǎo)全身性發(fā)炎和補(bǔ)體激活。在一般性真菌感染中(包括但不限于酵母感染)，該多糖參與膿毒反應(yīng)的誘導(dǎo)。給嚙齒類施用酵母聚糖據(jù)認(rèn)為是多器官故障綜合癥的合適模型(Goris et al.(1986)Arch.Surg.121897-901；Steinberg et al.(1989)Arch.Surg.1241390-1395)。在最小致死劑量的酵母聚糖時(shí)的死亡率部分由于消化道損傷導(dǎo)致細(xì)菌和細(xì)菌毒素從消化道進(jìn)入血流中(Deitch et al.，(1992)J.Trauma 32141-147)。方法雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各5只動(dòng)物的小組1.酵母聚糖15mg2.酵母聚糖15mg+尿苷3.酵母聚糖20mg4.酵母聚糖20mg+尿苷5.基礎(chǔ)酵母聚糖A以50mg/ml的濃度懸浮于礦物油中并經(jīng)腹膜內(nèi)注射用藥。在施用酵母聚糖前2小時(shí)經(jīng)腹膜內(nèi)注射以0.2ml的體積施用尿苷(2000mg/kg)。
施用酵母聚糖18小時(shí)后，從2組接受20mg酵母聚糖的小鼠和從一基礎(chǔ)(未處理)組收集血樣用于隨后測(cè)量組織損傷的血清化學(xué)指數(shù)。結(jié)果A.在48小時(shí)的存活率組別 存活率酵母聚糖15mg/kg 0/5酵母聚糖15mg/kg+尿苷5/5酵母聚糖20mg/kg 0/5酵母聚糖20mg/kg+尿苷3/5B.在14天時(shí)的存活率(完全恢復(fù))酵母聚糖15mg/kg 0/5酵母聚糖15mg/kg+尿苷4/5尿苷明顯提高用酵母聚糖處理的小鼠的存活時(shí)間和長(zhǎng)期幸存者的發(fā)生率。C.組織損傷的血清化學(xué)指數(shù)表4尿苷減輕酵母聚糖誘導(dǎo)的組織損傷ALT AST LDH CPKSDH基礎(chǔ)值50±2293±41 899±198 532±73152±25酵母聚糖 397±140 392±971974±392 2107±1172 81±15酵母聚糖 120±126 273±131 1419±244 754±37058±22+尿苷ALT＝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST＝天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶LDH＝乳酸脫氫酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脫氫酶實(shí)施例7尿苷與精氨酸對(duì)內(nèi)毒素處理的小鼠存活率的影響比較目的據(jù)報(bào)道氨基酸精氨酸在膿毒綜合征中有有益效應(yīng)(Leon et al.，J.Parenteral and Enteral Nutrition，1991，15503-508)。本實(shí)驗(yàn)的目的是比較尿苷與精氨酸(一種在膿毒綜合征中支持肝功能并臨床用于該目的的試劑)的效應(yīng)。方法重25克的雌性Balb/C小鼠分成各5只或6只動(dòng)物的5組。在現(xiàn)存的5組中的小鼠經(jīng)i.p.注射接受溶于0.2ml鹽水中的125微克鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(LPS)。在施用內(nèi)毒素前2小時(shí)，5組小鼠接受的注射液為1)鹽水(對(duì)照)2)尿苷2000mg/kg3)精氨酸25mg/kg4)精氨酸250mg/kg5)精氨酸1250mg/kg所有藥物在0.2ml鹽水中經(jīng)i.p.用藥。在16，20和24小時(shí)測(cè)量各組中存活小鼠數(shù)。結(jié)果用LPS處理16小時(shí)后僅一只對(duì)照動(dòng)物存活，與此相反，大多數(shù)用尿苷或精氨酸處理的動(dòng)物在該時(shí)間點(diǎn)存活。然而，到施用內(nèi)毒素后24小時(shí)為止，僅在用尿苷處理的組中有存活動(dòng)物。所有3種劑量的精氨酸確實(shí)提高存活時(shí)間(但不產(chǎn)生長(zhǎng)期幸存者)，且最低劑量(25mg/kg)比最高劑量(1250mg/kg)更有效。在促進(jìn)內(nèi)毒素處理的動(dòng)物的存活率中尿苷明顯比精氨酸更有效。表5尿苷與精氨酸對(duì)施用LPS后的存活率的影響施用LPS后的時(shí)間(小時(shí))組別 16 20 241.對(duì)照 1/60/60/62.尿苷 5/55/55/53.Arg 25 5/53/50/54.Arg 250 4/52/50/55.Arg 1250 4/61/60/6實(shí)施例8乳精酸提高用鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素處理的小鼠的存活率目的由革蘭氏陰性細(xì)菌引起的膿毒綜合征主要通過內(nèi)毒素(細(xì)菌細(xì)胞壁上的一種脂多糖成份)介導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定乳清酸對(duì)用致死劑量的純化的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素處理的小鼠存活率的影響。方法20只雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各10只動(dòng)物的2組。一組小鼠接受4次賴氨酸乳清酸處理(200mg/kg/劑；在2個(gè)連續(xù)日的每個(gè)9AM和2PM用藥)。賴氨酸乳清酸是乳清酸的一種水溶性鹽；賴氨酸單獨(dú)不提高內(nèi)毒素處理的小鼠的存活率。對(duì)照動(dòng)物在相同的處理程序中接受0.2ml無菌水。所有小鼠在最后一劑賴氨酸乳清酸后立即經(jīng)腹膜內(nèi)注射接受溶于0.2ml鹽水中的100微克鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(LPS)。監(jiān)測(cè)存活率一周。結(jié)果在對(duì)照組中的全部小鼠在48小時(shí)死亡。用賴氨酸乳清酸處理的10只小鼠中9只在全部72小時(shí)的觀察期內(nèi)存活且在施用LPS一周后仍存活而且似乎完全恢復(fù)。表6乳清酸提高了內(nèi)毒素處理的小鼠的存活率內(nèi)毒素處理后的存活率時(shí)間(LPS后的小時(shí))24 26 28 324872對(duì)照6/10 4/10 3/10 2/10 0/10 0/10LOR10/10 10/10 10/10 10/10 9/10 9/10實(shí)施例9乳清酸保護(hù)組織抵抗內(nèi)毒素?fù)p傷目的本實(shí)驗(yàn)的目的是證實(shí)乳清酸在防止由內(nèi)毒素引起的炎性組織損傷中的保護(hù)效應(yīng)。方法將雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各6只動(dòng)物的3組。一組動(dòng)物未作處理以提供組織損傷的血清化學(xué)指數(shù)的基礎(chǔ)值。在剩余2組中的小鼠經(jīng)i.p.注射接受溶于0.2ml鹽水中的100微克鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(LPS)。施用內(nèi)毒素前2小時(shí)，一組中的小鼠以相當(dāng)于100mg/kg自由乳清酸的劑量接受賴氨酸乳清酸。施用內(nèi)毒素后18小時(shí)，收集血液樣品以測(cè)定組織損傷指標(biāo)的血清化學(xué)濃度。結(jié)果乳清酸保護(hù)組織抵抗施用內(nèi)毒素引起的損傷。表7乳清酸減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損傷ALTAST LDHCPK SDH基礎(chǔ)值 132±14165±21 681±5521258±233 42±1(無LPS)對(duì)照(LPS) 2827±413 2860±5066833±1167 6820±365 680±142乳清酸鹽 252±99*415±77*1641±274*1040±283*89±7*+TPS*＝與對(duì)照不同(LPSi.p.)，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST＝天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶LDH＝乳酸脫氫酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脫氫酶實(shí)施例10尿苷和三乙酰尿苷減輕由伴刀豆球蛋白A引起的肝損傷目的白細(xì)胞介素-2(IL-2)在臨床上用于治療一些不同種類的癌癥。與IL-2反應(yīng)的肝毒性在接受治療劑量的IL-2用于癌癥治療的病人中并不少見(Viens et al.，J.Immunother.1992 11218-24)。在由給小鼠施用伴刀豆球蛋白A(ConA)誘導(dǎo)的自身免疫肝炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，?jù)報(bào)道肝損傷與內(nèi)源性IL-2生產(chǎn)提高相關(guān)(Tiegs et al.，J.Clin.Invest.199290196-203)。本實(shí)驗(yàn)的目的是證實(shí)本發(fā)明的化合物和方法在減輕由施用Con A起動(dòng)的肝損傷中的用途。方法雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各5只動(dòng)物的4組。一組動(dòng)物未作處理以提供組織損傷血清化學(xué)指數(shù)的基礎(chǔ)值。在余下的三組小鼠中經(jīng)靜脈內(nèi)(尾靜脈)注射接受在0.2ml體積鹽水中的10mg/kg伴刀豆球蛋白A。接受Con A前2小時(shí)，3組小鼠中的一組接受尿苷(2000mg/kgi.p.在0.2ml鹽水中)，另一組接受三乙酰尿苷(口服6000mg/kg，溶于0.6ml含2.5％Tween80的1∶1玉米油/水乳劑中)；剩下的Con A-處理組(對(duì)照)在用Con A前2小時(shí)經(jīng)i.p.接受0.2ml鹽水。施用Con A20小時(shí)后，從所有小鼠中收集血樣用于測(cè)定組織損傷或代謝障礙各種指數(shù)的血清水平。結(jié)果以ALT，AST和SDH酶血清水平分析時(shí)，施用ConA導(dǎo)致明顯損傷肝臟。ConA不能明顯提高肌苷磷酸激酶(CK)的水平，該酶主要在肌肉中發(fā)現(xiàn)；在該模型中由Con A引起的組織損傷比由內(nèi)毒素引起的損傷更特異性地定位于肝臟。尿苷和TAU都減輕由Con A用藥產(chǎn)生的肝損傷，如在下面表8中所示。表8尿苷和三乙酰尿苷減輕由伴刀豆球蛋白A引起的肝臟損傷ALT AST LDH CPK SDH基礎(chǔ) 144±18217±27790±90 2392±370 51±2(無ConA)Con A2652±847 2765±1030 4335±1358 2572±486 1114±318Con A289±115*394±114*973±202*1996±317 163±68*+尿苷Con A575±286*613±221 1380±2701951±435 283±143*+TAU*＝與對(duì)照不同(LPSi.p.)，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST＝天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶LDH＝乳酸脫氫酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脫氫酶用于本實(shí)驗(yàn)的ConA模型中的肝損傷與IL-2水平升高相關(guān)，并通過T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)。因此，本發(fā)明的化合物和方法在減輕由治療性施用IL-2產(chǎn)生的副作用中有用，且本發(fā)明的方法在治療自身免疫性肝炎中有用。實(shí)施例11尿苷減輕血凝結(jié)病變誘導(dǎo)的膿毒癥目的散布型血管內(nèi)凝結(jié)(DIC)是膿毒癥的嚴(yán)重后果，其中激活血凝結(jié)和血纖維蛋白溶解，使血液凝結(jié)因子迅速消耗。DIC可導(dǎo)致出血或血栓形成。肝臟是合成凝血因子和清除循環(huán)血栓小集體的主要部位。本實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定嘧啶核苷酸前體對(duì)膿毒誘導(dǎo)的凝血疾病的影響。部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間用作血液凝結(jié)系統(tǒng)狀態(tài)的指標(biāo)。方法30只雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各10只動(dòng)物的3組。一組小鼠未作處理，用于測(cè)定部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間的基礎(chǔ)值。2組小鼠接受30mg/kg殺死的大腸桿菌(菌株0111B4)；在施用大腸桿菌前2小時(shí)，一組經(jīng)腹膜內(nèi)注射接受尿苷(2000mg/kg)。在大腸桿菌用藥20小時(shí)后，從所有30只小鼠中收集血漿樣品以測(cè)定部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間(PTT)。從眼眶后血管叢收集0.27ml血放入含0.03ml3.5％檸檬酸鈉pH4的試管中。離心分離血漿，將100微升血漿轉(zhuǎn)移到干凈的1.5mlEppendorf管中以便用商用試劑盒測(cè)定PTT。結(jié)果施用殺死的大腸桿菌導(dǎo)致正常部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間延長(zhǎng)。尿苷減輕膿毒癥誘導(dǎo)的凝血時(shí)間改變，如在表9中所示。表9尿苷減輕膿毒誘導(dǎo)的部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間的改變部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間組別 PTT(秒)基礎(chǔ)值(正常) 32.3±1.3大腸桿菌 69.8±5.4大腸桿菌+尿苷51.2±2.1**＝與對(duì)照(僅用大腸桿菌)值不同，P＜.05實(shí)施例12由T細(xì)胞和內(nèi)毒素引起組合肝損傷病毒性肝炎以及自身免疫肝炎的一些重要形式受攻擊攜帶合適病毒或其它抗原的肝細(xì)胞的細(xì)胞毒性T細(xì)胞的起動(dòng)。由于內(nèi)毒素參與由許多象四氯化碳的其它試劑，膽堿缺陷，乙醇或膽汁郁積起動(dòng)的肝損傷，為了確定由T細(xì)胞導(dǎo)致的肝損傷是否誘導(dǎo)對(duì)內(nèi)毒素肝過敏而進(jìn)行了一些研究。在該實(shí)驗(yàn)后，研究了TAU對(duì)由T淋巴細(xì)胞和內(nèi)毒素引起的組合肝損傷的影響。實(shí)施例12A伴刀豆球蛋白A增效內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損傷8周齡的雌性Balb/C小鼠組(n＝6)接受伴刀豆球蛋白A(2.5mg/kgi.v.)，內(nèi)毒素(Salmonella Typhimurium，0.5mg/kg)或ConA與內(nèi)毒素的聯(lián)合。在接受內(nèi)毒素前24小時(shí)施用ConA。在注射內(nèi)毒素后18小時(shí)取血樣(或在未接受內(nèi)毒素的小鼠組中接受其載體)。小鼠“基礎(chǔ)”組僅接受載體(鹽水)代替Con A或內(nèi)毒素。表I伴刀豆球蛋白A起動(dòng)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損傷ALT ASTLDHCPK SDH基礎(chǔ)值87±15110±9 656±41413±87 39±2ConA 117±19170±16915±46419±13242±42.5mg/kgLPS 119±23256±22881±10426±82 41±30.5mg/kgConA 1130±494 2119±910 4370±1303 1525±450 471±267+LPSALT＝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST＝天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶LDH＝乳酸脫氫酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脫氫酶以用于本實(shí)驗(yàn)的劑量的單獨(dú)內(nèi)毒素或Con A經(jīng)血清酶水平(ALT，AST，LDH和SDH是肝損傷的標(biāo)記；CPK是肌肉損傷的指標(biāo))測(cè)定對(duì)肝和肌肉產(chǎn)生最小損傷。然而，在用Con A和內(nèi)毒素聯(lián)合處理的小鼠中，觀察到明顯更大的損傷。據(jù)信在該模型中Con A的毒性與T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的肝損傷特別相關(guān)(Tregs et al.J.Clin.Invest.90196-203，1992)。因此，這些結(jié)果支持了腸道產(chǎn)生的內(nèi)毒素參與細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(即，病毒和自身免疫肝炎)引起的肝損傷(即，病毒性和自身免疫肝炎)這一觀點(diǎn)，正如對(duì)由包括四氯化碳，膽堿缺陷，D-半乳糖胺和病毒感染的其它主要攻擊起動(dòng)的肝損傷所證實(shí)的。實(shí)施例12BTAU減輕由CTL和內(nèi)毒素引起的結(jié)合肝損傷經(jīng)過靜脈由施用伴刀豆球蛋白A(Con A)起動(dòng)的實(shí)驗(yàn)性肝炎經(jīng)過激活細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)。在該模型中的肝損傷導(dǎo)致對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素毒性效應(yīng)的靈敏性的顯著增加。順序施用Con A和內(nèi)毒素導(dǎo)致比累加更大的肝損傷(見實(shí)施例12A)。在病毒和自身免疫肝炎中的肝損傷涉及相似的機(jī)制，具有由T細(xì)胞起動(dòng)的和由腸道產(chǎn)生的內(nèi)毒素和其它發(fā)炎過程加劇的損傷。
TAU保護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝臟抵抗由內(nèi)毒素或ConA起動(dòng)的損傷。在本實(shí)驗(yàn)中，試驗(yàn)了TAU在受到順序施用ConA和內(nèi)毒素引起的結(jié)合肝損傷的小鼠中的肝保護(hù)效應(yīng)。方法雌性Balb/C小鼠(8周齡)分成各7只動(dòng)物的3組。一組動(dòng)物未受處理以提供組織損傷血清化學(xué)指數(shù)的基礎(chǔ)值。剩余的2組小鼠經(jīng)靜脈內(nèi)(尾靜脈)注射接受溶于0.2ml鹽水中的2mg/kg伴刀豆球蛋白A，24小時(shí)后接受鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(10微克i.p.)。其中一組小鼠在施用Con A前2小時(shí)和在施用內(nèi)毒素前2小時(shí)口服接受溶于0.6ml0.5％甲基纖維素中的TAU(6000mg/kg)；剩余的ConA/內(nèi)毒素處理的組(對(duì)照)僅接受載體(甲基纖維素)。施用內(nèi)毒素后18小時(shí)，從所有小鼠收集血樣品以測(cè)定組織損傷或代謝功能障礙各種指數(shù)的血清水平。結(jié)果經(jīng)肝損傷的血清化學(xué)指數(shù)分析順序施用Con A和內(nèi)毒素可導(dǎo)致明顯的肝損傷?？诜┯肨AU顯著減輕該聯(lián)合的肝損傷。口服TAU減輕由伴刀豆球蛋白A+LPS引起的肝損傷ALT ASTLDH CPKSDH基礎(chǔ) 118±33 162±14522±80 1521±235 56±3Con A/LPS2295±309 3408±389 5696±560 4684±1569 700±69Con A/LPS285±67*451±87*1341±236*2098±465*122±19*+TAU*＝與對(duì)照不同(LPSi.p.)，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST＝天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶LDH＝乳酸脫氫酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脫氫酶實(shí)施例13口服三乙酰尿苷促進(jìn)乙醇中毒的恢復(fù)乙醇中毒導(dǎo)致中央神經(jīng)系統(tǒng)活性受抑制?；謴?fù)依賴于從系統(tǒng)中清除乙醇。從循環(huán)中清除乙醇主要發(fā)生在肝臟，受乙醇脫氫酶和氧化還原平衡及肝代謝狀態(tài)的調(diào)節(jié)。
在這些實(shí)驗(yàn)中，用三乙酰尿苷(TAU)處理乙醇中毒的小鼠以確定通過給肝臟和其它組織提供尿苷的代謝支持是否影響乙醇中毒的恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)1禁食小鼠方法平均重22克的雌性Balb/C小鼠禁食24小時(shí)。9只小鼠接受口服TAU2000mg/kg p.o.，8只接受載體(0.75％羥丙甲基纖維素水溶液)。
1小時(shí)后，所有動(dòng)物接受5.7ml/kg乙醇(0.5ml 25％的水溶液p.o.)。
接受乙醇1小時(shí)后，小鼠接受另一劑量的TAU或載體。此時(shí)全部小鼠基本上昏迷。
從施用乙醇3小時(shí)后開始，以小時(shí)為間隔監(jiān)測(cè)行為。行為測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)如下乙醇中毒后的行為恢復(fù)深度昏迷對(duì)刺激無反應(yīng)。呼吸緩慢。平臥小鼠平躺但不活動(dòng)。眼瞼對(duì)用探針接觸發(fā)生反應(yīng)。呼吸迅速。糾正反射當(dāng)仰面放置時(shí)，動(dòng)物嘗試在5秒內(nèi)翻正。該類別包括全部“活動(dòng)型”動(dòng)物和一些“平臥”型?；顒?dòng)型動(dòng)物能行走。TAU加速禁食小鼠乙醇中毒的恢復(fù)。
對(duì)照n＝8只小鼠時(shí)間死亡 深度昏迷平臥 糾正反射 可動(dòng)型3小時(shí)1 8 0 0 04小時(shí)1 5 3 0 05小時(shí)2 3 3 3 06小時(shí)2 2 2 4 27小時(shí)2 1 1 4 48小時(shí)2 1 1 5 4TAUn＝9小鼠時(shí)間死亡 深度昏迷平臥 糾正反射 可動(dòng)型3小時(shí)0 5 4 404小時(shí)0 4 5 405小時(shí)0 2 7 606小時(shí)0 1 1 777小時(shí)0 1 0 888小時(shí)0 0 1 88小鼠＝雌性Balb/C，22克，禁食24小時(shí)乙醇劑量＝5.7ml/kgp.o.在時(shí)間＝0小時(shí)(0.7ml 25％乙醇)在施用乙醇前1小時(shí)和后1小時(shí)施用TAU(2g/kg)或載體(對(duì)照組)。實(shí)驗(yàn)2未禁食的小鼠平均重22克的雌性Balb/C小鼠在實(shí)驗(yàn)時(shí)前可自由獲取食物。10只小鼠經(jīng)p.o.接受口服TAU2000mg/kg，10只接受載體(0.75％HPMC)。
1小時(shí)后，所有動(dòng)物接受8ml/kg乙醇(0.7ml25％的水溶液p.o)。
施用乙醇1小時(shí)后，小鼠接受另一劑量的TAU或載體。
在乙醇用藥后2，3，4和6小時(shí)的間隔時(shí)監(jiān)測(cè)行為。行為分析的規(guī)則與上面禁食小鼠的試驗(yàn)相同。TAU加速非禁食小鼠中乙醇中毒的恢復(fù)對(duì)照，n＝10小鼠時(shí)間死亡 深度昏迷平臥 糾正反射 可動(dòng)型2小時(shí) 09 1 0 03小時(shí) 07 3 2 04小時(shí) 11 6 5 26小時(shí) 10 1 8 8TAUn＝10小鼠時(shí)間死亡 深度昏迷平臥 糾正反射 可動(dòng)型2小時(shí)0 5 5 203小時(shí)0 1 5 534小時(shí)0 0 3 876小時(shí)0 0 0 10 10小鼠＝雌性Balb/C，22克，隨時(shí)取食乙醇劑量＝8ml/kgP.o.，時(shí)間＝0小時(shí)(0.7ml 25％乙醇)。施用乙醇前1小時(shí)和后1小時(shí)施用TAU(2g/kg)或載體(對(duì)照組)。
TAU清楚地促進(jìn)受到嚴(yán)重乙醇中毒的小鼠中的行為恢復(fù)。未禁食的小鼠比禁食的動(dòng)物接受更高劑量的乙醇(8ml/kg對(duì)5.7ml/kg)，但恢復(fù)更快。這一觀察結(jié)果強(qiáng)調(diào)了在乙醇中毒恢復(fù)中能量代謝的重要性。TAU加速了在取食和禁食動(dòng)物中乙醇中毒的恢復(fù)。實(shí)施例14在小鼠病毒性肝炎中三乙酰尿苷減小死亡率蛙病毒3型(FV3)在小鼠中迅速誘導(dǎo)致死性肝炎，它受內(nèi)源性內(nèi)毒素引起的二級(jí)損傷的部分介導(dǎo)(Gut et al.，J.Infect.Disease.，1984，149621)。
在該模型中試驗(yàn)三乙酰尿苷(TAU)以證實(shí)該試劑和本發(fā)明的其它化合物在病毒性肝炎中具有有用的治療效應(yīng)。方法凍干的FV3在磷酸鹽緩沖鹽水中重新配制成每ml1×108噬菌斑形成單位(PFU)的密度。
重25克的雌性Balb/C小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)或靜脈(尾靜脈)注射接受相應(yīng)于大約LD50劑量的FV3病毒。在施用FV3前1小時(shí)或在次日下午和早晨經(jīng)口服施用TAU(3000mg/kg)或載體(0.75羥丙甲基纖維素)。觀察動(dòng)物3天；未活過該觀察期的動(dòng)物全部在病毒用藥后大約24-30小時(shí)死亡。腹膜內(nèi)施用FV3病毒FV3 4×107PFU/小鼠i.p.
存活率對(duì)照 6/10TAU 10/10靜脈內(nèi)施用FV3病毒FV32×107PFU/小鼠i.v.
存活率對(duì)照5/10TAU 10/10上文試圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說明而非限制。許多未偏離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的改變和修飾可以是有效的。
權(quán)利要求
1.一種用于治療或防止全身性發(fā)炎反應(yīng)綜合征引起的組織損傷的方法，它包括給動(dòng)物施用治療上有效量的嘧啶核苷酸前體。
2.一種用于治療或防止膿毒癥的方法，它包括給動(dòng)物施用治療上有效量的嘧啶核苷酸前體。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷或乳清酸的酰基衍生物或其藥用上可接受的鹽。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所說的尿苷?；苌锸侨阴Ｄ蜍铡?br> 5.權(quán)利要求2的方法，它包括進(jìn)一步施用尿苷磷酸化酶的抑制劑。
6.一種用于治療或防止膿毒癥的方法，它包括給動(dòng)物施用治療上有效量的尿苷磷酸化酶抑制劑。
7.一種用于減輕治療性細(xì)胞因子或炎性刺激物的毒性的方法，它包括在施用所說的細(xì)胞因子或所說的刺激物前，期間或后給動(dòng)物施用治療上有效量的嘧啶核苷酸前體。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷或乳清酸的?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所說的尿苷的?；苌锸侨阴Ｄ蜍?。
10.權(quán)利要求7的方法，其中所說的細(xì)胞因子或所說的刺激物選自白細(xì)胞介素-1，白細(xì)胞介素-2，白細(xì)胞介素6，腫瘤壞死因子，內(nèi)毒素，真菌多糖和雙鏈RNA。
11.權(quán)利要求7的方法，進(jìn)一步包括施用尿苷磷酸化酶抑制劑的步驟。
12.一種減輕治療性細(xì)胞因子或炎性刺激物的毒性的方法，包括給動(dòng)物施用所說的細(xì)胞因子或所說的刺激物前，期間或之后施用治療上有效量的尿苷磷酸化酶抑制劑。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所說的細(xì)胞因子或所說的刺激物選自白細(xì)胞介素1，白細(xì)胞介素2，白細(xì)胞介素6，腫瘤壞死因子，內(nèi)毒素，真菌多糖和雙鏈RNA。
14.一種治療癌癥的方法，它包括在施用所說的細(xì)胞因子或所說的刺激物前，期間或后給動(dòng)物施用治療上有效量的治療性細(xì)胞因子或炎性刺激物以及治療上有效量的嘧啶核苷酸前體。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷，胞苷，乳清酸，或尿苷，胞苷或乳清酸的?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所說的尿苷的?；苌锸侨阴Ｄ蜍?。
17.權(quán)利要求14的方法，其中所說的細(xì)胞因子或所說的刺激物選自白細(xì)胞介素1，白細(xì)胞介素-2，白細(xì)胞介素6，腫瘤壞死因子，內(nèi)毒素，真菌多糖和雙鏈RNA。
18.權(quán)利要求14的方法，它進(jìn)一步包括施用尿苷磷酸化酶抑制劑的步驟。
19.一種用于治療癌癥的方法，它包括在施用所說的細(xì)胞因子或所說的刺激物之前，期間或之后給動(dòng)物施用治療上有效量的治療性細(xì)胞因子或炎性刺激物和治療上有效量的尿苷磷酸化酶抑制劑。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所說的細(xì)胞因子或所說的刺激物選自白細(xì)胞介素1，白細(xì)胞介素2，白細(xì)胞介素6，腫瘤壞死因子，內(nèi)毒素，真菌多糖和雙鏈RNA。
21.一種治療或防止炎性肝炎的方法，它包括給動(dòng)物施用治療上有效量的尿苷，胞苷或乳清酸?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所說的炎性肝炎是由病毒感染引起的。
23.權(quán)利要求21的方法，其中所說的炎性肝炎是由自身免疫過程引起的。
24.權(quán)利要求21的方法，其中所說的炎性肝炎是由乙醇消耗引起的。
25.權(quán)利要求21的方法，其中所說的尿苷?；苌锸侨阴Ｄ蜍?。
26.權(quán)利要求21的方法，它進(jìn)一步包括施用尿苷磷酸化酶抑制劑的步驟。
27.治療或防止炎性肝炎的方法，包含給動(dòng)物施用治療上有效量的尿苷磷酸化酶抑制劑。
28.治療和防止炎性肝炎的方法，包含給動(dòng)物施用治療上有效量的尿苷或胞苷。
29.權(quán)利要求28的方法，其中每天施用2到40克尿苷或胞苷。
30.一種治療或防止在接受腸胃外營(yíng)養(yǎng)的動(dòng)物中的肝損傷的方法，它包括給所說的動(dòng)物靜脈內(nèi)施用治療上有效量的嘧啶核苷酸前體。
31.權(quán)利要求30的方法，其中所說的肝損傷是由于所說的動(dòng)物接受腸胃外營(yíng)養(yǎng)引起的。
32.權(quán)利要求30的方法，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷，或乳清酸的?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}。
33.權(quán)利要求30的方法，其中每天施用2到40克所說的嘧啶核苷酸前體。
34.權(quán)利要求30的方法，進(jìn)一步包括施用尿苷磷酸化酶抑制劑的步驟。
35.一種治療或防止在接受全部腸胃外營(yíng)養(yǎng)的動(dòng)物中的肝損傷的方法，包含給所說的動(dòng)物施用尿苷磷酸化酶抑制劑。
36.一種治療或防止在接受肝移植的動(dòng)物中的肝損傷的方法，包含給所說的動(dòng)物施用治療上有效量的嘧啶核苷酸前體。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷，或乳清酸的酰基衍生物或其藥用上可接受的鹽。
38.權(quán)利要求36的方法，其中每天施用2至40克所說的嘧啶核苷酸前體。
39.權(quán)利要求36的方法，進(jìn)一步包括施用尿苷磷酸化酶抑制劑的步驟。
40.一種在接受肝移植的動(dòng)物中治療或防止肝損傷的方法，包括給所說的動(dòng)物施用尿苷磷酸化酶抑制劑。
41.一種組合物，它包含a)嘧啶核苷酸前體的?；苌铮?；b)尿苷磷酸化酶抑制劑。
42.一種組合物，它包含a)嘧啶核苷酸前體的酰基衍生物，b)一種嘌呤核苷酸前體。
43.權(quán)利要求42的組合物，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷，胞苷或乳清酸。
44.權(quán)利要求42的組合物，其中所說的嘌呤核苷酸前體是肌苷，腺苷或肌苷或腺苷的?；苌铩?br> 45.包含腸胃外營(yíng)養(yǎng)制劑，和每天2至40克嘧啶核苷酸前體部分的一種組合物。
46.權(quán)利要求45的組合物，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷或乳清酸的酰基衍生物或其藥用上可接受的鹽。
47.一種給接受靜脈內(nèi)營(yíng)養(yǎng)的哺乳動(dòng)物提供營(yíng)養(yǎng)的方法，它包括給所說的哺乳動(dòng)物施用權(quán)利要求45的組合物。
48.一種組合物，它包含a)葡萄糖，和b)嘧啶核苷酸前體。
49.權(quán)利要求48的組合物，其中所說的組合物是含1至10％葡萄糖的水溶液。
50.權(quán)利要求48的組合物，其中所說的組合物是含5％葡萄糖的水溶液。
51.權(quán)利要求48的組合物，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷或胞苷。
52.一種在肝臟移植期間或之后治療哺乳動(dòng)物的方法，它包括施用權(quán)利要求48的組合物。
53.一種減輕乙醇中毒影響的方法，它包括給需要該治療哺乳動(dòng)物施用尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷或乳清酸的?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}。
54.一種治療乙醇中毒的方法，它包括給中毒的哺乳動(dòng)物施用尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷或乳清酸的?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}。
55.權(quán)利要求54的方法，其中所說的用藥步驟包括施用三乙酰尿苷。
56.權(quán)利要求54的方法，其中所說的用藥步驟包括施用尿苷或胞苷。
57.一種在需要該治療的動(dòng)物中減輕炎性肝損傷的方法，它包括給所說動(dòng)物施用治療上有效量的尿苷，胞苷或乳清酸的?；苌锘蚱渌幱蒙峡山邮艿柠}。
全文摘要
本發(fā)明公開了包括胞苷，尿苷和乳清酸的酰基衍生物和尿苷磷酸化酶抑制劑的嘧啶核苷酸前體以及它們地增強(qiáng)對(duì)膿毒癥或全身性炎癥的抗性中的用途。
文檔編號(hào)A61K31/70GK1156409SQ95194806
公開日1997年8月6日 申請(qǐng)日期1995年6月30日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月30日
發(fā)明者R·W·馮博斯特爾, M·K·巴馬特, B·M·希爾特布蘭德 申請(qǐng)人:普羅神經(jīng)細(xì)胞有限公司