專利名稱：吡咯基苯并二氮雜酮的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式Ⅰ所表示的化合物有其藥用鹽，其中R代表甲基、氟或溴。
本發(fā)明旨在以上化合物及其作為治療有效藥物在治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染、特別是HIV病毒感染方面的應(yīng)用，以及制備化合物和含該化合物的藥物的方法和將這些化合物用于制備治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染尤其是HIV感染的藥物。
該化合物可按其本身和例1至例3詳述的已知方法制備，該方法包括將式Ⅱ表示的4′取代-2-溴-2′(1-氫-吡咯-2-基羰基)乙酰苯胺與氨水反應(yīng)并
環(huán)化生成的2-氨基乙酰苯胺，例如用新戊酸。


圖1和圖2中的化合物(4)和(11)可作用式Ⅱ表示的化合物的例子。按照以上方法，溶于THF(四氫呋喃)和CH2Cl2的化合物Ⅱ與氨水反應(yīng)，所得產(chǎn)物，如圖1中的化合物(5)，在甲苯或正丁醇之類的溶劑中，在回流溫度下與新戊酸反應(yīng)。
從已知起始物制備化合物Ⅱ的方法見(jiàn)圖1和圖2并在例1至例3中得到充分描述。
化合物Ⅰ及其鹽具有抗病毒活性，特別對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒有效，如HIV病毒，這種病毒與AIDS以及與AIDS有關(guān)的疾病如ARC((AIDS相關(guān)縮合癥)的發(fā)病有關(guān)。這些化合物還可通過(guò)抑制重要的HIV病毒功能即TAT(轉(zhuǎn)活性轉(zhuǎn)錄)活性來(lái)抑制HIV復(fù)制。
化合物Ⅰ的抗病毒活動(dòng)性可如下所示蝕斑減少試驗(yàn)可按照B.A.Larder，B.Chesebro和D.D Richman在Aatimicro，Agents and Chemother，34.(1990)，436-441中所述進(jìn)行。HIV-1中的LAV-1病株在CD4+DEM細(xì)胞中生成。CD4+HeLa細(xì)胞的細(xì)胞單層被病毒感染，于37℃經(jīng)1小時(shí)的吸收后，培養(yǎng)基內(nèi)加入用于測(cè)試抗病毒活性的化合物，5%的小牛血清和0.1%的DMSO(二甲基亞礬)。將培養(yǎng)基在37℃下培養(yǎng)3天后，用10%的甲醛固定，0.25%的結(jié)晶紫染色以顯出蝕斑。對(duì)于每一藥物稀釋液，制備兩份樣品，基于沒(méi)加藥物的對(duì)照值，計(jì)算蝕斑的減少值。
被測(cè)化合物為式Ⅰ表示的化合物。為了進(jìn)行比較，也可用其中取代基R可為氯(詳見(jiàn)美國(guó)專利No.5，041，438)的式Ⅰ化合物和RT抑制劑，AZT進(jìn)行式驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
用于治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的化合物Ⅰ抗病毒的有效劑量范圍是每日0.1-10mg/kg體重。此劑量可一次給藥或分次給藥，給藥間隔可為2，4，6，8，12或24小時(shí)。適合的劑量是血藥濃度達(dá)到0.05-10μM，以0.6-5μM為最適，按1-3mg/kg體重每日一次或兩次給藥可達(dá)到理想的血藥濃度。
式Ⅰ化合物可按以下不同的劑型給藥?；衔铮M合物和它們的藥用鹽是適合的。藥用鹽可為有機(jī)鹽如乳酸鹽、乙酸鹽，馬來(lái)酸鹽或?qū)?甲基磺酸鹽等，也可為無(wú)機(jī)鹽如鹽酸鹽，硫酸鹽等。
該化合物也可與其他抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的藥物聯(lián)合用藥，特別是與反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，如ddC(2′，3′-雙脫氧胞苷)，AZT(3′-疊氮基-3′-脫氧腺苷)，ddI(2′，3′-雙脫氧肌苷)，ddA(2′，3′-雙脫氧胸苷)或起抗其他HIV蛋白質(zhì)如蛋白酶、整合酶和REV蛋白等)作用的抑制劑。用于AIDS和ARC患者的ddC和AZT的制劑已經(jīng)發(fā)表，ddC抑制病毒繁殖的劑量一般在0.05-1.0μM之間。0.005-0.25mg/kg體重的抑制病毒劑量適用于大多數(shù)患者。試用的口服劑量范圍比較寬，如0.01至0.25mg/kg體重，一次或多次給藥，給藥間隔可為2，4，6，8，12小時(shí)。目前認(rèn)為ddC以0.01mg/kg體重每8小時(shí)給藥一次效果最好。聯(lián)合用藥時(shí)，抗RT化合物可與化合物Ⅰ同時(shí)給藥或錯(cuò)開(kāi)給藥，也可將兩藥制成組合物，聯(lián)合用藥的劑量應(yīng)小于兩藥單獨(dú)用于治療的劑量。
本發(fā)明也涉及在藥用載體中含有治療有效量式Ⅰ化合物的組合物。本發(fā)明的化合物可單獨(dú)存在于溶液中，但該化合物的有效成份優(yōu)選以藥物組合物形式給藥，這些組合物包括至少一種活性成份和一種或多種藥用載體和/或其它藥劑，如RT抑制劑。這些載體包括人們所熟知的適用于口服、直腸，鼻腔，局部，口腔，舌下，陰道或非腸道(包括皮下、肌肉、靜脈和皮下)給藥的載體。本發(fā)明適用于口服給藥的化合物應(yīng)包含液體溶液，如溶于稀釋劑中的有效劑量化合物，稀釋劑如水，鹽水和橘汁。
這些組合物可以單位劑量的形式給藥，優(yōu)選含有6-600mg化合物Ⅰ，而以60-180mg為最適宜。
口劑劑型如膠囊、粉劑或片劑的單位劑量可含有以固體或微粒，溶液或水樣溶液的混懸液或水包油或油包水的乳化液等形式出現(xiàn)的預(yù)測(cè)量的有效成份，如軟膠囊。片劑的單位劑量劑型包含一種或多種乳糖、微晶纖維素，膠態(tài)二氧化硅、crocarmellose sodium，硬脂酸鎂，硬脂酸和其他賦形劑，著色劑以及藥理作用相容的載體。適用于口服的劑量單位劑型也包括在調(diào)味劑中含有有效成份的錠劑，這種調(diào)味劑往往是庶糖和阿拉伯膠、或黃著膠，以及在惰性性基質(zhì)中含有效成份的錠劑，這種惰性基質(zhì)可為明膠和甘油、或蔗糖和阿拉伯膠。
直腸給藥的單位劑量劑型可為含適當(dāng)基質(zhì)的栓劑，基質(zhì)可為可可油或水楊酸鹽。將有效成份溶于液體載體的漱口劑也被人為是一種用藥方式適用于陰道用藥的型劑如陰道栓，棉塞、奶液、膠體，膏劑、泡沫劑或噴霧劑可含有效成份和本領(lǐng)域已知的適宜載體。
適用于非腸道用藥的劑型包括水性或非水性的等滲無(wú)菌注射液，其包含抗氧化劑、緩沖劑、抗菌劑和使配方與受藥者的血清等滲的溶質(zhì);適用于非腸道的劑型還包括含懸濁劑和增稠劑的水性或非水性的無(wú)菌懸濁液。該配方可采用單劑量或多劑量的密封包裝，如安培、管形瓶或以凍干形式保存，使用前僅需加入無(wú)菌用水等無(wú)菌載體便可立即用于注射。臨時(shí)用注射用溶液和懸濁液可用上述粉劑、粒劑和片劑制成。
抗病毒有效劑量的本發(fā)明化合物或組合物可用于緩解因逆轉(zhuǎn)錄病毒所致的細(xì)胞致病損害作用。由于化合物Ⅰ可抑制TAT，因此它們可抑制潛伏期的病毒復(fù)制。以上所述的劑量便可達(dá)到此目的。優(yōu)選以1-3mg/kg體重劑量一天一次或兩次給藥可達(dá)到0.01-5.0μM的抑制病毒的用藥濃度。本化合物適用于AIDS，ARC患者和無(wú)癥狀的HIV攜帶者。
實(shí)例1本例所涉及的產(chǎn)品可按圖1制備。
1a)將42.7ml的2.0M的乙基溴化鎂加入130mlTHF(四氫呋喃)制成溶液，冷卻至-5℃，并逐滴加入5.93g吡咯溶于20mlTHF制成的溶液，溫度保持在-5℃。在0℃下攪拌1小時(shí)，在溫度不超過(guò)15℃下，將7.89g的2-甲基-6-甲基-四氫-3，1-苯并惡嗪-4-酮(1)的75mlTHF溶液加到混合物中，反應(yīng)液加熱至60℃，攪拌1小時(shí)，50℃再攪拌1小時(shí)，然后冷卻至室溫。用飽和氯化銨和氯化鈉溶液洗滌反應(yīng)后的混合物，有機(jī)層干燥，用活性碳處理、蒸發(fā)溶劑。所得固體在己烷中混勻呈漿，過(guò)濾洗滌得8.092g產(chǎn)物(2)，(74.1%)，1b)將該產(chǎn)物體中加入15ml30%的氫氧化鈉，20%水和40ml甲醇，反應(yīng)液加熱至回流溫度2小時(shí)。再加入15ml30%氫氧化鈉和40ml甲醇，繼續(xù)加熱2小時(shí)，冷卻至室溫后加入50ml水，混合物攪拌15分鐘。過(guò)濾出固體，并用水和己烷洗滌得5g(75.1%)的(2-氨基-5-甲苯基)-(1氫-吡咯-2-基)甲酮。產(chǎn)物(3)。
1c)往5g產(chǎn)物(3)的含9.1%碳酸氫鈉的100mlCH2Cl2溶液中逐滴加入3.16ml溴乙酰溴，在室溫下攪拌5小時(shí)后，加入3ml溴乙酰溴，繼續(xù)攪拌2小時(shí)后加入水，分離有機(jī)層，用水洗滌。合并水層，用CH2Cl2萃取水層，干燥合并的有機(jī)層，過(guò)濾，蒸發(fā)，殘余物溶于THF，用活性炭處理后蒸發(fā)至10ml。
1d)用60mlTHF溶液稀釋，將溶液加入到置于干冰浴中的50ml液氨中。反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，將液氨蒸發(fā)。蒸發(fā)剩余溶劑，以CH2Cl2/MeOH(10∶1)和CH2Cl2/MeOH(8∶1)作洗脫液通過(guò)閃蒸柱層析法純化殘余物，再用CH2Cl2/MeOH(6∶1)為洗脫液通過(guò)閃式層析提純產(chǎn)物得1.717g(26.8%)的2-氨基-4′-甲基-2′(1氫-吡咯-2-基羰基)乙酰苯胺，產(chǎn)物(5)。
1e)1.717g產(chǎn)物(5)與50ml甲苯和681mg新戊酸混合，加熱至回流溫度1小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，再與50mlTHF和20ml乙醚混合，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，干燥有機(jī)層，過(guò)濾并蒸發(fā)，以EtoAc/石油醚(1∶1)和EtoAc/石油醚(3∶2)為洗脫液用閃蒸法層析提純殘余物得240mg產(chǎn)物(6)，該產(chǎn)物再用EtoH結(jié)晶得162mg(15.0%)的1，3-二氫-7-甲基-5-(1氫-吡咯-2-基)02氫-1，4-苯并二氮雜
-2-酮，產(chǎn)物(6)，熔點(diǎn)237-239℃。
實(shí)例2本例所涉及產(chǎn)物按圖2制備。
2a)往3.1g5-氟-2-硝基甲苯的20ml濃硫酸攪拌液中分批加入6.4g三氧化鉻，同時(shí)保持反應(yīng)溫度于35-40℃。攪拌該混合物1.5小時(shí)，然后倒入攪拌的冰水中，用乙酸乙酯萃取，再用飽和的碳酸氫鈉水溶液萃取合并的有機(jī)餾份，用濃磷酸將溶液的pH值調(diào)至2，再用乙酸乙酯萃取該酸性混合物，干燥有機(jī)層并蒸發(fā)得1.3g(50%)產(chǎn)物(7)。
2b)將1.6g5-氟-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物(7)的150ml甲醇溶液在常壓下，以Raney鎳為催化劑氫化2小時(shí)，過(guò)濾后清除催化劑，蒸發(fā)溶劑，將產(chǎn)物用硅膠過(guò)濾，用10%甲醇-二氯甲烷洗脫，得到0.8g(60%)的產(chǎn)物(8)。
2c)將0.8g產(chǎn)物(8)的10ml乙酐混合物加熱至回流溫度過(guò)夜，蒸發(fā)溶劑，以25%乙酸乙酯-75%己烷作洗脫液，通過(guò)閃式層析純化殘余物，得到0.73g(79%)2-甲基-六氟-四氫-3，1-苯并惡嗪-4酮，產(chǎn)物(9)。
2d)與1a)和1b)步驟相似，從0.7ml(10.18mmol)的吡咯和0.73g產(chǎn)物(9)經(jīng)過(guò)硅膠過(guò)濾，以乙酸乙酯-已烷(1∶1)洗脫，得到0.72g(86%)的2-氨基-5-氟苯基-1氫-吡咯-2-基甲酮，產(chǎn)物(10)。熔點(diǎn)90-92℃。
2e)與1c)步驟相似，從0.42g產(chǎn)物(10)270ml的溴乙酰溴可得到650mg(99%)的2-溴-4′-氟-2′-(1氫-吡咯-2-基羰基)乙酰苯胺，產(chǎn)物(11)，熔點(diǎn)150-152℃。
2f)將0.65g化合物(11)的15mlCH2Cl2和3mlTHF溶液加入干冰-丙酮浴中50ml壓縮的液氨中，反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，使液氨逐漸蒸發(fā)，干燥的生成物于水和乙酸乙酯之間分配，用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)，將殘余物與30ml正丁醇和50mg新戊酸混合，并加熱至回流溫度16小時(shí)，將溶劑蒸干，用10%甲醇-90%CH2Cl2使殘余物結(jié)晶，并在熱甲醇中用活性炭處理，得到0.33g(68%)的7氟-1，3-二氫-5-(1氫-吡咯-2-基)-二氫-1，4-苯并二氮雜
-2酮，產(chǎn)物(12)，熔點(diǎn)255-257℃。
實(shí)例3用5-溴-2-硝基甲苯為起始物可得到相應(yīng)的7-溴化合物。
以下蓋倫組合物可按本身已知方法制備。
實(shí)例4式Ⅰ化合物的配方a)片劑Ⅰ成份 mg/片活性成份 20mg淀粉 40mg阿維塞爾(Avicel) 80mg乳糖 274mg硬脂酸鎂 2mg416mgb)片劑Ⅱ成份 mg/片活性成份 20mg乳糖 180mg
凝膠化淀粉 15mgc)軟膠囊成份 mg/膠囊活性成份 20mg乙氧基化脂肪酸 500mgPEG4000 100mg植物油，適量 1.0gd)口服液體成份 mg/劑活性成份 20.0mg又羥基苯甲酸甲酯 20.0mg蔗糖 適量調(diào)味劑 適量枸櫞酸緩沖劑 適量適量純水 5.0ml實(shí)例5式Ⅰ化合物和ddc的配方a)片劑Ⅰ成份 mg/片式Ⅰ化合物 20mg
ddc 5g淀粉 40mg阿維塞爾(Avicel) 80mg乳糖 269mg硬脂酸鎂 2mg416mgb)片劑Ⅱ成份 mg/片式Ⅰ化合物 20mgddc 5mg乳糖 175mg凝膠化淀粉 15mg微晶纖維素 72mg改良淀粉 10mg硬脂酸鎂 3mg300mgc)軟膠囊成份 mg/膠囊式Ⅰ化合物 20mgddc 5mg
乙氧基化脂肪酸 500mgPEG4000 100mg適量植物油至 1.0gd)口服液體成份 mg/劑式Ⅰ化合物 4.0mgddc 1.0mg對(duì)羥基苯甲酸甲酯 2.0mg對(duì)羧基苯甲酸丙酯 0.2mg蔗糖 1000.0適量調(diào)味劑 適量枸櫞酸緩沖劑 5.0mg適量純水 1.0mle)非腸道用藥劑成份 mg/劑式Ⅰ化合物 20.0mgddc 5.0mg丙二醇 20.0mg愛(ài)莫爾夫(Emulphor) 2.0mg適量注射用水 1.0mg
權(quán)利要求
1.式Ⅰ化合物及其藥用鹽，其中R為甲基，
氟或溴。
2.權(quán)利要求1的化合物為下面的化合物1，3-二氫-7-甲基-5-(1氫-吡咯-基)-2氫-1，4-苯并二氮雜
-2酮;7-氟-1，3-二氫-5-(1氫-吡咯-2-基)-二氫-1，4-苯并二氮雜
-2酮;7-溴-1，3-二氫-5-(1氫-吡咯-2-基)-二氫-1，4-苯并二氮雜
-2酮。
3.權(quán)利要求1和2的化合物，用于治療逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染，特別是HIV病毒的感染的治療活性劑。
4.制備權(quán)利要求1中式Ⅰ化合物的方法，其包括式Ⅱ的4′-
取代的2-溴-2′-(1氫-吡咯-2基羰基)乙酰苯胺與氨水反應(yīng)，然后環(huán)化所得的2-氨乙酰苯胺。
5.含權(quán)利要求1和2的化合物作為活性成份的藥物用于治療逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染，特別是HIV病毒的感染。
6.權(quán)利要求1或2的化合物用于制備治療逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染，特別是HIV病毒的感染的藥物。
7.權(quán)利要求1或2的化合物是按權(quán)利要求4的方法或與之相似的方法制備的。
全文摘要
本發(fā)明涉及化合物I及其藥用鹽，其中R為甲基，氟或溴，其用做治療有效劑應(yīng)用于治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，特別是HIV感染，其是通過(guò)已知方法制備的，即通過(guò)2-溴-2-(1氫-吡咯-2基羰基)乙酰苯胺以及相應(yīng)的4′位取代物與氨水反應(yīng)，然后用新戊酸環(huán)化所得的2-氨基乙酰苯胺。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1074905SQ9310081
公開(kāi)日1993年8月4日 申請(qǐng)日期1993年1月20日 優(yōu)先權(quán)日1992年1月24日
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