專利名稱：與系統(tǒng)免疫功能障礙有關(guān)的神經(jīng)認(rèn)知癥的診斷和治療的制作方法
本申請是1986年10月16日提交的、序列號為No.07/421，596的早期申請的部分繼續(xù)。
本發(fā)明涉及用于診斷和系統(tǒng)免疫功能障礙有關(guān)的這種類型的神經(jīng)認(rèn)知癥(neuro-cognitive disorder)的方法，這種類型的神經(jīng)認(rèn)知癥和出現(xiàn)類似癥狀的原發(fā)性心理或神經(jīng)異常的神經(jīng)病不同。本發(fā)明還包括診斷與免疫紊亂有關(guān)的癡呆。本發(fā)明還描述了用雙股的RNA對這些癥狀的治療。
記憶力衰退、智商(IQ)下降、以及認(rèn)知技能的減退這些中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的表現(xiàn)形式可能和末稍血液單核細(xì)胞(PBMC)中的2′-5′A途徑代謝障礙有關(guān)。這些障礙可能以潛在的和在臨床上檢查不到的淋巴激活素的釋放為征兆，這種釋放反過來又貢獻(xiàn)于已變得模糊不清的感覺中樞。并且，經(jīng)常像檢測不到的還原病毒感染和/或皰疹感染那樣起作用。潛隱性病毒感染也對腦病變有貢獻(xiàn)，貢獻(xiàn)的方式即有直接的，又有間接的(通過觸發(fā)不適當(dāng)?shù)暮吐缘牧馨图せ钏氐漠a(chǎn)生)。通過檢查2′-5′A途徑的成分并且通過用雙股的RNS的干擾治療就能以簡捷的方式診斷出疾病的雙重表現(xiàn)形式，所說的雙股的RNS在生物學(xué)上中和了淋巴激活素毒性，同時(shí)還減少了內(nèi)在的病毒負(fù)荷量。
我已發(fā)現(xiàn)，某些癡呆是在不消退的病毒感染后持續(xù)免疫活化的結(jié)果，這就造成了永久性的記憶力衰退。我還觀察到了不適和壓抑。各種淋巴激活素(諸如IL-2，IL-6)、INF、以及與人體抗御能力有關(guān)的干擾素的血清水平都升高了，并且這些分子(單獨(dú)地或集中在一起地)對該癥狀似乎都有貢獻(xiàn)。
癡呆(Alzheimer病等)的難以確定的病因是迄今難以發(fā)現(xiàn)治療這種疾病的有效治療方法的原因之一。因此，我開發(fā)了一種新的戰(zhàn)略首先確定癡呆病的一個(gè)異常的細(xì)胞表型，這可能對包括病毒感染在內(nèi)的各種免疫紊亂產(chǎn)生一個(gè)明顯的損傷控制，而不管該刺激器官的特殊性質(zhì)如何;第二，確定該異常表型是否可能在某些細(xì)胞內(nèi)的酶途徑中被找到，這些途徑使人體細(xì)胞(包括腦組織)處于免疫調(diào)節(jié)的抗病毒狀態(tài)。這些途徑是已知的，并且包括和2-5A相關(guān)的合成酶/RNaseL途徑以及和雙股的RNA相關(guān)的蛋白激酶。通過各種動物病毒，以及通過病毒感染的副產(chǎn)物，諸如，干擾素或雙股的RNA就可以使這些酶途徑活化或失活。這些途徑經(jīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)即可誘發(fā)細(xì)胞抵抗大量的病原體的能力，這是因?yàn)樽罱K的生化產(chǎn)物能夠干擾病原體的合成和穩(wěn)定。這里我將這些酶途徑稱為“抗病毒”途徑，但應(yīng)該指出的是，這些途徑還和免疫細(xì)胞的分化有關(guān)。特別是，這些途徑可能參與了T細(xì)胞、B細(xì)胞、和單核細(xì)胞或它們的先質(zhì)細(xì)胞的活化。
從前我就注意到在人的另外一種慢性病毒感染過程中的體內(nèi)2-5A合成酶/RNaseL途徑中的異常性(參考文獻(xiàn)1)。例如，由人的免疫缺陷病毒(HIV)引起的獲得性免疫缺陷綜合癥(愛滋病)總是伴隨有異常高水平的隱性2-5A合成酶，生物活性的2-5A水平降低了，并且低到RNaseL途徑的不可探測的水平(參考文獻(xiàn)1)。這種表型和由于缺少2-5A的適當(dāng)活化、并且隨后缺少2-5A合成酶產(chǎn)物、2-5A而產(chǎn)生的相對不活躍的抗病毒途徑相一致的。
在我的對癡呆病人的現(xiàn)在的研究中，在下面要討論的某些病人中，皰疹病毒還用單細(xì)胞系的抗體鑒別，而其余病人用包含抗幾種皰疹病毒的抗體的血清來監(jiān)視。因此我將稱某些癡呆病人為“通過培養(yǎng)的病毒陽性”，而不是HHV-6陽性。還從這些病人以及從具有類似的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)病因的其它病人分離出新的還原病毒。
我已發(fā)現(xiàn)并在這里公開，在任何和代謝障礙、神經(jīng)缺陷或慢性大腦功能失常(CCD)有關(guān)的慢性癡呆的個(gè)體中都存在著2-5A合成酶/RNaseL途徑的異?；蚧顒舆^強(qiáng)。這種紊亂經(jīng)常伴有其它的生化異常和大片的組織異常，如由成像揭示出來的大腦損傷以及認(rèn)知能力的缺陷，例如智商(IQ)的下降、以及注意力和抽象能力的損傷。另外，在CCD病人中，固有的殺傷細(xì)胞的功能和NK細(xì)胞的表型通常是異常的。
這些病用雙股的RNA療法進(jìn)行有效的治療，這種療法使2-5A合成酶/RNaseL途徑正?；⑶覍υ撏緩竭M(jìn)行了有益的調(diào)節(jié)，因此使病人恢復(fù)了雙股的RNA缺陷。盡管運(yùn)動的忍耐性和氧氣的消耗都增加了，但在細(xì)胞水平和功能水平上都有所改善，記憶力和IQ值都恢復(fù)到接近或達(dá)到先前的水平上。使用下面要說明的各種技術(shù)和方法來評估患有慢性大腦功能障礙的病人。
對嚴(yán)重慢性癡呆的研究給15個(gè)患有嚴(yán)重慢性癡呆病人服用200-400mg的Ampligen ，這是一種有微小副作用的失配的雙股的RNA，一周兩次，最多服用24周。達(dá)到30-50μg/ml Ampligen 的血液水平。對于大多數(shù)病人，維持10μg/ml水平一小時(shí)或更多些時(shí)間。所有的15個(gè)病人在末梢血液單核細(xì)胞中呈現(xiàn)出異常的抗病毒2-5A合成酶/RNaseL途徑的成分。在Ampligen 治療期間這些途徑的成分返回到比較正常的數(shù)值上。例如，在治療前，生物活性的2′-5′寡腺苷酸濃度是正常值(平均值＝242)的3-665倍，有13個(gè)病人經(jīng)12周的治療降低到正常值。在經(jīng)受檢查的14個(gè)病人中的13個(gè)人中，還獲得了在治療期間減少了可培養(yǎng)的病毒的證據(jù)，并且有11個(gè)病人用單核細(xì)胞抗體檢測到HHV-6(人類皰疹病毒-6)和/或新的還原病毒。15個(gè)病人的行為狀況(由改進(jìn)的Karnofsky分?jǐn)?shù)來判斷)都顯示出極其明顯的改觀，大多數(shù)病人在記憶力、智商和其它的心理試驗(yàn)方面都表現(xiàn)出持久的改善。沒有觀察到任何明顯的臨床毒性。雖然可以觀察到輕微的類似流感的癥狀，但是失配的雙股的RNA療法完全可用，沒有任何一個(gè)病人要求減少劑量。
對于大多數(shù)癡呆病人，異常的表現(xiàn)形式是隱性的2-5A合成酶的水平減少以及生物活性的2-5A水平和活化的RNasel的水平的增高。這種表型(和HIV感染后的表型明顯不同)給出了由2-5A合成酶的慢性過度刺激產(chǎn)生的抗病毒途徑的過高活性的概念。在這里，我描述了在用Ampligen (一種原型雙股RNA)治療期間，具有某種2-5A合成酶/RNAaseL抗病毒途徑異常的癡呆病人在臨床方面和病毒學(xué)方面的改進(jìn)。
病人 病人在治療前的Karnofsky行為分?jǐn)?shù)為60分或以下。這些病人表現(xiàn)出持久的(或復(fù)發(fā)的)很衰弱的癡呆，癡呆嚴(yán)重到至少有24個(gè)月他們的平均日?；顒訙p少或損傷到發(fā)病前的50%以下，沒有任何可能產(chǎn)生類似癥狀的其它臨床條件。廣泛的醫(yī)學(xué)發(fā)展能夠排除包括腦瘤、脈管異常、境遇性壓抑、或其它原發(fā)性的心理疾病、以及非病毒源的感染疾病在內(nèi)的其它可能的因素。所有病人都要給出癡呆的證據(jù)，而在Wechsler記憶力表上的得分比正常人低，并且比希望的總智商得分(Wechsler成人智力量表-修正的，WAIS-R)低，其中要依據(jù)病人的學(xué)術(shù)背景和/或過去在類似試驗(yàn)中的行為。此外，這些個(gè)體在WAIS-R試驗(yàn)中的一個(gè)個(gè)任務(wù)的得分比兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍還要大。典型的病人在1.4 Tesla MRI掃描中展示出腦的異常磁共振成象(MRI)掃描。
藥物攝入病人開始時(shí)接受200mg的Ampligen
(HEM Research，Rockville，MD，USA);在各個(gè)時(shí)期一周兩次靜脈內(nèi)服用(見表1)，在此之后將劑量增加到每周兩次400mg。
2-5A途徑測量和病毒培養(yǎng) 在中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行隨意抽樣的這些測量。進(jìn)行如下所述的2-5A合成酶/RNAaseL抗病毒途徑研究。2-5A合成酶是從PBMC提取物中用poly(I)·poly(C)瓊脂糖親合力色層分離法提純出來的(參考文獻(xiàn)2)。只有隱性的2-5A合成酶是用這種方法提純出來的，因?yàn)橛呻p股的RNA占據(jù)的酶不是鍵連的。然后使用通過薄層色層分離法測到的ATP→2-5A的轉(zhuǎn)換百分比來定量計(jì)算通過親合力提純的隱性2-5A合成酶的活性。在PBMC提取物中的被活化的RNaseL是由它的劈開核糖體RNA(rRNA)使其成為特定的劈裂產(chǎn)物的能力確定的，而這種能力是由電泳法測出的(參考文獻(xiàn)3)。通過密度計(jì)掃描法將這些試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行定量計(jì)算，并且表示為被劈開的18S rRNA/該提取物的稀釋劑的百分?jǐn)?shù)。通過乙烯醇提取法自PBMC提取物中回收2-5A。然后，通過活化被提純出來的隱性RNasel、從而使poly(U)〔32PpCp〕降級成酸性可溶產(chǎn)物的能力來估算生物活性的2-5A。
針對皰疹病毒，對病毒培養(yǎng)進(jìn)行了概括地描述(參考文獻(xiàn)4)。測量涉及到制備病人的末稍血液單核細(xì)胞并把這些細(xì)胞培養(yǎng)30天，定期檢查培養(yǎng)物是否呈現(xiàn)皰疹病毒感染的巨型細(xì)胞特征。通過免疫熒光法，使用來自病人的血清(其抗人體皰疹病毒-6(HHV-6)的抗體效價(jià)相當(dāng)高)，核實(shí)某些病人的巨型細(xì)胞中確實(shí)存在著病毒。還使用HHV-6的特殊的單核細(xì)胞抗體。培養(yǎng)后獲得的巨型細(xì)胞數(shù)目和體內(nèi)病毒負(fù)荷量有關(guān)。為了定量表示病毒負(fù)荷量，將＞10%的細(xì)胞為巨型細(xì)胞的培養(yǎng)物記為2+，將0%和10%之間的細(xì)胞為巨型細(xì)胞的培養(yǎng)物記為1+，將無巨型細(xì)胞的培養(yǎng)物記為0。還通過監(jiān)測經(jīng)Ampligen 治療后陰性培養(yǎng)物的次數(shù)來估算病毒負(fù)荷量的減少。
雙股RNA血液水平按如下所述確定Ampligen 水平(參考文獻(xiàn)5)。將肝素化的血液(100μl)和162μl的6M GUSCN/1M EDTA(PH值為8)混合，并且由3H標(biāo)記的poly(C)探查物孵化?；祀s后，用RNase消除不成對的探查物，并且通過過濾，沉淀和收集混雜的探查物。通過參照標(biāo)準(zhǔn)曲線將混雜的探查物數(shù)量轉(zhuǎn)換成等價(jià)的Ampligen 數(shù)量，該標(biāo)準(zhǔn)曲線是由加到混雜的血液內(nèi)并按上述進(jìn)行處理的已知數(shù)量的Ampligen 組成。為了測量Ampligen 自血液中的排除，在結(jié)束從用于注入的這個(gè)臂的相對的那個(gè)臂的注入后分多次抽血。
神經(jīng)心理測試 每個(gè)病人完成一組認(rèn)知的神經(jīng)心理的測試，包括wais-R全標(biāo)度智商試驗(yàn)，Halstead-Reitan神經(jīng)心理試驗(yàn)，以及Wechsler記憶表的直接語言、延遲語言、直接視覺、和延遲視覺部分。這里所報(bào)導(dǎo)的Wechsler記憶分?jǐn)?shù)是語言分×2再加上視覺分。為了避開可能存在的“訓(xùn)練效應(yīng)”，在整個(gè)時(shí)間內(nèi)引入另外一些形式的Wechsler記憶表。
腳踏傳動式試驗(yàn)臺訓(xùn)練試驗(yàn)?zāi)承┌V呆病人，雖然不是全部，但完全不能進(jìn)行日常練習(xí)。CNS功能的經(jīng)過治療的改善經(jīng)常和日常生活的比較正常的活動有關(guān)系，包括練習(xí)次數(shù)的增加在內(nèi)。按照修訂Bruce議定書進(jìn)行腳踏傳動式試驗(yàn)臺訓(xùn)練試驗(yàn)，按照標(biāo)準(zhǔn)方程通過用O2和CO2電極進(jìn)行的排出的氣體交換來估算氧氣適應(yīng)能力。為了消除刺激這個(gè)因素，在厭氧閾測量O2消耗量。
第一個(gè)接受Ampligen 的癡呆病人有慢性病，有進(jìn)展性的虛弱，因此感覺到活下去的希望有限。特別是，盡管她從前是一個(gè)職業(yè)高爾夫球手，但大約5年來她不能照料她自己，在沒有幫助的情況下走不了25呎，并且病情發(fā)作的次數(shù)越來越多。她不能讀書，甚至不能看電視，這是由于缺少短期記憶力造成的。她表現(xiàn)出NK功能障礙、病毒培養(yǎng)陽性、MRI掃描異常、損傷明顯的心理測試、訓(xùn)練耐力低(表1)。在開始治療的8周內(nèi)她顯示出循環(huán)的病毒減少了。她的Karnofsky分?jǐn)?shù)從治療前的30改善成接受Ampligen 24周后的80。在心理測試和訓(xùn)練耐力方面都有臨床上的改善(表1和表3)。這個(gè)病人在連續(xù)18個(gè)月接受Ampligen 后，有了持續(xù)的改善，正過著正常的生活，完全能夠自理。
免疫調(diào)節(jié)的病毒學(xué)變化 包括病人00在內(nèi)的所有15個(gè)病人在他們的末梢血液單核細(xì)胞內(nèi)都呈現(xiàn)出一種被擾動的抗病毒途徑。特別是，所有15個(gè)病人都改變了血液單核細(xì)胞中的生物活性的2-5A的水平。這由13個(gè)病人中改變了的RNaseL的活性來證實(shí)。12個(gè)病人在治療開始時(shí)就改變了末梢血液細(xì)胞中的隱性2-5A合成酶的水平?？傊?，11個(gè)病例有一個(gè)治療前的抗病毒途徑表型，其特征是(a)低水平的隱性2-5A合成酶，并且伴隨有(b)升高了的生物活性的2-5A數(shù)量，以及(c)異常高的RNaseL活性。我稱此為“第一輪廓表型”，這種表型和細(xì)胞外的淋巴激活素對該途徑慢性刺激的表型相一致。兩個(gè)病人(病人01和06)表現(xiàn)出升高了的隱性2-5A合成酶水平，并且伴隨有升高了的生物活性2-5A數(shù)量以及正常的或升高了的RNaseL水平(“第2輪廓表型”)。隱性2-5A合成酶的水平增高據(jù)報(bào)導(dǎo)說是由于受到Epstein-Barr病毒(EBV)的感染，并且可能表現(xiàn)出病人01和06的相互感染。EBV對病人01和06的反復(fù)刺激受到血清學(xué)證據(jù)的支持。
在Ampligen 治療期間，2-5A途徑返回到一個(gè)正常的表型。13個(gè)病人的生物活性的2-5A水平經(jīng)12個(gè)星期跌至正常水平，對于其余兩個(gè)病人，也有所下降，同時(shí)RNaseL活性也明顯下降，僅為正常值的1-2倍(表2)。大多數(shù)病人的隱性2-5A合成酶水平經(jīng)12個(gè)星期升高到正常值(表2)，但過了這個(gè)時(shí)間卻再次下降。許多病人在基線的病毒培養(yǎng)是陽性。在大多數(shù)病人的Ampligen 治療期間病毒的效價(jià)下降。另外，病人02、03、04、06和10在經(jīng)28-40個(gè)星期的Ampligen 治療后的連續(xù)三次培養(yǎng)都是陰性。在治療期間和低水平的隱性2-5A合成酶有關(guān)的抗病毒途徑輪廓(第一輪廓)伴隨著病毒負(fù)荷量的更加迅速的減少;但不管所研究的項(xiàng)目(表1)中的表型是什么樣的，在24個(gè)星期治療期間被測試的11個(gè)病人中的10個(gè)病人的病毒負(fù)荷量都減少了。雙股RNA同時(shí)減少出現(xiàn)在受治療者體內(nèi)的不同病毒因子(還原病毒和DNA病毒)的水平的能力對響應(yīng)的大小有所貢獻(xiàn)。
行為狀況和訓(xùn)練的耐力 參加本項(xiàng)研究的病人是明顯無能的，其平均Karnofsky分?jǐn)?shù)為47。經(jīng)12周治療后該分?jǐn)?shù)提高到67，在24周時(shí)評估的11個(gè)病人的該項(xiàng)分?jǐn)?shù)提高到79(表3)。
某些病人在Ampligen 治療前以及在此治療期間參與了腳踏傳動式試驗(yàn)臺試驗(yàn)。確定可能進(jìn)行的腳踏傳動式試驗(yàn)臺試驗(yàn)的時(shí)間長度和訓(xùn)練檢驗(yàn)期間的最大O2消耗量。這組病人作為一個(gè)整體看，24周后的腳踏傳動式試驗(yàn)臺試驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間增加了20%，并且在訓(xùn)練期間的最大O2消耗量增加了一倍。15個(gè)病人中的12個(gè)病人的O2消耗量增加50%以上(表3)。一個(gè)病人(01)24周僅提高了10%，一個(gè)病人(09)(僅可得到8周的數(shù)據(jù))下降了15%。由于O2消耗測量值一般是在厭氧閾處取得的，因此不可能將這些改善像“舉起”境遇性的抑郁一樣主要?dú)w因于增加的刺激。
神經(jīng)心理學(xué)試驗(yàn) 15個(gè)病人中的12個(gè)病人進(jìn)入這項(xiàng)研究，他們的短期記憶力被損傷，這一點(diǎn)由Wechsler記憶表檢驗(yàn)核實(shí)。在試驗(yàn)期間這些病人的Wechsler得分提高了63%。最大的收益是在和視覺任務(wù)相反的語言任務(wù)上，可能是因?yàn)檫@組病人是從較低語言分?jǐn)?shù)開始的。已達(dá)24周的所有病人都改善到Wechsler表的視覺部分的正常限制值以內(nèi)。由在Wechsler記憶表的延遲任務(wù)方面的改進(jìn)可提出在干擾記憶力方面的改進(jìn)，干擾記憶力是一種在早期癡呆中越來越引起注意的缺陷。
還注意到在智商(IQ)方面的收益。全標(biāo)度IQ從106增加到119，增加了12%。行為IQ增加了19%，語言IQ增加了10%。如果考慮治療了24周的病人，在第三個(gè)8周期間的全標(biāo)度IQ的增加(8%)似乎比第一和第二個(gè)8周期間的全標(biāo)度IQ的增加(分別是2%和0%)更加明顯，因此提出，IQ的增加可能比免疫學(xué)、行為、或短期記憶力的改善更加緩慢。
Ampligen
血液水平和不利的作用通過分子混雜來確定Ampligen
血液水平。如果注入400mg后立即測量血液水平，則其平均值為43μg/ml，范圍為31-75μg/ml(表2)。如果注入200μg的劑量，則得到的血液水平約為一半。這些病人以及其它一些病人的表觀排除率都不相同，但是在大多數(shù)病人中，20μg/ml的血液水平一般可至少維持一個(gè)小時(shí)。
在該項(xiàng)試驗(yàn)期間沒有看到對任何病人的明顯臨床副作用。一個(gè)病人在多次靜脈切開后患上了缺鐵性貧血，需要補(bǔ)充鐵。大多數(shù)病人報(bào)告說增加了類似流感的癥狀，包括肌肉疼痛和頭痛。在本項(xiàng)試驗(yàn)的整個(gè)過程中不存在改變凝固、血化學(xué)、白血細(xì)胞計(jì)數(shù)、肝和腎功能的跡象或其它異常的跡象。
病人顯示出臨床好轉(zhuǎn)、行為能力提高、大腦功能改善的征兆。最早的改善和2-5A合成酶抗病毒途徑和NKH1+細(xì)胞數(shù)的正?；⒁约澳┥已杭?xì)胞中的表觀病毒負(fù)荷量的減少有關(guān)。其中的僅接受8周Ampligen
的一個(gè)病人(05)，他的病毒效價(jià)在緊接下去的試驗(yàn)期間不下降。這個(gè)病人的抗病毒途徑異常的改進(jìn)延緩了一段時(shí)間。病人(01)在頭24周顯示出Karnofsky分?jǐn)?shù)的改善，但是其它的項(xiàng)目卻惡化變差。這個(gè)病人的2-5A合成酶異常的特征和14個(gè)病人中的其余13個(gè)人不同。病人(01)在24周后得到了改善。在32周時(shí)，他的IQ是138，在腳踏傳動式試驗(yàn)臺試驗(yàn)期間他的O2攝入量是1.56l/min。兩個(gè)自愿中斷Ampligen
的病人現(xiàn)在已經(jīng)惡化，他的Karnofsky分?jǐn)?shù)跌落并且練習(xí)耐力和神經(jīng)識別能力都下降了。
這里所研究的病人的生物活性2-5A水平發(fā)生了明顯的變化，并且他們的隱性2-5A合成酶和活化的RNaseL都有改變，從而使它們的細(xì)胞內(nèi)的酶途徑的代謝發(fā)生變化。我已經(jīng)觀察到了這樣一種“過度活躍的”表型，這種表型是由病毒感染的副產(chǎn)物引起的，即由長期過量產(chǎn)生的刺激胞質(zhì)分裂引起的。由于在這些病人中只有很小部分的血液單核細(xì)胞可能受到病毒的直接感染，因此通過病毒感染本身的途徑的過度活化是不可能的。無論如何，2-5A合成酶/RNaseL途徑的被改變了的代謝是識別和原發(fā)性神經(jīng)障礙或腦血管障礙無關(guān)的慢性癡呆病人的一個(gè)很有用的標(biāo)志。
在Ampligen
治療后，生物活性2-5A水平回到正常值，這和活化的RNaseL的水平的情況是相同的。這一結(jié)果是較正常的胞質(zhì)分裂產(chǎn)生、或血液細(xì)胞的胞質(zhì)分裂利用的次要恢復(fù)。還有，2-5A合成酶/RNaseL途徑的活性由其它的雙股RNA活化的蛋白質(zhì)激酶途徑向下調(diào)節(jié)。
臨床癥狀的改善伴隨著病毒學(xué)的改進(jìn)。在進(jìn)行分析的最早時(shí)期就注意到了在Karnofsky分?jǐn)?shù)、Wechsler記憶力試驗(yàn)、行為和IQ分?jǐn)?shù)方面的改善，這些改善一直繼續(xù)到整個(gè)研究期間。在Karnofsky分?jǐn)?shù)方面的比較巨大的收益似乎是在劑量增大到400mg的Ampligen
后取得的。開始時(shí)平均Karnofsky分?jǐn)?shù)為47，說明這些病人不能工作，在家里進(jìn)行日?；顒有枰罅椭Ｔ谘芯科陂g，Karnofsky分?jǐn)?shù)為80，處于平直穩(wěn)定狀態(tài)，說明病人經(jīng)過努力但勿需幫助就能夠在家里和工作單位開展正常的活動。Wechsler記憶力試驗(yàn)較早的時(shí)間(16周)就可以得到最大的收益，而IQ試驗(yàn)分?jǐn)?shù)趨向于較晚的改善。
在Ampligen 治療期間觀察到的在幾個(gè)方面的改善一般來說在24周內(nèi)是很明顯的。生物活性2-5A和活化的RNaseL的減少在P＜0.0001水平處是明顯的。對于減輕和疲勞有關(guān)的癡呆的參數(shù)的改善是非常明顯的。在16周時(shí)在P＜0.01水平處以及在24周在P＜0.001水平處，對于腳踏傳動式試驗(yàn)臺試驗(yàn)的行為改善是明顯的。在16周時(shí)在P＜0.01水平處以及在24周時(shí)在P＜0.0001水平處，Karnofsky分?jǐn)?shù)的改善是明顯的。在16周和24周時(shí)(P＜0.02)，對于Wechsler記憶力測試的改善是明顯的。全標(biāo)度IQ的增加也是明顯的。
大多數(shù)病人的生活方式顯示出同樣巨大的改善，如從第一個(gè)病例看到的那樣。許多病人不能照料他們自己，并且事實(shí)上在治療前不能記憶，沒有幫助不能走路。經(jīng)過24周，許多仍繼續(xù)治療的病人正在過著比較正常的生活。在病人接受Ampligen 的同時(shí)就發(fā)生了改善。再有，兩個(gè)中斷了至少兩個(gè)月的Ampligen 的病人在神經(jīng)認(rèn)知方面都發(fā)生了惡化。
表1 病人00試驗(yàn)治療前治療后c腳踏傳動式試驗(yàn)臺持續(xù)時(shí)間 1.5分鐘 9分鐘O2消耗量 1.15單位 2.36單位Karnofskya30 80Wechsler記憶力b0.5 2.75全標(biāo)度 IQ 88 134Halstead-Reitanb手輕敲 0 3Trails A 0 3Trails B 0 3Wais-R信息 11 16數(shù)字跨度 8 16詞匯 12 16算術(shù) 5 14相似性 9 12方塊設(shè)計(jì) 5 10數(shù)字符號 3 9a＝從臨床表格重新構(gòu)成的b＝ 0＝嚴(yán)重 1＝中等損傷 2＝輕微損傷3＝在正常范圍內(nèi)c＝治療10個(gè)月
對于慢性的大腦功能障礙的研究我還研究了一組患器官性的腦綜合癥的病人，其特征是大腦功能紊亂，某些病人超過15個(gè)月。他們在類似感染的發(fā)作后得上了一種新型的后感染免疫功能障礙，其特征是進(jìn)展性的精神惡化，這種惡化和記憶力下降、偶然的病情發(fā)作、高級精神能力(所謂認(rèn)知功能)喪失有關(guān)。對訴說有認(rèn)知問題的病人進(jìn)行的磁共振成象(MRI)顯示出有各種各樣的異常，即有大的信號強(qiáng)度，其中包括有和水腫或脫髓鞘一樣的大片不規(guī)則區(qū)域。末梢血液細(xì)胞在一個(gè)稱之為雙股RNA連接的2-5A/RNaseL途徑的新的抗病毒途徑中顯示出酶缺陷。用外部來源的雙股RNA進(jìn)行治療，使認(rèn)知功能、行為、MRI、2-5A途徑缺陷的損失都得以改善。
慢性大腦功能障礙(CCD)對實(shí)際上任何年令組都可能發(fā)生，并且經(jīng)常和被認(rèn)為是病毒性質(zhì)的后感染疾病的發(fā)作有關(guān)連。慢性大腦功能障礙(CCD)可能在單核細(xì)胞增多癥(參考文獻(xiàn)6)、布魯氏菌毒(參考文獻(xiàn)7)、或6型皰疹感染、以及其它因素之后發(fā)生。
認(rèn)知功能的減退 和上述的研究一樣，可以利用大量的神經(jīng)心理儀器，我使用這些儀器來研究和確定一組患慢性大腦功能障礙的病人。這里使用的一組典型的試驗(yàn)包括Wechsler成人智力表(修訂版)(WAIS-A)、立即的和延緩的(WMS)、Minnesota多種個(gè)性表(MMPI)、以及類似的一些試驗(yàn)?；糃CD的病人的試驗(yàn)分?jǐn)?shù)一般在平均值之下2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差或低得更多些;某些病人的所有分?jǐn)?shù)的平均分?jǐn)?shù)在平均值下一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差，或更多些;一個(gè)偶然的病人的多個(gè)分?jǐn)?shù)至少都在平均值下4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差。我通常還觀察在“項(xiàng)目變更時(shí)”他們的受到損傷的“抽象能力”和行為。記憶力損傷相對于由注意力和抽象能力產(chǎn)生的困難來說似乎是次要的。有幾個(gè)病人不能完成擺平他們的檢查書籍、把鑰匙放到門前并按正確位形放入鎖內(nèi)這樣一些簡單的任務(wù)。這些可測量到的并且是相一致的認(rèn)知缺陷不可能是由詐病或純心理原因引起的，因?yàn)樗麄兺ǔＪ敲繘r愈下的，最終變得臥床不起和瀕臨死亡。我還發(fā)現(xiàn)一個(gè)和這種病有關(guān)的新的生化缺陷。
腦部的磁共振成象 得到MRI掃描的大部分病人都訴說有認(rèn)知問題。本項(xiàng)研究的MRI掃描一般是使用通用電氣公司制造的1.5T超導(dǎo)Signa磁共振成象儀進(jìn)行的。
77%的被檢查的病人有MRI掃描異常高信號強(qiáng)度的大片加強(qiáng)區(qū)域，有時(shí)出現(xiàn)高信號強(qiáng)度的較大不規(guī)則區(qū)域，和局部水腫和/或脫髓鞘。最經(jīng)常的是影響皮質(zhì)下的白色物質(zhì)，但在深部白色物質(zhì)中也看到了損傷。
在解剖區(qū)和臨床表現(xiàn)之間是有關(guān)聯(lián)的例如，一個(gè)有運(yùn)動失調(diào)的病人具有涉及小腦的損傷，九個(gè)有視覺癥狀的病人具有涉及枕骨皮質(zhì)的損傷，一個(gè)有輕癱的病人具有涉及對側(cè)的內(nèi)囊的損傷。在這幾個(gè)重復(fù)進(jìn)行MRI掃描的病例中，這些損傷一直持續(xù)到我用雙股RNA治療干預(yù)時(shí)為止。
NK(Natual Killer-天然殺傷細(xì)胞)細(xì)胞表型和功能一種免疫學(xué)上的紊亂 NK細(xì)胞表型和功能通常是一種不尋常的表型通常起主要作用的NKH1+T3子群(一種由單核細(xì)胞抗體決定的淋巴細(xì)胞子型)可能會被削弱，但在包括暫時(shí)性的境遇性抑郁的病人在內(nèi)的控制人體內(nèi)卻是正常的，上述的病人通過興奮藥物、改變環(huán)境、訓(xùn)練等通?？梢缘玫礁纳?。還有，病人的NK細(xì)胞功能(相對于各種靶細(xì)胞線的細(xì)胞溶解活性)一般要減少，但在控制人體中并不減少。這個(gè)有缺陷的細(xì)胞溶解活性在用內(nèi)白細(xì)胞殺菌素-2刺激后并且在靶細(xì)胞線是(Epstein-Barr病毒)EBV感染的細(xì)胞線(CAZ388)時(shí)尤為突出?，F(xiàn)在我對這樣一些病人已經(jīng)進(jìn)行了第一個(gè)系列的研究，并且觀察到，NK細(xì)胞的表型和功能異常在用外源的雙股RNA治療后隨著病人的被改善的臨床過程而變化。
抗病毒防御和病毒學(xué)研究 我還觀察到，這些病人的大多數(shù)受到了皰疹-6的感染，這是一種比較新的最近才被描述的皰疹病毒(如上述的參考文獻(xiàn)4)，以前沒有將其和精神能力的減退連系起來。在癌癥病人的早期研究中發(fā)現(xiàn)了這種病毒。對這種病毒有不同的叫法HBLV(人類B細(xì)胞淋巴細(xì)胞病毒)、或HHV-6(人類皰疹病毒-6)。這種病毒的主要特點(diǎn)是它的相對于大約162個(gè)病毒殼粒和一個(gè)脂類膜的二十面體對稱性。被感染的細(xì)胞發(fā)展成大的折射細(xì)胞，某些病人可能有高達(dá)20-30%或更多些的循環(huán)淋巴細(xì)胞(某種類型的骨髓或胸腺的淋巴細(xì)胞)被感染。經(jīng)過幾個(gè)月的雙股RNA治療后，被感染的細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)大幅度地跌落，并且這個(gè)百分?jǐn)?shù)和認(rèn)知能力的臨床改善有關(guān)連。在這些病人中的許多病人體內(nèi)我還發(fā)現(xiàn)了EB(Epstein-Barr)病毒以及一種新型的類似于(但一般而言不同于)HIV的還原病毒，它是一種引起獲得性免疫缺陷或愛滋病的還原病毒。
從我研究的幾個(gè)病人取得的樣品指示出存在傳播這種疾病的一種方式的“偽型”的潛在可能性。例如我可以說6型皰疹病毒的外皮包圍著用于還原病毒的遺傳物質(zhì)。這可能會產(chǎn)生一種新的感染形式感染因子通過像皰疹病毒這樣的群體傳染性地傳播，但傳播的遺傳信息實(shí)際上是還原病毒的遺傳信息。我使用了大量的染色體探查物(參考文獻(xiàn)8)，再加上血清學(xué)和形態(tài)學(xué)上的考慮(參考文獻(xiàn)9)，提出了這個(gè)最終導(dǎo)致精神惡化和發(fā)病的新的生物學(xué)傳播機(jī)制。
我還研究了10個(gè)患有CCD病人的末梢血液淋巴細(xì)胞中的2-5A/RNaseL途徑，他們患有MRI損傷以及和智商降低有關(guān)的神經(jīng)缺陷。在這項(xiàng)研究的第一個(gè)階段，我觀看了病人的抗病毒防御，他們的智商(IQ)等于或小于105，而他們以前的職業(yè)強(qiáng)烈地暗示他們在發(fā)病前必然要有較高的IQ;對于許多病人，我能夠提出有力的證據(jù)證明他們在現(xiàn)在的腦病前的許多年月中是有較高的IQ的。
10個(gè)病人中有8個(gè)病人有一個(gè)過度活躍的或異常的RNaseL，它在一個(gè)典型的聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)試驗(yàn)中引起核糖體RNA的非自然的(不期望的)分裂。還有，這8個(gè)病人在治療前的2-5A合成酶水平在正常值之下。這些病人對改善IQ、MRI、等的雙股RNA治療的反應(yīng)最靈敏，而兩個(gè)沒有生化缺陷的病人對這種治療的反應(yīng)一般。
表4 患腦功能障礙的病人(有2-5A/RNaseL途徑損傷)的協(xié)調(diào)反應(yīng)A.病人的IQ降低。在雙股RNA治療后(每2或3天200-700mg)，在6-9個(gè)月內(nèi)IQ升高了50分。
B、MRI平穩(wěn)或改善。
C.在9-18個(gè)月內(nèi)，許多病例的WAIS-R、WMS、MMPI都改善了。
D.NK(自然殺傷細(xì)胞)細(xì)胞、免疫狀態(tài)平穩(wěn)或改進(jìn)。
E.病毒“負(fù)荷量”減少，由包含皰疹-6病毒的感染粒子的末梢血液細(xì)胞數(shù)目的減少來證實(shí)。
F.行為的增強(qiáng)，它和改善了的訓(xùn)練耐力(延長保持在腳踏傳動式試驗(yàn)臺上的時(shí)間的能力)以及改善了的氧氣消耗量有關(guān)。
G.2-5A/RNaseL途徑缺陷的改進(jìn)通常是一個(gè)主要的標(biāo)志，它比臨床響應(yīng)早4-12周。
常規(guī)的診斷自取病人的血樣開始，使用Carter等人在“The Lancet”中所述的方法分析末梢血液細(xì)胞是否是有酶缺陷的2-5′A(參考文獻(xiàn)1)。將一旦注意到的異常和其它健康個(gè)體的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，并且采用外部服用雙股RNA，最好是失配的雙股RNA，對這個(gè)異常進(jìn)行校正，從而改善了病人的臨床狀況并且恢復(fù)其認(rèn)知能力。在治療期間和治療結(jié)束時(shí)，接下去要由病人判斷她/他的細(xì)胞水平的改善，這通常比臨床改善要早幾個(gè)星期，從而即可確定維持正常的2-5′A合成酶/RNaseL途徑、恢復(fù)/保持病人的認(rèn)知技能所需要的雙股RNA數(shù)量(如果需要的話)。
診斷方法按如下所述估算正常人和患有慢性大腦功能障礙病人的2′-5′A分子的體內(nèi)濃度分析病人血樣品的乙醇可溶部分，以便在用poly U-｛32P｝-PCP進(jìn)行的2′-5′A核心-纖維素測定中(親合力色層分離法)得到這些樣品的2′-5′A含量。在這種測定中，使用2′-5′A激活的RNaseL水解poly(U)的能力來確定功能性的2′-5′A的濃度。
通過測試15個(gè)最近無任何病毒感染史的正常人(由不發(fā)燒、無全身癥狀、無疹等證明)來確定參考數(shù)值。使用由可靠的2′-5′A分子獲得的校正曲線來確定它們的淋巴細(xì)胞2′-5′A水平。
雙股RNA可以是聚肌苷酸鹽和聚胞(嘧啶核)苷酸鹽的一種絡(luò)合物，其中含一定比例的尿嘧啶基或呱基，例如從1/5到1/30的這樣的基(polyI·poly(C4-29X＞U或G))。
雙股RNA的一般結(jié)構(gòu)式為rIn·r(C11-14，U)n或rIn·r(C12，U)n。下面討論雙股RNA的其它適宜的例子。
所謂“失配的雙股RNA”指的是，其中的相對部分各股之間的氫的結(jié)合(基的堆積)是比較完整的，即這種結(jié)合在每29個(gè)接連的基對殘基中的中斷平均來說小于一個(gè)基對。因此應(yīng)這樣理解“失配的雙股RNA”這個(gè)術(shù)語。
最適合于本發(fā)明使用的失配的雙股RNA是基于從poly(Cn，U)和poly(Cn，G)中選擇出來的共聚核苷酸，其中的n是一個(gè)數(shù)值為4-29的整數(shù)，并且這種RNA是聚核糖肌苷酸和聚核糖胞苷酸的絡(luò)合物的失配類似物，它是通過修改rIn·rCn以便沿聚核糖胞苷酸鹽(rCn)股插入不配對基(尿嘧啶或胍)而形成的。另外，雙股RNA還可以通過修改聚核糖肌苷酸(rIn)的核糖基主鏈，例如通過包括2′-O-甲基的核糖基殘基，從poly(I)·poly(C)雙股RNA導(dǎo)出。失配的絡(luò)合物可以和RNA穩(wěn)定的聚合物(如賴氨酸和纖維素)絡(luò)合。這些失配的rIn·rCn類似物中的某一些最好具有一般結(jié)構(gòu)式rIn·(C11-14，U)n或rInl·(C29，G)n，在美國專利4，130，641和4，024，222中Carter和Ts′O介紹了這些失配的類似物，在這里參考引用了這些專利公開的內(nèi)容。這里描述的雙股RNA一般來說適合于按本發(fā)明使用。
用于本發(fā)明的失配的雙股RNA的其它例子包括poly(I)·poly(C4，U)poly(I)·poly(C7，U)poly(I)·poly(C13，U)poly(I)·poly(C22，U)poly(I)·poly(C20，G)poly(I)·poly(C29，G)和poly(I)·poly(Cp23，G＞P)另一類適合于本發(fā)明實(shí)踐的雙股RNA是具有確定結(jié)構(gòu)的短的雙股RNA，例如結(jié)構(gòu)式為5′lock-(I)n-lock3′3′lock-(C)m-lock5′
的寡核苷酸，其中的每個(gè)m和n都大于5并小于100，I是肌苷磷酸鹽，C是胞(嘧啶核)苷磷酸鹽，其中在一個(gè)股上的lock(鎖)補(bǔ)加到其相對股的lock(鎖)上;另一個(gè)例子是結(jié)構(gòu)為5′lock-〔(I)xA〕j-lock3′3′lock-〔(C)yU〕k-lock3′的寡核苷酸，其中的每個(gè)x和y都大于5并小于25，每個(gè)j和k至少為1并小于10，I和C和如上所述相同，A是一種不是I的核苷酸，U是一種其基與A配對的核苷酸。
另外，短的寡核苷酸可以具有如下的結(jié)構(gòu)5′(I)n-hinge-(C)m3′其中的n、m、I和C同上。
這些寡核苷酸在相對股內(nèi)沒有補(bǔ)加核苷酸的這一股內(nèi)可以有替代物。最好通過補(bǔ)加的雜聚物的內(nèi)部定位來穩(wěn)定這些寡核苷酸;鎖或鏈、或兩者、最好包含補(bǔ)加的雜聚物區(qū)域。這些寡核苷酸最好有單股的拖尾。在序列號為07/181，385的美國專利申請(1988年4月14日由Gillespie和Crater申請)和對應(yīng)的PCT/US89/02172中比較詳細(xì)地描述了這些寡核苷酸，這里參考引用了其公開的內(nèi)容。
此外，通過高壓液體色層分離法(HPLC)可以定量確定2′-5′A濃度和分子大小。還有，可以使用核糖體RNA分裂測定法來估計(jì)由病人在體內(nèi)合成的2′-5′A的生物功能性(活性)，或者用來確定病人樣品中的活化的RNaseL的水平。末梢單核血液細(xì)胞是用于分析的最好細(xì)胞。
按照要求，例如一周一次，堅(jiān)持讓患有慢性大腦功能障礙的病人靜脈注入200至700mg的rI·r(C11-14，U)，用這種方法來治療這種病人，2′-5′A酶水平增高，隨之得到了臨床的改善。由測到的2′-5′A合成酶水平、病人的臨床改善情況、特別是認(rèn)知功能回升的情況來指導(dǎo)服用的雙股RNA數(shù)量和服用的次數(shù)。服用的雙股RNA數(shù)量水平為每毫升病人的系統(tǒng)血液循環(huán)從0.01至1000微克雙股RNA，這個(gè)水平是在遠(yuǎn)離注入點(diǎn)處的一點(diǎn)、在服用后立即測量得到的。
權(quán)利要求
1.一種診斷病人是否存在與系統(tǒng)免疫功能障礙有關(guān)的神經(jīng)認(rèn)知癥的方法，包括估價(jià)病人末梢血液樣品中的細(xì)胞內(nèi)的2′-5′A合成酶水平，與健康人的2′-5′A合成酶的預(yù)先確定的水平進(jìn)行比較，與健康人的該水平進(jìn)行比較的異常2′-5′A合成酶水平表明存在與系統(tǒng)的免疫功能障礙有關(guān)的神經(jīng)認(rèn)知癥。
2.一種區(qū)分具有相似癥狀的慢性大腦功能障礙和原發(fā)性心理或精神病的方法，包括估價(jià)病人的末梢血液樣品中的細(xì)胞內(nèi)的2′-5′A合成酶水平，與健康人的2′-5′A合成酶的預(yù)先確定的水平進(jìn)行比較，與健康人的該水平進(jìn)行比較的異常的2′-5′A合成酶水平表明存在慢性大腦功能障礙。
3.一種治療患慢性大腦功能障礙的病人的方法，包括給該病人服用足以改善病人臨床狀況數(shù)量的雙股RNA。
4.一種治療患慢性大腦功能障礙的病人的方法，至少由一種下述癥狀來證實(shí)這種障礙的存在認(rèn)知功能的部分減退、損傷了的注意力和抽象能力、記憶力減退、免疫紊亂、或者同時(shí)有兩種癥狀、或者病人的末梢血液細(xì)胞內(nèi)的2′-5′A途徑中有酶改變，該方法包括讓所說病人服用其數(shù)量足以改善病人狀況的雙股RNA。
5.一種治療患有神經(jīng)認(rèn)知癥病人的方法，包括讓該病人服用其數(shù)量足以改善病人臨床狀況的雙股RNA。
6.一種治療患有神經(jīng)認(rèn)知癥病人的方法，至少由一種下述癥狀來證實(shí)這種病的存在認(rèn)知功能部分減退、損傷了的注意力和抽象能力、記憶力減退、免疫紊亂、或者同時(shí)有兩種癥狀，或者病人的末梢血液細(xì)胞內(nèi)的2′-5′A途徑有酶改變，該方法包括讓所說病人服用其數(shù)量足以改善病人狀況的雙股RNA。
7.如權(quán)利要求3、4、5、或6的方法，其中的雙股RNA是失配的。
8.如權(quán)利要求7的方法，其中的失配的雙股RNA是與聚尿苷酸絡(luò)合的聚腺苷酸。
9.如權(quán)利要求7的方法，其中的失配的雙股RNA是一種含1/5到1/30的尿嘧啶奎尼丁基的聚核糖肌苷酸和聚核糖胞苷酸的絡(luò)合物。
10.如權(quán)利要求9的方法，其中的失配的雙股RNA是rIn·r(C11-14，U)n，或者，失配的雙股RNA包含結(jié)合斷裂區(qū)域，并且顯示出rIn·r(C11-14，U)n的有利于治療的比例特性。
11.如權(quán)利要求7的方法，其中所服用的失配的雙股RNA的數(shù)量產(chǎn)生每毫升病人系統(tǒng)血液循環(huán)有從2至1000微克的失配的雙股RNA的水平。
12.如權(quán)利要求3、4、5或6的方法，其中的雙股RNA是有確定結(jié)構(gòu)的短的寡核苷酸，其結(jié)構(gòu)式為5′lock-(I)n-lock3′3′lock-(C)n-lock5′其中的每個(gè)m和n大于5并小于100，I是肌苷磷酸鹽，C是胞苷磷酸鹽，或者為5′lock-〔(I)xA〕j-lock3′3′lock-〔(C)yU〕k-lock3′其中的每個(gè)x和y大于5并小于25，每個(gè)j、和k至少為1并小于10，I和C如上述，A是一種不是I的核苷酸，U是其基與A配對的核苷酸，或者為5′(I)n-hinge-(C)m3′其中的n、m、I和C如上所述，其條件是一個(gè)股內(nèi)的鎖(lock)補(bǔ)加到相對股的鎖(lock)上。
13.如權(quán)利要求12的方法，其中的寡核苷酸是由補(bǔ)加的雜聚物的內(nèi)部定位穩(wěn)定的，鎖、或鏈、或兩者都包含補(bǔ)加的雜聚物的區(qū)域。
14.雙股RNA應(yīng)用于制備一種藥物，用來治療患慢性大腦功能障礙。
15.雙股RNA應(yīng)用于制備一種藥物，用來治療患慢性大腦功能障礙，至少由一種下述癥狀來證實(shí)這種障礙的存在認(rèn)知功能的部分減退、損傷了的注意力和抽象能力、記憶力減退、免疫紊亂，或者同時(shí)有兩種癥狀，或者病人的末梢血液細(xì)胞內(nèi)的2′-5′A途徑中有酶改變。
16.雙股RNA應(yīng)用于制備一種藥物，用來治療患神經(jīng)認(rèn)知癥的病人。
17.雙股RNA應(yīng)用于制備一種藥物，用來治療患神經(jīng)認(rèn)知癥的病人，至少由一種下述癥狀來證實(shí)這種疾病的存在認(rèn)知功能的部分減退、損傷了的注意力和抽象能力、記憶力減退、免疫紊亂，或者同時(shí)有兩種癥狀，或者病人的末梢血液細(xì)胞內(nèi)的2′-5′A途徑中有酶改變。
18.如權(quán)利要求14至17中任何一個(gè)所述的應(yīng)用，其中的雙股RNA是失配的。
19.如權(quán)利要求18的應(yīng)用，其中的失配的雙股RNA是一種包含1/5至1/30的尿嘧啶奎尼丁基的聚腺苷酸和聚尿苷酸的絡(luò)合物。
20.如權(quán)利要求18的應(yīng)用，其中的失配的雙股RNA是一種包含1/5至1/30的尿嘧啶奎尼丁基的聚核糖肌苷酸和聚核糖胞苷酸的絡(luò)合物。
21.如權(quán)利要求20的應(yīng)用，其中的失配的雙股RNA是rIn·r(C11-14，U)n，或者，失配的雙股RNA包含結(jié)合斷裂區(qū)域并且顯示出rIn·r(C11-14，U)n的有利于治療的比例特性。
22.如權(quán)利要求18的應(yīng)用，其中所服用的失配的雙股RNA的數(shù)量對每毫升人的系統(tǒng)的血液循環(huán)產(chǎn)生一個(gè)自2至100微克的失配的雙股RNA的水平。
23.如權(quán)利要求14至17中任何一個(gè)所述的應(yīng)用，其中的雙股RNA是一種有確定結(jié)構(gòu)的短的寡核苷酸，其結(jié)構(gòu)式為5′lock-(I)n-lock3′3′lock-(C)m-lock5′其中的每個(gè)m和n大于5并且小于100，I是肌苷磷酸鹽，C是胞苷磷酸鹽，或者為5′lock-〔(I)xA〕j-lock3′3′lock-〔(C)yU〕k-lock3′其中的每個(gè)x和y大于5并且小于25，每個(gè)j和k至小為1并且小于10，I和C如上述相同，A是一種不是I的核苷酸，U是一種其基與A配對的核苷酸，或者為5′(I)n-hinge-(C)m3′其中的n、m、I和C如上所述確定，條件是在一個(gè)股中的鎖(lock)補(bǔ)加到相對股中的鎖上。
24.如權(quán)利要求23的應(yīng)用，其中的寡核苷酸由補(bǔ)加的雜聚物的內(nèi)部定位來穩(wěn)定，并且鎖、或鏈、或者兩都包含補(bǔ)加的雜聚物的區(qū)域。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種診斷病人是否存在與系統(tǒng)免疫功能障礙有關(guān)的認(rèn)知癥的方法，其包括估價(jià)病人末梢血液樣品中的細(xì)胞內(nèi)的2′A′合成酶水平，與健康人的2′-5′A合成酶的預(yù)先確定的進(jìn)行比較，與健康人的該水平進(jìn)行比較的異常2′-5′A合成平表明存在與系統(tǒng)的免疫功能障礙有關(guān)的神經(jīng)認(rèn)識癥。另外，本發(fā)明還涉及用雙股RNA對這些癥狀的治療。
文檔編號A61P25/28GK1053360SQ9010946
公開日1991年7月31日 申請日期1990年10月16日 優(yōu)先權(quán)日1989年10月16日
發(fā)明者威廉·A·卡特 申請人:赫米研究公司