專利名稱：：有效治療癡呆和輕度認知障礙(mci)并改善認知功能的齊墩果烷三萜皂苷化合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及以下式(1)所表示的齊墩果烷型三蔣皂苷化合物的用途，該類化合物有效用于改善記憶和學習能力，可以作為用于治療和預防癡呆和輕度認知障礙、以及改善包括認知功能的腦功能的健康食品的有效成其中，每個R,、112和Rs為氫或C廣C4烷基；fU為d-C4烷基或d-C4羥基烷基；并且每個Rs和Re為氫或糖，其中Rs和Re中至少一個為選自葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和葡萄糖醛酸的糖。
背景技術：
：三碎皂苷是指具有三薛基團，并與糖或糖鏈形成糖苷鍵或酯鍵的皂苷元(苷元)化合物。根據(jù)皂苷元的類型對三裕皂苷分類。三碎皂苷的典型例子為具有五元環(huán)三萜基團的皂苷，例如齊墩果烷、烏蘇烷、羽扇豆烷、藿烷、蒲公英賽烷等。此外，根據(jù)它們與糖鏈的鍵合位置對皂苷分類。以齊墩果酸為例，在C-3或C-28位鍵合糖鏈的被稱為單糖鏈配糖體(monodesmoside),而在C-3和C-28位鍵合糖鏈的被稱為雙糖鏈配糖體(bisdesmoside)。C-3位以糖香鍵合為主，C-28位以酯4A合為主。與急香鍵合的典型的糖為葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和葡萄糖醛酸等。當皂普以雙糖鏈配糖體的形式存在時，腸道對皂苷的吸收率通常較低。然而，皂苷C-28位上存在的酯鍵容易被腸道細菌的酶水解。當糖鏈被除去時，經(jīng)糖苷鍵連接到C-3位的糖鏈末端從末端開始被部分水解，然后被身體吸收[KimDH，BaeEA，HanMJ,ParkHJ,ChoiJW.MetabolismofKalopanaxsaponinKbyhumanintestinalbacteriaandantirheumatoidarthritisactivityoftheirmetabolites.歷o/尸A"rwSw〃.2002Jan;25(1):68-71.]。相反地，與相應的糖苷相比，三碎皂苷元本身，不受糖的限制，其溶解性低，并且由于其腸道吸收相對低，在動物實驗中表現(xiàn)出的活性低[YoshikawaM，MatsudaH.Antidiabetogenieactivityofoleanolicacidglycosidesfrommedicinalfoodstuffs.歷oFactora.2000;13(1-4):231-7]。隨著全世界老年人口的增長，各種退行性老年病已經(jīng)引發(fā)了社會問題和經(jīng)濟問題。根據(jù)阿爾茨海默病協(xié)會(theAlzheimer'sAssociation)和國家衰老研究所(theNationalInstituteonAging)發(fā)布的統(tǒng)計H據(jù)，大約4百萬美國人患有癡呆。盡管在60歲或更老時發(fā)生癡呆很常見，但是在某些罕見的例子中，甚至在50歲就開始癡呆。在所有65歲或更年長的美國人中，10.3%患有癡呆，每年花費多達950億美元治療癡呆。才艮據(jù)韓國健康與社會事務研究院(theKoreaInstituteforHealthandSocialAffairs)的報告，癡呆患者的人數(shù)已經(jīng)隨著老年人數(shù)量的增長而快速增長。預計65歲或更年長的癡呆患者人數(shù)到2020年增長至9%，由1995年的8.3%增長了0.7%。而且，根據(jù)韓國國家統(tǒng)計局(theKoreaNationalStatisticalOffice)的估計，預計患有癡呆的老年人人數(shù)由2000年的277,048人(65歲或更年長的人口的8.3%)增長至2015年的527,068人(9%)和2020年的619,132(9%)。由于癡呆是損害患者生命并破壞患者家庭生活的難治疾病，因此它正在成為嚴重的社會、經(jīng)濟問題，必須加以克服。癡呆可以由多種原因引發(fā)，其主要癥狀的特征在于學習能力和記憶明顯下降。他克林(Tacrine)，1993年由FDA批準的第一種用于癡呆的治療藥物，它可以通過抑制大腦中乙酰膽堿(ACh)的分解，在阿爾茨海默病的早期或中期延緩大約30%的患有阿爾茨海默病患者的認知功能損失。然而，由于它產(chǎn)生大量對肝臟的副作用，現(xiàn)在幾乎不使用。安理申(Aricept),1996年由FDA批準，被用于提高乙酰膽堿的水平。該藥物每天睡前服用一次。其常見副作用包括惡心、腹瀉和疲勞，持續(xù)時間不長。因此，需要開發(fā)具5有良好療效和很少副作用的用于癡呆的新治療手段。為了開發(fā)有效用于改善記憶和學習能力的毒性低的物質，本發(fā)明人進行了深入的研究。結果，他們發(fā)現(xiàn)齊墩果烷型三雜皂苷化合物對于治療癡呆和輕度認知障礙以及改善認知功能是有效的。因此，本發(fā)明的目的是提供用于改善腦功能的治療性藥物和健康食品，其中包含齊墩果烷型三辟皂苷化合物作為有效成分。
發(fā)明內容本發(fā)明涉及用于治療癡呆和輕度認知障礙的治療性藥物或用于改善腦功能的健康食品，其中包括以下式(1)所表示的齊墩果烷型三碎皂香化合物其中，每個Ri、R2和R3為氫或d-C4烷基；114為d-C4烷基或d-C4羥基烷基；并且每個Rs和R6為氫或糖，其中Rs和R6中至少一個為選自葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和葡萄糖醛酸的糖。以下給出對本發(fā)明更詳細的說明。在式(1)所表示的齊墩果烷型三萜皂苷化合物中，由式(la)所表示的齊墩果酸皂苷和由式(lb)表示的常春藤皂苦是相關領域中熟知的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>由式(la)所表示的齊墩果酸為含有作為皂苷元的齊墩果酸的皂苷化合物，并且已知其具有抗癌和抗炎作用[LiJ，GuoWJ,YangQY.EffectsofursolicacidandoleanolicacidonhumancoloncarcinomacelllineHCT15.『orWJGfl^rae"^ra/.2002Jun;8(3):493-5],中樞神經(jīng)保護作用[QianYH,LiuY,HuHT,RenHM，ChenXL,XuJH.TheeffectsofthetotalsaponinofDipsacusasperoidesonthedamageofculturedneuronsinducedby(3-amyloidprotein25-35]，抗病毒作用[KapilA,SharmaS.Effectofoleanolicacidoncomplementinadjuvant-andcarrageenan-inducedinflammationinrats./尸/wnw尸/wrmflco/.1995Jul;47(7):585-7]，抗高脂血癥作用[LeeKT,SohnIC,KimDH，ChoiJW，KwonSH,ParkHJ.HypoglycemicandhypolipidemiceffectsoftectorigeninandkaikasaponinIIIinthestreptozotocin-lnduceddiabeticratandtheirantioxidantactivityz.wv"ro.J/rA尸/wrm2000Oct;23(5):461-6],抗過壽丈作用[ParkKH，ParkJ,KohD,LimY.Effectofsaikosaponin-A,atriterpenoidglycoside,isolatedfrom5M//ewrwm/^/cafw附onexperimentalallergicasthma.尸/yto^eries.2002Jun;16(4):359-63],免疫4空制作用[JuDW,ZhengQY,CaoX，F(xiàn)angJ,WangHB.EsculentosideAinhibitstumornecrosisfactor,interleukin-1,andinterleukin-6productioninducedbylipopolysaccharideinmice.尸/armaco/og7.1998Apr;56(4):187-95]和抗血管生成作用[韓國專利No.101,480]。而且，由式(lb)所表示的常春藤皂苷為含有作為皂苦元的常春藤皂芬元的化合物，并且已知其具有抗炎作用[KwakWJ,HanCK，ChangHW,KimHP,KangSS,SonKH.LonicerosideC,anantiinflammatorysaponinfrom丄om'cera乂opom'ca.CAem尸Afl/7w5w〃(7b^yo).2003Mar;51(3):333-5]，緩解疼痛的作用[ChoiJ，HuhK,KimSH,LeeKT,ParkHJ,HanYN.Antinociceptiveandanti-rheumatoidaleffectsofi^a/opawax//由sextractanditssaponincomponentsinexperimentalanimals.Jar扁co/.2002Feb;79(2):199-204]，抗氧化作用[ChoiJ,HuhK,KimSH,LeeKT，LeeHK，ParkHJ.KalopanaxsaponinAfromXa/o，wox/z'c加,apotentantioxidantintherheumatoidalrattreatedwithFreund'scompleteadjuvantreagent./^/wopAanwaco/.2002Jan;79(1):113-8]以及降血糖的作用[KimDH,YuKW,BaeEA，ParkHJ，ChoiJW.MetabolismofKalopanaxsaponinBandHbyhumanintestinalbacteriaandantidiabeticactivityoftheirmetabolites.5zW尸Aarm1998Apr;21(4):360-5]。但是，直到現(xiàn)在，還不知道式(1)所表示的齊墩果烷型三碎皂苷化合物，包括齊墩果酸皂苷或常春藤皂苷在治療癡呆和輕度認知障礙以及改善腦功能方面的作用。曰本專利公開No.2000-247993指出齊墩果酸對cj受體的高親和力，并且公開了其有效治療各種與(j受體相關的腦疾病，包括精神分裂癥、抑郁、焦慮、腦血管疾病、老年人行為障礙、阿爾茨海默病、帕金森癥、亨廷頓舞蹈癥、藥物成癮、應激等。然而，該專利沒有給出與治療疾病直接相關的體內動物實驗或體外神經(jīng)細胞實驗結果。含有作為皂苷元的齊墩果酸或常春藤皂苷元的齊墩果烷型三萜皂苷化合物可以是C-3或C-28位鍵合糖的單糖鏈配糖體形式，或者是C-3和C-28位鍵合糖的雙糖鏈配糖體形式。依據(jù)不同的糖鏈組合，現(xiàn)有超過150種皂香化合物[KangSamSik,Triterpenoidsaponin,SeoulNationalUniversityPress,1996,TradiMedDatabase]。齊墩果酸皂苷牛膝皂苷C,奧絲瓜普A-G，木通皂苷Stj，白頭翁皂香A，araliasaponinsXII-XVIII,惚木皂戒D,金盞草三碎香A-B，betavulgarosidesIV-V，柴胡三萜皂苷S1,錦雞兒苷A，竹節(jié)人參皂苷IB、IV，刺五加皂苷Al、C4、C3、Dl，clematichinenosideA、C，威靈仙前急香元CP9、CP9a、CP7a、CP2b,繡球藤皂苷E、F,藏紅花(Cractwm"vm)齊;教果酸急香，elatosidesB、D，刺五加苷K,fatsiasideAl,hederacolchisideE，常春藤皂苷B，虎掌草皂苷A、B、C，lablabosideA，絲瓜香H，6'-曱基地膚子急香I，地膚子急苷I、IC、IIB，3-0-oc-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸，3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸-28-0-(3-D-葡萄糖基(l46)(3-D-葡萄糖苷，3-0-a-L-吡喃鼠李糖基(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0+-0-吡喃木糖基(1—6)-卩-0-吡喃葡萄糖基酯，3-0-P-D-吡喃半乳糖基(1—2)-(3-D-吡喃葡萄糖基齊墩果酸，3-0-(3-D-吡喃葡萄糖基(1—3)-a-L-吡喃鼠李糖基(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸，3-0-P-D-吡喃葡萄糖基(1—3)-a-L-吡喃鼠李糖基(l42)-a-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸-28-龍膽二糖苦(gentiobiocide),28-0-p-D-吡喃葡萄糖基齊墩果酸，3-0-p-D-吡喃葡萄糖基齊墩果酸，3-0-p-D-吡喃葡萄糖醛酸基齊墩果酸(glucolopyranosyloleanolicacid),3-0-(3-D-他喃核糖基(ribopyrosyl)(1—3)-a-L-吡喃鼠李糖基(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸，3-0-P-D-吡喃木糖基(1—3)-a-L-吡喃鼠李糖基(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸，3-0-卩-D-木糖基(1—4)-卩-D-葡萄糖基(1—4)-a-L-鼠李糖基(1—3)-|3-D-葡萄糖基(1—3)-a-L-鼠李糖基(l—2)-a-阿拉伯糖基齊墩果酸28-O-p-D-葡萄糖基(1—6)-P-D-葡萄糖基酯，2'-0-p比喃葡萄糖基地膚子皂苷Ic,2'-0-吡喃葡萄糖基地膚子皂普Ic,3-0-P-D-吡喃木糖基(1—4)-P-D-吡喃葡萄糖基(l—3)-a-L-吡喃鼠李糖基(l—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖苷齊墩果酸28-0-p-D-吡喃葡萄糖基(1—6)-P-D-吡喃葡萄糖基酯，齊墩果酸-3-0-新橙皮苷，齊墩果酸3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖基-28-0-P-D-吡喃葡萄糖基(1—6)-P-D-吡喃葡萄糖基酯，齊墩果酸-3-0-(3-D-吡喃葡萄糖基(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖苷，果皮皂普J3，前皂苷元CP4，quinatosideD,竹節(jié)香附皂苷A、C、D、E,兩頭尖Z皂苷R10、Rll,草玉梅皂苷，spinacosidesC、D,菠菜皂苷A，龍牙惚木皂苷II、III、VI，通脫木皂苷R-3、R-l-a,R-4b,udosaponin曱酯A-C。常春藤皂苷木通(Akebia)皂芬A-G,木通皂苷(akeboside)，川續(xù)斷皂普F、Hl,驢蹄草普D，威巖仙皂苦D、F，威靈仙原皂苷元CP10、CP10a、Cp8a、CP3b、CP0、CP3a、CP2a,3-0-p-D-吡喃木糖基(1—3)-a-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元-28-O-a-L-吡喃鼠李糖基(l—4)-P-D-吡喃葡萄糖基(1—6)-(3-D-吡喃葡萄糖苷，常春藤皂苷元-3-0-a-L-阿拉伯糖苷，常春藤皂苷元-3-0-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基]-28-0-p-D-吡喃木糖基(1—6)-P-D-吡喃葡萄糖基酯，常春藤皂苷元-3-0-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基]-28-0-[3-0-乙酰基-P-D-吡喃葡萄糖基(l—6)-p-D-吡喃葡萄糖苷，常春藤皂苷元-3-0-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基]-28-0-[3-0-乙?；?(3-D-吡喃木糖基(1—6)-|3-D-吡喃葡萄糖苷，常春藤皂苷元-3-O-a-L-吡喃鼠李糖基(1—3)-P-D-吡喃葡萄糖基(l—3)-a-L-吡喃鼠李糖基(l—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基28-0-(3-D-吡喃葡萄糖基(1—6)-P-D-吡喃葡萄糖基酯，常春藤皂苷元-3-0-p-D-吡喃葡萄糖基(1—3)-a-L-吡喃鼠李糖基(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基28-0-p-D-吡喃葡萄糖基(1—6)-(3-D-吡喃葡萄糖基酯，常春藤皂苷元_3-0-(4-0-乙酰基)-a-L-吡喃阿拉伯糖基28-0-P-D-吡喃葡萄糖基(1—6)-P-D-吡喃葡萄糖基酯，刺楸皂苷B、G、JLa、JLb，牡丹草苷A、B、9絲瓜苷A、E,無患子皂苷EI、G、X、Y2、YI，4'-0-乙酰基木通皂苷D,3-0-[a-L-阿拉伯糖基]常春藤皂香元-28-0-[p-D-葡萄糖基]酯，3-0-a-L-吡喃鼠李糖基(1—3)P-D-葡萄糖基(1—3)-a-D-鼠李糖基(1—2)-a-阿拉伯糖基常春籐皂苷元-28-0-P-D-葡萄糖基(1—6)p-D-葡萄糖基酯，3-0-P-D-吡喃葡萄糖基(l—3)-a-L-吡喃鼠李糖基(l—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元，3-0-(3-D-吡喃葡萄糖基常春藤皂苷元，3-0-(p-D-葡萄糖基(1—4)-a-L-鼠李糖基(1—3)(3-D-葡萄糖基(l—3)-a-D-鼠李糖基(l—2)-a-阿拉伯糖基常春藤皂苷元-28-0-P-D-葡萄糖基(l—6)-(3-D-葡萄糖基酯，3-0-((3-D-葡萄糖基(1—4)-a-L-鼠李糖基(1—3)-(3-D-葡萄糖基(1—3)-a-L-鼠李糖基(1—2)-a-阿拉伯糖基常春藤皂苷元，3-0-(卩-D-木糖基(1—勺p-D-葡萄糖基(1—4)-a-L-鼠李糖基(1—3)-(3-D-葡萄糖基(1—3)-a-L-阿拉伯糖基(1—2)-a-阿拉伯糖基常春藤皂苷元，3-0-[(2'-0-乙?；?-a-L-吡喃阿拉伯糖基(1—6)-(3-D-吡喃葡萄糖基]常春藤皂苷元，3-0-(2'-0-乙?；?-a-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元陽28-0-[p-D-p比喃葡萄糖基(1—6)-卩-D-p比喃葡萄糖苷],percarpsaponinsC、J2、G、K,白頭翁香A、B、C,quinatosidesA、B、Q,無患子皂苷A、B、C，staunosidesA、B、D、E,taurosideG3，udosaponin曱酉旨D、E、F。包含齊墩果酸皂苷和常春藤皂苷的齊墩果烷型三碎皂苷化合物是由以下植物提取的例如牛膝屬、莧屬等的莧科植物；例如五加屬、橡木屬、八角金盤屬、刺楸屬、人參屬、通脫木屬等的五加科植物；例如Sow^Z"gaw/"a屬等的落葵科植物；例如紅毛七屬等的小檗科植物；例如牛舌草屬等的紫草科植物；例如忍冬屬等的忍冬科植物；例如藜屬等的藜科植物；例如盒子草屬、絲瓜屬、苦瓜屬等的葫聲科植物；例如川續(xù)斷屬等的川續(xù)斷科植物；例如尸M,rawy'Zva屬等的大戟科植物；例如七葉樹屬等的七葉樹科植物；例如木通屬等的木通科植物；例如金合歡屬、合歡屬(爿/Z^z^)、鐵木豆屬(5W^^fl^.)等的豆科植物；例如山柚子屬等的山柚子科植物；例如商陸屬等的商陸科植物；例如銀蓮花屬、鐵線蓮屬、常春藤屬(i/e&m印.)、白頭翁屬等的毛莨科植物；例如山黃皮屬、Xeram戶/^屬等的茜草科植物；例如番龍眼屬，無患子屬，77'"o^a屬等的無患子科植物；例如敗醬屬等的敗醬科植物。本發(fā)明人進行了動物試驗，并且結果表明，與沒有給藥的對照組相比，一組給予東萊菪堿(lmg/kg),已知東K菪堿通過抑制神經(jīng)遞質的傳遞減退記憶功能，另一組在給予東萊菪堿1小時后給予式(1)所表示的齊墩果烷型三碎皂香化合物，觀察到明顯的記憶改善效果。因此，式(1)所表示的齊墩果烷型三碎皂苷化合物可以用作藥物的有效成分，用于治療癡呆和輕度認知障礙或作為健康食品改善認知功能。包含作為有效成分的式(1)所表示的齊墩果烷型三薛皂苷化合物的藥物可以以能夠口服或非口服給藥的常規(guī)藥物形式存在。在用于口服或非口服給藥的藥物的制備中，可以使用通常使用的藥學或營養(yǎng)學上可接受的稀釋劑或賦形劑，如填充劑、膨脹劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、表面活性劑等。用于口服給藥的固體藥物的例子為片劑、丸劑、粉劑、顆粒、膠嚢等。固體藥物是通過將至少一種賦形劑，如淀粉、碳酸鉤、蔗糖、乳糖、明膠等與木酚素、內酯或其衍生物混合來制備的。而且，除了賦形劑以外，可以加入表面活性劑，如硬脂酸鎂和滑石。用于口服的液體藥物的例子為懸浮液、內用液體藥物、乳液、糖漿等。除了如水和液體石蠟的簡單稀釋劑之外，可以包括各種賦形劑，例如潤濕劑、甜味劑、香料、防腐劑等。用于非口服給藥的藥物的例子為無菌水溶液、水不溶性溶液、懸浮液、乳液、凍干藥物和栓劑。水不溶性溶液或懸浮液包括丙二醇，聚乙二醇，如橄欖油的植物油，如油酸乙酯的可注射酯等。Witepsol、聚乙二醇、Tween61、可可脂、月桂精脂(laurinfat)、甘油明膠等可以用作栓劑的基質?？紤]到身體的吸收度、失活的程度、排泄速率、年齡、性別、使用者的身體狀況等，適當選擇藥物中有效成分的含量?；谑?1)所表示的齊墩果烷型三碎皂苷化合物，推薦劑量為0.1-10mg/kg/天，更優(yōu)選為0.5-5mg/kg/天?？梢悦刻旖o藥1至3次。而且，可以以包含作為活性成分的化合物的健康食品的形式提供式(1)所表示的齊墩果烷型三碎皂苷化合物。在本說明書中，術語"健康食品"是指常規(guī)食品，或制成膠嚢、粉狀、懸浮液等形式的食品，其中已經(jīng)加入了式(1)所表示的齊墩果烷型三薛皂苷化合物。當其被攝入時，健康食品提供了特別的與健康有關的效果。但是，與常規(guī)藥物不同，由于它是以食品方式制成的，即使在長期使用后也不會引起任何副作用。圖1為顯示本發(fā)明的齊墩果烷型三辟皂苷化合物在口服給藥一次后改善記憶能力方面的效果的圖。具體實施例方式根據(jù)以下實施例所示，說明本發(fā)明的應用和優(yōu)選實施方案。然而，應理解考慮到本發(fā)明公開的內容，所屬領域技術人員可以在本發(fā)明的精神和范圍內進行修改和改進。實施例l:齊墩果烷型三碎皂普的提取從以下已知含有大量齊墩果酸皂普和常青藤皂苷的草藥中按照下述方法分離齊墩果酸皂苷和常青藤皂苷。每lkg(干重)的遼東橡木(^ra/z.ae/a^a),白頭翁(尸M/sa07/acAz.we朋Zs)，忍冬(丄om'cera乂a/om'ca)和刺浙大(Xa/opawaxj;z'c^s)用7L的50%乙醇回流提取4小時。該步驟重復2次。過濾提取物并使用旋轉蒸發(fā)器在5(TC下減壓濃縮。向得到的濃縮物加水至約5倍量(V/W)體積。得到的懸浮液與等體積的水飽和正丁醇混合，置于分液漏斗中，振搖并放置24小時。分離上面的丁醇層。再分離2-3次后，使用蒸發(fā)器濃縮丁醇部分，在真空箱中完全除去溶劑。使用十八烷基硅烷化硅膠樹脂(YMC*GELODS-A12nm,S-150m)對正丁醇部分進行柱色譜層析。樹脂的量為250g，或樣品量(10g)的25倍量。使用分步梯度法，其中溶劑的曱醇含量由10%(V/V)曱醇以10%(V/V)的比例逐步提高，10%(V/V)曱醇的量達到樹脂體積2-3倍量。只取經(jīng)70%、80%和90%曱醇溶劑(V/V)分離的部分，盡可能多地濃縮皂苷化合物。實施例2:齊墩果烷型三薛皂苷的分離和結構分析使用乙腈/水混合物溶劑對曱醇部分進行高效液相色譜(HPLC)層析。使用PDA檢測器，選取210nm處具有最大吸收值的主峰，該主峰表示特定的三薛吸收譜。隨后，采用乙腈/水混合物溶劑以9.5mL/分鐘的流速進行制備型HPLC來分離選定的峰。使用蒸發(fā)器濃縮后，在真空箱中干燥完全除去溶劑。使用YMCJ'SphereODS-H80柱并在210nm處進行成分分析。在2NH2S04的酸性條件下，10(TC下加熱60分鐘水解分離的峰的成分，除去皂苷的糖。得到的產(chǎn)品連同購自Sigma的齊墩果酸和常青藤皂苷元標準物質通過HPLC進行分析。被確認為齊墩果酸皂苷或常青藤皂苷的峰的成分被進一步分離，得到下表1中列出的8種物質。進行iH匿NMR(500MHz)，13C-NMR(125MHz)，DEPT和2DNMR。H」HCOSY、HMQC、HMBC、TOCSY、NOESY)分析來確定分離的物質的結構。而且，為了確定糖的種類和數(shù)量，采用糖分析系統(tǒng)分析水解的糖，并且在TMS衍生化后通過GC分析水解的糖。對每種糖的結構進行2DNMR(iH」HCOSY、HMQC、HMBC、TOCSY)分析。通過2DNMR(HMBC、NOESY)分析糖的結合。獲得100-500mg的表1中給出的8種齊墩果酸皂苷或常青藤皂苷物質。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例3:避暗測試(PassiveAvoidanceTest)進行避暗測試以確定上述8種齊墩果酸皂苷或常春藤皂香物質在體內改善記憶的效果。此外，測試中包括了皂苷化合物的普元，齊墩果酸和常春藤皂苷元。使用尺寸為50cmx15cmx40cm的穿梭箱。該箱被閘門分成兩個隔室。一個隔室被照得明亮，另一個用黑布覆蓋。將小鼠置于明亮的隔室中。然后，當閘門打開時，由于小鼠喜歡黑暗，小鼠在20秒內進入黑暗的隔室中。以這種方式確定等待時間，或直到小鼠離開明亮的隔室并進入黑暗隔室所消耗的時間。第一天，進行該訓練測試直到所有小鼠在20秒內進入黑暗隔室。第二天，將所有訓練的小鼠放在明亮的隔室內，每次一個，并且允許其進入黑暗隔室。當小鼠進入黑暗隔室時，通過裝備在黑暗隔室地板上的電網(wǎng)電擊足部(0.8mA，3秒)。在這種習得性測試后24小時，將小鼠置于明亮的隔室中，并允許其進入黑暗的隔室中。于是，正常的小鼠記住了前一天的電擊，遲疑進入黑暗的隔室中。經(jīng)測量，直到小鼠進入黑暗隔室中所花費的時間高達300秒。測定停留時間來評價記憶改善效果。對照組沒有給予東莨菪堿或藥物。給予已知具有通過抑制神經(jīng)遞質的傳遞來減退記憶功能的東莨菪石咸(1mg/kg)。l小時后，給予皂苷(30mg/kg)和苷元(30mg/kg)，安理申(多奈哌齊，1mg/kg，陽性對照)和水(陰性對照)。與給予水的陰性對照組相比，口服給予安理申的陽性對照組顯示出的停留時間延長1.6倍。盡管就苷元和糖的組合而言存在一些變化，但是與陰性對照組相比，根據(jù)本發(fā)明的所有8種齊墩果酸皂苷或常春藤皂香物質顯示出的停留時間均延長2.5-3.0倍。而且，這些皂苷顯示出比苷元齊墩果酸(2.4倍)和常春藤急苷元(2.3倍)更好的認知功能改善效果[參見表2和圖l]。因此，可以得出結論，齊墩果酸皂苷和常春藤皂苷有效改善了癡呆中減退的記憶和輕度認知障礙。它們在效果上不僅優(yōu)于用于治療癡呆的安理申，而且優(yōu)于作為皂苷苷元的齊墩果酸和常青藤皂苷元。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>以下給出制備包含作為活性成分的式(1)所表示的齊墩果烷型三碎皂苷化合物的治療性藥物或健康食品的實施例。制備實施例1:粉劑和膠嚢的制備50mg的齊墩果烷型三碎皂苷化合物與74mg乳糖、15mg微晶纖維素和1mg硬脂酸鎂混合獲得粉劑。使用適當?shù)脑O備將得到的粉劑裝填入No.5明膠膠囊中。制備實施例2:液體藥物的制備將50mg齊墩果烷型三萜皂苷化合物加到20g糖、20g異構化糖和足量的檸檬香料中。加入無菌純水至總體積為100mL。將得到的液體裝入褐色并瓦中并滅菌。制備實施例3:健康食品的制備將100mg的式(1)所表示的齊墩果烷型三辟皂普化合物與100mg人參提取物、100mg綠茶提取物、100mg維生素C、120mg粉狀維生素E、2mg乳酸鐵、2mg氧化鋅、20mg煙酰胺、5mg維生素A、2mg維生素B1、2mg維生素B2、200mg玉米淀粉和20mg硬脂酸鎂(用于l天)混合。工業(yè)實用性由上述說明顯而易見，式(1)所表示的齊墩果烷型三辟皂苷化合物具有優(yōu)良的記憶改善效果，因此有效用于治療癡呆和輕度認知障礙的藥物以及改善腦功能，包括認知功能的健康食品。所屬領域技術人員將認識到上述說明中公開的概念和特定實施方案可以容易地被用作基礎，用來改進或設計用于實現(xiàn)本發(fā)明相同目的的其它實施方案。所屬領域技術人員還將認識到這樣的等同實施方案不偏離所附權利要求書中闡明的本發(fā)明的精神和范圍。權利要求1.一種有效用于治療和預防癡呆和輕度認知障礙的藥物，該藥物包含作為有效成分的式(1)所表示的齊墩果烷型三萜皂苷化合物其中，每個R1、R2和R3為氫或C1-C4烷基；R4為C1-C4烷基或C1-C4羥基烷基；并且每個R5和R6為氫或糖，其中R5和R6中至少一個為選自葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和葡萄糖醛酸的糖。2.根據(jù)權利要求1所述的藥物，其中所述式(1)所表示的化合物為選自刺五力口香K、常春藤急香B、hederacolchisideE、elatosideA、elatosideC、忍冬苦苷A、忍冬苦苷B和刺楸皂苷B的齊墩果烷型三碎皂苷化合物。3.—種有效用于改善腦功能的健康食品，該健康食品包含式(1)所表示的齊墩果烷型三辟皂苷化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，每個R^、R2和R3為氫或C廣C4烷基；R4為CrQ烷基或d-C4羥基烷基；并且每個Rs和尺6為氫或糖，其中Rs和R6中至少一個為選自葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和葡萄糖醛酸的糖。4.根據(jù)權利要求1所述的健康食品，其中所述式(1)所表示的化合物為選自刺五加苷K、常春藤急香B、hederacolchisideE、elatosideA、elatosideC、忍冬苦苷A、忍冬苦苷B和刺楸皂普B的齊墩果烷型三辟皂苷化合物。全文摘要本發(fā)明涉及有效用于改善記憶和學習能力的齊墩果烷型三萜皂苷化合物的用途，它們作為用于治療和預防癡呆和輕度認知障礙的藥物以及用于改善腦功能，包括認知功能的健康食品的有效成分。文檔編號A61K31/01GK101528209SQ200680056220公開日2009年9月9日申請日期2006年10月24日優(yōu)先權日2006年10月24日發(fā)明者尹世晙,崔元洛,李壽敏,林光津,郭義宗,金峰撤,韓昌均申請人:Sk化學株式會社