專利名稱:利用雙鏈rna調(diào)節(jié)與愛滋病病毒相關(guān)的行為的制作方法
愛滋病(AIDS.獲得性免疫缺陷綜合癥)已構(gòu)成了二十世紀(jì)對(duì)于人類健康的主要威脅。由于它的生物學(xué)可變性，它在人類個(gè)體之間難以捉模的傳播方式，以及它的使快速檢測(cè)它的存在的方法無能為力的潛伏期，愛滋病已經(jīng)迅速發(fā)展成為一種前所未有的流行病疑難病癥。實(shí)際上上，即使采用那些已經(jīng)應(yīng)用到提高診斷能力中去的值得考慮的對(duì)策，現(xiàn)有技術(shù)仍不能在世界上任何地方使這種疾病得以有效地控制。(參見國家衛(wèi)生研究所〔Bethesda，Maryland〕疾病控制中心和國家衛(wèi)生研究所藥物與生物制品中心于1985年7月31日召集的題目為“Experienee With HTLV-Ⅲ Antibody Testing，an Update on Screening，Laboratory and Epidemiological Correlations”的專題討論會(huì)的會(huì)議記錄，并參見Budiansky，S.《Nature》，316卷，96頁，1985年7月11日)對(duì)于愛滋病病毒的存在有兩種不同的標(biāo)志。LAV是對(duì)法國巴黎巴士德研究所分離出來的愛滋病病毒的簡(jiǎn)稱，HTLV-Ⅲ是美國馬里蘭洲貝塞斯達(dá)國立衛(wèi)生研究所分離出來的愛滋病病毒的簡(jiǎn)稱。本文中經(jīng)常提到的愛滋病病毒是一般的或是指定名稱的。
現(xiàn)行治療方案采用下列兩種方法之一免疫學(xué)方法(疫苗產(chǎn)生)或直接攻擊病毒本身(抗病毒療法)。雖然疫苗產(chǎn)生方法開始時(shí)顯示出極大的前途(至少在理論上如此)，但目前有關(guān)病毒組成的新的知識(shí)卻在很大程度上打破了這種希望即該病毒顯然很容易突變或改變它的基本生化結(jié)構(gòu)，從而關(guān)健性的病毒抗原“決定基”-疫苗發(fā)揮有效作用所必需的結(jié)構(gòu)-就很容易發(fā)生突變或改變。例如，最近對(duì)加利福尼亞洲、馬里蘭洲和英格蘭分離出來的HTLV-Ⅲ病毒的基因組成進(jìn)行精細(xì)分析后，發(fā)現(xiàn)它們彼此明顯不同。這些研究暗示，通過接種疫苗來抵抗愛滋病。將不會(huì)具有象直接抗脊髓灰質(zhì)炎病毒，麻疹病毒等的大部分其它疫苗一樣的廣泛而持久效果。
對(duì)于另一種療法，即直接抗病毒療法，其它科學(xué)家已經(jīng)試驗(yàn)過幾種化合物，包括HPA-23，蘇拉明、ribavirin。干擾素和fascarnet等。這些藥物已經(jīng)引入到實(shí)驗(yàn)室或者臨床研究中，然而迄今幾乎沒有獲得任何治療成功的證據(jù)。事實(shí)上，在幾乎每一種情況下都有關(guān)于其高毒性和/或劇烈付作用的報(bào)導(dǎo)(如見1985年8月5日由W.Clack在《Newsweek》〔第71頁〕上發(fā)表的綜述和由C.Wallis于1985年8月12日在《Time》上發(fā)表的文章〔40-47頁〕)。實(shí)際上這些毒藥中沒有一種是新的或能夠有選擇性地直接抵抗?jié)撛谖蓙y的，即愛滋病毒病毒在某些細(xì)胞中繁殖的。例如HPA-23是一種含重金屬的組合物(使人聯(lián)想到二十年代或者青霉素問世前的人們利用砷劑治療性病);蘇拉明實(shí)際上是一種抗寄生(睡眠病)化合物，而fascarnet是一種抗皰疹病毒化合物。后兩種化合物可以抑制一種與愛滋病病毒相關(guān)的酶的活性，這種酶被稱作“逆轉(zhuǎn)錄酶”，但是，實(shí)際上還沒有證據(jù)證明象這樣一種酶促抑制會(huì)導(dǎo)致任何治療或疾病的予防/改善作用。與此類似，干擾素作為一種象上面提到過的化合物一樣的有毒的和無特異的化合物，對(duì)于與愛滋病病毒有關(guān)的腫瘤的治療可能具有有限的作用，但是大量的研究表明它作為一種抵抗愛滋病病毒或大部分其它病毒的抗病毒劑，其前途是渺茫的。
缺對(duì)雙鏈RNA是大分子RNA的已知形式之一(見美國專利4，024，222號(hào)和美國專利4，130，641號(hào))，在該形式中，由于雙螺旋不穩(wěn)定，而妨礙了堿基配對(duì)。人們所熟知的缺對(duì)雙鏈RNA的干擾素誘導(dǎo)特性表明了一種與干擾素的誘導(dǎo)本身無關(guān)的機(jī)制(如，見1983年8月15日遞交的題為“雙鏈RNA對(duì)腫瘤細(xì)胞的抗增殖作用”的歐洲專利申請(qǐng)833054265號(hào))。一個(gè)典型的用于治療的缺對(duì)雙鏈RNA是通過多次黃嘌呤核糖核苷酸與多胞嘧啶/尿嘧啶核糖核苷酸的復(fù)合所形成的雙股RNA，例如，美國馬里蘭洲Rockville HEW Research公司的商標(biāo)為“Ampligen”的產(chǎn)品rIn·r(C12U)n，其中的n為4至29的數(shù)值。已研究了許多與Ampligen具有相似行為的缺對(duì)dsRNA聚合物。與天然和/或合成的其它形成的dsRNA相比，缺對(duì)dsRNA在治療上的關(guān)健優(yōu)點(diǎn)是它們?cè)趧?dòng)物或人體內(nèi)的毒性較小。例如，Lampson等人在美國專利3，666，646號(hào)中提到雙股RNA(dsRNA)的早期復(fù)合體，它們雖然能夠引出與干擾素相關(guān)的各種效應(yīng)，但是它們的毒性排除了它們?cè)诎┌Y或相關(guān)機(jī)能失調(diào)治療上的任何臨床可用性。
本發(fā)明人在其最近的教科書上已經(jīng)詳細(xì)敘述了各種干擾素、干擾素誘導(dǎo)物的已知活性(如見R.W.Ottenfite和G.B.Buttes.Wauel Dekkes主編的《Anticancer and Interferon Agents》一書中由發(fā)明人所撰寫的一章，301-319頁。New Yock，1984;另見由P.E.Come和W.A.Cactes編寫的《Handbook of Experimental Pharmacology on Interferon》，1984由Spcinges Vechag.New Yock和Heidelkeg出版，535-555頁詳細(xì)敘述了dsRNAs的已知性質(zhì))。
現(xiàn)在已經(jīng)知道缺對(duì)dsRNA如Ampligen具有抗某些人類腫瘤，特別是腎癌的臨床效果。雖然目前認(rèn)為dsRNA為一種純粹的“干擾素誘導(dǎo)物”，但正是歐洲專利申請(qǐng)83305426.5號(hào)(本申請(qǐng)人是其發(fā)明人之一)中所充分描述的，dsRNA對(duì)某些完全抗干擾素本身的人類腫瘤是有效的。
與缺乏抗某些腫瘤的活性相似，現(xiàn)已證明所有類型干擾素實(shí)際上在對(duì)付愛滋病病毒方面均沒有明顯的活性
。特別使人感到驚奇的是，已知作為“干擾素誘導(dǎo)物”的缺對(duì)dsRNAs在治療與愛滋病相關(guān)的機(jī)能失調(diào)中具有應(yīng)用價(jià)值。
本發(fā)明敘述了以Amplgen作為舉例的缺對(duì)dsRNA的另一個(gè)新的和使人意想不到的特性，該特性對(duì)于與愛滋病相關(guān)的機(jī)能調(diào)的治療具有使人驚奇的廣泛用途。
本發(fā)明公開了有選擇性的抑制人類病毒，尤其是愛滋病病毒，而對(duì)正常細(xì)胞無顯著毒性的治療方法;阻止、推延或預(yù)防人體受愛滋病病毒感染的方法;一種預(yù)防或治療與愛滋病相關(guān)的機(jī)能失調(diào)的方法;處理人體細(xì)胞和組織產(chǎn)物以預(yù)防或阻止被愛滋病病毒感染或毒害的方法;以及糾正與愛滋病病毒有關(guān)的特定損害的方法，包括免疫系統(tǒng)內(nèi)細(xì)胞上干擾素受體的喪失，細(xì)胞內(nèi)2′-5′A合成酶的減少和免疫系統(tǒng)中被選擇細(xì)胞內(nèi)dsRNAs的減少或喪失。另外，也揭示了用于上述方法的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的方法適合于糾正與愛滋病病毒相關(guān)特定損傷，包括免疫系統(tǒng)中的各種關(guān)健細(xì)胞上干擾素受體的喪失，免疫/機(jī)體防御系統(tǒng)以及免疫/機(jī)體防御系統(tǒng)中各種關(guān)鍵細(xì)胞內(nèi)dsRNA的減少/喪失。
本發(fā)明所指的缺對(duì)dsRNA是一類選自poly(Cn，U)和poly(Cn，G)的共多聚核苷酸(其中的n取4到29的任何整數(shù))，同時(shí)是多次黃嘌呤核苷酸和多胞嘧啶核苷酸復(fù)合物的類似物，是通過修變r(jià)In·rCn以沿多胞嘧啶核苷酸鏈(rCn)摻入未配對(duì)堿基(尿嘧啶或鳥嘌呤)而形成的，或者是通過修飾多次黃嘌呤核苷酸(rIn)的核糖基骨架而形成的。這些用rInr(C12，U)n來表示的rIn的缺對(duì)類似物已在Caites和Ts′o的美國專利4，130，641號(hào)和4，024，222號(hào)中敘述過，在此列入本文的參考文獻(xiàn)。
本發(fā)明所指的藥物組合物包括缺對(duì)dsRNA，也可以是干擾素，以及藥理上可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明所采用的藥物組合物是適于在合適的藥物載體中通過非腸道給藥的。這樣，就可按照現(xiàn)有醫(yī)藥技術(shù)的要求，用無菌水或無熱原水作為溶劑或稀釋劑來制備非腸道溶液，懸浮液和分散體系。另外，也可用生理狀態(tài)可接受的鹽作為稀釋劑。
很清楚，存在于任何劑量單位中活性成分的絕對(duì)量不應(yīng)超過與所用給藥的比率及方式相符的數(shù)量，但另一方面，其用量也應(yīng)足夠以小的劑量達(dá)到預(yù)期的給藥比率。此外，給藥比率還將取決于所期望的藥理作用。
給與的缺對(duì)dsRNA的量達(dá)到每毫升體液0.01到1000毫克是足夠的。當(dāng)與干擾素同時(shí)給藥時(shí)則所加干擾素的量應(yīng)達(dá)到使其最終濃度為每毫升體液0.1-100，000IRU。這里所指的體液是血清、鹽、維生素等的溶液。它們?cè)隗w內(nèi)循環(huán)且浸潤(rùn)組織。
按下列要求將缺對(duì)dsRNA配成水溶液，即將其加入到各種人體細(xì)胞中達(dá)到其暫時(shí)濃度為每毫升液體0.01-250毫克。研究中使用了各種不同的細(xì)胞，各種用于HTLV-Ⅲ(愛滋病病毒)感染的潛在靶細(xì)胞。
下面所敘述的是用H-9細(xì)胞進(jìn)行的典型實(shí)驗(yàn)，該細(xì)胞是一種能被HTLV急性或慢性感染的人淋巴樣細(xì)胞。將其在標(biāo)準(zhǔn)條件下培養(yǎng)(如見Mitsuya等人，Science volame226，papage172，1984)著重對(duì)HTLV酶或HTLV特異性蛋白的存在進(jìn)行幾周的分析，在加入各種濃度的Ampligen之前，之后或同時(shí)加入病毒以模擬各種臨床狀態(tài)。最重要的是仔細(xì)分析細(xì)胞的數(shù)量，形態(tài)學(xué)特征等，以檢測(cè)是否象Mitsuya所述使用其它抑制劑一樣，ds RNA對(duì)于淋巴樣細(xì)胞的生長(zhǎng)具有各種非特異性效應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)過程的不同時(shí)間，分離細(xì)胞采用lee等人(Biochemistry，24卷，551頁，1985)所述的方法，對(duì)2′5′-A寡聚物進(jìn)行HPLC分析。某些A寡聚物當(dāng)以自然狀態(tài)存在時(shí)，能夠使細(xì)胞獲得抗病毒特性，但是以前并沒敘述過或預(yù)見到一種試驗(yàn)化合物(人工合成的)能夠精確地引發(fā)這種有選擇性的自然反應(yīng)，從而增強(qiáng)抗一般的以及特別是愛滋病病毒的自然防御機(jī)制。
表1-Ampligen對(duì)于HLTV-Ⅲ的傳染性的影響實(shí)驗(yàn)A天數(shù) HTLV陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù) 逆轉(zhuǎn)錄酶+藥物 -藥物 +藥物 -藥物4 0 50 1，412 24，2879 7 90 144，632 1，243，300實(shí)驗(yàn)B3 0 0 353 3237 0 0 400 1，20010 0 5 800 2，26114 2 ＞80 1，100 112，24717 5 ＞90 1，200 1，560，000
實(shí)驗(yàn)A是用25倍于靶細(xì)胞的病毒(稱為感染單位)作的，而實(shí)驗(yàn)B是用10倍于病毒的細(xì)胞(指定為H-9細(xì)胞)作的。陽性細(xì)胞百分率是指那些用免疫螢光法測(cè)定的定名為p24和p18的，表達(dá)了HTLV-Ⅲ標(biāo)記物的細(xì)胞;逆轉(zhuǎn)錄酶是指一種采用被稱為poly rA/dT的標(biāo)準(zhǔn)模板在細(xì)胞上清液中所測(cè)得的病毒酶。同時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)在所試驗(yàn)的各種濃度Ampligen時(shí)，細(xì)胞以正常的生長(zhǎng)速度繁殖(高達(dá)每毫升300毫克)。在實(shí)驗(yàn)A和B中，Ampligen(50毫克/毫升)在第一天被加進(jìn)去。HPLC分析顯示(在實(shí)驗(yàn)A或B的3-7天)在2′，5′-oligomer的圖形有一特異的偏移，其結(jié)果是高分子量的寡聚物(很少抗病毒活性)轉(zhuǎn)變?yōu)榈头肿恿康?最大抗病毒活性)對(duì)愛滋病病毒具有選擇性的和強(qiáng)大的抵抗作用的寡聚物。
用各種可能是人體內(nèi)愛滋病病毒靶細(xì)胞的其它人細(xì)胞進(jìn)行了類似實(shí)驗(yàn)，這些細(xì)胞包括NK細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞)，T輔助細(xì)胞，T抑制細(xì)胞和單核細(xì)胞等。在所有情況下，各種濃度的缺對(duì)dsRNA能夠選擇性地抑制和/或阻止HTLV的繁殖，而對(duì)正常細(xì)胞的生長(zhǎng)和成熟無任何影響。培養(yǎng)的T細(xì)胞的增殖是采用所熟知的細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)里面的IL-2因子的標(biāo)準(zhǔn)加入方法而維持的。缺對(duì)dsRNA對(duì)HTLV的選擇性抑制始終與通過HPLC分析所測(cè)定的2′，5′-寡聚物的圖形的特定偏移或提高有關(guān)。
因?yàn)閐sRNA是“干擾素誘導(dǎo)物”，所以可以認(rèn)為它是通過一種干擾素作用機(jī)制生效的，或者可將干擾素本身的活性看作是由dsRNA引出的。因此，下述實(shí)驗(yàn)通過證明面對(duì)由Ampligen所表現(xiàn)的十分有效而特異的抗愛滋病病毒活性，所有類型的干擾素實(shí)際上沒有明顯活性，而確證了本發(fā)明的獨(dú)到之處。
在用LAV感染前18小時(shí)，用250I.U./毫升的重組α-干擾素或250I.U./毫升的天然β-干擾素或50I.U./毫升的天然γ-干擾素或50微克/毫升的Ampligen，將CEM(另一種人T細(xì)胞系)處理，培養(yǎng)15天后，就得到下列數(shù)據(jù)表2-Ampligen對(duì)LAV感染性的影響逆轉(zhuǎn)錄酶 間接免疫螢光(cpm/ml培養(yǎng)液) (與LAV抗體結(jié)合的細(xì)胞百分?jǐn)?shù))殺處理 1，147，000 49%α-干擾素 503，000 5%β-干擾素 1，500，000 60%γ-干擾素 360，000 30%Ampligen 24，000 ＜1%上述數(shù)據(jù)表明了Ampligen對(duì)于病毒復(fù)制的極度抑制作用。左邊指示培養(yǎng)液內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄酶活性。右邊則指示含病毒抗原的培養(yǎng)物中細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。
可見dsRNA(Ampligen)抑制(＞99%)H9(T4)細(xì)胞和CEM(T4)細(xì)胞中的HTLV-Ⅲ/LAN感染。干擾素α、β、γ介于活性與非活性之間。Ampligen對(duì)病毒的抑制作用有很好的選擇，而對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)則沒有任何可測(cè)知的影響。
所以說，Ampligen是通過一種不同于干擾素的機(jī)制來抑制HTLV-Ⅲ/LAV病毒的復(fù)制的。這一發(fā)現(xiàn)提出了Ampligen和干擾素或其它藥物能夠結(jié)合使用。在此，Ampligen將抑制病毒的復(fù)制而干擾素則可用于刺激免疫系統(tǒng)，使其恢復(fù)疾病前的功能。
Ampligen對(duì)于天然抗病毒狀態(tài)的恢復(fù)作用以圖解的形式表示如下，Ampligen以抗病毒方式作用于AIDS/ARC組，恢復(fù)破壞病毒基因組的天然抗病毒RNA酶活性。
因此，該藥物具有抑制病毒制的潛在能力，以及擴(kuò)大免疫應(yīng)答能力。因此，不能將Ampligen簡(jiǎn)單地看作是一種病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，而是通過刺激人體免疫系統(tǒng)和在靶細(xì)胞內(nèi)建立一種抗病毒狀態(tài)的雙重機(jī)制發(fā)揮作用。鑒于Ampligen能夠治療外源干擾素很難起作用的動(dòng)物的病毒感染和病毒誘發(fā)的腫瘤，所以很容易把它與干擾素區(qū)別開來。通過這些觀察即可將Ampligen與許多其它用于治療這種疾病的藥物區(qū)別開來。
在相關(guān)的研究中，已在愛滋病易感者(同性戀者)身上通過愛滋病的病理學(xué)研究，檢定出意想不到的和以前未檢出的生化損傷。這些損傷可被Ampligen糾正，并且解釋了相對(duì)于干擾素或已被試驗(yàn)過的大部分其它化合物的微小活性(如果有的話)，Ampligen的有效的抗病毒活性。
首先，在每六個(gè)愛滋病易感者(同性戀者)和每六個(gè)愛滋病受害者的T淋巴細(xì)胞中觀察到關(guān)鍵性生化共因子dsRNA的丟失。在破碎細(xì)胞后按標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)檢測(cè)dsRNA。由此，可將Ampligen的效果準(zhǔn)確地看作是人體在亞細(xì)細(xì)胞水平上抵抗病毒侵襲所必需的關(guān)鍵性生化統(tǒng)一體的特異性替代療法。當(dāng)天然存在有dsRNA或象通過Ampligen療法一樣加入dsRNA時(shí)，即產(chǎn)生一種活性RNase L以“吃掉”(水解)或破壞病毒mRNA，從而終止或遏制病毒感染。繼在美國首先申請(qǐng)專利后，pseekle等人得出一個(gè)補(bǔ)充性的結(jié)論(見1985年9月發(fā)行的《Journal of Infectious Diseases》，457-465頁，題目為“Interferon-Induced2′-5′Oligoadenylate Synthetase During Interferon Alpha Therapy inHomosexual Men With Kaposi′s SarcomaMarked Deficiency in Biochemical Response to Interferon in Patients With Acquired Immunodeficiency Syndrome”)。他們指出，向取自愛滋病受害者的免疫細(xì)胞中加入干擾素并沒有導(dǎo)致預(yù)期的這種特異性細(xì)胞內(nèi)防御途徑(抵抗各種病毒的第一道防線)的增強(qiáng)。
另外，也發(fā)現(xiàn)愛滋病病毒感染本身導(dǎo)致了干擾素受體的進(jìn)一步喪失或改變(圖解顯示于細(xì)胞表面上)，從而使干擾素不能很好地結(jié)合并進(jìn)而不能發(fā)動(dòng)導(dǎo)致病毒感染被抑制和免疫能力的恢復(fù)/維持的關(guān)鍵生化過程的“級(jí)聯(lián)”。還進(jìn)一步觀察到，異常的低水平2′-5′A合成酶可帶來HTLV-Ⅲ的感染。據(jù)此，由本申請(qǐng)人認(rèn)定愛滋病病毒感染本身的特征在于至少有下列三個(gè)方面的損害(1)干擾素受體的喪失，(2)2′-5′A合成酶的減少，(3)細(xì)胞內(nèi)dsRNA的異常降低;而這些有害的改變可特異地使用Ampligen的dsRNA療法加以糾正。
對(duì)于危險(xiǎn)個(gè)體(被或未被愛滋病病毒感染)，dsRNA作用于生化損傷的下游或遠(yuǎn)端，從而恢復(fù)正常的抗病毒反應(yīng)能力。
dsRNA可被細(xì)胞有效地?cái)z入，因而不需要完整的IFN受體。更進(jìn)一步，缺對(duì)dsRNA也可被用作促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的攝取和分配的生物活性片段。因此，dsRNA具有很容易地通過血腦屏障的潛力，在某些病人體內(nèi)這種屏障可能是殘存的愛滋病病毒儲(chǔ)庫。
dsRNA激活2′-5′A聚合酶，其促進(jìn)活性抗病毒寡核苷酸合成能力較單獨(dú)使用干擾素可提高500倍(dsBAN可使1.6×106個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生2250毫微摩爾的2′-5′Aoligo A，而在同樣情況下200單位/毫升的IFN被導(dǎo)致不到0.5毫微摩爾2-5oligo A的產(chǎn)生)。
本申請(qǐng)人在病情有進(jìn)一步發(fā)展危險(xiǎn)的病人或具有明顯愛滋病癥狀者的NK細(xì)胞中觀察到相似現(xiàn)象，即就AIDS/ARC病人自然殺傷細(xì)胞(NK)的活性水平來說存在有相似狀況。然而，對(duì)NK調(diào)節(jié)的機(jī)制卻所知甚少。
AIDS/ARC病人和“危險(xiǎn)”人群中的健康成員通常具有微弱的免疫監(jiān)視能力(功能性NK和T淋巴細(xì)胞)并且不能被干擾素重新激活。Ampligen則遠(yuǎn)離病變部位發(fā)揮作用且能激活細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞。
血液產(chǎn)品包括用于輸血的全血或其一部分、“包裝”(濃縮)的紅細(xì)胞、包裝的白細(xì)胞、血小板濃縮物或象免疫球蛋白一類的血清蛋白部分。這些血液產(chǎn)品在開始分離時(shí)或冷凍保藏前應(yīng)加進(jìn)適當(dāng)濃度的缺對(duì)dsRNA。或者，在血液產(chǎn)品注射進(jìn)接受者體內(nèi)前立即加入適當(dāng)濃度的dsRNA。在這種情況下操作人員只需簡(jiǎn)單地查閱一下接受者體重與其體液量具有內(nèi)在聯(lián)系的體液量標(biāo)準(zhǔn)表，該體液量是與dsRNA的必要量相平衡的血液液和體液量的總和。一個(gè)60至70公斤的病人大約具有10至12品脫或5至6升的體液量。
以上所述的血液產(chǎn)品可能含有未檢測(cè)出的逆病毒，特別是與其有關(guān)的愛滋病相關(guān)病毒。目的是為上述的血液產(chǎn)品提供一個(gè)最終濃度以防止存在于該血液產(chǎn)品接受者的各種組織中的隱蔽逆病毒的“接種”。當(dāng)污染的輸液細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物在接受者的系統(tǒng)內(nèi)混合和/或分布時(shí)，通過防止該逆病毒的成功接種，我們就可以防止威脅生命的病毒的繁殖。
另一些重要用途是病人的血液暫時(shí)地與獻(xiàn)血者的血液或血液產(chǎn)品相遇的情形下，如通過有損傷的或用于傳遞逆病毒的膜時(shí)。這種設(shè)備的例子包括在心臟手術(shù)、心臟分流手術(shù)、器官移植等時(shí)所用的體外心泵和相關(guān)裝置。這不同于全血或血液產(chǎn)品被輸入病人體內(nèi)的情形。通過一細(xì)胞膜的暫時(shí)暴露僅僅包括暫時(shí)暴露給可能污染的血液，暴露持續(xù)短至幾分鐘或長(zhǎng)至幾小時(shí)則依賴于外科的或其它的醫(yī)療步驟的長(zhǎng)短。利用腎透析裝置進(jìn)行相似的暴露是可能的，其中存在的有效濃度的dsRNA將阻止未檢測(cè)出的逆病毒經(jīng)過細(xì)胞膜且在與這種設(shè)備相聯(lián)的個(gè)體體內(nèi)接種的可能性。
醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)也證實(shí)了愛滋病相關(guān)病毒的通道經(jīng)過鼻和淚分泌物。具有在患者之間轉(zhuǎn)移逆病毒潛力的醫(yī)療設(shè)備和裝置也使用本發(fā)明的缺對(duì)dsRNAs進(jìn)行了充分處理。作為例證的例子包括用于幫助呼吸的吸入劑和吸入劑治療設(shè)備以及用于檢測(cè)和治療眼睛的設(shè)備。含dsRNA的氣霧劑可以噴到該設(shè)備的接觸部分以防止由于大量使用而污染設(shè)備。
包含在或加進(jìn)全血或血液產(chǎn)品中的dsRNA的量將依賴于所用血液或血液產(chǎn)品的整個(gè)稀釋度。首先根據(jù)病人的大小測(cè)定出病人的組織容積，然后計(jì)算出dsRNA的量。被輸入的血液產(chǎn)品需要更大濃度的dsRNA，因?yàn)榕c使用體外血泵或透析設(shè)備相比其稀釋量相當(dāng)大。用于不稀釋的使用量最好在0.01-200mcg/每毫升體液。與此相比，對(duì)于通常由350和500毫升容器提供的全血，一個(gè)60公斤的帶有5至6升體液量的病人將需要大約200毫克的dsRNA，以達(dá)到40mcg的平衡濃度。
實(shí)施例對(duì)一個(gè)帶有與愛滋病相關(guān)的中間體嚴(yán)格的復(fù)合物的60公斤成年男子(淋巴結(jié)增大并且由于淋巴結(jié)的增大而幾乎有一年不能吃固體食物，愛滋病病毒的濃度大于每毫升血液105病毒顆粒而沒有腫瘤或其它感染跡象)采用靜脈滴注法用200毫克與生理鹽水混合的缺對(duì)dsRNA(Ampligen)處理30分鐘。這種灌輸導(dǎo)致當(dāng)dsRNA在體內(nèi)完全循環(huán)且與細(xì)胞處的體液充分平衡時(shí)其濃度達(dá)到大約每毫升體液40mcg(0.04毫克)。dsRNA在間隙為2至3天的6個(gè)連續(xù)療程中被輸入病人體內(nèi)以足夠清除病人體內(nèi)的所有可檢測(cè)的與愛滋病相關(guān)病毒和糾正病人的退化了的免疫功能。T4/T8淋巴細(xì)胞的比值提高50%提示了免疫功能的恢復(fù)，該比值通常被認(rèn)為是對(duì)于逆病毒的總的免疫力的可靠尺度。進(jìn)而言之，在治療結(jié)束時(shí)，通過皮試所測(cè)定的病人免疫能力從服用缺對(duì)dsRNA之前所測(cè)定的無反應(yīng)狀態(tài)恢復(fù)到正常水平。病人在治療結(jié)束時(shí)又能夠吃固體食物且病情一步一步好轉(zhuǎn)。
所觀察到的病人以服用Ampligen前的無反應(yīng)狀態(tài)恢復(fù)轉(zhuǎn)變成治療結(jié)束時(shí)的正常狀態(tài)是一個(gè)顯著結(jié)果，具有令人信服的價(jià)值。
權(quán)利要求
1.一種制備用于預(yù)防或治療愛滋病的組合物的方法，它是由抑制愛滋病量的dsRNA和抑制愛滋病量的干擾素組合而成。
2.如權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于其中的dsRNA的量應(yīng)在給藥后使病人體內(nèi)達(dá)到每毫升體液0.01至1000毫克的水平，干擾素的量達(dá)到每毫升體液0.01至1000毫克的水平。
3.如權(quán)利要求
1所述的方法，其中dsRNA是缺對(duì)dsRNA。
4.如權(quán)利要求
3所述的方法，其中缺對(duì)dsRNA是rIn·(C12I)n。
5.一種制備組合物的方法，其特征在于該組合物包括人血或其一部分以及抑制愛滋病有效量的缺對(duì)dsRNA。
6.一種制備組合物的方法，其特征在于該組合物包括人細(xì)胞和抑制愛滋病有效量的缺對(duì)dsRNA。
7.一種賦予人體來源的生物液以抵抗愛滋病病毒感染能力的方法，其特征在于使所說的生物液與以抑制愛滋病量的dsRNA混合或接觸。
8.如權(quán)利要求
7所述的方法，其中dsRNA是缺對(duì)dsRNA。
9.如權(quán)利要求
8所述的方法，其中缺對(duì)dsRNA是rIn·(C12I)n。
10.如權(quán)利要求
7所述的方法，其中生物液是人的血液或其一部分分。
11.一種使來源于人體的細(xì)胞具有抵抗愛滋病病毒感染的能力的方法，包括將所說的細(xì)胞與抑制愛滋病有效量的dsRNA接觸。
12.如權(quán)利要求
11所述的方法，其中dsRNA是缺對(duì)dsRNA。
13.如權(quán)利要求
12所述的方法，其中缺對(duì)dsRNA是rIn·(C12I)n。
14.如權(quán)利要求
11所述的方法，其中細(xì)胞是選自一組包括NK細(xì)胞、T細(xì)胞、T抑制細(xì)胞、T輔助細(xì)胞、精子和胎兒細(xì)胞的細(xì)胞。
15.一種由處理的非腸道體液除去或失活愛滋病病毒的方法，包括使所說的非腸道液與含有抑制愛滋病有效量的缺對(duì)dsRNA的組合物接觸。
專利摘要
選擇性地激活已受愛滋病病毒感染的或具有感染危險(xiǎn)的人體細(xì)胞內(nèi)潛在天然防御系統(tǒng)。本發(fā)明描述了從微妙的早期免疫學(xué)損害到晚期疾病狀況的臨床各期愛滋病病毒相關(guān)病變的特異性治療手段。同時(shí)還敘述了預(yù)防或阻止愛滋病病毒相關(guān)病變的方法，如將缺對(duì)ds RNA引入用于人體的(如輸血)或環(huán)繞人體(如透析)的各種血液產(chǎn)品或生物液。
文檔編號(hào)A61K38/20GK86105436SQ86105436
公開日1987年9月16日 申請(qǐng)日期1986年8月26日
發(fā)明者威廉姆·A·卡特 申請(qǐng)人:Hem研究公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan