單糖單元為d-甘露糖的皂苷及其制備方法和在制藥中的用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術領域。涉及單糖單元為D-甘露糖的皂巧及其制備方法和在 制藥中的用途，具體涉及單糖單元為D-甘露糖的齊域果酸皂巧及白枠脂酸皂巧及其制備 方法和在制備抗流感病毒藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] 流感病毒屬于正黏液病毒科（化thomyxoviridae)，是一種球形或絲狀、有包膜的 單股負鏈RNA病毒，基因組分為8個節(jié)段，送一特點使其在復制過程中極易發(fā)生基因重組， 導致新病毒的出現(xiàn)。根據(jù)流感病毒核蛋白（N巧和基質(zhì)蛋白（Ml)抗原性的不同，可將其 分為甲（A)、己度）和丙（C)型。甲型常W流行的形式出現(xiàn)，可在禽類和哺乳類宿主間傳 播，較易發(fā)生突變，具有強烈的傳染性和致病性，是對人類威脅最大的亞型；己型常造成局 部爆發(fā)，可感染人類和海豹、豬等；丙型則多散發(fā)，是對人類危害較小的非臨床病原體。甲 型流感病毒外膜上鑲嵌著3種重要的膜蛋白，分別為血凝素化emagglutinin，HA)、神經(jīng)氨 酸酶（neuraminidase, NA)和基質(zhì)蛋白（M2)。依據(jù)HA和NA抗原性特性的不同，甲型流感 病毒可進一步被分為16個Η〇Π -Η16)亞型和9個N(N1-N2)亞型，經(jīng)組合后有100多種亞 型的病毒株。甲型流感病毒還可W發(fā)生變異，進而感染其它物種（包括人類）。H5N1高致 病流感病毒即是如此，1997年在中國香港首次證實了冊N1高致病流感病毒感染人類的病 例，說明該病毒已具備W人為宿主的跨種屬傳播的能力。WK)的數(shù)據(jù)顯示，2003-2013年我 國發(fā)生45例冊N1禽流感，四季均有發(fā)生，W 11月到次年2月為主，5月也是一個發(fā)病高 峰(http://WWW, who, int/influenza/human_animal_interface/Influenza_Summary_IRA_ ΗΑ_?η?Θ^·3ΕΘ_13Μ3Γ?3. )。2013年在中國又出現(xiàn)了 H7N9流感病毒，截止到2013年6月2 日，已經(jīng)確診132人，死亡38人，康復77人。死亡率達28. 8%，目前為止還沒有有效的疫 苗，因此開發(fā)新型、高效、低毒、高特異性和用藥方便的抗流感病毒藥物迫在眉睫。
[000引 目前，臨床上針對甲型流感病毒的藥物主要有兩個祀點；M2離子通道抑制劑和 神經(jīng)氨酸酶抑制劑。前者包括有Amantadine和化mantadine,后者包括Oseltamivir 和 Zanamivir 等（J. Clin. Virol. 30,（2004): 115-133)。但由于流感病毒的高變異性， 目前已經(jīng)對所有M2離子通道抑制劑產(chǎn)生耐藥性（自2007年起，美國FDA已經(jīng)禁止送類 藥物用作病毒性流感治療藥物）；因而神經(jīng)氨酸酶抑制劑幾乎是唯一一類臨床用藥，但 自2006年起，在泰國和越南出現(xiàn)了對該類藥物耐藥的冊N1高致病流感病毒株（Nippon Rinsho. 64,（2006) :1845-1852 ;Antiviral Res. 73 (2007) :228-231) 0 同時，還是由于流感 病毒的高變異性，目前尚無一勞永逸的針對流感病毒的疫苗。
[0004] 血凝素蛋白（HA)是流感病毒表面的糖蛋白，由HA1和HA2兩個亞基組成。其中HA1 亞基與祀細胞膜上的唾液酸受體結(jié)合，介導病毒進入細胞質(zhì)，并被包裹在包體內(nèi)；HA2為跨 膜亞基，介導病毒膜與包體內(nèi)膜的融合，是病毒基因進入宿主細胞并進行復制的關鍵分子。 因此，若能在送個環(huán)節(jié)上阻斷流感病毒的入侵，則可W有效地進行預防和治療。本發(fā)明即針 對此環(huán)節(jié)，在前期發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)復雜的墓葫皂巧和熊果酸皂巧的基礎上，進行了深入的構(gòu)效 關系研究和結(jié)構(gòu)改造，發(fā)現(xiàn)了兩個結(jié)構(gòu)簡單的齊域果酸和白枠脂酸皂巧有抑制高致病流感 病毒冊N1感染宿主細胞的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的在于提供新的單糖單元為D-甘露糖的皂巧及其制備方法和在制藥中 的用途，具體涉及單糖單元為D-甘露糖的齊域果酸皂巧和白枠脂酸皂巧及其制備方法和 在制備抗流感病毒藥物中的用途。
[0006] 本發(fā)明W齊域果酸和白枠脂酸作為原料，合成出具有抑制高致病流感病毒H5N1 感染宿主細胞的單糖單元為D-甘露糖的皂巧，其包括齊域果酸皂巧和白枠脂酸皂巧。
[0007] 本發(fā)明所述的皂巧，其特征在于，所述皂巧的單糖單元為D-甘露糖，包括如結(jié)構(gòu) 通式（I)和（II)所示的齊域果酸皂巧和白枠脂酸皂巧，其中，
[0008] Ri為C1-C18烷氧基；單糖通過α -糖巧鍵與齊域果酸和白枠脂酸的C-3鏈接；
[0009]
〇
[0010] 本發(fā)明所述的皂巧類化合物W齊域果酸和白枠脂酸作為原料，按式（I)反應路 線，通過下述步驟制備：
[0011]
[001引 （a)齊域果酸或白枠脂酸與賄甲焼或其他醇反應，在C-28引入醋基；
[001引 化）分別將齊域果酸醋和白枠脂酸醋的3目-OH與糖基供體反應引入α-甘露糖單 元；
[0014] (C)在邸3〇化/邸3地條件下脫除糖單元上的醜基保護基分別得到3目-0- α -甘露 糖基齊域果酸醋和3目-0- α -D-甘露糖基白枠脂酸醋。
[0015] 本發(fā)明中，D-甘露糖基供體優(yōu)選己醜基、苯甲醜基、叔戊醜基為居基保護基，甘露 糖C-1活化基團優(yōu)選Η氯己醜亞胺醋、己硫巧、苯硫巧、對-甲苯硫巧；
[0016] 本發(fā)明中，構(gòu)建α -D-甘露糖巧鍵的路易斯酸催化劑優(yōu)選Cs-Cg的因代醜胺、Ci-Ce 的氣代姪基礙酸、C2-Cs的娃基氣代姪基礙酸醋、Ci-Ce的氣代姪基礙酸銀、Η氣化測-己離 絡合物或Η氣化測-己離混合物；
[0017] 本發(fā)明中，糖巧化反應中的有機溶劑優(yōu)選C1-C4的氯代焼姪、甲苯或己離；
[001引本發(fā)明中，渾滅劑優(yōu)選Η甲胺、Η己胺或硫代硫酸鋼；
[0019] 本發(fā)明中，分子篩優(yōu)選3 Α-5 A型娃鉛酸鹽分子篩；
[0020] 本發(fā)明中，柱層析純化中洗脫用的溶劑優(yōu)選石油離、二氯甲焼、己酸己醋、Η氯甲 焼、甲醇、正己焼或環(huán)己焼中一種或多種的混合物。
[0021] 本發(fā)明中，脫保護基反應中極性溶劑優(yōu)選四氨巧喃、甲醇、己醇、二氯甲焼、水中的 一種或多種的混合物；
[0022] 本發(fā)明中，重結(jié)晶純化中的溶劑優(yōu)選Η氯甲焼、C1-C4的烷基醇、己酸己醋、丙麗、正 己焼、石油離、環(huán)己焼、二氯甲焼、水中一種或多種的混合物。
[0023] 本發(fā)明進行了藥理實驗，結(jié)果表明，所述的皂巧類化合物對冊Ν1高致病流感病毒 的侵入宿主細胞過程有明顯的抑制作用，可進一步用于制備預防或治療流感病毒的藥物， W及制備與其它抗病毒藥的聯(lián)合用藥W及包含它的藥物組合物。
【具體實施方式】
[0024] 下面用實施例進一步說明本申請，但送并不意味著對本發(fā)明的限制。本發(fā)明采用 的合成原料齊域果酸和白枠脂酸為市售商品。
[00巧]實施例1 ;制備齊域果酸-28-甲基醋
[0026]
[0027] 將齊域果酸（456mg，1. Ommol)溶于5血DMF中，加入碳酸鐘（414mg，3. Ommol) 和賄甲焼（180 μ L 3. Ommol)，5(TC條件下反應7h，TLC檢測原料無剩余，減壓濃縮除去 大部分DMF，己酸己醋（150血）稀釋，依次用水（2X70血)、飽和碳酸氨鋼（2X70血)、飽 和氯化鋼（2X70mL)洗涂，收取有機層用無水硫酸鋼干燥，過濾濃縮，硅膠柱層析得到齊 域果酸-28-甲基醋白色固體（425mg, 90 % )。iHNMR 巧OOMHz, CDCI3) δ 5. 29 (t, 1H, J = 3. 5Hz)，3. 63 (s, 3H)，3. 22 (dd, J = 11. 5, 4. 4Hz, IH)，2. 86 (dd, J = 13. 8, 4. 3Hz, IH)，1. 25-1 .73 (m, 20H)，1. 15-1. 22 (m, 2H)，1. 14 (s, 3H)，1. 04-1. 10 (m, IH)，0. 99 (s, 3H)，0. 96-1. 01 (m, IH)，0. 93 (s, 3H)，0. 91 (s, 3H)，0. 90 (s, 3H)，0. 79 (s, 3H)，0. 73 (s, 3H)。
[002引實施例2 ;制備齊域果酸-28-甲基醋-3目-0-化3, 4, 6-四-0-苯甲醜 基-a-D-甘露糖巧）
[0029]
[0030] 將齊域果酸-28-甲基醋（235mg，0. 5mmol)和苯甲醜基保護的甘露糖Η氯亞胺醋 (445mg, 0. 6mmol)溶于二氯甲焼巧0血）中，再加入4Α.分子篩，成保護下室溫攬拌30min， 將反應溫度降至〇°C后，滴加 TMSOTf (17μ L 0.1 mmol)反應30min，然后自然升至室溫反 應化。TLC檢測反應進程，反應結(jié)束后加入4滴Η己胺終止反應，濾掉分子篩，將濾液濃 縮，經(jīng)硅膠柱層析（ΡΕ:ΕΑ = 15 ;1)得齊域果酸-28-甲基醋-3目-0-(2,3, 4,6-四-0-苯 甲醜基-α -D-甘露糖巧）白色固體巧32. 8mg, 90 % )。古 NMR (CDCI3, 400MHz