背景技術(shù)：

1、提高非人類哺乳動物諸如牛、馬或其他有蹄類動物的繁殖性能的能力可對主人具有顯著益處。這可以通過提高此類非人類哺乳動物的能育性和/或繁殖力來實(shí)現(xiàn)。目前，基于使用雌二醇和其他激素諸如gnrh(促性腺激素釋放激素)、lh(黃體生成素)、fsh(卵泡刺激素)或助孕素(諸如孕酮)來模擬在目標(biāo)物種中存在的天然或接近天然水平的激素，提出了幾種方法或方案來提高繁殖性能。這些方案中的一些方案包括在雌性中使排卵同步的步驟以促進(jìn)卵泡以同步方式的刺激、生長和排卵，從而允許固定時間的人工受孕，避免發(fā)情期檢測的必要性。這些所謂的同步方案在世界各地廣泛用于商業(yè)乳牛群和肉牛群。

2、用于使卵泡波出現(xiàn)同步的最常見的處理方法中的一種處理方法涉及使用不同類型的雌激素。然而，這種類固醇激素在世界上許多地方不能使用，并且已經(jīng)開發(fā)出替代方法來控制卵泡期和黃體期，目的是例如在雌二醇無法獲得的國家中改進(jìn)胚胎供體母牛的超數(shù)排卵過程。一種似乎是有前景的選擇的方法是在gnrh誘導(dǎo)的排卵后新的卵泡波出現(xiàn)時發(fā)起fsh處理。此外，因為目前可用的fsh產(chǎn)品的半衰期通常較短(大約6小時)，所以超數(shù)排卵方案涉及在4天至5天內(nèi)每天兩次fsh處理，這相當(dāng)耗時、費(fèi)力且容易出錯。因此，標(biāo)準(zhǔn)超數(shù)排卵方法是基于在卵泡波出現(xiàn)時多次注射fsh，卵泡波出現(xiàn)通常發(fā)生在自然發(fā)生的發(fā)情期后8天至12天。這種方法被稱為“基于發(fā)情期的”，并且雖然在胚胎產(chǎn)生方面是有效的，但受發(fā)情期周期的階段的制約，并且需要發(fā)情期檢測。后來的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，與允許從受孕到排卵的更理想間隔的現(xiàn)代同步方案相比，在“基于發(fā)情期的”方案中，受精率明顯更低。

3、已經(jīng)進(jìn)行了研究以確定延長fsh刺激方案是否可以增加排卵反應(yīng)。作者似乎得出結(jié)論，將fsh注射周期從連續(xù)4天延長至連續(xù)7天可維持卵泡生長并使更多的卵泡獲取排卵的能力。正在進(jìn)行更多的研究以在不同的牛品種中確認(rèn)這種假說。

4、在另一報道的方案中，在3天而不是4天期間用fsh處理母牛，并且在第4天最后2次注射由2次ecg(馬絨毛膜促性腺激素)注射替代(barros等人，2008)。這種處理似乎增加了胚胎的數(shù)量，盡管處理時間仍然很長。此外，ecg是相當(dāng)長的分子，并且已經(jīng)被描述為當(dāng)重復(fù)使用時誘導(dǎo)抗體形成，并且可能限制這些類型的方案的廣泛/頻繁使用。

5、在減少fsh注射次數(shù)的嘗試中，已經(jīng)開發(fā)出替代方案，在該替代方案中，將fsh包埋在緩釋聚合物(透明質(zhì)酸)中。使用這種緩釋制劑，在“基于發(fā)情期的”超數(shù)排卵方案后進(jìn)行單次注射。然而，作者得出結(jié)論，透明質(zhì)酸太粘稠并且單次肌內(nèi)注射導(dǎo)致較低的超數(shù)排卵反應(yīng)(bo等人，2010)。

6、ep2134165提出一種用于使用單鏈fsh增加繁殖的方法，在單鏈fsh中，兩個亞基通過肽接頭共價連接，以5μg-150μg的單劑量施用該單鏈fsh。

7、wo2014/076231報道了使用50μg或100μg的單劑量的rbfsh類似物來提高繁殖性能。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、在一個方面，本發(fā)明涉及用于使用一次性卵泡刺激素(“fsh”)施用在家牛母牛中誘導(dǎo)、引起或刺激超數(shù)排卵(“so”)的方法和組合物及用途。本發(fā)明還涉及用于提高家牛母牛的受孕率的此類方法和組合物及用途。

2、在另一方面，本發(fā)明涉及用于使用一次性卵泡刺激素(“fsh”)施用在家牛母牛中增加或改進(jìn)卵子采集(“opu”)的方法和組合物及用途。本發(fā)明還涉及此類方法和組合物以及在家牛母牛的人工受孕或體外受精方法中的用途。

3、通過進(jìn)行各種試驗和研究，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在家牛母牛中，使用特定劑量范圍和計劃表的fsh可以改進(jìn)排卵或卵母細(xì)胞產(chǎn)生。具體地，通過根據(jù)各種方案和在不同類型的母牛中測試fsh的功效，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)反應(yīng)因動物類型和預(yù)期的效果類型而異。更具體地，在家牛母牛中，與先前在其他類型的母牛中進(jìn)行的報道相反，驚訝地發(fā)現(xiàn)，單次施用劑量介于200μg和400μg之間，最優(yōu)選介于250μg和350μg之間的fsh可獲得最有效的超數(shù)排卵。鑒于之前關(guān)于劑量為約50μg時功效最佳的報道，此類發(fā)現(xiàn)是令人驚訝的。此外，本發(fā)明人還驚訝地發(fā)現(xiàn)，fsh劑量為約100μg至200μg時獲得允許或改進(jìn)家牛母牛卵子采集的最佳功效，因此該劑量不同于適于so的劑量。因此，令人驚訝地，在母牛的亞型之間存在可變性，并且同一亞型的母牛在so或opu中的最佳表現(xiàn)存在可變性。因此，從現(xiàn)有技術(shù)中不能推斷出鑒定出用于在家牛中誘導(dǎo)so或opu的最有效的條件。

4、在一個方面，本發(fā)明源于以下發(fā)現(xiàn)：通過以介于200μg和400μg，特別是介于300μg和400μg之間的劑量單次施用fsh，可以在家牛母牛中誘導(dǎo)高超數(shù)排卵。鑒于早期關(guān)于使用低得多的劑量(例如，50μg)功效最佳的報道，以及鑒于由本發(fā)明人獲得的進(jìn)一步數(shù)據(jù)，這一發(fā)現(xiàn)是令人驚訝的，該進(jìn)一步數(shù)據(jù)顯示使用約100μg的單劑量在家牛母牛中實(shí)現(xiàn)了最有效的opu過程。

5、在另一方面，本發(fā)明源于以下發(fā)現(xiàn)：通過以介于100μg和200μg之間的劑量單次施用fsh，可以在家牛母牛中誘導(dǎo)或?qū)崿F(xiàn)高opu。鑒于早期關(guān)于未注射fsh的opu的報道，以及鑒于由本發(fā)明人獲得的進(jìn)一步數(shù)據(jù)，這一發(fā)現(xiàn)是令人驚訝的，該進(jìn)一步數(shù)據(jù)顯示用約200μg-400μg的單劑量在家牛母牛中誘導(dǎo)最有效的so。

6、本發(fā)明的一個具體目的涉及fsh或包含fsh的組合物在在家牛母牛中誘導(dǎo)、引起或刺激超數(shù)排卵中的用途，其中在發(fā)情周期期間以介于200μg和400μg之間，特別是介于300μg和400μg之間的劑量對所述家牛母牛施用一次所述fsh。

7、本發(fā)明的另一目的在于一種用于在家牛母牛中誘導(dǎo)或刺激或增加超數(shù)排卵的方法，包括在發(fā)情周期期間以介于200μg和400μg之間，特別是介于300μg和400μg之間的劑量對所述家牛母牛施用一次fsh。

8、本發(fā)明的另一目的在于一種在用于在家牛母牛中誘導(dǎo)或刺激或增加超數(shù)排卵的方法中使用的fsh，所述方法包括在發(fā)情周期期間以介于200μg和400μg之間，特別是介于300μg和400μg之間的劑量對所述家牛母牛施用一次所述fsh。

9、本發(fā)明的另一具體目的涉及fsh或包含fsh的組合物在家牛母牛中進(jìn)行卵子采集的方法中的用途，其中所述fsh以介于100μg和200μg之間的劑量施用于所述家牛母牛。優(yōu)選地，fsh僅施用一次，之后進(jìn)行卵母細(xì)胞收集。

10、本發(fā)明的另一優(yōu)選的目的涉及fsh或包含fsh的組合物在家牛母牛中進(jìn)行卵子采集的方法中的用途，其中在發(fā)情周期期間以介于100μg和200μg之間的劑量對所述家牛母牛施用一次所述fsh。優(yōu)選地，該方法還包括收集卵母細(xì)胞的后續(xù)步驟。

11、本發(fā)明的另一目的在于一種用于在家牛母牛中進(jìn)行卵子采集的方法，包括以介于100μg和200μg之間的劑量對所述家牛母牛施用fsh。優(yōu)選地，fsh僅施用一次，之后進(jìn)行卵母細(xì)胞收集。

12、本發(fā)明的另一優(yōu)選的目的在于一種用于在家牛母牛中進(jìn)行卵子采集的方法，包括在發(fā)情周期期間以介于100μg和200μg之間的劑量對所述家牛母牛施用一次fsh。優(yōu)選地，該方法還包括收集卵母細(xì)胞的后續(xù)步驟。

13、本發(fā)明的另一目的在于在用于在家牛母牛中進(jìn)行卵子采集的方法中使用的fsh，所述方法包括以介于100μg和200μg之間的劑量對所述家牛母牛施用所述fsh。優(yōu)選地，fsh僅施用一次，之后進(jìn)行卵母細(xì)胞收集。

14、本發(fā)明的另一優(yōu)選的目的在于在用于在家牛母牛中進(jìn)行卵子采集的方法中使用的fsh，所述方法包括在發(fā)情周期期間以介于100μg和200μg之間的劑量對所述家牛母牛施用一次所述fsh。優(yōu)選地，該方法還包括收集卵母細(xì)胞的后續(xù)步驟。

15、優(yōu)選地，fsh是重組fsh(rfsh)。

16、如將進(jìn)一步公開的，在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，fsh包含通過肽接頭彼此共價連接的牛fshα亞基和牛fshβ亞基。

17、本發(fā)明可用于任何家牛母牛，特別是任何成熟的家牛母牛，諸如幼小的成年動物或老齡的動物、乳?；蛉庥媚概?。