本發(fā)明涉及一種藥物制劑及其制備方法，具體涉及皮寒藥制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：皮寒藥為豆科米口袋屬植物川滇米口袋gueldenstaedtiadelavayifranch的干燥全草，為四川攀西地區(qū)安寧河流域治療感冒時常用的特色民間草藥，異名皮傷寒、雞大腿等?！段鞑胁菟帯访?“皮寒藥”，為蝶形花科米口袋屬植物,康滇米口袋的帶根全草，記載其:“全草入藥，四季可采；性寒，味辛苦，清熱解毒、鎮(zhèn)痛”。目前，已有專利報(bào)道了皮寒藥提取物及其用途，如cn102641323a公開了皮寒藥或其水提取物在制備抗流感病毒的藥物或保健品中的用途，但是其僅對皮寒藥進(jìn)行了簡單的水提，并未對水提條件進(jìn)行篩選，因此無法得知在何種條件下進(jìn)行水提，能使皮寒藥水提取物的量達(dá)到最大；cn102641324a公開了皮寒藥乙醇提取物及其用途，但是其并未對醇提條件進(jìn)行篩選，因此也無法得知在何種條件下進(jìn)行醇提，能使皮寒藥醇提取物的量達(dá)到最大。文獻(xiàn)《趙芙蓉.攀西地區(qū)特色資源皮寒藥品質(zhì)評價研究[d].成都中醫(yī)藥大學(xué),2012》公開了通過對皮寒藥提取溶劑、提取方法以及提取時間的篩選，得到含量較高的芒柄花素及高麗槐素含量，但是其所得高麗槐素的含量僅為0.02925mg/g。因此，現(xiàn)在急需一種能夠提取高含量有效成分尤其是高麗槐素的皮寒藥提取物的方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種皮寒藥提取物或其顆粒劑及其制備方法。本發(fā)明提供了一種皮寒藥提取物，它是由如下方法制備而成：1)取皮寒藥藥材，粉粹，加入8-12倍水煎煮0.5-1.5h，煎煮為1-3次，過濾，合并濾液；2)取步驟1)所得濾液，濃縮至相對密度1.10，加入50-70％v/v乙醇，沉淀6-18h，取上清液，濃縮至相對密度為1.23±0.03，即得提取物。進(jìn)一步地，上述步驟1)中，所述加水量為皮寒藥藥材的12倍，煎煮時間為0.5h，煎煮次數(shù)為2次；上述步驟2)中，所述濃縮溫度為70℃，乙醇濃度為60％v/v，沉淀時間為18h。進(jìn)一步地，上述皮寒藥提取物中高麗槐素含量為0.1978-0.2501mg/g，芒柄花素含量為0.2127-0.2958mg/g。進(jìn)一步地，所述的皮寒藥來源于豆科米口袋屬植物川滇米口袋gueldenstaedtiadelavayifranch的干燥全草。本發(fā)明還提供了一種皮寒藥顆粒劑，它是由如下方法制備而成：取上述皮寒藥提取物，加入與提取物的重量配比為1-5:1的輔料，55-95％v/v乙醇，攪拌，干燥，即得。進(jìn)一步地，所述輔料與提取物的重量配比為4:1；乙醇濃度為75％v/v；輔料為糊精、無水葡萄糖、可溶性淀粉中的一種。本發(fā)明提供了一種制備皮寒藥提取物的方法，包括以下步驟：1)取皮寒藥藥材，粉粹，加入8-12倍水煎煮0.5-1.5h，煎煮為1-3次，過濾，合并濾液；2)取步驟1)所得濾液，濃縮至相對密度1.10，加入50-70％v/v乙醇，沉淀6-18h，取上清液，濃縮至相對密度為1.23±0.03，即得浸膏。進(jìn)一步地，所述步驟1)中，所述加水量為皮寒藥藥材的12倍，煎煮時間為0.5h，煎煮次數(shù)為2次；進(jìn)一步地，所述步驟2)中，所述濃縮溫度為70℃，乙醇濃度為60％v/v，沉淀時間為18h。本發(fā)明提供了一種制備皮寒藥提取物的方法，包括以下步驟：取上述的皮寒藥提取物，加入與提取物的重量配比為1-5:1的輔料，55-95％v/v乙醇，攪拌，干燥，即得。進(jìn)一步地，所述輔料與提取物的重量配比為4:1；乙醇濃度為75％v/v；輔料為糊精、無水葡萄糖、可溶性淀粉中的一種。本發(fā)明提供了一種上述皮寒藥顆粒在制備具有清熱解毒、鎮(zhèn)痛等藥物中的用途。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。具體實(shí)施方式本發(fā)明具體實(shí)施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過購買市售產(chǎn)品獲得。儀器：高效液相色譜儀(agilent公司，型號：technologies1260)；鼓風(fēng)干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；電子天平(北京塞多利斯天平有限公司，型號：bs200s)；電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司，型號：dzkw-4)；微型植物試樣粉碎機(jī)(北京中興偉業(yè)儀器有限公司，型號：fz102)；調(diào)溫電熱套(河北省黃驊市中興儀器有限公司，型號：zdhw)；以及其他玻璃儀器，篩網(wǎng)等。試藥：皮寒藥采自四川涼山州西昌市禮州鎮(zhèn)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)蔣桂華教授鑒定為豆科植物川滇米口袋gueldenstaedtiadelavayifranch.的干燥全草；高麗槐素對照品(成都曼斯特生物科技有限公司、中國科學(xué)院成都生物研究所，批號：must-15071610)、芒柄花素對照品(成都曼斯特生物科技有限公司、中國科學(xué)院成都生物研究所，批號：must-16031005)、無水葡萄糖(分析純ar成都市科龍化工試劑廠)。實(shí)施例1、本發(fā)明皮寒藥提取物的制備取浸泡40min后的皮寒藥藥材1000g，粉碎為粗粉,加水煎煮二次,每次加水12倍，每次煎煮0.5h，煎液濾過，濾液合并，濃縮至相對密度1.10(70℃)，加乙醇使醇含量達(dá)60％，靜置沉淀18h，取上清液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.20-1.25(70℃)，即得提取物。實(shí)施例2、制備皮寒藥提取物的工藝篩選1、皮寒藥飲片吸水時間及吸水率皮寒藥在浸泡時間超過40min后，吸水率變化不再明顯，此時藥材的吸水量達(dá)到了藥材重量的127.8％。因此，實(shí)驗(yàn)前將藥材浸泡40min后進(jìn)行提取。2、皮寒藥水提液中高麗槐素、芒柄槐素的hplc測定(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取高麗槐素對照品,精密稱定，甲醇溶解，定容至10ml,制成1.002mg/ml高麗槐素對照品儲備液。再取1ml1.002mg/ml高麗槐素稀5倍。為0.2004mg/ml。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。取芒柄花素對照品,精密稱定，甲醇溶解，定容至10ml,制成0.999mg/ml芒柄花素對照品儲備液。再取1ml0.999mg/ml芒柄花素對照品儲備液稀釋10倍，為0.0999mg/ml。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2)色譜條件色譜柱：diamonsiltmc18hplc色譜柱(4.6×250mm,5ul,ser.no.:8132964.)流動相：乙腈-水(40:60)，流速：1.0ml/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μl，檢測波長：210nm，分析時間：25min。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制高麗槐素標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別精密吸取高麗槐素對照品溶液2μl、4μl、8μl、12μl、16μl，按照上述色譜條件進(jìn)行分析。以峰面積為縱坐標(biāo)，高麗槐素的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制回歸方程。分析得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y＝718.91x-34.353,r2＝0.9992。在0.4008-3.2060μg之間高麗槐素的峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。芒柄花素標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別精密吸取芒柄花素對照品溶液2μl、4μl、10μl、12μl、16μl，按照上述色譜條件進(jìn)行分析。以峰面積為縱坐標(biāo)，芒柄花素的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制回歸方程。分析得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y＝705.19x-16.675，r2＝0.9993。在0.1998-1.9980μg之間芒柄花素的峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。(4)精密度考察分別吸取芒柄花素對照品溶液(0.999mg/ml)10μl連續(xù)進(jìn)樣5次；分別吸取高麗槐素對照品溶液(1.002mg/ml)10μl連續(xù)進(jìn)樣5次。測得芒柄花素rsd＝0.64％，髙麗槐素rsd＝0.68％，表明本方法精密度良好。(5)樣品穩(wěn)定性考察取皮寒藥藥材粗粉約10g，精密稱定，按樣品制備方法進(jìn)行處理，即得供試品溶液。分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h測定一次?？疾旖Y(jié)果表明：芒柄花素rsd＝2.15％，髙麗槐素rsd＝3.07％。供試品放置12小時內(nèi)，芒柄花素、高麗槐素的含量基本穩(wěn)定，隨著時間的延長會有所下降，故供試品最好在8個小時內(nèi)進(jìn)行檢測。(6)對照品穩(wěn)定性考察精密吸取芒柄花素對照品溶液(0.0999mg/ml)10μl,分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h測定一次；精密吸取高麗槐素對照品溶液(1.002mg/ml)10μl,分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h測定一次。測得芒柄花素rsd＝1.02％，髙麗槐素rsd＝1.09％。對照品溶液高麗槐素穩(wěn)定性在8小時后開始有所下降進(jìn)行檢測，芒柄花素變化不大，故供試品最好在8個小時內(nèi)進(jìn)行檢測。(7)重現(xiàn)性試驗(yàn)考察取皮寒藥材粗粉平行5份，每份10g，精密稱定，按照樣品制備方法處理，得到供試品份。按照樣品測定方法，測得峰面積，計(jì)算芒柄花素，高麗槐素的的含量。測得芒柄花素rsd＝1.23％，髙麗槐素rsd＝2.81％。本方法測得樣品中芒柄花素和高麗槐素的含量重現(xiàn)性良好。(8)加樣回收率考察采用加樣回收率法，按上述方法測得皮寒藥藥材粗粉的芒柄花素與高麗槐素含量。精密加入與粗粉含量等量的芒柄花素與高麗槐素對照品。按樣品測定方法操作，測得樣品中芒柄花素、高麗槐素的含量，計(jì)算回收率?；厥章剩ィ絒測得量(mg)－藥材中含量(mg)]/芒柄花素或高麗槐素加入量*100％。測得芒柄花素平均回收率＝100.14％，rsd＝1.46％，髙麗槐素平均回收率＝100.27％，rsd＝1.72％。故本方法高麗槐素、芒柄花素回收率良好。3、皮寒藥水提工藝(1)皮寒藥水提工藝實(shí)驗(yàn)取皮寒藥藥材270g，平均分成9份。以水提液中干膏收率，水溶性浸出物高麗槐素含量、芒柄花素含量為指標(biāo)，采用hplc檢測法，以加水倍數(shù)(a)、提取次數(shù)(b)、提取時間h(c)、粒度(d)4個因素,每個因素取3水平，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知當(dāng)工藝條件為粗粉，加水12倍，提取2次，每次提取30min時，所得水提液中干膏收率，水溶性浸出物高麗槐素含量、芒柄花素含量較高，表1是對最佳水提工藝的重復(fù)性驗(yàn)證結(jié)果。表1皮寒藥最佳水提工藝實(shí)驗(yàn)結(jié)果從表1看出：采用粗粉，加12倍水，提取2次，每次提取30min重現(xiàn)性良好。故此水提工藝條件穩(wěn)定、可控。4、分離與純化工藝研究(1)分離與純化方法考察取皮寒藥粗粉80g，平均分成4份。按以上優(yōu)選工藝制備皮寒藥樣品?？疾斐Ｓ梅蛛x純化方法(離心、過濾、醇沉)的有效成分含量，選擇合理的分離純化方法。結(jié)果見表2。表2皮寒藥水提藥液純化方法考察結(jié)果樣品名稱高麗槐素含量mg/g(x1)芒柄花素含量mg/g(x2)綜合評價(y)原液0.30010.315694.3離心液0.25940.303885.960％醇沉液0.30020.3560100過濾液0.16800.210357.5注：綜合評價公式：y＝50*(x1/x1max)+50*(x2/x2max)由表2可知：以上三種常用分離純化方法處理后，根據(jù)綜合評價有效成分含量為60％醇沉液>過濾液>原液>離心液。且藥液較為粘稠，過濾較難處理。故皮寒藥提取物的純化方法選用醇沉法。(2)皮寒藥醇沉工藝實(shí)驗(yàn)取皮寒藥藥材270g，平均分成9份。按以上優(yōu)選工藝制備皮寒藥樣品。以水溶性浸出物高麗槐素含量、芒柄花素含量為指標(biāo)，采用hplc檢測法，以藥液相對密度(a)、醇沉濃度(b)、醇沉?xí)r間h(c)3個因素,每個因素取3水平,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知當(dāng)醇沉工藝條件為相對密度1.10，醇沉濃度60％，純沉?xí)r間18h，所得水提液中水溶性浸出物高麗槐素含量、芒柄花素含量較高，表3是對最佳醇沉工藝的重復(fù)性驗(yàn)證結(jié)果。表3皮寒藥最佳醇沉工藝實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明：采用相對密度1.10的藥液，加60％乙醇，醇沉18h，重現(xiàn)性良好。故此醇沉工藝條件穩(wěn)定、可控?？蔀槠ず庮w粒劑制備工藝提供參考。5、濃縮工藝研究本實(shí)驗(yàn)主要對常壓下不同溫度、減壓下不同溫度，以及同一溫度下不同壓力進(jìn)行考察。取皮寒藥粗粉100g，按照以上優(yōu)選出的方案進(jìn)行提取，將得到藥液平均分成5份，分別在常壓100℃、常壓80℃、減壓80℃、減壓70℃、減壓60℃下進(jìn)行濃縮。以水溶性浸出物高麗槐素含量、芒柄花素含量為指標(biāo)，采用hplc法測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4皮寒藥顆粒劑濃縮方法考察結(jié)果濃縮方法高麗槐素含量mg/g(x1)芒柄花素含量mg/g(x2)綜合評價(y)常壓100℃0.21980.243185.0常壓80℃0.24430.250791.2減壓80℃0.24170.295898.4減壓70℃0.25010.294399.8減壓60℃0.19780.212775.5注：綜合評價公式：y＝50*(x1/x1max)+50*(x2/x2max)如表4所示：在減壓70℃時，高麗槐素、芒柄花素含量最高。且減壓濃縮方法有速度快、有效成分影響小的優(yōu)點(diǎn)，故本實(shí)驗(yàn)采用減壓70℃，進(jìn)行濃縮。結(jié)果表明：本發(fā)明通過篩選皮寒藥提取物制備工藝，得到高麗槐素含量及芒柄花素含量均較高的皮寒藥提取物，為提取高含量有效成分的皮寒藥提取物提供了一個優(yōu)異的方法。實(shí)施例3、本發(fā)明皮寒藥顆粒劑的制備取實(shí)施例1所得皮寒藥提取物，加入無水葡萄糖，輔料與提取物比例為4:1，加75％乙醇為潤濕劑適量，制成顆粒，在溫度60℃，干燥時間2h，制得顆粒為1000g。實(shí)施例4、制備本發(fā)明皮寒藥顆粒劑的工藝篩選1、皮寒藥顆粒劑制粒工藝研究方法(1)皮寒藥顆粒劑的評價指標(biāo)綜合評分規(guī)則本實(shí)驗(yàn)采用單一變量法，在治理過程中，觀察并記錄軟材、顆粒情況。同時，以顆粒成型率、吸濕率、溶化性為評價指標(biāo)綜合評分。綜合評分＝成型率*50+(1-吸濕率)*25+溶化性*25，優(yōu)選出最佳工藝。(2)成型率的測定將制得的皮寒藥顆粒劑分別過一號篩(200μm)和五號篩(180μm)，稱量。要求不通過一號篩和能過五號篩的總和不得超過供示量的15％。重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。成型率＝能過一號篩但不過五號篩的顆粒質(zhì)量/過篩前顆粒質(zhì)量*100％。(3)溶化性檢查在干燥至恒重的10ml離心管中加入精密稱定的按比例制得的處方顆粒樣品0.5g，精密加入10ml沸水，充分?jǐn)嚢枵袷?min，3000r·min-1，離心15min，棄去上清液，在80℃將殘?jiān)娓芍梁阒?，精密稱定，計(jì)算溶化率。溶化率＝溶化顆粒重/總顆粒重(4)吸濕率的測定將底部盛有氯化鈉過飽和溶液的干燥器室溫放置48h使其達(dá)到平衡，相對濕度為75％。稱取樣品顆粒2g，平鋪于恒重后的稱量瓶中，將稱量瓶蓋子打開放入干燥器中，24h后取出稱重，計(jì)算吸濕率。吸濕率＝(吸濕后藥粉質(zhì)量-吸濕前藥粉質(zhì)量)/吸濕后藥粉質(zhì)量*100％。2、輔料種類的選擇取3份實(shí)施例1所得提取物，每份30g，按提取物與輔料1:4的重量配混合均勻，用85％乙醇為潤濕劑制粒，加入潤濕劑的適量。制粒，于60℃干燥箱中干燥2h。觀察顆粒情況，優(yōu)選最佳輔料。結(jié)果見表5。表5皮寒藥顆粒劑輔料種類考察結(jié)果輔料顆粒情況成型率(％)吸濕率(％)溶化性(％)綜合評價糊精細(xì)粉較多91.630.0761.7888.31無水葡萄糖顆粒適中92.131.4697.7196.73可溶性淀粉細(xì)粉較多83.674.2547.4680.66表5考察結(jié)果表明：糊精的粘結(jié)力明顯不夠，軟材干，干燥后顆粒發(fā)白，且細(xì)粉較多，加水沖開后溶液渾濁，一段時間后在杯底絮集形成白色沉淀。以可溶性淀粉制得的顆粒同樣細(xì)粉較多，溶化性不佳，且價格昂貴。以無水葡萄糖制得的軟材粘結(jié)力強(qiáng)，制得的顆粒粒度適中，顆粒分明，沒有過多的細(xì)粉，色澤金黃，加水沖開溶液澄清透明。故采用無水葡萄糖為輔料，糊精的吸濕率較好，考慮將糊精與無水葡萄糖按照一定比例混合制成混合輔料。3、輔料配比的考察取50g實(shí)施例1所得提取物，分別與不同比例的混合輔料混合，混合輔料之間配比為糊精：無水葡萄糖1:1，1:2，1:3，1:4，1:5，以輔料與提取物比1:4，加入85％乙醇潤濕劑，制粒。于60℃干燥箱中干燥2h。觀察顆粒情況，優(yōu)選最佳混合輔料配比。結(jié)果見表6。表6皮寒藥顆粒劑輔料配比考察結(jié)果糊精：葡萄糖粉顆粒情況成型率溶化性吸濕率綜合評價1：1顆粒細(xì)粉多90.152.003.4383.811：2顆粒細(xì)粉較多98.175.521.992.461：3顆粒細(xì)粉較多98.479.712.4293.321：4顆粒適中97.389.532.4595.481：5顆粒適中94.689.202.8894.51表6考察結(jié)果表明：以混合輔料制備顆粒，顆?？傮w的溶化性都不太好，顆粒融化后，溶液會有輕微的混濁，一段時間后杯底會有白色沉淀。考慮到溶化性的問題，所以以糊精和葡萄糖混合的輔料不可行，改用葡萄糖單一輔料制備顆粒。4、單一輔料與提取物比例的選擇根據(jù)輔料優(yōu)選的結(jié)果，取5份實(shí)施例1所得提取物，每份10g，將提取物與輔料分別按1:1,1:2，1:3，1:4，1:5不同比例混合制粒，加入85％乙醇潤濕劑，制粒。于60℃干燥箱中干燥2h。觀察顆粒情況，優(yōu)選最佳輔料與提取物比例。結(jié)果見表7。表7皮寒藥顆粒劑輔料與提取物配比考察結(jié)果考察結(jié)果表明：提取物與輔料比例為1:1，1:2時軟材過稀，1:3時可制粒，但成型性不佳。1:4時制得的軟材符合“手捏成團(tuán)，輕按即散”。1:5制得的軟材較干，部分顆粒經(jīng)干燥后黏結(jié)成塊。提取物與輔料1:4綜合得分高于其他配比，故用提取物與輔料1:4制粒。5、潤濕劑濃度及用量考察根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，取50g實(shí)施例1所得提取物，將提取物與無水葡萄糖按1:4比例混合，均分為5等份，分別以55％、65％、75％、85％、95％乙醇為潤濕劑，制粒。于60℃干燥箱中干燥2h。觀察顆粒情況，優(yōu)選適宜的潤濕劑濃度。結(jié)果見表8。表8皮寒藥顆粒劑潤濕劑濃度考察結(jié)果濃度顆粒情況成型率(％)吸濕率(％)溶化性(％)綜合評價55％顆粒較疏松97.6.1.3697.398.0565％顆粒較疏松95.91.1398.898.0975％顆粒適中97.50.9599.098.6585％顆粒輕微粘結(jié)98.21.3098.798.5895％顆粒輕微粘結(jié)99.11.6898.798.61考察結(jié)果表明：根據(jù)顆粒的成型率，吸濕率，溶化性，認(rèn)為75％的乙醇為適宜的潤濕劑濃度。在制粒過程中潤濕劑的用量則應(yīng)根據(jù)軟材的情況而定。6、制粒工藝驗(yàn)證為了驗(yàn)證上述實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，以保證成型工藝的合理可行，以優(yōu)選出的最佳成型工藝，安排3組重復(fù)實(shí)驗(yàn)。表9皮寒藥顆粒劑制備工藝驗(yàn)證結(jié)果表明：按照優(yōu)選出的最佳制粒工藝制備出的顆粒成型率，吸濕率，溶化性，水分等各項(xiàng)指標(biāo)均合格，重復(fù)性良好，制粒工藝可行，穩(wěn)定可控。綜上，本發(fā)明制備皮寒藥提取物及其顆粒物的工藝條件穩(wěn)定、可控、提取率高，可為開發(fā)防治流感的中藥制劑進(jìn)一步研究提供參考。當(dāng)前第1頁12