本發(fā)明屬于壯藥毛果魚藤技術領域，尤其涉及一種毛果魚藤石油醚提取物及其制備和抗炎應用。
背景技術：
糖尿病、心血管疾病及腫瘤是對人類生活危害最大的疾病。糖尿病被認為是全球面臨的疾病難題。由于現(xiàn)代人們生活的條件以及環(huán)境的極大改變，使得人們患糖尿病幾率呈上升趨勢。國際糖尿病協(xié)會發(fā)布的數(shù)據指出，2040年全球患糖尿病的患者約至6.42億人。因此，尋找副作用少、效率高的治療糖尿病藥物迫在眉睫。
以糖尿病為特征的代謝紊亂疾病，還被廣泛認為是一種慢性炎癥性疾病。已有研究證明是由多種原因引起的機體對糖類、脂肪以及蛋白質代謝紊亂的一種代謝綜合征。糖尿病患者持續(xù)的高血糖能促進炎癥進程，引發(fā)機體臟器的損害及全身炎癥反應。
毛果魚藤(derriseriocarpahow)為豆科魚藤屬植物，其又名土甘草，主要分布在廣東、廣西等地區(qū)。攀援狀灌木，木質大藤本。莖棕黃色，有多數(shù)黃色瘤狀突起物，斷面淡黃色，纖維狀。羽狀復葉互生，小葉對生?；ㄐ。奂t色，呈腋生總狀花序。小枝被銹色微柔毛，花期為6-7月，果期為9月至翌年1月。毛果魚藤常被用于治療膀胱炎、腎炎、尿道炎、咳嗽等，具有利尿除濕、鎮(zhèn)咳化痰的功效。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種毛果魚藤石油醚提取物及其制備和抗炎應用，為臨床提供一種新的具有良好療效的抗炎中藥。
為解決上述技術問題，本發(fā)明采用以下技術方案：
毛果魚藤石油醚提取物，來自毛果魚藤乙醇提取物的石油醚提取部位。
毛果魚藤石油醚提取物在制備抗炎藥物中的應用。
抗炎藥物為抗糖尿病炎癥藥物。
糖尿病為ii型糖尿病。
毛果魚藤石油醚提取物在制備治療胰島素抵抗綜合癥藥物中的應用。
毛果魚藤石油醚提取物的制備方法將毛果魚藤藤莖采用乙醇浸泡后回流提取，濃縮，揮去乙醇后得到毛果魚藤乙醇提取物；毛果魚藤乙醇提取物采用石油醚萃取，濃縮后得到毛果魚藤石油醚提取物。
毛果魚藤石油醚提取物的制備方法，按以下操作進行：將干燥毛果魚藤藤莖切片，經中藥粉碎機粉碎成粗粉，過篩得毛果魚藤藥粉；稱取毛果魚藤藥粉，用乙醇浸泡藥粉后，加熱回流提取，合并乙醇提取液，濃縮，揮盡乙醇；將毛果魚藤乙醇提取物用水混懸，加入石油醚萃取，合并萃取液，濃縮，最終得到毛果魚藤石油醚提取物浸膏。
切片為0.5-1cm，過篩為30目篩。
乙醇為體積濃度95％的乙醇，浸泡藥粉24h。
加熱回流提取2次，每次1h；石油醚萃取3次。
為充分利用廣西、云南特有的壯藥毛果魚藤，發(fā)明人建立了一種毛果魚藤石油醚提取物(petroleumetherextractofderriseriocarpahow.，peedeh)的制備方法。據此，發(fā)明人進一步研究，發(fā)現(xiàn)了毛果魚藤石油醚提取物具有抗炎作用，特別針對ii型糖尿病的相關炎癥有良好效果。通過使用高糖高脂飼料及鏈脲佐菌素建立ii型糖尿病動物模型(km小鼠)，采用elisa對小鼠血清炎癥趨化因子以及炎癥因子tnf-α(腫瘤壞死因子)、mcp-1(細胞趨化蛋白)、il-6(白介素-6)、il1-β(白介素1β)檢測其含量，采用免疫組化法對小鼠胰腺炎癥介質因子cox-2進行檢測。檢測結果顯示，給與毛果魚藤石油醚提取物治療的實驗模型小鼠的tnf-α、mcp-1、il-6、il1-β等炎癥趨化因子以及炎癥因子顯著降低，胰腺中炎癥介質因子cox-2的表達下降。實驗研究表明，本發(fā)明毛果魚藤石油醚提取物可顯著降低炎癥介導因子以及炎癥因子表達，可通過抗炎提高胰島素敏感性，治療胰島素抵抗綜合癥。因此，本發(fā)明為深入研究與開發(fā)壯藥毛果魚藤提供了理論依據，以期為臨床提供一種新的通過抗炎作用而治療糖尿病的現(xiàn)代中藥制劑。
附圖說明
圖1是各組小鼠胰腺組織cox-2蛋白表達的倒置熒光顯微鏡圖(400×)。
具體實施方式
一、毛果魚藤石油醚提取物的制備
將干燥毛果魚藤藤莖切成0.5-1cm切片，經中藥粉碎機粉碎成粗粉，過30目篩得毛果魚藤藥粉；稱取毛果魚藤藥粉1kg，用體積濃度95％的乙醇浸泡藥粉24h后，加熱回流提取2次，每次1h，合并乙醇提取液，濃縮，揮盡乙醇，得到毛果魚藤乙醇提取物(92.5g)；將毛果魚藤乙醇提取物用適量水混懸，加入500ml石油醚萃取，萃取3次，合并萃取液，濃縮，最終得到深綠色的毛果魚藤石油醚提取物浸膏20g。
二、實驗糖尿病模型小鼠的建立
spf級實驗動物60只km小鼠，飼養(yǎng)于實驗中心動物房，晝夜交替，小鼠自由飲水。飼養(yǎng)的過程中遵守實驗公務管理與保護的相關準則。實驗動物采購于廣西醫(yī)科大學動物實驗中心。實驗所用的km小鼠是國產使用量最大的小鼠，常被用于藥理學、毒理學等方面的研究以及藥品、生物制品的生產與檢定。實驗造模使用高糖高脂飼料喂養(yǎng)及腹腔注射鏈脲佐菌素的方法建立ii型糖尿病模型小鼠，具備糖尿病特征。
實驗分組見表1。實驗動物均以20ml/kg的體積進行灌胃。正常組及模型組以同等體積灌胃雙蒸水。動物給藥21d，實驗結束時，按動物處理規(guī)定處理小鼠，收集小鼠血漿在4℃，12000rpm條件下，離心10min。取小鼠胰腺，使用生理鹽水洗滌，濾紙吸干，二者一同放入-80℃冰箱待用。
表1實驗分組
注：陽性藥為二甲雙胍，劑量為320mg/kg
三、實驗動物血清指標的檢測
實驗步驟
取實驗動物血清，嚴格按照檢測指標elisa試劑盒上的步驟進行實驗。繪制實驗試劑盒標準曲線，加樣、溫育、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯示，終止即可。最后由標準曲線公式，計算不同組別的小鼠血清指標濃度。
統(tǒng)計學處理
采用spss21.0軟件進行數(shù)理統(tǒng)計，多組間的比較用anova單因素方差分析，兩兩比較用lsd法，組間比較、組內比較用t檢驗方法進行統(tǒng)計，實驗結果以x±s表示，p＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。
實驗結果
如表2顯示，毛果魚藤石油醚提取浸膏均能顯著的降低(p＜0.05)糖尿病小鼠的炎癥指標tnf-α、mcp-1、il-6、il1-β，從而達到干預糖尿病小鼠炎癥的相關病癥。
表2實驗動物血清指標檢測結果
comparedwithstzgroup，*p＜0.05
四、動物胰腺炎癥指標cox-2的檢測
實驗步驟
取石蠟切片于烤箱中55℃烘烤，使石蠟融化。于二甲苯染色缸中脫蠟3次，后以梯度為10％的酒精中洗脫。抗原修復，使用試劑盒對應的血清對玻片進行封閉，加入蛋白對應的一抗和二抗進行，二抗封閉，一抗孵育過夜，使用磷酸緩沖鹽溶液洗滌，加入染色劑，染色，復染，脫水，再使用蓋玻片封片即可。使用倒置熒光顯微鏡在×400的顯微鏡倍數(shù)下觀察玻片，測定胰腺組織中cox-2的表達量。
實驗結果
如圖1所示，模型組小鼠胰島細胞染色明顯，陽性藥及不同藥物組胰島細胞的染色有所減輕，毛果魚藤石油醚浸膏低劑量、中劑量、高劑量均呈現(xiàn)劑量依賴性關系，即隨著藥物浸膏濃度的增加，糖尿病模型小鼠胰島細胞凋亡因子減少。胰腺分泌胰液，在糖、蛋白質及脂肪代謝中起重要作用。因此，藥物可通過降低胰島細胞炎癥因子cox-2蛋白的表達，從而改善糖尿病病癥。