本發(fā)明涉及一種促進(jìn)傷口無瘢痕愈合的苦莓苷f1敷料及制備方法，屬于生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

皮膚是人體最重要的屏障器官。由于創(chuàng)傷、潰瘍、燒傷等原因，可能導(dǎo)致急性或慢性的皮膚大范圍損傷，影響皮膚包括屏障保護(hù)、吸收代謝、分泌排泄、體溫調(diào)節(jié)、免疫在內(nèi)的各項(xiàng)功能，并有可能導(dǎo)致并發(fā)癥，危及生命。傳統(tǒng)敷料(紗布/油紗)纖維吸收滲液差，更換時(shí)易致創(chuàng)面再損傷，延長傷口愈合時(shí)間。目前，高生物相容性的新型微納米材料大量涌現(xiàn)，如銀離子敷料、藻酸鈣鈉鹽敷料、水凝膠、泡沫敷料等濕性敷料已廣泛應(yīng)用于壓瘡、糖尿病足潰瘍、術(shù)后創(chuàng)口的治療。

玉米醇溶蛋白、小麥醇溶蛋白、殼聚糖、透明質(zhì)酸、纖維素等高分子材料具有可再生性、良好的成膜性、可紡性、生物可降解性和生物相容性的獨(dú)特優(yōu)勢，所制備的生物纖維膜在藥物傳遞系統(tǒng)、組織工程支架、創(chuàng)傷敷料等方面具有良好的應(yīng)用前景(賀夢玲.靜電紡玉米醇溶蛋白微納米纖維的改性研究[d].東華大學(xué),2017.)。多種不同性質(zhì)的高分子材料共混，可提高纖維膜的各項(xiàng)性能，如玉米醇溶蛋白具有較差的力學(xué)性能和親水性，加入殼聚糖、透明質(zhì)酸等親水性的多羥基、氨基、羧基化合物共混后，可顯著改善玉米醇溶蛋白纖維的拉伸強(qiáng)度、伸長率、斷裂延伸率、可濕性(李夢琴,任紅濤,王躍,徐艷艷,王潔.玉米醇溶蛋白殼聚糖復(fù)合膜的制備[j].中國食品學(xué)報(bào),2011,(04):71-77；yaoc,lix,songt.fabricationofzein/hyaluronicacidfibrousmembranesbyelectrospinning[j].journalofbiomaterialsscience,polymeredition,2007,18(6):731-742.)。這類新型濕性敷料的發(fā)展，解決了傳統(tǒng)干性敷料的弊端，為促進(jìn)傷口愈合，減少瘢痕藥物提供了給藥載體，而促進(jìn)傷口無瘢痕愈合的藥物，仍是制約理想敷料發(fā)展的關(guān)鍵因素。

傳統(tǒng)中草藥在創(chuàng)傷治療方面具有悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)。具有活血化瘀的三七功效成分——三七皂苷具有促進(jìn)干細(xì)胞增殖、分化的作用，由殼聚糖、透明質(zhì)酸、三七提取物制成的自凝膠組合物具有促進(jìn)傷口愈合，抑制瘢痕形成的作用(新型傷口敷料殼聚糖復(fù)合三七提取物的研究_宮珊珊)，有望開發(fā)為新型功能性傷口敷料。

苦莓苷f1為熊果酸型五環(huán)三萜，在藥食兩用的路邊青屬、懸鉤子屬植物中含量豐富，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、降血糖、降血脂、細(xì)胞保護(hù)作用，并且能夠促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞，從而治療心肌梗塞(chengl,chenh,yaox,qig,liuh,leek,leek,zhangj,chens,linx,zhaow,lij,lim.aplant-derivedremedyforrepairofinfarctedheart[j].plosone.2009；4(2):e4461.)。rubusimperialis提取物具有促進(jìn)小鼠背部皮下傷口愈合的作用，而苦莓苷f1在體外對纖維細(xì)胞l929的轉(zhuǎn)化無明顯影響，該研究人員認(rèn)為是苦莓苷f1以外的成分具有促傷口愈合作用(tonintd,thiesenlc,deoliveiranunesml,broeringmf,donatomp,gossmj,petreanum,nieror,machadoid,santinjr.rubusimperialis(rosaceae)extractandpurecompoundniga-ichigosidef1:woundhealingandanti-inflammatoryeffects[j].naunynschmiedebergsarchpharmacol,2016,389(11):1235-1244.)。目前，尚沒有其他關(guān)于苦莓苷f1促進(jìn)傷口愈合、減少瘢痕形成作用的公開。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種苦莓苷f1的新應(yīng)用，并制備得到了促進(jìn)傷口愈合、減少瘢痕形成的苦莓苷f1敷料。本發(fā)明制備過程操作方便、成本低，制備的苦莓苷f1敷料具有保濕、吸收傷口滲出液、加速傷口愈合、減少瘢痕形成等性能，適用于燒傷、切割傷、潰瘍、壓瘡等傷口修復(fù)。

申請人發(fā)現(xiàn)苦莓苷f1能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的生成，具有促進(jìn)血管新生的作用，并且對過氧化氫和高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，明顯改善內(nèi)皮細(xì)胞的活力。申請人利用全皮層切除傷口模型對苦莓苷f1促進(jìn)家兔皮膚傷口愈合效果進(jìn)行了評價(jià)，并通過分子生物學(xué)方法對其抑制瘢痕和促進(jìn)皮膚新生附屬器形成進(jìn)行了表征，結(jié)果發(fā)現(xiàn)苦莓苷f1能抑制炎癥產(chǎn)生、促進(jìn)上皮化、新生皮膚組織的分化、血管以及毛發(fā)等皮膚附屬器的重建、抑制i型膠原纖維蛋白產(chǎn)生的瘢痕。本申請證實(shí)苦莓苷f1具有促進(jìn)傷口愈合，減少瘢痕形成的作用。針對新型微納米纖維膜及苦莓苷f1的特點(diǎn)以及目前傷口敷料存在的問題，本發(fā)明采用靜電紡絲法制備含苦莓苷f1的微納米纖維膜，在發(fā)揮纖維膜親和、保濕的同時(shí)，利用苦莓苷f1的特點(diǎn)，加速傷口愈合，減少瘢痕形成。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種促進(jìn)傷口愈合、減少瘢痕形成的苦莓苷f1敷料，所述苦莓苷f1敷料的制備方法包括：(1)將苦莓苷f1溶于高分子聚合物的有機(jī)醇和/或有機(jī)酸溶液，得到復(fù)合溶液；(2)采用靜電紡絲法，得到苦莓苷f1的微納米纖維膜；(3)干燥后，得到苦莓苷f1敷料。

在一種實(shí)施方式中，所述的苦莓苷f1是從路邊青屬、懸鉤子屬植物中提取出來的一種熊果酸型五環(huán)三萜皂苷，為白色無定型粉末，易溶于甲醇、甲醇-水、乙醇、乙醇-水、正丁醇等，微溶于乙酸乙酯、氯仿，難溶于石油醚、正己烷等，結(jié)構(gòu)如圖1所示。苦莓苷f1可明顯改善內(nèi)皮細(xì)胞的活力，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)血管新生。實(shí)驗(yàn)證明，苦莓苷f1促進(jìn)家兔皮膚傷口愈合，抑制炎癥產(chǎn)生、促進(jìn)上皮化、新生皮膚組織的分化、血管以及毛發(fā)等皮膚附屬器的重建、抑制i型膠原纖維蛋白產(chǎn)生的瘢痕。

在一種實(shí)施方式中，所述的高分子聚合物為玉米醇溶蛋白、小麥醇溶蛋白、殼聚糖、透明質(zhì)酸、纖維素的一種或多種混合物。玉米醇溶蛋白、小麥醇溶蛋白、殼聚糖、透明質(zhì)酸、纖維素是一類具有可再生性、良好的成膜性、可紡性、生物可降解性和生物相容性的高分子材料。多種高分子材料共混后，可有效提敷料產(chǎn)品的拉伸強(qiáng)度、伸長率、斷裂延伸率、可濕性等性能。

在一種實(shí)施方式中，所述高分子聚合物為玉米醇溶蛋白和殼聚糖的復(fù)合。

在一種實(shí)施方式中，所述的有機(jī)醇酸溶液為c2-c4的醇或者c2-c6的酸溶液。

在一種實(shí)施方式中，所述的有機(jī)醇酸溶液，包括但不限于乙醇、甲醇、異丙醇、正丁醇、乙酸、丙酸、乳酸、丁酸、檸檬酸、酒石酸。c2-c4醇是苦莓苷f1、玉米醇溶蛋白、小麥醇溶蛋白的優(yōu)良溶劑，c2-c6酸溶液可促進(jìn)殼聚糖、透明質(zhì)酸、纖維素溶解。

在一種實(shí)施方式中，所述的有機(jī)醇酸溶液，醇酸溶液的溶劑為水，醇酸的濃度為0.001％-95％。

在一種實(shí)施方式中，所述的靜電紡絲法是有效制備微納米纖維材料的主要途徑之一，具有操作方便、工藝簡單、靈活、高效等優(yōu)點(diǎn)。

在一種實(shí)施方式中，所述的微納米纖維的寬度為10nm-200um。

在一種實(shí)施方式中，所述的微納米纖維膜中，苦莓苷f1的濃度為0.001mg/g-500mg/g，苦莓苷f1的濃度可通過控制苦莓苷f1在高分子聚合物醇酸溶液中的添加量實(shí)現(xiàn)。

在一種實(shí)施方式中，所述干燥為真空干燥；真空干燥時(shí)溫度為30-150℃，真空度為0.001-0.1mpa，干燥時(shí)間0.5-24h。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種促進(jìn)傷口愈合、減少瘢痕形成的藥物或者藥物組合物，所述藥物或者藥物組合物以苦莓苷f1作為有效成分或者主要有效成分。

在一種實(shí)施方式中，所述藥物或者藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的賦型劑。所述藥學(xué)上可接受的賦型劑是指任何可用于藥學(xué)領(lǐng)域的稀釋劑、輔助劑和/或載體。

在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的苦莓苷f1可以與其他活性成分組合使用，只要它們不產(chǎn)生其他不利的作用，例如過敏反應(yīng)。

在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的傷口包括但不限于淺ii、深ii、淺iii度的燒傷、燙傷、手術(shù)傷口、切割傷、刺傷、撕裂傷、爆炸傷、挫傷、火器傷、潰瘍、壓瘡等。

在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物或者藥物組合物可配制成若干種劑型，其中含有藥學(xué)領(lǐng)域中常用的一些賦形劑；例如可注射的制劑(如可注射的溶液或混懸液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)、局部制劑(如軟膏、溶液、敷料等)。

在一種實(shí)施方式中，用于本發(fā)明藥物組合物的載體是藥學(xué)領(lǐng)域中可得到的常見類型，包括：可注射制劑用的防腐劑、加溶劑、穩(wěn)定劑等，局部制劑用的基質(zhì)、稀釋劑、潤滑劑、防腐劑等。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供苦莓苷f1在制備促進(jìn)傷口愈合、減少瘢痕形成的藥物中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

(1)采用靜電紡絲法制備了一種促進(jìn)傷口愈合、減少瘢痕形成的苦莓苷f1敷料，該敷料為苦莓苷f1與玉米醇溶蛋白、小麥醇溶蛋白、殼聚糖、透明質(zhì)酸、纖維素組成的復(fù)合纖維膜。集合了新型濕性敷料親和、保濕的特點(diǎn)和苦莓苷f1促進(jìn)傷口愈合、減少瘢痕形成的藥效特點(diǎn)而制備的敷料，對治療燒傷、切割傷、潰瘍、壓瘡等傷口治療有極大的醫(yī)療應(yīng)用價(jià)值；

(2)本發(fā)明利用全皮層切除傷口模型對苦莓苷f1促進(jìn)家兔皮膚傷口愈合效果進(jìn)行了評價(jià)，并通過分子生物學(xué)方法對其抑制瘢痕和促進(jìn)皮膚新生附屬器形成進(jìn)行了表征，結(jié)果發(fā)現(xiàn)苦莓苷f1能抑制炎癥產(chǎn)生、促進(jìn)上皮化、新生皮膚組織的分化、血管以及毛發(fā)等皮膚附屬器的重建、抑制i型膠原纖維蛋白產(chǎn)生的瘢痕。本申請證實(shí)了苦莓苷f1具有促進(jìn)傷口愈合，減少瘢痕形成的作用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明中苦莓苷f1的分子結(jié)構(gòu)圖；

圖2為不同實(shí)驗(yàn)組下的傷口面積變化情況；

圖3為不同實(shí)驗(yàn)組下的i型/iii型膠原纖維比值。

具體實(shí)施方案

下面是對本發(fā)明進(jìn)行具體描述。

實(shí)施例1：苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/殼聚糖敷料的制備

99g玉米醇溶蛋白(22-24kda,sigma-aldrich)和1g殼聚糖(50-190kda,75％脫乙?；瑂igma-aldrich)溶解于300ml含70％乙醇和2％乙酸的水溶液中，將20mg苦莓苷f1加入到上述醇酸溶液中，得到苦莓苷f1復(fù)合溶液。在25℃，60％濕度條件下，將紡絲溶液置于注射器中，通過微量注射泵(kds250，kdscientific)設(shè)定紡絲速度0.2ml/h，控制靜電電壓14kv(高壓靜電發(fā)射器，hb-z503-1ac，天津恒博高壓電源廠)，接收距離10cm，制備得到納米纖維膜。將納米纖維膜置于真空干燥箱(dzf-1b，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)，設(shè)定溫度為45℃，真空度為0.08mpa，干燥12h，得到苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/殼聚糖敷料。

實(shí)施例2：實(shí)施例1制備的苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/殼聚糖敷料的應(yīng)用

將重1.5-2.5kg新西蘭大白兔適應(yīng)1周后，采用8％硫化鈉(分析純，常州市盛豐化學(xué)試劑有限公司)溶液脫除兔背部毛。24h后，采用70％的乙醇對備皮區(qū)進(jìn)行消毒，0.5％利多卡因注射液(醫(yī)用級，萬榮三九藥業(yè)有限公司)按60mg/kg劑量進(jìn)行皮下注射麻醉。用手術(shù)剪刀和鑷子，在每只兔背部中線兩側(cè)剪去三個(gè)直徑為1cm的全厚層皮膚。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為3組，每組3只：苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/殼聚糖敷料(ncc)組，玉米醇溶蛋白/殼聚糖(cc)敷料組、依沙吖啶(大連雙島制藥廠)對照組。其中，玉米醇溶蛋白/殼聚糖(cc)敷料，是指不添加苦莓苷f1的按照實(shí)施例1的方法制備得到的敷料。分別將各供試品敷在傷口處，再用繃帶包扎。依沙吖啶對照組采用0.2％依沙吖啶溶液處理，石蠟脫脂紗布覆蓋，繃帶包扎，每隔2天換藥一次，連續(xù)處理2次。

術(shù)后每天記錄創(chuàng)口圖形，測定傷口面積如圖2所示。結(jié)果顯示，與cc組和依沙吖啶組比較，ncc組傷口大小顯著減小，在第1天時(shí)傷口面積就縮小到60％，在第6天ncc組傷口已基本閉合，表明ncc能顯著提高傷口閉合速率。術(shù)后14天，觀察各組傷口愈合情況，其中ncc組傷口完全愈合，表面光滑平整，無瘢痕，皮下血管分布、皮膚顏色、表皮平整度與正常皮膚均接近，重塑情況良好；cc組傷口完全愈合，表面不平整，有明顯瘢痕，皮膚彈性稍硬，皮下血管分布較少、皮膚顏色略白，重塑情況一般；依沙吖啶組傷口完全愈合，表面不平整，有明顯瘢痕，皮膚彈性較硬，皮下血管分布較少、皮膚顏色呈白色，重塑情況與正常皮膚有明顯差異。

皮膚瘢痕組織中膠原纖維的成分與比例均與正常皮膚中不一致，ⅰ型膠原纖維占著最為重要的成分，粗大的ⅰ型膠原纖維是瘢痕組織纖維化的物質(zhì)基礎(chǔ)。對不同敷料組傷口組織切片i型膠原纖維蛋白、iii型膠原纖維蛋白免疫熒光染色結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果如圖3所示。正常組i型膠原纖維蛋白少于iii型膠原纖維蛋白，ncc組與正常組結(jié)果相近，cc組i型膠原纖維蛋白與iii型膠原纖維蛋白含量接近，依沙吖啶組i型膠原纖維蛋白明顯多于iii型膠原纖維蛋白，與正常皮膚有明顯差異，表明傷口為病理性瘢痕愈合。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/殼聚糖敷料能明顯促進(jìn)傷口無瘢痕愈合。

實(shí)施例3：苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/透明質(zhì)酸敷料的制備及應(yīng)用

95g玉米醇溶蛋白(22-24kda,sigma-aldrich)和5g透明質(zhì)酸鈉(95％，sigma-aldrich)溶解于300ml含30％乙醇和30％乙酸的水溶液中，將5mg苦莓苷f1加入到上述醇酸溶液中，得到苦莓苷f1復(fù)合溶液。在25℃，60％濕度條件下，將紡絲溶液置于注射器中，通過微量注射泵(kds250，kdscientific)設(shè)定紡絲速度0.1ml/h，控制靜電電壓14kv(高壓靜電發(fā)射器，hb-z503-1ac，天津恒博高壓電源廠)，接收距離10cm，制備得到納米纖維膜。將納米纖維膜置于真空干燥箱(dzf-1b，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)，設(shè)定溫度為55℃，真空度為0.1mpa，干燥12h，得到苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/透明質(zhì)酸敷料。

將苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/透明質(zhì)酸敷料代替實(shí)施例1的敷料，應(yīng)用于如實(shí)施例2所述家兔全皮層切除傷口模型，發(fā)現(xiàn)苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/透明質(zhì)酸敷料能顯著促進(jìn)傷口愈合，促進(jìn)上皮化、新生皮膚組織的分化、血管以及毛發(fā)等皮膚附屬器的重建、抑制i型膠原纖維蛋白產(chǎn)生的瘢痕。傷口經(jīng)苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/透明質(zhì)酸敷料作用1天后，傷口面積縮小到70％，在第7天傷口已基本閉合，表明苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/透明質(zhì)酸敷料能顯著提高傷口閉合速率。術(shù)后14天，觀察傷口愈合情況，發(fā)現(xiàn)傷口完全愈合，表面光滑平整，無瘢痕，皮下血管分布、皮膚顏色、表皮平整度與正常皮膚均接近，重塑情況良好，表明苦莓苷f1/玉米醇溶蛋白/透明質(zhì)酸敷料能抑制瘢痕形成。

實(shí)施例4：苦莓苷f1/殼聚糖/透明質(zhì)酸敷料的制備及應(yīng)用

20g殼聚糖(50-190kda,75％脫乙?；?，sigma-aldrich)和5g透明質(zhì)酸鈉(95％，sigma-aldrich)溶解于300ml含10％乙醇和50％乙酸的水溶液中，將10mg苦莓苷f1加入到上述醇酸溶液中，得到苦莓苷f1復(fù)合溶液。在25℃，60％濕度條件下，將紡絲溶液置于注射器中，通過微量注射泵(kds250，kdscientific)設(shè)定紡絲速度0.1ml/h，控制靜電電壓14kv(高壓靜電發(fā)射器，hb-z503-1ac，天津恒博高壓電源廠)，接收距離10cm，制備得到納米纖維膜。將納米纖維膜置于真空干燥箱(dzf-1b，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)，設(shè)定溫度為40℃，真空度為0.1mpa，干燥12h，得到苦莓苷f1/殼聚糖/透明質(zhì)酸敷料。

將苦莓苷f1/殼聚糖/透明質(zhì)酸敷料代替實(shí)施例1的敷料，應(yīng)用于如實(shí)施例2所述家兔全皮層切除傷口模型，發(fā)現(xiàn)苦莓苷f1/殼聚糖/透明質(zhì)酸敷料能顯著促進(jìn)傷口愈合，促進(jìn)上皮化、新生皮膚組織的分化、血管以及毛發(fā)等皮膚附屬器的重建、抑制i型膠原纖維蛋白產(chǎn)生的瘢痕。傷口經(jīng)苦莓苷f1/殼聚糖/透明質(zhì)酸敷料作用1天后，傷口面積縮小到65％，在第7天傷口已基本閉合，表明苦莓苷f1/殼聚糖/透明質(zhì)酸敷料能顯著提高傷口閉合速率。術(shù)后14天，觀察傷口愈合情況，發(fā)現(xiàn)傷口完全愈合，表面光滑平整，無瘢痕，皮下血管分布、皮膚顏色、表皮平整度與正常皮膚均接近，重塑情況良好，表明苦莓苷f1/殼聚糖/透明質(zhì)酸敷料能抑制瘢痕形成。

雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。