本發(fā)明涉及一種具有抗癌效果的鴉膽子碘化油及其制備和應用，屬于醫(yī)藥
技術領域：
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背景技術：
：肝細胞性肝癌是我國常見高發(fā)的惡性腫瘤，發(fā)病率高，轉移早，預后差，缺乏有效的治療方法。據(jù)國際癌癥研究中心估計，2015年中國共計約有280萬人死于癌癥，平均每天7500人。肝癌的化療及放療不能獲得滿意療效，化學抗癌藥物在作用于靶細胞的同時往往會對其他正常細胞造成傷害，引起多種副作用，而植物藥、中藥在抗癌、抗腫瘤方面有獨特的優(yōu)勢，因此目前從天然植物中提取抗癌物質具有重要的應用價值和廣闊的研究前程。鴉膽子是苦木科植物鴉膽子的干燥成熟果實，主要成分有鴉膽因、鴉膽子苦素、鴉膽子苷等。鴉膽子仁含鴉膽子油56.23％，油主要是由油酸、亞油酸、軟脂酸、棕櫚酸、花生烯酸等組成。目前已經(jīng)證實鴉膽子油除了具有抗炎、抗菌作用外，還具有對癌細胞的直接殺傷作用。研究證明鴉膽子油為細胞周期非特異性抗腫瘤藥物，對多種癌細胞均有殺傷和抑制作用，能明顯通過抑制阻礙癌細胞的增殖，通過調節(jié)機體免疫功能殺死癌細胞，除此以外還具有逆轉藥物的耐藥性的特點，與其他抗癌藥物共同作用時，具有協(xié)同作用。鴉膽子油具體的抗癌機制可大體歸納為以下幾個方面：1鴉膽子油對細胞凋亡具有誘導作用；2鴉膽子油可有效抑制腫瘤細胞dna的轉錄與合成；3鴉膽子油對腫瘤細胞生物膜結構具有明顯的破環(huán)作用；4鴉膽子油對dna拓撲異構酶ⅱ具有抑制和逆轉耐藥性作用。碘化油又名碘油，是碘結合天然植物油中不飽和脂肪酸雙鍵形成的有機碘化物。目前臨床，碘化油除了用作藥物載體，還用作肝癌治療栓塞劑。臨川研究表明，對于不能手術的中晚期肝癌，經(jīng)動脈灌注化療栓塞術能明顯的延長患者的生存期，成為目前公認的肝癌非手術手段中療效最好的治療方法。碘化油的栓塞作用是由于它經(jīng)動脈輸入后能選擇性積聚于腫瘤血管內，這是因為腫瘤新生血管走向迂曲，管壁缺乏肌層和彈力層，無神經(jīng)支配，而且由于腫瘤分泌的滲透增強因子的作用使其通透性增高，致黏性較大的碘化油不易被血流沖散而滯留在腫瘤血管、血竇內或漏到腫瘤組織間歇內；除此以外腫瘤血管缺乏神經(jīng)、肌層，致使管壁不能收縮，流速緩慢，黏附的碘化油不易被沖掉。目前臨床上大多用碘化油作為肝癌治療栓塞劑。在對肝癌動脈栓塞治療時，碘化油混合栓塞劑可通過門靜脈膽支的膽管周圍靜脈叢進入門靜脈中，造成一過性阻斷肝臟和腫瘤組織中的毛細血管床血流。同時，碘化油對肝癌組織具有趨向性和親和力，能較密集的沉積于肝癌組織中。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明首先提供了一種鴉膽子碘化油，是一種雙功能的用于治療肝癌的物質。所述鴉膽子碘化油是：主要由油酸、亞油酸、硬脂酸等飽和、不飽和脂肪酸組成的鴉膽子果實中通過浸取法得到的植物油。其中油酸含量為50-65％，亞油酸含量為10-20％，其中油酸：亞油酸約為3：1。所述鴉膽子碘化油的制備方法，包括以下步驟：在碘化氫發(fā)生器中加入赤磷、碘，連續(xù)緩慢滴加純水，將所產(chǎn)生的碘化氫氣體通入鴉膽子油中，得到碘化油。所述鴉膽子碘化油的制備方法中，鴉膽子油、赤磷、碘的質量比可以為10-20：5-10：40-80。所述鴉膽子碘化油的制備方法中，水的滴加速度可以控制在10-100μl/min。所述鴉膽子碘化油的制備方法中，碘化氫發(fā)生器可加熱至40-45℃。所述鴉膽子碘化油的制備方法中，將所產(chǎn)生的碘化氫氣體通入鴉膽子油中，反應12-24h。所述碘化油中，含碘量為25％-30％。所述鴉膽子油可以是市售的鴉膽子油，也可以是通過常規(guī)方法制備提取的鴉膽子油。為了解決鴉膽子油安全性差、不良反應多等一系列問題，本發(fā)明使用了吸附劑對鴉膽子油進行了精煉：將鴉膽子油原料加熱到70-80℃，再加入重量為粗油體積3-5％的干燥活性炭，充分攪拌，30-60分鐘后減壓抽提得到黃色粗油；再向粗油中加入體積為5-10％的干燥高嶺土，充分混勻攪拌，30分鐘后減壓抽提得到鴉膽子油；將鴉膽子油在110℃條件下700mmhg減壓通氮1小時，最后得到精煉鴉膽子油。本發(fā)明提供的一種新型鴉膽子碘化油，在具有栓塞效果的基礎上，同樣具有抑制肝癌細胞hepg2生長的能力，能夠在臨床中擁有栓塞作用，停留在腫瘤部位抗癌。附圖說明圖1體外模擬栓塞模型。具體實施方式實施例1鴉膽子油的精煉將市售或提取墨綠色50g鴉膽子油加熱至70℃，加入5g干燥后的活性炭，充分攪拌后減壓抽提得到黃色粗油；再將黃色粗油加熱至70℃，加入5g干燥后的高嶺土，充分攪拌后減壓抽提得到鴉膽子油；將得到的鴉膽子油在減壓條件下通氮氣1小時，得到48.97g純鴉膽子油。實施例2鴉膽子油的質量檢驗(1)純鴉膽子油的含量測定取2滴實施例1制備得到的精制鴉膽子油，溶于2mlnaoh甲醇溶液(0.5mol/l)，加熱至65℃，30分鐘后加入2ml三氟化硼甲醇溶液(1：3)并加熱至70℃，加熱10分鐘，于室溫條件下加入2ml色譜純正己烷，劇烈搖晃后靜止分層，取上相有機相1ml加入無水硫酸鈉或飽和食鹽水后用有機濾膜過濾。采用gc-2010plus(島津)氣相色譜柱，并且設定氣相色譜條件：tr-fame260m154p(60m×0.25mm，0.25μm)；載氣，高純氮氣；分流比，100：1；進樣量1μl；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；程序升溫，60℃保持3min，以5℃/min升至175℃，保持15min，以2℃/min升至220℃，保持10min對樣品進行測定。測得鴉膽子油中油酸含量為62.2％，亞油酸含量為19％。(2)其他項目檢測：水分與揮發(fā)物：不得過1.0％(中國藥典2015版)雜質：不得過0.05％相對密度應為：0.910-0.920灼燒殘渣：不得超過0.1％實施例3鴉膽子碘化油的制備在碘化氫氣體發(fā)生器中加入赤磷7g，碘片70g，以10μl/min速度連續(xù)滴加水滴，加熱至40℃，將產(chǎn)生的碘化氫氣體通入20g純鴉膽子油中，反應24小時，得粗制鴉膽子碘化油28.14g。用8ml無水乙醇洗滌粗制碘化油10次脫除游離碘；再用10ml偏重亞硫酸鈉洗滌5次，脫色，最后用20ml蒸餾水洗滌5次，真空干燥后既得精煉碘化油27.78g。(1)碘含量測定：根據(jù)2015版中國藥典，取0.6g碘化油，置蒸發(fā)皿中，加40mlkoh乙醇溶液，水浴蒸發(fā)至塊狀物，用少量水洗凈，洗液并入蒸發(fā)皿中，繼續(xù)蒸發(fā)至干，用熱水150ml將殘渣洗入具塞錐形瓶，放冷加入5ml冰醋酸與5滴曙紅鈉指示液5滴，用0.1mol/l硝酸銀溶液滴定至紅色，每1ml硝酸銀滴定液等于12.69mg的碘。測定計算得到含碘量28.01％。(2)游離碘測定：根據(jù)2015版中國藥典，取碘化油1g，加三氯甲烷5ml，搖勻，加10ml蒸餾水和0.5g碘化鉀，溶解后，加淀粉指示液1ml，搖勻后靜置，水層無色，說明游離碘含量達標。(3)轉化率測定：將20g碘化油用飽和食鹽水洗滌3次，靜止分層。回收上層油相，減壓條件下旋轉蒸發(fā)除去過量的乙醇，然后加入無水硫酸鈉，靜止過夜去除多余的水分。減壓過濾除去硫酸鈉結晶，稱量得19.28g。再與等體積正戊烷混合，放置于-20℃冰箱中12小時，減壓抽濾去除甘油三脂，得到17.45g產(chǎn)品，則其轉化率為87.25％。實施例4鴉膽子碘化油的制備在碘化氫氣體發(fā)生器中加入赤磷7g，碘片60g，以10μl/min速度連續(xù)滴加水滴，加熱至40℃，將產(chǎn)生的碘化氫氣體通入20g純鴉膽子油中，反應24小時，得粗制鴉膽子碘化油26.82g。用8ml無水乙醇洗滌粗制碘化油10次脫出游離碘；再用10ml偏重亞硫酸鈉洗滌5次，脫色，最后用20ml蒸餾水洗滌5次，真空干燥后既得精煉碘化油26.61g。(1)碘含量測定：根據(jù)2015版中國藥典，取0.6g碘化油，置蒸發(fā)皿中，加40mlkoh乙醇溶液，水浴蒸發(fā)至塊狀物，用少量水洗凈，洗液并入蒸發(fā)皿中，繼續(xù)蒸發(fā)至干，用熱水150ml將殘渣洗入具塞錐形瓶，放冷加入5ml冰醋酸與5滴曙紅鈉指示液5滴，用0.1mol/l硝酸銀溶液滴定至紅色，每1ml硝酸銀滴定液等于12.69mg的碘。測定計算得到含碘量24.84％。(2)游離碘測定：根據(jù)2015版中國藥典，取碘化油1g，加三氯甲烷5ml，搖勻，加10ml蒸餾水和0.5g碘化鉀，溶解后，加淀粉指示液1ml，搖勻后靜置，水層無色，說明游離碘含量達標。(3)轉化率測定：將20g碘化油用飽和食鹽水洗滌3次，靜止分層?；厥丈蠈佑拖啵瑴p壓條件下旋轉蒸發(fā)除去過量的乙醇，然后加入無水硫酸鈉，靜止過夜去除多余的水分。減壓過濾除去硫酸鈉結晶，稱量得18.92g。再與等體積正戊烷混合，放置于-20℃冰箱中12小時，減壓抽濾去除甘油三脂，得到17.42g產(chǎn)品，則其轉化率為87.1％。實施例5鴉膽子碘化油的制備在碘化氫氣體發(fā)生器中加入赤磷7g，碘片80g，以10μl/min速度連續(xù)滴加水滴，加熱至40℃，將產(chǎn)生的碘化氫氣體通入20g純鴉膽子油中，反應24小時，得粗制鴉膽子碘化油29.11g。用8ml無水乙醇洗滌粗制碘化油10次脫出游離碘；再用10ml偏重亞硫酸鈉洗滌5次，脫色，最后用20ml蒸餾水洗滌5次，真空干燥后既得精煉碘化油28.62g。(1)碘含量測定：根據(jù)2015版中國藥典，取0.6g碘化油，置蒸發(fā)皿中，加40mlkoh乙醇溶液，水浴蒸發(fā)至塊狀物，用少量水洗凈，洗液并入蒸發(fā)皿中，繼續(xù)蒸發(fā)至干，用熱水150ml將殘渣洗入具塞錐形瓶，放冷加入5ml冰醋酸與5滴曙紅鈉指示液5滴，用0.1mol/l硝酸銀溶液滴定至紅色，每1ml硝酸銀滴定液等于12.69mg的碘。測定計算得到含碘量30.11％。(2)游離碘測定：根據(jù)2015版中國藥典，取碘化油1g，加三氯甲烷5ml，搖勻，加10ml蒸餾水和0.5g碘化鉀，溶解后，加淀粉指示液1ml，搖勻后靜置，水層無色，說明游離碘含量達標。(3)轉化率測定：將20g碘化油用飽和食鹽水洗滌3次，靜止分層?；厥丈蠈佑拖?，減壓條件下旋轉蒸發(fā)除去過量的乙醇，然后加入無水硫酸鈉，靜止過夜去除多余的水分。減壓過濾除去硫酸鈉結晶，稱量得19.28g。再與等體積正戊烷混合，放置于-20℃冰箱中12小時，減壓抽濾去除甘油三脂，得到18.01g產(chǎn)品，則其轉化率為90.05％。實施例6鴉膽子碘化油抑制肝癌細胞生長的作用本實施例通過mtt比色法測定鴉膽子碘化油樣品對hepg2細胞生長的抑制能力。收集培養(yǎng)的hepg2細胞，調整細胞懸液濃度至10000個/ml，在96孔板中每孔加入100μl懸液，在5％co2，37℃環(huán)境下孵育12小時，至細胞單層鋪滿孔底，加入實施例3中碘化鴉膽子油培養(yǎng)24小時后，每孔加入20μlmtt工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時；每空加入150μl二甲基亞砜溶液，輕輕震動10分鐘，在酶標儀490mm波長處檢測樣品吸光度，得到碘化鴉膽子油對hepg2的半數(shù)抑制濃度為：35.3mg/l。收集培養(yǎng)的hepg2細胞，調整細胞懸液濃度至10000個/ml，在96孔板中每孔加入100μl懸液，在5％co2，37℃環(huán)境下孵育12小時，至細胞單層鋪滿孔底，加入鴉膽子油培養(yǎng)24小時后，每孔加入20μlmtt工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時；每空加入150μl二甲基亞砜溶液，輕輕震動10分鐘，在酶標儀490mm波長處檢測樣品吸光度。得到鴉膽子油對hepg2的半數(shù)抑制濃度為：33.1mg/l。實施例7鴉膽子碘化油抑制肝癌細胞生長的作用本實施例通過mtt比色法測定鴉膽子碘化油樣品對hepg2細胞生長的抑制能力。收集培養(yǎng)的hepg2細胞，調整細胞懸液濃度至10000個/ml，在96孔板中每孔加入100μl懸液，在5％co2，37℃環(huán)境下孵育12小時，至細胞單層鋪滿孔底，加入實施例4中碘化鴉膽子油培養(yǎng)24小時后，每孔加入20μlmtt工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時；每空加入150μl二甲基亞砜溶液，輕輕震動10分鐘，在酶標儀490mm波長處檢測樣品吸光度，得到碘化鴉膽子油對hepg2的半數(shù)抑制濃度為：35.9mg/l。收集培養(yǎng)的hepg2細胞，調整細胞懸液濃度至10000個/ml，在96孔板中每孔加入100μl懸液，在5％co2，37℃環(huán)境下孵育12小時，至細胞單層鋪滿孔底，加入鴉膽子油培養(yǎng)24小時后，每孔加入20μlmtt工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時；每空加入150μl二甲基亞砜溶液，輕輕震動10分鐘，在酶標儀490mm波長處檢測樣品吸光度。得到鴉膽子油對hepg2的半數(shù)抑制濃度為：31.25mg/l。實施例8鴉膽子碘化油抑制肝癌細胞生長的作用本實施例通過mtt比色法測定鴉膽子碘化油樣品對hepg2細胞生長的抑制能力。收集培養(yǎng)的hepg2細胞，調整細胞懸液濃度至10000個/ml，在96孔板中每孔加入100μl懸液，在5％co2，37℃環(huán)境下孵育12小時，至細胞單層鋪滿孔底，加入實施例5中碘化鴉膽子油培養(yǎng)24小時后，每孔加入20μlmtt工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時；每空加入150μl二甲基亞砜溶液，輕輕震動10分鐘，在酶標儀490mm波長處檢測樣品吸光度，得到碘化鴉膽子油對hepg2的半數(shù)抑制濃度為：35.88mg/l。收集培養(yǎng)的hepg2細胞，調整細胞懸液濃度至10000個/ml，在96孔板中每孔加入100μl懸液，在5％co2，37℃環(huán)境下孵育12小時，至細胞單層鋪滿孔底，加入鴉膽子油培養(yǎng)24小時后，每孔加入20μlmtt工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時；每空加入150μl二甲基亞砜溶液，輕輕震動10分鐘，在酶標儀490mm波長處檢測樣品吸光度。得到鴉膽子油對hepg2的半數(shù)抑制濃度為：30.28mg/l。實施例9體外栓塞模擬將直徑2mm的玻璃珠約12g裝入容積10ml的塑料容器中，取普通醫(yī)用輸液器插入倒掛的500ml生理鹽水瓶口，微導管通過y型接頭置于塑料容器上端口。將生理鹽水的流速調節(jié)至0.3ml/s，用注射器把碘化鴉膽子油通過微導管注入，連續(xù)推注直到水流停止，觀察到碘化鴉膽子油能將水流完全堵住，沒有沉淀物經(jīng)過玻璃珠口流出。表1鴉膽子油脂肪酸組成序號脂肪酸種類脂肪酸含量分子式1棕櫚酸7.94％c16h32o22硬脂酸6.93％c18h36o23油酸62.2％c18h34o24亞油酸19％c18h32o25亞麻酸1.26％c18h30o2表2實施例6碘化鴉膽子油吸光度結果表3實施例6鴉膽子油吸光度結果濃度mg/l03.1256.2512.52550吸光度0.1730.1280.1370.0750.0650.0790.1650.1680.1290.0930.0690.0820.2220.1790.1280.0930.0780.0850.1560.1400.1300.0780.0790.0820.1980.2040.1520.1130.0870.086平均吸光度0.18280.163730.1348190.0908230.0751370.082564抑制率09.44123125.431749.7657758.4417354.3341表4實施例7碘化鴉膽子油吸光度結果濃度mg/l03.1256.2512.52550吸光度0.1760.1160.1080.1090.0870.0790.1780.1580.1030.1180.0820.0590.1610.1300.1030.1090.0920.0720.2150.1640.1090.1130.1010.1040.1910.1810.1300.1320.0980.083平均吸光度0.18420.1494990.1106760.116230.0920.07933抑制率018.8388339.9150536.8998650.0542956.9326表5實施例7鴉膽子油吸光度結果濃度mg/l03.1256.2512.52550吸光度0.1810.1190.1200.0850.0680.0620.1610.1490.1110.1030.0740.0720.2140.1690.1190.1030.0870.0730.1600.1290.1040.0880.0890.0790.1970.1880.1300.1230.0980.087平均吸光度0.18260.1512940.1172940.1008940.0836940.075094抑制率％017.1447135.7646544.7460354.1655258.87527表6實施例8碘化鴉膽子油吸光度結果表7實施例8鴉膽子油吸光度結果濃度mg/l03.1256.2512.52550吸光度0.2110.1220.1120.0730.0640.0690.1760.1500.1040.0810.0700.0740.2140.1570.1070.0980.0830.0940.1820.1410.0970.0760.0850.0860.1920.1470.1220.1110.0860.083平均吸光度0.1950.1430.1080.0880.0780.081抑制率％021.6010340.7026951.9217757.5508255.65796雖然本發(fā)明已以較佳實施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內，都可做各種的改動與修飾，因此本發(fā)明的保護范圍應該以權利要求書所界定的為準。當前第1頁12