本發(fā)明涉及胱氨酸或半胱氨酸的應(yīng)用、抑菌劑，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：生物體內(nèi)半胱氨酸可以與胱氨酸相互轉(zhuǎn)化。其實(shí)在生物體中起主要作用的是半胱氨酸。半胱氨酸是生物體內(nèi)一種常見(jiàn)的含硫氨基酸，分子式為c3h7no2s，溶于水，水中溶解度277.433g/l。溶于稀無(wú)機(jī)酸和堿性溶液，不易溶于水，難溶于乙醇，不溶于醚和氯仿。半胱氨酸是一種還原劑，可以與發(fā)生氧化反應(yīng)。半胱氨酸在厭氧條件下經(jīng)脫硫氫酶作用后分解成丙酮酸、硫化氫和氨，或經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用，分解為丙酮酸和硫磺。內(nèi)源半胱氨酸能在胞內(nèi)發(fā)生氧化還原反應(yīng)，使細(xì)胞的活性增強(qiáng)，而且還能降低或消除有毒物質(zhì)的活性。半胱氨酸能夠有效的治療放射性傷害。半胱氨酸還有能夠分解角質(zhì)的作用，可作為藥物治療一些皮膚病。由于半胱氨酸在胞內(nèi)能發(fā)生氧化還原反應(yīng)，具有預(yù)防生物體衰老的功能。高水平的內(nèi)源半胱氨酸對(duì)菌體的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。病原性細(xì)菌嚴(yán)重危害人類身體健康和養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。雖然抗生素可以有效進(jìn)行防治，但抗生素的濫用和誤用會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。細(xì)菌耐藥后，對(duì)原本有效的抗生素產(chǎn)生耐受，導(dǎo)致感染難以控制。因此，采用新的方法控制細(xì)菌特別是耐藥菌的感染十分重要。一種技術(shù)方法是通過(guò)提高耐藥菌對(duì)抗生素的敏感性，使得原本無(wú)效或低效的抗生素變得有效，將耐藥菌殺死。因此，發(fā)現(xiàn)具有提高細(xì)菌對(duì)抗生素敏感性的分子，將其與抗生素一起制備成復(fù)方制劑，對(duì)控制細(xì)菌特別是耐藥菌的感染十分重要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供胱氨酸或半胱氨酸的應(yīng)用。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供了含增敏氨基酸的抑菌劑，該抑菌劑能提高細(xì)菌對(duì)抗生素的敏感性，有效抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：胱氨酸或半胱氨酸的應(yīng)用，胱氨酸或半胱氨酸在提高抗生素抑菌性能方面的應(yīng)用。所述抗生素為喹諾酮類抗生素、氨基糖苷類抗生素、β-內(nèi)酰胺類抗生素或亞胺培南。所述喹諾酮類抗生素為諾氟沙星、加替沙星、莫昔沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、單諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、二氟沙星、惡喹酸或氟甲喹等。所述氨基糖苷類抗生素為硫酸慶大霉素、慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素或阿米卡星等。所述β-內(nèi)酰胺類抗生素為青霉素及其衍生物或頭孢菌素類抗生素。所述β-內(nèi)酰胺類抗生素氨芐青霉素、青霉素或頭孢唑林等。所述喹諾酮類抗生素對(duì)大腸桿菌、枸櫞酸桿菌、綠膿桿菌、沙雷桿菌、葡萄球菌等有抗菌作用。所述氨基糖苷類抗生素對(duì)銅綠假單胞菌、肺炎桿菌、大腸桿菌等有抗菌作用。所述β-內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)大腸桿菌、克雷伯菌、腸桿菌、吲哚陽(yáng)性變形桿菌等有抗菌作用。所述亞胺培南對(duì)鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、克雷伯氏桿菌、不動(dòng)桿菌部分菌株、流桿嗜血桿菌變形桿菌、沙雷桿菌、綠膿桿菌等有抗菌作用。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了胱氨酸及半胱氨酸可以通過(guò)調(diào)控細(xì)菌代謝，改變細(xì)菌的耐藥性，能夠提高細(xì)菌及耐藥菌對(duì)抗生素的敏感性，可以作為抗生素增敏劑使用，可用于提高抗生素的有效性。胱氨酸進(jìn)入細(xì)胞后是轉(zhuǎn)化為半胱氨酸來(lái)起作用，半胱氨酸也可直接進(jìn)入細(xì)胞作用。但由于半胱氨酸不夠穩(wěn)定，易被氧化，在實(shí)際使用時(shí)主要采用胱氨酸。含增敏氨基酸的抑菌劑，包括增敏氨基酸和抗生素，所述增敏氨基酸為胱氨酸或半胱氨酸，所述增敏氨基酸和抗生素的質(zhì)量比為24-960：0.05-20。上述的抑菌劑，所述抗生素為諾氟沙星、硫酸慶大霉素、氨芐青霉素、頭孢唑林、亞胺培南、慶大霉素中的一種或幾種。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由胱氨酸、諾氟沙星和水組成，胱氨酸的濃度為24-480mg/l，諾氟沙星的濃度為0.05-0.2mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制大腸桿菌野生型mg1655和大腸桿菌突變型zm12時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，胱氨酸的濃度為120-480mg/l，諾氟沙星的濃度為0.05-0.2mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制大腸桿菌野生型mg1655和大腸桿菌突變型zm12時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由胱氨酸、硫酸慶大霉素和水組成，胱氨酸的濃度為120-480mg/l，硫酸慶大霉素的濃度為0.5-2mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制大腸桿菌野生型mg1655和大腸桿菌突變型zm12時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由胱氨酸、硫酸慶大霉素和水組成，胱氨酸的濃度為480mg/l，硫酸慶大霉素的濃度為0.5-2mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制大腸桿菌野生型mg1655和大腸桿菌突變型zm12時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由胱氨酸、氨芐青霉素和水組成，胱氨酸的濃度為120-480mg/l，氨芐青霉素的濃度為5-20mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制大腸桿菌野生型mg1655和大腸桿菌突變型zm12時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由胱氨酸、氨芐青霉素和水組成，胱氨酸的濃度為480mg/l，氨芐青霉素的濃度為5-20mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制大腸桿菌野生型mg1655和大腸桿菌突變型zm12時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由胱氨酸、頭孢唑林和水組成，胱氨酸的濃度為0.5mg/l，頭孢唑林的濃度為0.5mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制肺炎克雷伯桿菌時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由胱氨酸、亞胺培南和水組成，胱氨酸的濃度為0.5mg/l，亞胺培南的濃度為1mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制金黃色葡萄球菌時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由胱氨酸、慶大霉素和水組成，胱氨酸的濃度為0.5mg/l，慶大霉素的濃度為1mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制奇異變形桿菌時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由半胱氨酸、諾氟沙星和水組成，胱氨酸的濃度為48-960mg/l，諾氟沙星的濃度為0.05-0.2mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制大腸桿菌野生型mg1655和大腸桿菌突變型zm12時(shí)，效果較好。上述的抑菌劑，所述抑菌劑由半胱氨酸、諾氟沙星和水組成，胱氨酸的濃度為960mg/l，諾氟沙星的濃度為0.05-0.2mg/l。該抑菌劑在實(shí)際用于抑制大腸桿菌野生型mg1655和大腸桿菌突變型zm12時(shí)，效果較好。大腸桿菌野生型mg1655和突變型zm12的來(lái)源均是美國(guó)伊利諾伊大學(xué)jamesa.imlay教授饋贈(zèng)。本發(fā)明的抑菌劑包括增敏氨基酸和抗生素，增敏氨基酸為胱氨酸或半胱氨酸，將增敏氨基酸和抗生素聯(lián)用可以提高細(xì)菌對(duì)抗生素的敏感性，從而克服耐藥菌對(duì)目的藥物的耐藥性，從而使抑菌劑更好的發(fā)揮殺菌或抑菌活性，為克服細(xì)菌耐藥提供一種新的解決途徑。將增敏氨基酸和抗生素以合適的濃度聯(lián)用可以顯著提高抗生素的殺菌作用，與現(xiàn)有的只用抗生素作為抗菌藥物相比，具有更好的效果以及更高的安全性和操作性。本發(fā)明的抑菌劑在使用時(shí)能夠較少抗生素的用量，既能較好的抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，還能防止濫用抗生素導(dǎo)致的耐藥菌株增多、耐藥性性增強(qiáng)。附圖說(shuō)明圖1為試驗(yàn)例1中單獨(dú)胱氨酸對(duì)大腸桿菌的抑制效果圖；圖2為試驗(yàn)例1中單獨(dú)半胱氨酸對(duì)大腸桿菌的抑制效果圖；圖3為試驗(yàn)例2中各抑菌劑對(duì)大腸桿菌的抑制效果圖；圖4為試驗(yàn)例3中各抑菌劑對(duì)大腸桿菌的抑制效果圖；圖5為試驗(yàn)例4中各抑菌劑對(duì)大腸桿菌的抑制效果圖；圖6為試驗(yàn)例5中各抑菌劑對(duì)大腸桿菌的抑制效果圖；圖7為試驗(yàn)例6中各抑菌劑對(duì)菌的抑制效果圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。以下實(shí)施例及試驗(yàn)例中大腸桿菌野生型mg1655和突變型zm12的來(lái)源均是美國(guó)伊利諾伊大學(xué)jamesa.imlay教授饋贈(zèng)。下述實(shí)施例及試驗(yàn)例所使用的實(shí)驗(yàn)方法若無(wú)特殊說(shuō)明，均為本
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現(xiàn)有常規(guī)的方法，所使用的配料或材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為通過(guò)商業(yè)途徑可得到的配料或材料。實(shí)施例1本實(shí)施例中的含增敏氨基酸的抑菌劑由胱氨酸、諾氟沙星、水組成，胱氨酸的濃度為120mg/l，諾氟沙星的濃度為0.05mg/l。實(shí)施例1-36中的胱氨酸抑菌劑由胱氨酸、抗生素、水組成，胱氨酸及抗生素的濃度如表1所示。表1實(shí)施例1-36中的抑菌劑組成實(shí)施例37-39中的含增敏氨基酸抑菌劑由胱氨酸、抗生素、水組成，胱氨酸和抗生素的濃度如表2所示。表2實(shí)施例37-39中的抑菌劑組成胱氨酸(mg/l)頭孢唑林(mg/l)亞胺培南(mg/l)慶大霉素(mg/l)實(shí)施例370.50.5實(shí)施例380.51實(shí)施例390.51實(shí)施例40-54中的含增敏氨基酸抑菌劑由半胱氨酸、抗生素、水組成，半胱氨酸和抗生素的濃度如表3所示。表3實(shí)施例40-54中的抑菌劑組成半胱氨酸(mg/l)諾氟沙星(mg/l)實(shí)施例40480.05實(shí)施例41480.1實(shí)施例42480.2實(shí)施例43960.05實(shí)施例44960.1實(shí)施例45960.2實(shí)施例462400.05實(shí)施例472400.1實(shí)施例482400.2實(shí)施例494800.05實(shí)施例504800.1實(shí)施例514800.2實(shí)施例529600.05實(shí)施例539600.1實(shí)施例549600.2對(duì)比例1本對(duì)比例中的抑菌劑為0.05mg/l的諾氟沙星水溶液。對(duì)比例1-11中的抑菌劑為抗生素水溶液，抗生素的種類及濃度如表4所示。對(duì)比例7為無(wú)菌水，不含有抗生素。表4對(duì)比例1-11中的抑菌劑成分對(duì)比例14-29中抑菌劑為胱氨酸或半胱氨酸，其濃度如表5所示。表5對(duì)比例14-29中的抑菌劑成分試驗(yàn)例1細(xì)菌樣品的制備：挑取大腸桿菌mg1655的菌落分別于30ml的lb液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)至飽和。然后在接種到貧硫培養(yǎng)基中培養(yǎng)4h左右，將其稀釋到菌體值od600＝0.2，吸取菌液至25ml錐形瓶中備用。取od600＝0.2左右的大腸桿菌野生型mg1655的菌液1ml于試管中，然后加入對(duì)比例14-29中的胱氨酸或半胱氨酸水溶液，于37℃恒溫培養(yǎng)17h左右。用液體培養(yǎng)的方法，通過(guò)檢測(cè)菌量增長(zhǎng)狀況(od600)檢測(cè)對(duì)比例14-29對(duì)于大腸桿菌mg1655的抑制情況。對(duì)比例14-21的結(jié)果如圖1所示，對(duì)比例22-29的結(jié)果如圖2所示，縱坐標(biāo)為胱氨酸或半胱氨酸的濃度，單位為mg/l；結(jié)果表明在胱氨酸或者半胱氨酸的單獨(dú)作用下，隨著胱氨酸或半胱氨酸濃度的增大，其對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)基本上沒(méi)有抑制作用。試驗(yàn)例2細(xì)菌樣品的制備：挑取大腸桿菌zm12的菌落分別于30ml的lb液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)至飽和。然后在接種到貧硫培養(yǎng)基中培養(yǎng)4h左右，將其稀釋到菌體值od600＝0.2，吸取菌液至25ml錐形瓶中備用。取od600＝0.2左右的大腸桿菌zm12的菌液1ml于試管中，然后加入實(shí)施例16-24及對(duì)比例4-6、對(duì)比例7、14、16、17的抑菌劑，于37℃恒溫培養(yǎng)17h左右。用液體培養(yǎng)的方法，通過(guò)檢測(cè)菌量增長(zhǎng)狀況(od600)檢測(cè)實(shí)施例16-24及對(duì)比例4-6、對(duì)比例7、14、16、17中的抑菌劑對(duì)于大腸桿菌zm12的抑制情況。結(jié)果如圖3所示，圖3中從左至右是對(duì)比例7、對(duì)比例4-6；對(duì)比例14、實(shí)施例16-18；對(duì)比例16，實(shí)施例19-21；對(duì)比例17，實(shí)施例22-24，從圖中可以看出當(dāng)胱氨酸濃度恒定的情況下，與硫酸慶大霉素聯(lián)用時(shí)可顯著抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況，均可提高細(xì)菌多種抗生素的敏感性。但當(dāng)胱氨酸的濃度逐漸增大時(shí)，可基本上抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。試驗(yàn)例3按照試驗(yàn)例1的方法制備大腸桿菌mg1655菌液樣品。取od600＝0.2左右的大腸桿菌野生型mg1655的菌液1ml于試管中，然后加入實(shí)施例19-27、7-15、28-36及對(duì)比例1-3、4-6、7-10的抑菌劑，于37℃恒溫培養(yǎng)17h左右。用液體培養(yǎng)的方法，通過(guò)檢測(cè)菌量增長(zhǎng)狀況(od600)檢測(cè)實(shí)施例19-27、7-15、28-36及對(duì)比例1-3、4-6、7-10中的抑菌劑對(duì)于大腸桿菌mg1655的抑制情況。結(jié)果如圖4所示。圖4中從左至右依次是對(duì)比例7、對(duì)比例4-6、對(duì)比例1-3、對(duì)比例8-10；對(duì)比例16、實(shí)施例19-21、實(shí)施例7-9、實(shí)施例28-30；對(duì)比例17、實(shí)施例22-24、實(shí)施例10-12、實(shí)施例31-33；對(duì)比例18、實(shí)施例25-27、實(shí)施例13-15、實(shí)施例34-36，從圖4中可以看出在胱氨酸濃度恒定的情況下，與諾氟沙星、氨芐青霉素、硫酸慶大霉素聯(lián)用時(shí)均可顯著抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況，均可提高細(xì)菌對(duì)多種抗生素的敏感性。但當(dāng)胱氨酸的濃度逐漸增大時(shí)，可基本上抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。試驗(yàn)例4按照試驗(yàn)例1的方法制備大腸桿菌mg1655菌液樣品。取od600＝0.2左右的大腸桿菌野生型mg1655的菌液1ml于試管中，然后加入實(shí)施例1-15及對(duì)比例7、對(duì)比例1-3、14-18的抑菌劑，于37℃恒溫培養(yǎng)17h左右。用液體培養(yǎng)的方法，通過(guò)檢測(cè)菌量增長(zhǎng)狀況(od600)檢測(cè)實(shí)施例1-15及對(duì)比例1-3、14-18的抑菌劑對(duì)于大腸桿菌mg1655的抑制情況。結(jié)果如圖5所示，圖5從左至右分別是對(duì)比例7、對(duì)比例1-3；對(duì)比例14、實(shí)施例1-3；對(duì)比例15、實(shí)施例4-6；對(duì)比例16、實(shí)施例7-9；對(duì)比例17、實(shí)施例10-12；對(duì)比例18、實(shí)施例13-15，從圖5中可以看出當(dāng)胱氨酸在較低濃度下時(shí)，諾氟沙星抗生素與胱氨酸聯(lián)用時(shí)能夠促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)，但是當(dāng)胱氨酸與抗生素的濃度同時(shí)增大時(shí)，諾氟沙星與胱氨酸聯(lián)用時(shí)能夠顯著降低細(xì)菌的生長(zhǎng)。因此胱氨酸與抗生素聯(lián)用能夠提高細(xì)菌對(duì)抗生素的敏感性，且具有濃度依賴性。試驗(yàn)例5按照試驗(yàn)例1的方法制備大腸桿菌mg1655菌液樣品。取od600＝0.2左右的大腸桿菌野生型mg1655的菌液1ml于試管中，然后加入實(shí)施例40-54及對(duì)比例7、對(duì)比例1-3、22-29的抑菌劑，于37℃恒溫培養(yǎng)17h左右。用液體培養(yǎng)的方法，通過(guò)檢測(cè)菌量增長(zhǎng)狀況(od600)檢測(cè)實(shí)施例40-54及對(duì)比例1-3、22-29中的抑菌劑對(duì)于大腸桿菌mg1655的抑制情況。結(jié)果如6所示，圖6從左至右分別是對(duì)比例7、對(duì)比例1-3；對(duì)比例22、實(shí)施例40-42；對(duì)比例23、實(shí)施例43-45；對(duì)比例24、實(shí)施例46-48；對(duì)比例25、實(shí)施例49-51；對(duì)比例26、實(shí)施例52-54，從圖6中可以看出當(dāng)胱氨酸在較低濃度下時(shí)，諾氟沙星抗生素與半胱氨酸聯(lián)用時(shí)能夠促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)，但是當(dāng)半胱氨酸與抗生素的濃度同時(shí)增大時(shí)，諾氟沙星與半胱氨酸聯(lián)用時(shí)能夠顯著降低細(xì)菌的生長(zhǎng)。因此半胱氨酸與抗生素聯(lián)用能夠提高細(xì)菌對(duì)抗生素的敏感性，且具有濃度依賴性。試驗(yàn)例6按照試驗(yàn)例1的方法制備肺炎克雷伯桿菌、金黃色葡萄菌、奇異變形桿菌的菌液樣品。1、取稀釋后的肺炎克雷伯桿菌稀釋液od600＝0.2左右的菌液1ml于試管中，然后依次分加入實(shí)施例37及對(duì)比例7、11中的抑菌劑，于37℃恒溫培養(yǎng)17h左右。用液體培養(yǎng)的方法，通過(guò)檢測(cè)菌量增長(zhǎng)狀況(od600)檢測(cè)實(shí)施例37及對(duì)比例7、11中的抑菌劑對(duì)于肺炎克雷伯桿菌的抑制情況。2、取稀釋后的金黃色葡萄菌稀釋液od600＝0.2左右的菌液1ml于試管中，然后依次分加入實(shí)施例38及對(duì)比例7、12中的抑菌劑，于37℃恒溫培養(yǎng)17h左右。用液體培養(yǎng)的方法，通過(guò)檢測(cè)菌量增長(zhǎng)狀況(od600)檢測(cè)實(shí)施例38及對(duì)比例7、12中的抑菌劑對(duì)于金黃色葡萄菌的抑制情況。3、取稀釋后的奇異變形桿菌稀釋液od600＝0.2左右的菌液1ml于試管中，然后依次分加入實(shí)施例39及對(duì)比例7、13中的抑菌劑，于37℃恒溫培養(yǎng)17h左右。用液體培養(yǎng)的方法，通過(guò)檢測(cè)菌量增長(zhǎng)狀況(od600)檢測(cè)實(shí)施例39及對(duì)比例7、13中的抑菌劑對(duì)于奇異變形桿菌的抑制情況。結(jié)果如圖7所示。圖7從左至右依次是，對(duì)比例7、對(duì)比例11、實(shí)施例37；對(duì)比例7、對(duì)比例12、實(shí)施例38；對(duì)比例7、對(duì)比例13、實(shí)施例39，從圖7中可以看出：對(duì)于肺炎克雷伯桿菌而言，在抗生素頭孢唑林濃度一定的情況下，與胱氨酸聯(lián)用時(shí)，可明顯抑制肺炎克雷伯桿菌的生長(zhǎng)；對(duì)于金黃色葡萄菌而言在抗生素亞胺培南濃度一定的情況下，與胱氨酸聯(lián)用時(shí)可明顯抑制金黃色葡萄菌的生長(zhǎng)；對(duì)于奇異變形桿菌而言，在抗生素慶大霉素濃度一定的情況下，與胱氨酸聯(lián)用時(shí)可明顯抑制奇異變形桿菌的生長(zhǎng)。當(dāng)前第1頁(yè)12