一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于臨床測(cè)定血清中同型半胱氨酸含量的檢測(cè)試劑，屬于臨床體外檢 測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy)亦稱(chēng)高半胱氨酸，是甲硫氨酸代謝過(guò)程 中產(chǎn)生的一種含硫氨基酸。20世紀(jì)60年代末，McCully從病理上發(fā)現(xiàn)高胱氨酸尿癥和胱 硫醚尿癥患者早期即可發(fā)生全身動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成，20世紀(jì)70年代初又通過(guò)動(dòng) 物模型證實(shí)同型半胱氨酸在血中蓄積可導(dǎo)致血管損害，80年代人們提出高同型半胱氨酸 血癥是動(dòng)脈硬化和冠心病的1個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。血清同型半胱氨酸逐漸成為多種疾病檢測(cè) 相關(guān)項(xiàng)目。
[0003]目前，同型半胱氨酸的測(cè)定方法有很多種，參考方法是高效液相色譜法（HPLC )，雖然靈敏度、特異性好，但儀器價(jià)格昂貴而不能推廣。高效液相色譜法（HPLC)是目前比 較成熟且推廣使用的方法，不足之處是樣品處理、層析條件、樣品檢測(cè)及定量的諸多變異， 使其難以標(biāo)準(zhǔn)化。離子色譜法與毛細(xì)管電泳法，主要用于實(shí)驗(yàn)研究，臨床上較少使用； 酶聯(lián)免疫分析法（EIA)是臨床上測(cè)定同型半胱氨酸水平的常用方法，特點(diǎn)是操作方便， 快捷，重復(fù)性好，但是大部分操作仍需要手工操作，比較耗時(shí)，不適合臨床大批量標(biāo)本 同時(shí)測(cè)定；目前，臨床上最常用的是熒光偏振免疫法，雖可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析，但需專(zhuān)門(mén) 儀器，且試劑昂貴。
[0004] 隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外逐漸采用循環(huán)酶方法測(cè)定血清Hcy，該 法可用于全自動(dòng)生化分析儀，操作方便快捷，可以滿足臨床檢驗(yàn)需要。但該方法所用試 劑穩(wěn)定性不佳，抗干擾能力差等缺點(diǎn)，需要進(jìn)一步改善。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的提供一種同型半胱氨酸的檢測(cè)試劑，一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測(cè) 試劑盒，其包試劑R1和試劑R2 : 本發(fā)明采用液體雙試劑比色法測(cè)試血清中的同型半胱氨酸的含量。與國(guó)內(nèi)常見(jiàn)試劑盒 相比，本試劑盒采用新的緩沖液和穩(wěn)定劑，顯著改善了試劑的穩(wěn)定性。此外，所采用新型兩 性表面活性劑椰油酰胺丙基甜菜堿，不僅顯著改善測(cè)定的性能，并且顯著改善了試劑的穩(wěn) 定性和抗干擾能力。試劑的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性良好，價(jià)格便宜，使用方便，完全可以滿足臨床 需要。
[0006] -種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑，包括體積比為240:65的試劑1和試劑2,試劑 1和試劑2的組成及含量如下： 試劑1 (R1): 溶劑：PIPES(哌嗪-1，4-二乙磺酸）緩沖液（pH=8. 0, 25°C) S_腺苷甲硫氨酸（SAM) 0. 15mmol/L NADH 0.35mmol/L 三（2羧乙基）膦氯化氫（TCEP) 0. 6 mmol/L a一麗戊二酸 5. 3mmol/L 乙二胺四乙酸二鈉 lmmol/L 椰油酰胺丙基甜菜堿 3g/L 疊氮鈉（NaN3) 0. 5g/L； 試劑2 (R2): 溶劑：HEPES緩沖液（pH=7. 0, 25°C) Hey甲基轉(zhuǎn)移酶（HMTase) 1. 5KU/L 谷氨酸脫氫酶（GLDH) 1. 8KU/L S_腺苷同型半胱氨酸（SAH)水解酶（SAHase) 3. 0KU/L 腺苷脫氨酶（ADA) 5.5KU/L 聚乙二醇6000 lg/L 牛血清白蛋白（BSA) lg/L 椰油酰胺丙基甜菜堿 3g/L 疊氮鈉（NaN3) 0. 5g/L。
[0007] 本發(fā)明的有益效果如下： 1)雙試劑比色法測(cè)定HCY，相比三試劑而言，使用更加方便快捷。
[0008] 2)采用新的緩沖液和穩(wěn)定劑，顯著改善了試劑的穩(wěn)定性。
[0009] 3)采用新型兩性表面活性劑椰油酰胺丙基甜菜堿，不僅顯著改善測(cè)定的性能，而 且對(duì)維護(hù)體系的穩(wěn)定，防止出現(xiàn)脂濁，效果明顯，相比之前所用的TRITONX-405(曲拉通 X-405)、TWEEN-20 (吐溫20)，并且顯著改善了試劑的穩(wěn)定性和抗干擾能力。
【附圖說(shuō)明】 圖1為實(shí)施例1與市場(chǎng)常規(guī)試劑的相關(guān)性曲線圖。 圖2為不同表面活性劑對(duì)本發(fā)明的穩(wěn)定性的影響圖。 圖3實(shí)施例1與常規(guī)試劑的穩(wěn)定性圖。
【具體實(shí)施方式】 [0010] 實(shí)施例1 本實(shí)施例所描述的同型半胱氨酸的檢測(cè)試劑，包括 試劑1 (R1): 溶劑PIPES(哌嗪-1，4-二乙磺酸）緩沖液（pH=8. 0, 25°C) S_腺苷甲硫氨酸（SAM) 0.15mmol/L NADH0.35mmol/L 三（2羧乙基）膦氯化氫（TCEP) 0. 6 mmol/L a一麗戊二酸 5. 3mmol/L 乙二胺四乙酸二鈉 lmmol/L 椰油酰胺丙基甜菜堿 3g/L 疊氮鈉（NaN3) 0. 5g/L； 試劑2 (R2): 溶劑HEPES緩沖液（pH=7. 0, 25°C) Hey甲基轉(zhuǎn)移酶（HMTase) 1. 5KU/L 谷氨酸脫氫酶（GLDH) 1. 8KU/L S_腺苷同型半胱氨酸（SAH)水解酶（SAHase) 3. 0KU/L 腺苷脫氨酶（ADA) 5.5KU/L 聚乙二醇6000 lg/L 牛血清白蛋白（BSA) lg/L 椰油酰胺丙基甜菜堿 3g/L 疊氮鈉（NaN3) 0. 5g/L。
[0011] 本實(shí)施例試劑的使用方法： 本實(shí)施例描述的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑，在使用時(shí)采用具有雙試劑功能的全自動(dòng)生化 分析儀，如東芝40全自動(dòng)分析儀等，利用雙試劑速率法進(jìn)行測(cè)定。將R1和R2放置到對(duì)應(yīng) 的試劑位上，在樣品盤(pán)的對(duì)應(yīng)位置放置好蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，操作如表1 : 表1實(shí)施例1試劑檢測(cè)方法
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑，其特征在于，包括體積比為240:65的試劑1和 試劑2,試劑1和試劑2的組成及含量如下： 試劑1 溶劑 PIPES (哌嗪-1，4-二乙磺酸）緩沖液，pH=8. 0, 25°C S-腺苷甲硫氨酸 0. 15 mmol/L NADH 0.35 mmol/L 三（2羧乙基）膦氯化氫 0. 6 mmol/L a 一麗戊二酸 5. 3 mmol/L 乙二胺四乙酸二鈉 lmmol/L 椰油酰胺丙基甜菜堿 3g/L 疊氮鈉 〇. 5g/L ; 試劑2 溶劑 HEPES 緩沖液，pH=7. 0, 25°C， Hey甲基轉(zhuǎn)移酶 1. 5KU/L 谷氨酸脫氫酶 1. 8KU/L S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 3.0KU/L 腺苷脫氨酶 5. 5KU/L 聚乙二醇6000 lg/L 牛血清白蛋白 lg/L 椰油酰胺丙基甜菜堿 3g/L 疊氮鈉 0. 5g/L 。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑，包括試劑1和試劑2，本發(fā)明對(duì)試劑1和試劑2進(jìn)行了改進(jìn)，使本發(fā)明與同類(lèi)檢測(cè)試劑對(duì)比相關(guān)性好，臨床檢測(cè)樣本結(jié)果一致，能夠達(dá)到市場(chǎng)對(duì)產(chǎn)品的應(yīng)用要求，并且靈敏度高，抗干擾性能好，是一種更加穩(wěn)定、良好的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑。
【IPC分類(lèi)】C12Q1-32, C12Q1-34, C12Q1-48
【公開(kāi)號(hào)】CN104531834
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410195118
【發(fā)明人】甘宜梧, 李志明, 王綺, 譚柏清
【申請(qǐng)人】山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年5月9日