發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種具有協(xié)同作用的α-淀粉酶抑制劑的組合物，屬醫(yī)藥生物領(lǐng)域。

發(fā)明背景

糖尿病是一種內(nèi)分泌代謝紊亂疾病，是由胰島素分泌及利用障礙引起的以高血糖為特征的慢性疾病，分為以胰島素分泌量不足的i型糖尿病和以胰島素敏感性受損的ii型糖尿病。根據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟(idf)統(tǒng)計，截至2015年中國糖尿病患者人數(shù)為1億960萬，居全球首位。全球糖尿病患者人數(shù)為4.15億，每年有500萬人死于糖尿病相關(guān)疾病。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(who)預測，2016年全球用于糖尿病的醫(yī)療開支將會達到530億美元，僅次于腫瘤位列第二。此外隨著生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，因此，糖尿病藥物的研發(fā)不僅具有極高的商業(yè)價值，更對人類健康有著十分巨大的意義。

糖尿病的主要特征是患者血糖(葡萄糖)值高于正常值，而血糖主要的來源是中淀粉等多糖的水解。人們已經(jīng)搞清多糖在體內(nèi)的水解，是在一系列α-糖苷酶參與完成的。淀粉首先由唾液α-淀粉酶和胰腺α-淀粉酶水解，產(chǎn)生麥芽糖和麥芽三糖等麥芽寡糖；后續(xù)的消化步驟由附著在小腸粘膜上皮細胞上的α-葡萄糖苷酶完成，即由α-葡萄糖苷酶水解麥芽糖和麥芽寡糖生成葡萄糖(proteincell,2011,10,827–836)。因此，盡管α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶都參與到人體的糖代謝過程中，但它們的氨基酸序列和結(jié)構(gòu)有很大差異，在消化碳水化合物過程中水解的底物不同，所參與的代謝的階段也大相徑庭。

α-糖苷酶的抑制劑可抑制淀粉等多糖水解，減少了葡萄糖進入血液，進而達到降低血糖值的作用。一些天然產(chǎn)物被證明具有α-葡萄糖苷酶的抑制活性，如cn1559539a公開了從蠶沙或桑葉中提取的生物堿和黃酮類提取物聯(lián)用對α-葡萄糖苷酶的協(xié)同抑制作用。cn102258570a公開了卷柏活性提取物和夏枯草活性提取物聯(lián)用對酵母α-葡萄糖苷酶的協(xié)同抑制作用。人們也從植物中發(fā)現(xiàn)了一些具有α-淀粉酶抑制活性的化合物，其中三萜類化合物齊墩果酸對α-淀粉酶具有抑制作用(foodsci.technol.res,2003,9,35–39)。還有研究表明，三萜類化合物如齊墩果酸、科羅索酸等，具有降低餐后血糖和改善糖尿病的作用(phytother.res,2011,25,1031–1040；diabetesresclinpr,2006,73,174–177)。但這些天然產(chǎn)物單獨使用時，對α-糖苷酶的抑制活性較低，降糖效果較差。

阿卡波糖是一種活性較強的α-糖苷酶抑制劑類藥物，同時具有α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性，但對α-淀粉酶的抑制活性遠強于對α-葡萄糖苷酶的抑制作用。該藥物是除胰島素外，在中國占有最大銷售額的糖尿病藥物。臨床應用中，阿卡波糖也存在一定問題。其一，阿卡波糖對α-淀粉酶的抑制作用仍偏弱，導致臨床劑量偏大。其二，阿卡波糖具有一定副作用，主要表現(xiàn)為腹脹、脹氣等不適，嚴重時可致胃腸道疾病，影響了其在臨床上的應用。如何降低阿卡波糖的臨床劑量和副作用是一個急需解決的問題。

具有協(xié)同作用的聯(lián)用藥物一方面可增強單獨用藥的藥效，另外一方面可減輕藥物大劑量單用所導致的副作用。對于具有協(xié)同作用的聯(lián)用藥物，可以利用chou等人提出的協(xié)同指數(shù)法(ci,combinationindex)來評價其協(xié)同作用的強弱，該方法可在酶抑制劑、抗菌、對細胞增殖抑制、體內(nèi)活性評價等諸多領(lǐng)域應用。根據(jù)藥物間的協(xié)同、疊加和拮抗作用，藥物相互作用計算出的ci值可以分為三個區(qū)間。其中協(xié)同作用ci<0.9；疊加作用0.9<ci<1.1；拮抗作用ci>1.1(pharmacologicalreviews2006,58,621-681)。

在降低阿卡波糖劑量和副作用的研究中，已有利用藥物聯(lián)用取得實質(zhì)性結(jié)果的研究報道：本發(fā)明團隊的前期研究結(jié)果表明以麥芽糖、淀粉為底物時，木蝴蝶種子提取物與阿卡波糖聯(lián)用對于大鼠小腸α-糖苷酶有抑制作用，并且表現(xiàn)出協(xié)同作用。不同濃度的木蝴蝶種子提取物和阿卡波糖聯(lián)用時，ci值為0.24～0.98。本發(fā)明團隊也公開了黃酮類化合物和糖苷酶抑制劑聯(lián)用對α-糖苷酶的協(xié)同抑制作用(cn104984346a)。然而，在針對阿卡波糖臨床優(yōu)化的藥物聯(lián)用研究中同時發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合阿卡波糖的藥用組合物一般具有苛刻的選擇性。比如在上述報導中，木蝴蝶種子提取物與阿卡波糖的組合物對α-糖苷酶表現(xiàn)出協(xié)同抑制作用，但其對于酵母源α-葡萄糖苷酶表現(xiàn)出拮抗作用，對于豬胰腺α-淀粉酶，無協(xié)同抑制作用(張博崴大連理工大學碩士論文2014)。黃酮類化合物和糖苷酶抑制劑聯(lián)用對α-糖苷酶表現(xiàn)出協(xié)同抑制作用，但對α-淀粉酶卻未表現(xiàn)協(xié)同抑制。因此，協(xié)同用藥的效果難以預測，這給相關(guān)研發(fā)帶來許多困難及一定的隨機性。即使如此，考慮到阿卡波糖最主要的活性針對α-淀粉酶的抑制作用，開發(fā)和α-淀粉酶具有協(xié)同抑制作用的藥物組合物，具有十分重要的應用價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種具有α-淀粉酶協(xié)同抑制活性的組合物，該組合物包括三萜類化合物和α-糖苷酶抑制劑。

該組合物具有很強的協(xié)同抑制α-淀粉酶作用，能更有效的抑制α-淀粉酶活性，更少地使用以阿卡波糖為代表的α-糖苷酶抑制劑類藥物的用量，因此事實上提高了藥效，并效降低阿卡波糖為代表的α-糖苷酶抑制劑類藥物的毒副作用，并且有效地解決了藥物聯(lián)用易引發(fā)低血糖等問題。

附圖說明

本發(fā)明附圖10幅。

圖1是齊墩果酸、白樺脂酸、白樺脂醇、科羅索酸、甘草次酸與甘草酸的化學結(jié)構(gòu)。

圖2是齊墩果酸與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制的試驗結(jié)果。

圖3是不同比例的齊墩果酸與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制試驗結(jié)果。

圖4是白樺脂酸與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制的試驗結(jié)果。

圖5是白樺脂醇與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制的試驗結(jié)果。

圖6是科羅索酸與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制的試驗結(jié)果。

圖7是甘草次酸與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制的試驗結(jié)果。

圖8是甘草酸與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制的試驗結(jié)果。

圖9是黃芩苷元與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制的試驗結(jié)果。

圖10是木蝴蝶種子提取物與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶活性抑制試驗結(jié)果。

具體實施方式

本發(fā)明基于對三萜類化合物和α-糖苷酶抑制劑的協(xié)同效應的發(fā)現(xiàn)。首先提供一類具有α-淀粉酶協(xié)同抑制活性的組合物，包括三萜類化合物和α-糖苷酶抑制劑。

其中所述的三萜類化合物包括三萜類化合物單體及其可藥用衍生物，包括但不限于三萜類化合物單體、所述單體的可藥用鹽、所述單體的可藥用酯。

更為具體地，三萜類化合物單體的可藥用鹽包括所述單體的有機鹽類化合物以及所述單體的鹽類化合物?？膳e例但不限于：鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、鐵鹽、鋁鹽、銅鹽、鹵化物、哌嗪鹽。三萜類化合物單體的可藥用酯包括但不限于所述三萜類化合物單體的c1-4醇酯。列舉為：甲酯、乙酯、丙酯、異丙酯、正丁酯、異丁酯、叔丁酯。

作為優(yōu)選的實施方式，上述本發(fā)明組合物中所述的三萜類化合物包括齊墩果烷型三萜類化合物和羽扇豆烷型三萜類化合物。其中的齊墩果烷型三萜類化合物可優(yōu)選舉例但不限于齊墩果酸、科羅索酸、甘草酸、甘草次酸，以及這些單體的可藥用衍生物；羽扇豆烷型三萜類化合物可優(yōu)選舉例但不限于白樺脂酸、白樺脂醇，以及這些單體的可藥用衍生物。

更為具體的實施方式中，上述本發(fā)明組合物中所述的三萜類化合物選自下述化合物單體或其可藥用衍生物：齊墩果酸、科羅索酸、甘草酸、甘草次酸、白樺脂酸、白樺脂醇。

另一具體的實施方式中，上述本發(fā)明組合物中所述的α-糖苷酶抑制劑是阿卡波糖。

在上述本發(fā)明所述的組合中，所述的三萜類化合物與α-糖苷酶抑制劑，尤其是阿卡波糖，的使用相對劑量并未表現(xiàn)出對協(xié)同效應的顯著影響。

作為具體的實施方式，上述本發(fā)明的組合物中。所述的三萜類化合物和α-糖苷酶抑制劑的摩爾比是0.1～2000:1。在該比值范圍內(nèi)，兩種組分的相對使用量根據(jù)三萜類化合物的不同略有差異。

具體實施方式之一，所述的組合物中，齊墩果酸或其可藥用衍生物與α-糖苷酶抑制劑的摩爾比為0.5～200:1，優(yōu)選1～180：1，更優(yōu)選2～160:1。

具體實施方式之一，所述的組合物中，科羅索酸或其可藥用衍生物與α-糖苷酶抑制劑的摩爾比為0.1～100:1，優(yōu)選0.3～80:1,更優(yōu)選0.5～60:1。

具體實施方式之一，所述的組合物中，白樺脂酸或其可藥用衍生物與α-糖苷酶抑制劑的摩爾比為2～2000:1，優(yōu)選5～1500：1，更優(yōu)選10～1200:1。

具體實施方式之一，所述的組合物中，白樺脂醇或其可藥用衍生物與α-糖苷酶抑制劑的摩爾比為2～1500:1，優(yōu)選3～1200:1，更優(yōu)選5～1000:1.

具體實施方式之一，所述的組合物中，甘草次酸或其可藥用衍生物與α-糖苷酶抑制劑的摩爾比為2～1500:1，優(yōu)選10～1200:1。

具體實施方式之一，所述的組合物中，甘草酸或其可藥用衍生物與α-糖苷酶抑制劑的摩爾比為2～1500:1，優(yōu)選5～1200:1，更優(yōu)選10～1000:1。

本發(fā)明另一方面提供上述本發(fā)明所述的組合物在制備糖尿病治療藥物中的應用。其中所述的糖尿病包括i型糖尿病和ii型糖尿病。

具體實施方式中，所述的糖尿病治療藥物除了含有有效劑量的所述組合物外，還可以根據(jù)制劑需求包括藥學上可接受的載體和/或賦形劑。所述在藥學上可接受的載體和/或賦形劑是一種或多種常用的填充劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑或矯味劑的載體。填充劑可選自淀粉、蔗糖、乳糖或微晶纖維素；粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑選自羧甲基淀粉鈉、羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素、瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉；表面活性劑可以是十六烷醇或十二烷基硫酸鈉；潤滑劑選自滑石粉、硬脂酸鈣、鎂、微粉硅膠或聚乙二醇等。

再一方面，所述的糖尿病治療藥物可以根據(jù)給藥方式的需求，制備成不同的劑型，所述劑型包括但不限于片劑、膠囊劑、滴丸劑或顆粒劑。

更為具體地描述，本發(fā)明所述的組合物的各種制藥劑型可以按照藥學領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備所需要的制劑。作為舉例但非限定的描述為:片劑包括普通片、薄膜片、腸溶片。制劑中可以選用本發(fā)明所述的組合物干粉，加入適量稀釋劑，如淀粉、糊精、甘露醇、微晶纖維素；適量的粘合劑，如水、乙醇、纖維素、淀粉、明膠；適量的崩解劑，如羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、海藻酸鈉；以及適當?shù)臐櫥瑒?，如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇。還可以加入甜味劑，如d-木糖、木糖醇、麥芽糖醇、甜葉菊素、天冬甜母；然后按常規(guī)濕法制粒，干燥后整?；蛘吒煞ㄖ屏：髩浩?，如為包薄膜衣片，用成膜材料選自纖維素類、聚乙二醇類，按常規(guī)包衣，分裝入密閉瓶或者鋁塑板中。膠囊劑包括普通膠囊劑、腸溶膠囊劑等。制劑中可以選用本發(fā)明所述的組合物干粉，加入適當輔料，如碳酸鈣、甘露醇、氧化鎂、微粉硅膠等；適當潤滑劑，如滑石粉、硬脂酸鎂、乙二醇酯、聚硅酮類；以及適當?shù)恼澈蟿?，如礦物油、食油；還可以加入適當甜味劑，如d-木糖、木糖醇、麥芽糖醇、甜葉菊素、天冬甜母?；旌铣筛煞刍蛘咧瞥深w粒，填充入膠囊，分裝在密閉瓶或者鋁塑板中。

如無特殊說明，本發(fā)明中所使用的阿卡波糖購于拜耳醫(yī)藥保健有限公司，50mg/片；齊墩果酸、科羅索酸、甘草酸、甘草次酸、白樺脂酸、白樺脂醇，購于成都曼思特生物科技有限公司，純度hplc≥98％；α-淀粉酶購于sigma公司；pnpg購于上海寶曼生物有限公司。

如無特殊說明，本說明書中所使用的檢測方法是：

1、參測物對α-淀粉酶抑制活性測定方法：以豬胰腺α-淀粉酶為酶源，以淀粉為底物，dns法測定生成還原糖濃度，反應體系中酶液、三萜類化合物(溶解于乙醇)、阿卡波糖、底物、緩沖液各100μl。酶的終濃度為0.07u/ml，底物淀粉的終濃度為10mg/ml，乙醇終濃度為20％(v/v)。將酶與抑制劑在37℃溫育15min，加入淀粉后啟動反應，反應在37℃持續(xù)10min，加入1mldns溶液，沸水浴5min終止反應并顯色，取200μl樣品加入96孔板，測定其540nm吸光值。

2、參測物對α-葡萄糖苷酶抑制活性測定方法是：sd大鼠(200～220g)禁食16h，乙醚麻醉處死后取小腸，剖開，用預冷的pbs緩沖液沖洗，后按照1:10(w/v)加入pbs緩沖液。將小腸剪成碎段后勻漿，4℃，10000r/min，離心15min，取上清液作為試驗用α-葡萄糖苷酶母液。

酶反應體系總體積為500μl，包括酶液、三萜類化合物、阿卡波糖、麥芽糖、緩沖液各100μl。酶與三萜類化合物、阿卡波糖混勻，37℃溫育30min，麥芽糖溶液啟動反應。37℃溫育，反應30min。葡萄糖氧化酶試劑盒測定生成葡萄糖濃度，酶標儀505nm下測定樣品吸光值。

3、抑制率的測算方法

按照公式(i)計算抑制劑單用或聯(lián)用對酶的抑制率，

公式(i)中：

樣品組(a)：加入抑制劑后的吸光值；

對照組(a)：不加抑制劑，加入對照緩沖液和酶的吸光值。

4、協(xié)同指數(shù)(ci)計算方法

按chou等人的方法，使用compusyn軟件對聯(lián)用藥物在各個抑制率點上的協(xié)同指數(shù)(ci)進行計算。

公式(ii)中：

(d)1：抑制劑1單用達到某特定藥效所需劑量

(d)2：抑制劑2單用達到某特定藥效所需劑量

(dx)1：抑制劑聯(lián)用達到某特定藥效所需抑制劑1的劑量

(dx)2：抑制劑聯(lián)用達到某特定藥效所需抑制劑2的劑量

如果ci小于0.9，則存在協(xié)同作用；ci大于0.9小于1.1，則存在疊加作用；ci大于1.1，則存在拮抗作用。在協(xié)同作用的范圍內(nèi)，ci值越小，協(xié)同作用越強。

下述非限制性實施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明的內(nèi)容，但不應當理解為對本發(fā)明任何形式的限限定。

實施例1：齊墩果酸和阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

檢測結(jié)果如圖2所示，顯示：阿卡波糖單獨使用，在1.3、2.6、5.3、10.5μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為23％～64％，抑制率較低。單獨使用齊墩果酸，在23.5、47.1、94.1、188.2μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為13％～65％，抑制率也較低。將1.3、2.6、5.3、10.5μm阿卡波糖分別和23.5、47.1、94.1、188.2μm齊墩果酸聯(lián)合使用，抑制活性明顯提高，抑制率提升至30％～86％。且各聯(lián)用劑量點的ci值均小于0.62，評價為協(xié)同作用。

實施例2：齊墩果酸和阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

如圖3所示，將23.5、47.1、94.1、188.2μm齊墩果酸分別與1.3、2.6、5.3、10.5μm阿卡波糖聯(lián)用，不同劑量齊墩果酸和不同劑量的與阿卡波糖聯(lián)合使用時，抑制率均高于單用使用三萜類化合物或阿卡波糖，ci值均小于0.65(表1)。表現(xiàn)表明齊墩果酸與阿卡波糖按不同配比聯(lián)用，在各個劑量點上均能夠表現(xiàn)出協(xié)同作用。

表1齊墩果酸與阿卡波糖不同比例聯(lián)用協(xié)同抑制α-淀粉酶的ci值

實施例3：科羅索酸和阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

如圖4所示，阿卡波糖單獨使用在1.3、2.6、5.3、10.5μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為23％～64％，抑制率較低。單獨使用科羅索酸，在7.8、15.6、31.2、62.4μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為15％～66％，抑制率也較低。將1.3、2.6、5.3、10.5μm阿卡波糖分別和7.8、15.6、31.2、62.4μm科羅索酸聯(lián)合使用，抑制活性明顯提高，抑制率提升至36％～89％。且各聯(lián)用劑量點的ci值均小于0.55，評價為協(xié)同作用。同樣，使用7.8μm科羅索酸與10.5μm阿卡波糖，62.4μm科羅索酸與1.3μm阿卡波糖聯(lián)用，ci值分別為0.41和0.45，也為協(xié)同作用。

實施例4：白樺脂酸和阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

如圖5所示，阿卡波糖單獨使用在1.3、2.6、5.3、10.5μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為23％～64％，抑制率較低。單獨使用白樺脂酸，在176.1、352.1、704.2、1408.4μm，對α-淀粉酶的抑制率為16％～61％，抑制率也較低。將1.3、2.6、5.3、10.5μm阿卡波糖分別和176.1、352.1、704.2、1408.4白樺脂酸聯(lián)合使用，抑制活性明顯提高，抑制率提升至35％～88％。且各聯(lián)用劑量點的ci值均小于0.61，評價為協(xié)同作用。同樣，使用176.1μm白樺脂酸與10.5μm阿卡波糖，1408.4μm白樺脂酸與1.3μm阿卡波糖聯(lián)用，ci值分別為0.52和0.57，也為協(xié)同作用。

實施例5：白樺脂醇和阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

如圖6所示，阿卡波糖單獨使用在1.3、2.6、5.3、10.5μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為23％～64％，抑制率較低。單獨使用白樺脂醇，在120.9、241.8、483.5、967.0μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為14％～65％，抑制率也較低。將1.3、2.6、5.3、10.5μm阿卡波糖分別和120.9、241.8、483.5、967.0μm白樺脂醇聯(lián)合使用，抑制活性明顯提高，抑制率提升至32％～86％。且各聯(lián)用劑量點的ci值均小于0.69，評價為協(xié)同作用。同樣，使用120.9μm白樺脂醇與10.5μm阿卡波糖，976.0μm白樺脂醇與1.3μm阿卡波糖聯(lián)用，ci值分別為0.53和0.64，為協(xié)同作用。

實施例6：甘草次酸和阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

如圖7所示，阿卡波糖單獨使用在1.3、2.6、5.3、10.5μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為23％～64％，抑制率較低。單獨使用甘草次酸，在168.3、336.7、673.3、1346.6μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為9％～62％，抑制率較低。將1.3、2.6、5.3、10.5μm阿卡波糖分別和168.3、336.7、673.3、1346.6μm甘草次酸聯(lián)合使用，抑制活性明顯提高，抑制率提升至33％～84％。且各聯(lián)用劑量點的ci值均小于0.71，評價為協(xié)同作用。同樣，使用168.3μm甘草次酸與10.5μm阿卡波糖，1346.6μm甘草次酸與1.3μm阿卡波糖聯(lián)用，ci值分別為0.55和0.67，為協(xié)同作用。

實施例7：甘草酸和阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

如圖8所示，阿卡波糖單獨使用在1.3、2.6、5.3、10.5μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為23％～64％，抑制率較低。單獨使用甘草酸，在136.7、273.4、546.7、1093.4μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為12％～62％，抑制率較低。將1.3、2.6、5.3、10.5μm阿卡波糖和136.7、273.4、546.7、1093.4μm甘草酸聯(lián)合使用，抑制活性明顯提高，抑制率提升至36％～88％。且各聯(lián)用劑量點的ci值均小于0.65，評價為協(xié)同作用。同樣，使用136.7μm甘草酸與10.5μm阿卡波糖，1093.4μm甘草酸與1.3μm阿卡波糖聯(lián)用，ci值分別為0.44和0.60，為協(xié)同作用。

實施例8：黃芩苷元和阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

如圖9所示，阿卡波糖單獨使用在0.9、1.9、2.8、3.7μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為5％～36％。單獨使用黃芩苷元，在46.3、92.5、139、185.0μm濃度下，對α-淀粉酶的抑制率為15％～42％。將0.9、1.9、2.8、3.7μm阿卡波糖分別和46.3、92.5、139、185.0μm黃芩苷元聯(lián)合使用，抑制率為22％～52％，抑制率提升較低，各聯(lián)用劑量的ci值均大于0.9，評價為疊加作用，高劑量點ci值大于1.1，評價為拮抗作用。

實施例9：木蝴蝶種子提取物與阿卡波糖聯(lián)用對α-淀粉酶的抑制活性測試

稱取木蝴蝶種子100g，干燥后，粉碎，用1500ml、體積濃度為90％乙醇水溶液冷浸48h，過濾后，得抽提液。40℃減壓蒸餾除去溶液，得到黃色粉末狀的木蝴蝶種子提取物。

如圖10所示，阿卡波糖單用在2～16μg/ml范圍內(nèi)均表現(xiàn)出抑制作用。木蝴蝶種子提取物單用在2～200μg/ml范圍內(nèi)對α-淀粉酶活性有促進作用，表現(xiàn)為產(chǎn)物濃度測定吸光值的升高。將2、20、200μg/ml木蝴蝶種子提取物與2、8、16μg/ml阿卡波糖聯(lián)用，減弱了阿卡波糖抑制作用，木蝴蝶種子提取物與阿卡波糖聯(lián)用表現(xiàn)為對α-淀粉酶有拮抗抑制作用，沒有協(xié)同抑制作用。

實施例10：三萜類化合物和阿卡波糖聯(lián)用對大鼠α-葡萄糖苷酶的抑制活性測試

如表2所示，阿卡波糖單用終濃度為0.03μm時抑制率為25％，各三萜類化合物終濃度為400μm時抑制率均低于20％，表明三萜類化合物對大鼠α-葡萄糖苷酶抑制作用較弱，各三萜類成分和阿卡波糖聯(lián)用后，抑制率低于三萜類成分和阿卡波糖值之和，未能顯著增加阿卡波糖的抑制作用，表明三萜成分不能和阿卡波糖協(xié)同抑制α-葡萄糖苷酶。

表2三萜類化合物單用對α-葡萄糖苷酶的抑制作用