本發(fā)明涉及藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的藥物組合物及提取物。

背景技術(shù)：

白血病是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病?？寺⌒园籽〖?xì)胞因?yàn)樵鲋呈Э?、分化障礙、凋亡受阻等機(jī)制在骨髓和其他造血組織中大量增殖累積，并浸潤其他非造血組織和器官，同時(shí)抑制正常造血功能。臨床可見不同程度的貧血、出血、感染發(fā)熱以及肝、脾、淋巴結(jié)腫大和骨骼疼痛。據(jù)報(bào)道，我國各地區(qū)白血病的發(fā)病率在各種腫瘤中占第六位。

目前，化療是白血病治療的主要方法之一，而接受長期化療的癌癥病人會(huì)在治療過程中出現(xiàn)多藥耐藥性（mdr）。多藥耐藥性是指，白血病細(xì)胞在化療時(shí)，長期接觸某一化療藥物，不僅會(huì)對這一藥物產(chǎn)生抗藥性，還會(huì)對其他結(jié)構(gòu)和功能不同的化療藥物產(chǎn)生抗藥性，從而大大降低了化學(xué)藥物治療的效果。因此，開發(fā)能逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的藥物是白血病化療急需解決的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的藥物組合物及提取物。

本發(fā)明所要解決的上述技術(shù)問題，通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的藥物組合物，包含如下重量份的成分：沙蟾毒精30~60份；華蟾酥毒基35~60份；遠(yuǎn)華蟾蜍精10~25份；蟾毒它靈20~45份；蟾毒靈25~45份；酯蟾毒配基15~40份。

優(yōu)選地，所述的逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的藥物組合物，包含如下重量份的成分：沙蟾毒精40~50份；華蟾酥毒基40~50份；遠(yuǎn)華蟾蜍精15~20份；蟾毒它靈30~40份；蟾毒靈30~40份；酯蟾毒配基20~30份。

本發(fā)明還提供一種治療白血病的藥物，包含上述藥物組合物以及常用的治療白血病的藥物。

優(yōu)選地，所述的藥物組合物和常用的治療白血病的藥物的重量比為1~5:1~5（比如可以是1:1，1:5，5:1，3:1，1:3，2:1或1:2）；所述的常用的治療白血病的藥物選自阿霉素、阿糖胞苷、苯丁酸氮芥、烏苯美司、佐柔比星、安吖啶中的一種或一種以上的組合。

一種逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的蟾酥提取物，所述的蟾酥提取物含有蟾蜍毒素類有效成分，所述蟾蜍毒素類有效成分中含有如下重量份的成分：

沙蟾毒精30~60份；華蟾酥毒基35~60份；遠(yuǎn)華蟾蜍精10~25份；蟾毒它靈20~45份；蟾毒靈25~45份；酯蟾毒配基15~40份。

優(yōu)選地，所述蟾蜍毒素類有效成分中含有如下重量份的成分：

沙蟾毒精40~50份；華蟾酥毒基40~50份；遠(yuǎn)華蟾蜍精15~20份；蟾毒它靈30~40份；蟾毒靈30~40份；酯蟾毒配基20~30份。

優(yōu)選地，所述的蟾蜍毒素類有效成分占蟾酥提取物總重量的10%以上。

更優(yōu)選地，所述的蟾蜍毒素類有效成分占蟾酥提取物總重量的30%以上。

更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的蟾蜍毒素類有效成分占蟾酥提取物總重量的30~80%。

本發(fā)明提供另一種治療白血病的藥物，其包含上述任一項(xiàng)所述的蟾酥提取物以及常用的治療白血病的藥物。

優(yōu)選地，所述的蟾酥提取物和常用的治療白血病的藥物的重量比為1~5:1~5（比如可以是1:1，1:5，5:1，3:1，1:3，2:1或1:2）；所述的常用的治療白血病的藥物選自阿霉素、阿糖胞苷、苯丁酸氮芥、烏苯美司、佐柔比星、安吖啶中的一種或一種以上的組合。

有益效果：本發(fā)明提供了一種全新的逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的藥物組合物以及蟾酥提取物，所述的藥物組合物以及蟾酥提取物具有優(yōu)異的逆轉(zhuǎn)白血病耐藥性作用；所述的藥物組合物對白血病耐藥性的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為17倍以上；所述蟾酥提取物以所述的藥物組合物作為有效成分，且對白血病耐藥性的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為10倍以上，且隨著其中的有效成分含量越高，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)越大。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例對本發(fā)明不做任何形式的限定。

實(shí)施例1逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的蟾酥提取物的制備

（1）取蟾酥100g加入1l體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇水溶液，在25℃下浸漬3天，過濾即得乙醇提取物；

（2）將乙醇提取物濃縮至無醇味，然后用非極性大孔樹脂柱富集蟾蜍毒素類有效成分；

所述的非極性大孔樹脂柱富集蟾蜍毒素類有效成分的具體方法為：將乙醇提取物上樣于非極性大孔樹脂柱（d101大孔樹脂柱）后，先用水洗脫除雜，再用80%的乙醇洗脫非極性大孔樹脂柱；收集乙醇洗脫部位，濃縮、干燥即得所述的提取物。

經(jīng)檢測，該實(shí)施例制備得到的提取物中蟾蜍毒素類有效成分占蟾酥提取物總重量的64%，其中，蟾蜍毒素類有效成分中含有如下重量份的具體成分：沙蟾毒精47份；華蟾酥毒基47份；遠(yuǎn)華蟾蜍精18份；蟾毒它靈38份；蟾毒靈36份；酯蟾毒配基24份。

上述各成分的檢測方法采用液相色譜進(jìn)行檢測，具體條件為：用agilentzorbaxsbc18（柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm）為色譜柱；以乙腈為流動(dòng)相a，以0.1%乙酸銨溶液為流動(dòng)相b，檢測波長為296nm；柱溫30℃，流速為1.0ml/min。采用梯度洗脫，梯度洗脫條件見表1：

表1.梯度洗脫條件

實(shí)施例2逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的蟾酥提取物的制備

（1）取蟾酥100g加入1l體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇水溶液，在25℃下浸漬3天，過濾即得乙醇提取物；

（2）將乙醇提取物濃縮至無醇味，然后用非極性大孔樹脂柱富集蟾蜍毒素類有效成分；

所述的非極性大孔樹脂柱富集蟾蜍毒素類有效成分的具體方法為：將乙醇提取物上樣于非極性大孔樹脂柱（d101大孔樹脂柱）后，先用水洗脫除雜，再用60%的乙醇洗脫非極性大孔樹脂柱；收集乙醇洗脫部位，濃縮、干燥即得所述的提取物。

經(jīng)檢測，該實(shí)施例制備得到的提取物中蟾蜍毒素類有效成分占蟾酥提取物總重量的44%，其中，蟾蜍毒素類有效成分中含有如下重量份的具體成分：沙蟾毒精55份；華蟾酥毒基36份；遠(yuǎn)華蟾蜍精21份；蟾毒它靈45份；蟾毒靈27份；酯蟾毒配基20份。

實(shí)施例3逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥性的蟾酥提取物的制備

（1）取蟾酥100g加入1l體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇水溶液，在25℃下浸漬2天，過濾即得乙醇提取物；

（2）將乙醇提取物濃縮至無醇味，然后用非極性大孔樹脂柱富集蟾蜍毒素類有效成分；

所述的非極性大孔樹脂柱富集蟾蜍毒素類有效成分的具體方法為：將乙醇提取物上樣于非極性大孔樹脂柱（d101大孔樹脂柱）后，先用水洗脫除雜，再用40%的乙醇洗脫非極性大孔樹脂柱；收集乙醇洗脫部位，濃縮、干燥即得所述的提取物。

經(jīng)檢測，該實(shí)施例制備得到的提取物中蟾蜍毒素類有效成分占蟾酥提取物總重量的26%，其中，蟾蜍毒素類有效成分中含有如下重量份的具體成分：沙蟾毒

精57份；華蟾酥毒基37份；遠(yuǎn)華蟾蜍精24份；蟾毒它靈45份；蟾毒靈26份；酯蟾毒配基16份。

實(shí)施例4逆轉(zhuǎn)白血病耐藥性試驗(yàn)

取人白血病hl-60細(xì)胞耐藥細(xì)胞株hl-60/rs、人慢性髓原白血病細(xì)胞耐阿霉素耐藥株k562/adm置于培養(yǎng)基（rpmi1640培養(yǎng)基）中培養(yǎng)，癌細(xì)胞以10×103每孔加入96孔板中，在37℃含5％co2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后貼壁后吸去原來的培養(yǎng)基。然后空白組再加入含10%胎牛血清的rpmi1640培養(yǎng)基；藥物處理組加入含有0.01~100μg/ml待測藥物的rpmi1640培養(yǎng)基；陽性對照組加入含有0.01~100μg/ml阿霉素的rpmi1640培養(yǎng)基；繼續(xù)培養(yǎng)48h后，再加入濃度5mg/ml的mtt，繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸去上清液，加入100μldmso，暗處放置10min，利用酶標(biāo)儀（sunrise公司）在570nm下測定吸光值，并根據(jù)吸光值計(jì)算細(xì)胞存活情況，每個(gè)處理設(shè)6個(gè)重復(fù)孔。細(xì)胞存活率(%)=δod藥物處理組/δod空白組×100。再根據(jù)劑量效應(yīng)曲線計(jì)算細(xì)胞半抑制濃度(ic50)，結(jié)果見表2。

逆轉(zhuǎn)倍數(shù)＝ic50(化療藥物)/ic50(化療藥物+本發(fā)明所述的組合物或提取物)。

藥物處理組分別為：

藥物處理組1為阿霉素；

藥物處理組2為阿霉素+藥物組合物（長春新堿和藥物組合物的重量比1:1）（所述藥物組合物由沙蟾毒精47份；華蟾酥毒基47份；遠(yuǎn)華蟾蜍精18份；蟾毒它靈38份；蟾毒靈36份；酯蟾毒配基24份混合而成）；

藥物處理組3為阿霉素+藥物組合物（長春新堿和藥物組合物的重量比1:1）（所述藥物組合物由沙蟾毒精55份；華蟾酥毒基36份；遠(yuǎn)華蟾蜍精21份；蟾毒它靈45份；蟾毒靈27份；酯蟾毒配基20份混合而成）；

藥物處理組4為阿霉素+藥物組合物（長春新堿和藥物組合物的重量比1:1）

（所述藥物組合物由沙蟾毒精57份；華蟾酥毒基37份；遠(yuǎn)華蟾蜍精24份；蟾毒它靈45份；蟾毒靈26份；酯蟾毒配基16份混合而成）；

藥物處理組5為阿霉素+實(shí)施例1提取物（長春新堿和實(shí)施例1提取物的重量比1:1）；

藥物處理組6為阿霉素+實(shí)施例2提取物（長春新堿和實(shí)施例1提取物的重量比1:1）；

藥物處理組7為阿霉素+實(shí)施例3提取物（長春新堿和實(shí)施例1提取物的重量比1:1）；

表2.白血病細(xì)胞的ic50以及逆轉(zhuǎn)倍數(shù)測試結(jié)果

從表2實(shí)驗(yàn)組2~4可以看出，按本發(fā)明所述成分配比組成的藥物組合物能明顯逆轉(zhuǎn)人白血病hl-60細(xì)胞耐藥細(xì)胞株hl-60/rs、人慢性髓原白血病細(xì)胞耐阿霉素耐藥株k562/adm等對阿霉素的耐藥性，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為17倍以上。這說明，本發(fā)明所述的藥物組合可以逆轉(zhuǎn)白血病的耐藥性。這也說明，所述的藥物組合物可以和常用的治療白血病的藥物組合用于治療白血?。怀Ｓ玫闹委煱籽〉乃幬锟梢詾榘⒚顾?、阿糖胞苷、苯丁酸氮芥、烏苯美司、佐柔比星或安吖啶中。

從表2實(shí)驗(yàn)組5~7可以看出，發(fā)明提取物能明顯逆轉(zhuǎn)人白血病hl-60細(xì)胞耐藥細(xì)胞株hl-60/rs、人慢性髓原白血病細(xì)胞耐阿霉素耐藥株k562/adm等對阿霉素的耐藥性，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為10倍上。這說明以本發(fā)明所述藥物組合物作為有效成分的提取物可以逆轉(zhuǎn)白血病耐藥性，且所述藥物組合物作為有效成分在提取物種的含量越高，逆轉(zhuǎn)白血病耐藥性的效果更好。此外，還可以說明，所述的提取物可以和常用的治療白血病的藥物組合用于治療白血?。怀Ｓ玫闹委煱籽〉乃幬锟梢詾榘⒚顾?、阿糖胞苷、苯丁酸氮芥、烏苯美司、佐柔比星或安吖啶中。