本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種奧利司他脂質(zhì)體及其制備方法和在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：奧利司他(orlistat)的化學名：n-甲酰-l-亮氨酸(s)-1[(2s，3s)3-己基-4氧基-2-環(huán)氧丙基甲基]十二酯，也稱四氫脂抑素(thl)，是一種半合成的脂抑素衍生物，結(jié)構(gòu)式如下：奧利司他是目前國際公認的一種新型減肥降脂藥，市場上銷售的商品名稱為賽尼可，1998年首次在新西蘭上市，當年銷售額達1.46億美。奧利司他是長效和強效的特異性胃腸道脂肪酶抑制劑，常溫下為白色或類白色粉末，不溶于水，溶于氯仿，易溶于乙醇，通過與胃和小腸腔內(nèi)胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性絲氨酸部位形成共價鍵使酶失活。食物中的脂肪不能分解為游離脂肪酸和單?；视?，因而脂肪不能被吸收和利用，從而減少人體的熱量攝入，控制體重。該藥無需通過全身吸收發(fā)揮藥效。在常用劑量下，脂肪的吸收可被抑制30％?？诜蠛苌傥眨谀c道內(nèi)可被代謝失活，代謝部位在胃腸道壁，消除半衰期約為14～19小時。約97％的本品隨糞便排泄，其中83％以原形排出。臨床上奧利司他可應(yīng)用于肥胖癥及高脂血癥。一般情況下，一次可口服120mg，一日三次，于餐中或餐后1小時服用。服藥2周后體重可開始下降。可連續(xù)服用6～12個月，如劑量增大至每日400mg以上時，其作用不再增強。目前奧利司他的專利有奧利司他的制備、提純、檢測和奧利司他用于減肥的藥物的開發(fā)。申請?zhí)枮?01410249734.3的專利公布了一種奧利司他的制備方法，該專利中降低生產(chǎn)成本和環(huán)境污染，具體方法包括發(fā)酵液的預處理、濾餅浸提、濃縮、非極性溶劑萃取、濃縮、極性溶劑萃取、冷凍除雜、濃縮、非極性溶劑結(jié)晶、氫化、反洗、結(jié)晶及重結(jié)晶。申請?zhí)枮?01210594357.8的專利公開了一種奧利司他的純化方法，通過極性溶劑結(jié)晶、非極性溶劑結(jié)晶兩步溶媒精制，經(jīng)hplc測定，可以獲得含量99％以上，最大單雜0.1％以內(nèi)，符合usp35標準的奧利司他。申請?zhí)枮?01510804600.8的專利公開一種奧利司他的快速檢測方法，待測樣品經(jīng)提取、洗滌液、與鹽酸羥胺溶液和強堿溶液反應(yīng)萃取、酸化顯色步驟，并根據(jù)顏色判斷是否含有奧利司他。檢測方法操作簡便、分析成本低，待測樣品經(jīng)預處理后再與檢測劑反應(yīng)，可以排除相關(guān)因素的干擾，更有利于對溶液顏色的觀察，對樣品中是否有奧利司他做出更準確地判斷。申請?zhí)枮?01110370659.2的專利公布了一種含奧利司他的制劑及其制備方法，該制劑含有奧利司他包衣層，所述的制劑是通過將奧利司他熔融液，包衣在空白片或空白小丸表面形成所述的奧利司他包衣層后制備而成。申請?zhí)枮?01310000099.0的專利公開了一種含有奧利司他片劑及其制備方法，該片劑由含二氧化硅的奧利司他磷脂組合物與藥用助劑直接壓片而成，所述含二氧化硅的奧利司他磷脂組合物中，奧利司他、磷脂和二氧化硅的重量比為1：0.5-1.5：0.5-3。以上都是口服用藥，且都是將奧利司他用于減肥和治療代謝綜合征，并沒有用于治療和/或抗腫瘤的奧利司他脂質(zhì)體的相關(guān)報道。因此開發(fā)一種新型抗腫瘤藥物，對廣大腫瘤患者、企業(yè)和社會具有巨大的潛在的臨床價值和經(jīng)濟效益。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種奧利司他脂質(zhì)體，改變奧利司他的疏水的性質(zhì)，并且具有良好的穩(wěn)定性，能夠順利進入腫瘤細胞內(nèi)部發(fā)揮抗腫瘤作用。本發(fā)明的奧利司他脂質(zhì)體可以用于制備抗腫瘤疾病的藥物中，具有很大的潛在的臨床價值。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種奧利司他脂質(zhì)體，包括奧利司他、磷脂、膽固醇和mpeg2000-dppe，其中，磷脂選自大豆卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰膽堿。奧利司他水溶性差，且不穩(wěn)定，導致其體內(nèi)生物利用度低，不能很好地發(fā)揮其藥效作用。因此，需要采取必要的技術(shù)手段對其進行改良，以改善其水溶性等性質(zhì)，使其更適合于藥用。作為優(yōu)選，大豆卵磷脂與二硬脂酰磷脂酰膽堿的質(zhì)量比為4-6:1。作為優(yōu)選，磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為4-6:1。作為優(yōu)選，磷脂與mpeg2000-dppe的質(zhì)量比為13-15:1。作為優(yōu)選，磷脂與奧利司他的質(zhì)量比為6-8:1。本發(fā)明的目的之二在于提供一種所述的奧利司他脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：按上述比例取大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、mpeg2000-dppe、膽固醇和奧利司他混合均勻后加入無水乙醇攪拌使其溶解，超聲使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入pbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體。本發(fā)明的目的之三在于提供一種所述的奧利司他脂質(zhì)體在制備抗腫瘤疾病的藥物中的應(yīng)用。作為優(yōu)選，所述腫瘤疾病包括非小細胞肺癌、人乳腺癌、人神經(jīng)母細胞瘤、肝癌。本發(fā)明的目的還在于提供一種抗腫瘤疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包括奧利司他脂質(zhì)體和藥學上可以接受的載體或助劑。本發(fā)明的目的還在于提供一種奧利司他注射劑，所述奧利司他注射劑包括所述的奧利司他脂質(zhì)體和藥學上可以接受的載體或助劑。本發(fā)明的有益效果在于：1)本發(fā)明提供了一種奧利司他脂質(zhì)體，增加奧利司他的溶解度，提高藥物的穩(wěn)定性，促進藥物吸收、減輕藥物對機體的刺激，作為奧利司他的載體能可大大改善客體分子的水溶性，以使其適應(yīng)液體制劑的要求，提高奧利司他的生物利用度，使奧利司他的藥用價值得到更好的發(fā)揮。2)本發(fā)明將奧利司他制備成脂質(zhì)體，改變了其疏水的性質(zhì)，以使其適應(yīng)液體制劑的要求，具有更好的生物安全性，可以用于制備抗腫瘤疾病的藥物中，具有很大的潛在的臨床價值。附圖說明圖1為奧利司他藥物組中非小細胞肺癌細胞a549的濃度效應(yīng)曲線。圖2為奧利司他脂質(zhì)體藥物組中非小細胞肺癌細胞a549的濃度效應(yīng)曲線。圖3為奧利司他藥物組中人乳腺癌細胞mcf7的濃度效應(yīng)曲線。圖4為奧利司他脂質(zhì)體藥物組中人乳腺癌細胞mcf7的濃度效應(yīng)曲線。圖5為奧利司他藥物組中人神經(jīng)母細胞瘤細胞sh-sy5y的濃度效應(yīng)曲線。圖6為奧利司他脂質(zhì)體藥物組中人神經(jīng)母細胞瘤細胞sh-sy5y的濃度效應(yīng)曲線。具體實施方式以下將對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細描述。優(yōu)選實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，所舉實施例是為了更好地對本發(fā)明的內(nèi)容進行說明，但并不是本發(fā)明的內(nèi)容僅限于所舉實施例。所以熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述
發(fā)明內(nèi)容對實施方案進行非本質(zhì)的改進和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護范圍。實施例1稱取大豆卵磷脂25mg、二硬脂酰磷脂酰膽堿5mg、mpeg2000-dppe2.5mg、膽固醇6mg和奧利司他4mg均勻混合；加入無水乙醇15ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入20mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l1。實施例2稱取大豆卵磷脂24mg、二硬脂酰磷脂酰膽堿4mg、mpeg2000-dppe2mg、膽固醇7mg和奧利司他4mg均勻混合；加入無水乙醇12ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入18mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l2。實施例3稱取大豆卵磷脂24mg、二硬脂酰磷脂酰膽堿6mg、mpeg2000-dppe2mg、膽固醇5mg和奧利司他5mg均勻混合；加入無水乙醇12ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入18mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l3。實施例4稱取大豆卵磷脂30mg、mpeg2000-dppe2.5mg、膽固醇6mg和奧利司他4mg加入無水乙醇15ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入20mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l4。實施例5稱取大豆卵磷脂25mg、氫化大豆卵磷脂5mg、膽固醇6mg和奧利司他4mg加入無水乙醇15ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入20mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l5。實施例6稱取大豆卵磷脂25mg、二硬脂酰磷脂酰膽堿5mg、mpeg2000-dppe2.5mg、膽固醇6mg和奧利司他4mg加入無水乙醇15ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入20mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l6。實施例7稱取大豆卵磷脂25mg、二硬脂酰磷脂酰膽堿5mg、mpeg2000-dppe2.5mg、膽固醇6mg和奧利司他4mg加入無水乙醇15ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入20mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l7。實施例8稱取大豆卵磷脂24mg、二硬脂酰磷脂酰膽堿8mg、mpeg2000-dppe4mg、膽固醇4mg和奧利司他4mg加入無水乙醇15ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入20mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l8。實施例9稱取大豆卵磷脂28mg、二硬脂酰磷脂酰膽堿4mg、mpeg2000-dppe4mg、膽固醇6mg和奧利司他4mg加入無水乙醇15ml攪拌使其溶解，超聲2min使其混合均勻，將得到的溶液緩慢注入20mlpbs緩沖液中，60℃攪拌，減壓除去乙醇，補加pbs適量，用脂質(zhì)體擠出儀反復擠壓通過200nm的膜，制得奧利司他脂質(zhì)體l9。脂質(zhì)體包封率的測定取脂質(zhì)體適量，置于超高速條件下12000rpm離心8min，若有沉淀則反復離心，直至無沉淀出現(xiàn)，取上清液，加入適量的甲醇或添加適當triton水溶液的甲醇破膜，然后經(jīng)hplc法測定溶液中藥物的含量，通過對比離心前后脂質(zhì)體中藥物的含量計算包封率。粒徑測定取脂質(zhì)體混懸液，用注射用水稀釋至適宜濃度，用zetasizer測定脂質(zhì)體的粒徑。表1：粒徑及包封率l1l2l3l4l5l6l7l8l9粒徑(nm)98101105157163182176142151包封率(％)918789576358426451表2：存放穩(wěn)定性分別取脂質(zhì)體于4℃保存，于不同時間點測定包封率。t/d010203040506070包封率(％)l19191919090898989包封率(％)l28787868686868685包封率(％)l38989898888888787包封率(％)l56363605446423021包封率(％)l86463524337322821體外抗癌活性通過體外細胞毒性實驗，檢測奧利司他和本發(fā)明制備的奧利司他脂質(zhì)體對3種常用癌細胞的抗腫瘤活性。陽性對照藥：阿霉素。奧利司他藥物組：取奧利司他用無水乙醇配置成1000mm的儲存液。奧利司他脂質(zhì)體藥物組：本發(fā)明實施例1制備的奧利司他脂質(zhì)體。非小細胞肺癌細胞a549、人乳腺癌細胞mcf7、人神經(jīng)母細胞瘤細胞sh-sy5y分別在含10％胎牛血清、100μg/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素、0.2％nahco3的dmem培養(yǎng)液中，置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。設(shè)實驗組和對照組，每組3個復孔，選用阿霉素作為陽性對照組，實驗組將奧利司他和奧利司他脂質(zhì)體設(shè)10個不同濃度梯度，濃度分別為：100，50，25，10，4，2，0.4，0.08，0.016，0μm，每個濃度設(shè)3個復孔。細胞培養(yǎng)24h后，將培養(yǎng)液換成含不同濃度奧利司他和奧利司他脂質(zhì)體的培養(yǎng)液，藥物作用72h后，采用cck-8測定藥物對細胞的毒性作用。最后取實驗組、陽性對照組各復孔平均光密度值(opticaldensity,od)計算細胞存活率和抑制率，并以藥物濃度為橫坐標，細胞增殖抑制率為縱坐標繪制濃度效應(yīng)曲線，見圖1，圖2，圖3，圖4，圖5，圖6。利用graphpadprism6求回歸方程，得出72h50％抑制濃度(50％inhibitingconcentration,ic50)。結(jié)果如下(ic50＝μm)：樣品a549mcf7sh-sy5ydox0.700.510.83奧利司他藥物組13.517.5717.102奧利司他脂質(zhì)體藥物組5.3783.5163.15最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當中。當前第1頁12