本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，涉及南非葉的制藥用途，更具體地說是涉及南非葉醇提物的制藥用途。

背景技術：

據(jù)世界衛(wèi)生組織(who，worldhealthorganization)近期所做的一些全球估計數(shù)字：2014年，有39％的18歲(含)以上成人(男性38％，女性40％)超重。全球肥胖流行率在1980年和2014年之間翻了一倍以上。一度被視為高收入國家問題的超重和肥胖，如今在低收入和中等收入國家，尤其是在城市環(huán)境中呈上升發(fā)展趨勢。在非洲，兒童超重或肥胖的人數(shù)幾乎增長了一倍，從1990年的540萬增加到2014年的1060萬。2014年，5歲以下超重或肥胖的兒童中，近半數(shù)生活在亞洲。在全世界，與超重和肥胖相關的死亡人數(shù)大于體重不足引起的死亡。全球(撒哈拉以南非洲和亞洲部分地區(qū)除外)的肥胖人數(shù)多于體重不足人數(shù)。

肥胖為多種疾病的根源，糖尿病患者中80％、心臟病患者中21％由肥胖引起，同時肥胖也是糖尿病、高脂血癥、動脈粥樣硬化、心血管系統(tǒng)疾病等“成人疾病”的主要危險因素。且由肥胖引起的社會經(jīng)濟損失巨大，據(jù)統(tǒng)計，美國由肥胖所致的經(jīng)濟損失每年增加約1170億美元，韓國由肥胖所致的經(jīng)濟損失從2001年的億韓元增加到了2005年的18000億韓元。

早在1996年，肥胖就已經(jīng)被who定義為一種疾病，是目前在全世界范圍內(nèi)增長最為迅速的慢性疾病之一。安全有效的肥胖治療劑的開發(fā)對減少巨大的社會經(jīng)濟損失具有重要意義。但是，能夠解決市場狀況的醫(yī)藥品局限于食欲抑制劑及脂肪吸收抑制劑，因而滿足不了需要，并存在多種副作用。

此前，美國fda批準了兩種藥物用于治療肥胖并可長期使用，它們包括西布曲明和奧利司他。根據(jù)最近報道的研究結(jié)果，與安慰劑組相比，使用西布曲明至少一年或更長時間會導致體重減少超過4.5kg或4.3％。但是，使用西布曲明會引起如血壓升高、失眠、口干、眩暈等副作用，且不能用于具有如高血壓等心血管疾病的患者。而奧利司他可通過抑制從胰腺和消化系統(tǒng)分泌的脂肪酶活性，減少攝取食物中的脂肪的吸收。與安慰劑組相比，給藥奧利司他一年會導致體重減少2.7kg或2.9％。但使用奧利司他會產(chǎn)生諸如腹瀉、油便、排泄失禁等副作用。因截至目前所開發(fā)的藥物的局限性，為了治療肥胖，必然需要開發(fā)一種具有新作用機制的藥物，其具有好的抗肥胖功效并減少副作用的產(chǎn)生。

此外，心腦血管疾病是目前死亡率較高的疾病，而其罪魁禍首是動脈粥樣硬化，從中國人的飲食結(jié)構、飲食習慣來看，造成中國人口動脈粥樣硬化的主要原因是血脂異常，主要為高脂血癥(hyperlipidemia)。血脂主要是指血清中的膽固醇和甘油三酯。無論是膽固醇含量增高，還是甘油三脂的含量增高，或是兩者皆增高，統(tǒng)稱為高脂血癥。高脂血癥是動脈粥樣硬化的主要危險因素，是誘發(fā)各種心血管疾病的主要病因，而心血管疾病是人類第一大殺手，其發(fā)病率和死亡率都超過腫瘤性疾病而躍居第一。據(jù)美國心臟病協(xié)會統(tǒng)計，心血管疾病危害了近六千萬美國人，花費近二千五百九十億美元。近年來，高脂血癥引起的各種疾病在我國有明顯增加的趨勢。因此尋找療效好副作用小的治療高血脂的藥物也是急需解決的問題。

南非葉即扁桃斑鳩菊(vernoniaamygdalinadel.)的葉，原產(chǎn)于熱帶非洲，在尼日利亞等地被用作蔬菜食用，也是非洲民間傳統(tǒng)草藥，具有多種藥用價值。但到目前為止，未見南非葉在肥胖癥、高血脂癥的預防和治療等方面的研究。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足之處，提供了南非葉醇提物的制藥用途，主要是在防治肥胖和高血脂癥中的制藥用途。

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案之一是：

南非葉醇提物在制備預防和/或治療肥胖癥的藥物中的用途，所述南非葉醇提物為乙醇提取物，其制備方法包括：取南非葉，干燥，粉碎，按照干燥南非葉與乙醇的配方比例為1g：50ml的比例加入濃度為30～90％的乙醇，室溫浸漬后，在70～90℃下回流提取60～120min，提取液回收溶劑得到浸膏，浸膏在-50℃下冷凍干燥，即得所述南非葉醇提物。

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案之二是：

一種包含上述南非葉醇提物的藥物組合物在制備預防和/或治療肥胖癥的藥物中的用途。

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案之三是：

南非葉醇提物在制備預防和/或治療高血脂癥的藥物中的用途，所述南非葉醇提物為乙醇提取物，其制備方法包括：取南非葉，干燥，粉碎，按照干燥南非葉與乙醇的配方比例為1g：50ml的比例加入濃度為30～90％的乙醇，室溫浸漬后，在70～90℃下回流提取60～120min，提取液回收溶劑得到浸膏，浸膏在-50℃下冷凍干燥，即得所述南非葉醇提物。

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案之四是：

一種包含上述南非葉醇提物的藥物組合物在制備預防和/或治療高血脂癥的藥物中的用途。

一實施例中：所述用途通過減輕體重和/或降低脂肪含量和/或改善內(nèi)臟的脂肪堆積情況和/或調(diào)節(jié)血脂和/或調(diào)節(jié)內(nèi)臟脂質(zhì)含量實現(xiàn)。

一實施例中：所述改善內(nèi)臟的脂肪堆積情況包括改善內(nèi)臟結(jié)構紊亂和/或改善脂滴蓄積和/或降低內(nèi)臟重量。

一實施例中：所述調(diào)節(jié)血脂為降低血清總膽固醇含量和/或降低低密度脂蛋白膽固醇含量。

一實施例中：所述調(diào)節(jié)內(nèi)臟脂質(zhì)含量為降低內(nèi)臟甘油三酯含量。

一實施例中：所述內(nèi)臟為肝臟。

本發(fā)明所述的“藥物組合物”指的是除包含上述南非葉醇提物外，還可以包括至少一種藥學上可接受的輔料或藥物載體；所述藥學上可接受的輔料例如包括稀釋劑、溶劑、賦形劑、吸收劑、潤濕劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、增溶劑、乳化劑、助懸劑、表面活性劑、成膜劑、拋射劑、抗氧劑、矯味劑、芳香劑、殺菌劑、防腐劑等；所述藥學上可接受的藥物載體指能夠擔載藥物，并且具有改變藥物進入人體的方式和在體內(nèi)的分布，控制藥物釋放速度達到控釋或緩釋，將藥物靶向輸送至靶器官等作用的體系，例如包括脂質(zhì)體、微球、微囊、固體分散體、膠束、微乳液、凝膠、緩釋型載體、控釋型載體、靶向型載體、納米顆粒材料等；以及，通過上述南非葉醇提物與上述藥學上可接受的輔料或藥物載體相互配合形成的具體制劑，例如制成固體制劑如片劑、丸劑、滴丸劑、膠囊劑、顆粒劑、膏劑等，液體制劑如煎劑、口服液、針劑等；并不以此為限。

本發(fā)明所述的“藥物組合物”，還可以包括至少一種具有相同或不同藥效的藥物，即本發(fā)明的南非葉醇提物可以與至少一種藥物聯(lián)合應用，例如食欲抑制劑、脂肪吸收抑制劑、血脂調(diào)節(jié)劑、血壓調(diào)節(jié)劑、抗炎劑、抗菌劑、抗病毒劑等，并不以此為限；以及，上述南非葉醇提物與至少一種藥物聯(lián)合應用后還可以至少包括一種藥學上可接受的輔料或藥物載體的組合物。

本技術方案與背景技術相比，它具有如下優(yōu)點：

本發(fā)明公開了南非葉醇提物在制備預防和/或治療肥胖癥和/或高血脂癥的藥物中的用途，經(jīng)過藥理實驗表明，南非葉醇提物能夠降低肥胖者的體重、改善內(nèi)臟脂肪堆積，呈現(xiàn)肥胖的預防及治療效果；并且通過減少存在于血清及肝臟中的脂質(zhì)含量，改善由于高脂飲食所導致的高脂血癥和肝組織內(nèi)的脂肪堆積，由此呈現(xiàn)預防高脂血癥的發(fā)生、抑制高脂血癥病情的進展或使病態(tài)好轉(zhuǎn)的效果，是一種改善肥胖和高脂血癥效果明顯的中藥提取物，并具有天然、高效、安全無毒的特點。南非葉提取物及包含該南非葉提取物的藥物組合物可制成各種劑型的肥胖和高脂血癥治療藥物或保健食品，在肥胖和高脂血癥治療領域有廣泛的應用潛能。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的南非葉醇提物不同時間段對小鼠體重的影響。

圖2為本發(fā)明的南非葉醇提物對小鼠體重、bmi及脂肪重量的影響。

圖3為本發(fā)明的南非葉醇提物對飲食性肥胖癥小鼠血脂水平的影響。

圖4為本發(fā)明的南非葉醇提物對小鼠肝臟重量及肝臟脂質(zhì)水平的影響。

圖5為小鼠肝臟病理切片he染色結(jié)果。

圖6為小鼠肝臟病理切片油紅o染色結(jié)果。

具體實施方式

下面通過實施例具體說明本發(fā)明的內(nèi)容：

采用喂飼高脂飼料的c57bl/6小鼠建立肥胖癥模型，觀察本發(fā)明的南非葉醇提物對肥胖模型小鼠的體重及血清總膽固醇(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)、肝重、肝臟脂質(zhì)水平及病理變化的影響。

1、藥效學實驗具體方法步驟如下：

1)實驗動物和試劑

c57bl/6小鼠32只，雄性，均重11～13g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司(許可證scxk(滬)2012-0002)；

奧利司他，購自上海笛柏生物科技有限公司；

2)動物處理方法

c57bl/6小鼠，溫度22±1℃，濕度40～60％，自然光照，自由飲水，自由進食普通飼料1周后，隨機分成4組，每組8只，分別為正常對照組(normal)、高脂模型組(hfd)、奧利司他組(hfd+o)、南非葉醇提物組(hfd+v)。除正常對照組給予普通飼料外，其余組均給予高脂飼料，高脂飼料配方為：

3)稱取南非葉干燥粉末，室溫下(例如10～30℃)以體積濃度為30％的乙醇480ml(干燥南非葉與乙醇的配方比例為1g：50ml)浸漬一段時間后，在85℃下回流提取120min，提取液過濾，濾液減壓回收溶劑得到浸膏，浸膏用冷凍干燥機在-50℃下冷凍干燥得粉末，取該粉末適量，配制成5mg/ml溶液備用；

4)按照下述方法給藥：

normal組和hfd組：每日于下午15點給予飼料前給予生理鹽水20ml/kg，方式：灌胃。

hfd+o組：每日于下午15點給予飼料前給奧利司他一次，劑量100mg/kg，方式：灌胃。

hfd+v組：每日于下午15點給予飼料前給南非葉醇提物一次，劑量100mg/kg，方式：灌胃。

按照上述方法連續(xù)給藥20周，每日觀察動物一般狀況，記錄動物進食量；每周稱重一次；實驗終點稱量小鼠空腹體重，測量體長，計算bmi指數(shù)；摘眼球取血，并分離肝臟，腸系膜周圍脂肪組織、左右雙側(cè)附睪周圍脂肪組織及左右雙側(cè)腎周脂肪組織，用濾紙吸干組織液后分別稱重，計算肝臟系數(shù)和脂肪系數(shù)，測定tg、tc、ldl-c及肝臟脂質(zhì)含量，并取部分小鼠肝臟于冰凍切片機上分別以7μm和10μm厚度切片，用于he和油紅o染色觀察肝臟形態(tài)及脂滴蓄積情況。

5)統(tǒng)計學分析：數(shù)據(jù)采用graphpadprism5軟件(graphpadsoftwareinc，usa)進行統(tǒng)計學分析，組間比較用單因素方差分析，當方差分析差異有顯著性時，進一步用t檢驗作兩兩比較。

2、結(jié)果與分析

1)南非葉醇提物對飲食性肥胖癥小鼠體重及脂肪重量的影響

連續(xù)給藥20周，檢測體重、體質(zhì)指數(shù)(bmi)，脂肪重量，如圖1、2所示。該結(jié)果表明：

①高脂模型組與正常對照組相比，喂養(yǎng)期間體重差距逐漸增大，至第12周時，高脂模型組動物體重升高已具有顯著性差異(圖1)，到第20周喂養(yǎng)結(jié)束時其體重、bmi、脂肪重量分別增長22.95％(p<0.001)、23.42％(p<0.001)，297.96％(p<0.001)，參考體重大于正常對照組的平均體重1.96倍標準差和大于正常對照組體重的20％的標準，肥胖癥小鼠造模成功(圖2)。

②奧利司他組與高脂模型組相比，體重、bmi、脂肪重量分別下降14.75％(p<0.001)、23.80％(p<0.001)、52.82(p<0.001)，說明陽性對照藥奧利司他對于改善飲食性肥胖癥小鼠體重效果顯著。

③南非葉醇提物組與高脂模型組相比，體重、bmi、脂肪重量分別下降20.42％(p<0.001)、19.58％(p<0.001)、66.15％(p<0.001)，說明南非葉醇提物能夠顯著改善肥胖小鼠體重和降低脂肪含量(圖2)。

2)南非葉醇提物對飲食性肥胖癥小鼠血脂水平的影響

連續(xù)給藥20周后，檢測血脂變化(tc、tg、ldl-c)，結(jié)果圖3所示。該結(jié)果表明：

①高脂模型組動物與正常組相比，其血清tc、ldl-c分別比正常對照組升高83.88％(p<0.001，圖3a)、224％(p<0.001，圖3c)，而血清tg水平未見升高反而下降，提示可能高脂肪飲食更易引起高膽固醇血癥而不是高甘油三酯血癥(圖3b)。

②奧利司他組與高脂模型組相比，tc、ldl-c分別下降30.11％(p<0.001，圖3a)、69.14％(p<0.001，圖3c)，說明陽性藥奧利司他對高膽固醇血癥有顯著的調(diào)節(jié)作用。

③南非葉醇提物組與高脂模型組相比，tc、ldl-c分別下降27.87％(p<0.001，圖3a)、69.14％(p<0.001，圖3c)，說明南非葉醇提物具有顯著的調(diào)節(jié)血脂作用。

3)南非葉醇提物對飲食性肥胖癥小鼠肝臟脂質(zhì)水平的影響及病理變化

連續(xù)給藥20周后，檢測肝重、肝臟脂質(zhì)含量、肝臟病理切片結(jié)果如圖4、圖5和圖6所示。該結(jié)果表明：

①高脂模型組與正常對照組相比，肝重重量升高16.19％(p<0.01，圖4a)肝臟tg含量顯著升高(p<0.001，圖4c)；肝組織he染色結(jié)果顯示，正常對照組小鼠肝臟組織結(jié)構應完整，肝小葉輪廓清晰，肝細胞條數(shù)圍繞中央靜脈呈放射狀排列。而高脂膜型組肝小葉結(jié)構紊亂，肝索排列紊亂，呈點、片狀壞死，肝竇擴張，細胞質(zhì)疏松，細胞質(zhì)內(nèi)可見大小不等、數(shù)量不一的圓形脂肪空泡(圖5)；肝組織油紅o染色結(jié)果顯示，正常對照組幾乎未見油紅o染液著色，而高脂模型組可見較深的紅色脂滴(圖6)；由以上結(jié)果表明肝臟內(nèi)出現(xiàn)了結(jié)構紊亂以及脂肪滴沉積，呈肝細胞彌漫脂肪變性。

②南非葉醇提物組與高脂膜型脂組相比，肝臟重量下降26.23％(p<0.001，圖4a)，tg含量降低22.70％(p<0.001，圖4c)，肝臟結(jié)構紊亂、脂滴蓄積等情況得到明顯改善(圖5、圖6)。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳實施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實施的范圍，即依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。